( PDF ) Desenvolvimento de uma formulação semi-sólida contendo nanocápsulas de dexametasona: estudos de estabilidade e avaliação da liberação "in vitro"

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PRÓ-REITORIA DE PÓS-GRADUAÇÃO E PESQUISA

ÁREA DE CIÊNCIAS TECNOLÓGICAS

Curso de Mestrado Acadêmico em Nanociências

Daniel de Azevedo Ferrony

DESENVOLVIMENTO DE UMA FORMULAÇÃO SEMI-SÓLIDA CONTENDO

NANOCÁPSULAS DE DEXAMETASONA: ESTUDO DE ESTABILIDADE E

AVALIAÇÃO DA LIBERAÇÃO “IN VITRO”

Santa Maria, RS

2009

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Daniel de Azevedo Ferrony

DESENVOLVIMENTO DE UMA FORMULAÇÃO SEMI-SÓLIDA CONTENDO

NANOCÁPSULAS DE DEXAMETASONA: ESTUDO DE ESTABILIDADE E

AVALIAÇÃO DA LIBERAÇÃO “IN VITRO”

Dissertação de Mestrado realizada sob a orientação da Professora Doutora Marta Palma

Alves, apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Nanociências em preenchimento dos

requisitos para obtenção do título de Mestre em Nanociências.

Orientadora: Profª. Drª. Marta Palma Alves

Santa Maria, RS

2009

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Daniel de Azevedo Ferrony

DESENVOLVIMENTO DE UMA FORMULAÇÃO SEMI-SÓLIDA CONTENDO

NANOCÁPSULAS DE DEXAMETASONA: ESTUDO DE ESTABILIDADE E

AVALIAÇÃO DA LIBERAÇÃO “IN VITRO”

Dissertação de Mestrado realizada sob a orientação da Professora Doutora Marta Palma

Alves, apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Nanociências em preenchimento

dos requisitos para obtenção do título de Mestre em Nanociências.

Drª Marta Palma Alves – Orientadora (UNIFRA)

Dr. Ruy Carlos Ruver Beck (UFSM)

Dr. Sergio Roberto Mortari (UNIFRA)

Santa Maria, ....... de ........................ de 2009

RESUMO

Anti-inflamatórios corticosteróides são largamente utilizados para o tratamento tópico

de lesões, que muitas vezes requerem tratamento prolongado, aumentando o risco de

efeitos colaterais. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de uma

formulação semi-sólida de uso tópico contendo dexametasona na forma

nanoencapsulada (CGNCDEXA), para o tratamento da psoríase. Para tanto, após o

desenvolvimento da formulação semi-sólida e a incorporação das nanocápsulas

contendo dexametasona, foram realizados estudos de estabilidade e de liberação do

fármaco. As amostras foram armazenadas à temperatura de 40 °C (±2° C) e 75% UR

(±5%) por 150 dias. Estas foram analisadas em intervalos de 1 mês com relação às

características organolépticas, pH, viscosidade, espalhabilidade e teor do princípio

ativo. Para a realização dos estudos de liberação foram utilizadas células de Franz

modificadas. Todos os parâmetros determinados foram comparados com formulações

contendo o fármaco na forma livre. As características organolépticas do CGNCDEXA

mantiveram-se estáveis por um período de 60 dias. Para as formulações contendo o

fármaco na forma livre, as alterações foram perceptíveis a partir do primeiro mês de

análise. Alterações nas características organolépticas foram observadas para ambas as

formulações, sendo mais intensas nas formulações contendo o fármaco na forma livre.

Os valores de pH para ambas as formulações foram mantidos em torno de 6,0 ao final

de 150 dias de experimento. As formulações de CGNCDEXA apresentaram

comportamento reológico pseudoplástico, enquanto as formulações semi-sólidas

contendo o fármaco na forma livre (CGDEXA) apresentaram comportamento plástico.

Os valores de viscosidade da formulação de CGNCDEXA apresentaram diferença

significativa (p≤0,05) em relação aos seus valores iniciais (7416 mPa) e após 150 dias

(2315 mPa). Os valores de viscosidade da formulação de CGDEXA também

apresentaram diferença significativa (p≤0,05) em relação aos seus valores iniciais

(12730 mPa) e finais, após 150 dias (3170 mPa) de análise. Os valores de

espalhabilidade da formulação de CGNCDEXA não apresentaram diferença

significativa (p≥0,05) em relação aos seus valores iniciais (6184 mm

) e finais (6408

). No entanto, para formulação de CGDEXA foi observada diferença significativa

(p≤0,05) em relação aos seus valores iniciais (4364 mm

) e finais (6467 mm

) de

espalhabilidade. A concentração de dexametasona diminuiu para ambas as formulações

durante os 150 dias de experimento. Através das análises térmicas (DSC e TG) foi

possível evidenciar a fusão da dexametasona, quando esta encontrava-se incorporada na

formulação de creme gel na forma livre. No entanto, a análise térmica da formulação de

creme gel contendo dexametasona na forma nanoencapsulada, não evidenciou sua

fusão. O fluxo de liberação e a concentração total de dexametasona liberada para as

formulações de CGNCDEXA foram significativamente menores (p≤0,05) do que a

formulação contendo o fármaco na forma livre, sugerindo desta forma, uma liberação

mais lenta da dexametasona nanoencapsulada. Através dos resultados, pode-se concluir

que a incorporação das nanocápsulas de dexametasona em uma formulação de creme-

gel contendo componentes emolientes apresentou características físico-químicas

adequadas, representando viabilidade para preparação deste tipo de formulação.

Palavras-chave: dexametasona, nanocápsulas, estabilidade, liberação, psoríase.

ABSTRACT

Anti-inflammatory, corticosteroids are largely applied for the lesion topical treatment,

which many times require treatment for a prolonged period increasing the risks of

collateral damage. This work has as its objective the development of a semi-solid

formulation of topical use containing dexamethasone in the nanoencapsulated

(CGNCDEXA), for the psoriases treatment. For that, after the development of a semi-

solid formulation and the incorporation of dexamethasone nanocapsules, stability

studies were carried out, thermical analysis, a releasing studies of the drug. The

samples were stored at 40°C (±2°C) and 75% UR (±5%) for 150 days, being analyzed

in intervals of 30 days concerning the organoleptic characteristics, pH, viscosity,

spreading and drug. For the releasing studies modified Franz cells were used. All the

analyzed parameters were compared to formulations containing the free form drug. The

CGNCDEXA organoleptical characteristics remained stable for a period of 60 days.

For the formulation containing the free drug, the alterations were noticeable from the

first month of analysis. Organoleptical characteristic alterations were observed for both

formulations, being more intense in the formulation containing the free form drug. The

pH values for both formulations were kept around 6.0 at the end of 150 days of

experiment. The CGNCDEXA formulations presented pseudoplastic rheological

behavior, while the semi-solid formulation containing the free form drug (CGDEXA)

presented plastic behavior. The viscosity values of the formulation of CGNCDEXA

presented significant difference (p≤0,05) in relation to its initial values (7416 mPa) and

after 150 days (2315 mPa). The viscosity values of the CGDEXA formulation also

presented significant differences (p≤0,05) in relation to the initial values (12730 mPa)

and final, after 150 days (3170 mPa) of analysis. The spreading values of the

formulation of CGNCDEXA did not present significant difference (p≥0,05) in relation

to its initial values (6184 mm²) and final (6408 mm²). However, for the CGDEXA

formulation was observed a significant difference (p≤0,05) in relation to its initial

values (4364 mm²) and final (6467 mm²) of spreading. The dexamethasone

concentration decreased for both formulations during the 150 days of experiment.

Through the thermical analysis (DSC and TG) it was possible to evidence the

dexamethasone fusion, when it was found in the free form incorporated in the gel cream

formulation. However, the thermical analysis of the gel cream formulation containing

dexamethasone in the nanoencapsuled, did not evidence its fusion indicating a drug

protection by the nanostructured system. The releasing flow and the total

dexamethasone concentration released for the CGNCDEXA formulations were

significantly smaller (p≤0,05)than the formulations containing a free form drug, thus

suggesting, a slower release of the nonencapsuled dexamethasone. Through the results,

it is possible to conclude that the dexamethasone nanocapsule corporation in a gel

cream formulation containing emollient components presented proper physical-

chemical characteristics, representing viability for the preparation of this kind of

formulation.

Key Words: Dexamethasone, nanocapsule, stability, realeasing, psoriases.

LISTA DE TABELAS

Tabela 1- Composição das suspensões de nanocápsulas, contendo dexametasona .......38

Tabela 2 - Composição do creme gel contendo nanocápsulas de dexametasona ...........41

Tabela 3 – Formulação do creme base ...........................................................................41

Tabela 4 - Curva analítica usada para determinação da dexametasona nas formulações

semi-sólidas ....................................................................................................................46

Tabela 5 - Curva analítica para determinação da dexametasona nos estudos de liberação

“in vitro” .........................................................................................................................47

Tabela 6 - Parâmetros referentes à aparência, cor e odor das formulações, contendo

dexametasona na forma livre (CGDEXA) e nanoencapsulada (CGNCDEXA), durante

150 dias de análise ..........................................................................................................61

Tabela 7 – Valores de pH do creme gel, contendo dexametasona na forma livre

(CGDEXA) e nanoencapsulada (CGNCDEXA) durante 150 dias de análises (n=3) ....63

Tabela 8 – Valores referentes ao índice de plasticidade (n) e coeficiente de consistência

(K) para as formulações de creme gel com o fármaco nanoestruturado e ponto de fluidez

para as formulações contendo o fármaco na forma livre (n=3) ......................................65

Tabela 9 - Valores de viscosidade, apresentados pelo creme gel, contendo a forma livre

(CGDEXA) e nanoencapsulada (CGNCDEXA) de dexametasona (n=3) ......................67

Tabela 10 - Valores de espalhabilidade apresentado pelo creme gel, contendo a forma

livre (CGDEXA) e nanoencapsulada (CGNCDEXA) de dexametasona (n=3) .............70

Tabela 11 – Valores referentes à construção da curva analítica da dexametasona (n=3) 73

Tabela 12 – Análise de variância (ANOVA) correspondente às absorbâncias obtidas na

determinação da curva analítica de dexametasona .........................................................74

Tabela 13 – Valores referentes ao doseamento da dexametasona, incorporada nas

formulações semi-sólidas para forma nanoencapsulada e livre (n=3) ............................75

Tabela 14 – Valores referentes à construção da curva analítica para o teste de liberação

(n=3) ...............................................................................................................................77

Tabela 15 – Análise de variância (ANOVA) correspondente às absorbâncias obtidas na

determinação da curva analítica de dexametasona .........................................................78

Tabela 16 – Valores de fluxo, concentração total, coeficiente de regressão e coeficiente

de permeabilidade das formulações de creme gel contendo nanocápsulas de

dexametasona (CGNCDEXA), creme gel contendo nanocápsulas de dexametasona com

adição de acetonitrila (CGNCDEXA C/ACN) e creme gel contendo dexametasona na

forma livre (CGDEXA) (n=6) ........................................................................................80

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 – Psoríase do couro cabeludo. Densas escamas cobrindo uma parte ou todo o

couro cabeludo são altamente característicos da psoríase (HABIF, 2005) ........................23

Figura 2 – Psoríase em placas. As placas crônicas são vermelhas-foscas e cobertas de

escamas. Tendem a permanecer em tamanho e em posição fixas por longos períodos

(HABIF, 2005) ...................................................................................................................23

Figura 3 – Psoríase em placas. Apresentação clássica. As placas vermelhas espessas têm

uma borda bem definida e escamas prateadas aderentes (HABIF, 2005) ..........................23

Figura 4 - Comparação entre os componentes histológicos de uma placa psoriática com

a pele normal (LOWES et al., 2007) ..................................................................................25

Figura 5 - Estrutura química da dexametasona (GOODMAN & GILMAN, 2006) ...........31

Figura 6 – Representação gráfica de nanopartículas e nanoesferas poliméricas: a)

fármaco dissolvido no núcleo oleoso das nanocápsulas; b) fármaco adsorvido à parede

polimérica das nanocápsulas; c) fármaco retido na matriz polimérica das nanoesferas; d)

fármaco adsorvido ou disperso molecularmente na matriz polimérica das nanoesferas

(SCHAFFAZICK, et al., 2003) ..........................................................................................34

Figura 7 - Distribuição do diâmetro médio das suspensões de nanocápsulas contendo

dexametasona ......................................................................................................................49

Figura 8 - Potencial zeta apresentado pelas suspensões de nanocápsulas contendo

dexametasona ......................................................................................................................50

Figura 9 – Curva termogravimétrica para a dexametasona. Taxa de aquecimento 10

°C/min, sob fluxo de nitrogênio .........................................................................................51

Figura 10 – Curva termogravimétrica da formulação de creme gel contendo

dexametasona livre (CGDEXA). Taxa de aquecimento 10 °C/min, sob fluxo de

nitrogênio ............................................................................................................................52

Figura 11 – Curva termogravimétrica da suspensão de nanocápsulas de dexametasona.

Taxa de aquecimento 10 °C/min, sob fluxo de nitrogênio .................................................53

Figura 12 – Termograma da formulação de creme gel contendo nanocápsulas de

dexametasona. Taxa de aquecimento 10 °C/min, sob fluxo de nitrogênio ........................53

Figura 13 - Calorimetria diferencial exploratória da formulação de creme gel contendo o

fármaco na forma livre, na forma nanoencapsulada, da formulação de creme gel base e

da dexametasona. Taxa de aquecimento 10 °C/min, sob fluxo de nitrogênio ....................55

Figura 14 - Diâmetro médio apresentado pela suspensão das nanocápsulas contendo

dexametasona incorporadas no creme gel ..........................................................................57

Figura 15 - Diâmetro médio das partículas apresentado pela base de creme gel sem a

incorporação da dexametasona ...........................................................................................57

Figura 16 - Diâmetro médio apresentado pela formulação de creme gel contendo

nanocápsulas de dexametasona após 150 dias de experimento ..........................................58

Figura 17 - Potencial zeta apresentado pelas nanocápsulas de dexametasona

incorporadas no creme gel ..................................................................................................59

Figura 18 - Potencial zeta apresentado pelas nanocápsulas de dexametasona

incorporadas no creme gel após 150 dias de experimentos ................................................60

Figura 19 – Formulações semi-sólidas, contendo dexametasona na forma livre (A) e na

forma nanoencapsulada (B), após 48 horas de preparação .................................................61

Figura 20 - Comportamento do CGDEXA durante os 150 dias de análise, referente às

amostras mantidas em estufa sob temperatura de 40° C e 75% UR ...................................62

Figura 21- Comportamento do CGNCDEXA durante os 150 dias de análise, referente as

amostras mantidas em estufa sob temperatura de 40° C e 75% UR ...................................62

Figura 22 - Valores de pH para as formulações de CGDEXA e CGNCDEXA durante os

150 dias de experimento .....................................................................................................64

Figura 23 – Reograma das amostras, contendo nanocápsulas de dexametasona,

referentes aos valores iniciais e após 150 dias de experimento ..........................................66

Figura 24 – Reograma das amostras, contendo dexametasona na forma livre referentes

aos valores inicias e após 150 dias de experimento ............................................................66

Figura 25 – Viscosidade versus taxa de cisalhamento referentes ao creme gel, contendo

dexametasona na forma de nanocápsulas (CGNCDEXA), relativo aos valores iniciais e

após 150 dias de experimento à temperatura de 40° C e 75% UR .....................................68

Figura 26 - Viscosidade versus taxa de cisalhamento referentes ao creme gel, contendo

dexametasona na forma livre (CGDEXA), relativo aos valores iniciais e após 150 dias

de experimento à temperatura de 40° C e 75% UR ............................................................68

Figura 27 – Comparação entre os valores de viscosidade das amostras, contendo

dexametasona na forma nanoencapsulada (CGNCDEXA) e livre (CGDEXA) referentes

aos valores iniciais e após 150 dias de experimento ..........................................................70

Figura 28 – Espalhabilidade inicial e após 150 dias de análises para o CGDEXA ............71

Figura 29 – Espalhabilidade inicial e após 150 dias de análises para o CGNCDEXA ......71

Figura 30 – Espalhabilidade inicial e após 150 dias de análises para as formulações de

CGDEXA e CGNCDEXA ..................................................................................................72

Figura 31 – Representação gráfica da curva analítica da dexametasona ............................73

Figura 32 – Cromatograma do creme gel, contendo nanocápsulas de dexametasona

(CGNCDEXA) ...................................................................................................................75

Figura 33 – Cromatograma do creme gel, contendo nanocápsulas sem dexametasona .....75

Figura 34 – Comparação do teor de dexametasona nas formulações, contendo

dexametasona na forma livre e nanoencapsulada, durante o período de análise (150

dias), à temperatura de 40° C .............................................................................................76

Figura 35 – Representação gráfica da curva analítica da dexametasona, utilizada para a

realização dos estudos de liberação ....................................................................................78

Figura 36 - Liberação da dexametasona do creme gel na forma livre (CGDEXA),

nanoencapsulada (CGNCDEXA) e com adição de acetonitrila à solução receptora

(CGNCDEXA C/ACN) ......................................................................................................81

Figura 37 – Liberação da dexametasona do creme gel na forma nanoencapsulada

(CGNCDEXA) e na forma livre (CGDEXA) ....................................................................81

Figura 38 – Liberação da dexametasona do creme gel na forma livre (CGDEXA) e na

forma nanoencapsulada tratada com acetonitrila (CGNCDEXA C/ACN) ........................82

Figura 39 – Liberação da dexametasona na forma nanoencapsulada e com adição de

acetonitrila ..........................................................................................................................82

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

ACN – Acetonitrila;

ANVISA – Agência Nacional de Vigilância Sanitária;

CGDEXA – Creme gel contendo dexametasona na forma livre;

CGNCDEXA – Creme gel contendo nanocápsulas de dexametasona;

CGNCDEXA C/ACN – Creme gel contendo nanocápsulas de dexametasona contendo

acetonitrila;

CLAE – Cromatografia Líquida de Alta Eficiência;

DP – Desvio Padrão;

DPR – Desvio Padrão Relativo;

DSC – Calorimetria Exploratória Diferencial;

PDI – Índice de polidispersão;

RE – Resolução;

TG – Análises Termogravimétricas;

UR – Umidade Relativa.

SUMÁRIO

1 INTRODUÇÃO .........................................................................................................15

2 REVISÃO DE LITERATURA .................................................................................18

2.1 PELE .........................................................................................................................18

2.1.1 Epiderme ................................................................................................................19

2.1.2 Derme ....................................................................................................................20

2.1.3 Hipoderme .............................................................................................................20

2.2 ADMINISTRAÇÃO TÓPICA DE FÁRMACOS ....................................................20

2.3 PSORÍASE ...............................................................................................................22

2.3.1 Tipos de psoríase ...................................................................................................26

2.3.1.1 Psoríase crônica em placas .................................................................................26

2.3.1.2 Psoríase gutata ....................................................................................................26

2.3.1.3 Psoríase invertida ou flexural .............................................................................27

2.3.1.4 Psoríase eritrodérmica ........................................................................................27

2.3.1.5 Psoríase pustular ................................................................................................27

2.3.1.6 Psoríase ungueal .................................................................................................27

2.3.1.7 Artrite psoríatica .................................................................................................28

2.4 Corticóides tópicos para o tratamento da psoríase ...................................................28

2.4.1 Glicocorticóides .....................................................................................................29

2.4.1.1 Dexametasona .....................................................................................................31

2.5 SISTEMAS NANOESTRUTURADOS PARA ADMINISTRAÇÃO DE

FÁRMACOS ..................................................................................................................32

2.6 NANOPARTÍCULAS POLIMÉRICAS ..................................................................34

2.7 LIBERAÇÃO E PENETRAÇÃO CUTÂNEA ........................................................35

3 MATERIAIS E MÉTODOS .....................................................................................37

3.1 MATERIAIS ............................................................................................................37

3.1.1 Matéria-prima, solventes e outros materiais ..........................................................37

3.1.2 Equipamentos e materiais de laboratório ..............................................................37

3.2 MÉTODO .................................................................................................................38

3.2.1 Preparação das suspensões, contendo nanocápsulas de dexametasona .................38

3.2.2 Avaliação físico-química das suspensões de nanocápsulas, contendo

dexametasona ..................................................................................................................39

3.2.2.1 Determinação do pH ...........................................................................................39

3.2.2.2 Distribuição do diâmetro médio das partículas e índice de polidispersão ..........40

3.2.2.3 Potêncial Zeta .....................................................................................................40

3.2.2.4 Análises térmicas (DSC e TG) ...........................................................................40

3.2.3 Preparação das formulações semi-sólidas contendo nanocápsulas de dexametasona

.........................................................................................................................................40

3.2.3.1 Creme gel ............................................................................................................40

3.2.3.2 Creme base .........................................................................................................41

3.2.4 Determinação do diâmetro médio das partículas após a incorporação nas bases

semi-sólidas ....................................................................................................................42

3.2.5 Determinação do potencial zeta após a incorporação nas bases semi-sólidas .......42

3.2.6 Estudo de estabilidade das bases semi-sólidas, contendo dexametasona na forma

nanoencapsulada e na forma livre ..................................................................................42

3.2.6.1 Determinação das características organolépticas das formulações contendo

dexametasona na forma livre e nanoencapsulada ...........................................................43

3.2.6.2 Determinação do pH das formulações, contendo dexametasona na forma livre e

nanoencapsulada .............................................................................................................43

3.2.6.3 Avaliação das características reológicas das formulações semi-sólidas, contendo

dexametasona na forma livre e nanoencapsulada ...........................................................43

3.2.6.4 Determinação da espalhabilidade das formulações semi-sólidas, contendo

dexametasona na forma livre e nanoencapsulada ...........................................................44

3.2.6.5 Doseamento das formulações semi-sólidas, contendo dexametasona na forma

livre e nanoencapsulada ..................................................................................................44

3.2.6.5.1 Construção da curva analítica ..........................................................................45

3.2.7 Estudos de liberação “in vitro” ..............................................................................46

3.2.8 Construção da curva analítica para realização dos estudos de liberação ...............47

3.3 ANÁLISES ESTATÍSTICAS DOS RESULTADOS ..............................................47

4 RESULTADOS E DISCUSSÃO ..............................................................................48

4.1 AVALIAÇÃO FÍSICO-QUÍMICA DAS SUSPENSÕES DE NANOCÁPSULAS,

CONTENDO DEXAMETASONA ................................................................................48

4.1.1 Determinação do pH ..............................................................................................48

4.1.2 Determinação do diâmetro médio e índice de polidispersão das nanopartículas ..48

4.1.3 Determinação do potencial zeta .............................................................................49

4.1.4 Análises térmicas ...................................................................................................50

4.1.4.1Análises termogravimétrica – TG ........................................................................51

4.1.4.1.1 TG da dexametasona .......................................................................................51

4.1.4.1.2 TG da formulação semi-sólida com dexametasona livre .................................52

4.1.4.1.3 TG da suspensão com nanocápsulas de dexametasona ...................................52

4.1.4.1.4 TG da formulação com a dexametasona nanoencapsulada .............................53

4.1.4.2 Análise calorimétrica diferencial (DSC) ............................................................54

4.2 DESENVOLVIMENTO DA FORMULAÇÃO SEMI-SÓLIDA PARA A

INCORPORAÇÃO DO FÁRMACO .............................................................................55

4.3 DETERMINAÇÃO DO DIÂMETRO MÉDIO DAS NANOPARTÍCULAS DE

DEXAMETASONA, INCORPORADAS NAS BASES SEMI-SÓLIDAS ..................56

4.4 DETERMINAÇÃO DO POTENCIAL ZETA DAS NANOPARTÍCULAS DE

DEXAMETASONA INCORPORADAS NAS BASES SEMI-SÓLIDAS ...................59

4.5 ESTUDO DE ESTABILIDADE DAS BASES SEMI-SÓLIDAS, CONTENDO

DEXAMETASONA NA FORMA NANOENCAPSULADA E NA FORMA LIVRE .60

4.5.1 Determinação das características organolépticas ..................................................60

4.5.2 Determinação do pH ..............................................................................................63

4.5.3 Determinação da viscosidade e espalhabilidade das formulações semi-sólidas,

contendo dexametasona na forma livre e nanoencapsulada ...........................................64

4.5.3.1 Viscosidade .........................................................................................................64

4.5.3.2 Espalhabilidade ...................................................................................................70

4.5.4 Doseamento das formulações semi-sólidas, contendo dexametasona na forma livre

e nanoencapsulada ..........................................................................................................73

4.5.4.1 Construção da curva analítica .............................................................................73

4.6 ESTUDOS DE LIBERAÇÃO “IN VITRO” ............................................................77

4.6.1 Construção da curva analítica para os estudos de liberação da dexametasona .....77

5 CONCLUSÕES ...........................................................................................................85

6 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................................................88

1 INTRODUÇÃO

A psoríase é uma doença inflamatória crônica de pele que afeta igualmente, homens e

mulheres em cerca de 1 a 3% da população mundial. Aproximadamente 30 a 40% dos adultos

com psoríase apresentam o início dos sintomas antes dos 16 anos de idade (SUKHATME,

2009). Essa dermatose emerge da interação de uma base genética (herança poligênica), fatores

ambientais e psicológicos (AZULAY, 1997; FITZPATRICK et al., 1997).

Apesar de apresentar evolução benigna, a psoríase determina um importante impacto

na qualidade de vida dos pacientes, interferindo em suas atividades diárias, nas relações

sociais e interpessoais ou, ainda, atuando sobre aspectos psicossociais (KRUEGER et al.,

2000; ARRUDA e MORAES, 2001; CORDORO, 2008).

Muitos agentes tópicos estão disponíveis para o tratamento dessa doença, mas

nenhuma das medicações tópicas é previsivelmente efetiva. Todos os pacientes requerem

tratamento prolongado para obterem alivio, o qual frequentemente é temporário, dessa forma,

a adesão é um problema e os pacientes ficam desestimulados pelo tratamento moderadamente

efetivo que dura semanas ou meses.

Os corticosteróides são uma classe de hormônios esteróides, produzidos pelas

glândulas supra-renais, onde a dexametasona apresenta-se como exemplo de análogo sintético

desse grupo, utilizado principalmente devido à sua atividade antiinflamatória e

imunossupressora (SILVA, 2006; FOX, MERK e BICKERS, 2006).

Quando usados topicamente, além de sua ação antiinflamatória, exercem atividade

antimitótica. Dessa forma, os corticosteróides tópicos podem ser utilizados como agentes de

primeira escolha no tratamento de alguns tipos de psoríase, promovendo uma diminuição da

multiplicação celular e menor formação das camadas de queratina (MARTINDALE, 1999;

SILVA, 2006).

Entretanto seu uso prolongado pode induzir efeitos adversos (algumas vezes

irreversíveis) como exacerbação das lesões, afinamento da pele, estrias, telangiectasias,

hipopigmentação, e efeito rebote após a interrupção do tratamento (MARTINDALE, 1999;

FUCHS, WANNMACHER e FERREIRA, 2006; JOSSE et al., 2009). O efeito rebote ocorre

frequentemente após a interrupção abrupta do tratamento tópico prolongado. Dessa forma,

antes da suspensão do mesmo, faz-se necessário a instituição de esquema terapêutico

intermitente ou a substituição por agentes de menor atividade, objetivando a diminuição dos

sintomas de retirada (FUCHS, WANNMACHER e FERREIRA, 2006).

A pele é um órgão que desempenha diversas funções, devido à arquitetura e às

propriedades químicas e biológicas de suas várias estruturas. É um órgão dinâmico, dotado de

grande capacidade renovadora e de reparação, bem como de certo grau de impermeabilidade.

Apresenta como função vital a conservação da homeostasia, além de função sensorial e de

defesa contra agressões físicas, químicas e biológicas (SAMPAIO e RIVITTI, 2001).

A camada córnea é a camada mais externa do organismo e, devido às suas

propriedades, desempenha um papel fundamental em relação à função protetora da pele,

servindo como meio de comunicação entre o organismo e o meio exterior. Além da proteção

mecânica a camada córnea apresenta impermeabilidade relativa à água e eletrólitos, evitando

perdas hídricas e eletrolíticas, mantendo a homeostasia do indivíduo, bem como limitando a

penetração de substâncias exógenas (SAMPAIO e RIVITTI, 2001; HUANG et al., 2005;

AZULAY e AZULAY, 2006; PARDEIKE, HOMMOS e MÜLLER, 2009).

Atualmente existe um grande interesse na liberação seletiva de fármacos, em vista

disso, sistemas carreadores têm sido bastante estudados com objetivo de melhorar a

seletividade e eficiência das formulações. Dentre estes, incluem-se os sistemas coloidais

transportadores de fármacos, principalmente representados pelas nanopartículas poliméricas,

lipossomas, emulsões submicrométricas e complexos lipídicos Uma liberação sustentada do

fármaco poderá suprir a pele por um período de tempo mais prolongado, podendo-se,

também, considerar que um tratamento no local da inflamação poderá reduzir a absorção

sistêmica e os efeitos colaterais (MONACO, 2000; CABRAL, 2004; SCHMALTZ, DOS

SANTOS e GUTERRES, 2005; GUTERRES, BENVENUTTI e POHLMANN, 2006).

As nanopartículas poliméricas apresentam diâmetro inferior a 1µm e seu termo inclui

as nanocápsulas e nanoesferas, as quais diferem entre si segundo sua composição e

organização estrutural (SCHAFFAZICK et al., 2003). As nanocápsulas possuem uma parede

polimérica disposta em torno de um núcleo oleoso onde o fármaco se encontra dissolvido ou

então adsorvido à sua parede polimérica. Já as nanoesferas são formadas por uma matriz

polimérica e não apresentam óleo na sua composição. Neste caso, o fármaco pode encontrar-

se retido ou disperso em sua matriz polimérica (SCHAFFAZICK et al., 2003; GUTERRES,

BENVENUTTI e POHLMANN, 2006).

O uso desses sistemas permite o aumento da especificidade do fármaco, elevando sua

concentração nos locais onde sua ação farmacológica é requerida. Dessa forma, pode-se evitar

o acúmulo de fármacos em tecidos inespecíficos, e consequentemente, diminuir a ocorrência

de efeitos tóxicos nesses locais. Além disso, o aumento da ação terapêutica do fármaco pode

também contribuir para uma diminuição da dose administrada com consequente diminuição

de seus efeitos colaterais (SCHAFFAZICK et al., 2003; GUTERRES, BENVENUTTI e

POHLMANN, 2006).

Investigações têm evidenciado que as nanopartículas apresentam a tendência de

acumularem-se em tecidos inflamados, podendo-se, desta forma, abrir novas perspectivas para

atuação de fármacos anti-inflamatórios ou antibióticos em áreas inflamadas (KREUTER,

1994).

Assim, de acordo com o que foi exposto, este trabalho tem como objetivo principal

desenvolver uma formulação semi-sólida tópica com características emolientes contendo

nanocápsulas de dexametasona para o tratamento da psoríase. Além de, preparar, caracterizar

e realizar estudos de estabilidade com as formulações de creme-gel, contendo nanocápsulas de

dexametasona, comparando-as com a forma livre do ativo. Da mesma maneira, realizar

estudos de liberação “in vitro”, utilizando membranas de acetato de celulose em células de

difusão tipo Franz, para avaliação do comportamento da cedência da dexametasona a partir

deste tipo de sistema.

2 REVISÃO DE LITERATURA

2.1 PELE

A pele é um órgão de grande extensão e importância no organismo humano, sendo

responsável por diversas funções como: proteção física, nutrição, pigmentação,

termorregulação, transpiração, perspiração, defesa, absorção e percepção sensorial através dos

elementos do sistema nervoso, situados na derme (DE SOUZA, 2004; HUANG, 2005;

AZULAY e AZULAY, 2006). Participam, também, de diversas funções biológicas como a

resposta inflamatória e imune, crescimento piloso, cicatrização e síntese de vitamina D

(HEGEDUS et al., 2006).

A via tópica é considerada uma via atrativa para administração de substâncias, pois,

além de ser uma rota não invasiva, pode evitar a degradação de vários fármacos. Caracteriza-

se não só como uma via para terapia local, mas também uma via para que fármacos alcancem

efeitos regionais ou sistêmicos (ASBILL e MICHINIAK, 2000; MIYAZAKI et al., 2003).

Dessa forma, apresenta-se como uma via acessível para administração de substâncias, devido

aos problemas associados com outras rotas de administração, como a via oral e a parenteral

(ASBILL e MICHINIAK, 2000; FOLDVARI, 2000; KORTING, MEHNERT e KORTING,

2007). O exemplo, mais comum é com o uso de anti-inflamatórios não esteróides

administrados por via oral, os quais podem apresentar efeitos colaterais gastrointestinais,

sendo diminuídos através da administração tópica dos mesmos (PARDEIKE, HOMMOS e

MÜLLER, 2009).

A pele é um órgão dinâmico que tem características de permeabilidade dependentes de

fatores, tais como, (1) espessura do extrato córneo; (2) integridade do extrato córneo; (3)

hidratação do estrato córneo; (4) coeficiente de partição da substância entre veículo e estrato

córneo; (5) aplicação de promotores de permeabilidade. Os fatores 1 e 2 são manifestados em

função da idade, do sexo, da raça e da região corporal. Os fatores 3 e 5 estão presentes quando

a formulação ou as condições de tratamento são alteradas. O fator 4 é decorrente da lipofilia

ou solubilidade relativa da substância entre o estrato córneo e o veículo (TAUBER, 1989).

A pele humana compõe-se de três camadas de tecidos: a epiderme celular, estratificada

e avascular; a derme subjacente de tecido conectivo e a hipoderme constituída pela gordura

subcutânea (BARRY, 2005; HUANG et al., 2005).

2.1.1 Epiderme

A epiderme é constituída por várias camadas de queratinócitos em diferentes estágios

de diferenciação celular, além de conter melanócitos, células de Langerhans (importantes na

resposta imune) e células de Merkel (envolvidas na percepção sensorial) (ASBILL e

MICHINIAK, 2000; FOLDVARI, 2000).

Os queratinócitos são responsáveis por, pelo menos, 80% das células epidérmicas,

dispostos lado a lado e apresentam uma constante renovação. O alto índice de multiplicação

de sua camada basal fornece células que vão gradativamente se modificando e migrando para

a superfície formando a camada espinhosa ou de Malpighi. A seguir, essas células passam por

um rápido estágio, em que apresentam o citoplasma mais basofílico e granuloso, a camada

granulosa e transformam-se, subitamente, em células anucleadas (corneócitos), sendo então

eliminadas para o meio ambiente através da camada córnea, a camada mais externa da pele

(AZULAY e AZULAY, 2006). Essa diferenciação demora em torno de duas semanas para

pessoas jovens, e em torno de 37 dias para pessoas com idade maior que 50 anos

(LEONARDI, MARTINS e KUREBAYASHI, 2004).

O estrato córneo é a camada mais externa da epiderme, sendo formado por 10-15

camadas de corneócitos, envolvidos por lipídios extracelulares, apresentando uma espessura

que varia entre 10-20 µm. Devido à sua elevada organização estrutural e hidrofobicidade, o

estrato córneo atua como a principal barreira para a penetração de substâncias aplicadas

topicamente, mas também atua como um reservatório para formulações aplicadas por esta via

(FERNANDEZ et al., 2000; FOLDVARI, 2000; LEONARDI, MARTINS e

KUREBAYASHI, 2004; KORTING, MEHNERT e KORTING, 2007; PARDEIKE,

HOMMOS e MÜLLER, 2009).

O grau de hidratação do estrato córneo é também um fator bastante importante para

determinação da taxa de absorção percutânea de um determinado fármaco (ALVES, 2006). A

pele, prejudicada por algum tipo de doença, torna-se mais permeável à água, sendo que na

presença de psoríase, por exemplo, pode chegar a ser dez vezes mais permeável que em

condições normais (DE SOUZA, 2004).

No caso de lesões em que a integridade está comprometida e sua arquitetura se mostra

alterada, a pele não desempenha mais o papel de barreira protetora, e o excipiente não precisa

ter afinidades com as matérias graxas.

2.1.2 Derme

A composição da derme envolve tecido conjuntivo denso composto por células, como

fibroblastos granulócitos e macrófagos. Também é formada por macromoléculas sintetizadas

pelos fibroblastos, as quais constituem a matriz extracelular, formada por colágeno, elastina,

glicosaminoglicanas e glicoproteínas de estrutura. Nessa camada da pele, estão presentes as

raízes dos pelos, as glândulas, terminações nervosas, vasos sanguíneos e linfáticos

(JUNQUEIRA & CARNEIRO, 1999; FOLDVARI, 2000; LEONARDI, MARTINS e

KUREBAYASHI, 2004).

2.1.3 Hipoderme

A hipoderme, também conhecida como gordura subcutânea, funciona como

amortecedor mecânico e barreira térmica, a qual sintetiza e estoca rapidamente substâncias

energéticas prontamente disponíveis (BARRY, 2005). É um tecido subcutâneo que une a

derme aos órgãos profundos. É formada por tecido conjuntivo adiposo de espessura muito

variável conforme sua localização. Desempenha função de termogênese e energética, ou seja,

quando necessário, através da lipólise, os ácidos graxos são liberados rapidamente. Isso

acontece, já que a gordura é essencial na homeostermia, além de desempenhar função

mecânica de amortecimento, sobretudo nos órgãos internos (HERNANDEZ e MERCIER-

FRESNEL, 1999).

2.2 ADMINISTRAÇÃO TÓPICA DE FÁRMACOS

Existem alguns aspectos importantes que devem ser considerados na seleção de um

veículo tópico, tais como, a solubilidade do agente ativo no veículo; a velocidade com que o

agente é liberado do veículo; a capacidade do veículo de hidratar o estrato córneo; a

estabilidade do agente terapêutico no veículo e as interações químicas e físicas entre o

veículo, o estrato córneo e o agente ativo. Tradicionalmente, os veículos têm sido

considerados inertes do ponto de vista farmacológico, entretanto, devido às suas propriedades

físicas peculiares, muitos podem ser terapeuticamente benéficos. Como exemplo, pode-se

citar que a capacidade do veículo em retardar a evaporação da superfície da pele é menor nas

tinturas e curativos úmidos e maior nas pomadas e cremes (ROBERTSON e MAIBACH,

2007).

Atualmente existe um grande interesse no desenvolvimento de formulações tópicas.

Estas preparações são capazes de liberar o fármaco no sítio de ação, ou seja, no local

inflamado, minimizando efeitos sistêmicos adversos, devido a sua baixa concentração

plasmática (ROVENSKY et al., 2003; PARDEIKE, HOMMOS e MÜLLER, 2009). Estas

formulações incluem cremes, géis e sistemas mais complexos, utilizando uma gama de

fármacos como, por exemplo, os anti-inflamatórios corticosteróides.

Em casos especiais, como na inflamação crônica com descamação, exemplo a

psoríase, a mesma pode ser tratada de modo mais adequado, com preparações mais

lubrificantes como cremes e pomadas, constituídos por substâncias que apresentem

características hidratantes e emolientes. Ainda, cremes são frequentemente utilizados como

veículos em placas psoriáticas exsudativas, bem como em áreas flexurais (HUANG et al.,

2005).

A eficácia terapêutica de um fármaco aplicado na pele depende principalmente de sua

habilidade de penetração, podendo assim exercer a atividade farmacológica desejada.

Considerando que a maioria dos fármacos possui propriedades físico-químicas inadequadas

para penetrar efetivamente na pele, foram desenvolvidas ao longo dos anos, diferentes

estratégias para aumentar a permeação de substâncias através da mesma (BONINA et al.,

2001).

Os principais passos envolvidos na absorção percutânea, incluem o estabelecimento de

um gradiente de concentração que gera a força motriz para o movimento do fármaco através

da pele; a liberação do fármaco do seu veículo (coeficiente de partição) e a difusão do

fármaco através das camadas da pele(coeficiente de difusão). As características ideais de um

fármaco tópico incluem baixa massa molecular (600Da), solubilidade adequada em óleo e

água, bem como um alto coeficiente de partição (BARRY, 2004).

A maior limitação dos fármacos para liberação transdérmica é a própria pele, que age

como uma barreira, prevenindo a entrada de moléculas estranhas e impedindo a saída de

substâncias endógenas. A principal barreira para penetração através da pele, é exercida pela

camada mais superficial, o estrato córneo e sua compacta estrutura (KALIA e GUY, 2001;

MORGANTI et al., 2001; MOSER et al., 2001; HUANG, 2005). A função de barreira

também é ajudada pela atividade metabólica da pele, embora a capacidade de

biotransformação seja consideravelmente mais baixa na pele do que no intestino ou fígado

(SUHONEN, BOUWSTRA e URTTI, 1999).

A permeação de substâncias através da pele pode ocorrer por difusão do ativo através

da epiderme intacta ou através dos apêndices da pele como, por exemplo, os folículos pilosos

e glândulas sudoríparas. Entretanto cabe ressaltar que, devido à pequena porcentagem da

superfície total da pele ocupada pelos seus anexos, a penetração de ativos por esta via é

considerada pequena por alguns autores (LEONARDI, MARTINS e KUREBAYASHI,

2004).

Considerando a epiderme intacta, o ativo pode permear entre os queratinócitos ou

através deles. No meio transcelular, o ativo tem que atravessar os queratinócitos e, depois,

difundir-se também entre os lipídeos. Dessa forma, o meio intercelular é o maior determinante

para a permeação cutânea (LEONARDI, MARTINS e KUREBAYASHI, 2004). Qualquer

agressão na pele que remova água, lipídios ou proteínas da epiderme, pode alterar sua

integridade e comprometer sua função (HABIF, 2005). Dessa forma, a penetração de

substâncias aumenta várias vezes na pele inflamada, como por exemplo, na dermatite atópica.

Nas doenças esfoliativas graves, como a psoríase eritrodérmica, parece haver pouca barreira à

penetração desses agentes (ROBERTSON e MAIBACH, 2007).

O gel-creme é uma emulsão cuja fase aquosa está previamente gelificada pelo

polímero hidrófilo gelificante. Os agentes gelificantes, empregados na formação do gel-

creme, são usualmente os mesmos utilizados para obtenção de um hidrogel, como por

exemplo, carbopol (carbomer) e natrosol (FERREIRA, BRANDÃO e SILVA, 2002;

FERNANDEZ-MONTES, 2005; MARTINI, 2005).

2.3 PSORÍASE

A psoríase é uma doença inflamatória crônica a qual acomete a pele, com grande

polimorfismo de expressão clínica (MARTINS, ARRUDA e MUGNAINI, 2004). Apresenta

causa desconhecida e faz parte do grupo de doenças Pápulo-Escamosas, devido às

características clínicas de sua lesão primária (HABIF, 2005). Afeta comumente as regiões do

couro cabeludo, joelhos, cotovelos e tronco (figura 1 a 3).

As lesões podem permanecer localizadas ou tornarem-se generalizadas com o tempo

(LOWES et al., 2007; SUKHATME e GOTTLIEB, 2009). Estudos têm relatado o

aparecimento precoce de lesões no sexo feminino, mas este fato não é universalmente

observado (FARBER e NALL, 1998; RAYCHAUDHURI e GROSS, 2000).

Figura 1 – Psoríase do couro cabeludo. Densas escamas cobrindo uma parte ou todo o couro

cabeludo são altamente característicos da psoríase (HABIF, 2005)

Figura 2 – Psoríase em placas. As placas crônicas são vermelhas-foscas e cobertas de

escamas. Tendem a permanecer em tamanho e em posição fixas por longos períodos (HABIF,

2005)

Figura 3 – Psoríase em placas. Apresentação clássica. As placas vermelhas espessas têm uma

borda bem definida e escamas prateadas aderentes (HABIF, 2005)

Não existem evidências da presença de diferenças morfológicas na psoríase entre

homens e mulheres (FARBER e NALL, 1998). Acredita-se que o fator genético exerça um

papel fundamental no desenvolvimento da psoríase. Estima-se que aproximadamente 40% dos

indivíduos que sofrem de psoríase tenham um parente em primeiro grau que tenha a doença

(RICHARDSON e GELFAND, 2008).

A psoríase é considerada uma doença não contagiosa que apresenta diversas formas e

vários níveis de severidade (DOS SANTOS et al., 2005). Pode aparecer em qualquer idade,

sendo que a doença de início tardio tende a ser mais leve. O aparecimento de lesões

psoriáticas, logo após o nascimento, está relacionado à maior gravidade e antecedentes

familiares (HABIF, 2005). Durante muito tempo, foi aceita como causa primária da doença, a

hiperproliferação ceratinocítica associada à diferenciação epidérmica anormal, entretanto,

com os avanços em biologia molecular e imunologia descobriu-se que sua causa é bem mais

complexa (FARBER e NALL, 1998; RICHARDSON e GELFAND, 2008).

A psoríase é mediada por linfócitos T e células dendríticas ativadas encontradas nas

placas psoriáticas. Estas células liberam citocinas pró-inflamatórias como fator de necrose

tumoral (TNF)-alpha, interleucinas (17, 23) e interferon gama que desencadeiam a liberação

de outras citocinas conduzindo a hiperproliferação dos queratinócitos (SUKHATAME, 2009).

Dessa forma, a psoríase é caracterizada como uma dermatose inflamatória imunomodulada

por resposta tipo 1, pois há superexpressão das citocinas Th1 pró-inflamatórias com

deficiência relativa de citocinas Th2 (DOS SANTOS et al., 2005).

Os linfócitos T desempenham papel importante no desencadeamento e manutenção da

inflamação. Sua expressão clínica só ocorre quando uma reação imunológica induzida por

linfócitos T se desenvolve na pele do paciente (MARTINS, ARRUDA e MUGNAINI, 2004).

Em 1978, as células T e os macrófagos foram identificados como as principais células

do infiltrado inflamatório dérmico da psoríase. A partir de 1983, o fenótipo das células T foi

identificado, CD4+ e CD8+, assim como o aumento das células dendríticas na derme

(CARNEIRO et al., 2005). Existem evidências, indicando que a psoríase é imunologicamente

mediada, como a resposta terapêutica a medicamentos imunossupressores, transferência da

doença através do transplante de medula óssea em humanos e de células T purificadas de pele

humana pré-psoriática em ratos e a presença de modificações nos receptores de células T de

pele psoriática (FARBER e NALL, 1998).

Essa reação imunológica pode ser desencadeada por fatores ambientais, combinados,

como por exemplo, estresse, infecções e determinados tipos de medicamentos como o lítio.

O exame histológico da placa de psoríase (figura 4) demonstra alterações como o

espessamento da epiderme e vasodilatação dos vasos sanguíneos da derme. Além disso,

embora a pele normal apresente um número notável de células de defesa residentes, nas lesões

psoriáticas observa-se um aumento do número de leucócitos. (DOS SANTOS et al., 2005;

LOWES et al., 2007).

Figura 4 - Comparação entre os componentes histológicos de uma placa psoriática com a pele

normal (LOWES et al., 2007)

Microscopicamente, observa-se o alongamento de pontes intercelulares com um

encurtamento do tempo de trânsito do queratinócito epidérmico, devido a uma diminuição da

monofosfato de guanosina cíclico (ALLEN Jr., 2001).

O aumento na velocidade de crescimento e do ciclo celular leva ao acúmulo de células

na superfície do corpo, sendo que estas células não descamam suficientemente. Enquanto as

células de uma pele saudável amadurecem entre 28 e 30 dias, uma célula psoriática pode

amadurecer em apenas 3 a 4 dias e atingir a camada superficial da pele, acumulando-se e

formando lesões avermelhadas com escamas em relevo (DOS SANTOS et al., 2005). A

descamação e a consequente perda da função barreira da pele, ocorre devido à falha dos

corneócitos psoriáticos em empilhar-se normalmente e secretar lipídios extracelulares para

que ocorra a adesão entre eles (LOWES et al., 2007).

2.3.1 Tipos de psoríase

A psoríase possui várias apresentações clínicas, as lesões típicas são

eritematoescamosas, de limites bem precisos com halo periférico claro e escamas geralmente

argênticas. Dependendo da apresentação clínica, as lesões podem sofrer variações em seu

tamanho, morfologia e localização no organismo. As alterações histológicas da pele são

idênticas nas suas diferentes formas clínicas (LOWES et al., 2007).

A sua apresentação clínica subdivide-se em vários tipos, sendo: psoríase crônica em

placas, gutata, invertida ou flexural, eritrodérmica, pustular, ungueal e a artrite psoriásica.

2.3.1.1 Psoríase crônica em placas

Psoríase crônica em placas é constituída por placas crônicas não inflamatórias, bem

definidas, sendo a apresentação mais comum da psoríase. As lesões podem surgir em qualquer

local da superfície cutânea. Elas aumentam até certo tamanho e então tendem a permanecer

estáveis por meses ou anos. Uma mácula temporária marrom, branca ou vermelha permanece

quando a placa melhora (HABIF, 2005).

2.3.1.2 Psoríase gutata

Psoríase gutata, é um tipo de psoríase caracterizada por lesões pequenas (0,5 a 1,5 cm

de diâmetro), geralmente pouco descamativas, localizadas em região superior de tronco e

extremidades proximais dos membros e, algumas vezes, do couro cabeludo. Geralmente as

lesões da psoríase em gota não estão cobertas por escamas e não são tão finas como as placas

psoriáticas. Essa forma é característica em crianças e adultos jovens, geralmente precedida de

um quadro infeccioso, estreptocócico ou viral de garganta. Ocorre regressão no período de

semanas a meses, às vezes, sem necessidade de tratamento (LINDEN e WEINSTEIN, 1999;

CHRISTOPHERS e MROWIETZ, 1999; PETERS, WEISSMAN e GILL, 2000; ARRUDA,

CAMPBELL e TAKAHASHI , 2001; LOWES et al., 2007).

2.3.1.3 Psoríase invertida ou flexural

Psoríase inversa ou flexural é comumente encontrada nas axilas, peito e ao redor de

dobras da pele como nos órgãos genitais e nádegas. O aspecto é seco e liso, avermelhado e

inflamado, não apresenta escamas. Ela é facilmente irritável por atrito e suor, sendo mais

comum em pacientes com excesso de peso (ALLEN Jr., 2001).

2.3.1.4 Psoríase eritrodérmica

Psoríase eritrodérmica é o tipo menos comum da doença, acometendo 75% ou mais da

superfície corpórea, com descamação fina, podendo levar à perda abundante de proteínas,

dificuldade para manutenção da temperatura corporal e perda excessiva de fluidos

(ARRUDA, CAMPBELL e TAKAHASHI , 2001).

2.3.1.5 Psoríase pustular

- psoríase Pustular é caracterizada por lesões pustulosas sobre base eritemato-

inflamatória, podendo ser dividida em três subtipos:

- psoríase pustulosa generalizada, a qual evolui em surtos com febre no início do

quadro e aparecimento súbito de erupção pustulosa disseminada, evoluindo para eritrodermia;

- psoríase pustulosa anular, forma rara, na qual as lesões são anulares ou circinadas,

semelhantes às do impetigo herpetiforme, que é uma forma de psoríase pustulosa da gravidez;

- psoríase pustulosa localizada (PPL) onde diferenciam-se a PPL palmoplantar e

acrodermatite contínua de Halopeau, na qual há comprometimento da região distal dos dedos

das mãos e pés, podendo haver destruição da lâmina ungueal e até comprometimento ósseo

(CHRISTOPHERS e MROWIETZ, 1999; ARRUDA, CAMPBELL e TAKAHASHI, 2001).

2.3.1.6 Psoríase ungueal

A psoríase ungueal raramente ocorre isoladamente. Está presente em 10 a 80% dos

pacientes acometidos pelos diversos tipos de psoríase. Ocorre mais frequentemente nas unhas

dos dedos das mãos do que dos pés, apresentam a onicólise, depressões, hiperqueratose

subungueal, alterações de cor ou estrias longitudinais ou transversais (SHAW, 1998;

PETERS, WEISSMAN e GILL, 2000; ARRUDA, CAMPBELL e TAKAHASHI , 2001).

2.3.1.7 Artrite psoríatica

A artrite psoriática pode ser desenvolvida por 10 a 30% dos pacientes acometidos pela

psoríase. Os sintomas podem incluir rigidez, dor, inchaço, sensibilidade das articulações e

tecidos moles, redução dos movimentos, rigidez matutina e cansaço. As articulações que

geralmente são afetadas incluem os pulsos, joelhos, tornozelo, costas e pescoço. Acomete

igualmente homens e mulheres, ocorrendo geralmente entre 30 a 50 anos (LINDEN e

WEINSTEIN, 1999).

2.4 Corticóides tópicos para o tratamento da psoríase

Corticóides continuam entre os agentes de primeira linha no tratamento tópico da

psoríase em todas as faixas etárias (CORDORO, 2008).

O tratamento vai depender do tipo de psoríase, da extensão do quadro e também de

fatores como idade, ocupação, e condições gerais de saúde (SAMPAIO e RIVITTI, 2001). A

terapia envolve a redução da velocidade de proliferação da epiderme, a diminuição da

inflamação dérmica e da resposta imunológica. A aplicação tópica de cremes, pomadas,

loções e spray com corticóides, é o tratamento mais utilizado (DOS SANTOS et al., 2005).

Os cremes e pomadas com ação hidratante, contendo componentes oleosos ou

emolientes, auxiliam na hidratação e sensação tátil da pele e, ainda, reduzem a descamação e

a irritação (DOS SANTOS et al., 2005; ALTCHEK et al., 2006).

Em indivíduos, onde a área da superfície do corpo envolvida pelas lesões corresponde

a menos de 5%, é comum iniciar com tratamento tópico, exceto nos casos onde esse tipo de

tratamento não tenha obtido sucesso anteriormente ou se a psoríase for debilitante ao local

atingido (LEBWOHL, 2004; MENTER et al., 2009).

Nos casos em que é atingida de 5 a 10% da superfície corporal, o dermatologista

costuma receitar algum tratamento tópico, que, dependendo do caso, pode ser acrescido da

fototerapia ou de medicações orais. Nos pacientes, onde há um envolvimento de mais de 10%

da superfície corporal, somente a terapia tópica pode não ser suficiente, mas poderá ser de

ajuda à fototerapia ou à terapia sistêmica (LEBWOHL, 2004, ALTCHEK, 2006).

A severidade da psoríase pode ser agravada por lesões e irritação da pele, exposição

solar, estresse e ansiedade, alguns medicamentos, infecções e dieta.

Para pacientes com placas localizadas e incipientes, podem ser prescritos

corticosteróides tópicos potentes ou de baixa ou média potência; também é possível usar

medicamentos que não sejam corticosteróides, como calcipotriol ou tazaroteno (LEBWOHL,

2004). A psoríase com envolvimento localizado geralmente é responsiva somente a

corticosteróides de maior potência como o propionato de clobetasol (0,05%) e betametasona

dipropionato (0,05%) ou valerato (0,1%), considerandos agentes de maior eficácia em seu

tratamento tópico (FUCHS, WANNMACHER e FERREIRA, 2006).

O tratamento com corticóides pode apresentar alguns efeitos adversos como: atrofias

da pele, aparecimento de telangiectasias, víbices e púrpura (SAMPAIO e RIVITTI, 2001). A

face e os pontos intertriginosos são as áreas mais suscetíveis a efeitos colaterais cutâneos

provocados pelos corticosteróides tópicos. Dessa forma, corticóides fluorados, que

apresentam modificações químicas afim de que haja um aumento na sua potência devem ser

evitados para o tratamento destas regiões (DOS SANTOS et al., 2005; ALTCHEK et al.,

2006; FOX, MERK e BICKERS, 2006).

Algumas áreas limitadas podem necessitar de tratamentos alternativos. Por exemplo, o

envolvimento das palmas das mãos e plantas dos pés pode ser debilitante e sabe-se que essas

áreas são difíceis de tratar. Psoríase pustular das palmas das mãos e plantas dos pés

respondem apenas ocasionalmente à terapia tópica. Embora as palmas das mãos e plantas dos

pés constituam pequena percentagem da área da superfície corporal, pode justificar-se o

tratamento com medicamentos orais ou com fototerapia (LEBWOHL, 2004).

2.4.1 Glicocorticóides

Os corticosteróides são fármacos amplamente utilizados como efetivos e potentes anti-

inflamatórios (figura 5). Dividem-se em glicocorticóides e mineralocorticóides. Ambos os

grupos possuem ação sobre a retenção de sódio e água como sobre o metabolismo

intermediário.

A predominância de um ou outro desses efeitos é que os caracteriza. O principal

exemplo de glicocorticóide endógeno nos seres humanos é o cortisol (hidrocortisona),

enquanto a aldosterona é o principal mineralocorticóide (SILVA, 2006; FOX, MERK e

BICKERS, 2006).

Glicocorticóides são os mais eficazes antiinflamórios disponíveis, suplantando os não-

esteróides, promovem melhora sistemática de uma série de manifestações clínicas, sem afetar

a evolução da doença básica. Ao lado de esperados benefícios, há risco de potenciais efeitos

adversos, observados numa variedade de tecidos orgânicos, na dependência de doses

empregadas e, sobretudo, na duração do tratamento. Em uso agudo, são geralmente bem

tolerados. No tratamento prolongado, surgem efeitos adversos como: acne, hipertensão,

predisposição maior às infecções microbianas, micóticas e virais, diabetes, úlcera gastro

intestinal, inibição do crescimento, osteoporose, entre outros (FOX, MERK e BICKERS,

2006).

A hidrocortisona é o protótipo dos glicocorticóides, e sua estrutura básica é a mesma

de todos os esteróides, caracterizando-se pelo núcleo ciclopentanoperidrofenantreno.

Alterações nas moléculas da hidrocortisona e da cortisona deram origem aos compostos

glicocorticóides atuais, com potente atividade antinflamatória e com menor capacidade de

retenção de sódio (SILVA, 2006).

Os glicocorticóides possuem diferenças em relação à sua atividade antiinflamatória,

dependendo de suas características químicas. Por exemplo, para atingir a atividade

antiinflamatória de uma molécula de dexametasona são necessárias 5,3 moléculas de metil

prednisolona, ou então, 26,7 moléculas de hidrocorticosona, sugerindo, dessa maneira que a

dexametasona apresenta uma potência antiinflamatória superior aos demais glicorticóides

(SUN et al., 2007).

Sua eficácia terapêutica baseia-se primariamente na sua atividade antiinflamatória,

mas podem também exercer efeitos antimitóticos no caso da psoríase e outras doenças

dermatológicas associadas a um aumento da renovação celular (SILVA, 2006).

Os efeitos anti-inflamatórios são decorrentes da estimulação da biossíntese da proteína

lipomodulina que por sua vez, inibe a ação enzimática da fosfolipase A

. Deste modo é

impedida a liberação de ácido araquidônico e em conseqüência, não se formam seus

metabólitos, como prostaglandinas, tromboxanos e leucotrienos, que são mediadores da

inflamação (KOROLKOVAS e DE FRANÇA, 2001; LIONZO, 2006).

Os glicocorticóides determinam menor ocorrência de efeitos sistêmicos se usados

em doses adequadas e por períodos não-prolongados, e reduzem radicalmente as

manifestações da inflamação. Propriedade que resulta de seus efeitos profundos sobre a

concentração, distribuição e função dos leucócitos periféricos, bem como dos seus efeitos

supressores sobre as citocinas e quimiocinas inflamatórias e outros mediadores da inflamação.

Independente de sua causa, a inflamação caracteriza-se pelo extravasamento e pela infiltração

dos leucócitos no tecido afetado. Além de seus efeitos sobre a função leucocitária, os

glicocorticóides influenciam a resposta inflamatória ao reduzir a síntese de prostaglandinas,

leucotrienos e fator de ativação de plaquetas, que resulta da ativação da fosfolipase A2. Por

fim, os glicocorticóides reduzem a expressão da ciclooxigenase-2, a forma induzível dessa

enzima, nas células inflamatórias, diminuindo a formação de prostaglandina (ROBERTSON e

MAIBACH, 2007).

Os corticosteróides, quando usados topicamente, exercem ação antiinflamatória e

antimitótica. A ação antiinflamatória obedece aos mecanismos básicos descritos para o uso

sistêmico. Os corticosteróides, principalmente os halogenados onde a dexametasona se

enquadra como exemplo, reduzem o número de mitoses, o que os torna úteis no tratamento da

psoríase pela diminuição da multiplicação celular e menor formação de camadas de queratina

(SILVA, 2006; ROBERTSON e MAIBACH, 2007).

2.4.1.1 Dexametasona

A dexametasona (figura 5) é um esteróide, derivado do núcleo

ciclopentanoidrofenantreno que apresenta atividade glicocorticóide e antiinflamatória.

Apresenta massa molar de 392,47 g/mol. É um derivado fluorado da prednisolona e isômero

da betametasona podendo ser caracterizada como um pó cristalino branco ou quase branco e

inodoro, praticamente insolúvel em água; facilmente solúvel em etanol, acetona, dioxano e

metanol; levemente solúvel em clorofórmio; muito solúvel em éter. Apresenta ponto de fusão

entre 268° e 271° com decomposição. Sua solubilidade em água é de 1 mg/ml e seu

coeficiente de partição octanol-tampão fosfato pH 7,4 a 37°C é de 1,33 (KOROLKOVAS e

DE FRANÇA, 2001; MARTINDALE, 1996; EINMAHL et al., 1999; MOFFAT,

OSSELTON e WIDDOP, 2004)

Figura 5 - Estrutura química da dexametasona (GOODMAN & GILMAN, 2006)

A dexametasona é um exemplo de análogo sintético de ação prolongada, com duração

da atividade biológica maior que 48 horas e atividade glicocorticóide 30 vezes superior à

hidrocortisona (SILVA, 2006). Apresenta estabilidade “in vitro”, sendo apropriada para

utilização em sistemas de liberação de fármacos de ação prolongada (SUN, at al., 2007).

A dexametasona apresenta-se de 4 formas diferentes: na forma de acetato de

dexametasona, isocotinato de dexametasona, fosfato sódico e tebutato (MOFFAT,

OSSELTON e WIDDOP, 2004).

A dexametasona apresenta a maior potência dentre os glicorticóides de ação sistêmica

(KOROLKOVAS e DE FRANÇA, 2001). Entretanto seu uso contínuo, na forma sistêmica

e/ou tópica apresenta algumas desvantagens como o surgimento de efeitos indesejáveis (FOX,

MERK e BICKERS, 2006; JOSSE et al., 2009).

Levando-se em consideração os efeitos apresentados por esse fármaco, alguns estudos

estão sendo desenvolvidos com o objetivo de aumentar a eficácia da dexametasona e

consequentemente, diminuir os seus efeitos adversos, bem como, a obtenção de sistemas de

liberação prolongada.

Beck e colaboradores (2003) realizaram o desenvolvimento e a caracterização de

formulações de nanopartículas (poly (DL-lactide) e poly (ε-caprolactona) contendo

dexametasona. Avaliaram ainda, a atividade antiinflamatória em ratos, através da inibição da

formação do granuloma e inibição de edema de pato de rato, induzida por caragenina. Os

autores observaram, uma melhora significativa na atividade farmacológica da dexametasona

encapsuladadas em nanoesferas, em relação a formulação comercial (Decadron

) contendo o

fármaco na forma livre.

Cascone e colaboradores (2002) realizaram a incorporação de nanopartículas de

PLGA contendo dexametasona em hidrogéis com álcool polivinílico e dextrano, com o

objetivo de avaliar o mecanismo de liberação do fármaco encapsulado nas nanopartículas.

Através deste estudo foi observado que a dexametasona foi liberada das nanopartículas de

PLGA seguindo um mecanismo de difusão controlado. Além disto, verificaram que a

presença de dextrano nos hidrogéis permitiu a liberação de uma quantidade maior de

dexametasona em comparação aos hidrogéis sem a presença de dextrano (CASCONE et al.,

2002).

2.5 SISTEMAS NANOESTRUTURADOS PARA ADMINISTRAÇÃO DE FÁRMACOS

Nos últimos anos, sistemas utilizando nanopartículas poliméricas têm sido utilizados

como uma das estratégias mais promissoras para a liberação de fármacos a sítios específicos

de ação (ALVES et al., 2007).

O desenvolvimento ou a alteração de protótipos químicos, visando um aumento da

afinidade do fármaco sobre a pele pode ser um processo laborioso e limitado. Desta forma, a

associação do fármaco a um sistema que permita a alteração ou adequação de suas

propriedades, sem modificar seu mecanismo de ação, parece ser uma alternativa considerável

para contornar esse problema. Nesse sentido, o desenvolvimento de sistemas para vetorização

de fármacos, através de sistemas nanoestruturados, estão sendo propostos com o intuito de

controlar a liberação do fármaco em seu sítio ativo, aumentar sua especificidade e diminuir

seus efeitos colaterais através da redução da dose administrada. Dentre estes sistemas

nanoestruturados, encontram-se os carreadores coloidais, os quais têm sido propostos para

liberação de fármacos na pele e no estrato córneo de uma forma mais específica. Desta forma,

polímeros biodegradáveis na forma de partículas coloidais, têm sido estudados para aplicação

em terapias antitumorais, antimicrobianas, e antiinflamatória tópica, injetável e oftálmica

(COUVREUR, DUBERNET, PUISIEUX 1995; YOKOYAMA, OKANO, 1996;

GIUNCHEDI et al., 1999; PINTO, ANDREMONT e COUVREUR., 2000; TUNÇAI et al.,

2000; KIM e LEE., 2001; SHAFFAZICK et al., 2003; GUTERRES, BENVENUTTI e

POHLMANN 2007).

A vetorização de um fármaco permite a sua liberação em sítios fisiológicos específicos

como órgãos, tecidos ou células, onde a atividade farmacológica é requerida. O

direcionamento do fármaco a sítios específicos evita seu acúmulo em tecidos onde sua ação

não é requerida, contribuindo para uma redução de efeitos colaterais e promovendo índices

terapêuticos mais adequados (YOKOYAMA e OKANO, 1996; GUTERRES, BENVENUTTI

e POHLMANN, 2006). Esses sistemas têm sido extensivamente estudados para administração

oral e parenteral, podendo, também, serem utilizados para liberação de vários fármacos

através da pele (JALÓN et al., 2001).

Liberação imediata, bem como a liberação sustentada, tem sido relatada para

suspensões de nanopartículas lipídicas sólidas (NPLS). Nos últimos anos, também os

lipossomas foram bastante estudados, porém sua estabilidade é questionável e frequentemente

outros tipos de carreadores têm sido testados para controlar melhor a liberação de fármacos

(PINTO, ANDREMONT e COUVREUR, 2000). Devido à natureza polimérica das

nanopartículas, as mesmas podem ser mais estáveis do que os lipossomas em fluidos

biológicos e durante a armazenagem (MÜLLER, MÄDER e GOHLA, 2000).

Para aplicação dérmica, ambas as características são interessantes, a liberação imediata

pode ser útil para melhorar a penetração de uma substância. A liberação sustentada é

importante para substâncias ativas, que possam causar irritação em concentrações altas ou que

devam suprir a pele por um período prolongado de tempo (JENNING, SCHÄFER e GOHLA,

2000).

Por outro lado, um grande número de fármacos apresenta pouca solubilidade ou

instabilidade em meio aquoso, fatores que podem levar a problemas na formulação. Neste

sentido, as nanopartículas poliméricas podem proteger moléculas lábeis e melhorar a ação de

fármacos com problemas de solubilidade (LEGRAND et al., 1999).

2.6 NANOPARTÍCULAS POLIMÉRICAS

Nanopartículas poliméricas são sistemas coloidais, medindo em torno de 10 nm a 1000

nm e tamanho similar aos lipossomas, apresentando melhor estabilidade que estes, durante a

estocagem como “in vivo”. As nanopartículas podem consistir de uma matriz polimérica

(nanoesferas) ou de um sistema reservatório oleoso envolvido por uma parede polimérica

(nanocápsulas) (BARRAT, 2000) (figura 6). Podem, também, ser constituídas, por um

sistema emulsionado, consistindo de uma fase dispersa (óleo) em uma fase contínua (água),

estabilizada por emulsionantes (nanoemulsão) (KAN et al., 1999).

Figura 6 – Representação gráfica de nanopartículas e nanoesferas poliméricas: a) fármaco

dissolvido no núcleo oleoso das nanocápsulas; b) fármaco adsorvido à parede polimérica das

nanocápsulas; c) fármaco retido na matriz polimérica das nanoesferas; d) fármaco adsorvido

ou disperso molecularmente na matriz polimérica das nanoesferas (SCHAFFAZICK, et al.,

2003)

Polímeros biodegradáveis vem sendo estudados para a aplicação na área

farmacológica. Como exemplo destes, podemos citar a poli(ε-caprolactona), que é um

poliéster alifático bastante hidrofóbico, que apresenta uma velocidade de degradação lenta.

Desta forma, tem sido empregado no preparo de nanocápsulas e para o desenvolvimento de

sistemas de liberação prolongada (ROSA, PENTEADO e CALIL, 2000; FIALHO e CUNHA

Jr., 2007).

As formas de associação das formas ativas a esses sistemas coloidais dependem da

natureza química dos fármacos, assim como da composição química dos sistemas. Nas

nanoesferas os fármacos podem encontrar-se retido ou molecularmente disperso na matriz,

enquanto que, nas nanocápsulas, os fármacos estarão distribuídos na vesícula ou adsorvidos

em sua parede polimérica (SCHAFFAZICK et al., 2003).

Os métodos de preparação de nanopartículas poliméricas podem ser classificados em

dois tipos: os métodos de polimerização in situ de monômeros dispersos (cianoacrilatos de

alquila) e os métodos baseados na precipitação de polímeros pré-formados tais como

poli(ácido lático), poli (ácido lático-co-ácido glicólico), poli(ε-caprolactona) e copolímeros do

ácido metacrílico e de um éster acrílico ou metacrílico. Os dois tipos de métodos podem

originar tanto nanoesferas quanto nanocápsulas (LAMPRECHT et al., 1999; TUNÇAY et al.,

2000; PINTO, ANDREMONT e COUVREUR, 2000; SHAFFAZICK et al., 2003;

GUTERRES, BENVENUTTI e POHLMANN, 2006).

A adequada caracterização das nanopartículas é um pré-requisito importante para o

controle de qualidade de produtos. Devido à natureza coloidal destes sistemas, dificuldades

técnicas são encontradas na sua caracterização físico-química. Esta caracterização envolve

parâmetros como: distribuição de tamanho da partícula, potencial zeta (determinação da carga

de superfície), análises morfológicas, determinação da quantidade de fármaco (total,

associado e livre), determinação do peso molecular, estudos de estabilidade (efeitos de

estocagem em função do tempo), caracterização estrutural e cinética de liberação

(GUTERRES et al., 1995; SHAFFAZICK et al., 2003; GUTERRES, BENVENUTTI e

POHLMANN, 2006).

2.7 LIBERAÇÃO E PENETRAÇÃO CUTÂNEA

Análises farmacocinéticas de liberação “in vitro”, a partir de sistemas

nanoestruturados, têm contribuído enormemente para o entendimento sistemático e

quantitativo de fármacos vetorizados. Uma otimização do sistema, baseada nessas avaliações

de liberação, deveria ser determinada para cada caso, ou seja, para cada fármaco em estudo

(ALVES et al., 2007)

Durante décadas a pele tem sido utilizada como via de administração de substâncias

dermatologicamente ativas, onde as moléculas do fármaco difundem-se para o tecido alvo

para produzir seus efeitos terapêuticos (ZULLI, 2007). A distribuição de uma molécula ativa

na pele é, principalmente, função das propriedades físico-químicas do fármaco, do veículo e

ainda das propriedades fisiológicas do sistema biológico (PINTO, ANDREMONT e

COUVREUR, 2000; ZULLI, 2007; PARDEIKE, HOMMOS e MÜLLER, 2009). Modelos

matemáticos estão sendo crescentemente aplicados para predizer a penetração percutânea,

baseado em propriedades físico-químicas de ativos e veículos (PUGH, ROBERTS e

HADGRAFT, 1996; SCHNEIDER et al., 1996; CRONIN et al., 1999).

Estudos de permeação “in vitro” são essenciais para avaliar o comportamento do

fármaco na pele e através da pele. Efetivamente, três parâmetros principais precisam ser

considerados: (1) o tipo de membrana que será usada para avaliar a permeação do fármaco;

(2) o modelo matemático que será utilizado para caracterizar a permeação do fármaco na pele;

e (3) o modelo da célula de difusão que será adotado para realização do estudo (KATTAN,

ASBILL e HAIDAR, 2000).

A aplicação de técnicas biofísicas para monitorar a permeabilidade da pele, permitem

uma melhor compreensão dos mecanismos de absorção em nível molecular. Este

conhecimento pode ser usado para melhorar o desempenho de medicamentos dérmicos e

transdérmicos associados a promotores de absorção ou a formas vetorizadas. Com esses

dados, poderia ser possível comparar os resultados da via dérmica e transdérmica com os

resultados alcançados pela via oral. Com esta possibilidade, o desenvolvimento deste tipo de

sistema deverá com certeza, obter maior êxito (HADGRAFT, 1999). É importante também,

que todos estes fatores físico-químicos, sejam relacionados com a atividade desempenhada

por esses fármacos “in vivo”.

3 MATERIAIS E MÉTODOS

3.1 MATERIAIS

3.1.1 Matéria-prima, solventes e outros materiais

• Dexametasona (Base) – Henrifarma;

• Poli(ε-caprolactona)

= 80000 – Sigma-Aldrich;

• Monooleato de sorbitano (Span 80) – Sigma;

• Polissorbato 80 (Tween 80

) – Sigma-Aldrich;

• Triglicerídios de ácidos cáprico/caprílico (Miglyol 810

) – Via Farma;

• Carbopol 940

(polímero de ácido acrílico) – Henrifarma;

• Trietanolamina – Via Farma;

• Imidazolinidil uréia –Alpha Química;

• Cera autoemulsionante aniônica – Galena;

• Álcool cetílico – Alpha Química;

• Glicerina – Alpha Química;

• Oleato de decila (Cetiol V

) – Alpha Química;

• Óleo de Rosa Mosqueta – Galena;

• Acetona P.A – Nuclear;

• Acetonitrila grau CLAE - J.T.Baker;

• Água Milli-Q

;

• Hidróxido de sódio – Nuclear;

• Fosfato de potássio – Synth;

• Tampão pH 4,0;

• Tampão pH 7,0;

• Membrana 0,45 µm – Millipore;

• Membrana de acetato de celulose 0,45 µm – Sartorius Stedim biotech.

3.1.2 Equipamentos e materiais de laboratório

• Evaporador rotatório 801 – Fisatom;

• Balança analítica AX 200 – Shimadzu;

• Cromatógrafo líquido de Alta Eficiência – CLAE - Cromatógrafo líquido Young Lin

Instrument, modelo YL9100 CLAE System, equipado com bomba modelo YL9110,

detector com comprimento de onda variável UV/VIS modelo YL9160;

• Coluna cromatográfica - Lichropher

100 RP – 18, 250 mm, 4,0 mm, 5 µm) – Merck;

• Lavadora Ultra-sônica – Unique;

• Centrífuga TDL80-2B – Centribio;

• Câmara climática TE 4001 – Tecnal;

• Potenciômetro – Digimed;

• Placas de vidro (espalhabilidade);

• Viscosímetro rotacional – RV DV-1+ Brookfield;

• Aparato vertical de célula de Franz – Adaptado;

• Zetasizer

- Nano-ZS - Malvern.

3.2 MÉTODO

3.2.1 Preparação das suspensões contendo nanocápsulas de dexametasona

As nanopartículas foram preparadas através do método de nanoprecipitação de

polímeros pré-formados (FESSI et al., 1989), utilizando-se a dexametasona como fármaco na

sua forma base, em uma concentração final de 0,5 mg/ml de suspensão. As nanocápsulas,

contendo dexametasona foram desenvolvidas e caracterizadas por Friedrich e colaboradores

(2008), utilizando, para isso, os componentes descritos na tabela 1.

Tabela 1- Composição das suspensões de nanocápsulas, contendo dexametasona

Fase orgânica (%)

Triglicerídeos de ácidos cáprico e caprílico 3,30

Monooleato de sorbitano 0,776

Poli(ε-caprolactona)

1,0

Acetona 267,0

Dexametasona 0,05

Fase aquosa

Polissorbato 80 0,776

Água destilada 533,0

Os componentes da fase orgânica foram pesados e colocados em um béquer, sendo

mantidos sob agitação magnética em banho-maria (temperatura de 40 ºC), até sua total

dissolução. A fase orgânica foi vertida com auxílio de um funil, na fase aquosa, também sob

agitação magnética em banho-maria a 40 ºC.

Após a suspensão formada foi mantida sob agitação magnética em banho-maria por

10 minutos e levada ao evaporador rotatório para a eliminação do solvente orgânico e ajuste

da concentração final de dexametasona em 0,5mg/ml de suspensão. Seguindo o mesmo

procedimento, foi realizada a preparação de nanocápsulas brancas sem a adição de

dexametasona.

3.2.2 Avaliação físico-química das suspensões de nanocápsulas, contendo dexametasona

As suspensões contendo nanocápsulas, foram caracterizadas anteriormente por

Friedrich e colaboradores (2008). No presente trabalho, os testes de caracterização foram

realizados com o objetivo de comparação com as suspensões previamente desenvolvidas. As

suspensões, contendo as nanocápsulas de dexametasona foram analisadas com relação à

distribuição do diâmetro médio das partículas, índice de polidispersão, potencial zeta, pH e

análises térmicas, compreendendo Calorimetria Exploratória Diferencial (DSC) e

Termogravimetria (TG).

3.2.2.1 Determinação do pH

A determinação do pH foi realizada em potenciômetro calibrado com solução tampão

pH 4,0 e 7,0 diretamente nas suspensões. Os resultados foram expressos pela média das três

determinações.

3.2.2.2 Distribuição do diâmetro médio das partículas e índice de polidispersão

As determinações de distribuição do diâmetro médio e do índice de polidispersão das

nanopartículas em suspensão foram realizadas através de espalhamento de luz dinâmico

(Zetasizer

Nanoseries, Malvern Instruments). As suspensões foram diluídas 500 vezes (v/v)

em água Milli-Q

e os resultados foram determinados através da média de três repetições

(MÜLLER et al., 2001). Primeiramente, as análises foram realizadas na Faculdade de

Farmácia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFGRS) e, no decorrer do

experimento, as análises foram repetidas em decorrência da aquisição do equipamento no

Laboratório de Nanotecnologia da UNIFRA.

3.2.2.3 Potêncial Zeta

O potencial zeta das suspensões de nanocápsulas foi obtido através de eletroforese

(Zetasizer

Nanoseries, Malvern Instruments). Essa determinação foi realizada após diluição

de 500 vezes (v/v) das suspensões de nanocápsulas em solução de NaCl 10 mM previamente

filtrada através de membrana com porosidade de 0,45 µm (MÜLLER et al., 2001). Os

resultados foram obtidos através da média de três determinações. As análises foram realizadas

Faculdade de Farmácia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFGRS) e repetidas,

posteriormente no Centro Universitário Franciscano (UNIFRA) em decorrência da aquisição

do equipamento.

3.2.2.4 Análises térmicas (DSC e TG)

As análises foram realizadas, usando equipamento STA 409C (Luxx)-Netzsch com

temperatura inicial de 30 ºC e temperatura final de 350 ºC com taxa de aquecimento de 10

ºC/min sob atmosfera de nitrogênio com fluxo de 100 cm

/min

-1

em cadinho padrão de

alumínio com tampa, com geometria circular.

Foram realizadas análises térmicas, incluindo Calorimetria Exploratória diferencial

(DSC) da dexametasona matéria-prima, das formulações contendo dexametanona na forma

livre e nanoencapsulada e formulação de creme gel base. As análises de Termogravimetria

(TG) foram realizadas para as amostras de dexametasona matéria-prima, da suspensão

contendo nanocápsulas de dexametasona, formulação de creme gel base, além das

formulações semi-sólidas (creme gel) contendo o fármaco livre e nanoencapsulado.

Essas análises foram realizadas no Laboratório de Física Aplicada da Universidade

Federal do Ceará – UFC.

3.2.3 Preparação das formulações semi-sólidas contendo nanocápsulas de dexametasona

3.2.3.1 Creme gel

Os componentes utilizados na preparação do creme gel, contendo nanocápsulas de

dexametasona estão descritos na tabela 2.

Tabela 2 - Composição do creme gel contendo nanocápsulas de dexametasona

Componentes Quantidades (%)

Creme Base 10,0

Carbopol 940

0,3

Trietanolamina 99% 0,2

Imidazolinidil uréia a 30% 4,0

Suspensão de nanocápsulas contendo dexametasona (0,5mg/ml) 85,5

O creme gel foi preparado substituindo-se a água pela suspensão de nanocápsulas

contendo dexametasona. O creme base foi disperso com a suspensão de nanocápsulas

contendo dexametasona. Essa dispersão foi adicionada sob homogeneização ao carbopol 940

previamente triturado. A esta dispersão foi adicionada a trietanolamina e a imidazolidinil

uréia. A concentração teórica final de dexametasona na formulação foi de 0,42 mg/g de creme

gel.

Com objetivo de comparar os resultados entre o fármaco nanoestruturado ou não,

foram preparados veículos com a incorporação da dexametasona na forma livre. Nesta

formulação, a dexametasona foi dispersa em monooleato de sorbitano e polissorbato 80, para

posterior incorporação no creme gel. A concentração final teórica obtida foi de 0,42mg/g de

creme gel. Todas as formulações semi-sólidas foram preparadas em triplicata.

3.2.3.2 Creme base

Os componentes utilizados para preparação do creme base estão descritos na tabela

Tabela 3 – Formulação do creme base

Fase Componentes %

FO Álcool cetílico 2,5

FO Cera autoemulsionante aniônica 24,0

FA Glicerina 5,0

FO Oleato de decila 6,0

FO Óleo de Rosa Mosqueta 6,0

FF Imidazolinidil uréia a 30% 2,0

FA Água destilada q.s.p 100

FO = Fase oleosa; FF = Fase Final; FA = Fase Aquosa

O creme base foi preparado segundo a técnica usual para preparação de emulsões. Os

constituintes foram divididos de acordo com a hidro ou lipossolubilidade. As duas fases foram

aquecidas independentemente a aproximadamente 70 ºC, com uma diferença de temperatura

em torno de 5 ºC entre as fases. Após a fusão dos componentes oleosos, a fase aquosa foi

adicionada lentamente sobre a fase oleosa, sob agitação, até total resfriamento. A

imidazolinidil uréia foi adicionada na fase final, após resfriamento do creme.

3.2.4 Determinação do diâmetro médio das partículas após a incorporação nas bases semi-

sólidas

A determinação do diâmetro médio e da polidispersão das nanocápsulas

incorporadas no veículo semi-sólido foi realizada através de espalhamento de luz dinâmico.

As amostras de creme gel, contendo nanocápsulas de dexametasona foram diluídas 500 vezes

(m/v) em água Milli-Q

. Posteriormente as soluções foram homogeneizadas em vórtex até

sua completa homogeneização. Os resultados foram obtidos através da média de três

repetições (MARCHIORI, 2008).

3.2.5 Determinação do potencial zeta após a incorporação nas bases semi-sólidas

O Potencial Zeta das formulações contendo suspensões de nanocápsulas foi obtido

através de eletroforese (Zetasizer

Nanoseries, Malvern Instruments). Essa determinação foi

realizada após diluição de 500 vezes (m/v) das formulações contendo as suspensões de

nanocápsulas em solução de NaCl 10 mM previamente filtrada através de membrana com

0,45 µm. Posteriormente as soluções foram homogeneizadas em vórtex até sua completa

homogeneização. Os resultados foram obtidos através da média de três determinações.

3.2.6 Estudo de estabilidade das bases semi-sólidas, contendo dexametasona na forma

nanoencapsulada e na forma livre

As amostras submetidas ao estudo de estabilidade foram armazenadas em

temperatura de 40 °C (± 2 °C) e 75% UR (± 5%) (BRASIL, 2005). Os parâmetros analisados

foram: características organolépticas (aparência, cor e odor), pH, teor, espalhabilidade e

viscosidade. Os testes foram aplicados nas formulações, contendo dexametasona na forma

nanoencapsulada e na forma livre. As leituras foram realizadas de 30 em 30 dias por um

período de 150 dias.

3.2.6.1 Determinação das características organolépticas das formulações contendo

dexametasona na forma livre e nanoencapsulada

As características físicas, ou seja, aparência, cor e odor, apresentadas pelas amostras

foram observadas visualmente e comparadas com as amostras armazenadas em temperatura

ambiente, as quais foram consideradas como padrão. A amostra foi classificada segundo os

seguintes critérios (ALVES, 1996):

1. condições normais, satisfatórias;

2. ligeira mudança de algum aspecto relativo à aparência, cor e odor da amostra;

3. incorporação de ar, início do desenvolvimento de coloração ou odor,

principalmente em termos de rancificação;

4. início de separação de fases da amostra, notável coloração, produto com odor

alterado;

5. fases separadas, produto fortemente corado e/ou com odor desagradável.

3.2.6.2 Determinação do pH das formulações, contendo dexametasona na forma livre e

nanoencapsulada

Para a determinação do pH das formulações semi-sólidas, foi utilizado um

potenciômetro calibrado com solução tampão pH 4,0 e 7,0. As leituras foram realizadas

diretamente nas formulações semi-sólidas, a cada 30 dias, por um período de 150 dias.

3.2.6.3 Avaliação das características reológicas das formulações semi-sólidas, contendo

dexametasona na forma livre e nanoencapsulada

As características reológicas das formulações semi-sólidas foram avaliadas com

auxilio de um viscosímetro rotacional Brookfield, modelo RV DVI+ com 10 velocidades.

A construção dos reogramas foi feita através da representação gráfica da taxa de

cisalhamento, em função da tensão de cisalhamento. O comportamento reológico foi

acompanhado ainda em função da relação entre a viscosidade em função da taxa de

cisalhamento. As análises foram realizadas em triplicada e as leituras foram feitas a cada 30

dias por um período de 150 dias.

3.2.6.4 Determinação da espalhabilidade das formulações semi-sólidas, contendo

dexametasona na forma livre e nanoencapsulada

Para a determinação da espalhabilidade, empregou-se a metodologia proposta por

Münzel, Buechi e Schultz e colaboradores (1959), modificada por Knorst em 1991 (DE

PAULA, et al., 1998).

Foi empregada uma placa-molde circular de vidro (diâmetro = 20 cm; espessura = 0,2

cm), com orifício central de 1,2 cm de diâmetro, que foi colocada sobre placa-suporte de

vidro (20 cm X 20 cm). Sob essas placas, foi posicionado uma folha de papel milimetrado. A

amostra foi introduzida no orifício da placa e a superfície nivelada com espátula; após, a

placa-molde foi cuidadosamente retirada. Sobre a amostra, foi colocada uma placa de vidro de

peso pré-determinado. Após 1 minuto, foi calculada a superfície abrangida através da medida

do diâmetro em duas posições opostas, com posterior cálculo do diâmetro médio. Esse

procedimento foi repetido, acrescentando-se novas placas, em intervalos de 1 minuto e

registrando-se, após cada determinação, a superfície abrangida. A espalhabilidade (Ei),

determinada a 25 ºC, foi calculada através da equação abaixo:

Ei = (d

.π)/4

Onde:

Ei = espalhabilidade da amostra para peso i (mm

)

d = diâmetro médio (mm)

Os valores da espalhabilidade em função dos pesos adicionados foram determinados

através de 3 medições, calculando-se a média entre elas. As análises foram realizadas em

triplicada e as leituras foram feitas a cada 30 dias por um período de 150 dias.

3.2.6.5 Doseamento das formulações semi-sólidas, contendo dexametasona na forma livre e

nanoencapsulada

A determinação do teor de dexametasona nas formulações semi-sólidas foi realizada

para as amostras de creme gel, contendo dexametasona tanto na forma livre, como na forma

nanoencapsulada. As medidas foram realizadas a cada 30 dias por um período de 150 dias

com amostras armazenadas conforme item 3.2.5.

Foram pesados 1,20 gramas de cada formulação, contendo nanocápsulas de

dexametasona e transferidas para um balão volumétrico de 25 ml, sendo a cápsula lavada com

acetonitrila (ACN). As amostras foram colocadas no ultrasom, durante 5 minutos e o volume

dos balões completados com ACN. As amostras foram transferidas para um tubo de ensaio e

centrifugadas por 10 minutos, com uma rotação de 3500 rpm. No final do processo, as

amostras foram filtradas com papel filtro e membrana 0,45 µm Millipore

As análises foram realizadas por Cromatografia líquida de alta eficiência, (CLAE),

através da adaptação da metodologia de Beck e colaboradores (2003) para quantificação da

dexametasona nas nanocápsulas. Utilizou-se um cromatógrafo líquido YL-Clarity, modelo

YL9100 CLAE System, equipado com bomba modelo YL9110, detector com comprimento

de onda variável UV/VIS modelo YL9160, Coluna cromatográfica - Lichropher

100 RP – 18

(250 mm, 4,0 mm, 5 µm) – Merck.

A fase móvel utilizada foi constituída de ACN e água na proporção de 45:55 (v/v) e

fluxo de 1,0 ml por minuto. O volume de injeção utilizado foi de 20 µl e as amostras foram

analisadas em um comprimento de onda de 238,5 nm.

Alguns parâmetros de validação, como linearidade, repetibilidade, especificidade,

limite de quantificação e detecção foram realizados para confirmar a capacidade de

quantificação da dexametasona encapsulada incorporada no creme gel.

Os resultados obtidos, através das áreas dos picos, foram aplicados na curva de

calibração e calculados através da equação da reta. O teor de dexametasona em cada amostra

foi expresso em µg/ml e porcentagem (%).

3.2.6.5.1 Construção da curva analítica

Para construção da curva analítica, foi pesado o equivalente a 25 mg de

dexametasona, sendo o volume completado com acetonitrila em um balão volumétrico de

100 ml. A partir desta solução (250µg/ml), a curva analítica foi construída nas concentrações

de 5, 10, 20, 30 e 40 µg/ml, utilizando-se acetonitrila como solvente. O procedimento foi

realizado em triplicata. Na tabela 4, encontram-se as diluições e as concentrações finais de

dexametasona, empregadas na curva analítica.

Tabela 4 - Curva analítica usada para determinação da dexametasona nas formulações semi-

sólidas

Balão

(25 ml)

Solução padrão (250µg/ml)

(ml)

Concentração

(µ

µµ

µg/ml)

1 0,5 5

2 1,0 10

3 2,0 20

4 3,0 30

5 4,0 40

As áreas médias, correspondentes a três determinações para cada diluição de

dexametasona, foram plotadas no eixo das ordenadas e as concentrações (µg/ml), no eixo das

abscissas.

3.2.7 Estudos de liberação “in vitro”

Os estudos de liberação “in vitro” foram realizados, utilizando-se uma célula de

difusão vertical do tipo Franz com um compartimento receptor com capacidade em torno de

6,0 mL e uma área de difusão de 3,14 cm

(FRANZ, 1975; VENTER et al., 2001; ALVES et

al., 2007).

Para realização dos experimentos de liberação, foram utilizadas membranas de

acetato de celulose com poros de 45 µm da Millipore

. As membranas foram previamente

hidratadas com água destilada durante 24 horas. A membrana foi colocada em contato com

uma solução receptora, constituída por tampão fosfato pH 7,4. Este meio foi mantido em

banho-maria a 37 °C, circulando água pelo compartimento inferior, sendo este,

constantemente agitado com uma barra magnética, coberta com teflon. As amostras foram

colocadas na parte superior da membrana (0,5 g) e, em intervalos pré-determinados de tempo

(a cada 1 hora por um período de 8 horas), foram coletados 2 ml da solução receptora. A cada

retirada da solução receptora, 2 ml foram recolocadas no compartimento receptor. A alíquota

coletada foi analisada em cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) conforme

condições descritas no item 3.2.5.5. A determinação da concentração e o fluxo de liberação da

dexametasona foram determinados para as formulações semi-sólidas contendo o fármaco na

forma livre e nanocencapsulada.

Para análise de cada formulação, 6 células de difusão tipo Franz foram utilizadas,

obtendo-se desta forma seis repetições.

3.2.8 Construção da curva analítica para realização dos estudos de liberação

Para construção da curva analítica, foi pesado o equivalente a 25mg de

dexametasona, sendo o volume completado com acetonitrila (ACN), em um balão

volumétrico de 25 ml. Desta solução, foi transferido 1 ml para um balão volumétrico de 100

ml e completado com ACN. A partir desta solução, a curva analítica foi construída nas

concentrações de 1,0; 2,0; 3,0; 5,0 e 10,0 µg/ml, utilizando-se ACN como solvente. O

procedimento foi realizado em triplicata.

Na tabela 5, encontram-se as diluições e as concentrações finais de dexametasona

empregadas na curva analítica.

Tabela 5 - Curva analítica para determinação da dexametasona nos estudos de liberação “in

vitro”

Balão

(10 ml)

Solução padrão (10 µ

µµ

µg/ml)

(ml)

Concentração

(µ

µµ

µg/ml)

1 1 1

2 2 2

3 3 3

4 5 5

5 10 10

A determinação do teor foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência,

seguindo as condições descritas no item 3.2.5.5. A média das áreas, correspondentes a três

determinações para cada diluição de dexametasona, foram plotadas no eixo das ordenadas e as

concentrações (µg/ml), no eixo das abscissas.

3.3 ANÁLISES ESTATÍSTICAS DOS RESULTADOS

A metodologia estatística dos dados incluiu análise descritiva de variáveis como a

média, desvio padrão, coeficiente de variação, estudos de correlação, regressão linear simples

e análise de variância (ANOVA), teste de Tukey, considerando-se níveis de significância de

0,05.

4 RESULTADOS E DISCUSSÃO

4.1 AVALIAÇÃO FÍSICO-QUÍMICA DAS SUSPENSÕES DE NANOCÁPSULAS,

CONTENDO DEXAMETASONA

As características físico-químicas foram avaliadas através das determinações de pH,

distribuição do diâmetro médio das partículas, índice de polidispersão, potencial zeta e análise

térmica incluindo, Calorimetria Exploratória Diferencial (DSC) e Técnicas de

Termogravimetria (TG).

4.1.1 Determinação do pH

O monitoramento do valor do pH é uma ferramenta importante para avaliar a

estabilidade das suspensões, visto que uma diminuição deste valor pode indicar degradação do

polímero ou de algum outro componente, ou difusão do fármaco para o meio aquoso

(GUTERRES et al., 1995).

No presente estudo o valor médio de pH para a suspensão, contendo dexametasona foi

de 4,8 (±0,1) inferior ao encontrado por Friedrich e colaboradores (2008), o qual foi

determinado em torno de 5,3. Apesar desta diferença, estes valores encontram-se dentro da

faixa ácida, observada por Marchiori (2008). Esta diferença provavelmente pode ser atribuída

à procedência das matérias-primas utilizadas em ambos os experimentos.

Considera-se, desta forma, que os valores de pH, levemente ácidos, apresentados pelas

suspensões coloidais, encontram-se coerentes para este tipo de sistema e, na faixa de pH

utilizados em formulações para uso tópico (ALVES et al., 2007).

4.1.2 Determinação do diâmetro médio e índice de polidispersão das nanopartículas

Primeiramente, as análises foram realizadas na Faculdade de Farmácia da

Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS), onde a suspensão apresentou diâmetro

médio em torno de 259,6 nm (± 3,0) e índice de polidispersão inferior a 0,2, indicando, dessa

forma, homogeneidade na distribuição do tamanho das partículas. Estes dados formam

repetidos na UNIFRA, após a aquisição do equipamento (Zetasizer

), onde obteve-se um

diâmetro médio de 278,8 (± 3,7) e índice de polidispersão de 0,19 (± 0,01) (figura 7).

Figura 7 - Distribuição do diâmetro médio das suspensões de nanocápsulas contendo

dexametasona

Os resultados obtidos, neste experimento, apresentaram valores próximos aos

encontrados anteriormente por Friedrich e colaboradores (2008) e Marchiori (2008), os quais

foram de 253nm (± 3,0) e 201nm (± 6,0) para o diâmetro médio das partículas, e índice de

polidispersão em torno de 0,23 e 0,11 respectivamente.

Considera-se, desta forma, que o diâmetro médio das partículas apresenta-se adequado

para aplicação tópica, visto que, para formulações cosméticas ou farmacêuticas, recomenda-se

tamanho inferior a 600 nm (VERMA et al., 2003).

4.1.3 Determinação do potencial zeta

As análises referentes ao potencial zeta das suspensões de dexametasona apresentaram

valores em torno de -11 mV (figura 8). Estes valores foram superiores aos encontrados por

Marchiori (2008), a qual referiu resultados em torno de -5,73 mV. Esses valores estão de

acordo com a literatura, que descreve a presença de cargas negativas para suspensões

preparadas com poli (ε-caprolactona) justificando-se este potencial pelos grupamentos ésteres

presentes no polímero (MÜLLER et al., 2001). Domingues e colaboradores (2008) realizou

estudos com nanocápsulas poliméricas de poli (ε-caprolactona) contendo indometacina e

observou um potencial zeta negativo em torno de – 24 mV. Ainda, Paese (2008) em seu

estudo com nanocápsulas de benzofenona-3, utilizando poli (ε-caprolactona) como polímero,

obteve valores de potencial zeta em torno de -9,5 mV.

No presente estudo, os valores encontrados são considerados adequados para a

manutenção do sistema sem agregação e precipitação das nanoestruturas, isto ocorre devido à

repulsão eletrostática que as mesmas apresenta, resultantes da densidade de carga de

superfície (SCHAFFAZICK et al., 2003).

Figura 8 - Potencial zeta apresentado pelas suspensões de nanocápsulas contendo

dexametasona

4.1.4 Análises térmicas

A análise térmica é constituída por técnicas analíticas que investigam o

comportamento de amostras em função da temperatura. Quando submetida a uma variação

térmica, uma dada substância pode sofrer alterações físicas e/ou químicas, reagir com os

componentes do meio ambiente, perder água de cristalização, etc., sendo que muitas dessas

transformações são acompanhadas pela perda ou absorção de energia calorífica (CASSIMIRO

et al., 2000).

As técnicas termoanalíticas possuem grande importância na área cosmética e de

medicamentos, devido à grande variedade de aplicações. Elas podem ser empregadas em

diferentes aplicações, como: identificação e análise da pureza de materiais; determinação de

temperaturas e entalpias características de mudanças de estados físicos (fusão e vaporização);

transformações de fases e reações e avaliação da cinética de decomposição térmica.

Essas técnicas, não são apenas um método qualitativo, mas também, quantitativo e

cinético. Quando empregadas para caracterização de materiais de síntese, apresentam como

vantagens menor tempo de ensaio e utilização de uma pequena quantidade de amostra

(CAMMENGA e EPPLE 1995; DA SILVA, DE PAULA e MATOS, 2007).

A calorimetria de varredura diferencial (DSC) foi desenvolvida pela Perkin Elmer nos

Estados Unidos e foi a primeira técnica a ser chamada de calorimetria de varredura

diferencial. Através desta técnica, mede-se a energia necessária para manter nula a diferença

de temperatura entre a amostra e um material de referência em função da temperatura ou do

tempo (VOGEL et al., 2000; DA SILVA, DE PAULA e MATOS, 2007).

A Termogravimetria (TG) é uma técnica em que se mede a mudança de peso (massa)

de uma substância em função da temperatura ou tempo sob determinadas condições

atmosféricas. Os experimentos são executados por meio de uma termobalança de elevada

sensibilidade, reprodutibilidade e resposta rápida às variações de massa. As curvas obtidas

através deste experimento, fornecem informações relativas à composição e estabilidade

térmica da amostra, dos produtos intermediários e do resíduo formado (VOGEL et al., 2000;

DA SILVA, DE PAULA e MATOS, 2007).

No presente trabalho, a análise térmica foi realizada utilizando técnicas de

termogravimetria (TG) e análise calorimétrica exploratória (DSC). Estas técnicas foram

utilizadas para avaliar a evolução dos processos de perda de água e decomposição das

suspensões e formulações com a dexametasona livre e na forma de nanocápsulas.

4.1.4.1Análises termogravimétrica – TG

4.1.4.1.1 TG da dexametasona

Na Figura 9, observa-se que a partir de 260° C, ocorre um processo de perda de massa

do fármaco. Este processo que ocorre na região de fusão da dexametasona pode ser associado

a sua decomposição, que ocorre simultaneamente com a sua fusão (MOFFAT, OSSELTON e

WIDDOP, 2004). Na região de temperatura entre 260 a 350 °C ocorre uma perda de massa da

ordem de 20%.

Figura 9 – Curva termogravimétrica para a dexametasona. Taxa de aquecimento 10 °C/min,

sob fluxo de nitrogênio

4.1.4.1.2 TG da formulação semi-sólida com dexametasona livre

A formulação de creme gel contendo dexametasona na forma livre (CGDEXA)

apresenta um processo de perda de massa que inicia em torno de 75 °C e está relacionado à

evaporação da água e de outros produtos voláteis contidos na formulação (Figura 10).

A evaporação da água a pressões ambiente ocorre em temperaturas da ordem de 100

°C, entretanto, o início a 75°C pode ser explicado considerando-se que a medida de TG foi

realizada sob fluxo de nitrogênio (100 cm

/min

-1

Ainda verifica-se que dos 90% de perda inicial de massa da formulação (CGDEXA),

apenas 9% correspondem à perda em temperaturas menores que 100 °C. Além disso, o

termograma permite observar a ocorrência de uma perda de massa com início a partir de

260°C associada à decomposição de dexametasona.

Figura 10 – Curva termogravimétrica da formulação de creme gel contendo dexametasona

livre (CGDEXA). Taxa de aquecimento 10 °C/min, sob fluxo de nitrogênio

4.1.4.1.3 TG da suspensão com nanocápsulas de dexametasona

A suspensão contendo as nanocápsulas de dexametasona, conforme a resposta

apresentada na Figura 11, mostra uma perda de água e de componentes voláteis a partir de 50

°C. Até a temperatura de 100 °C, cerca de 8% da massa é perdida. Até 175°C o sistema perde

até 50% da massa.

Não foi observado qualquer decréscimo após 200 °C relativo à decomposição da

dexametasona.

Figura 11 – Curva termogravimétrica da suspensão de nanocápsulas de dexametasona. Taxa

de aquecimento 10 °C/min, sob fluxo de nitrogênio

4.1.4.1.4 TG da formulação com a dexametasona nanoencapsulada

Observa-se no termograma da Figura 12 que a formulação de CGNCDEXA

apresentou perda de água, bem como de outros de seus componentes voláteis. Da mesma

forma que a suspensão contendo nanocápsulas de dexametasona, não foi evidenciada no

termograma, a decomposição da dexametasona. Há um deslocamento do início do processo de

perda de água e dos voláteis para 75 °C quando comparado com a suspensão contendo

nanocápsulas de dexametasona provavelmente devido à maior intensidade na interação da

água com os componentes da formulação. A perda total de até 80% da massa é estendida até

250 °C quando comparada com os dados das Figuras 10 (formulação com dexametasona

livre) e 11 (suspensão de nanocápsulas com dexametasona), indicando que os componentes

apresentam interação mais forte, dificultando a retirada de água e outros componentes voláteis

da formulação.

Figura 12 – Termograma da formulação de creme gel contendo nanocápsulas de

dexametasona. Taxa de aquecimento 10 °C/min, sob fluxo de nitrogênio

4.1.4.2 Análise calorimétrica diferencial (DSC)

Com o auxílio da calorimetria diferencial exploratória da dexametasona (figura 13), é

possível visualizar o inicio do processo endotérmico de fusão a uma temperatura em torno de

268 °C, seguido de um processo exotérmico de decomposição. Estes valores encontram-se de

acordo com a literatura que descreve que a fusão da dexametasona ocorre em uma faixa de

temperatura entre 268 °C e 271 °C, seguida da decomposição.

O primeiro pico de decaimento, observado no DSC da formulação de creme gel base,

pode ser associado à evaporação de um composto volátil do óleo de rosa mosqueta que

volatiliza na região em torno de 70 °C. A volatilização desse composto também pode ser

observada nas outras formulações analisadas, porém, com menor intensidade. A formulação

base apresenta em torno de 54,5% de água em sua composição. A dessorção dessa água pode

ser visualizada no DSC, onde na região próxima e logo após 100 °C, o DSC apresenta um

fluxo de calor endotérmico até próximo dos 120 °C. Não foram observados picos na faixa de

temperatura relativa à fusão e decomposição da dexametasona.

Em relação ao DSC da formulação contendo a dexametasona na forma livre, observa-

se um início com decaimento que acentua-se até em torno de 127 °C, indicando a dessorção

de água e outros constituintes voláteis da formulação. Na faixa de temperatura relativa à fusão

da dexametasona, observa-se um processo endotérmico com absorção de energia

evidenciando a fusão do fármaco. A análise térmica de DSC da formulação contendo

dexametasona na forma nanoencapsulada não evidenciou processos térmicos na região de

fusão da dexametasona.

Comparando os gráficos de DSC das formulações analisadas é possível observar que a

formulação contendo a dexametasona na forma livre apresentou maior entalpia. A entalpia é a

integral do fluxo de calor com a temperatura, portanto a área sob as curvas. Este fato pode ser

explicado em razão de que a formulação de creme gel contendo o fármaco na forma livre,

contém uma maior quantidade de água em relação às outras formulações analisadas.

Figura 13 - Calorimetria diferencial exploratória da formulação de creme gel contendo o

fármaco na forma livre, na forma nanoencapsulada, da formulação de creme gel base e da

dexametasona. Taxa de aquecimento 10 °C/min, sob fluxo de nitrogênio

4.2 DESENVOLVIMENTO DA FORMULAÇÃO SEMI-SÓLIDA PARA A

INCORPORAÇÃO DO FÁRMACO

A resposta farmacológica de fármacos, aplicados na pele, é determinada por algumas

variáveis, dentre elas, a diferença de permeabilidade das regiões corporais, favorecendo ou

diminuindo a penetração do fármaco; o gradiente de concentração do fármaco; o esquema

posológico, visto que, devido às suas propriedades, a pele pode atuar como reservatório para

muitos fármacos; o veículo, que pode favorecer a capacidade de penetração do ativo na

epiderme; e a oclusão, a qual permite um contato íntimo da substância ativa e seu veículo com

a pele, podendo aumentar a eficácia do fármaco (FOX, MERK e BICKERS, 2006).

Com base nesses dados, no presente estudo, uma formulação de creme gel foi

desenvolvida com a finalidade de atender as necessidades de lesões dermatológicas que

apresentam a necessidade de hidratação, emoliência, diminuição da perda transepidérmica de

água, remoção das escamas e controle da inflamação. Desta forma, o creme gel foi formulado,

CGDEXA

Dexametasona

Creme base

CGNCDEXA

contendo dexametasona como ativo principal, utilizado em função da sua atividade

antiinflamatória e imunossupressora.

O óleo de rosa mosqueta foi empregado para atender a necessidade de emoliência das

lesões e auxiliar na remoção das escamas acumuladas nas mesmas. O óleo de rosa mosqueta é

obtido da semente de Rosa aff. rubiginosa e rico em ácidos graxos insaturados como ácido

oléico (16%), linoléico (41%) e linolénico (39%). Possui acentuado poder regenerador de

tecidos, sendo, desta forma, utilizado em vários processos dermatológicos, incluindo a

psoríase (BATISTUZZO, MASAYUKI e YUKIKO, 2000).

No presente trabalho, além do desenvolvimento de uma formulação com

características emolientes, sistemas nanoestruturados foram incorporados na mesma.

A encapsulação do antinflamatório em sistemas poliméricos, como nanocápsulas,

busca otimizar a ação deste, permitindo uma liberação controlada/sustentada do fármaco,

diminuindo os seus efeitos colaterais e, ainda, promover uma diminuição na perda

transepidérmica de água, através do possível efeito oclusivo, apresentado pelas mesmas.

O comportamento das formulações tópicas, contendo fármacos na sua forma

tradicional (livre) já é conhecido e estudado por vários autores.

A incorporação de um fármaco nanoestruturado em uma base semi-sólida com

características para atender às necessidades específicas trata-se de um processo com

características inovadoras. Dessa forma faz-se necessária a realização de estudos que

permitam avaliar a viabilidade e a estabilidade desta formulação. Através destes estudos é

possível obter informações que indiquem o comportamento e o grau de estabilidade relativa

do produto, nas diversas condições que possa ser submetido, desde a fabricação até o término

de sua validade (BRASIL, 2004).

4.3 DETERMINAÇÃO DO DIÂMETRO MÉDIO DAS NANOPARTÍCULAS DE

DEXAMETASONA, INCORPORADAS NAS BASES SEMI-SÓLIDAS

Para determinação do diâmetro médio e do índice de polidispersão das nanocápsulas

de dexametasona, incorporadas no creme gel, as amostras foram diluídas 500 vezes (m:v) em

água MilliQ

. Os valores do diâmetro e índice de polidispersão, para as nanocápsulas

incorporadas no creme gel (figura 14), foram de 270,33 nm (±1,27) e 0,236 (±0,01),

respectivamente. Estes valores foram semelhantes aos apresentados pela suspensão de

dexametasona antes de serem incorporadas nas formulações semi-sólidas. Desta forma, o

veículo (creme gel) mostrou-se adequado para a incorporação das suspensões de nanocápsulas

de dexametasona visto que o diâmetro das mesmas foi mantido sem sofrer alterações

significativas.

Para o creme base (figura 15), sem a incorporação dos nanocarreadores, foram

observadas partículas em torno de 625,20 nm (±26,40), com índice de polidispersão de 0,898

(±0,06), respectivamente. Nesse caso, o índice de polidispersão elevado serve como

parâmetro para demonstrar presença de diferentes populações de partículas dentro da

formulação.

Figura 14 - Diâmetro médio apresentado pela suspensão das nanocápsulas contendo

dexametasona incorporadas no creme gel

Figura 15 - Diâmetro médio das partículas apresentado pela base de creme gel sem a

incorporação da dexametasona

Avaliou-se ainda, o diâmetro das nanopartículas contendo dexametasona incorporadas

nas formulações após 150 dias de experimento. Foi observando que o diâmetro destas

nanopartículas ficaram em torno de 299,4 nm e índice de polidispersão de 0,39. O valor

encontrado apresenta diferença significativa em relação ao diâmetro obtido logo após a

incorporação da suspensão de nanocápsulas de dexametasona na formulação de creme gel

(figura 16).

Figura 16 - Diâmetro médio apresentado pela formulação de creme gel contendo

nanocápsulas de dexametasona após 150 dias de experimento

Apesar da diferença estatística observada entre esses valores, os diâmetros das

nanocápsulas de dexametasona mantiveram-se dentro dos limites aceitáveis para formulações

de uso tópico.

O aumento do diâmetro das nanopartículas, observado na formulação de CGNCDEXA

após 150 dias de experimento de estabilidade, pode estar associado à agregação de moléculas

de água, presentes na formulação de creme gel, à estrutura polimérica das nanocápsulas. Essa

agregação provoca um aumento de seu volume (efeito swelling), com consequente aumento

de seu diâmetro.

4.4 DETERMINAÇÃO DO POTENCIAL ZETA DAS NANOPARTÍCULAS DE

DEXAMETASONA INCORPORADAS NAS BASES SEMI-SÓLIDAS

As amostras de creme gel contendo nanocápsulas de dexametasona apresentaram

potencial zeta de aproximadamente -35 mV (figura 17), sendo este valor semelhante ao

observado por Marchiori (2008) em amostras de gel hidrofílico contendo nanocápsulas de

dexametasona.

Os valores de potencial zeta encontrados para o creme gel com a suspensão foram

maiores que os obtidos para as suspensões de nanocápsulas de dexametasona. Valores de

potencial zeta elevados sugerem maior estabilidade do sistema, pois a repulsão entre as

partículas previne o fenômeno de agregação. Desta forma os valores de potencial zeta

encontrados apresentam-se adequados para permitir que as nanocápsulas incorporadas no

creme gel mantenham-se sem agregação.

Figura 17 - Potencial zeta apresentado pelas nanocápsulas de dexametasona incorporadas no

creme gel

Foi analisado ainda, o potencial zeta das formulações de creme gel contendo

nanocápsulas de dexametasona após 150 dias de experimento para verificar possíveis

alterações de seus valores. Observou-se através desta análise valores de potencial zeta em

torno de -62,58 mV (figura 18).

Este aumento da carga negativa do potencial zeta, observado após a incorporação da

suspensão na formulação de creme gel e após os 150 dias de experimento, pode estar

relacionado com a presença de água na formulação de creme gel. A molécula de água

apresenta um pólo negativo em sua estrutura química. Desta forma, quando em contato com o

polímero pode sofrer agregação e contribuir para um aumento da carga negativa das

nanopartículas.

Figura 18 - Potencial zeta apresentado pelas nanocápsulas de dexametasona incorporadas no

creme gel após 150 dias de experimentos

4.5 ESTUDO DE ESTABILIDADE DAS BASES SEMI-SÓLIDAS, CONTENDO

DEXAMETASONA NA FORMA NANOENCAPSULADA E NA FORMA LIVRE

No presente estudo, as formulações foram realizadas em triplicata e submetidas a

testes de estabilidade acelerada, com umidade e temperatura controladas, 40° C (± 2°) e 75%

UR (± 5%) (BRASIL, 2005), onde os critérios a seguir foram avaliados.

4.5.1 Determinação das características organolépticas

As formulações, contendo dexametasona na forma nanoencapsulada e na forma livre

foram avaliadas por um período de 150 dias. Os parâmetros analisados encontram-se descritos

na tabela 6.

As determinações foram realizadas pela observação visual em relação à aparência e

cor, e verificação do odor.

Tabela 6 - Parâmetros referentes à aparência, cor e odor das formulações, contendo

dexametasona na forma livre (CGDEXA) e nanoencapsulada (CGNCDEXA), durante 150

dias de análise

Aparência Cor Odor

Dias CGNCDEXA

CGDEXA CGNCDEXA

CGDEXA

CGNCDEXA

CGDEXA

2 1 1 1 1 1 1

30 1 1 1 1 1 1

60 1 2 1 2 1 2

90 1 3 2 3 2 3

120 2 3 3 4 3 4

150 2 4 3 5 3 5

1. Condições normais, satisfatórias.

2. Ligeira mudança de algum aspecto relativo à aparência, cor e odor da amostra.

3. Incorporação de ar, início do desenvolvimento de coloração e/ou odor, principalmente em termos de

rancificação.

4. Início de separação de fases da amostra, notável coloração, produto com odor alterado.

5. Fases separadas, produto fortemente corado e/ou com odor desagradável.

Inicialmente o aspecto das formulações, contendo dexametasona, apresentaram-se de

forma distinta. A formulação de CGDEXA apresentou um aspecto caseoso, diferente da

formulação de CGNCDEXA onde foi observado um aspecto mais homogêneo (figura 19).

Figura 19 – Formulações semi-sólidas, contendo dexametasona na forma livre (A) e na forma

nanoencapsulada (B), após 48 horas de preparação

As amostras, contendo dexametasona na sua forma livre, apresentaram alterações em

relação à aparência, cor e odor (figura 20). Estas alterações foram observadas a partir do 60°

dia do início dos estudos de estabilidade. As formulações apresentaram uma diminuição da

consistência, acentuando-se no decorrer do experimento. Em relação à cor, foram observadas

alterações após 60 dias de análise, intensificando-se ao longo dos estudos de estabilidade. Foi

observado ainda, odor característico de rancificação a partir de 60 dias de análise,

intensificando-se no decorrer do ensaio.

Figura 20 - Comportamento do CGDEXA durante os 150 dias de análise, referente às

amostras mantidas em estufa sob temperatura de 40° C e 75% UR

Para as formulações de CGNCDEXA, as alterações só foram observadas a partir de 90

dias de análises (tabela 6), sendo menos intensas do que nas formulações com o fármaco na

forma livre.

Em relação à aparência foi observada uma diminuição gradativa da consistência a

partir de 120 dias de análise. As alterações na cor foram observadas a partir de 90 dias, onde

foi verificada a presença de uma tonalidade amarelada, diferente da original (branca), como

pode ser observado na figura 21. Da mesma forma, após 90 dias foi observada uma ligeira

mudança no odor e, após 120 dias, o início de odor rancificado.

Figura 21- Comportamento do CGNCDEXA durante os 150 dias de análise, referente as

amostras mantidas em estufa sob temperatura de 40° C e 75% UR

De acordo com os resultados descritos na tabela 6, figuras 20 e 21, observa-se que as

características organolépticas de ambas as formulações do creme gel (CGDEXA e

CGNCDEXA) sofreram alterações durante o período testado. A formulação, contendo o

fármaco na forma nanoencapsulada, manteve as características organolépticas por um período

de tempo maior que a formulação, contendo o fármaco na forma livre. Indicando desta forma,

que as nanocápsulas podem estar promovendo uma proteção maior do fármaco, frente às

alterações referentes à aparência, cor e odor.

30 dias

60 dias

90 dias

120 dias

150 dias

dias

60 dias

90 dias

120 dias

0 dias

A literatura vem referindo este tipo de comportamento protetor, atribuído aos sistemas

carreadores. Em um estudo realizado por Shah e colaboradores (2007), os autores avaliaram a

fotoestabilidade da tretinoína, incorporada em nanopartículas lipídicas sólidas, quando

comparadas com sua forma livre. Os resultados obtidos demonstraram que as nanopartículas

lipídicas sólidas, contendo tretinoína promoveram uma diminuição de sua fotodegradação

quando comparadas à forma livre. Portanto, o aumento da fotoestabilidade da tretinoína,

quando incorporada na forma de nanopartícula lipídica sólida, pode ser explicado por uma

possível proteção contra a luz exercida pela sua matriz lipídica onde o fármaco se encontrava

disperso.

4.5.2 Determinação do pH

A tabela 7 apresenta os resultados de pH referentes às formulações de creme gel,

contendo dexametasona na forma nanencapsulada e livre.

Tabela 7 – Valores de pH do creme gel, contendo dexametasona na forma livre (CGDEXA) e

nanoencapsulada (CGNCDEXA) durante 150 dias de análises (n=3)

Tempo

CGNCDEXA CGDEXA

Dias pH ± DP pH ± DP

2 7,7 ± 0,01 7,1 ± 0,01

30 6,8 ± 0,10 7,0 ± 0,02

60 6,8 ± 0,02 6,9 ± 0,03

90 6,4 ± 0,06 6,6 ± 0,02

120 6,3 ± 0,04 6,3 ± 0,04

150 6,1 ± 0,01 6,1 ± 0,03

Através dos valores apresentados na tabela 7 e figura 22, pode-se observar que no

presente estudo ocorreu diminuição nos valores de pH para ambas as formulações

(CGNCDEXA e CGDEXA). As amostras apresentaram diferença significativa (p≤0,05) entre

os resultados, quando comparadas aos valores no período inicial e final do experimento.

Apesar da diferença verificada, esses valores não representam experimentalmente, uma

alteração relevante e encontram-se dentro dos limites para formulações de uso tópico.

2 30 60 90 120 150

Tempo (dias)

Valores de pH

CGDEXA CGNCDEXA

Figura 22 - Valores de pH para as formulações de CGDEXA e CGNCDEXA durante

os 150 dias de experimento

Marchiori (2008) realizou a incorporação de nanocápsulas de dexametasona em um

hidrogel e obteve valores de pH em torno de 5,74 (± 0,19). O valor encontrado permaneceu

inalterado após um mês de armazenamento a 40 °C, mantendo-se dentro dos limites

estabelecidos para formulações de uso tópico.

Em estudos anteriores, realizados com nanopartículas poliméricas contendo

diclofenaco incorporado em diferentes veículos os autores perceberam uma diminuição dos

valores de pH (MILÃO, 2001). Dentre as possíveis causas estaria a degradação do polímero, o

qual não pode ser justificada no presente trabalho, pois também houve diminuição do pH, na

formulação de creme gel contendo fármaco livre.

A pele apresenta um pH levemente ácido, o qual atua como proteção bacteriana e

fungicida. Dessa forma, as formulações de uso tópico devem obedecer a uma faixa específica

com relação aos valores de pH os quais devem ficar no limite entre 3 e 10, pois, do contrário

podem provocar alterações no pH da pele, permitindo a exposição desta a agentes

sensibilizantes (LEONARDI, GASPAR e CAMPOS, 2002).

4.5.3 Determinação da viscosidade e espalhabilidade das formulações semi-sólidas, contendo

dexametasona na forma livre e nanoencapsulada

4.5.3.1 Viscosidade

A reologia é o estudo das propriedades de fluxo e deformação da matéria, sendo que,

na área farmacêutica, torna-se indispensável para a compreensão de diferentes fenômenos

como viscosidade, espalhabilidade, elasticidade e fluidez. A compreensão adequada dos

materiais farmacêuticos, permite o entendimento de diferentes processos tecnológicos

permitindo uma maior eficácia no desenvolvimento e desempenho das formas farmacêuticas

(MARTIN, 1993; LACHMAN, LIEBERMAN e KANING, 2001; NETZ e ORTEGA, 2002;

MARRIOTT, 2005; ALLEN Jr., POPOVICH e ANSEL, 2007).

O estudo das características reológicas dos materiais sólidos, líquidos e semi-sólidos

permite classificá-los em newtonianos e não-newtonianos, dependendo de suas propriedades

de fluxo. O fluxo newtoniano é caracterizado pela viscosidade constante, independente da

força de cisalhamento aplicada. O fluxo não newtoniano não apresenta relação linear entre a

tensão de cisalhamento aplicada e sua taxa de cisalhamento. Neste último, inclui-se o fluxo

plástico, pseudoplástico e dilatante. (NETZ e ORTEGA, 2002; MARRIOT, 2005; ALLEN Jr.,

POPOVICH e ANSEL, 2007).

Nos sistemas não newtonianos plásticos, é necessária a presença de uma força de

cedência prévia capaz de ultrapassar as forças internas e destruir a estrutura do material para

que ocorra a sua fluidez. O comportamento não-newtoniano pseudoplástico não apresenta

ponto de cedência, apresentando fluxo quando a força é aplicada. Materiais que exibem esse

comportamento não apresentam, portanto, um valor unívoco que possa ser considerado

característico (MARRIOT, 2005; ALLEN Jr., POPOVICH e ANSEL, 2007).

Através da análise das características reológicas das formulações de CGNCDEXA e

CGDEXA (figuras 23, 24), pode-se verificar que ambas as formulações apresentaram fluxo

não-newtoniano. As formulações, contendo o fármaco na forma nanoencapsulada

apresentaram comportamento pseudoplástico (n<1), seguindo o modelo de Ostwald. Para as

formulações contendo o fármaco na forma livre as formulações semi-sólidas apresentam

comportamento plástico (tabela 8).

Tabela 8 – Valores referentes ao índice de plasticidade (n) e coeficiente de consistência (K)

para as formulações de creme gel com o fármaco nanoestruturado e ponto de fluidez para as

formulações contendo o fármaco na forma livre (n=3)

Tempo CGNCDEXA CGDEXA

N K Ponto de fluidez

2 dias 0,295 67452,80 5,862

30 dias 0,154 125892,54 5,275

60 dias 0,183 87700,08 5,174

90 dias 0,124 72110,75 6,139

120 dias 0,114 69183,10 6,028

150 dias 0,123 31915,38 4,098

n= índice de plasticidade;

K= coeficiente de consistência.

Figura 23 – Reograma das amostras, contendo nanocápsulas de dexametasona, referentes aos

valores iniciais e após 150 dias de experimento

Figura 24 – Reograma das amostras, contendo dexametasona na forma livre referentes aos

valores inicias e após 150 dias de experimento

Alves e colaboradores (2007) realizaram estudos sobre o comportamento reológico de

formulações semi-sólidas (hidrogéis), contendo nanopartículas poliméricas (nanocápsulas,

nanoesferas) e nanoemulsões, contendo nimesulida. Esses sistemas semi-sólidos apresentaram

comportamento não newtoniano pseudoplástico, indicando que a adição de nanopartículas não

modificou as características reológicas da formulação do gel hidrofílico.

O mesmo foi observado por Siqueira (2008), em que, nanocápsulas de benzofenona-3

foram incorporadas a hidrogéis de natrosol. Nesse estudo, foi possível observar que a adição

das nanopartículas poliméricas ao hidrogel de natrosol não apresentou alteração no

comportamento reológico. Dessa forma, o comportamento pseudoplástico, originalmente

conferido ao natrosol, foi mantido. Este comportamento não newtoniano pseudoplástico ainda

foi observado por Paese (2008), que incorporou nanocápsulas de benzofenona-3 em hidrogéis

de carbopol 940

O comportamento pseudoplástico surge nas soluções de polímeros e na maioria dos

sistemas semi-sólidos que contenham esses componentes, em consequência da existência de

interações intermoleculares entre as cadeias de polímeros (LACHMAN, LIEBERMAN e

KANIG, 2001).

A tabela 9 apresenta os resultados referentes aos valores de viscosidade, para as

formulações semi-sólidas (creme-gel), contendo dexametasona na forma livre (CGDEXA) e

na forma nanoencapsulada (CGNCDEXA).

Tabela 9 - Valores de viscosidade, apresentados pelo creme gel, contendo a forma livre

(CGDEXA) e nanoencapsulada (CGNCDEXA) de dexametasona (n=3)

Tempo

(dias)

CGNCDEXA CGDEXA

Viscosidade* (mPa.s) ± DP

2 7416 ± 1009 12730 ± 99

30 9370 ± 509 9006 ± 905

60 7276 ± 236 6860 ± 2262

90 5356 ± 427 7540 ± 2064

120 4803 ± 586 6450 ± 2786

150 2315 ± 219 3170 ± 1004

De acordo com as leituras de viscosidade apresentados na tabela 9, observa-se uma

diminuição nos valores de viscosidade para ambas as formulações durante os 150 dias de

experimento. Para a amostra de CGNCDEXA, os valores de viscosidade apresentaram

diferença significativa (p≤0,05) em relação aos valores iniciais (7416 mPa.s ± 1009) após 150

dias de análise (2315 mPa.s ± 219). O mesmo pode ser observado para a amostra de

CGDEXA em que os valores iniciais obtidos foram de 12730 mPa.s (±99) e os finais de 3170

mPa.s (±1004).

Através dos resultados descritos na tabela 9 e figuras 25 e 26, pôde-se observar uma

diminuição acentuada da viscosidade para ambas as formulações (CGNCDEXA e CGDEXA),

principalmente no último mês de análise. Esse comportamento pode ser justificado pela perda

da estabilidade das formulações, o que vem corroborar os resultados apresentados com

relação às características organolépticas.

Figura 25 – Viscosidade versus taxa de cisalhamento referentes ao creme gel, contendo

dexametasona na forma de nanocápsulas (CGNCDEXA), relativo aos valores iniciais e após

150 dias de experimento à temperatura de 40° C e 75% UR

Figura 26 - Viscosidade versus taxa de cisalhamento referentes ao creme gel, contendo

dexametasona na forma livre (CGDEXA), relativo aos valores iniciais e após 150 dias de

experimento à temperatura de 40° C e 75% UR

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 5 10 15 20 25

Taxa de cisalhamento (s

-1

)

Viscosidade (mPa.s)

2 dias CGDEXA 150 dias CGDEXA

0 20

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 5 10 15 20 25

Taxa de cisalhamento (s

-1

)

Viscosidade (mPa.s)

2 dias CGNCDEXA 150 dias CGNCDEXA

0 20

Analisando-se a estabilidade entre as formulações, com relação à viscosidade,

observa-se que o creme gel contendo dexametasona na forma livre, apresentou uma

diminuição mais acentuada de seus valores (tabela 9 e figura 26) em relação à mesma

formulação, contendo dexametasona na forma nanoencapsulada. Embora, após 150 dias de

experimento, as formulações de creme gel, contendo dexametasona na forma livre e

nanoencapsulada, não apresentaram diferença significativa (p≥0,05) em relação à viscosidade

final (figura 27).

As duas formulações tiveram seus valores de viscosidade diminuídos ao longo do

experimento, não podendo-se atribuir este fenômeno ao sistema nanoestruturado e sim as

características do veículo.

Figura 27 – Comparação entre os valores de viscosidade das amostras, contendo

dexametasona na forma nanoencapsulada (CGNCDEXA) e livre (CGDEXA) referentes aos

valores iniciais e após 150 dias de experimento

Em função dos resultados encontrados sugere-se que a concentração do agente

espessante seja aumentada ou que outras opções de gelificantes (como natrosol ou carbopol

ultrez), ou substâncias com maior ponto de fusão sejam testadas.

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 5 10 15 20 25

Taxa de cisalhamento (s

-1

)

Viscosidade (mPa.s)

2 dias CGDEXA 150 dias CGDEXA

2 dias CGNCDEXA 150 dias CGNCDEXA

0 20

4.5.3.2 Espalhabilidade

O teste de espalhabilidade tem como objetivo constatar se as formulações estudadas

mantêm seus valores de espalhabilidade, sob as condições de armazenamento estabelecidas,

durante o período de tempo analisado.

No presente estudo, a espalhabilidade das amostras foi determinada e acompanhada

em relação à estabilidade, durante 150 dias de análises, e submetidos à temperatura de 40° C e

75% UR. Da mesma forma, foram comparadas a espalhabilidade do creme gel, contendo

nanocápsulas de dexametasona em relação à mesma formulação contendo o fármaco na forma

livre. Essa comparação foi realizada para verificar se a presença das nanocápsulas poderia

influenciar a espalhabilidade do creme gel.

A tabela 10 apresenta os valores de espalhabilidade para as formulações, contendo

dexametasona na forma nanoencapsulada (CGNCDEXA) e livre (CGDEXA).

Tabela 10 - Valores de espalhabilidade apresentado pelo creme gel, contendo a forma livre

(CGDEXA) e nanoencapsulada (CGNCDEXA) de dexametasona (n=3)

Tempo

(dias)

CGNCDEXA CGDEXA

Espalhabilidade (mm

) ± DP Espalhabilidade (mm

) ± DP

2 6184 ± 147 4364 ± 425

30 5951 ± 340 4457 ± 775

60 5407 ± 558 5535 ± 777

90 6148 ± 656 5527 ± 1052

120 6330 ± 849 6429 ± 1588

150 6408 ± 737 6467 ± 750

De acordo com os valores encontrados (tabela 10 e figura 30), observa-se que a

espalhabilidade do CGNCDEXA manteve os valores inalterados durante todo o período de

análise. Para o creme gel, na forma nanoencapsulada, os valores iniciais (6184 mm

± 147) de

espalhabilidade mantiveram-se estáveis em relação aos finais (6408 mm

± 737) não

apresentando diferença significativa entre os mesmos (p≥0,05).

Em relação ao CGDEXA, observou-se um aumento da espalhabilidade quando

comparados aos valores iniciais (4364 mm

± 425) e finais (6467 mm

± 750), apresentando

diferença estatisticamente significativa entre eles (p≤0,05). O comportamento das

formulações de CGDEXA e CGNCDEXA, pode ser observado nas figuras 28 e 29

respectivamente.

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

0 100 200 300 400

Peso das placas (g)

Ei (mm

)

2 dias CGDEXA 150 dias CGDEXA

Figura 28 – Espalhabilidade inicial e após 150 dias de análises para o CGDEXA

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

0 100 200 300 400

Peso das placas (g)

Ei (mm

)

2 dias CGNCDEXA 150 dias CGNCDEXA

Figura 29 – Espalhabilidade inicial e após 150 dias de análises para o CGNCDEXA

Quando as duas formulações (CGNCDEXA e CGDEXA) foram comparadas, pôde-se

observar uma diferença entre ambas as amostras. A formulação de CGNCDEXA apresenta

uma melhor estabilidade física em relação ao CGDEXA, o qual teve um aumento da

espalhabilidade no decorrer do experimento (tabela 10 e figura 30).

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

0 100 200 300 400

Peso das placas (g)

Ei (mm

)

2 dias CGDEXA 150 dias CGDEXA

2 dias CGNCDEXA 150 dias CGNCDEXA

Figura 30 – Espalhabilidade inicial e após 150 dias de análises para as formulações de

CGDEXA e CGNCDEXA

Marchiori (2008) realizou a avaliação da espalhabilidade de um gel de carbopol,

contendo dexametasona na forma livre e nanoencapsulada. Com este estudo, a autora

observou que a presença das nanopartículas nos géis não provocou alteração na

espalhabilidade do hidrogel quando comparada com a espalhabilidade do gel contendo

fármaco na forma livre.

Observa-se ainda, no presente estudo, uma correlação entre os valores de viscosidade e

espalhabilidade das formulações, contendo dexametasona na forma livre (CGDEXA). À

medida que os valores de viscosidade diminuem, ocorre um aumento dos valores de

espalhabilidade. No entanto, as formulações, contendo dexametasona na forma

nanoencapsulada não apresentaram esse comportamento, mantendo seus valores de

espalhabilidade independentemente da diminuição da viscosidade, não apresentando

linearidade entre esses dois parâmetros.

Ambas as formulações apresentaram comportamentos reológicos diferentes. Dessa

forma, pode-se indicar que a incorporação do sistema nanoestruturado à formulação semi-

sólida de creme gel contribuiu para a modificação do comportamento, através de possíveis

interações produzidas entre os componentes da base semi-sólida e as nanocápsulas, contendo

dexametasona.

4.5.4 Doseamento das formulações semi-sólidas, contendo dexametasona na forma livre e

nanoencapsulada

4.5.4.1 Construção da curva analítica

A tabela 11 apresenta as áreas referentes às diferentes concentrações de dexametasona,

determinada por cromatografia líquida de alta eficiência, em um comprimento de onda de

238,5 nm. As amostras foram analisadas seguindo metodologia modificada e previamente

validada por Beck e colaboradores (2003). Dessa forma, apenas os parâmetros de linearidade,

precisão, e especificidade foram validados.

Tabela 11 – Valores referentes à construção da curva analítica da dexametasona (n=3)

Concentração

(µ

µµ

µg/ml)

Áreas

Médias ±

±±

± DP

DPR

(%)

5 198,896

211,408

206,588

205,631 ± 6,31 3,07

10 394,512

399,634

407,072

400,406 ± 6,31 1,58

20 839,048

817,551

826,113

827,571 ± 10,82 1,31

30 1237,115

1230,504

1245,975

1237,865 ± 7,76 0,63

40 1648,980

1653,918

1659,569

1654,156 ± 5,30 0,32

y = 41,521x - 6,8255

= 0,9999

200

400

600

800

1000

1200

1400

1600

1800

0 5 10 15 20 25 30 35 40 45

Concentração (µg/ml)

Área

Figura 31 – Representação gráfica da curva analítica da dexametasona

Os valores foram tratados estatisticamente, através da análise de variância – ANOVA

e encontram-se descritos na tabela 12.

Tabela 12 – Análise de variância (ANOVA) correspondente às absorbâncias obtidas na

determinação da curva analítica de dexametasona

FONTE DE

VARIAÇÃO

SOMA DOS

QUADRADOS

QUADRADO

MÉDIO

F.C FT

Entre amostras 4 4241433,3139731 1060358,3284933

11155,10310*

4,53

Regressão linear 1 4241121,6058571 4241121,6058571

44617,1332* 5,99

Desvio de

linearidade 3 311,7081159 103,9027053 1,09307** 4,76

Resíduo 6 570,3353807 95,0558968

Total 14

4242003,649

*significativo para p≤0,05

**não significativo para p≥0,05

A curva analítica da dexametasona (figura 31) apresentou regressão linear significativa

(p≤0,05), não havendo desvio significativo da linearidade (p≥0,05). A equação da reta para o

método foi: y = 41,521x – 6,8255; onde x é a concentração em µg/ml e y a área, apresentando

um coeficiente de correlação de 0,9999.

Através dos resultados obtidos, é possível demonstrar que a curva pode ser utilizada

para a interpolação de valores experimentais, visando à determinação quantitativa de

dexametasona.

Os parâmetros de validação determinados apresentaram linearidade, exibindo um

coeficiente de correlação superior aos limites preconizados de 0,99. O método demonstrou

especificidade, uma vez que não houve interferência de nenhum excipiente da formulação na

quantificação da dexametasona no comprimento de onda de 238,5 nm (figuras 32 e 33).

O método demonstrou precisão adequada uma vez que apresentou um DPR de 2,60%

e 2,49% para repetibilidade e precisão intermediária respectivamente. Os limites de detecção

e quantificação encontrados foram de 0,179 µg/ml e 0,597 µg/ml respectivamente, indicando,

dessa forma, uma boa sensibilidade do método.

Figura 32 – Cromatograma do creme gel, contendo nanocápsulas de dexametasona

(CGNCDEXA)

Figura 33 – Cromatograma do creme gel, contendo nanocápsulas sem dexametasona

A tabela 13 apresenta os valores referentes ao doseamento da dexametasona nas

formulações de creme gel, para forma nanoencapsulada (CGNCDEXA) e para forma livre

(CGDEXA).

Tabela 13 – Valores referentes ao doseamento da dexametasona, incorporada nas formulações

semi-sólidas para forma nanoencapsulada e livre (n=3)

Dias

CGNCDEXA CGDEXA

Teor (µg/ml)

± DP

Teor (%)

± DP

Teor (µg/ml)

± DP

Teor (%)

± DP

2 18,93 ± 0,55 94,68 ± 2,74

20,03 ± 0,41

100,14 ± 2,04

30 18,80 ± 0,52 93,99 ± 2,64

18,09 ± 0,13

89,17 ± 0,68

60 18,64 ± 0,90 93,21 ± 4,52

abc

18,17 ± 0,58

88,60 ± 2,14

90 15,47 ± 0,30 77,35 ± 1,51

17,75 ± 0,98

88,74 ± 4,93

bcd

120 14,43 ± 0,09 72,15 ± 0,44

17,19 ± 0,06

85,97 ± 0,31

bcd

150 13,32 ± 0,55 66,00 ± 2,76

13,74 ± 0,85

68,68 ± 4,27

a-b-c-d-e: as médias com letras diferentes dentro da mesma coluna apresentaram diferença significativa entre si

(p≤0,05) de acordo com o teste Tukey

De acordo com o teor de dexametasona, encontrado na formulação de creme gel,

contendo dexametasona na forma nanoencapsulada (CGNCDEXA) e na forma livre

(CGDEXA), pode-se observar que há uma diminuição da concentração, em ambas as

formulações durante o período do experimento.

Em relação aos valores iniciais de teor (94,68%) para a formulação de CGNCDEXA,

pode-se observar que, a partir de 90 dias, o teor caiu abaixo de 90%, acentuando-se por todo o

período de análise.

Para a formulação de CGDEXA (100,14%), essa alteração foi visível após 30 dias de

análise, apresentando, nesse período, um teor de 89,17%.

Desta forma, a análise dos teores (%) das formulações de CGNCDEXA e CGDEXA,

permite indicar que as nanocápsulas podem estar exercendo uma ação protetora frente ao

fármaco, permitindo a manutenção de seus teores acima de 90% por um período superior em

relação à formulação contendo o fármaco livre (tabela 13 e figura 34).

Marchiori (2008) realizou estudos de estabilidade com a dexametasona na forma

nanoencapsulada e incorporada a um gel hidrofílico. As amostras foram armazenadas a uma

temperatura de 40 °C por um período de um mês. A autora concluiu, com esse estudo que o

teor de dexametasona, tanto na forma nanoencapsulada como na forma livre, foi mantido

durante o período testado. Indicando que os sistemas nanoestruturados foram capazes de

manter o teor de dexametasona quando incorporadas ao veículo hidrofílico, durante 30 dias.

A análise para determinação do teor de dexametasona, realizada em intervalos de 30

dias, não permitiu uma visualização precisa do início da diminuição da concentração do

fármaco. Dessa forma, a realização das leituras, em intervalos menores, é sugerida, para um

melhor acompanhamento do comportamento e interações entre o fármaco, o nanocarreador e

o veículo. Principalmente em função dos estudos realizados com nanocarreadores neste tipo

de veículo serem muito recentes.

100

120

2 30 60 90 120 150

Tempo (dias)

Concentração (%)

CGNCDEXA CGDEXA

Figura 34 – Comparação do teor de dexametasona nas formulações, contendo dexametasona

na forma livre e nanoencapsulada, durante o período de análise (150 dias), à temperatura de

40° C

Analisando-se as características organolépticas das formulações contendo a

dexametasona, tanto na forma nanoencapsulada como na forma livre e ainda o teor da

dexametasona nestas formulações, observa-se que as alterações em relação a estes parâmetros

devem ser otimizadas.

Sugere-se, portanto, a adição de agentes antioxidantes que poderiam contribuir para

uma melhor manutenção da estabilidade da formulação. O Tinogard

é um exemplo de

antioxidante que pode ser utilizado, pois apresenta vantagens em relação ao BHT, como a

manutenção da coloração das formulações.

4.6 ESTUDOS DE LIBERAÇÃO “IN VITRO”

Para a realização destes estudos foi realizada a avaliação da liberação “in vitro” e a

determinação do fluxo de liberação da dexametasona incorporada no CGNCDEXA E

CGDEXA, utilizando acetato de celulose (0,45 µm) como membrana.

4.6.1 Construção da curva analítica para os estudos de liberação da dexametasona

Os valores referentes às áreas obtidas por CLAE correspondentes à concentração de

dexametasona em cada diluição estão descritos na tabela 14.

Tabela 14 – Valores referentes à construção da curva analítica para o teste de liberação (n=3)

Concentração

(µ

µµ

µg/ml)

Áreas

Médias ±

±±

± DP

DPR (%)

1 48,226 53,229 47,338 49,598 (±6,40) 6,40

2 85,375 92,477 104,259 94,037 (±10,14) 10,14

3 125,996 136,888 137,181 133,355 (±4,78) 4,78

5 217,856 217,821 211,802 215,826 (±1,61) 1,61

10 438,895 436,046 444,908 439,950 (±1,03) 1,03

y = 43,282x + 4,7668

= 0,9995

100

200

300

400

500

0 2 4 6 8 10 12

Concentração (µg/ml)

Área

Figura 35 – Representação gráfica da curva analítica da dexametasona, utilizada para a

realização dos estudos de liberação

Os valores foram tratados estatisticamente, através da análise de variância – ANOVA

e encontram-se descritos na tabela 15.

Tabela 15 – Análise de variância (ANOVA) correspondente às absorbâncias obtidas na

determinação da curva analítica de dexametasona

FONTE DE

VARIAÇÃO gl

SOMA DOS

QUADRADOS

QUADRADO

MÉDIO F.C FT

Entre amostras 4 285638,3985317 71409,5996329 1228,96799* 4,53

Regressão linear 1 285501,8530217 285501,8530217 4913,5220* 5,99

Desvio de

linearidade 3 136,5455100 45,5151700 0,78332** 4,76

Resíduo 6 348,6320240 58,1053373

Total 14

285987,0306

*Significicativo para p≤0,05;

**Não significativo para p≥0,05

A curva analítica da dexametasona (figura 35) apresentou regressão linear significativa

(p≤0,05), não havendo desvio significativo da linearidade (p≥0,05). A equação da reta para o

método foi: y = 43,2821x + 4,7668; onde x é a concentração em µg/ml e y, a área,

apresentando um coeficiente de correlação de 0,9995.

Através dos resultados obtidos, é possível demonstrar que a curva pode ser utilizada

para a interpolação de valores experimentais, visando à determinação quantitativa de

dexametasona nas concentrações correspondente de 1 a 10 µg/ml.

Os estudos de liberação são de fundamental importância para determinação do

comportamento do fármaco em relação ao veículo e ao sistema no qual se encontra

incorporado, permitindo verificar, inclusive, a existência de interação entre o ativo e os

componentes da formulação.

O desenvolvimento de formulações, que permitam a liberação controlada de fármacos

em sítios específicos, visando à diminuição de efeitos tóxicos e/ou aumento do índice

terapêutico, tem recebido grande atenção nos últimos anos (FARREL e HEAKETH, 2003;

KAWASHIMA, 2001).

O princípio básico do sistema de liberação é a presença de compostos biodegradáveis

que, através da ação de fatores físicos e químicos (pH, temperatura, ação enzimática, etc.),

presentes em sistemas biológicos como a pele, permitem que frações pré-determinadas do

composto farmacológico ativo, sejam liberadas lentamente no organismo (CABRAL, 2004).

A liberação controlada de fármacos apresenta diversas vantagens em relação aos

sistemas convencionais, dentre eles, a liberação progressiva e sustentada do ativo, redução do

número de aplicações e consequentemente diminuição de reações adversas e efeitos

colaterais, aumentando a segurança de ação do mesmo. A liberação sustentada é importante

para substâncias ativas, potencialmente irritantes, em concentrações elevadas ou que devam

suprir a pele por um período de tempo prolongado (JENNING, SCHÄFER e GOHLA, 2000).

O método de liberação “in vitro”, utilizando membranas artificiais como, por exemplo,

acetato de celulose, e silicone contendo miristato de isopropila, permitem a simulação dos

lipídeos intercelulares do estrato córneo (BARRY in AULTON, 2005).

Os ensaios de liberação “in vitro”, utilizando células de Franz são bastante utilizados

devido ao seu baixo custo, boa reprodutibilidade de resultados, realização do experimento em

pequeno espaço de tempo, quando comparados com outras técnicas, além de ser um método

simples e facilmente controlado em condições experimentais (LEVEQUE et al., 2003;

LEONARDI, MARTINS e KUREBAYASHI, 2004; BARRY, 2005; DE ANTONIO, 2007).

Levando-se em consideração a importância de uma liberação controlada de fármacos,

este estudo teve como um dos objetivos avaliar a liberação da dexametasona incorporada no

creme gel contendo o ativo na forma nanoencapsulada e na forma livre.

Estes estudos tiveram o intuito de verificar se os sistemas nanoestruturados,

apresentam comportamento de liberação diferente, com relação ao fármaco livre. Para tanto,

os estudos de liberação foram realizados, utilizando-se células de difusão do tipo Franz,

dividida em dois compartimentos e sendo utilizado como membrana acetato de celulose

(0,45µm). A solução receptora foi constituída de tampão fosfato 7,4. As coletas foram

realizadas em intervalos de 1 hora, por um período de 8 horas. As amostras coletadas foram

analisadas em cromatografia líquida de alta eficiência. Uma parte dessas amostras coletadas

foram tratadas com acetonitrila (ACN), solvente utilizado para permitir o rompimento da

parede polimérica das nanocápsulas e, dessa forma, realizar a quantificação da dexametasona,

que, por ventura, venha a atravessar a membrana sem destruição da nanocápsula.

A tabela 16 apresenta os valores de fluxo (µg/cm

/h), concentração total (µg/cm

)

permeada, coeficiente de regressão e coeficiente de permeabilidade para formulações de

creme gel, contendo dexametasona na forma nanoencapsulada (CGNCDEXA) e na forma

livre (CGDEXA).

Tabela 16 – Valores de fluxo, concentração total, coeficiente de regressão e coeficiente de

permeabilidade das formulações de creme gel contendo nanocápsulas de dexametasona

(CGNCDEXA), creme gel contendo nanocápsulas de dexametasona com adição de

acetonitrila (CGNCDEXA C/ACN) e creme gel contendo dexametasona na forma livre

(CGDEXA) (n=6)

Formulação

Fluxo

(µg/cm

/h)

Concentração

total (µg/cm

)

Coeficiente

de regressão

)

Coeficiente de

permeabilidade

(Kp)

CGNCDEXA

2,205 ± 0,63

21,338 ± 4,13

0,957 0,101

CGNCDEXA

C/ACN

2,902 ± 0,57

27,265 ± 4,33

0,962 0,106

CGDEXA 3,354 ± 0,23

31,863 ± 2,02

0,968 0,105

*concentração total permeada no período máximo de 8 horas.

a-b: as médias com as letras diferentes dentro da mesma coluna apresentam diferença significativa entre si

(p≤0,05) de acordo com o teste de Tukey.

Através da análise estatística dos dados de fluxo e concentração total (tabela 16, figura

36), verificou-se diferença significativa (p≤0,05) entre os valores das formulações de

CGDEXA, CGNCDEXA e CGNCDEXA tratada com acetonitrila.

Pode-se observar que o fluxo de liberação da dexametasona foi de 2,205 µg/cm

/h para

o fármaco na forma nanoencapsulada, de 2,902 µg/cm

/h para o fármaco na forma

nanoencapsulada, tratada com acetonitrila e de 3,354 µg/cm

/h para o fármaco na forma livre.

Analisando-se estatisticamente esses resultados, observa-se que há diferença significativa

(p≤0,05) quando se compara o fluxo de liberação do CGDEXA com o CGNCDEXA. Ao

comparar o CGDEXA com o CGNCDEXA tratada com acetonitrila, não foi observada

diferença significativa (p≤0,05) entre os valores de fluxo. Para as formulações de

CGNCDEXA tratadas com e sem acetonitrila (ACN), não foi observado diferença

significativa entre os valores (p

≥0,05).

0 1 2 3 4 5 6 7 8

Tempo (horas)

Concentração liberada (µg/cm

)

CGNCDEXA CGNCDEXA C/ACN CGDEXA

Figura 36 - Liberação da dexametasona do creme gel na forma livre (CGDEXA),

nanoencapsulada (CGNCDEXA) e com adição de acetonitrila à solução receptora

(CGNCDEXA C/ACN)

Observa-se através destes valores que a dexametasona na forma livre apresentou um

fluxo de liberação em torno de 34% superior ao apresentado pela dexametasona na forma

nanoencapsulada (figura 37).

0 1 2 3 4 5 6 7 8

Tempo (horas)

Concentração liberada (µg/cm

)

CGNCDEXA CGDEXA

Figura 37 – Liberação da dexametasona do creme gel na forma nanoencapsulada

(CGNCDEXA) e na forma livre (CGDEXA)

Quando a comparação é feita entre a dexametasona livre e a nanoencapsulada, porém

esta última tratada com acetonitrila, o fluxo fica em torno de 13% superior para a preparação

com o fármaco livre (figura 38). Isso demonstra que a presença do solvente (ACN) aumentou

a liberação do fármaco, visto que sua ação provoca o rompimento da parede polimérica das

nanocápsulas, permitindo uma maior liberação do ativo que estava encapsulado.

0 1 2 3 4 5 6 7 8

Tempo (horas)

Concentração liberada (µg/cm

)

CGNCDEXA C/ACN CGDEXA

Figura 38 – Liberação da dexametasona do creme gel na forma livre (CGDEXA) e na forma

nanoencapsulada tratada com acetonitrila (CGNCDEXA C/ACN)

Analisando-se estatisticamente os valores de fluxo entre as formulações de

CGNCDEXA com CGNCDEXA C/ ACN (figura 39), não foi observado diferença

significativa entre ambas (p≥0,05), porém, a presença do solvente (ACN), permitiu um

aumento da liberação do fármaco em torno de 24%.

Observa-se ainda que a concentração total de dexametasona liberada foi de 21,338

µg/cm

para o fármaco na forma nanoencapsulada, de 27,265 µg/cm

para o fármaco na

forma nanoencapsulada, tratada com acetonitrila e de 31,863 µg/cm

para o fármaco na forma

livre.

0 1 2 3 4 5 6 7 8

Tempo (horas)

Concentração liberada (µg/cm

)

CGNCDEXA CGNCDEXA C/ACN

Figura 39 – Liberação da dexametasona na forma nanoencapsulada e com adição de

acetonitrila

A semelhança do perfil de liberação da dexametasona, entre sua forma

nanoencapsulda e livre, observada na primeira hora do experimento pode ser decorrente da

liberação do fármaco da superfície das nanocápsulas.

Neste sentido, Ferranti e colaboradores (1999) realizaram estudos de liberação “in

vitro” a partir de nanocápsulas de primidona, avaliando seu perfil de liberação em meio

gástrico e intestinal, simulando pH 1,25 e 7,4 respectivamente. Nesse experimento foram

comparados os perfis de liberação do fármaco na forma livre e nanoencapsulada. Os autores

verificaram, que após 8 horas de experimento, 100% da primidona na forma livre foi liberada,

enquanto que o mesmo fármaco na forma nanoencapsulada liberou 76% (pH 7,4) e 83% (pH

1,25).

Jenning e colaboradores (2000) avaliaram o perfil de liberação da vitamina A,

associada à nanopartículas lipídicas sólidas (SLN). Estes pesquisadores utilizaram célula de

difusão de Franz para avaliar o perfil de liberação da vitamina A incorporada à nanopartículas

lipídicas sólidas e à formulações semi-sólidas como géis e cremes por um período de 24

horas. A dispersão de nanopartículas lipídicas sólidas, contendo vitamina, A apresentou um

perfil de liberação controlado nas primeiras 6 horas de estudo, e após esse período (12-24hs)

sofreu um aumento em sua taxa de liberação. No entanto, quando as SLN contendo vitamina

A foram incorporadas em formulações como cremes e géis, foi observada uma liberação

controlada entre 12 e 18 horas aproximadamente. Dessa forma, foi possível observar que a

liberação controlada da vitamina A, associada à SLN, foi mantida após sua incorporação em

formulações semi-sólidas (géis e cremes), além de contribuir para uma liberação sustentada

do fármaco.

No presente estudo, observa-se que a concentração total de dexametasona liberada ao

final das 8 horas de análise foi maior na formulação, contendo o fármaco na forma livre,

apresentando uma liberação de 15,17% da quantidade total de dexametasona a ser liberada. A

formulação, contendo dexametasona nanoencapsulada apresentou uma liberação de 10,16%

da quantidade total do fármaco, e, quando a mesma foi tratada com acetonitrila, esta liberação

foi de 12,98%. Este fato pode ser explicado pela possível interação do fármaco com o

polímero, quando o mesmo encontra-se na forma nanoencapsulada.

Através dos valores de liberação da dexametasona pode-se observar que a mesma está

sendo liberada do veículo, tanto na forma livre como na forma nanoencapsulada, entretanto,

na formulação contendo nanocápsulas de dexametasona, parte da dexametasona encontra-se

nanoencapsulada.

Houve diferença significativa em relação à concentração total de dexametasona

liberada entre as formulações de CGDEXA e CGNCDEXA. Entretanto, quando adicionada

ACN à solução receptora do ensaio com a formulação de CGNCDEXA, observa-se um

aumento da concentração de dexametasona liberada até um valor semelhante à observada na

formulação contendo o fármaco na forma livre.

Portanto, pode-se sugerir que as nanocápsulas de dexametasona são liberadas em um

fluxo e concentração semelhante à forma livre, porém, a liberação da dexametasona de dentro

das nanopartículas para o meio ocorre de maneira mais lenta, sugerindo uma liberação mais

gradual.

Este comportamento vem ao encontro de um estudo “in vivo” realizado por Brum

(2008), onde as formulações testadas no presente trabalho foram utilizadas para avaliação da

atividade da NTPDase de linfócitos na dermatite de contato induzida por níquel. Para esse

estudo foram utilizados ratos wistar, os quais, após a indução da dermatite de contato, foram

tratados com as formulações de CGDEXA e CGNCDEXA. A avaliação histopatológica das

lesões induzidas nas orelhas das ratas foram avaliadas e demonstraram que no grupo tratado

com dexametasona livre ocorreram áreas de atrofia com diminuição do estrato Malpighiano e

áreas de preservação dos anexos da epiderme. No entanto, no grupo tratado com

dexametasona nanoencapsulada foram observadas áreas de atrofia mais acentuadas,

apresentando, apenas duas camadas de estrato Malpighiniano e uma diminuição do número de

folículos pilosos e de vasos sanguíneos. Os resultados indicaram um possível efeito

reservatório das nanocápsulas de dexametasona na pele dos ratos, permitindo uma maior ação

do fármaco e consequentemente uma maior atrofia em relação à formulação contendo o

fármaco na forma livre, sendo necessário a realização de novos testes com espaçamentos

maiores entre as doses aplicadas.

5 CONCLUSÕES

• A incorporação de uma suspensão, contendo nanocápsulas de dexametasona em uma

formulação semi-sólida de creme gel, apresentou características físico-químicas

adequadas, representando viabilidade farmacotécnica.

• As suspensões, contendo nanocápsulas de dexametasona, apresentaram diâmetro

médio de partícula inferior a 300 nm, índice de polidispersão menores que 0,2,

potencial zeta de -11 mV e valores de pH em torno de 4,8 (±0,1).

• O potencial zeta das nanopartículas de dexametasona apresentou um aumento após sua

incorporação no creme gel e após 150 dias de experimento.

• A formulação do creme gel, contendo nanocápsulas de dexametasona (CGNCDEXA)

mantiveram suas características organolépticas por um período superior as do creme

gel com o fármaco na forma livre (CGDEXA). As nanocápsulas podem estar

exercendo uma influência, com relação à interação do fármaco com o veículo,

protegendo o ativo por um período maior de tempo.

• Ambas as formulações estudadas apresentaram resultados de pH satisfatórios (entre 6

e 7) durante todo o período de análise (150 dias), sendo que os valores permaneceram

dentro dos níveis indicados para formulações de uso tópico.

• Tanto as formulações semi-sólidas, contendo nanocápsulas de dexametasona como o

fármaco na forma livre, apresentaram um fluxo não-newtoniano. As formulações,

contendo o fármaco na forma livre (CGDEXA) apresentaram comportamento plástico.

O comportamento das formulações semi-sólidas foi influenciado pela inclusão dos

nanocareadores, em virtude de que a formulação contendo dexametasona na forma

nanoestruturada (CGNCDEXA), apresentou comportamento pseudoplástico (n<1). Os

valores de viscosidade apresentaram diminuição no decorrer do experimento, para

ambas as formulações.

• A formulação, contendo o fármaco na forma livre (CGDEXA), apresentou um

aumento significativo (p≤0,05) para os valores de espalhabilidade, no decorrer do

experimento. A formulação, contendo o fármaco na forma nanoencapsulada

(CGNCDEXA), manteve a mesma espalhabilidade durante todo o período de análise.

• Ambas as formulações semi-sólidas (CGNCDEXA e CGDEXA) apresentaram

diminuição na concentração de dexametasona no decorrer do experimento. A

formulação, contendo o fármaco na forma nanoencapsulada (CGNCDEXA)

apresentou um teor abaixo de 90% após 90 dias de análise, com subsequente queda

após esse período. A formulação, contendo a dexametasona livre (CGDEXA),

apresentou um teor abaixo de 90% logo após 30 dias de experimento. Devido ao fato

de que as formulações, contendo o fármaco na forma nanoencapsulada

(CGNCDEXA), mantiveram seus teores acima de 90% por um período maior do que o

observado para forma livre, pode-se concluir que as nanocápsulas estariam exercendo

um efeito estabilizante.

• A incorporação do fármaco na forma nanoencapsulada modificou os parâmetros de

liberação com relação ao fluxo e à concentração total de dexametasona liberada. As

formulações de CGDEXA apresentaram concentração total e fluxo de liberação maior

que a formulação, contendo o fármaco na forma nanoencapsulada (CGNCDEXA),

sugerindo uma liberação controlada do ativo.

• As formulações, contendo dexametasona na forma nanoencapsulada (CGNCDEXA)

tratadas com acetonitrila, apresentaram um aumento de aproximadamente 24% no

fluxo da dexametasona liberada em relação a mesma forma sem a adição do solvente.

Esses resultados sugerem que as nanopartículas estejam sendo liberadas do veículo

tanto na forma livre como na forma nanoencapsulada.

• Apesar da viabilidade tecnológica da formulação, alguns estudos referentes ao sistema

espessante e anti-oxidante tornam-se necessários.

6 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

ALLEN Jr., L. V. Compounding for patients whit psoriasis. Secundum artem. Paddock

laboratories inc, v.9(4), 2001.

ALLEN Jr., L. V.; POPOVICH, N. G.; ANSEL, H. C.; Formas farmacêuticas e sistemas de

liberação de fármacos. 8° Ed. Artmed: Porto Alegre, 2007.

ALTCHEK, D.; SODRÉ, C. T.; AZULAY, D. R., in AZULAY, R. D. & AZULAY D. R.

Dermatologia. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, ed.4, 2006.

ALVES, M. Formas farmacêuticas plásticas contendo nanocápsulas, nanoesferas e

nanoemulsões de nimesulida: desenvolvimento, caracterização e avaliação da atividade

antiinflamatória. Tese de doutorado. Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Porto

Alegre: 2006.

ALVES, M. P. Desenvolvimento e avaliação da estabilidade de bases dermatológicas.

Influência de promotores de absorção na permeação transdérmica de piroxicam.

Dissertação de Mestrado. Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia

Farmacêuticas: Universidade Federal de Santa Maria- UFSM. 1996.

ALVES, M. P.; SCARROE, A.L.; SANTOS, M.; POHLMANN, A.R.; GUTERRES, S.S.

Human skin penetration and distribution of nimesulide fron hydrophilic gels containing

nanocarriers. International Journal of Pharmaceutics, v. 341, p. 215-220, 2007.

ARRUDA, L. F.; CAMPBELL, G. A. M.; TAKAHASHI, M. D. F. Psoríase. Anais

Brasileiros de Dermatologia, Rio de Janeiro, n.76( 2), p.141-167, 2001.

ARRUDA, L. H. F.; MORAES, A. P. F. The impact of psoriais on quality of life. British

Journal of Dermatology, v.144, n.58, p.33-36, 2001.

ASBILL, C. S. and MICHNIAK, B. B. Percutaneous penetration enhancers: local versus

transdermal activity. Pharmaceutical Science & Technology Today, v.3(1), p.36-41, 2000.

AZULAY, R. D.; AZULAY, D. R. Dermatologia. Guanabara Koogan, ed.4, Rio de Janeiro,

2006.

AZULAY, R. D.; AZULAY, D. R. Dermatologia. Guanabara Koogan, Rio de Janeiro, 1997.

BARRAT, G. M. Therapeutic applications of colloidal drug carriers. PSTT, v.3, n.5, p. 163-

171, 2000.

BARRY, B. in AULTON, M. E. Delineamento de formas farmacêuticas. Artmed, ed.2ª,

Porto Alegre, 2005.

BARRY, B. W. Breaching the skins barrier to drugs. Nature Biotechnology, v.22, p.165-167,

2004.

BATISTUZZO, J. A. O.; MASAYUKI, I.; YUKIKO, E. Formulário Médico-Farmacêutico.

São Paulo: Tecnopress. 2000.

BECK, R. C. R.; GUTERRES, S. S.; FREDDO, R. J.; MICHALOWSKI, C. B.;

BARCELLOS, I.; FUNCK, J. A. Nanoparticles containing dexamethasone: Physicochemical

properties and anti-inflammatory activity. Acta Farmaceutica Bonaerense, v. 22, p. 11-15,

2003.

BONINA, F. P.; PUGLIA, C.; BARBUZZI, T.; CAPRARIIS, P.; PALAGIANO, F., RIMOLI,

M. G. and SAIJA, A. In vitro and in vivo evaluation of polyoxyethylene esters as dermal

prodrugs of ketoprofen, naproxen and diclofenac. European Journal of Pharmaceutics

Sciences v.14(2), p.123-134, 2001.

BRASIL. Ministério da Saúde. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Guia de

Estabilidade de Produtos Cosméticos/ Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Brasília,

DF, 2004.

BRASIL. Ministério da Saúde. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Guia para a

realização de estudo de estabilidade. Brasília, DF, 2005.

BRITISH Pharmacopoeia. London: Her Majesty Stationery Office, London, 2005. 1 CD-

ROM.

BRUM, L. M.;

Atividade da NTPDase de linfócitos na dermatite de contato antes e após o

tratamento com Dexametasona Nanoestruturada. Dissertação de Mestrado. Centro

Univeersitário Franciscano – UNIFRA. Santa Maria: 2008.

CABRAL, P. Q. A. Sistema de liberação controlada de drogas: uma revisão. Monografia

(Trabalho final de curso) – Curso de Medicina Veterinária. Universidade Federal de Campina

Grande, Patos, Paraíba, 2004.

CAMMENGA, H. K.; EPPLE, M. Basic principle of thermoanalytical techniques and their

applications in preparative chemistry. Angewandte Chemie International Edition in

English, v.34, n.11, p.1171-1187, 1995.

CARNEIRO, S. C. da S.; MEDEIROS, R.; MAGALHÃES, G. M.; ALVES, C.; CUZZI, T.;

SOTTO, M. N. Ação da pentoxifilina nos dendrócitos dérmicos FXIIIa de placas de psoríase.

Anais Brasileiros de Dermatologia, 80(Supl 3):S314-22, 2005.

CASCONE, E. G.; POT, P. M.; LAZZERI, L.; ZHU, Z. Realease of dexamethasone from

PLGA nanoparticles entrapped into dextran/poly(vinyl alcohol) hydrogels. Journal of

materials science: materials in medicine, v.13, p.265-269, 2002.

CASIMIRO, M. H.; LEAL. J. P.; GIL, M.H.; DE CASTRO, C. A. N. Análise Calorimétrica

aplicada a Polímeros Biológicos. Parte I: Fundamentos Teóricos. Sociedade Química de

Portugal. 2000.

CHRISTOPHERS, E.; MROWIETZ, U.; Psoriasis. In: FREEDBERG, I. M et al. Fitzpatricks

Dermatology in General Medicine. McGraw-Hill. International Edition. v.1, p.495-521,

1999.

CORDORO, K. M. Topical therapy for the management of childhood psoriasis: part I. Skin

Therapy Letter, v.13(3), 2008.

COUVREUR, P.; DUBERNET, C.; PUISIEUX, F. Controlled drug delivery with

nanoparticles: current possibilities and future trends. European Journal of Pharmaceutics

and Biopharmaceutics. v.41(1), p.2-13, 1995.

CRONIN, M. T. D.; DEARDEN, J. C.; MOSS, G. P.; MURRAY-DICKSON, G.

Investigation of the mechanism of flux across human skin in vitro by quantitative structure-

permeability relationships. European Journal of Pharmaceutics Sciences, v.7, p.325-330,

1999.

DA SILVA, E. C.; DE PAULA, M. V. R. V.; MATOS, J. R. Análise térmica aplicada à

cosmetologia. Revista Brasileira de Ciências Farmacêuticas. v.43, n.3, jul/set. 2007.

DE ANTONIO, M. E. C. O.; Permeação cutânea “in vitro”, como ferramenta auxiliar

para o estudo de formulações semi-sólidas de cetoconazol para aplicações tópicas.

Dissertação de mestrado. Programa de Pós Graduação em Ciências Farmacêuticas.

Departamento de Farmácia da Universidade Federal do Paraná – UFPR. 2007.

DE PAULA I. C.; ORTEGA G. G.; BASSANI V. L.; PETROVICK P. R. Development of

Ointment Formulations Prepared with Achyrocline satureioides Spray-Dried Extracts. Drug

Development and Industrial Pharmacy, v. 24, n.3, p. 235 – 241. 1998.

DE SOUZA, V. M. Ativos dermatológicos: guia de ativos dermatológicos utilizados na

farmácia de manipulação, para médicos e farmacêuticos. 2° ed, São Paulo: Tecnopress,

2004.

DOMINGUES, G. S.; GUTERRES, S. S.; BECK, R. C. R.; POHLMANN, A. R.;

Micropartículas nanorrevestidas contendo um fármaco modelo hidrofóbico: preparação em

etapa única e caracterização biofarmacêutica. Química Nova, v. 31, n.8, p. 1966-1972, 2008.

DOS SANTOS, W. H.; SILVA, L. C.; PALUDETTI, L. A.; BAFFA. F.C. A psoríase e seus

tratamentos. International Journal of Pharmaceutical Compounding. (Edição Brasileira).

v. 7, n° 7, janeiro/fevereiro, 2005.

EINMAHL, S.; ZIGNANI, M.; VARESIO, E.; HELLER, J.; VEUTHEY, J. L.; Tabatabay,

C.; Gurny, R. Concomitant and controlled release of dexamethasone and 5-fluorouracil from

poly (ortho ester). International Journal of Pharmaceutics, v. 185, p. 189-198, 1999.

FARBER, E. M.; NALL, L. Epidemiology: natural history and genetics. In: Roenigk Jr HH,

Maibach HI, editors. Psoriasis. New York: Dekker; P. 107-57. 1998

FARREL, S. HEAKETH,H .P. An introduction to drug delivery for Chemical Engineers

Disponível em: http:/engineering eng owan.edu/hesketh/hesketh/cee%20drug%20delivery pdf

ompanies envolved in polymeric drug de livery. Htm, Acesso em julho 2003.

FERNANDEZ, C.; MARTI-MESTRES, G.; RAMOS, J.; MAILLOLS, H. L. C. Analysis of

benzophenone-3: II application to determination of ‘in vitro’ and ‘in vivo’ skin penetration

from solvents, coarse and submicron emulsions. Journal of Pharmaceutical and Biomedical

Analysis, v. 24, p. 155-165, 2000.

FERNANDEZ-MONTES, E. A. Técnicas y procedimiéntos em formulación magistral

dermatológica. Madrid: Ed. E. Aliá, p. 85-87. 2005.

FERRANTI, V.; MARCHAIS, H.; CHABENAT, C.; ORECCHIONI, LAFONT, O.

Primidone-loaded poly-ε-caprolactone nanocapsules: incorporation efficiency and in vitro

release profiles. International Journal of pharmaceutics, v.193(1), p. 107-111, 1999.

FERREIRA, A. O. ; BRANDÃO, M. F.; SILVA, M. A. D. C. G. Guia prático de farmácia

magistral. Juiz de Fora, MG: Ed. Ortofarma, p. 356. 2002.

FESSI, H.; PUISIEUX, F.; DEVISSAGUET, J-Ph.; AMMOURY, N.; BENITA, S.

Nanocapsule formation by interfacial polymer deposition following sovent displacement.

International Journal of Pharmaceutics, v. 55, p. 1-4, 1989.

FIALHO, S. L.; CUNHA Jr. A. S.; Sistemas de transporte de drogas para o seguimento

posterior do olho: bases fundamentais e aplicações. Arquivos Brasileiros de Oftalmologia,

v.70, p.173-179, 2007.

FITZPATRICK, T.; JOHNSON, R.; WOFF, K.; POLANO, M.; SUURMOND, D.

Dermatology. New York: Mc Graw-Hill, 1997.

FOLDVARI, M. Non-invasive administration of drugs through the skin: challenges in

delivery system design. Pharmaceutical Science & Technology Today, v.3, n.12, p.417-

425, 2000.

FOX, L. P.; MERK, H. F.; BICKERS, D. in GOODMAN e GILMAN; As bases

farmacológicas de terapêutica. 11ª ed. São Paulo, McGraw Hill, 2006.

FRANZ T. J. Percutaneous absorption. On the relevance of in vitro data. The Journal of

Investigative Dermatology, v. 64, n.3, p.190-195, 1975.

FRIEDRICH, B. R.; FONTANA, C. M.; BECK, R. C. R.; POHLMANN, R. A.; GUTERRES,

S. S.; Development and physicochemical characterization of dexamethasone-loaded

polymeric nanocapsule suspensions. Química Nova, 2008.

FUCHS, F. D.; WANNMACHER, L.; FERREIRA, M. B. C.; Farmacologia clínica:

fundamentos da terapêutica racional. Ed. 3, Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2006.

GIUNCHEDI, P.; CONTE, U.; CHETONI, P. e SAETTONE, M. F. Pectin microspheres as

ophthalmic carrier for piroxicam: evaluation in vitro and in vivo in albino rabbits. European

Journal of Pharmaceutics Sciences, v. 9, p.1-7, 1999.

GOODMAN e GILMAN; As bases farmacológicas de terapêutica. 11ª ed. São Paulo,

McGraw Hill, 2006.

GUTERRES, S. S.; BENVENUTTI, E. V.; POHLMANN, A. R. in DURÁN, N.; MATTOSO,

L. H.; MORAIS, P. C.; Nanotecnologia: introdução, preparação, e caracterização de

nanomateriais e exemplos de aplicação. São Paulo, Ed. Artiliber, 2006.

GUTERRES, S. S.; FESSI, H.; BARRAT. G.; PUISIEUX, F. and DEVISSAGUET, J-Ph.

Poly(DL-lactide) nanocapsules containing diclofenac: I. Formulation and stability study.

International Journal of Pharmaceutics, v.113, p.57-63, 1995.

GUTERRES, S. S.; FESSI, H.; BARRATT, G.; DEVISSAGUET, F. P. AND JEAN-

PHILIPPE. Poly(D,L-Lactide) Nanocapsules Containing Non-Steroidal Anti-Inflammatory

Drugs: Gastrointestinal Tolerance Following Intravenous and Oral Administration.

Pharmaceutical research. v.12, Number 10 / October, 1995.

HABIF, T. P. Dermatologia Clínica: guia colorido para diagnóstico e tratamento. ed.4,

Porto Alegre: Artmed, 2005.

HADGRAFT, J. Passive enhancement strategies in topical and transdermal drug delivery.

International Journal of Pharmaceutics, v.184, p.1-6, 1999.

HEGEDUS, F. Non-surgical treatment modalities of facial photodamage: pratical Knowledge

for the oral and maxillofacial Professional. Int. J. Oral Maxillofac. Surg. v. 35 p. 389-398.

2006.

HERNANDEZ & MERCIER-FRESNEL. Manual de Cosmetologia. 3. ed. Rio de Janeiro:

Revinter, p.353, 1999.

HUANG, X.; TANOJO, H.; LENN, J.; DENG, C. H.; KROCHMAL, L.; A novel foam

vehicle for delivery of topical corticosteroids. J Am Acad Dermatol, v.53(1), 2005.

JALÓN, E. G.; BLANCO-PRÍETO, M. J.; YGARTUA, P. e SANTOYO, S. PLGA

microparticles: possible vehicles for topical drug delivery. International Journal of

Pharmaceutics, v.226, p.181-184, 2001.

JENNING, V.; SCHÄFER, K. M. e GOHLA, S.Vitamin A-loaded solid lipid nanoparticles

for topical use: drug release properties. Journal of Controlled Release, v. 66, p.115-126,

2000.

JOSSE, G.; ROUVRAIS, C.; MAS, A.; HAFTEK, M.; DELALLEAU, A.; FERRAQ, Y.;

OSSANT, F; GEORGE, J.; LAGARDE, J. M.; SCHMITT, A. M. A multitechnique

evaluation of topical corticosteroid treatment. Skin Research and Technology, v.15, p. 35-

39, 2009.

JUNQUEIRA, L. C. & CARNEIRO, J. Histologia Básica, 9 ed. São Paulo: Guanabara

Koogan, 1999.

KALIA, N. Y.; GUY, R. H. Modeling transdermal drug release. Advanced Drug Delivery

Reviews, v.48, n.2-3, p.159-172, 2001.

KAN, P.; CHEN, Z; KUNG, R; LEE, C. e Chu, I. Study on the formulation of o/w emulsion

as carriers for lipophilic drugs. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, v.15(2), p.117-125,

1999.

KATTAN, E.; ASBILL, C. S.; HAIDAR, S. Transdermal testing: practical aspects and

methods. Pharm. Sci. Technol. Today, v.3(12), p.426-430, 2000.

KAWASHIMA, Y. Preface nanoparticulate systems for improved drug delivery. Adv. Drug

Delivery Rev. v. 1. p. 1-2, 2001.

KIM, S. Y. e LEE, M. Y. Taxol-loaded block copolymer nanospheres composed of methoxy

poly (ethylene glycol) and poly (ε-caprolactone) as novel anticancer drug carriers.

Biomaterials, v.22, p.1697-1704, 2001.

KNORST, M. T. Desenvolvimento tecnológico de forma farmacêutica plástica contendo

extrato concentrado de Achyrocline satureioides (Lom) DC. Compositae (Marcela). 1991

228p. Dissertação (Mestrado) - Curso de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas, Curso de

Farmácia, 1991.

KOROLKOVAS, A.; DE FRANÇA, F. F. A. C. Dicionário Terapêutico Guanabara. Rio de

Janeiro: Guanabara Koogan, 2001.

KORTING, S. M.; MEHNERT, W.; KORTING, H. C.; Lipid nanoparticles for improved

topical application of drugs for skin diseases. Advanced Drug Delivery Reviews, v. 59, p.

427-443, 2007.

KREUTER, J. Colloidal drug delivery Systems. Ed. Marcel Dekker, New York, 1994.

KRUEGER, G. G.; FELDMAN, S. R.; CAMISA, C.; DUVIC, M. ELDER, J. T.;

GOTTLIEB, A.B. Two considerations for patients with psoriasis and their clinicians: What

defines mild, moderate and severe psoriasis? What constitutes a clinically significant

improvement when treating psosriasis? J. Am Acad Dermatol, 43:281-5, 2000.

LACHMAN, L.; LIEBERMAN, H. A.; KANIG, J. L.; Teoria e prática na indústria

farmacêutica. Fundação Calouste Gulbenkian: Lisboa, 2001.

LAMPRECHT, A.; UBRICH, N.; PÉREZ, M. H.; LEHR, M. C.; HOFFMAN, M. and

MAINCENT, P. Biodegradable monodispersed nanoparticles prepared by pressure

homogenization-emulsification. International Journal of Pharmaceutics, v.184, p.97-105,

1999.

LEBWOHL, MARK. Tratamento de Doenças da Pele: estratégias terapêuticas abrangentes.

Barueri, SP: Manole, 2004.

LEGRAND, P.; BARRAT, G.; MOSQUEIRA, V.; FESSI, H. e DEVISSAGUET, J. P.

Polymeric nanocapsules a drug delivery systems A review. S.T.P. Pharma sciences v.9 (5),

p.411-418, 1999.

LEONARDI, G. R.; GASPAR, L. R.; CAMPOS, P. M. B. G.; Estudo da variação do pH da

pele humana exposta à formulação cosmética acrescida ou não das vitaminas A, E, ou de

ceramida, por metodologia não invasiva. Anais brasileiros de dermatologia, v. 77 (5), p. 563-

569, 2002.

LEONARDI, G. R.; MARTINS, L. G.; KUREBAYASHI, M. Permeação cutânea.

Cosmetologia aplicada. Cap. 2, São Paulo, 2004.

LEVEQUE, N.; MAKKI, S.; HAFGRAFT, J.; HUMBERT, Ph. Comparidon of Franz cells

and midrodialysis for assessing salilylic acid penetration through human skin. Interantional

Journal of Pharmaceutics. France, v. 269, n. 2, p. 323-328, 2003.

LINDEN, K. G., WEINSTEIN, G. D. Psoriasis: Current perspectives whit an emphasis os

Treatment [Rewiews] Am J Med, v.107( 6), p.595-605, dez, 1999.

LIONZO, M. I. Z. Micropartículas de P (HBHV) e de blendas de P (HBHV): PCL contendo

dexametasona ou acetato de dexametasona como modelos de fármacos: caracterização físico-

química e perfis de liberação in vitro. Dissertação de mestrado. UFRGS. Curso de Pós

Graduação, 2006.

LOWES, A. L.; BOWCOCK, A. M.; KRUEGER, J. G. Pathogenesis and therapy of psoriasis.

Nature, v. 445, 2007.

MARCHIORI, M. C. L. Desenvolvimento de formulação dermatológica contendo

dexametasona associada a nanocápsulas poliméricas. Monografia (Trabalho final de curso) –

Curso de Farmácia. Universidade Federal de Santa Maria, Santa Maria, Rio Grande do Sul,

2008.

MARRIOT, C. in AULTON, M. E. Delineamento de formas farmacêuticas. Artmed, ed.2ª,

Porto Alegre: 2005.

MARTIN, A.; Physical pharmacy: physical chemical principles in the pharmaceutical

sciences. 40°ed. Baltimore, Maryland: Lippincott Williams & Wilkins, 1993.

MARTINDALE, The Extra Pharmacopoeia. 31

Ed. New York, 1996.

MARTINDALE, The Extra Pharmacopoeia. 32

Ed. Taunton, Massachusetts:

Pharmaceutical Press, 1999.

MARTINI, M. C. Introducion a La dermofarmácia y a La cosmetologia. Zaragoza: Ed.

Acribia, p. 329. 2005.

MARTINS, G. A.; ARRUDA, L. e MUGNAINI, A. S. B. Validação de questionários de

avaliação da qualidade de vida em pacientes de psoríase. An. Bras. Dermatol, vol.79, n.5,

p.521-535, ISSN 0365-0596, 2004.

MENTER, A.; KORMAN, N. J.; ELMETS, C. A.; FELDMAN, S. R.; GELFAND, J. M.;

GORDON, K. B.; GOTTLIEB, A.; KOO, J. Y. M.; LEBWOHL, M.; LIM, H. W.;

VOORHEES, A. S. V.; BEUTNER, K. R.; BUSHAN, R. Guidelines of care for the

management of psoriasis and psoriatic arthritis. Journal of American Academy of

Dermatology, vol.60, n.4, p. 643-659, 2009.

MILÃO, D. Desenvolvimento tecnológico e biológica de formas farmacêuticas plásticas

contendo nanocápsulas de diclofenaco. Dissertação de mestrado. UFRGS, Curso de Pós

Graduação, 2001.

MIYAZAKI, S.; A. TAKAHASHI, W. KUBO, J. BACHYNSKY & R. LÖBENBERG. J.

Pharm.Pharmaceutical Sci. 6: 238-45. 2003.

MOFFAT, A.C; OSSELTON, M. D.; WIDDOP, P.; Clarke’s Analysis of drugs and Poisons.

3ª ed. London: Pharmaceutical Press, 2004.

MONACO, J. P. Desenvolvimento de sistemas bio e mucoadesivos de uso intra-bucal:

Avaliação in vitro da liberação de nimesulida, 2000. 143 f. Dissertação (Mestrado) -

Ciências Farmacêuticas, Universidade de São Paulo/Ribeirão Preto, SP, 2000.

MORGANTI, P.; RUOCCO, E.; WOLF, R. and RUOCCO, V. Percutaneous absorption and

delivery systems. Clinics in Dermatology, v.19, p.489-501, 2001.

MOSER, K.; KRIWET, K.; NAIK, A.; KALIA, Y. N.

and GUY, R. H. Passive skin

penetration enhancement and its quantification in vitro. European Journal of

Pharmaceutics and Biopharmaceutics, v.52, p.103-112, 2001.

MÜLLER, C. R.; SCHAFFAZICK, S. R.; POHLMANN, A. R.; DE LUCCA FREITAS, L.;

PESCE DA SILVEIRA, N.; DALLA COSTA, T.; GUTERRES, S. S. Spray-dried diclofenac-

loaded poli(ε-caprolactona) nanocapsules and nanospheres: preparation and physicochemical

characterization. Pharmazie, v.56, p. 864-867, 2001.

MÜLLER, R. H.; MÄDER, K. e GOHLA, S. Solid lipid nanoparticles (SLN) for controlled

drug delivery – a review of the state of the art. European Journal of Pharmaceut. and

Biopharmaceutics, v.50, p.161-177, 2000.

MÜNZEL, K.; BUECHI, J.; SCHULTZ, O. E. (Hrsg.) Galenisches Praktikum. Stuttgart:

Wissenschaftliche, 1959.

NETZ, P. A.; ORTEGA, G. G.; Fundamentos de Físico-química. Porto Alegre: Artmed, 2002.

PAESE. K. Desenvolvimento tecnológico, estudo de fotoestabilidade e avaliação da

permeação cutânea in vitro da benzofenona-3 a partir de nanocápsulas poliméricas

incorporadas em diferentes veículos semi-sólidos. Dissertação de mestrado. UFRGS, Curso

de Pós Graduação, 2008.

PARDEIKE, J.; HOMMOS, A.; MÜLLER, R. H. Lipid nanoparticles (SLN, NLC) in

cosmetic and pharmaceutical dermal products. International Journal of Pharmaceutics,

v.366, p.170-184, 2009.

PETERS, B. P.; WEISSMAN, F.G.; GILL, M. A. Pathology and treatment of psoriasis. Am J

Health Syst Pharm, v.57( 7), p.645-662, 2000.

PINTO, A.; ANDREMONT, A. e COUVREUR, P. Targeted delivery of antibiotics using

liposomes and nanoparticles: research and applications. Inter. Journal of Antimicrob. Agents,

v.13, p.155-168, 2000.

PUGH, W. J.; ROBERTS, M. S.; HADGRAFT. J. Epidermal permeability – penetrant

structure relationships: 3. The effect of hydrogen bonding interactions and molecular size on

diffusion across the stratum corneum. International Journal of Pharmaceutics, v.138, p.149-

165, 1996.

RAYCHAUDHURI, S. P.; GROSS, J. A comparative study of pediatric onset psoriasis whit

adult onset psoriasis. Pediatric Dermatology, v.17, p.174-178, 2000

RICHARDSON, S. K.; GELFAND, J. M. Update on the natural history and systemic

treatment of psoriasis. Advances in dermatology, v.24, p 171-196, 2008.

ROBERTSON, D. B.; MAIBACH, H. I. in KATZUNG, G. B. Farmacologia básica e clínica.

São Paulo: MacGraw-Hill, 2007.

100

ROSA, D. DOS SANTOS.; PENTEADO, D. F.; CALIL, M. R. Propriedades térmicas e

biodegradabilidade de PCL e PHB em um pool de fungos. Revista de Ciências &

Tecnologia UNIMEP, v.15, p.75-80, 2000.

ROVENSKY, J.; SVICK, K.; ISTOK, R.; STANCIKOVA, M. Quantitative assessment of

markers of inflammation, arthritis and pain in rats with adjuvant arthritis following the

treatment with ibuprofen cream and placebo. Drugs Exp Clin Res, v.29(2), p.85-90, 2003.

SAMPAIO, SEBASTIÃO DE A. P.; RIVITTI, EVANDRO A. Dermatologia. 2.ª edição.São

Paulo: Artes Médicas, 2001.

SCHAFFAZICK, S. R.; GUTERRES, S. S.; FREITAS, L. L.; POHLMANN, A. R.

Caracterização e estabilidade físico-química de sistemas poliméricos nanoparticulados para

administração de fármacos. Química Nova, v.26, p.726-737, 2003.

SCHMALTZ C.; DOS SANTOS J. V.; GUTERRES, S. S. Nanocápsulas como uma tendência

promissora na área cosmética: A imensa potencialidade deste pequeno grande recurso.

Pharmacia Brasileira, v.16, p.80-85, n.13-14, 2005

SCHNEIDER, I.; DOBNER, B.; NEUBERT, R.; WOHLRAB, W. Evaluation of drug

penetration into human skin ex vivo usin branched fatty acids and propylene glycol.

International Journal of Pharmaceutics, v.145, p.187-196, 1996.

SHAH, K. A.; DATE, A. A.; JOSHI, M. D.; PATRAVALE, V. B. Solid lipd nanoparticles

(SLN) of tretinoin: Potential in topical delivery. International Journal of Pharmaceutics,

v.345, p. 163-171, 2007.

SHAW, K. An Overreview of psoriasis. Pharmacy Times, p.2-5, December 1998.

SILVA, P. Farmacologia. 7. edição. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2006.

SIQUEIRA, N. M. Desenvolvimento tecnológico e avaliação da penetração cutânea de

benzofenona-3 a partir de nanocápsulas revestidas com quitosana. Dissertação de mestrado.

UFRGS, Curso de Pós Graduação, 2008.

101

SUHONEN, M. T.; BOUWSTRA, J. A. and URTTI, A. Chemical enhancement of

percutaneous absorption in relation to stratum corneum structural alterations. Journal of

Controlled Release, v.59, p.149-161, 1999.

SUKHATME, S. V.; GOTTLIEB, A. B.; Pediatric psoriasis: updates in biologic therapies.

Dermatologic Therapy, v.22, p.34-39, 2009.

SUN, J.; LIU, Y.; KONG, W.; JIANG, P.; JIANG, W. In vitro permeability of round window

membrane to transforming dexamethasone with delivery vehicles – a dosage estimation.

Chinese Medical Journal, v. 120(24), p. 2284-2289, 2007.

TAUBER, U. Drug metabolism in the skin: advantages and disadvantages, en transdermal

Drug Delivery: Developmental Issues and Research Initiatives. (Hadgraft, J. R. H. ed.),

Marcel Dekker, New York, p. 99-112, 1989.

TUNÇAY, M.; ÇALI, S.; KA, H. S.; ERCAN, M. T.; PEKSOY e HINCAL, A. A.

Diclofenac sodium incorporated PLGA (50:50) microspheres: formulation considerations and

in vitro/in vivo evaluation. International Journal of Pharmaceutics, v.195, p.179-188,

2000.

VENTER, J. P.; MÜLLER, D. G.; PLESSIS, J. e GOOSEN, C. A comparative study of in

situ adapted diffusion cell and in vitro Franz diffusion cell method for trandermal absorption

of doxylamine. European Journal of Pharmaceutics Sciences, v.13, p.169-177, 2001.

VERMA, D. D.; VERMA, S.; BLUME, G.; FAHR, A. Particle size of liposomes influences

dermal delivery of substances into skin. Internacional Journal of Pharmaceutics, v. 258,

(1-2), p. 141-151, 2003.

VOGEL, A. I.; MENDHAM, J.; DENNEY, R. C.; THOMAS, B. M. Análise química

quantitativa. 6 ed. Rio de Janeiro, RJ: LTC, 2000.

YOKOYAMA, M. e OKANO, T. Targetable drug carriers: present status and a future

perspective. Advanced Drug Delivery Reviews, v.21, p.77-80, 1996.

102

ZULLI, G. Desenvolvimento de uma matriz polimérica para incorporação e liberação

controlada de papaína. (Dissertação de Mestrado). Instituto de Pesquisas Energéticas e

Nucleares: Universidade de São Paulo – USP, 2007.

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