( PDF ) Desenvolvimento folicular em resposta a diferentes tratamentos de estimulação ovariana em cabras Canindé avaliadas por ultrassonografia

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UIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ

PRÓ-REITORIA DE PÓS-GRADUAÇÃO E PESQUISA

FACULDADE DE VETERIÁRIA

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊCIAS VETERIÁRIAS

FRACISCO CARLOS DE SOUSA

DESEVOLVIMETO FOLICULAR EM RESPOSTA A DIFERETES

TRATAMETOS DE ESTIMULAÇÃO OVARIAA EM CABRAS

CAIDÉ AVALIADAS POR ULTRASSOOGRAFIA

FORTALEZA-CE

2010

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FRANCISCO CARLOS DE SOUSA

DESENVOLVIMENTO FOLICULAR EM RESPOSTA A DIFERENTES

TRATAMENTOS DE ESTIMULAÇÃO OVARIANA EM CABRAS

CANINDÉ AVALIADAS POR ULTRASSONOGRAFIA

Fortaleza

2010

Dissertação apresentada ao Programa de Pós-

Graduação em

Ciências Veterinárias da Faculdade de Veterinária da

iversidade Estadual do Ceará, como requisito parcial

para a obtenção do grau de Mestre em Ciências

Veterinárias.

Área de concentração: Reprodução e Sanidade Animal

Linha de Pesquisa: Reprodução e Sanidade de Pequenos

Ruminantes

Orientador: Prof. Dr. Dárcio Ítalo Alves Teixeira

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S725d Sousa, Francisco Carlos de

Desenvolvimento folicular em resposta a diferentes

tratamentos de estimulação ovariana em cabras Canindé

avaliadas por ultrassonografia/ Francisco Carlos de Sousa.

__ Fortaleza, 2010.

69p.; il.

Orientador: Prof. Dr. Dárcio Ítalo Alves Teixeira

Dissertação (Mestrado em Ciências Veterinárias) –

Universidade Estadual do Ceará, Faculdade de Veterinária.

1.Caprinos. 2. Desenvolvimento folicular.

3.Ultrassonografia. I. Universidade Estadual do Ceará,

Faculdade de Veterinária.

CDD: 636.0824

FRANCISCO CARLOS DE SOUSA

DESENVOLVIMENTO FOLICULAR EM RESPOSTA A DIFERENTES

TRATAMENTOS DE ESTIMULAÇÃO OVARIANA EM CABRAS

CANINDÉ AVALIADAS POR ULTRASSONOGRAFIA

Aprovada em: 23/07/2010

BANCA EXAMINADORA

Prof. Dr. Dárcio Ítalo Alves Teixeira

Universidade Estadual do Ceará

Orientador

Profa. Dra. Lúcia Daniel Machado da Silva

Universidade Estadual do Ceará

Examinadora

Dr. Jorge André Matias Martins

Universidade Federal do Ceará

Examinador

Dissertação apresentada ao Programa de Pós-

Graduação

em Ciências Veterinárias da

Faculdade de Veterinária da

Universidade Estadual do Ceará, como requisito parcial

para a obtenção do grau de Mestre em Ciências

Veterinárias.

À minha família por todo apoio,

amor, carinho e compreensão...

Dedico.

AGRADECIMETOS

À Universidade Estadual do Ceará (UECE), por ter me proporcionado a

chance de concluir mais uma etapa na formação acadêmica.

À Faculdade de Veterinária (FAVET), pelo apoio e carisma de professores,

alunos e secretárias.

Ao Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias (PPGCV), pela

oportunidade de realização do Mestrado, além do empenho, organização e

profissionalismo de sua Coordenadoria e Secretaria.

Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico

(CNPq), pela concessão de bolsa de estudos durante o curso de mestrado.

A Deus, por ter me dado o bem mais precioso que é a vida, além de força de

vontade, iluminação, saúde, paciência e determinação para enfrentar todas as

dificuldades impostas pela vida.

Aos meus pais, Maria de Fátima de Sousa e José Alves de Souza, pelos

ensinamentos, educação, incentivo e apoio incondicionais que me deram.

Aos meus irmãos, Denis Carlos de Sousa e Shirley Maria de Sousa, pela

amizade, incentivo e consideração dedicada a mim.

À minha tia e madrinha, Eugênia Alice de Lima, pelo carinho e por sempre

acreditar no meu potencial.

Ao Prof. Dr. Dárcio Ítalo Alves Teixeira, por sua orientação e preciosa

colaboração na elaboração deste trabalho, além de sua dedicação, paciência e valiosos

ensinamentos.

Ao Prof. Dr. Vicente José de Figueirêdo Freitas, por ter me permitido utilizar

a estrutura do Laboratório de Fisiologia e Controle da Reprodução (LFCR), pelos

ensinamentos e por ter confiado no meu trabalho.

À Dra. Luciana Magalhães Melo, por todo o apoio, preocupação e valiosa

solicitude durante todo o Mestrado, contribuindo também para o enriquecimento deste

estudo.

Ao Prof. Dr. Arlindo de Alencar Araripe Moura, pelas sugestões, pela

participação na avaliação deste trabalho, além do auxílio na análise estatística dos

dados.

À Profa. Dra. Lúcia Daniel Machado da Silva, por seus ensinamentos e

sugestões, previamente à realização deste trabalho e por sua participação na análise do

mesmo.

Ao Dr. Jorge André Matias Martins, por ter se disponibilizado a colaborar na

análise estatística dos resultados e por sua contribuição na avaliação deste trabalho.

À M.Sc. Suely Renata Gaya Avelar, por sua participação desde o início deste

trabalho. Um exemplo de força e superação.

Ao B.Sc. Victor Hugo Vieira Rodrigues, pelo auxílio nas ultrassonografias e

por ser meu amigo.

À M.Sc. Alexsandra Fernandes Pereira, pela amizade e grande exemplo de

determinação.

Ao Carlos Henrique Sousa de Melo, por seu companheirismo e participação

responsável durante toda a realização dos experimentos de ultrassonografia.

Ao Antônio Carlos de Albuquerque Teles Filho, pelo importante auxílio e

dedicação aos experimentos.

Ao Talles Monte de Almeida, que almejando aprendizado em

ultrassonografia, sempre se mostrou solícito e disposto a colaborar.

A toda a equipe do LFCR, M.Sc. Raylene Ramos, B.Sc. Agostinho Neto,

Érica Albuquerque, Maiara Pinheiro, Claudia Luciano, Jefferson Ferreira, e a todos que

estiveram neste laboratório, por todos os momentos de alegria, trabalho e

companheirismo.

Aos professores do PPGCV, pelos importantes ensinamentos e orientações a

mim concedidas.

Aos funcionários e companheiros Selmar Silva, Cícero Máximo e César

Camelo, pelo apoio e pela amizade.

RESUMO

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito de diferentes tratamentos de

estimulação hormonal sobre a população folicular antral de cabras Canindé

naturalizadas. Dezessete cabras cíclicas adultas foram tratadas com esponjas

intravaginais contendo 60 mg de acetato de medroxiprogesterona por 11 dias, associado

a uma injeção de 50 µg de d-cloprostenol no oitavo dia do tratamento. Em adição, as

fêmeas receberam os seguintes regimes de tratamentos: ao grupo múltiplas doses (MD)

foram administrados 120 mg de NIH-FSH-P1, distribuídos em cinco injeções a

intervalos de 12 h; ao grupo três doses (TD) foram administrados 120 mg de NIH-FSH-

P1, distribuídos em três injeções a intervalos de 24 h; o grupo única dose (UD), recebeu

70 mg de NIH-FSH-P1 e 200 UI de eCG administrados 36 h antes da remoção da

esponja. Os ovários de todos os animais foram observados por ultrassonografia

transretal em tempo real (UTR) durante os protocolos de estimulação. Foram realizadas

três sessões de tratamento hormonal/UTR e em cada sessão as cabras foram alocadas

em um grupo diferente para evitar o efeito da repetição do tratamento. Todos os

folículos ≥ 2 mm foram contados, mensurados e classificados de acordo com o seu

diâmetro maior. A arquitetura ultrassonográfica dos ovários visualizados foi bem

definida. Uma taxa de detecção ovariana de 100% foi observada em todos os grupos e

por todo o período do estudo. No momento da inserção das esponjas (Dia 0), todos os

grupos apresentavam características ovarianas similares. No dia 11, as cabras do

tratamento DU apresentaram um maior percentual (p<0,0001) de pequenos folículos,

enquanto os percentuais de folículos médios e grandes foram significativamente

(p<0,0001) menores em relação aos outros tratamentos. Os grupos MD e TD não

diferiram significativamente (p<0,05), independente da categoria folicular. O diâmetro

de folículos pequenos foi similar em MD, TD e UD durante todo o período do estudo.

No grupo TD o diâmetro dos folículos grandes foi significativamente (p<0,05) menor

no dia 10 quando comparado a MD e UD. Entretanto, estas diferenças não foram

observadas no dia 11. Em conclusão, a ultrassonografia transretal mostrou que o

tratamento TD revelou várias similaridades em relação ao tratamento MD, no que se

refere ao desenvolvimento folicular terminal, representando um protocolo eficiente e

simples para estimulação ovariana em cabras Canindé.

Palavras-chave: Caprinos. Desenvolvimento folicular. Ultrassonografia.

ABSTRACT

The aim of the present study was to evaluate the effect of different hormonal stimulation

treatments on the antral follicular population in naturalized Canindé goats. Seventeen

cycling goats were treated with intravaginal sponges containing 60 mg

medroxyprogesterone acetate for 11 days plus a single injection of 50 µg d-cloprostenol

on the eighth day of treatment. Additionally, the females received the following

treatment regimens: multiple doses (MD) group, 120 mg NIH-FSH-P1 administered in

five injections at 12-h intervals, three doses (TD) group, 120 mg NIH-FSH-P1

administered in three injections at 24-h intervals; oneshot (OS) group, 70 mg NIH-

FSH-P1 plus 200 IU eCG administered at 36 h, before removal of the sponge. The

ovaries of all animals were observed by transrectal real-time ultrasonography (RTU)

during stimulation protocols. Three sessions of hormone treatment/RTU examination

were performed, and each of the goats was allocated to a different group to avoid the

effect of treatment repetition. All follicles ≥ 2 mm were counted, measured and

classified according to their largest diameter. The ultrasonographic architecture of the

visualized ovaries was well defined. An ultrasonic ovary detection rate of 100% in all

groups was observed over the whole course of the study. At sponge insertion (Day 0),

all groups had similar ovarian characteristics. At Day 11, OS goats had a higher

percentage (p<0.0001) of small follicles, whereas the percentages of medium and large

follicles were significantly (p<0.0001) lower relative to the other treatment groups. The

MD and TD groups did not differ significantly (p>0.05), regardless of follicular

category. The diameter of small follicles was similar in MD, TD and OS during the

whole study period. In the TD group, the diameter of large follicles was significantly

smaller (p<0.05) at Day 10 as compared to MD and OS. However, these differences

were not observed on Day 11. In conclusion, transrectal ultrasonography showed that

the TD regimen revealed several similarities to MD treatment regarding terminal

follicular development, representing an efficient and simpler protocol for ovarian

stimulation in Canindé goats.

Keywords: Goats. Follicular development. Ultrasonography.

LISTA DE FIGURAS

Revisão de Literatura

Figura 1 – Exemplares da raça Canindé: macho (A) e fêmea (B)........................ 17

Figura 2 – Modelos de transdutores utilizados em medicina veterinária: linear

(A), convexo (B) e setorial (C). Tipos de imagens obtidas com o transdutor

linear (A1), convexo (B1) e setorial (C1)............................................................. 22

Figura 3 – Exame ultrassonográfico pelo método transabdominal (A),

transretal (B) e transvaginal (C) em ovinos..........................................................

Figura 4 – Cronologia do diagnóstico ultrassonográfico da gestação em

caprinos e ovinos...................................................................................................

Figura 5 – Padrão representativo de crescimento e regressão de folículos

individuais durante o ciclo estral de cabras apresentando quatro ondas de

desenvolvimento folicular.....................................................................................

Figura 6 – Principais eventos que ocorrem durante uma onda folicular

ovulatória: recrutamento, seleção, dominância e ovulação...................................

LISTA DE TABELAS / QUADROS

Revisão de Literatura

Quadro 1 – Impedância acústica........................................................................... 23

Quadro 2 – Dia da emergência da onda folicular de cabras Anglo-Nubiana

apresentando ciclos estrais de três ou quatro ondas..............................................

Capítulo 1

Table 1 – Follicular population frequencies of small, medium and large

follicles at Day 0 in the different hormonal stimulation treatments……………..

Table 2 – Follicular population frequencies of small, medium and large

follicles at Day 11 in the different hormonal stimulation treatments……………

Table 3 – Mean (± SD) diameter (mm) of follicles per category at the different

days after hormonal treatments………………………………………………….

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

ASCCOPER – Associação dos criadores de caprinos e ovinos de Petrolina e região

CL – Corpo Lúteo (Corpus Luteum)

cm – Centímetro

CNPq – Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico

eCG – Equine Chorionic Gonadotropin (Gonadotrofina Coriônica Equina)

EMBRAPA – Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária

EPM – Erro Padrão da Média

FSH – Follicle Stimulating Hormone (Hormônio Folículo Estimulante)

FUNCAP – Fundação Cearense de Apoio a Pesquisa

h – Hora

hMG – Human Menopausal Gonadotropin

IBGE – Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística

Kg – Quilograma

kHz – Quilohertz

LFCR – Laboratório de Fisiologia e Controle da Reprodução

µg – Micrograma

s – Metro Quadrado por Segundo

MAP – Medroxiprogesterone Acetate (acetato de medroxiprogesterona)

MD – Multiple Doses (Múltiplas Doses)

mg – Miligrama

MHz – Megahertz

mm – Milímetro

ng – Nanograma

OS – Oneshot

PGF

2α

– Prostaglandina F

2α

PIV – Produção in vitro

RTU – Transrectal Real Time Ultrasonography

SD – Standard Deviation

SEBRAE – Serviço Brasileiro de Apoio às Micro e Pequenas Empresas

SEM – Standard Error of the Mean

SPRD – Sem Padrão Racial Definido

TD – Three Doses (Três doses)

UD – Única Dose

UECE – State University of Ceará (Universidade Estadual do Ceará)

UI – Unidade Internacional

UTR – Ultrassonografia em Tempo Real

SUMÁRIO

1 ITRODUÇÃO .............................................................................................................. 14

2 REVISÃO DE LITERATURA...................................................................................... 16

2.1 RAÇA CANINDÉ......................................................................................................

2.2 ULTRASSONOGRAFIA.......................................................................................... 17

2.2.1 PRINCÍPIOS FÍSICOS DA ULTRASSONOGRAFIA MODO B...................... 21

2.2.2 APLICAÇÕES DA ULTRASSONOGRAFIA MODO B NO ESTUDO DO

APARELHO REPRODUTOR FEMININO........................................................................

2.2.2.1 DIAGNÓSTICO DE GESTAÇÃO EM PEQUENOS RUMINANTES........

2.2.2.2 DINÂMICA FOLICULAR OVARIANA EM CAPRINOS..........................

2.3 TRATAMENTOS HORMONAIS DE ESTIMULAÇÃO OVARIANA EM

CAPRINOS..........................................................................................................................

3 JUSTIFICATIVA............................................................................................................

4 HIPÓTESE CIETÍFICA............................................................................................. 36

5 OBJETIVOS.................................................................................................................... 37

5.1 OBJETIVO GERAL.................................................................................................. 37

5.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS.....................................................................................

6 CAPÍTULO 1...................................................................................................................

7 COCLUSÕES............................................................................................................... 54

8 PERSPECTIVAS............................................................................................................ 55

9 REFERÊCIAS BIBLIOGRÁFICAS.......................................................................... 56

APÊDICE A..................................................................................................................... 65

APÊDICE B..................................................................................................................... 67

1 ITRODUÇÃO

A exploração de caprinos no Nordeste brasileiro destaca-se pelo seu efetivo,

que consta de, aproximadamente, 8,5 milhões de animais, correspondendo a 91,1% do

rebanho nacional (IBGE, 2008). Entretanto, cerca de 75% deste rebanho é composto por

caprinos sem padrão racial definido (SPRD), resultante de cruzamentos indiscriminados

entre raças naturalizadas e destas com raças exóticas (MADRUGA et al., 2008).

Os caprinos naturalizados são descendentes dos animais trazidos pelos

colonizadores portugueses. Devido ao processo de seleção natural que sofreram ao

longo de várias gerações, estes animais apresentam potencial genético e produtivo

compatíveis com o ambiente semi-árido da região Nordeste (MEDEIROS, 1999).

Os principais tipos caprinos naturalizados são Moxotó, Canindé, Marota e

Repartida (EGITO; MARIANTE; ALBUQUERQUE, 2002). Dentre esses genótipos, a

raça Canindé sobressai-se por sua rusticidade e por possuir produção leiteira acima da

média nacional quando comparada a outros caprinos naturalizados (SANTANA, 2000).

Apesar de os animais da raça Canindé apresentarem baixa capacidade produtiva quando

comparados aos de raças especializadas, é importante enfatizar que mesmo sob as

condições adversas da região semi-árida, a criação destes é uma prática necessária, uma

vez que os mesmos são capazes de utilizar os recursos naturais da região, mantendo

escore corporal adequado, reduzindo assim, os custos de produção. Além disso, tais

animais demonstram índices reprodutivos similares aos apresentados pelos demais

caprinos naturalizados, mesmo quando submetidos a condições de estresse térmico

devido às elevadas temperaturas encontradas no Nordeste.

No entanto, estudos realizados por Mariante (1993) demonstraram que

cruzamentos absorventes entre raças locais e exóticas causaram uma drástica redução no

efetivo populacional das raças naturalizadas, as quais se encontram atualmente em

ameaça de extinção e, portanto, pondo em risco a manutenção do patrimônio genético

local. Diante dessa realidade, a preservação de raças caprinas naturalizadas tem sido

buscada não só devido à importante variabilidade genética destes animais, como

também à sua contribuição para o desenvolvimento rural, principalmente junto ao

homem do campo, prestando-se para a produção de carne, pele e leite.

Neste contexto, as biotecnologias reprodutivas são ferramentas úteis para a

obtenção e multiplicação deste material genético, destacando-se, no caso da fêmea, a

produção de embriões, seja in vivo ou in vitro (COGNIÉ et al., 2004). Tratamentos

hormonais para estimulação ovariana têm sido empregados primariamente nas fêmeas

doadoras, com o objetivo de induzir o crescimento de muitos folículos e também de

produzir uma grande quantidade de oócitos capazes de resultarem em embriões

transferíveis (SINGH et al., 2004). Os tratamentos tradicionais utilizam múltiplas doses

de hormônio folículo-estimulante (FSH), tornando-os mais laboriosos e onerosos, o que

dificulta a sua implementação. Além disso, uma grande variabilidade na resposta

estimulatória tem sido encontrada em caprinos (MENCHACA; PINCZAK;

RUBIANES, 2002), o que tem impossibilitado estimar a resposta ovariana nesses

animais quando tratados hormonalmente. Com isso torna-se necessária uma otimização

nos protocolos de estimulação, bem como um maior conhecimento da fisiologia

ovariana.

A aplicação da ultrassonografia transretal constituiu-se, nos últimos anos, em

um dos passos mais importantes para o estudo e o entendimento dos eventos

fisiológicos que ocorrem durante o ciclo estral. Por ser uma técnica não-invasiva,

prática e direta, esta tem permitido contínuo monitoramento e mensuração de folículos

antrais, possibilitando a caracterização do processo de dinâmica folicular ovariana em

um padrão de ondas foliculares.

A despeito do maior número de trabalhos empregando a ultrassonografia

para elucidar os diferentes eventos ocorrentes no ciclo estral da espécie caprina, poucas

investigações têm sido realizadas com caprinos estimulados hormonalmente. Até o

presente momento, não foram registradas mudanças na dinâmica do desenvolvimento

folicular em cabras Canindé submetidas a tratamentos mais práticos de estimulação

hormonal, em comparação aos protocolos tradicionais. Cientes de que o uso de

protocolos simplificados pode resultar em alterações nas respostas ovarianas, parece

interessante o aprofundamento de estudos dos eventos foliculares na fêmea caprina

estimulada com esse tipo de tratamento. Desta forma, o propósito deste trabalho foi

contribuir para o conhecimento do efeito de diferentes tratamentos hormonais de

estimulação ovariana sobre o padrão de desenvolvimento folicular, em cabras da raça

Canindé.

2 REVISÃO DE LITERATURA

2.1 Raça Canindé

Dos ecotipos caprinos naturalizados que se encontram na região Nordeste,

apenas Moxotó e Canindé são consideradas raças, tendo esta última sido reconhecida

pelo Ministério da Agricultura em 1999 (MACHADO, 2001). Filogeneticamente, o

caprino Canindé teve em sua formação o grupamento ilustrado pela Grisone Negra, dos

Alpes suíços, de onde derivaram a British Alpine e a Poitevine (INFORME

EMBRAPA, 2003).

Afirma-se que a raça Canindé teve origem no Vale do Rio Canindé,

localizado no Piauí, fato que permitiu a consolidação do nome da raça (ASCCOPER,

2009). Estes animais também têm sido encontrados nos estados da Bahia, Pernambuco,

Rio Grande do Norte e Ceará, apesar do risco de extinção da raça (SEBRAE, 2009).

Outros acreditam que o nome é oriundo de Calindé, tanga branca de algodão rústico

utilizada pelos escravos negros. Assim, a cabra preta com ventre claro, similar a uma

tanga (Figura 1), era destinada aos escravos, pois tinha aparência semelhante à

vestimenta deles. No Sertão Cearense, o nome Canindé é utilizado principalmente como

sinônimo de faca pontuda. Mas também pode se referir às pedras ou lascas rochosas do

rio Canindé que serviam para afiar lâminas ou peixeiras no sertão do Piauí

(ASCCOPER, 2009).

Os caprinos Canindé assemelham-se aos ecotipos Moxotó e Repartida em

tamanho e forma, além de apresentar pêlos curtos e brilhantes. A raça é distinguida

facilmente pela sua cor, apresentando pelagem preta sobre o dorso e vermelho-

amarelada ou branca no abdome.

Apresenta focinho negro e chifres de tamanho

mediano.

A cabeça é negra, com mancha baia, de tamanho variado, na região cervical.

Na face, uma faixa branca estreita (lágrima) percorre a arcada orbitária cranialmente,

descendo até os ductos lacrimais. Os pêlos da porção externa da orelha são negros, mas

claros internamente e nas bordas. A linha branca abdominal tem início na base do peito,

seguindo pelas axilas, passando pela região inguinal e pelas nádegas, chegando à base

da inserção da cauda, onde os pêlos das bordas inferiores são claros. Os membros

anteriores e posteriores são negros na face medial e brancos distalmente, com exceção

dos joelhos que são brancos, na face medial e distal; os cascos são sempre negros. Os

animais são leves e de pequeno porte, apresentando peso corporal médio de 35 a 40 Kg

e medindo cerca de 55 a 65 cm de altura (RIBEIRO, 1999; MADRUGA et al., 2008;

ASCCOPER, 2009). Exemplares com este padrão racial podem ser vistos na Figura 1.

Figura 1 – Exemplares da raça Canindé: macho (A) e fêmea (B). Fonte: LFCR.

De acordo com Santana (2000), a raça Canindé apresenta boa conformação

geral, com potencial para produção de carne e pele, mostrando, também, tendência para

o tipo leiteiro, com produção diária em torno de 1,5 litros. Com relação aos índices

reprodutivos observados em condições de caatinga, estes animais apresentam boa

prolificidade, com uma média de 1,6 crias por parto e mortalidade situando-se entre

15,0 e 18,6% para animais de até um ano de idade (BELLAVER; ARRUDA;

MORAES, 1979; MAIA; COSTA, 1997; RIBEIRO, 1999). Em estudo conduzido

durante a gestação em caprinos, Medeiros et al. (1996) observaram ganhos de peso

superiores em cabras Canindé quando comparadas às raças Anglo-Nubiana e Alpina. Ao

nascimento, as crias pesam cerca de 2,0 Kg (MACHADO, 2001). Apesar disso, a

necessidade crescente de se obter substancial incremento da produtividade na

caprinocultura do semi-árido brasileiro tem conduzido à introdução de raças exóticas.

Assim, a raça Canindé e outros tipos naturalizados têm sofrido ameaça de extinção,

devido à miscigenação indiscriminada com caprinos exóticos (OLIVEIRA et al., 2005).

2.2 Ultrassonografia

A ultrassonografia é uma técnica que faz parte de um grupo de

procedimentos e métodos que permitem a emissão de diagnóstico através de imagem e

que possibilita a visibilidade anatômica dos órgãos internos em vários animais

pertencentes a espécies domésticas e não-domésticas (SANTOS; OLIVEIRA; LIMA,

2004).

O melhor entendimento da técnica de ultrassonografia é possível com a

definição de som. Os sons são ondas de energia mecânica radiante, de propagação

longitudinal, formadas por compressões e rarefações sucessivas das moléculas do meio

onde se propagam (SIMÕES, 2008a). No ar, a velocidade de propagação do som é de

aproximadamente 340 m/s. Os líquidos transmitem-no com mais velocidade (1425 m/s);

nos sólidos a velocidade é superior a este valor (MOURA; MERKT, 1996). Os sons

perceptíveis ao ouvido humano têm uma frequência compreendida entre 16 e 20 kHz

por segundo; os ultrassons, por sua vez, são definidos como quaisquer sons de

frequência maior que o ouvido humano é capaz de captar, isto é, acima de 20 kHz

(ZISKIN, 1993). Três tipos de sistemas ultrassonográficos podem ser utilizados para o

diagnóstico de gestação em pequenos ruminantes, são eles: modo A, Doppler e modo B.

No entanto, a utilização do modo A para esta finalidade caiu em desuso (GANAIE et

al., 2009).

O modo A apresenta em forma de gráfico unidimensional, a amplitude e a

profundidade das ondas sonográficas nos tecidos. O diagnóstico de gestação através

desta técnica baseia-se na detecção de uma faixa fluida presente no útero. Ondas

ultrassônicas são emitidas a partir de um transdutor manual colocado externamente na

pele do abdome e em direção ao útero. Estas ondas são refletidas entre os diferentes

tecidos para o transdutor e convertidas em energia elétrica na forma de sinais audíveis

ou visuais. A unidade é sensível a uma profundidade de 10 a 20 cm. Um sinal audível

ou luminoso é emitido pela unidade quando uma faixa de estrutura fluida é registrada

(FREITAS; SIMPLÍCIO, 1999).

Em ovinos, Ganaie et al. (2009) demonstraram que a técnica modo A pode

não detectar gestação antes de 30 dias pós-monta. Além disso, uma menor sensibilidade

é registrada aos 31-45 dias de gestação, que pode ser devido à presença de pequenas

quantidades de fluidos fetais neste período. O aumento significativo na sensibilidade

deste exame em estágios subsequentes a 91-105 dias, pode ser atribuído ao rápido

aumento no volume de líquido amniótico e no tamanho fetal. Da mesma forma, é

considerado um método satisfatório em caprinos para uma idade fetal entre 50 e 120

dias. De acordo com El Amiri et al. (2003), se realizado em estágio avançado de

gestação, o modo A permite um rápido exame (80-100 ovelhas/hora). No entanto, a

presença de uma vesícula urinária repleta, hidrometra ou piometra podem levar a um

diagnóstico falso positivo. Além disso, a viabilidade fetal e o número de fetos não são

detectáveis por este método (FREITAS et al., 2005).

No princípio Doppler, o feixe de ultrassons transmitido pelo transdutor está

sujeito a pequenas alterações na frequência de ondas refletidas de superfícies em

movimento, tais como pulsação sanguínea, batimentos cardíacos ou movimentos fetais

(WANI et al., 1998). As ondas refletidas são recebidas de volta pelo mesmo transdutor e

convertidas em som audível e amplificado (fones de ouvido ou autofalantes) ou

luminoso (osciloscópio). Wani et al. (1998) citam que a acurácia dos diferentes sons

para diagnosticar gestação foi de 100, 100 e 72% para batimento cardíaco fetal, fluxo

sanguíneo umbilical e sons da artéria uterina principal, respectivamente. O detector

ultrassônico do pulso fetal, que é a base do fenômeno Doppler, consiste de um

transdutor e de um amplificador (JAINUDEEN; HAFEZ, 2004).

O Doppler pode ser utilizado por via transabdominal e transretal (EL AMIRI

et al., 2003). O exame transabdominal é semelhante ao realizado com ultrassom modo

A, no qual o transdutor deve ser posicionado no flanco direito, cranialmente ao lado do

úbere, com o animal em estação. A eficiência da técnica transretal é superior à

transabdominal, em virtude da possibilidade de avaliação da viabilidade fetal. Para o

diagnóstico de gestação em caprinos é utilizado um equipamento baseado no efeito

Doppler, podendo ser o modelo DPPR-80, munido de um transdutor transretal de 2,2

MHz (SANTOS; OLIVEIRA; LIMA, 2004).

Paula et al. (2003), comparando a eficiência deste método com a

ultrassonografia modo B em caprinos, verificaram um baixo percentual de acerto aos 30

(0%) e 45 (22%) dias de gestação, ocorrendo um aumento deste percentual aos 60 dias

pós-monta (66,7%). Também, segundo estes autores, o efeito Doppler mostrou menor

eficiência quanto à detecção de gestação múltipla em comparação com a simples.

A ultrassonografia modo B (modo brilho) é uma técnica que se baseia na

emissão de impulsos sonoros de alta frequência que após interagirem com tecidos ou

órgãos são processados num conjunto de pontos de brilho com diferentes intensidades,

formando uma imagem bidimensional. A imagem ecográfica representa um plano

tomográfico da morfologia e anatomia dos tecidos ou órgãos explorados. Consiste em

uma técnica complementar ao exame clínico e é utilizada para avaliação de tecidos

moles em todas as espécies. É um método não invasivo, prático, rápido e não provoca

modificações biológicas, tanto aos pacientes como ao operador (SIMÕES, 2008a).

A ultrassonografia modo B permite a avaliação do tamanho, forma,

arquitetura interna, ecotextura, localização e da consistência de órgãos em

funcionamento, ou o monitoramento de suas funções. Possibilita ainda o registro de

imagens para serem utilizadas em atestados ou laudos clínicos. Uma de suas limitações

inclui a natureza não específica de muitas alterações observadas, o que impede, muitas

vezes, um diagnóstico preciso e imediato (NEVES et al., 2008). De acordo com

Augusto; Pachaly (2000), a qualidade da imagem ultrassonográfica e sua correta

interpretação dependem do conhecimento das interações entre as ondas de ultrassom e

os tecidos ou órgãos, da escolha apropriada do transdutor e também da diferenciação de

artefatos da técnica de alterações. A avaliação ultrassonográfica requer longo tempo de

estudo e experiência. É praticamente impossível realizar uma boa interpretação somente

através de observações de imagens ultrassonográficas de livros ou através de vídeos.

Um dos primeiros passos para trabalhar com esse tipo de exame diagnóstico é o

conhecimento dos princípios físicos da ultrassonografia modo B e anatomia normal da

espécie avaliada.

Atualmente, os transdutores emitem feixes sequenciais ou segmentares de

ultrassons, obtendo-se no mesmo instante a imagem correspondente aos seus ecos.

Nestas condições, denomina-se ultrassonografia em tempo real (UTR) modo B,

constituindo-se assim, em método de avaliação contínuo em animais, permitindo o

estudo de processos sequenciais dentro e entre estruturas (GRIFFIN; GINTHER, 1992;

SIMÕES, 2008a).

A aplicação dessa técnica na reprodução animal, a partir da década de 1980,

constituiu-se em um dos passos mais importantes para o estudo e o entendimento dos

eventos fisiológicos que ocorrem durante o ciclo estral e a gestação, em diversas

espécies. Permite ainda maior precisão e segurança para diagnóstico, prognóstico e

terapêutica, resultando em uma maior eficiência reprodutiva, notadamente em

explorações intensivas (NEVES et al., 2008).

2.2.1 Princípios físicos da ultrassonografia modo B

A formação da imagem ultrassonográfica baseia-se no princípio de impulso-

eco. Feixes ultrassônicos são produzidos por vibrações de cristais especializados, após

excitação por impulsos elétricos. As ondas sonoras resultantes são direcionadas através

dos tecidos de interesse e refletidas em forma de eco, regressando com a mesma

velocidade à fonte emissora. Por possuírem a capacidade de transformar energia elétrica

em energia mecânica e vice-versa, estes cristais são denominados piezoelétricos. Os

compostos piezoelétricos mais utilizados consistem de zirconato-titanato de chumbo

embebido em uma matriz de epóxi ou material similar (HANGIANDREOU, 2003).

O equipamento de ultrassom, o ecógrafo, é composto por um console e pelo

transdutor

. O transdutor é caracterizado por conter em seu interior cristais piezoelétricos

e é considerado o instrumento mais importante para a avaliação ultrassonográfica e a

escolha correta do tipo e frequência é essencial para uma melhor visualização da

imagem. Existem vários tipos e modelos que variam de acordo com a área a ser

examinada. Com relação à forma, os transdutores podem ser de três tipos: linear,

convexo e setorial (Figura 2). O primeiro possui os cristais organizados lado a lado, de

maneira alinhada e estacionária ao longo do transdutor, produz uma imagem retangular,

na qual o diâmetro horizontal coincide com a largura da fita de cristais. O transdutor

convexo é uma variação do transdutor linear, nele os cristais se dispõem em uma

superfície convexa, oferecendo uma imagem de maior ângulo que a setorial. O

transdutor setorial produz uma imagem triangular, a partir de um cristal piezoelétrico,

que é movimentado enquanto está sob estímulo elétrico. Sua vantagem é que requer

uma pequena superfície de contato. (AUGUSTO; PACHALY, 2000; JAINUDEEN;

HAFEZ, 2004; SANTOS; OLIVEIRA; LIMA, 2004).

As características ultrassônicas de um tecido dependem de sua habilidade

para refletir em maior ou menor grau as ondas sonoras. A isto se denomina

ecogenicidade (SIMÕES, 2008a). Os ecos evidentes na tela do aparelho aparecem em

uma escala de cinza que varia do preto ao branco. Segundo Cruz; Freitas (2001), os

tecidos são definidos como hiperecóicos (branco), hipoecóicos (cinza) e anecóicos

(preto). Estruturas líquidas não refletem ondas sonoras e são representadas na tela do

monitor com a cor preta, como por exemplo, as imagens dos folículos ovarianos e

vesículas embrionárias. Enquanto que os tecidos densos (p. ex., osso e cérvice em

diestro) refletem uma grande proporção de ondas transmitidas e são vistos na tela do

aparelho em tons de cinza claro ou branco. O padrão de variação entre os tons de cinza

fornece uma ecotextura que pode ser característica de um tecido durante um

determinado estado reprodutivo (GRIFFIN; GINTHER, 1992; RANTANEN, 1995).

Figura 2 – Modelos de transdutores utilizados em medicina veterinária: linear (A), convexo (B) e setorial

(C). Tipos de imagens obtidas com o transdutor linear (A1), convexo (B1) e setorial (C1). Fonte: Nutricell

Nutrientes Celulares Ltda (www.nutricell.com.br).

Os tecidos orgânicos oferecem resistência à propagação dos ultrassons. Essa

resistência é denominada impedância acústica e é proporcional à velocidade de

propagação e à densidade desses tecidos (RANTANEN; EWING, 1981). Uma vez que a

velocidade de propagação nos tecidos moles sofre variações pouco significativas, a

impedância acústica depende principalmente da densidade dos tecidos. Diferentes

valores de impedância acústica são encontrados entre os tecidos moles do corpo

(Quadro 1). São as diferenças de impedância acústica entre dois meios adjacentes que

determinam os graus de intensidade da transmissão e da reflexão dos ultrassons. Quanto

maior for esta diferença, maior será a intensidade das ondas refletidas, diminuindo a

possibilidade de propagação dos ultrassons aos tecidos situados distalmente em relação

à interface. Nos tecidos moles, a interface tem pequenas diferenças acústicas, o que

permite o retorno de ecos de intensidade variável, desta forma, estas interfaces

constituem boas fontes de informação (NYLAND et al., 2005).

Quadro 1 – Impedância acústica. Fonte: Nyland et al. (2005).

As interfaces em que um dos meios têm elevada impedância acústica (por

exemplo, as constituídas entre tecidos moles e tecido ósseo ou mineralizado) ou baixa

impedância acústica (geralmente entre tecidos moles e gases), apresentam uma

intensidade de reflexão extremamente elevada, bloqueando a progressão dos ultrassons

aos tecidos situados distalmente em relação a estas estruturas (SIMÕES; FONTES;

ALMEIDA, 2008b). Estas interfaces constituem uma importante limitação à exploração

ultrassonográfica desses tecidos.

A frequência de um transdutor é determinada pelo tamanho do cristal

contido neste. Mais especificamente, cristais grandes vibram a menores frequências e

penetram mais profundamente do que pequenos cristais que vibram a maiores

frequências (RANTANEN, 1995). Consequentemente, quanto maior for a frequência (a

resolução acústica aumenta com o aumento da frequência), menor será a sua capacidade

de penetração nos meios de propagação (SIMÕES; FONTES; ALMEIDA, 2008b).

Os ecógrafos são equipados com transdutores de variadas frequências e que

podem ser utilizados em diversas modalidades de exame (Figura 3), seja

transcutaneamente por via transabdominal, ou internamente, pelos métodos transretal e

transvaginal (ISWAR, 1995).

Tecido ou substância Impedância acústica (Z) = x 10

Kg/m

Ar 0,0004

Gordura 1,38

Água (50° C) 1,54

Cérebro 1,58

Sangue 1,61

Rim 1,62

Fígado 1,65

Músculo 1,70

Lente 1,84

Osso 7,8

Figura 3 – Exame ultrassonográfico pelo método transabdominal (A), transretal (B) e transvaginal (C) em

ovinos. Fonte: Manual ultrassom Falco Vet e

Aria et al. (2004).

As frequências mais comumente utilizadas em grandes animais são as de

3,5; 5,0; 6,0; 7,5 e 8,0 MHz. A frequência do transdutor determina a profundidade e o

tamanho da mínima estrutura visível na imagem. Assim, a visualização de estruturas

relativamente pequenas (p. ex., folículo ovariano de 4,0 mm) localizadas próximo ao

transdutor é mais adequada com transdutores de 6,0; 7,5 e 8,0 MHz por via transretal

em equinos, bovinos e pequenos ruminantes. Em contrapartida, as ondas sonoras

produzidas pelos transdutores com baixas frequências (3,5 e 5,0 MHz) utilizados por via

transabdominal penetram mais e obtêm imagens de tecidos localizados mais

profundamente, por exemplo, fetos e útero a partir dos 40 dias de gestação em caprinos

e ovinos (GRIFFIN; GINTHER, 1992; JAINUDEEN; HAFEZ, 2004). Para melhorar a

qualidade da imagem e aumentar a superfície de contato com a área avaliada, um

composto gel inócuo, inodoro e hidrossolúvel deve ser aplicado ao transdutor

(SANTOS; OLIVEIRA; LIMA, 2004).

Embora o custo do equipamento ainda seja alto, um bom volume de trabalho

pode favorecer sua aquisição pelo médico veterinário (WOLF; GABALDI, 2002). Um

passo muito importante é a seleção do equipamento mais adequado. Isto deve ser

baseado no uso principal (pesquisa versus prática privada) e se o trabalho está restrito a

pequenos ruminantes ou grandes animais.

No mercado existem equipamentos não transportáveis, transportáveis e

portáteis. Os equipamentos não transportáveis produzem imagens de excelente

qualidade e há uma grande variedade de máquinas e sondas. Suas desvantagens são alto

custo, peso e tamanho elevados, que podem dificultar seu transporte. São úteis em

centros de pesquisa para exames confiáveis, utilizando uma variedade de sondas para

uso externo e interno. Os aparelhos transportáveis são leves (6,0-20,0 Kg) e podem

funcionar com baterias ou energia elétrica, sendo facilmente transportados ao campo e

também úteis na pesquisa. Várias opções estão disponíveis no mercado. É importante

avaliar qualidade e robustez antes da aquisição do aparelho. Já as unidades de ultrassom

portáteis são uma boa escolha para Veterinários do campo, por serem muito leves (< 3,0

Kg) e funcionarem com bateria que permite uma autonomia de 2,5 a 7,0 horas de

trabalho contínuo, dependendo do fabricante, do tipo de dispositivo de visualização e da

temperatura ambiente (VIÑOLES-GIL et al., 2010).

Além disso, em virtude da grande variedade de marcas e modelos existentes

no mercado, fatores como preço, qualidade de resolução, utilidade e suporte técnico

devem ser considerados durante a seleção de um equipamento de ultrassom. Outros

fatores incluem capacidade de armazenamento de dados e acompanhamento por

transdutores multifrequenciais (RIBADU; NAKAO, 1999).

Em geral, os ecógrafos atuais possuem a capacidade de controle da variação

de intensidade dos ultrassons refletidos. Esta característica, denominada ganho geral

(gain), permite diminuir ou aumentar a intensidade geral dos ecos visualizados,

otimizando o contraste entre os diversos pontos. Estes aparelhos apresentam ainda a

possibilidade de controlar a variação de intensidade proximal ou distal, denominando-se

ganho proximal (near gain) ou ganho distal (far gain), respectivamente. Esta

compensação é particularmente útil para corrigir as diferenças de intensidade de

estruturas isoecogênicas, situadas a diferentes profundidades, pois, normalmente, os

ecos provenientes de estruturas mais profundas são de menor intensidade devido ao

efeito de atenuação da maior distância do meio percorrido (RANTANEN; EWING,

1981). A maioria dos modelos também apresenta um teclado para anotação de dados e

tem funções para obtenção de medidas (AUGUSTO; PACHALY, 2000).

2.2.2 Aplicações da ultrassonografia modo B no estudo do aparelho reprodutor feminino

2.2.2.1 Diagnóstico de gestação em pequenos ruminantes

Um diagnóstico de gestação precoce e confiável associado à quantificação

fetal é essencial para a manutenção de altos níveis de eficiência reprodutiva em um

rebanho. Uma técnica confiável para o diagnóstico de gestação permite distinguir cabras

prenhes de não-prenhes e ainda evita gastos desnecessários com alimentação, mão-de-

obra, vacinações etc.; favorece a identificação de fêmeas portadoras de problemas

reprodutivos e contribui para minimizar as perdas, principalmente de ordem econômica.

Além disso, atenção especial e suplementação alimentar podem ser oferecidas às fêmeas

prenhes e aquelas com gestação múltipla podem ser submetidas a um programa

nutricional adequado visando o máximo aproveitamento do potencial de produção de

leite e, ao mesmo tempo, suprir as exigências dos fetos em desenvolvimento, sobretudo

no terço final de gestação, fase na qual a nutrição tem maior influência sobre o peso da

cria ao nascer (FREITAS NETO et al., 2009; AMER, 2010).

Em grandes animais domésticos como a vaca e a égua, a palpação do trato

genital pelo reto facilita o diagnóstico precoce de gestação, o que não é possível em

pequenos ruminantes. Com a utilização de biotécnicas reprodutivas tais como a

sincronização e/ou indução do estro, inseminação artificial e transferência de embriões,

foi necessário o desenvolvimento de técnicas que pudessem fornecer informações

complementares, tornando-as adequadas ao sistema produtivo. Dentre estas ferramentas

de estudo encontra-se a ultrassonografia modo B, que apesar de ter sido inicialmente

considerada de alto custo para o uso em animais de fazenda, tem se revelado um método

preciso, seguro e de elevada praticidade para o diagnóstico de gestação em pequenos

ruminantes (CRUZ; FREITAS, 2001; AMER, 2010). Segundo Bicudo (2010), o exame

ultrassonográfico apresenta a cronologia mostrada na Figura 4.

O diagnóstico de gestação por ultrassonografia pode ser realizado pelas vias

transabdominal, transretal e transvaginal. No exame transabdominal, o transdutor

lubrificado com gel carboximetilcelulose é posicionado no flanco, acima do úbere, com

o animal em estação (ISWAR, 1995). O período ideal para o diagnóstico de gestação em

caprinos e ovinos através do método transabdominal é entre 40 e 75 dias de gestação.

Neste período, é possível a visualização dos placentomas, do próprio feto e seu

batimento cardíaco (ISWAR, 1995). A quantificação fetal também pode ser realizada a

partir dos 40 dias de gestação, alcançando acurácia máxima de 91,7% aos 60 dias

(MEDAN et al., 2004).

]

Figura 4 – Cronologia do diagnóstico ultrassonográfico da gestação em caprinos e ovinos. Fonte: Bicudo

(2010).

O método transretal tem sido utilizado em ovinos (CHALHOUB et al.,

2001) e caprinos (GONZÁLEZ et al., 2004), não requerendo um transdutor especial

para seu uso nestas espécies, podendo ser utilizado o transdutor linear empregado em

grandes animais. A vantagem deste método é que possibilita um diagnóstico de gestação

bastante precoce. Schrick; Inskeep (1993), utilizando um transdutor linear de 7,5 MHz

observaram fluido extra-embrionário no corno uterino ipsilateral à ovulação, no 15º dia

após a monta, em todas as ovelhas do experimento.

A ultrassonografia transvaginal é um método ainda pouco utilizado em

pequenos ruminantes, porém representa uma via de exame alternativa para quem dispõe

somente de um transdutor micro-convexo endocavitário (SANTOS; OLIVEIRA; LIMA,

2004). Aria et al. (2004) empregaram esta técnica para o diagnóstico de gestação em

cabras e ovelhas adultas, obtendo apenas dois casos falsos-negativos em comparação

com o método transabdominal, provavelmente devido à incorreta suspensão do abdome

e/ou inexperiência do operador.

A UTR também tem sido utilizada em caprinos e ovinos

como ferramenta

para determinação da idade gestacional (HAIBEL, 1988; SUGUNA et al., 2008),

detecção de patologias uterinas (LOPES JÚNIOR et al., 2004), determinação de perda

embrionária ou fetal (DIXON et al., 2007), punção folicular visando à produção in vitro

de embriões (GRAFF et al., 1999) e sexagem fetal (SANTOS et al., 2007).

2.2.2.2 Dinâmica folicular ovariana

em caprinos

A UTR é uma técnica não-invasiva, que visa o exame de estruturas em que a

identificação fisiológica é realizada de forma dinâmica (TAVERNE; WILLEMSE,

1989). O uso da ultrassonografia tem facilitado um rápido aumento no conhecimento da

fisiologia reprodutiva e seu controle. Entretanto, sua aplicação para estudos ovarianos

em caprinos está atrasada quando comparada com o seu uso em grandes animais

(RUBIANES; MENCHACA, 2003). Mesmo assim, a ultrassonografia tem alcançado

substancial aplicabilidade com relação ao exame dos ovários em caprinos, fornecendo

possibilidades de acompanhar o desenvolvimento folicular, permitindo monitorar o

crescimento e a regressão de folículos ovarianos individuais, de forma repetida no

mesmo animal (PIERSON; GINTHER, 1984). Em trabalho desenvolvido por Simões et

al. (2006) a UTR mostrou-se uma ferramenta confiável, fornecendo uma acurácia de

91,9% para a visualização ovariana em três ciclos estrais estudados. Associado a isso,

Baril et al. (2000) afirmaram que a eficiência da técnica ultrassonográfica aumenta com

a experiência do operador.

Apesar de Tenório Filho et al. (2003) afirmarem que o exame transvaginal é

mais eficiente para monitorar a dinâmica folicular na espécie caprina, pois provoca

menos desconforto do que o exame retal, a maioria dos trabalhos de ultrassonografia

ovariana em caprinos foi realizada por via transretal. Além disso, não há relatos de

prejuízo aos animais avaliados pelo método transretal (ORITA et al., 2000; MEDAN et

al., 2003; CRUZ et al., 2008; SIMÕES et al., 2008).

Todavia, as informações a respeito da atividade ovariana durante o ciclo

estral em caprinos são limitadas e recentes. Os poucos ensaios disponíveis sugerem que

o ciclo estral nesta espécie é caracterizado por um padrão de desenvolvimento folicular

semelhante à onda e com apenas uma onda associada à ovulação (PADILLA; HOLTZ,

2000; MEDAN et al., 2005), como pode ser visualizado na Figura 5.

Figura 5 – Padrão representativo de crescimento e regressão de folículos individuais durante o ciclo estral

de cabras apresentando quatro ondas de desenvolvimento folicular. As setas indicam a emergência das

ondas foliculares e os diferentes símbolos indicam diferentes folículos em cada onda folicular (Ov =

ovulação). Fonte: Medan et al. (2005).

Em estudo conduzido com cabras Serrana, Simões et al. (2006) afirmaram

que o número de ondas foliculares variou de três a cinco, em um ciclo interovulatório

regular (19-22 dias), sendo que quatro foi o número de ondas foliculares mais

comumente observado, ocorrendo em 61,3% dos ciclos avaliados. Neste mesmo ensaio

experimental, o número total de ondas por ciclo estral não afetou a duração da primeira

onda, que se apresentou sempre mais longa que as outras. Em estudo realizado com

cabras Anglo-Nubiana criadas em ambiente seco e úmido, Tenório Filho et al. (2007)

utilizando os métodos transretal e transvaginal, observaram um padrão de três a quatro

ondas por ciclo, com diferentes dias de emergência para cada onda (Quadro 2).

Uma onda folicular é caracterizada pela ocorrência de eventos distintos, são

eles: recrutamento, seleção e dominância folicular (Figura 6). O dia da emergência da

onda folicular é o primeiro dia da onda em que um grupo de folículos em crescimento é

primeiramente detectado por ultrassonografia (EVANS, 2003). Embora o termo

recrutamento seja frequentemente utilizado como sinônimo de emergência, é mais

correto defini-lo como o crescimento de folículos que se tornaram dependentes de

gonadotrofina (DRIANCOURT, 2001). Do grupo de folículos recrutados, um ou dois

folículos com ≥ 5 mm de diâmetro é/são selecionado(s) para continuar o crescimento,

com potencial para ovular. O fenômeno da dominância folicular ocorre, provavelmente,

em função da capacidade do folículo dominante de impedir o crescimento e

diferenciação dos folículos subordinados, de escapar do processo de atresia, além de

suprimir a emergência de uma nova onda folicular, não havendo recrutamento de novos

folículos (EVANS, 2003).

Quadro 2 – Dia da emergência da onda folicular de cabras Anglo-Nubiana apresentando ciclos estrais de

três ou quatro ondas. Fonte: Adaptado de Tenório Filho et al. (2007).

Figura 6 – Principais eventos que ocorrem durante uma onda folicular ovulatória: recrutamento, seleção,

dominância e ovulação. Fonte: Adaptado de Driancourt (2001).

A existência de dominância folicular em caprinos manteve-se controversa

por um longo período. Contudo, atualmente, mais dados suportam o conceito de que a

dominância folicular é também operativa na espécie caprina. Ginther; Kot (1994)

relatam que a dominância folicular em caprinos é evidente apenas na primeira e na

última onda, e ainda assim, de forma menos intensa que em bovinos. A ocorrência de

dominância folicular reduzida ou ausente em ondas intermediárias de ciclos estrais de

de ondas/ciclo estral Onda folicular

Dia da emergência da onda

(Média ± EPM)

Primeira 1,0 ± 0,0

Segunda 6,7 ± 0,5

Três

Terceira 14,0 ± 1,2

Primeira 1,1 ± 0,2

Segunda 4,5 ± 0,4

Quatro

Terceira 9,5 ± 0,9

caprinos tem sido descrita (ORITA et al., 2000). O conceito de co-dominância foi

introduzido para explicar que dois folículos grandes podem ser observados em cada

onda, porém estudos específicos a respeito deste aspecto ainda são escassos

(RUBIANES; MENCHACA, 2003).

A ultrassonografia também permite a detecção da ovulação, caracterizando o

padrão de tamanho de folículos pré-ovulatórios (GONZALEZ-BULNES et al., 2004a).

Neste estudo, os folículos pré-ovulatórios foram caracterizados por apresentar diâmetro

médio de 7,8 ± 0,4 mm e contorno irregular, com presença de artefatos e

descontinuidade nos limites do tecido ovariano, em comparação com folículos grandes

anovulatórios. A imagem do antro não é absolutamente anecóica, havendo difusão e

imagem hipoecóica heterogênea com reflexão de artefatos ecóicos. A ovulação é

confirmada pelo desaparecimento do folículo pré-ovulatório e visualização de uma

estrutura heterogênea, altamente ecogênica e com diâmetro máximo de 8,6 mm ± 0,3

mm, denominada corpo hemorrágico (GONZALEZ-BULNES et al., 2004a).

Trabalhando com cabras Shiba, Medan et al. (2003) relatam que a ovulação ocorreu

sempre na última onda, na qual o folículo ovulatório apresentou diâmetro máximo

significativamente maior em comparação com os maiores folículos das ondas anteriores.

Quando duplas ovulações são observadas, estas são normalmente oriundas de folículos

derivados da mesma onda, embora em alguns casos estas derivem de folículos de duas

ondas consecutivas

(GINTHER; KOT, 1994).

Aproximadamente três dias pós-ovulação, um corpo lúteo (CL) pode ser

detectado ultrassonograficamente. O CL em formação é menos ecogênico que em

estádios mais avançados. Já o CL maduro é observado como uma estrutura cinza escuro,

mais ecogênica, com bordas marcantes e distintas. Em alguns corpos lúteos observa-se

uma cavidade central anecóica; a presença desta cavidade não mostra nenhuma relação

com a concentração de progesterona (DE CASTRO et al., 1999).

A influência do CL sobre o desenvolvimento folicular tem sido investigada

(LASSALA et al., 2004). Estes autores relatam a ocorrência de ondas foliculares em

fêmeas caprinas apresentando CL ou não, sendo verificado um número de três a quatro

ondas, independente da presença de estrutura luteal. Neste mesmo trabalho, o

recrutamento folicular, a duração da dominância folicular e o intervalo entre ondas não

foram alterados pela presença ou ausência de CL.

A maioria dos trabalhos que emprega exames ultrassonográficos para

avaliação ovariana em caprinos é realizada durante a estação reprodutiva (ORITA et al.,

2000; GONZALEZ-BULNES et al., 2005). Em estudo pioneiro, Cruz; Rondina; Freitas

(2003) verificaram que cabras Anglo-Nubiana e Saanen criadas em clima tropical,

exibindo anestro e inatividade ovulatória, mantiveram atividade ovariana, que o

desenvolvimento folicular ocorreu a intervalos regulares de 4 a 6 dias entre ondas e que

os folículos antrais continuaram a crescer até atingir o tamanho equivalente ao de

folículos pré-ovulatórios.

Mais recentemente, a técnica ultrassonográfica foi utilizada para selecionar

cabras doadoras de embriões em um programa de transgênese que apresentassem

resposta superovulatória (≥ 5 corpos hemorrágicos), imediatamente antes da colheita de

embriões por laparotomia (TEIXEIRA et al., 2008).

2.3 Tratamentos hormonais de estimulação ovariana em caprinos

Na produção in vivo ou in vitro de embriões, os protocolos tradicionais

utilizados comercialmente para estimulação ovariana em caprinos consistem no uso

prolongado (11-18 dias) de dispositivos vaginais impregnados com

progestágeno/progesterona associados à administração de gonadotrofinas, anteriormente

ou no momento da retirada do dispositivo (MENCHACA; PINCZAK; RUBIANES,

2002). Os implantes vaginais servem para bloquear a fase de crescimento folicular

terminal e evitar a ovulação antes da retirada do implante, enquanto que o suporte

fornecido pelas gonadotrofinas é importante para aumentar o número de folículos em

crescimento capazes de produzir oócitos viáveis.

Em programas de transferência de embriões, a estimulação das doadoras tem

sido realizada principalmente através do uso de hormônio folículo-estimulante (FSH) ou

com altas doses (comumente, mais de 1000 UI) de gonadotrofina coriônica equina

(eCG) (REGUEIRO et al., 1999). Em geral, o FSH tem mostrado ser superior à eCG, no

que se refere à taxa de ovulação e produção de embriões (ARMSTRONG et al., 1983).

Diante disso, o uso de FSH em protocolos estimulatórios tem sido preferido.

Quando associada à colheita oocitária por laparoscopia (COL) para a

produção in vitro de embriões (PIV), a estimulação ovariana pela utilização de FSH

promove um aumento no número de folículos puncionados e oócitos recuperados,

possibilitando assim, um aumento na eficiência da técnica (LOCATELLI et al., 2004).

A despeito deste efeito positivo, um dos fatores mais importantes ligados à estimulação

ovariana é a grande variabilidade da resposta estimulatória dos animais tratados

(MENCHACA; PINCZAK; RUBIANES, 2002). De acordo com Gonzalez-Bulnes et al.

(2004b), esta variabilidade pode ocorrer devido a fatores extrínsecos (fonte, grau de

pureza das gonadotrofinas e protocolo de administração das mesmas) ou intrínsecos

(raça, idade, estado nutricional e reprodutivo). A presença de um folículo grande

(dominante) é outro fator relacionado, exercendo efeito deletério sobre o recrutamento

folicular, observando-se uma resposta estimulatória dependente do número de pequenos

folículos no início do tratamento com FSH exógeno (RUBIANES; MENCHACA,

2003).

A dose total de FSH administrada de uma só vez conduz a um menor

número de folículos que se esta dose for dividida em várias injeções (KELLY;

KLEEMAN; WALKER, 2005). Isto ocorre porque esta gonadotrofina apresenta meia-

vida curta, cerca de 110 minutos (RIESENBERG et al., 2001). Assim, para manter a

atividade biológica do FSH de origem porcina ou ovina, a dose total é administrada em

três a seis aplicações, intervaladas de 12 horas, durante os últimos três ou quatro dias do

tratamento progestágeno (BARIL; BREBION; CHESNÉ, 1993).

A fim de simplificar o procedimento de estimulação ovariana, nesta última

década foram propostos protocolos que combinam uma alta dose (80-140 mg) de FSH

com baixa dose (200-300 UI) de eCG, administradas num mesmo momento

(BALDASSARRE et al., 2002; PIERSON et al., 2004; GIBBONS et al., 2007). Este

protocolo é denominado única dose. Em estudo realizado por Baldassarre et al. (2002),

não foram descritas diferenças entre o tratamento única dose em comparação às

múltiplas doses decrescentes de FSH isoladamente, no que se refere à quantidade de

folículos e oócitos colhidos. A base para a associação FSH-eCG é a seguinte: a alta dose

de FSH é hábil para recrutar, mas não para sustentar o desenvolvimento de um grupo de

folículos FSH-responsivos, enquanto a longa meia-vida da eCG (JAINUDEEN;

HAFEZ, 2004) possibilita a continuação do crescimento folicular iniciado pela alta dose

de FSH.

Atualmente, ainda não se tem consenso em relação à dose ótima de

gonadotrofina, uma vez que esta pode variar em função da raça, produção da fêmea e

condições do meio (BARIL, 2006). Além disso, a dose total de hormônios

gonadotróficos administrada por cabra doadora tem um efeito não somente sobre o

número de folículos puncionados e oócitos colhidos, mas também sobre sua

competência ao desenvolvimento. Portanto, é desejável determinar a quantidade de FSH

ou FSH-eCG, bem como o regime de aplicação a ser usado em cada situação. Existem

trabalhos empregando diferentes doses de FSH, entre os quais se utilizam 133 mg NIH-

FSH-P1 distribuídos em múltiplas doses (BALDASSARRE et al., 2002) e 80 mg NIH-

FSH-P1 associados a 300 UI eCG (GIBBONS et al., 2007) em regime de única dose.

Estes diferentes tratamentos de estimulação anteriores à COL determinam o

estado e o tamanho dos folículos presentes no ovário no momento da colheita oocitária.

Neste último aspecto, é de especial importância que para colher oócitos mais

competentes ao desenvolvimento, é necessário puncionar folículos maiores que 3 mm

de diâmetro, pois a competência oocitária está condicionada por proteínas e fatores de

maturação que são sintetizados unicamente durante a etapa final de crescimento

folicular (CROZET; AHMED-ALI; DUBOS, 1995).

3 JUSTIFICATIVA

Os caprinos naturalizados são de valiosa importância devido à grande

adaptadabilidade que os mesmos apresentam nas condições do semi-árido Nordestino,

destacando-se a raça Canindé, por sua rusticidade, prolificidade e boa produção leiteira.

Dado seu valor genético, a conservação do material biológico destes animais tem sido

buscada por meio da organização de bancos de germoplasma, que têm a produção de

embriões como sua principal fonte. No entanto, o grande número de injeções de FSH é

um fator limitante, agregando custos à esta biotécnica, o que tem impulsionado, nos

últimos anos, a busca por tratamentos simplificados. Associado a isso, tem-se

encontrado grande variabilidade na resposta ovariana em cabras estimuladas, o que

torna difícil assegurar a quantidade e a qualidade dos oócitos a serem obtidos.

Neste contexto, o estudo do padrão de desenvolvimento da população

folicular durante a etapa de estimulação pode ser um fator importante, uma vez que o

tamanho folicular está diretamente relacionado com o diâmetro do oócito e sua

capacidade de resultar em embriões no estádio de blastocisto (ARLOTTO et al., 1996).

4 HIPÓTESE CIETÍFICA

Tratamentos hormonais mais práticos de estimulação ovariana promovem

um padrão de desenvolvimento folicular, em cabras da raça Canindé, similar ou superior

aos tratamentos tradicionais utilizados.

5 OBJETIVOS

5.1 Objetivo geral

 Comparar diferentes tratamentos gonadotróficos de estimulação ovariana em

cabras da raça Canindé em relação à população folicular avaliada por meio

da ultrassonografia transretal.

5.2 Objetivos específicos

 Estudar o desenvolvimento folicular em cabras estimuladas hormonalmente,

comparando protocolos mais práticos com os tradicionalmente utilizados;

 Contar e mensurar todos os folículos ≥ 2 mm presentes em ambos os ovários

de cabras Canindé submetidas a diferentes tratamentos hormonais de

estimulação ovariana.

6 CAPÍTULO 1

Resposta folicular a diferentes tratamentos de estimulação hormonal em cabras Canindé

monitoradas por ultrassonografia

(Follicular response to different hormonal stimulation treatments in

ultrasonographically monitored Canindé goats)

Periódico: Animal Reproduction Science (Submetido em maio de 2010).

Fator de impacto: 1,89

Resumo