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UNIVERSIDADE DO ESTADO DE SANTA CATARINA – UDESC
CENTRO DE CIÊNCIAS AGROVETERINÁRIAS – CAV
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS AGRÁRIAS
MESTRADO EM PRODUÇÃO VEGETAL
MARCOS VINICIUS HENDGES
AMADURECIMENTO E QUALIDADE PÓS-COLHEITA DE MAÇÃS
‘ROYAL GALA’ E ‘FUJI SUPREMA’ SUBMETIDAS AO DANO
MECÂNICO
Dissertação apresentada à Universidade do
Estado de Santa Catarina, como requisito
parcial do Programa de Pós-Graduação em
Ciências Agrárias, para obtenção do título de
Mestre em Produção Vegetal.
Orientador: Dr. Cristiano Andre Steffens
Co-orientador(a): Dra. Lucimara Rogéria
Antoniolli
Co-orientador: Ph.D. Cassandro Vidal
Talamini do Amarante
LAGES – SC
2009
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Ficha catalográfica elaborada pela Bibliotecária
Renata Weingärtner Rosa – CRB 228/14ª Região
(Biblioteca Setorial do CAV/UDESC)
Marcos Vinicius Hendges
Amadurecimento e qualidade pós-colheita de maçãs
‘Royal Gala’ e ‘Fuji Suprema’ submetidas ao dano
mecânico / Marcos Vinicius Hendges – Lages, 2009.
54 p.
Dissertação (mestrado) – Centro de Ciências
Agroveterinárias / UDESC.
1.Maçã.2.Dano mecânico. 3.Pós-colheita. 4. Etileno. 5.
Armazenamento I.Título.
CDD – 634.11
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MARCOS VINICIUS HENDGES
AMADURECIMENTO E QUALIDADE PÓS-COLHEITA DE MAÇÃS
‘ROYAL GALA’ E ‘FUJI SUPREMA’ SUBMETIDAS AO DANO
MECÂNICO
Dissertação apresentada à Universidade do Estado de Santa Catarina, como requisito parcial
do Programa de Pós-Graduação em Ciências Agrárias, para obtenção do título de Mestre em
Produção Vegetal.
Banca Examinadora:
Prof. Dr. Cristiano André Steffens
Orientador - UDESC/Lages - SC
Pesquisadora Dra. Lucimara Rogéria Antoniolli
EMBRAPA Uva e Vinho/Bento Gonçalves
Prof. Ph.D. Cassandro Vidal Talamini do
Amarante - UDESC/Lages - SC
Dr. Paulo Cezar Cassol
Coordenador do Programa de Pós-
graduação em Ciências Agrárias
Dr. Jefferson Meirelles Coimbra
Coordenador Técnico da Produção
Vegetal
Adil Knackfuss Vaz
Diretor Geral do Centro de Ciências
Agroveterinárias
Lages – SC, 07/08/2009
A minha mãe pelo apoio, por viver, acreditar e
incentivar meus sonhos.
DEDICO
AGRADECIMENTOS
A todos que de alguma forma contribuíram para realização deste trabalho, em especial
a:
Cristiano André Steffens e Lucimara Antoniolli pela orientação, confiança e amizade.
Ao professor Cassandro V. T. do Amarante por sua contribuição neste trabalho.
Ao professor Auri Brackmann por disponibilizar a infra-estrutura do seu laboratório.
Aos bolsistas, estagiários e voluntários do laboratório de Fisiologia e Tecnologia Pós-
colheita da Embrapa Uva e Vinho, e do laboratório de Pesquisa em Fisiologia Vegetal e Pós-
colheita da Universidade do Estado de Santa Catarina (UDESC), os quais contribuíram de
forma significativa na realização dos experimentos.
Ao projeto INOVAMAÇÃ, Embrapa Uva e Vinho e CAV/UDESC.
RESUMO
O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do dano mecânico sobre o amadurecimento e
qualidade de maçãs das cultivares Royal Gala, em dois sistemas comerciais de
armazenamento, tratados ou não com 1-MCP, e Fuji Suprema armazenada em temperatura
ambiente. Foram realizados três experimentos independentes. No primeiro, com a cultivar
Royal Gala, avaliaram-se os seguintes tratamentos: dano mecânico (sem e com dano por
impacto através da queda livre dos frutos a altura de 20 cm) combinado com a aplicação de 1-
MCP (0 e 625nL L
-1
). Os frutos foram armazenados durante quatro meses em armazenamento
refrigerado (AR; 0ºC±1ºC e 92±2% de UR) e durante oito meses em atmosfera controlada
(AC; 1,2kPa de O
2
+ 2,0kPa de CO
2
; 0ºC±0,1ºC e 96±2% de UR). No segundo experimento,
também com a cultivar Royal Gala, aplicou-se os danos em duas intensidades (queda livre a
uma altura de 10 cm e 20 cm), sendo os frutos tratados ou não com 1-metilciclopropeno
(625nL L
-1
), antes e após o dano. Os tratamentos avaliados foram: controle (sem dano e sem
1-MCP), 1-MCP, dano mecânico por impacto, 1-MCP + dano mecânico, dano mecânico + 1-
MCP, combinados com dois períodos de armazenamento refrigerado (dois e quatro meses) a
temperatura de 0±1ºC, com (UR) de 92±2%. Nesses dois experimentos o delineamento
experimental utilizado foi o de blocos ao acaso, contendo três repetições de cinco frutos. O
terceiro experimento foi conduzido com a cultivar Fuji Suprema, na qual se aplicou diferentes
tipos de dano mecânico. Os tratamentos avaliados foram: controle (sem dano mecânico), dano
mecânico por impacto (queda livre de 20 cm), dano mecânico por compressão (10
quilogramas) e dano mecânico por corte (3 mm de largura x 3,5 mm de profundidade e 3,5 cm
de comprimento). O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado,
sendo utilizadas quatro repetições. Os frutos foram avaliados quanto à firmeza de polpa,
acidez titulável, sólidos solúveis, índice de cor L da epiderme e da polpa para ‘Royal Gala’, e
além destes, ângulo ‘hue’ da casca e incidência de podridões na cultivar Fuji Suprema.
Exetuando-se o dano por compressão, o dano mecânico, nas intensidades avaliadas, provoca
escurecimento da polpa no local da lesão, porém não possui efeito sobre a indução do
amadurecimento e sobre os demais atributos de qualidade. O 1-MCP contribui para
manutenção da firmeza de polpa e da acidez titulável de maçãs ‘Royal Gala’, porém não
reduz os efeitos do dano mecânico sobre o escurecimento da polpa, independente do
momento de aplicação. Quanto maior a intensidade do dano mecânico, maior são os efeitos
sobre a integridade dos tecidos da polpa. O dano por corte é o tipo de dano mais prejudicial
devido à grande incidência de podridões.
Palavras-chave: Malus domestica. Injúria. Pós-colheita. Etileno. Armazenamento
refrigerado. Atmosfera controlada.
ABSTRACT
The objective of this work was to evaluate the effect of mechanical damage on the ripening
and quality of cultivars Royal Gala apple, in two commercial systems of storage, treated or
not with 1-MCP, and Fuji Suprema apple stored at ambient conditions. Three independent
experiments were carried. In the first, with ‘Royal Gala’ apples, were evaluated the following
treatments: mechanical damage (with and without impact damage through the free fall of the
fruit height of 20 cm) combined with the application of 1-MCP (0, 625 nL L
-1
). The fruits
were stored for four months in cold storage (CS, 0 ° C ± 1 º C and 92 ± 2% RH) and eight
months in controlled atmosphere (CA, 1.2 kPa to 2.0 kPa O
2
+ CO
2
, 0 º C ± 1 º C and 96 ±
2% RH). In the second experiment, also with ‘Royal Gala’ apples, damage was applied at two
intensities (free fall at a height of 10 and 20 cm) and the fruits were treated or not with 1-
methylcyclopropene (625nL L
-1
), before and after the damage. The treatments evaluated
were: control (without damage and without 1-MCP), 1-MCP, impact damage, 1-MCP +
impact damage, impact damage + 1-MCP, combined with two periods of storage (two and
four months) at 0 ± 1 ° C and (RH) of 92 ± 2%. The experimental design was randomized
blocks, with three replications of five fruits. The third experiment was conducted with ‘Fuji
Suprema’ apples, which were applied three types of mechanical damage. The treatments
were: control (no mechanical damage), mechanical damage by impact (free fall of 20 cm),
mechanical damage by compression (10 kilogram) and mechanical damage by cut (3 mm
width x 3.5 mm depth and 3.5 cm of lenght). The experimental design was completely
randomized, using four replicates of five fruits. Fruits were evaluated for flesh firmness,
titratable acidity, soluble solids content, L color index of the skin and flesh in ‘Royal Gala’
apples, and besides these, ‘hue’ angle of the skin and decay incidence in ‘Fuji Suprema’
apples. Except damage by compression, mechanical damage, in them intensity evaluated,
cause flesh browning in the damage place , but do not affect the ripening and other attributes
of quality. The 1-MCP contribute to maintenance of flesh firmness and titratable acidity of
‘Royal Gala’ apples, however it does not reduce the effects of mechanical damage on the
flesh browning, independent time of damage application. As larger intensity of mechanical
damage, higher the effects on the integrity of flesh tissue. The damage by cut is the more
harmful damage due to the higher decay incidence.
Keywords: Malus domestica. Injury. Postharvest. Ethylene. Cold storage. Controlled
atmosphere.
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 - Firmeza de polpa de maçãs ‘Royal Gala’ em função do dano mecânico e da
aplicação do 1-MCP, armazenadas durante quatro meses em atmosfera refrigerada
(AR) e oito meses em atmosfera controlada (AC), seguido de sete dias de
exposição em condição ambiente........................................................................... 23
Tabela 2 - Acidez titulável de maçãs ‘Royal Gala’ em função do dano mecânico e da
aplicação do 1-MCP, armazenadas durante quatro meses em atmosfera refrigerada
(AR) e oito meses em atmosfera controlada (AC), seguido de sete dias de
exposição em condição ambiente........................................................................... 24
Tabela 3 - Índice de cor (L) da polpa de maçãs ‘Royal Gala’ em função do dano mecânico e
da aplicação do 1-MCP, armazenadas durante quatro meses em atmosfera
refrigerada (AR) e oito meses em atmosfera controlada (AC), seguido de sete dias
de exposição em condição ambiente...................................................................... 25
Tabela 4 - Área escurecida no local do dano em maçãs ‘Royal Gala’ em função do dano
mecânico e da aplicação do 1-MCP, armazenadas durante quatro meses em
atmosfera refrigerada (AR) e oito meses em atmosfera controlada (AC), seguido
de sete dias de exposição em condição ambiente.................................................. 26
Tabela 5 - Profundidade de escurecimento no local do dano em maçãs ‘Royal Gala’,
armazenadas durante quatro meses em atmosfera refrigerada (AR) e oito meses
em atmosfera controlada (AC), seguido de sete dias de exposição dos frutos em
condição ambiente.................................................................................................. 27
Tabela 6 - Firmeza de polpa de maçãs ‘Royal Gala’ em função do dano mecânico e da
aplicação do 1-MCP, armazenadas por dois e quatro meses em atmosfera
refrigerada e mais sete dias em condição ambiente............................................... 33
Tabela 7 - Acidez titulável de maçãs ‘Royal Gala’ em função do dano mecânico e da
aplicação do 1-MCP, armazenadas por dois e quatro meses em atmosfera
refrigerada e mais sete dias em condição ambiente............................................... 35
Tabela 8 - Índice de cor (L) da polpa de maçãs ‘Royal Gala’ em função do dano mecânico e
da aplicação do 1-MCP, armazenadas por dois e quatro meses em atmosfera
refrigerada e mais sete dias em condição ambiente............................................... 36
Tabela 9 - Área escurecida no local do dano em maçãs ‘Royal Gala’ em função do dano
mecânico e da aplicação do 1-MCP, armazenadas por dois e quatro meses em
atmosfera refrigerada e mais sete dias em condição ambiente.............................. 37
Tabela 10 - Profundidade de escurecimento no local do dano em maçãs ‘Royal Gala’ em
função do dano mecânico e da aplicação do 1-MCP, armazenadas por dois e
quatro meses em atmosfera refrigerada e mais sete dias em condição ambiente..37
Tabela 11 - Firmeza de polpa, acidez titulável (AT), sólidos solúveis (SS), e índice de cor L
em maçãs ‘Fuji Suprema’ em função do dano mecânico durante quinze dias em
condição ambiente.................................................................................................. 46
LISTA DE ABREVIAÇÕES
AC - Atmosfera controlada
ACC - Aminociclopropano-1-carboxílico
AR - Armazenamento refrigerado
AT - Acidez titulável
ºBRIX - Graus brix
ºC - Graus celsius
CV - Coeficiente de variação
g - grama
hº - Ângulo hue
kg - Quilograma
kPa - Quilo pascal
L - Litro
L – Luminosidade (cor)
m
3
- metro cúbico
meq – mili equivalente
mL - mililitro
mm - milímetro
N - Normal (concentração de solução química)
N - Newton (unidade de firmeza de polpa)
NaOH - Hidróxido de sódio
nL - Nanolitro
NPP - Núcleo de Pesquisa em Pós-colheita
pH - Potencial de hidrogênio
PVC – Cloreto de polivinila
SS - Sólidos solúveis
UR - Umidade relativa
UFSM - Universidade Federal de Santa Maria
UDESC - Universidade do Estado de Santa Catarina
1-MCP - 1-metilciclopropeno
µL – Microlitro
SUMÁRIO
1 INTRODUÇÃO...........................................................................................................15
2 QUALIDADE DE MAÇÃS ‘ROYAL GALA’ SUBMETIDAS AO DANO
MECÂNICO POR IMPACTO E APLICAÇÃO DE 1-METILCICLOPROPENO
EM DOIS SISTEMAS COMERCIAIS DE ARMAZENAMENTO....................... 17
2.1 RESUMO...................................................................................................................... 17
2.1.1 ABSTRACT.................................................................................................................. 18
2.2 INTRODUÇÃO............................................................................................................ 18
2.3 MATERIAL E MÉTODOS.......................................................................................... 20
2.4 RESULTADOS E DISCUSSÃO................................................................................. 22
2.5 CONCLUSÃO.............................................................................................................. 27
3 QUALIDADE DE MAÇÃS ‘ROYAL GALA’ SUBMETIDAS AO DANO
MECÂNICO POR IMPACTO E TRATADAS COM 1-
METILCICLOPROPENO ANTES E APÓS O DANO.......................................... 28
3.1 RESUMO...................................................................................................................... 28
3.1.1 ABSTRACT.................................................................................................................. 28
3.2 INTRODUÇÃO............................................................................................................ 29
3.3 MATERIAL E MÉTODOS.......................................................................................... 30
3.4 RESULTADOS E DISCUSSÃO.................................................................................. 32
3.5 CONCLUSÃO.............................................................................................................. 39
4 AMADURECIMENTO E QUALIDADE DE MAÇÃS ‘FUJI SUPREMA’
SUBMETIDAS A DIFERENTES TIPOS DE DANO MECÂNICO...................... 40
4.1 RESUMO...................................................................................................................... 40
4.1.1 ABSTRACT.................................................................................................................. 41
4.2 INTRODUÇÃO............................................................................................................ 41
4.3 MATERIAL E MÉTODOS.......................................................................................... 43
4.4 RESULTADOS E DISCUSSÃO.................................................................................. 45
4.5 CONCLUSÃO.............................................................................................................. 47
5 CONCLUSÕES GERAIS........................................................................................... 48
6 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS...................................................................... 49
15
1 INTRODUÇÃO
A produção de maçãs no Brasil tem aumentado significativamente nas últimas
décadas, permitindo a transformação do País de importador para exportador (PEREZ, 2006).
O cultivo da maçã está instalado na região Sul do Brasil, envolvendo os três estados, os quais
possuem clima propício para a implantação desta cultura. Atualmente, as cultivares mais
plantadas são Gala, Fuji e suas mutantes, com colheita nos meses de fevereiro a março e de
março a maio, respectivamente.
A maçã possui vida pós-colheita longa comparativamente a outras espécies de frutos,
dependendo da cultivar e do sistema de armazenamento, pode ser armazenada por até nove
meses (STEFFENS et al., 2008). Apesar do grande potencial de armazenamento, seu
comportamento fisiológico pode ser alterado devido aos danos mecânicos que ocorrem
principalmente durante o processo de colheita, transporte e classificação.
Os danos mecânicos podem ser classificados basicamente em danos por compressão,
por impacto e corte, sendo os principais responsáveis pela perda de qualidade de maçãs,
pepinos, batatas e tomates (MORRETTI & SARGENT, 2000), e aceleração no
amadurecimento de quivis, peras e pêssegos (MENCARELLI et al., 1996; AGAR &
MITCHAM, 2000; KASAT et al., 2007)
Apesar de um aparente consenso da literatura na área de fisiologia pós-colheita sobre o
efeito dos danos mecânicos na indução do amadurecimento (KLUGE et al., 1996; BRAGA,
2004; MAIA, 2005; ALVES et al., 2007b) e na perda da qualidade dos frutos (CHITARRA &
CHITARRA, 2005; HENZ et al., 2005; DURIGAN & MATTIUZ, 2007b), nem sempre este
fato é observado. Santos et al. (2008) e Schwarz et al. (2008) não verificaram perda de
qualidade em caquis e pêssegos submetidos ao dano mecânico. Kasat et al. (2007), Durigan &
Mattiuz (2007a) e Sanches et al. (2008) não identificaram efeito do dano mecânico sobre o
teor de sólidos solúveis em pêssegos, abobrinha e abacates. Quintana & Paull (1993), De
Martino et al. (2006) e Steffens et al. (2008) não observaram diferença entre frutos
16
danificados e não danificados quanto a atividade respiratória em mamões, damascos e maçãs,
respectivamente. Kaaya & Njoroge (2004), por sua vez, verificaram que danos por impacto
seqüenciais, provocam a diminuição na taxa respiratória de tomates, o que também foi
observado em frutos submetidos ao dano por compressão, em que, além da redução na
evolução de gás carbônico, se verificou o atraso no amadurecimento (SILVA & CALBO,
1992). Entretanto, quando há efeito do dano, normalmente se observa, além da alteração na
aparência dos frutos, aceleração na taxa de perda de água e diminuição da matéria seca
(WILLS et al., 1998), penetração de agentes patogênicos (LUENGO et al., 2003),
escurecimento da polpa no local lesionado, aumento na taxa respiratória e de produção de
etileno (MATTIUZ & DURIGAN, 2001a; DURIGAN et al., 2005; STEFFENS et al., 2008).
Como o etileno está relacionado com a indução dos processos envolvidos no
amadurecimento dos frutos, esta maior produção de etileno, desencadeada pelo dano
mecânico, pode acelerar o processo de amadurecimento de maçãs, reduzindo a vida pós-
colheita dos frutos. Esta aceleração do amadurecimento decorre da ação do etileno, cuja
biossíntese sofre um incremento substancial nos tecidos afetados pelo dano mecânico
(ALVES et al., 2007a; STEFFENS et al., 2008).
A maioria dos efeitos do etileno pode ser regulada pela ação de inibidores de sua
síntese e/ou ação. Um produto que apresenta extraordinário efeito sobre a ação do etileno é o
1-metilciclopropeno (1-MCP). Este produto atua ligando-se irreversivelmente ao sítio de
ligação do etileno, impedindo que o mesmo ligue-se a seu receptor e assim desencadeie o
processo de amadurecimento dos frutos (DE MARTINO et al., 2006). Brackmann et al.
(2004) observaram redução na produção de etileno e na taxa respiratória em maçãs ‘Gala’
tratadas com 1-MCP, bem como melhor manutenção da qualidade dos frutos durante o
armazenamento. Em quivi, foi observado que o 1-MCP inibiu a indução do amadurecimento
pelo dano mecânico por impacto (ALVES et al., 2007b). Desta forma, o 1-MCP pode ser uma
alternativa para retardar ou até inibir o efeito do dano mecânico na indução do
amadurecimento de frutos, prolongando o período de armazenamento e mantendo a qualidade
dos frutos, bem como reduzir escurecimento da região danificada no fruto (STEFFENS et al.,
2008).
Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito do dano mecânico
sobre o amadurecimento e qualidade de maçãs das cultivares Royal Gala, em dois sistemas
comerciais de armazenamento, tratados ou não com 1-MCP, e Fuji Suprema armazenada em
temperatura ambiente
17
2 QUALIDADE DE MAÇÃS ‘ROYAL GALA’ SUBMETIDAS AO DANO
MECÂNICO POR IMPACTO E APLICAÇÃO DE 1-METILCICLOPROPENO EM
DOIS SISTEMAS COMERCIAIS DE ARMAZENAMENTO
2.1 RESUMO
O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do dano mecânico por impacto e da
aplicação de 1-metilciclopropeno (1-MCP) sobre a qualidade de maçãs ‘Royal Gala’ mantidas
em armazenamento refrigerado (AR) e em atmosfera controlada (AC). Os tratamentos
avaliados foram dano mecânico (sem e com dano por impacto) combinado com a aplicação de
1-MCP (0 e 625 nL L
-1
). Os frutos foram armazenados durante quatro meses em
armazenamento refrigerado (AR; 0ºC±1ºC e 92±2% de UR) (experimento 1) e durante oito
meses em atmosfera controlada (AC; 1,2 kPa de O
2
+ 2,0 kPa de CO
2
; 0ºC±0,1ºC e 96±2% de
UR) (experimento 2). Em AR, os frutos tratados com 1-MCP apresentaram maior firmeza de
polpa, além de maior área escurecida no local danificado, na saída da câmara. Nesta condição
de armazenamento, após sete dias em condição ambiente, os frutos tratados com 1-MCP
apresentaram acidez titulável mais elevada, maior escurecimento da epiderme e menor
profundidade de escurecimento da polpa, no local danificado. Em AC, a aplicação do 1-MCP
proporcionou, após a saída da câmara, frutos com menor teor de sólidos solúveis e maior
escurecimento da epiderme no local danificado, sendo que, após sete dias em condição
ambiente, os frutos apresentaram maior profundidade de escurecimento do tecido da polpa no
local danificado. O dano por impacto ocasionou escurecimento da polpa de maçãs ‘Royal
Gala’. O 1-MCP não inibiu os efeitos do dano, mas preservou a qualidade dos frutos,
especialmente em AR.
Palavras-chave: Amadurecimento. Etileno. Armazenamento refrigerado, Atmosfera
controlada.
18
2.1.1 ABSTRACT
The objective of this work was to evaluate the effects of impact injury and treatment
with 1-methylcyclopropene (1-MCP) on the quality of ‘Royal Gala’ apples in cold storage
(CS) and controlled atmosphere condition (CA). The treatments were impact injury (with and
without impact injury) combined with 1-MCP (0 and 625nL L
-1
). The fruits were stored for
four months in CS (0°C ± 1ºC and 92 ± 2% RH) (experiment 1) and for eight months in CA
(1.2 kPa O
2
+ 2.0 kPa CO
2
, 0°C ± 1ºC and 96 ± 2% RH) (experiment 2). In CS, fruits treated
with 1-MCP showed higher flesh firmness and larger area of flesh browning in the damaged
place, at removal from storage. After CS followed by seven days of shelf life, fruits treated
with 1-MCP showed higher titratable acidity, skin browning and smaller depth of flesh
browning in the damage place. In CA, 1-MCP application it provided, at removal from CA
storage, fruits with lower levels of soluble solids content and higher skin browning in the
damage place, and, after shelf life, fruit showed greater depth of flesh browning in the
damaged place. The impact injury caused flesh browning of ‘Royal Gala’ apples. 1-MCP did
not inhibit the effects of impact injury, but preserved fruit quality, especially in CS.
Keywords: Ripening. Ethylene. Cold storage. Controlled atmosphere.
2.2 INTRODUÇÃO
Os consumidores estão cada vez mais exigentes, aumentando assim a demanda por
frutos com alto padrão de qualidade. Os frutos continuam seus processos metabólicos depois
de colhidos, e estão suscetíveis a fatores estressantes, que podem causar a perda prematura de
qualidade. Impactos e vibrações durante a colheita, transporte e classificação podem
ocasionar danos mecânicos, os quais são responsáveis por consideráveis perdas de qualidade
na cadeia produtiva, desde o produtor até o consumidor (DINTWA et al., 2008). De acordo
com Barchi et al. (2002), os danos mecânicos são responsáveis pela deterioração de frutos e
vegetais, sendo estimadas perdas médias de 35%. Dentre os danos mais comuns destacam-se
os causados por impacto, compressão e corte (SANCHES et al., 2008). Esses danos podem
desencadear inúmeras respostas fisiológicas (MATTIUZ & DURIGAN, 2001a), como
alterações no metabolismo, no aroma e no sabor (MORETTI & SARGENT, 2000),
escurecimento da polpa, além do aumento na taxa respiratória e de produção de etileno
(MATTIUZ & DURIGAN, 2001a; DE MARTINO et al., 2006).
19
O etileno está relacionado com a indução dos processos envolvidos no
amadurecimento dos frutos, sendo que a maior produção de etileno, desencadeada pelo dano
mecânico, pode acelerar o processo de amadurecimento, reduzindo o período de
armazenamento dos frutos (STEFFENS et al., 2008). Outro grande problema decorrente dos
danos mecânicos, e identificado como uma das principais causas de perda em maçãs é a
presença de amassamento e escurecimento no local da lesão. Dados recentes de distribuidores
de maçãs demonstram que este problema pode ocasionar perdas de até 50% (LEWIS et al.,
2008).
Como forma de redução de perdas e controle da oferta de maçãs ao consumidor,
utilizam-se diferentes tecnologias de armazenamento, algumas bastante difundidas
comercialmente, como o caso do armazenamento refrigerado (AR) e da atmosfera controlada
(AC), as quais podem estar associadas ao uso do 1-metilciclopropeno (1-MCP). O
armazenamento em AC retarda substancialmente o amadurecimento dos frutos (CHITARRA
& CHITARRA, 2005). Além disso, o 1-MCP, por ser um produto que inibe a ação do etileno,
pode ser uma alternativa para retardar a indução do amadurecimento desencadeado pelo dano
mecânico (DAL CIN et al., 2006). Este produto atua ligando-se irreversivelmente ao sítio de
ligação do etileno, impedindo que o mesmo se ligue a seu receptor e assim desencadeie o
processo de amadurecimento dos frutos (DE MARTINO et al., 2006). Em damascos (DE
MARTINO et al., 2006) e maçãs (STEFFENS et al., 2008), o surgimento de uma região
escurecida na região lesionada foi retardado pelo uso do 1-MCP. Este efeito do 1-MCP pode
estar relacionado à menor atividade da enzima polifenoloxidase (WATKINS, 2006).
Apesar de existir um consenso quanto ao efeito do dano mecânico na perda da
qualidade de frutos armazenados, existem poucas informações no Brasil sobre os efeitos do
dano por impacto em maçãs. Além disso, alguns autores não observaram efeito do dano
mecânico na produção de etileno em mamões (QUINTANA & PAULL, 1993), na atividade
respiratória de tomates (KAAYA & NJOROGE, 2004) e mamões (QUINTANA & PAULL,
1993) e nos atributos de qualidade em caquis (SCHWARZ et al., 2008) e pêssegos (SANTOS
et al., 2008). Provavelmente, a divergência entre os trabalhos deve-se ao tipo e a intensidade
do dano, bem como a susceptibilidade dos frutos ao dano.
Sendo assim, este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito do dano mecânico por
impacto e da aplicação de 1-metilciclopropeno (1-MCP) sobre a qualidade de maçãs ‘Royal
Gala’ mantidas sob armazenamento refrigerado e em atmosfera controlada
20
2.3 MATERIAL E MÉTODOS
Os frutos utilizados neste trabalho foram colhidos em um pomar comercial no
município de Vacaria, RS, na safra 2007/2008. Depois de colhidos, os frutos foram colocados
em bandejas, e estas em caixas plásticas, cada uma contendo três bandejas sobrepostas.
Posteriormente, os frutos foram transportados para o Laboratório de Fisiologia e Tecnologia
Pós-colheita da Embrapa Uva e Vinho, onde foram aplicados os tratamentos. Os tratamentos
foram organizados em esquema bifatorial 2 x 2 (sem e com dano mecânico por impacto x sem
e com aplicação de 1-MCP).
O dano mecânico foi aplicado na região equatorial do lado mais vermelho dos frutos,
através da queda livre, de uma altura de 20 cm, sobre uma superfície metálica indeformável.
Para isso utilizou-se um equipamento de sucção, semelhante ao utilizado por Magalhães et al.
(2007), composto por uma bomba de vácuo (marca Fisatom, potência de 300 Watts),
conectada, através de uma tubulação de silicone, à uma tampa de dessecador recortada, fixada
a uma haste de 1,20 m de altura. No orifício da tampa, foi conectado um tubo de PVC de 40
mm, contendo uma ventosa que permite a aderência do fruto através do processo de sucção. A
base do equipamento consistiu em uma chapa de ferro. Após regulagem da altura de queda, a
bomba foi ligada e, deste modo, os frutos permaneceram suspensos, presos à ventosa, através
da força gerada pelo vácuo. Com o desligamento da bomba, na ausência de vácuo, ocorre a
queda livre do fruto. Na base do equipamento foi colocado pó de giz, permitindo que a cada
queda, o fruto fosse marcado na região do impacto e, posteriormente, assinalado com caneta
para retroprojetor na cor preta (marca Pilot, ponta de 2,0 mm), para identificação do local da
lesão. Antes da aplicação do dano, os frutos foram pesados individualmente e separados por
calibre, sendo regulada a altura de queda para cada calibre. Depois do dano, os frutos
receberam ou não tratamento com 1-MCP na dose de 625 nL L
-1
. Para o tratamento com 1-
MCP foi utilizado o produto SmartFresh
®
(0,14% de 1-MCP na formulação pó), na relação de
0,16g de produto/m
3
de câmara, para obter 1,0 µL L
-1
de 1-MCP. O produto foi solubilizado
em água, em condição ambiente, em um recipiente hermético e, posteriormente, a solução foi
transferida para uma placa de Petri dentro de uma minicâmara com volume de 0,45m
3
, com
fechamento hermético. Os frutos ficaram expostos ao tratamento por 24 horas a 20
o
C.
Parte dos frutos foi mantida durante quatro meses em sistema de armazenamento
refrigerado (AR; 0±1ºC e 92±2% de UR), junto à Embrapa Uva e Vinho, correspondendo ao
experimento 1, constituído de três repetições de cinco frutos. Outra parte dos frutos foi
transportada para o Núcleo de Pesquisa em Pós-colheita da Universidade Federal de Santa
21
Maria, correspondendo ao experimento 2. Neste experimento foram utilizadas três repetições
de 15 frutos para cada tratamento, com armazenamento durante oito meses em AC (1,2 kPa
de O
2
+ 2,0 kPa de CO
2
;
,
0±1ºC e 96±2% de UR).
Após o período de armazenamento, os frutos foram encaminhados ao Laboratório de
Pesquisa em Fisiologia Vegetal e Pós-colheita da Universidade do Estado de Santa Catarina
(UDESC), onde foram avaliados quanto aos atributos de firmeza de polpa, acidez titulável
(AT), sólidos solúveis (SS), escurecimento da epiderme e da polpa no local do dano e área e
profundidade de escurecimento no local do dano, logo após a saída da câmara e depois de sete
dias em condição ambiente.
Para medida da firmeza de polpa (N) removeu-se uma porção da epiderme e com
auxílio de um penetrômetro equipado com ponteira de 11 mm de diâmetro, fez-se a medida na
região equatorial dos frutos, intermediária entre o local do dano e o local oposto ao dano. Os
valores de AT (meq de ácido málico 100 mL
-1
) foram obtidos por meio de uma amostra de 10
mL de suco dos frutos, previamente extraída de fatias transversais retiradas da região
equatorial das maçãs, e triturada em uma centrífuga elétrica. Esta amostra foi diluída em 90
mL de água destilada e titulada com solução de hidróxido de sódio 0,1 N até pH 8,1. Os
teores de SS (ºBrix) foram determinados por refratometria, utilizando-se o suco extraído,
conforme descrito para a AT, sendo realizada a correção do efeito da temperatura (20°C). A
quantificação do escurecimento da epiderme e da polpa no local do dano foi feita através da
medição da luminosidade (L), que varia de 0 (preto) a 100 (branco), com um colorímetro
Minolta, modelo CR 400. Para as medidas da área de tecido escurecido, no local danificado,
retirou-se a epiderme e, com auxílio de um paquímetro digital, efetuou-se a medida
transversal e longitudinal da região escurecida no local do dano. Tais medidas foram
utilizadas no cálculo da área da elipse (A = πab; onde “a” e “b” correspondem à metade da
medida transversal e longitudinal, respectivamente). Para medida da profundidade de
escurecimento no local do dano foi retirada amostra da polpa com um furador de rolhas,
sendo mensurada a profundidade de tecido escurecido a partir da superfície da epiderme.
O delineamento utilizado foi em blocos ao acaso, sendo os dados submetidos à análise
da variância (ANOVA). Para a comparação das médias, adotou-se o teste de Tukey (P<0,05).
22
2.4 RESULTADOS E DISCUSSÃO
Na colheita, os frutos apresentavam firmeza de polpa de 79,97 N, AT de 5,3 meq 100
mL
-1
, teor de SS de 11,5º Brix e valor L (para quantificar o escurecimento no local danificado
após o impacto) de 41,96 para a epiderme e 83,13 para a polpa.
O dano mecânico não afetou a firmeza de polpa, em ambos os sistemas de
armazenamento e períodos de avaliação (Tabela 1). Steffens et al. (2008) também não
observaram efeito do dano mecânico sobre a firmeza de polpa de maçãs ‘Gala’ mantidas sob
condição ambiente. Contudo, em outros frutos tem-se observado que o dano mecânico acelera
a redução da firmeza de polpa (MATTIUZ & DURIGAN, 2001b; DE MARTINO et al.,
2006). Mattiuz & Durigan (2001b) citam que alguns frutos podem ser mais sensíveis que
outros ao dano mecânico, devido às suas características físicas, como tamanho, peso e grau de
hidratação celular. Em AR, frutos tratados com 1-MCP apresentaram maior firmeza de polpa
nos dois períodos de avaliação, independente da aplicação de dano mecânico (Tabela 1), com
valor superior ao mínimo utilizado como padrão ideal (60 N) (CORRENT et al., 2004).
Brackmann et al. (2004), trabalhando com a cultivar Gala em AR, também observaram maior
firmeza de polpa em frutos tratados com 1-MCP. A maior firmeza de polpa nos frutos
tratados com 1-MCP está diretamente relacionada à redução na ação e produção do etileno. O
etileno aumenta a atividade das enzimas responsáveis pela perda de firmeza de polpa
(MAJUMDER & MAZUMDAR, 2002). Contudo, em AC não foi observado efeito do 1-MCP
na manutenção da firmeza de polpa. Brackmann et al. (2008) também não observaram efeito
do 1-MCP na manutenção da firmeza de polpa, na saída da câmara, em maçãs ‘Gala’
armazenadas em AC. Em AC, todos os tratamentos apresentaram firmeza de polpa superior a
60 N, não havendo diferença estatística entre os mesmos (Tabela 1). De acordo com Corrent
et al. (2004), em condições de AC maçãs ‘Royal Gala’ apresentam redução de firmeza de
polpa menos acentuada do que em AR, o que pode explicar o fato do 1-MCP não ter
apresentado efeito sobre a manutenção da firmeza de polpa na condição de AC.
23
Tabela 1 - Firmeza de polpa de maçãs ‘Royal Gala’, armazenadas durante quatro meses em atmosfera
refrigerada (AR) e oito meses em atmosfera controlada (AC), seguido de sete dias de exposição em
condição ambiente.
Firmeza de polpa (N)
----------------- AR -----------------
----------------- AC -----------------
--------
1
MCP
--------
--------
1
MCP
--------
Tratamentos
Com
Sem
Média
Com
Sem
Média
------------------------------- Saída da câmara ----------------------------------
Sem dano 67,86 56,47 62,16a 71,03 72,51 71,77a
Com dano 66,26 57,85 62,05a 71,71 71,49 71,59a
Média 67,06A 57,16B 71,37A
72,00A
CV% 5,34 1,38
------------------------------ Condição ambiente ------------------------------
Sem dano 66,61 45,90 56,25a 67,46 71,27 69,38a
Com dano 65,27 53,34 59,30a 65,06 68,83 66,34a
Média 65,93A 49,62B 66,26A
70,04A
CV% 9,22
4,68
Médias seguidas pela mesma letra, minúscula na vertical e maiúscula na horizontal, em um mesmo sistema de
armazenamento, não diferem pelo teste de Tukey (P<0,05)
Não houve diferença estatística quanto à AT (Tabela 2) e ao teor de SS (dados não
apresentados) entre os frutos sem e com dano mecânico, em ambos os sistemas de
armazenamento e períodos de avaliação. Da mesma forma, outros autores não verificaram
efeito do dano mecânico sobre estes atributos em abacate (SANCHES et al., 2008), maçã
(STEFFENS et al., 2008) e damasco (DE MARTINO et al., 2006). Contudo, em goiabas
houve menor AT nos frutos submetidos ao dano mecânico (MATTIUZ & DURIGAN,
2001b). Em maçãs sem dano mecânico armazenadas em AR, o 1-MCP proporcionou maior
AT após sete dias em condição ambiente, o mesmo não ocorrendo com os teores de SS. Estes
resultados estão de acordo com os obtidos por Brackmann et al. (2004), que observaram
maior AT em maçãs tratadas com 1-MCP, mas não sobre o teor de SS. A diminuição da AT e
do teor de SS ocorre como resultado da utilização de substratos no processo respiratório.
Segundo Corrent et al. (2004), a manutenção da AT nos frutos tratados com 1-MCP pode ser
explicada através da menor atividade metabólica. Em frutos com dano mecânico, não foram
observados efeitos do 1-MCP na AT e no teor de SS. Esse comportamento pode ser resultado
da diminuição dos efeitos do 1-MCP devido à formação de novos sítios de ligação ao etileno.
Apesar do mesmo se ligar irreversivelmente ao sítio, há o retorno da sensibilidade ao etileno
pelos frutos, resultado da formação de novos receptores (BLANKENSHIP & DOLE, 2003),
os quais podem ser induzidos pelo dano (STEFFENS et al., 2008).
24
Embora tenha sido verificado efeito positivo do 1-MCP sobre a manutenção da AT em
AR, o mesmo não foi observado em AC (Tabela 2). Os resultados obtidos no presente
trabalho concordam com Watkins et al. (2000) os quais encontraram maior AT em diferentes
cultivares de maçãs, tratadas com 1-MCP e armazenadas em AR, porém, efeitos
inconsistentes foram verificados em AC.
Tabela 2 - Acidez titulável de maçãs ‘Royal Gala’, armazenadas durante quatro meses em atmosfera refrigerada
(AR) e oito meses em atmosfera controlada (AC), seguido de sete dias de exposição em condição
ambiente.
Acidez titulável (meq 100mL
-1
)
----------------- AR -----------------
----------------- AC -----------------
--------
1
MCP
--------
--------
1
MCP
--------
Tratamentos
Com
Sem
Média
Com
Sem
Média
------------------------------- Saída da câmara ----------------------------------
Sem dano 3,26 3,01 3,13a 3,30 3,51 3,40a
Com dano 3,55 2,95 3,25a 3,34 3,59 3,46a
Média 3,40A 2,98A 3,31A 3,55A
CV% 16,44 6,23
------------------------------ Condição ambiente ------------------------------
Sem dano 3,91Aa 2,76Ba 3,33 4,79 5,20 4,99a
Com dano 3,37Aa 2,97Aa 3,16 4,37 3,97 4,17a
Média 3,63 2,86 4,58A 4,59A
CV% 8,33
19,36
Médias seguidas pela mesma letra, minúscula na vertical e maiúscula na horizontal, em um mesmo sistema de
armazenamento, não diferem pelo teste de Tukey (P<0,05).
Embora não tenha sido observada diferença estatística entre frutos com e sem dano
mecânico quanto ao valor L da cor da epiderme (dados não apresentados), o dano mecânico
causou maior redução no valor L da polpa, em ambas as avaliações e sistemas de
armazenamento, indicando que houve escurecimento do tecido na região danificada (Tabela
3). Resultados similares foram obtidos por STEFFENS et al. (2008) em maçãs submetidas a
dano mecânico. Dependendo da intensidade do impacto, pode haver dano no sistema de
membranas, levando à descompartimentação das células da polpa na região lesionada e,
assim, à oxidação dos compostos fenólicos (STEFFENS et al., 2008). O tratamento com 1-
MCP e o armazenamento em condição de AC não apresentaram efeito sobre o controle do
escurecimento em frutos submetidos ao dano mecânico (Tabela 3). Steffens et al. (2008) não
verificaram efeito da aplicação de 1-MCP em maçãs, efetuada antes do dano mecânico, na
diminuição do escurecimento na região lesionada. No entanto, estes autores observaram que a
aplicação de 1-MCP após a ocorrência do dano mecânico reduziu o escurecimento da região.
25
O dano mecânico pode induzir a formação de novos receptores de etileno. Desta forma, o
tratamento com 1-MCP após o dano mecânico impede que o etileno se ligue a estes novos
receptores, reduzindo assim a atividade da enzima polifenoloxidase.
Tabela 3 - Índice de cor (L) da polpa de maçãs ‘Royal Gala’, armazenadas durante quatro meses em atmosfera
refrigerada (AR) e oito meses em atmosfera controlada (AC), seguido de sete dias de exposição em
condição ambiente.
Cor de polpa (L) no local danificado
---------------
--
AR
-----------------
-----------------
AC
-----------------
--------
1
MCP
--------
--------
1
MCP
--------
Tratamentos
Com
Sem
Média
Com
Sem
Média
---------------------------------- Saída da câmara --------------------------------
Sem dano 81,18 81,69 81,43a 80,85 80,90 80,87a
Com dano 76,68 75,19 75,93b 75,95 76,20 76,07b
Média 78,93A 78,44A 78,40A 78,54A
CV% 1,58 1,13
------------------------------ Condição ambiente ------------------------------
Sem dano 81,56 82,52 82,03a 81,41 82,19 81,79a
Com dano 75,51 75,94 75,72b 75,78 75,64 75,71b
Média 78,53A 79,22A 78,59A 78,91A
CV% 1,05
1,51
Médias seguidas pela mesma letra, minúscula na vertical e maiúscula na horizontal, em um mesmo sistema de
armazenamento, não diferem pelo teste de Tukey (P<0,05).
A menor área de tecido escurecido no local danificado foi de 2,21 cm
2
(Tabela 4), a
qual, de acordo com padrões internacionais de qualidade, inviabilizaria a comercialização
destes frutos (PANG et al., 1996). Segundo estes autores, a avaliação da superfície da lesão é
mais relevante que o volume para medida do tecido escurecido. Na prática, a medida de área
lesionada é importante, pois quantifica o que está prontamente visível ao consumidor
(ZEEBROECK et al., 2007; LEWIS et al., 2008). De acordo com Cliff et al. (2002), o
tamanho do dano não é o fator mais importante, e sim, o aspecto visual do fruto danificado.
26
Tabela 4 - Área escurecida no local do dano em maçãs ‘Royal Gala’, armazenadas durante quatro meses em
atmosfera refrigerada (AR) e oito meses em atmosfera controlada (AC), seguido de sete dias de
exposição dos frutos em condição ambiente.
Área escurecida no local danificado (cm
2
)
----------------- AR ----------------- ----------------- AC ----------------
--------
1
MCP
--------
--------
1
MCP
-----
Tratamentos
Com
Sem
Média
Com
Sem
Média
---------------------------------- Saída da câmara ------------------------------
Sem dano 0,00Ab 0,00Ab 0,00 0,00 0,00 0,00b
Com dano 4,03Aa 2,84Ba 3,43 2,73 2,85 2,79a
Média 2,01 1,43 1,36A 1,42A
CV% 14,02 6,16
------------------------------ Condição ambiente ------------------------------
Sem dano 0,00 0,00 0,00b 0,00 0,00 0,00b
Com dano 3,80 3,62 3,71a 2,26 2,21 2,23a
Média 1,90A 1,81A 1,13A 1,10A
CV% 27,58
15,69
Médias seguidas pela mesma letra, minúscula na vertical e maiúscula na horizontal, em um mesmo sistema de
armazenamento, não diferem pelo teste de Tukey (P<0,05).
Para frutos em AR, o tratamento com 1-MCP aumentou a área de escurecimento no
local danificado, na remoção da câmara (Tabela 4), e após sete dias em condição ambiente,
reduziu o valor de profundidade de tecido escurecido (Tabela 5). Em AC, o tratamento com 1-
MCP proporcionou o maior valor de profundidade de escurecimento no local danificado após
sete dias de exposição dos frutos em condição ambiente (Tabela 5). O dano é influenciado por
propriedades mecânicas e pela geometria da célula, resistência da parede celular e presença de
espaços intercelulares (ZEEBROECK et al., 2007). De acordo com Ragni & Berardinelli
(2001) uma variação de 10% no raio de curvatura no local do impacto, pode ocasionar uma
diferença de até 12% no diâmetro do dano. Desta forma, as diferenças observadas entre os
tratamentos, podem estar associadas ao formato de cada fruto e não ao 1-MCP.
27
Tabela 5 - Profundidade de escurecimento no local do dano em maçãs ‘Royal Gala’, armazenadas durante quatro
meses em atmosfera refrigerada (AR) e oito meses em atmosfera controlada (AC), seguido de sete
dias de exposição dos frutos em condição ambiente.
Profundidade de escurecimento no local danificado (cm)
----------------- AR ----------------- ----------------- AC ----------------
--------
1
MCP
--------
--------
1
MCP
-----
Tratamentos
Com
Sem
Média
Com
Sem
Média
---------------------------------- Saída da câmara ------------------------------
Sem dano 0,00 0,00 0,00b 0,00 0,00 0,00b
Com dano 0,46 0,42 0,44a 0,33 0,39 0,36a
Média 0,23A 0,21A 0,16A 0,19A
CV% 9,60 14,69
--------------------------------- Condição ambiente ---------------------------
Sem dano 0,00 0,00 0,00b 0,00 0,00 0,00b
Com dano 0,37 0,42 0,39a 0,37 0,30 0,33a
Média 0,18B 0,21A 0,18A 0,15B
CV% 5,78
7,67
Médias seguidas pela mesma letra, minúscula na vertical e maiúscula na horizontal, em um mesmo sistema de
armazenamento, não diferem pelo teste de Tukey (P<0,05).
2.5 CONCLUSÃO
O dano mecânico, ocasionado pelo impacto do fruto a uma altura de 20 cm sobre
superfície rígida, não possui efeito sobre a indução do amadurecimento, mas ocasiona
escurecimento da polpa em maçãs ‘Royal Gala’. O uso do 1-MCP não retarda os efeitos
decorrentes do dano mecânico, no entanto, proporciona melhor manutenção dos atributos de
qualidade em atmosfera refrigerada. A atmosfera controlada preserva a qualidade dos frutos,
porém, sem efeito sinérgico com o 1-MCP
28
3 QUALIDADE DE MAÇÃS ‘ROYAL GALA’ SUBMETIDAS AO DANO
MECÂNICO POR IMPACTO E TRATADAS COM 1-METILCICLOPROPENO
ANTES E APÓS O DANO
3.1 RESUMO
Foram conduzidos dois experimentos com o objetivo de avaliar o efeito do dano
mecânico por impacto e da aplicação de 1-metilciclopropeno, antes e após o dano, sobre a
qualidade de maçãs ‘Royal Gala’ após o armazenamento refrigerado. Os tratamentos
avaliados foram: controle (sem dano e sem 1-MCP), 1-MCP, dano mecânico por impacto, 1-
MCP + dano mecânico, dano mecânico + 1-MCP, armazenados por dois e quatro meses em
ambiente refrigerado seguidos por sete dias em condição ambiente. No experimento 1 o dano
por impacto foi realizado através da queda livre dos frutos a uma altura de 10 cm e no
experimento 2 a 20 cm. O dano mecânico não apresentou efeito na firmeza de polpa, acidez
titulável, sólidos solúveis e índice de cor L da epiderme no local danificado, todavia provocou
escurecimento da polpa no local danificado. No experimento 1, não se observou efeito do 1-
MCP na área e profundidade de escurecimento no local do dano. Contudo, no experimento 2
houve incremento nestas variáveis no tratamento dano mecânico + 1-MCP. O 1-MCP
contribuiu para manutenção da firmeza de polpa e da acidez titulável, porém não reduziu os
efeitos do dano mecânico, independentemente do momento da aplicação. Com o aumento no
período de armazenamento houve redução nos valores de firmeza de polpa e acidez titulável
em frutos não tratados com 1-MCP, e do teor de sólidos solúveis em frutos tratados ou não.
Palavras-chave: Malus domestica. Amadurecimento. Injúria. Pós-colheita.
3.1.1 ABSTRACT
Two experiments were carried to evaluate the effect of impact damage and treatment
with 1-methylcyclopropene, before and after the damage, on the quality of ‘Royal Gala’
apples after cold storage (CS). The treatments evaluated were: control (without damage and
without 1-MCP), 1-MCP, mechanical impact damage, 1-MCP + impact damage, impact
29
damage + 1-MCP, stored for two and four months in cold storage following to seven days of
shelf life. In experiment 1, the impact damage was done through the free fall of 10 cm and in
experiment 2 to 20 cm. The impact damage had no effect on flesh firmness, titratable acidity,
soluble solids content and L color index of the skin , however caused flesh browning in the
damaged place. In experiment 1 there was no effect of 1-MCP in the area and depth of flesh
browning in the damage place. However, in experiment 2, treatment mechanical damage + 1-
MCP increased the value of these variables. 1-MCP contributed to maintenance of flesh
firmness and titratable acidity, but did not reduce the effects of mechanical damage,
independently of the time of application. With the increase in the period of storage there was
reduction in the values of flesh firmness and titratable acidity of fruits no treated with 1-MCP
and soluble solids content in treated fruits or not.
Key words: Malus domestica. Ripening. Injury. Postharvest.
3.2 INTRODUÇÃO
Os danos mecânicos são responsáveis pela deterioração de frutos e hortaliças, e
ocorrem durante a colheita, embalagem e acondicionamento, sendo estimadas perdas entre 30
e 40% decorrente destes danos (BARCHI et al., 2002). Dependendo da intensidade dos danos,
pode ocorrer escurecimento da polpa, aumento na taxa respiratória e de produção de etileno
(MATTIUZ & DURIGAN, 2001), além de acelerar a taxa de perda de água e diminuir a
matéria seca dos produtos (WILLS et al., 1998).
Pang et al. (1996), trabalhando em linhas de beneficiamento de maçã, verificaram uma
incidência de 93% de deformação da casca e/ou escurecimento em ‘Gala’ devido ao dano
mecânico. Ragni & Berardinelli (2001) observaram que impactos gerados no momento do
descarregamento das maçãs, na linha de beneficiamento, podem provocar profundidade e
diâmetro de escurecimento da polpa de 5 e 15 mm, respectivamente, os quais não são
eliminados com o descasque. O escurecimento da polpa no local da lesão é considerado como
uma das desordens mais comuns em pós-colheita (LINDEN et al., 2008), e uma das principais
causas de perdas em maçãs, podendo alcançar níveis acima de 50% (LEWIS et al., 2008).
Além do prejuízo visual gerado pelo dano mecânico, a maior produção de etileno,
causada em virtude do estresse, pode acelerar respostas fisiológicas ligadas ao
amadurecimento (STEFFENS et al., 2008). O aumento da produção de etileno está
relacionado proporcionalmente à quantidade de estresses mecânicos sofridos (MORRETI,
30
2007) e ocorre devido a perturbações na membrana plasmática, a qual responde com
mudanças em suas características físicas induzindo a produção de etileno para tentar reparar
os danos (VITTI et al., 2004). Este maior amadurecimento ligado ao etileno tem sido
associado à ação do mesmo sobre a atividade de enzimas hidrolítcas, como
poligalacturonases, pectinametilesterases, ß-galactosidases e celulases (BRUMMELL &
HARPSTER, 2001).
Mesmo em concentrações muito baixas, o etileno pode acelerar o amadurecimento e a
senescência dos frutos (SAQUET & STREIF, 2002), sendo necessária a inibição de sua
síntese ou de sua ação para retardar esse processo (GIRARDI et al., 2003). Um produto que
apresenta extraordinário efeito sobre a ação do etileno é o 1-metilciclopropeno (1-MCP).
De acordo com Watkins (2006), o 1-MCP reduz a atividade das enzimas
aminociclopropano carboxilase sintase (ACC sintase) e 1-aminociclopropano carboxilase
oxidase (ACC oxidase). Ele atua ligando-se irreversivelmente ao sítio de ligação do etileno,
impedindo que o mesmo ligue-se a seu receptor (DE MARTINO et al., 2006), entretanto, com
o passar do tempo, há o retorno da sensibilidade ao etileno, resultado da formação de novos
sitios de ligação (BLANKENSHIP & DOLE, 2003). Steffens et al. (2008) observaram
redução no escurecimento da região lesionada com a aplicação do 1-MCP após a ocorrência
do dano mecânico. Segundo estes autores, o dano mecânico pode induzir a formação de novos
receptores de etileno e o tratamento com 1-MCP, após o dano mecânico, impede que o etileno
se ligue a estes novos receptores.
Desta forma, este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito do dano mecânico por
impacto e da aplicação de 1-MCP, antes e após o dano, sobre o amadurecimento e qualidade
de maçãs ‘Royal Gala’ após o armazenamento refrigerado.
3.3 MATERIAL E MÉTODOS
Foram realizados dois experimentos. Frutos colhidos em pomar comercial no
município de Vacaria – RS, foram acondicionados em bandejas e transportados até a sede da
Embrapa Uva e Vinho, onde os tratamentos foram aplicados. Os tratamentos, compostos por
três repetições e unidade experimental de cinco frutos, sendo compostos pelo controle (sem
dano e sem 1-MCP), 1-MCP, dano mecânico por impacto, 1-MCP + dano mecânico, dano
mecânico + 1-MCP, em dois períodos de armazenamento (dois e quatro meses de
armazenamento refrigerado mais sete dias em condição ambiente).
31
No experimento 1 o dano por impacto foi realizado através da queda livre dos frutos a
uma altura de 10 cm e no experimento 2 a 20 cm. O dano mecânico foi aplicado na região
equatorial do lado mais vermelho dos frutos, através da queda livre, sobre uma superfície
metálica indeformável. Para isso utilizou-se um equipamento de sucção, semelhante ao
utilizado por Magalhães et al. (2007), composto por uma bomba de vácuo (marca Fisatom,
potência de 300 Watts), conectada, através de uma tubulação de silicone, à uma tampa
recortada de dessecador fixa à uma haste de 1,20 m de altura. No orifício da tampa, foi
conectado um tubo de PVC de 40 mm, contendo uma ventosa que permite a aderência do
fruto através do processo de sucção. A base do equipamento consistiu em uma chapa de ferro.
Após regulagem da altura de queda, a bomba foi ligada e, deste modo, os frutos
permaneceram suspensos, presos à ventosa, através da força gerada pelo vácuo. Com o
desligamento da bomba, na ausência de vácuo, ocorre a queda livre do fruto. Na base do
equipamento foi colocado pó de giz, permitindo que a cada queda, o fruto fosse marcado na
região do impacto e, posteriormente, assinalado com caneta para retroprojetor na cor preta
(marca Pilot, ponta de 2,0 mm), para identificação do local da lesão. Antes da aplicação do
dano, os frutos foram pesados individualmente e separados por calibre, sendo regulada a
altura de queda para cada calibre.
O 1-MCP foi aplicado, antes e após o dano, na dose de 625nL L
-1
. Para o tratamento
com 1-MCP foi utilizado o produto SmartFresh
®
(0,14% de 1-MCP na formulação pó), na
relação de 0,16g de produto/m
3
de câmara, para obter 1,0 µL L
-1
de 1-MCP. O produto foi
solubilizado em água, em condição ambiente, em um recipiente hermético e, posteriormente,
a solução foi transferida para uma placa de Petri dentro de uma minicâmara com volume de
0,45m
3
, com fechamento hermético. Os frutos ficaram expostos ao tratamento por 24 horas.
Depois de aplicado os tratamentos, os frutos foram armazenados em atmosfera
refrigerada na temperatura 0±1ºC com umidade relativa (UR) de 92±2%, sendo avaliados
após dois e quatro meses de armazenamento mais sete dias de exposição em condição
ambiente, quanto aos seguintes atributos de qualidade: firmeza de polpa, acidez titulável
(AT), sólidos solúveis (SS), escurecimento da epiderme e da polpa (índice de cor L) área e
profundidade de escurecimento do tecido no local do dano.
Para medida da firmeza de polpa removeu-se uma porção da epiderme e com auxílio
de um penetrômetro equipado com ponteira de 11mm de diâmetro, fez-se a medida na região
equatorial dos frutos e intermediaria entre o dano e a oposta ao dano, sendo os resultados
expressos em Newton (N). Os valores de AT foram obtidos por meio de uma amostra de 10
mL de suco dos frutos, previamente extraída de fatias transversais retiradas da região
32
equatorial das maçãs, e triturada em uma centrífuga elétrica. Esta amostra foi diluída em 90
mL de água destilada e titulada com solução de hidróxido de sódio 0,1N até pH 8,1, sendo os
resultados expressos em meq 100mL
-1
. Os teores de SS foram determinados por refratometria,
utilizando-se o suco extraído, conforme descrito para a AT, sendo realizada a correção do
efeito da temperatura (20°C) e os resultados expressos em ºBrix. A determinação do índice de
cor L, que varia de 0 (preto) a 100 (branco), foi efetuada com um colorímetro Minolta,
modelo CR 400, sendo as leituras realizadas, no local do dano (epiderme e polpa). Para as
medidas da área de tecido escurecido no local danificado, retirou-se a epiderme e com auxílio
de um paquímetro digital, fez-se a medida do lado transversal e longitudinal do dano, sendo
transformados em medida de área através da fórmula da área da elipse (A = πab), onde “a” e
“b” correspondem à metade da medida transversal e longitudinal, respectivamente. Para
medida da profundidade de escurecimento foi retirada amostra da polpa com um furador de
rolhas, sendo mensurada a distância do escurecimento a partir da superfície da epiderme.
O delineamento utilizado foi o de blocos ao acaso, sendo os dados submetidos à
análise da variância (ANOVA). Para a comparação das médias, adotou-se o teste de Tukey
(P<0,05).
3.4 RESULTADOS E DISCUSSÃO
Na colheita, os frutos apresentavam firmeza de polpa de 79,97 N, AT de 5,3 meq 100
mL
-1
, teor de SS de 11,5º Brix e valor L (para quantificar o escurecimento no local danificado
após o impacto) de 41,96 para a epiderme e 83,13 para a polpa.
No experimento 1, na avaliação realizada na saída da câmara, houve interação entre os
fatores avaliados para as variáveis firmeza de polpa. Após sete dias em condição ambiente, se
verificou interação para a variável firmeza de polpa, acidez titulável e profundidade de
escurecimento no local danificado. No experimento 2, não se observou interação entre os
fatores avaliados em todas as variáveis, na saída da câmara, porém houve para acidez titulável
e cor da polpa no local danificado, após sete dias em condição ambiente (Tabelas 6, 7, 8, 9 e
10). O dano mecânico não influenciou nos valores de firmeza de polpa, em ambos os
experimentos e avaliações (Tabela 6). Steffens et al. (2008) também não observaram
influência do dano mecânico sobre a firmeza de polpa de maçãs ‘Gala’. Contudo, Kasat et al.
(2007) identificaram menor firmeza de polpa em pêssegos submetidos ao dano por impacto,
todavia, a diferença entre os trabalhos possivelmente deva-se às intensidades de dano testadas
ou à sensibilidade ao dano mecânico diferenciada entre as espécies.
33
Tabela 6 - Firmeza de polpa de maçãs ‘Royal Gala’ em função do dano mecânico e da aplicação do 1-MCP,
armazenadas por dois e quatro meses em atmosfera refrigerada, e mais sete dias em condição
ambiente.
Firmeza de polpa (N)
-------
Saída da câmara
-----
--
---
Condição ambiente
----
Tratamento
2 meses
4 meses Média 2 meses
4 meses Média
---------- 10 cm ----------
Controle 65,72Aa
56,47Ab 61,10 60,01Ab
45,89Bb 52,95
1-MCP 69,72Aa
67,85Aa 68,79 67,40Aa
66,60Aa
67,00
1-MCP + Dano 73,18Aa
69,27Aa 71,22 71,45Aa
70,85Aa
71,15
Dano + 1-MCP 67,53Aa
73,37Aa 70,45 68,10Aa
61,35Aa
64,72
Dano mecânico 66,41Aa
56,83Ab 61,62 64,38Ab
49,36Bb 56,87
Média 68,51 64,76 66,27 58,81
CV% 5,22 6,26
---------- 20 cm ---------- ------- Saída da câmara ------- --- Condição ambiente ----
Controle 65,72 56,47 61,10b 60,01 45,89 52,95b
1-MCP 69,72 67,85 68,79a 67,40 66,60 67,00a
1-MCP + Dano 75,47 68,61 72,04a 73,19 63,67 68,43a
Dano + 1-MCP 72,01 66,26 69,14a 69,00 65,27 67,13a
Dano mecânico 64,82 57,85 61,33b 58,79 53,34 56,06b
Média 69,55A 63,41B 65,68A 58,95B
CV% 4,93 6,73
Médias seguidas pela mesma letra, minúscula na vertical e maiúscula na horizontal, em um mesmo nível de dano
mecânico, não diferem pelo teste de Tukey (P<0,05).
No experimento 1, após dois meses de armazenamento, a aplicação de 1-MCP não
influenciou a firmeza de polpa, na avaliação realizada na saída da câmara, contudo, após sete
dias os frutos apresentaram maior firmeza de polpa do que os não tratados ( Tabela 6). Após
quatro meses de armazenamento, o 1-MCP manteve maior firmeza de polpa dos frutos, na
saída da câmara e após sete dias de exposição dos frutos em condição ambiente. Este efeito do
1-MCP ocorreu tanto em frutos danificados como em frutos que não sofreram dano mecânico.
No experimento 2, o 1-MCP também manteve maior firmeza de polpa em frutos danificados e
não danificados, independente do tempo de armazenamento e do momento de avaliação
(Tabela 6). A firmeza dos frutos está associada às substâncias pécticas que atuam como
material cimentante e encontram-se, principalmente, depositadas na parede celular
(OLIVEIRA et al., 2002). A hidrólise de carboidratos estruturais, especialmente, substâncias
pécticas e hemicelulose, enfraquece a parede celular e a força coesiva que liga as células
(VIEITES et al., 2007). A maior firmeza dos frutos tratados com 1-MCP está associada à
redução da atividade das enzimas pectolíticas, devido à redução da ação do etileno
(JACOMINO et al., 2002; BRUMMELL & HARPSTER, 2001).
34
Em ambos os experimentos o dano mecânico não influenciou nos valores de AT
(Tabela 7). Na saída da câmara, nos dois experimentos, não houve efeito substancial da
aplicação do 1-MCP sobre a manutenção da AT, independente do tempo de armazenamento e
da presença ou não de dano mecânico. Após o período em condição ambiente, houve
interação entre os fatores avaliados. No experimento 1, após dois meses mais sete dias em
condição ambiente, observou-se o maior valor de AT nos tratamentos 1-MCP + dano e 1-
MCP. Contudo, no experimento 2, com dois meses de armazenamento, os frutos tratados com
1-MCP, independente da presença do dano mecânico, mantiveram valores de AT maiores que
os frutos submetidos ao dano mecânico, mas sem diferir do tratamento controle. Com quatro
meses de armazenamento mais sete dias em condição ambiente, os frutos tratados com 1-
MCP apresentaram AT mais elevada, não diferindo dos tratamentos dano + 1-MCP, em
ambos os experimentos, e 1-MCP + dano, no experimento 1. (Tabela 7). Apesar de um
comportamento variável entre os tratamentos, verificou-se, na maioria dos casos, AT superior
nos frutos tratados com 1-MCP. Alguns autores observam manutenção da AT de maçãs ‘Law
Rome’, ‘Delicious’, ‘Empire’, ‘McIntosh’; ‘Gala’ e ‘Royal Gala’ quando tratadas com 1-
MCP (WATKINS et al., 2000; BRACKMANN et al., 2004; CORRENT et al., 2004). A maior
acidez encontrada nos frutos tratados está relacionada a menor atividade metabólica nestes
frutos, ocorrendo redução da intensidade respiratória e do consumo de ácidos orgânicos
(CORRENT et al., 2004).
Após dois meses mais sete dias, verificou-se o menor valor de AT nos frutos
danificados sem 1-MCP, todavia, sem diferença significativa para os frutos do controle. O
fato de o tratamento com 1-MCP + dano apresentar valor significativamente menor de acidez
que os frutos do tratamento 1-MCP pode estar relacionado à formação de novos receptores de
etileno induzidos pelo dano mecânico. Tanto o dano mecânico, quanto a aplicação de 1-MCP,
não influenciaram os teores de SS. Os frutos apresentaram decréscimo no teor de SS com o
aumento no período de armazenamento em ambos os experimentos, sendo a diferença
significativa somente em condição ambiente (dados não apresentados).
Em ambos os experimentos e avaliações, independente do tempo de armazenamento, o
dano mecânico e a aplicação de 1-MCP não influenciaram o valor de L na epiderme no local
danificado (dados não apresentados).
Com relação à cor da polpa no local danificado, houve, nos dois experimentos,
escurecimento dos frutos que foram submetidos ao dano mecânico, independente da aplicação
do 1-MCP (Tabela 8). Lewis et al. (2008) não observaram descoloração da epiderme no local
da lesão gerada pelo dano, todavia após o descasque se observou escurecimento da polpa.
35
Steffens et al. (2008) também observaram escurecimento da região lesionada em frutos
danificados. O escurecimento está relacionado ao dano nas membranas celulares, que,
dependendo da intensidade do dano, tornam-se incapazes de compartimentalizar o conteúdo
celular, ocorrendo o contanto de enzimas oxidativas com os compostos fenólicos do vacúolo,
resultando em reações de escurecimento (LEWIS et al., 2008). O 1-MCP não influenciou no
índice de cor L da polpa. Steffens et al. (2008) verificaram que a aplicação de 1-MCP, antes
do dano mecânico, não diminuiu o escurecimento na região lesionada, no entanto, os mesmos
autores identificaram menor escurecimento da polpa quando os frutos foram tratados com 1-
MCP após o dano, o que não foi verificado no presente trabalho.
Tabela 7 - Acidez titulável de maçãs ‘Royal Gala’ em função do dano mecânico e da aplicação do 1-MCP,
armazenadas por dois e quatro meses em atmosfera refrigerada, e mais sete dias em condição
ambiente.
Acidez titulável (meq 100mL
-1
)
-------
Saída da câmara
-------
---
Condição ambiente
---
Tratamento
2 meses
4 meses Média 2 meses
4 meses Média
---------- 10 cm ----------
Controle 4,22 3,01 3,61ab 4,12Abc
2,75Bc 3,43
1-MCP 4,07 3,26 3,66ab 4,54Aab
3,91Ba 4,22
1-MCP + Dano 4,47 3,84 4,15a 4,84Aa 3,55Bab
4,19
Dano + 1-MCP 4,06 3,43 3,74ab 4,06Abc
3,39Bab
3,72
Dano mecânico 3,74 3,00 3,37b 3,83Ac 3,02Bbc
3,42
Média 4,11A 3,30B 4,28 3,32
CV% 11,58 5,61
---------- 20 cm ---------- ------- Saída da câmara ----- ----- Condição ambiente -----
Controle 4,22 3,01 3,61a 4,12Aab
2,75Bb 3,43
1-MCP 4,07 3,26 3,66a 4,54Aa 3,91Aa 4,22
1-MCP + Dano 4,20 3,36 3,77a 4,44Aa 2,91Bb 3,67
Dano + 1-MCP 3,93 3,55 3,74a 4,40Aa 3,36Bab
3,88
Dano mecânico 3,75 2,95 3,35a 3,53Ab 2,96Ab 3,25
Média 4,03A 3,22B 4,20 3,18
CV% 12,09 7,47
Médias seguidas pela mesma letra, minúscula na vertical e maiúscula na horizontal, em um mesmo nível de dano
mecânico, não diferem pelo teste de Tukey (P<0,05).
36
Tabela 8 - Índice de cor (L) da polpa de maçãs ‘Royal Gala’ em função do dano mecânico e da aplicação do 1-
MCP, armazenadas por dois e quatro meses em atmosfera refrigerada, e mais sete dias em condição
ambiente.
Cor de polpa (L) no local danificado
------- Saída da câmara ------- ----- Condição ambiente ----- Tratamento
2 meses 4 meses
Média 2 meses
4 meses Média
---------- 10 cm ---------
Controle 80,57 81,69 81,12a 79,31 82,51 80,91a
1-MCP 80,33 81,18 80,75a 78,59 81,56 80,07a
1-MCP + Dano 75,39 76,82 76,10b 71,71 76,32 74,01b
Dano + 1-MCP 73,36 75,82 74,59b 72,92 76,09 74,50b
Dano mecânico 75,64 74,96 75,30b 73,16 76,88 75,01b
Média 77,05B 78,09A 75,13B 78,67A
CV% 1,63 2,52
---------- 20 cm --------- ------- Saída da câmara ------- ----- Condição ambiente -----
Controle 80,57 81,69 81,13a 79,31Aa
82,51Aa 80,91
1-MCP 80,33 81,18 80,76a 78,59Aa
81,56Aa 80,07
1-MCP + Dano 74,15 76,97 75,56b 74,03Ab
74,66Ab 74,34
Dano + 1-MCP 72,00 76,68 74,34b 73,11Ab
75,50Ab 74,31
Dano mecânico 73,17 75,19 74,18b 70,69Bb
75,93Ab 73,31
Média 76,04B 78,34A 75,14 78,03
CV% 1,69 1,53
Médias seguidas pela mesma letra, minúscula na vertical e maiúscula na horizontal, em um mesmo nível de dano
mecânico, não diferem pelo teste de Tukey (P<0,05).
Os menores valores de área de tecido escurecidos sendo 1,91 e 2,86 cm
2
para o os
experimentos 1 e 2, respectivamente (Tabela 9). Isso demonstra que existe relação entre a
intensidade do dano mecânico e a magnitude da região lesionada. De acordo com os padrões
internacionais de qualidade, esses valores de área de dano inviabilizam a comercialização
destes frutos (PANG et al., 1996).
No experimento 1, houve diferença na área e profundidade de escurecimento no local
danificado somente entre os frutos danificados e os não danificados, no entanto, frutos
danificados sem 1-MCP, avaliados após sete dias em condição ambiente, apresentaram
aumento na profundidade do dano com o aumento do período de armazenamento (Tabela 10).
Neste caso, a ação do 1- MCP pode ter influenciado na menor profundidade do dano dos
frutos tratados, uma vez que o mesmo diminui a atividade da enzima polifenoloxidase
(WATKINS, 2006).
37
Tabela 9 - Área escurecida no local do dano em maçãs ‘Royal Gala’ em função do dano mecânico e da aplicação
do 1-MCP, armazenadas por dois e quatro meses em atmosfera refrigerada, e mais sete dias em
condição ambiente.
Área escurecida no local danificado (cm
2
)
------- Saída da câmara ------- ----- Condição ambiente -----
Tratamento
2 meses 4 meses Média 2 meses 4 meses Média
---------- 10 cm --------
Controle 0,00 0,00 0,00b 0,00 0,00 0,00b
1-MCP 0,00 0,00 0,00b 0,00 0,00 0,00b
1-MCP + Dano 2,45 1,91 2,18a 2,07 2,22 2,14a
Dano + 1-MCP 2,50 2,19 2,34a 2,00 2,40 2,20a
Dano mecânico 2,52 3,65 3,09a 2,23 2,39 2,31a
Média 1,49A 1,55A 1,26A 1,40A
CV% 44,75 19,05
---------- 20 cm --------
------- Saída da câmara ------- ----- Condição ambiente -----
Controle 0,00 0,00 0,00c 0,00 0,00 0,00c
1-MCP 0,00 0,00 0,00c 0,00 0,00 0,00c
1-MCP + Dano 3,47 3,32 3,39b 2,86 3,17 3,02b
Dano + 1-MCP 4,29 4,03 4,16a 3,54 3,80 3,67a
Dano mecânico 3,48 2,85 3,16b 3,55 3,62 3,58ab
Média 2,24A 2,03A 1,99A 2,12A
CV% 12,84 17,03
Médias seguidas pela mesma letra, minúscula na vertical e maiúscula na horizontal, em um mesmo nível de dano
mecânico, não diferem pelo teste de Tukey (P<0,05).
Tabela 10 - Profundidade de escurecimento no local do dano em maçãs ‘Royal Gala’ em função do dano
mecânico e da aplicação do 1-MCP, armazenadas por dois e quatro meses em atmosfera
refrigerada, e mais sete dias em condição ambiente.
Profundidade de escurecimento no local danificado (cm)
------- Saída da câmara ------- ----- Condição ambiente -----
Tratamento
2 meses 4 meses Média 2 meses 4 meses Média
---------- 10 cm --------
Controle 0,00 0,00 0,00b 0,00Ab 0,00Ab 0,00
1-MCP 0,00 0,00 0,00b 0,00Ab 0,00Ab 0,00
1-MCP + Dano 0,27 0,27 0,27a 0,24Aa 0,25Aa 0,25
Dano + 1-MCP 0,30 0,33 0,31a 0,22Aa 0,28Aa 0,25
Dano mecânico 0,24 0,32 0,28a 0,22Ba 0,32Aa 0,27
Média 0,16A 0,18A 0,14 0,17
CV% 15,74 15,04
---------- 20 cm --------
------- Saída da câmara ------- ----- Condição ambiente -----
Controle 0,00 0,00 0,00b 0,00 0,00 0,00c
1-MCP 0,00 0,00 0,00b 0,00 0,00 0,00c
1-MCP + Dano 0,49 0,39 0,44a 0,34 0,37 0,35b
Dano + 1-MCP 0,44 0,46 0,45a 0,41 0,37 0,39ab
Dano mecânico 0,45 0,42 0,43a 0,46 0,41 0,44a
Média 0,27A 0,25A 0,24A 0,23A
CV% 12,23 17,77
Médias seguidas pela mesma letra, minúscula na vertical e maiúscula na horizontal, em um mesmo nível de dano
mecânico, não diferem pelo teste de Tukey (P<0,05).
38
No experimento 2, o maior valor de área escurecida no local danificado foi encontrado
no tratamento dano + 1-MCP, o que também foi observado em condição ambiente, porém,
nesta avaliação, os frutos danificados sem 1-MCP não diferenciaram do tratamento dano + 1-
MCP. Na saída da câmara, foi observado diferença na profundidade de escurecimento no
local danificado somente entre os frutos danificados e não danificados, sem influência do uso
do 1-MCP. Contudo, em condição ambiente, os frutos danificados sem 1-MCP apresentaram
o maior valor de profundidade de escurecimento no local danificado (Tabela 10). A área e a
profundidade de escurecimento no local danificado também estão relacionados ao dano nas
membranas celulares, havendo a descompartimentação nas células perturbadas pelo impacto,
ocorre a oxidação de compostos fenólicos e conseqüentemente o escurecimento (LEWIS et
al., 2008).
Com o aumento do tempo de armazenamento de dois para quatro meses, houve
redução na firmeza de polpa, nos frutos não tratados com 1-MCP, e da AT (Tabela 5, 6 e 7).
Em tecidos de frutos imaturos há predominância em uma substância insolúvel denominada de
protopectina, formada a partir da ligação de grupos carboxílicos com o cálcio (VIEITES et al.,
2007), sendo que, com a maturação, ocorre liberação de cálcio e a solubilização da
protopectina da parede celular, ocorrendo modificação na textura, que se torna gradualmente
macia (CHITARRA & CHITARRA, 2005). A redução da AT com o avanço do
armazenamento é um comportamento considerado normal, pois, o teor de ácidos orgânicos
reduz em função da sua utilização como substrato para respiração (CHITARRA &
CHITARRA, 2005). Comportamento similar foi observado para o teor de SS (dados não
apresentados).
Em ambos os experimentos, os frutos apresentaram, com o aumento no tempo de
armazenamento, redução do escurecimento da polpa, evidenciado pelo acréscimo no índice de
cor L. Contudo, no experimento 2, após sete dias de exposição dos frutos em condição
ambiente, somente o tratamento dano mecânico sem aplicação de 1-MCP demonstrou este
comportamento (Tabela 8). O incremento no valor de L, com o aumento do período de
armazenamento, sugere que os compostos responsáveis pelo escurecimento são
metabolizados com o decorrer do tempo após a ocorrência do dano mecânico. O clareamento
do tecido lesionado pode ser resultado da desidratação de células superficiais danificadas
(AVENA-BUSTILLOS et al., 1994) ou devido a síntese de lignina (BOLIN & HUXSOLL,
1991).
39
3.5 CONCLUSÃO
O dano mecânico provoca escurecimento da polpa no local da lesão, porém não possui
efeito sobre os demais atributos de qualidade. O 1-MCP contribui para manutenção da
firmeza de polpa e da acidez titulável de maçãs ‘Royal Gala’, porém não reduz os efeitos do
dano mecânico sobre o escurecimento da polpa, independe do momento da aplicação. Quanto
maior a intensidade do dano mecânico, maiores são os efeitos sobre a perda de integridade
dos tecidos da polpa. O avanço no armazenamento causa maior amadurecimento dos frutos,
contudo reduz o escurecimento da polpa no local danificado.
40
4 AMADURECIMENTO E QUALIDADE DE MAÇÃS ‘FUJI SUPREMA’
SUBMETIDAS A DIFERENTES TIPOS DE DANO MECÂNICO
4.1 RESUMO
O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do dano mecânico por impacto,
compressão e corte sobre o amadurecimento e a qualidade de maçãs ‘Fuji Suprema’ mantidas
em condição ambiente. Os tratamentos avaliados foram: controle (sem dano mecânico), dano
mecânico por impacto, dano mecânico por compressão e dano mecânico por corte. O
delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado, sendo utilizadas quatro
repetições. Os frutos foram avaliados quanto à firmeza de polpa, acidez titulável, sólidos
solúveis, índice de cor L da epiderme e da polpa, ângulo ‘hue’ da casca e incidência de
podridões. Os diferentes danos não influenciaram a firmeza de polpa e o ângulo ‘hue’ da
casca. O dano por corte proporcionou frutos com menor acidez titulável, nove dias após a
aplicação do dano. Frutos submetidos ao dano por impacto apresentaram maior teor de
sólidos solúveis, quinze dias após a aplicação dos danos. Para o índice de cor L da polpa, os
danos, por impacto e corte, causaram o menor valor em todas as avaliações, evidenciando o
escurecimento da polpa. Contudo, este efeito não foi observado na epiderme. O tratamento
com dano mecânico por corte apresentou todos os frutos podres aos nove dias após a
aplicação dos danos. De maneira geral, pode-se concluir que os danos mecânicos, na
intensidade testada, não afetam o amadurecimento dos frutos de maçã ‘Fuji Suprema’.
Entretanto, os frutos submetidos ao dano por impacto e corte apresentam prejuízos a sua
qualidade, pois apresentam a polpa escurecida no local do dano. Além disso, o dano por corte
reduz a vida pós-colheita dos frutos facilitando a ocorrência de podridões.
Palavras-chave: Malus domestica. Injúria. Pós-colheita.
41
4.1.1 ABSTRACT
The objective of this work was to evaluate the effect of mechanical damage by impact,
compression and cut on the ripening and quality of 'Fuji Suprema' apples in ambient
conditions. The treatments were: control (no mechanical damage) and mechanical damage by
impact, compression and cut. The experimental design was completely randomized, with four
replicates. Fruits were evaluated in terms of flesh firmness, titratable acidity, soluble solids
content, L color index of the skin and flesh, hue angle (h
o
) of the skin and decay incidence
after three, nine and fifteen days after the damages application. Different mechanical damages
did not influence the flesh firmness and hue angle of the skin. Cut damage provided fruits
with lower titratable acidity, nine days after damages application. Fruits submitted to damage
by impact showed higher soluble solids content, 15 days after damages application. For the L
color index of the flesh, cut and impact damages caused the smallest value in all evaluations,
characterizing the flesh browning. However, this effect was not observed in the skin. Cut
damage presented 100% of decay incidence to the nine days after mechanical damages
application. In general, it can be conclude that the mechanical damages, in the tested
intensity, do not affect the ripening of ‘Fuji Suprema’ apples. However, fruits submitted to cut
and impact damages show loss quality, because they have flesh browning incidence in the
damage place. Moreover, cut damage reduces postharvest life of fruits, facilitating decay
incidence.
Keywords: Malus domestica. Injury. Postharvest.
4.2 INTRODUÇÃO
Os períodos de colheita e pós-colheita podem ser considerados como as etapas mais
importantes do processo produtivo de fruteiras. Neste momento, o produto frutícola é
submetido a uma série de efeitos mecânicos, que, dependendo da sensibilidade do fruto,
poderão causar danos que levarão a perda de qualidade (BORDIN, 1998).
Os danos mecânicos podem ser ocasionados por impacto, compressão e corte
(CHITARRA & CHITARRA, 2005), durante a colheita, transporte e classificação (DINTWA
et al., 2008), sendo responsáveis por consideráveis perdas de qualidade na cadeia produtiva de
frutos, desde o produtor até o consumidor. Os danos alteram as reações bioquímicas normais
dos frutos, modificando a coloração e o sabor e diminuindo a vida pós-colheita (CHITARRA
42
& CHITARRA, 2005). Além de alterações bioquímicas e fisiológicas, os diferentes tipos de
danos mecânicos provocam uma série de lesões, que podem facilitar o ataque de patógenos
(ZEEBROECK et al., 2007).
Geralmente, os danos mecânicos desencadeiam processos que prejudicam a aparência
dos frutos, os quais, na maioria dos casos, são descartados ou comercializados por valor
reduzido. Segundo Kader et al. (2002), a qualidade visual é o principal atributo considerado
pelos consumidores no momento de adquirir um determinado produto. Cliff et al. (2002)
sugerem que o tamanho do dano não é o fator mais importante, e sim, o aspecto visual do
fruto danificado. Em geral, estima-se que em produtos hortícolas os danos mecânicos
representam 20 a 25% de perdas, dependendo da sensibilidade do produto e da intensidade do
dano (VIGNEAULT et al., 2002). No entanto, dados recentes de distribuidores de maçãs
demonstram que os danos mecânicos podem causar perdas acima de 50% (LEWIS et al.,
2008).
Além do prejuízo ao aspecto visual do fruto, os danos podem induzir o aumento na
taxa respiratória e produção de etileno em goiabas (MATTIUZ & DURIGAN, 2001a) e
damascos (DE MARTINO et al., 2006), podendo reduzir o período de armazenamento. O
etileno é responsável por inúmeras respostas fisiológicas, dentre elas o aumento na respiração
e a indução do amadurecimento e senescência de frutos climatéricos (SAQUET & STREIF,
2002). O aumento na produção de etileno, após o ferimento, ocorre devido a alterações na
estrutura da membrana plasmática, a qual responde com mudanças em suas características
físicas induzindo a produção de etileno para tentar reparar os danos (VITTI et al., 2004).
Segundo Mencarelli et al. (1996), os danos por impacto são gerados durante a colheita
e o manuseio pós-colheita, enquanto que os danos por compressão nos procedimentos de
classificação e embalagem e os por corte em caixas de madeira. Durigan et al. (2005) e Kasat
et al. (2007) identificaram que os danos por impacto provocaram a maior perda de qualidade
em pêssego e lima ácida ‘Tahiti’. No entanto, Durigan & Mattiuz (2007a, 2007b) verificaram
que além das injúrias provocadas pelo impacto, os danos por corte também contribuíram para
perdas em abobrinhas e melancias. Em maçãs ‘Gala’, o dano mecânico por impacto, realizado
após o armazenamento em atmosfera controlada, apesar de aumentar a atividade metabólica
dos frutos e comprometer a qualidade dos frutos em função do escurecimento na região
danificada, não acelerou o amadurecimento dos frutos (STEFFENS et al., 2008).
Atualmente, não existem informações sobre o efeito de diferentes tipos de dano
mecânico em maçãs ‘Fuji Suprema’. Deste modo, este trabalho objetivou avaliar o efeito dos
43
danos por impacto, compressão e corte sobre o amadurecimento e a qualidade de maçãs ‘Fuji
Suprema’.
4.3 MATERIAL E MÉTODOS
Maçãs ‘Fuji Suprema’ foram colhidas em um pomar comercial no município de
Vacaria, RS, acondicionadas em bandejas plásticas e transportadas até o Laboratório de
Fisiologis e Pós-colheita da Universidade do Estado de Santa Catarina.
Os tratamentos avaliados foram controle (sem dano mecânico), dano mecânico por
impacto, dano mecânico por compressão e dano mecânico por corte. Os danos mecânicos por
impacto e corte, foram aplicados no lado mais vermelho do fruto, em sua região equatorial, e
o dano por compressão foi realizado em dois lados opostos dos frutos, sendo um na região
mais vermelha e outro na mais amarela. O delineamento experimental utilizado foi o
inteiramente casualizado, com quatro repetições.
Os frutos do tratamento por impacto foram danificados através da queda livre dos
mesmos a uma altura de 20 cm sobre uma superfície indeformável, com o auxílio de um
equipamento de sucção, semelhante ao utilizado por Magalhães et al. (2007), composto por
uma bomba de vácuo (marca Fisatom, potência de 300 Watts), conectada, através de uma
tubulação de silicone, à uma tampa recortada de dessecador, fixada à uma haste de 1,20 m de
altura. No orifício da tampa, há um tubo de PVC de 40 milímetros (mm), no qual está presa
uma ventosa que permite a aderência do fruto através do processo de sucção. A base do
equipamento consiste em uma chapa de ferro.
Após regulagem da altura de queda, a bomba foi ligada e, deste modo, os frutos
permaneceram suspensos, presos à ventosa através da força gerada pelo vácuo. Com o
desligamento da bomba, cessa o vácuo e ocorre a queda livre do fruto. Na base do
equipamento foi colocado pó de giz, permitindo que a cada queda, o fruto fosse marcado na
região do impacto e, posteriormente, assinalado com caneta para retroprojetor na cor preta
(marca Pilot, ponta de 2,0 mm), para identificação do local da lesão. Antes da aplicação do
dano, os frutos foram pesados individualmente e separados por calibre, sendo regulada a
altura de queda para cada calibre, os quais, depois de danificados foram homogeneizados
igualmente entre os tratamentos.
Para os danos por compressão e corte utilizou-se um texturômetro eletrônico TAXT-
plus (Stable Micro Systems Ltda.). O dano por compressão foi aplicado sobre os frutos
através de uma plataforma com base de 75 mm diâmetro, exercendo uma força de 10 kg. O
44
dano mecânico por corte foi aplicado com o auxílio de uma lâmina de 3 mm de largura, a qual
causou um corte de 3,5 mm de profundidade e 3,5 cm de comprimento. Depois de
danificados, os frutos permaneceram por quinze dias em condição ambiente (20±1ºC e
65±5% de UR), sendo avaliados aos três, nove e quinze dias após a realização do dano,
quanto aos atributos firmeza de polpa, acidez titulável (AT), sólidos solúveis (SS),
escurecimento da epiderme e da polpa (índice de cor L), ângulo ‘hue’ da casca e incidência de
podridões.
Para medida da firmeza de polpa, removeu-se uma porção da epiderme e com auxílio
de um penetrômetro equipado com ponteira de 11 mm de diâmetro, fez-se a medida na região
equatorial dos frutos e intermediaria entre o dano e a oposta ao dano, para danos por impacto
e corte, e intermediária entre os danos para o dano por compressão, sendo os resultados
expressos em Newton (N).
Os valores de AT foram obtidos por meio de uma amostra de 10 mL de suco dos
frutos, previamente extraída de fatias transversais retiradas da região equatorial das maçãs, e
triturada em uma centrífuga elétrica. Esta amostra foi diluída em 90 mL de água destilada e
titulada com solução de hidróxido de sódio 0,1N até pH 8,1, sendo os resultados expressos em
meq 100mL
-1
.
Os teores de SS foram determinados por refratometria, utilizando-se o suco extraído,
conforme descrito para a AT, sendo realizada a correção do efeito da temperatura (20°C) e os
resultados expressos em ºBrix.
A determinação do índice de cor L da epiderme e da polpa, que varia de 0 (preto) a
100 (branco), foi efetuada com um colorímetro Minolta, modelo CR 400, sendo as leituras
realizadas no local do dano, sendo para o dano por corte, feita na região lesionada com a
adjacente ao dano, uma vez que o bocal do colorimetro é maior que o tamanho do dano. A
determinação da cor da epiderme (ângulo ‘hue’; h
o
) que define a coloração básica, sendo que
0˚ = vermelho, 90˚ = amarelo e 180˚ = verde, também foi efetuada com o colorímetro. As
leituras foram realizadas na região equatorial, no lado menos vermelho dos frutos, oposto ao
danificado no dano por impacto e corte, e no local menos vermelho entre os danos, nos frutos
danificados por compressão.
A incidência de podridões foi avaliada pela contagem dos frutos afetados, que
apresentaram lesões maiores do que 5 mm de diâmetro com características de ataque de
patógenos e os resultados expressos em percentagem (%).
45
Os dados foram submetidos à análise da variância (ANOVA). Dados em percentagem
foram transformados pela fórmula arco-seno [(x+0,5)/100]
1/2
antes de serem submetidos à
ANOVA. Para a comparação das médias, adotou-se o teste de Tukey (P<0,05).
4.4 RESULTADOS E DISCUSSÃO
Na colheita, os frutos apresentavam firmeza de polpa de 70,46 N, AT de 5,21 meq 100
mL
-1
, teor de SS de 16,4º Brix e valor L (para quantificar o escurecimento no local danificado
após o impacto) de 39,31 para a epiderme e 78,21 para a polpa
Não se verificou, nas avaliações realizadas, efeito dos diferentes tipos de danos
mecânicos sobre a firmeza de polpa (Tabela 11). Em pêssegos, submetidos a diferentes tipos
de danos, foi observado maior perda de firmeza de polpa no dano por impacto (KASAT et al.,
2007). Provavelmente, a diferença entre os resultados obtidos deve-se a intensidade do dano
aplicado, já que, em pêssegos, foram realizadas duas quedas na altura de 120 cm e no presente
trabalho uma queda a uma altura de 20 cm. Os resultados obtidos no presente trabalho
concordam com Steffens et al., 2008, que em maçãs ‘Gala’, não verificaram diferença entre
frutos não danificados e danificados por impacto a uma altura de 20 cm quanto à firmeza de
polpa.
Para a AT não houve diferenças entre os tratamentos nas avaliações realizadas aos três
e quinze dias e para o teor de SS aos três e nove dias (Tabela 11). Sanches et al. (2008),
trabalhando com diferentes tipos de dano mecânico em abacate, não observaram
comportamento diferenciado para AT e teor de SS em abacates danificados e não-danificados,
fato também verificado para o teor de SS em pêssegos (KASAT et al., 2007) e abobrinha
(DURIGAN & MATTIUZ, 2007a). Contudo, nove dias após a aplicação dos danos, os frutos
danificados por corte apresentaram o menor valor de AT (Tabela 11). Mattiuz & Durigan
(2001a) identificaram em goiabas, submetidas ao dano mecânico, os menores valores de AT
nos frutos danificados, quando comparadas ao tratamento controle. Kasat et al. (2007)
observaram menor AT em pêssegos submetidos a dano por corte e impacto. Os tratamentos
apresentaram diferenças para o teor de SS na análise realizada quinze dias após a aplicação
dos danos, sendo que os frutos submetidos ao dano por impacto possuíram o maior teor
(Tabela 11). Mencarelli et al. (1996) observaram incremento no teor de SS em quivis
danificados por impacto em relação aos frutos não danificados, justificando esse aumento
como conseqüência da aceleração do amadurecimento.
46
Tabela 11 - Firmeza de polpa, acidez titulável (AT), sólidos solúveis (SS), e índice de cor L em maçãs ‘Fuji
Suprema’ em função do dano mecânico durante quinze dias em condição ambiente.
Tratamentos
Firmeza
de polpa
(N)
AT
(meq 100mL
-
1
)
SS
(ºBrix)
L
Epiderme
(dano)
L
Polpa
(dano)
Podridões
(%)
--------------------------- Três dias após a aplicação dos danos ---------------------------
Sem dano 79,02a 4,66a 15,00a 38,02a 75,78a 0,00
Impacto 77,58a 4,70a 15,33a 39,08a 57,99c 0,00
Compressão 78,10a 4,74a 14,86a 37,99a 76,47a 0,00
Corte 72,24a 4,86a 14,60a 39,78a 69,14b 0,00
CV (%) 4,15 15,55 4,21 5,46 2,71 0,00
--------------------------- Nove dias após a aplicação dos danos ---------------------------
Sem dano 68,92a 5,26a 16,06a 38,92a 79,47a 0,00b
Impacto 72,81a 4,62a 16,40a 39,30a 62,36b 0,00b
Compressão 70,95a 4,93a 16,30a 41,17a 80,18a 0,00b
Corte 69,18a 3,83b 14,93a 35,65a 53,14b 100,00a
CV (%) 2,20 6,36 4,88 6,68 5,21 0,00
--------------------------- Quinze dias após a aplicação dos danos ---------------------------
Sem dano 60,01a 5,03a 17,46b 41,11a 80,07a 0,00
Impacto 60,28a 5,69a 18,40a 42,07a 68,72b 0,00
Compressão 61,66a 4,52a 17,46b 41,57a 78,50a 0,00
CV (%) 1,21 10,27 1,67 6,29 2,50 0,00
Médias não seguidas pela mesma letra, minúscula na vertical, diferem pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade
de erro.
O ângulo ‘hue’ da casca não foi influenciado pelos danos mecânicos avaliados (dados
não apresentados). O índice de cor L da epiderme, no local danificado, não apresentou
diferença estatística entre tratamentos (Tabela 11). Para o índice de cor L da polpa, houve
diferença em todas as avaliações, sendo que os frutos submetidos ao dano por corte e impacto
apresentaram os menores valores de L. Contudo, aos três dias após a aplicação dos danos, os
frutos do dano mecânico por impacto foram os que apresentaram o menor valor de L,
seguidos pelos danificados por corte, os quais se diferenciaram estatisticamente dos frutos
submetidos ao dano por compressão e dos frutos do controle (Tabela 11). O menor valor deste
índice de cor demonstra um maior escurecimento da região lesionada. O fato do dano por
compressão não causar o escurecimento da polpa pode estar associado à capacidade das
células de se reorganizarem e assim, não serem rompidas. Quando os espaços intercelulares
são suficientemente largos, como em maçãs, há espaço suficiente para que as células se
reorientem quando comprimidas (CHITARRA & CHITARRA, 2005). Com o rompimento
das células, devido à magnitude da força empregada, ocorre o extravasamento do líquido
celular e sua conseqüente exposição à ação enzimática, resultando em oxidação de compostos
fenólicos a quinonas, o que leva ao aparecimento de pigmentos de coloração escura (RADI et
47
al., 1997), conforme observado na polpa dos frutos submetidos ao dano por impacto e corte.
Mattiuz & Durigan, (2001b) também verificaram, em goiabas ‘Paluma’ e ‘Pedro Sato’,
escurecimento da polpa no local da lesão em frutos danificados. Da mesma maneira, maçãs
‘Granny Smith’(SAMIM & BANKS, 1993) e pêssegos ‘Aurora-1’ (KASAT et al. 2007)
submetidos à aplicação de danos mecânicos por impacto apresentaram escurecimento do local
lesionado
Aos nove dias após a aplicação dos danos, observou-se 100% de podridão nos frutos
submetidos ao dano por corte (Tabela 11). Este resultado está de acordo com os obtidos por
Durigan & Mattiuz (2007b), os quais observam que o dano por corte facilitou a deterioração
da polpa de melancias. Isto sugere que a ruptura da epiderme, provocada por esse tipo de
dano, é o principal fator responsável pelo expressivo aumento de ataque de organismos
oportunistas, já que, depois de gerado o dano, o local do ferimento permanece exposto, sendo
este, o ponto mais vulnerável para o ataque de patógenos (CHITARRA & CHITARRA,
2005). Segundo Zeebroeck et al. (2007), após o ferimento há o ataque de patógenos devido ao
rompimento das barreiras impostas pela epiderme dos frutos.
4.5 CONCLUSÃO
Os danos mecânicos por impacto, corte e compressão, na intensidade testada, não
afetam o amadurecimento de maçãs ‘Fuji Suprema’. Os danos mecânicos por impacto e corte
prejudicam a qualidade dos frutos, causando escurecimento na polpa no local lesionado. O
dano por corte é o tipo de dano mais prejudicial, pois inviabiliza a comercialização após nove
dias em temperatura ambiente, devido à incidência de podridões.
48
5 CONCLUSÕES GERAIS
Em maçãs ‘Royal Gala’ e ‘Fuji Suprema’ os danos mecânicos, nas intensidades
aplicadas, não apresentam efeito sobre a indução do amadurecimento.
Em maçãs ‘Fuji Suprema’ o dano por compressão, na intensidade aplicada, não causa
escurecimento da epiderme e da polpa, contudo os danos por corte e impacto causam
escurecimento da polpa no local danificado, prejudicando a qualidade do fruto, sendo o
problema mais acentuado no dano por corte.
Em maçãs ‘Royal Gala’ o 1-MCP não reduz os efeitos do dano mecânico por impacto,
independente do momento da aplicação, todavia proporciona melhor manutenção dos
atributos de qualidade, especialmente quando mantida sob armazenamento refrigerado. A
atmosfera controlada preserva a qualidade dos frutos, porém, sem efeito sinérgico com o 1-
MCP.
Os efeitos do dano mecânico sobre a indução do amadurecimento e perda de qualidade
em maçãs ‘Royal Gala’ e ‘Fuji Suprema’ não devem ser considerados como regra geral, pois,
possivelmente a resposta ao dano envolve inúmeros fatores que não foram avaliadas no
presente trabalho.
49
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