( PDF ) Resistência anti-helmíntica em caprinos no município de Mossoró-RN

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WESLEY ADSON COSTA COELHO

RESISTÊNCIA ANTI-HELMÍNTICA EM CAPRINOS NO

MUNICÍPIO DE MOSSORÓ-RN

MOSSORÓ - RN

2009

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WESLEY ADSON COSTA COELHO

RESISTÊNCIA ANTI-HELMÍNTICA EM CAPRINOS NO

MUNICÍPIO DE MOSSORÓ-RN

Dissertação apresentada à Universidade Federal

Rural do Semi-Árido – UFERSA, como parte das

exigências para a obtenção do título de Mestre em

Ciência Animal.

Orientadora: Prof

. Drª. Sílvia Maria Mendes Ahid

Co-orientador: Dr. Luiz da Silva Vieira

MOSSORÓ – RN

2009

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Ficha catalográfica preparada pelo setor de classificação e

catalogação da Biblioteca “Orlando Teixeira” da UFERSA

C672r Coelho, Wesley Adson Costa

Resistência anti-helmíntica em caprinos no município de Mossoró/RN. /

Wesley Adson Costa Coelho. -- Mossoró: 2009.

58f.: il.

Dissertação (Mestrado em Ciência Animal: Área de

concentração em Parasitologia) – Universidade Federal Rural

do Semi-Árido. Pró-Reitoria de Pós-Graduação.

Orientador: Prof.ª Dra. Sc. Silvia Mª Mendes Ahid

Co-orientador: Prof.º D.Sc. Luiz da Silva Vieira

1.Caprinos. 2.Resistência. 3.Anti-helmínticos. Título.

CDD:636.39

Bibliotecária: Marilene Santos de Araújo

CRB-5/1033

WESLEY ADSON COSTA COELHO

RESISTÊNCIA ANTI-HELMÍNTICA EM CAPRINOS NO

MUNICÍPIO DE MOSSORÓ-RN

Dissertação apresentada à Universidade Federal

Rural do Semi-Árido – UFERSA, como parte das

exigências para a obtenção do título de Mestre em

Ciência Animal.

APROVADA EM: __14_/_01_/_2009_

BANCA EXAMINADORA

_________________________________________________

Prof

. Drª. Sílvia Maria Mendes Ahid (UFERSA)

Presidente e Orientadora

________________________________________________

Dr. Luiz da Silva Vieira (EMBRAPA CAPRINOS/UFERSA)

Primeiro Membro e Co-orientador

________________________________________________

Prof

. Drª. Francely Martinelli Fernandes (UNESP)

Segundo Membro

AGRADECIMENTOS

A Deus por me permitir chegar ao fim de mais uma etapa, por estar presente

nos momentos mais atribulados, por ser a luz da minha vida, por guiar os meus passos e

fazer parte de mais uma conquista na minha vida;

À minha família que sempre me apoiou em todas as minhas decisões, por ter

acompanhado passo a passo meu crescimento profissional;

À minha namorada Jamile Carine dos Santos que sempre esteja ao meu lado;

A minha orientadora, conselheira e amiga Sílvia Maria Mendes Ahid, com

quem eu posso contar a qualquer momento;

Ao meu amigo, também co-orientador, Luiz da Silva Vieira por toda ajuda e

conhecimentos repassados;

A empresa BIOFARM a qual forneceu todo patrocínio, bem como todos os

medicamentos que foram necessários, com toda simpatia e atenção;

Ao professor Alexsandro Maia pela ajuda na análise estatística;

Ao meu amigo Idalécio Pacífico da Silva pelo grande auxílio nas coletas;

A minha amiga Zuliete Aliona Araújo de Souza Fonseca pelo grande auxílio

nas coletas e processamento das amostras.

“Aquele que habita no esconderijo do altíssimo, à sombra do

onipotente descansará. Direi do Senhor: Ele é o meu Deus, o

meu refúgio a minha fortaleza e nele confiarei.”

(Salmo 91)

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 - Prevalência (%) de H. contortus em caprinos, resistentes ao albendazole e

ivermectina em propriedade do município de Mossoró-RN, segundo classificações

RESO.....................................................................................................................................

Tabela 2 - Prevalência (%) de Trichostrongylus sp em caprinos, resistentes ao

albendazole e ivermectina em propriedade do município de Mossoró-RN, segundo

classificações RESO..............................................................................................................

Tabela 3 - Rebanhos caprinos do Município de Mossoró-RN com presença de resistência

anti-helmíntica ao albendazole e a ivermectina....................................................................

Tabela 4 - Prevalência de nematódeos de caprinos resistentes a ivermectina e ao

albendazole............................................................................................................................

Tabela 5 - Redução na contagem de ovos nas fezes (RCOF) de caprinos tratados com

ivermectina e albendazole após 10 dias pós-vermifugação.................................................

Tabela 6 - Composição da cultura de larvas, após 10 dias da administração dos

tratamentos, em caprinos nas propriedades estudadas..........................................................

Tabela 7 – Coordenadas geografia via satélite das 30 propriedades visitadas......................

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 - Mapa do Estado do Rio Grande do Norte dividido por Mesorregiões.................

Figura 2 A, B - Laboratório de Parasitologia Animal da UFERSA......................................

Figura 3 A, B - Propriedades rurais de caprinos no município de Mossoró-RN...................

Figura 4 A, B - Caprino jovem marcado com colar..............................................................

Figura 5 A- Coleta de fezes em caprino diretamente da ampola retal; B- condicionamento

da amostra coletada em sacos plásticos................................................................................

Figura 6 A - GPS, Garmin, modelo Etrex H; B- Aquisição das coordenadas geográficas

por uso de GPS......................................................................................................................

Figura 7 A, B,C- Extração de larvas da coprocultura do tratamento controle, ivermectina

e albendazole.........................................................................................................................

Figura 8 - Tela inicial do programa estatístico RESO (1989)...............................................

Figura 9 - Vista aérea do município de Mossoró-RN na altitude de 73,6 Km. Pontos

verdes sinalizando as 30 propriedades visitadas...................................................................

Figura 10- Vista aérea do município de Mossoró-RN na altitude de 73,6 Km. Pontos

brancos sinalizando as 27 propriedades resistentes ao albendazole .....................................

Figura 11- Vista aérea do município de Mossoró-RN na altitude de 73,6 Km. Pontos

vermelhos sinalizando as 13 propriedades resistentes a ivermectina....................................

LISTA DE SIGLAS

OPG - Ovos por grama de fezes;

OPGt -Média do número de ovos por grama de fezes do grupo de animais tratados;

OPGc -Média do número de ovos por grama de fezes do grupo controle;

PCR - Reação da Cadeia de Polimerase;

RCOF -Teste de redução da contagem de ovos por grama de fezes;

R. A. -Resistência Anti-helmíntica;

WAAVP -World Association for the Advancement of Veterinary Parasitology.

RESUMO

Tendo assumido durante séculos área de vocação pecuária o Nordeste brasileiro atualmente

destaca-se na caprinocultura, na qual as helmintoses gastrintestinais estão entre os maiores

problemas. Mesmo com o surgimento de drogas anti-helmínticas de amplo espectro de ação, o

controle dos parasitos vem sendo prejudicado pela resistência parasitária. O objetivo desse

trabalho foi verificar a sensibilidade dos nematódeos de caprinos a ação dos vermífugos

ivermectina 1% e albendazole 10%, como também determinar o perfil das propriedades que

apresentou helmintos resistentes aos princípios ativos em questão. O trabalho foi realizado no

período de janeiro a novembro de 2008 em 30 criações de caprinos localizadas no município

de Mossoró-RN. Em cada propriedade, previamente positiva para OPG, foram selecionados

45 animais, os quais foram divididos em três grupos: grupo I tratamento albendazole, grupo

II ivermectina e Grupo III, sem tratamento. Foram vermifugados e 10 dias pós-tratamento

realizou-se a coleta de fezes, diretamente da ampola retal, e processamento das amostras pelo

método de OPG e coprocultura. As coordenadas geográficas de todas as propriedades foram

obtidas por GPS. Os dados obtidos foram analisados pelo programa estatístico RESO. Das

propriedades estudadas o Haemonchus contortus, teve percentual de população de helmintos

resistentes ao albendazole em 90%, enquanto que, à ivermectina 36,6%. Este por sua vez, foi

o mais prevalente em todos os grupos tratados. Já o Trichostrongylus sp, foi encontrado em

70% das propriedades e seu percentual da população de helmintos resistentes a ivermectina

foi de 33,3%, enquanto o albendazole, 42,8%. A redução na contagem de ovos nas fezes

(RCOF) 10 dias pós-tratamento com ivermectina e albendazole, variou entre 43% a 100%,

29% a 100% respectivamente. Por ordem de resistência o Haemonchus contortus foi o que

apresentou maior índice, seguido pelos genêros Trichostrongylus sp e Oesophagostomun sp.

Os dados do GPS revelaram que as 27 propriedades resistência ao albendazole estão

largamente distribuídas por todo município, concentrando-se nas regiões oeste da cidade de

Mossoró-RN. As 13 propriedades resistentes a ivermectina estão distribuídas no município,

mas em menor proporção que o albendazole. Todas as propriedades resistentes a ivermectina

foram resistentes albendazole simultaneamente. O perfil das propriedades demonstrou que os

anti-helmínticos mais utilizados pertenciam aos grupos dos benzimidazóis (63,3%),

avermectinas (33,3%), em menor escala os imidazóis (3,3%). Nestas propriedades não se

adotavam manejo correto dos animais como também havia pelo criador, desconhecimento da

dose correta e uso dos vermífugos.

Palavras-Chave: caprinos; resistência; anti-helmínticos.

ABSTRACT

For many centuries the Brazilian Northeast area is vocation in the production of goats, in the

which the gastrointestinal nematodes is among the largest problems. Even with the

appearance of anthelmintic drugs of wide action spectrum, the control of the parasites has

been harmed by the anthelmintic resistance. The purpose of this study was to verify the

sensibility of the goat nematodes the action of the substance ivermectin 1% and albendazole

10% as well as to determine the profile of the properties that with resistant. The work was

accomplished in 30 creations of goats located into Mossoró city between January to

November 2008, where each property was divided in three groups, a control and two

treatments. The obtained data were analyzed by statistical program RESO. In each property

45 animals were selected, divided in three groups: group I treatment benzimidazole, I group II

ivermectin and I Group III, without treatment. The animals was drugged and 10 days powder-

treatment was collection of feces, directly of the rectal flask and processing of the samples for

the method of OPG and larva culture. The geographical coordinates of all the properties were

obtained by GPS. The obtained data were analyzed by statistical program RESO. In studied

the Haemonchus contortus, was the more prevalence in all the treated groups, and the

population of resistant helmints to albendazole was 90% of the properties, while, the

ivermectina 36.6%. Already Trichostrongylus sp, was found in 70% of the properties and

your percentile of the population of resistant helmintos the ivermectina was of 33.3%, while

the albendazole, 42.8%. The reduction in the count of eggs in the feces (RCEF) after 10 days

of the treatment with ivermectina and albendazole, varied among 43% to 100%, 29% to 100%

respectively. In resistance order the gender Haemonchus contortus was larger index, followed

for Trichostrongylus sp and Oesophagostomun sp. The data of GPS revealed that 27

properties resistance to the albendazole were broadly distributed for every municipal district,

concentrating at the areas west of the city of Mossoró-RN. The 13 resistant properties the

ivermectin were distributed in the municipal district, but in smaller proportion that

albendazole. In all resistant properties the ivermectin were simultaneously resistant

albendazole. The profile of the properties demonstrated that the anthelmintic used was groups

of the benzimidazole (63.3%), ivermectin (33.3%), in smaller scale the imidazol (3.3%). In

these properties were not adopted correct handling of the animals as well as ignorance of the

correct dose e drugs anthelmintic. The profile of the properties demonstrated that the

anthelmintic used was groups of the benzimidazóis (63.3%), ivermectin (33.3%), in smaller

scale the imidazol (3.3%). In these properties were not adopted correct handling of the

animals as well as ignorance of the correct dose e drugs anthelmintic.

Key-Words: goats; resistance; anthelmintic.

SUMÁRIO

1 INTRODUÇÃO..............................................................................................................

2 REVISÃO DE LITERATURA.....................................................................................

2.1 IMPORTÂNCIA DAS HELMINTOSES GASTRINTESTINAIS PARA A

CAPRINOCULTURA........................................................................................................

2.2 AGENTES ETIOLÓGICOS ........................................................................................

2.2.1 Haemonchus contortus (RUDOLPHI, 1803)...........................................................

2.2.2 Trichostrongylus sp (LOSS, 1905)............................................................................

2.2.3 Oesophagostomum sp (MOLIN, 1861).....................................................................

2.3 DROGAS ANTI-HELMÍNTICAS..............................................................................

2.3.1 Benzimidazóis............................................................................................................

2.3.1.1 Mecanismo de ação..................................................................................................

2.3.1.2 Mecanismo de resistência.........................................................................................

2.3.2 Lactonas Macrocíclicas............................................................................................

2.3.2.1 Mecanismo de ação..................................................................................................

2.3.2.2 Mecanismo de resistência.........................................................................................

2.4 RESISTÊNCIA ANTI-HELMÍNTICA.........................................................................

2.4.1 Histórico da resistência aos benzimidazóis em caprinos........................................

2.4.2 Histórico da resistência as lactonas macrocíclicas..................................................

2.4.3 Estabelecimento da resistência anti-helmíntica.......................................................

2.4.4 Diagnóstico da resistência anti-helmíntica...............................................................

2.4.4.1 Testes in vivo............................................................................................................

2.4.4.1.1 Teste controlado....................................................................................................

2.4.4.1.2 Teste de redução na contagem de ovos nas fezes.................................................

2.4.4.2 Testes in vitro............................................................................................................

2.4.4.2.1 Teste de eclosão de ovos.......................................................................................

2.4.4.2.2 Teste genético.......................................................................................................

2.4.5 Controle da resistência..............................................................................................

3 OBJETIVOS....................................................................................................................

3.1 GERAL..........................................................................................................................

3.2 ESPECÍFICOS..............................................................................................................

4 MATERIAL E MÉTODOS...........................................................................................

4.1 LOCAL DE ESTUDO...................................................................................................

4.2 PROPRIEDADES.........................................................................................................

4.3 PRINCÍPIOS ATIVOS..................................................................................................

4.4 ANIMAIS EXPERIMENTAIS......................................................................................

4.5 POSOLOGIA NOS TRATAMENTOS.........................................................................

4.6 AMOSTRAS FECAIS....................................................................................................

4.7 AQUISIÇÃO DAS CORDENADAS GEOGRAFICAS DAS PROPRIEDADES....

4.8 EXAMES PARASITOLÓGICOS................................................................................

4.9 TESTE DE REDUÇÃO DA CONTAGEM DE OVOS POR GRAMA DE FEZES...

4.10 ANÁLISE DOS DADOS.............................................................................................

5 RESULTADOS E DISCUSSÃO.....................................................................................

6 CONCLUSÕES...............................................................................................................

REFERÊNCIAS................................................................................................................

APÊNDICE........................................................................................................................

ANEXO...............................................................................................................................

1 INTRODUÇÃO

No semi-árido brasileiro, o Nordeste tem assumido durante séculos, área de vocação

pecuária, especialmente para a exploração de ruminantes domésticos. Dentre as várias

alternativas encontradas para a exploração agropecuária da região, destaca-se a caprinocultura

como uma alternativa econômica viável de geração de emprego e renda (SIMPLÍCIO, 2006),

sendo uma das principais atividades econômicas das áreas mais secas do Nordeste (COSTA

JÚNIOR et al., 2005).

No estado do Rio Grande do Norte o rebanho está em ascensão, sendo que em 2003, a

população de caprinos era 406 mil (IBGE, 2003). Atualmente o Estado destaca-se na

produção de carne e leite (ACOSC, 2006). No entanto, a caprinocultura sofre grandes perdas

econômicas devido às verminoses, que dentre os fatores que a favorecem, estão o manejo,

estado fisiológico, condições climáticas, lotação e nutrição (MATTOS; CASTRO, 2002).

O parasitismo por nematódeos gastrintestinais tem-se constituído em um dos

principais fatores limitantes à exploração da caprinocultura, sendo um aspecto importante no

manejo sanitário, pelo fato desses animais serem relativamente sensíveis a endoparasitas,

principalmente os gastrintestinais, tais como Haemonchus contortus, Trichostrongylus sp,

Cooperia sp, Oesophagostomum columbianum, Trichuris sp, Cysticercus sp e Strongyloides

papilosus, os quais são responsáveis por significativas perdas econômicas, em decorrência da

elevada taxa de mortalidade de animais e atraso no crescimento (COSTA JÚNIOR et al.,

2005). Na região Oeste do Rio Grande do Norte os helmintos de maior prevalência são

Strongyloides sp, seguidos por Haemonchus sp, Trichostrongylus sp, e,em menor escala

Oesophagostomum sp (AHID et al., 2008).

A estacionalidade da incidência de helmintos é um sério problema para a produção de

caprinos a pasto, sendo que os nematódeos são transmitidos de forma mais intensa entre

meados do período chuvoso ao início do período seco, tendo como causa a presença de

condições de temperatura e umidade ideais à sobrevivência dos parasitos nas pastagens,

aumentando a intensidade de reinfecção nos animais nesse período (COSTA JÚNIOR et al.,

2005).

O controle dos parasitos vem sendo realizado através do uso de anti-helmínticos

pertencentes a diversos grupos químicos, na maioria das vezes, sem considerar os fatores

epidemiológicos predominantes na região, os quais interferem diretamente na população

parasitária ambiental e, conseqüentemente, na infecção do rebanho (VIEIRA;

CAVALCANTE, 1999).

Vários princípios ativos vêm sendo utilizados no tratamento de nematódeos de caprino

os quais são classificados em quatro grandes grupos conforme seu mecanismo de ação,

espectro de atividade e eficácia: Grupo I- Benzimidazóis e Pró-benzimidazóis; Grupo II-

Imidazóis e Pirimidinas, Grupo III- Salicilanilidas e Substitutos nitrofenólicos; Grupo IV-

Organofosforados; Grupo V – Lactonas macrocíclicas (MATTOS; CASTRO, 2002).

Em 1981 surgiu um grupo químico de anti-helmíntico como alternativa, as

avermectinas, considerado até hoje, como meio potente para o controle desses parasitos

Entretanto, a resistência a ivermectina, a droga mais utilizada deste grupo, tem sido registrada

em caprinos parasitados, principalmente por Ostertagia circumcincta e Haemonchus

contortus em vários países (VARADY et al., 1993 ; TERRIL et al., 2001 ; GATONGI et al.,

2003).

O estabelecimento da resistência é amplamente influenciado pelo tamanho e

diversidade da população como também pela taxa de mutação do gene envolvido, sendo que o

aparecimento de cepas de nematódeos resistentes a anti-helmínticos pode ser explicado pela

teoria da evolução, que tem como ponto básico a seleção natural (MELO, 2005).

Diferentes esquemas de tratamento são utilizados a fim de reduzir ou eliminar os

efeitos adversos do parasitismo. Dos esquemas de controle, o estratégico é o mais utilizado, o

que consiste na aplicação de tratamentos estratégicos com um anti-helmíntico de alta eficácia,

antes que ocorra um aumento significativo da população de parasitos em épocas do ano

predeterminadas. Um dos grandes riscos deste controle refere-se à pequena ou nenhuma

população de nematódeos em refúgio durante a época seca. Este fato aliado a utilização de

tratamento anti-helmínticos nestes períodos possibilita que a resistência anti-helmíntica

desenvolva-se rapidamente (SANGSTER, 2001).

Em virtude da importância do assunto e aliado ao fato que estar diretamente ligado ao

fator econômico da região, este trabalho teve por objetivo detectar a ocorrência de resistência

aos anti-helmínticos pertencentes ao grupo das lactonas macrocíclicas (ivermectina 1%) e

benzimidazóis (albendazole 10%) em nematódeos gastrintestinais de caprinos no município

de Mossoró-RN.

2 REVISÃO DE LITERATURA

2.1 IMPORTÂNCIA DAS HELMINTOSES GASTRINTESTINAIS PARA A

CAPRINOCULTURA

O Brasil possui cerca de 10,31 milhões de cabeças de caprinos, sendo que a grande

concentração está na região Nordeste que detém 93,0%. O parasitismo por nematódeos

gastrintestinais tem-se constituído em um dos principais fatores limitantes à exploração da

caprinocultura, sendo um aspecto importante no manejo sanitário, pelo fato desses animais

serem relativamente sensíveis a endoparasitas (ANUALPEC, 2006).

Os caprinos do Nordeste brasileiro são parasitados por nematódeos gastrintestinais dos

gêneros Haemonchus sp, Trichostrongylus sp, Strongyloides sp, Cooperia sp, Bunostomum

sp, Trichuris sp, Skrjabinema sp e Oesophagostomun sp (VIEIRA et al., 1998). Desses

gêneros de parasitos os de maior importância econômica são Haemonchus sp,

Trichostrongylus sp, Oesophagostomun sp e Strongylóides sp (BRITO et al., 1996). O

Haemonchus sp destaca-se em importância, visto que, além da sua alta prevalência no Brasil

apresenta grande patogenicidade (AMARANTE, 2005).

De acordo com estudos realizados no Brasil os parasitos do gênero Haemonchus sp é

o mais prevalente, tanto em ovinos quanto em caprinos, encontrado no estado do Ceará

(MELO et al., 1998 ; BEVILAQUA ; MELO, 1999 ; VIEIRA ; CAVALCANTE, 1999), em

Pernambuco (CHARLES et al., 1989 ; SANTOS et al., 1993;), na Bahia (BARRETO ;

SILVA, 1999), na região sul do Brasil (RAMOS et al., 1999 ; FARIAS et al., 1997 ;

CUNHA-FILHO et al., 1999), na América Latina (WALLER et al., 1996). Mundialmente

Haemonchus sp é o gênero mais comum no Sul da África (BOOMKER et al., 1994);

Haemonchus contortus na Malásia e Nigéria (FAKAE; CHIEJINA, 1995); H. contortus,

Trichostrongylus sp e Oesophagostomum sp no Gâmbia e Paquistão (FRISTCHE et al., 1993)

e H. contortus e Oesophagostomum columbianum na Mauritânia (JACQUIET et al., 1995).

O H. contortus apresenta alto grau de hematofagismo resultando na incapacidade do

hospedeiro de compensar as perdas de sangue. O animal com elevado nível de infecção

parasitária pode perder até 145 ml de sangue por dia, conseqüentemente, desenvolve um

quadro de anemia grave, em um curto período de tempo (BOWMAN, 1995).

A infecção é diagnosticada através da contagem de ovos por gramas de fezes pela

técnica descrita por Gordon & Whitlock (1939) utilizando-se dois gramas de fezes de caprinos

ou ovinos diluídos em 58 ml de solução hipersaturada de NaCl ou açúcar e cultura de larvas

pela técnica descrita por Roberts & O‟Sullivan (1950).

2.2 AGENTES ETIOLÓGICOS

2.2.1 Haemonchus contortus (RUDOLPHI, 1803)

Classificado no filo Nematelminto, Classe Nematoda; Superfamília

Trichostrongyloidea; Genero Haemonchus; Espécie Haemonchus contortus, é um parasito que

afeta ruminantes principalmente a espécie caprina. Morfologicamente possui cavidade bucal

armada com uma lanceta. O macho apresenta um raio dorsal assimétrico em sua bolsa e

espículos curtos e cuneiformes. O útero branco e repleto de ovos da fêmea se espirala em

torno do intestino repleto de sangue, dando origem ao chamado „efeito do poste de barbeiro‟.

A vulva localiza-se a aproximadamente ¼ do comprimento do corpo antes da extremidade da

cauda, a prevalência de diversas configurações das abas vulvares varia entre as espécies e

subespécies (GEORGI, 1998).

Possui ciclo evolutivo direto. Os ovos são eliminados nas fezes e em condições

favoráveis (18 a 26°C e 80 a 100% umidade) se desenvolvem no pasto em terceiro estágio

infectante (L3) em aproximadamente 5 dias. Em condições frias o desenvolvimento pode ser

retardado por semanas ou meses. A temperatura ótima para a sobrevivência das larvas é de 18

a 26°C (ONYIAH; ARSLAN, 2005). Em baixas temperaturas as larvas sobrevivem por

longos períodos devido ao seu baixo metabolismo e reservas energéticas. A umidade é um

fator importante para a sobrevivência da larva, em condições secas, tais como no semi-árido

brasileiro, as larvas não sobrevivem. Após a ingestão e desencapsulamento no rumem, as

larvas sofrem duas mudas. Exatamente antes da muda final desenvolvem a lanceta perfurante

que lhes permite a obtenção de sangue dos vasos da mucosa do abomaso, local de fixação do

parasito. Quando adulto, movem-se livremente na superfície da mucosa. O período pré-

patente é de duas a três semanas (AROSEMENA et al., 1999).

Macroscopicamente, os adultos podem ser identificados devido a sua localização

específica no abomaso e seu tamanho, que varia de 1,1 a 2,7 cm de comprimento.

Microscopicamente, o macho apresenta um lobo dorsal assimétrico e espículos em ganchos.

Nas fêmeas, observam-se os ovários brancos enrolando-se em espiral ao redor do intestino

repleto de sangue (LICHTENFELS et al., 1994). A fêmea apresenta três tipos de flap vulvar,

lisa, botão e linguiforme, sendo o ultimo ainda classificado em A, B, C, D e I, dependendo do

tipo de processo linguiforme (LE JAMBRE; WHITLOCK, 1968).

O quadro clínico em animais é anemia, em conseqüência dos hábitos alimentares

(hematófagos) do parasita e da inoculação de substâncias anticoagulantes no local onde se

fixam, provocando grandes perdas de sangue. Nestes animais são observados também edema

submandibular e emagrecimento além de perturbações digestivas, como diarréia (FORTES,

2004).

2.2.2 Trichostrongylus sp (LOSS, 1905)

Gênero tipo da família Trichostrongylidae, o Trichostrongyluys possui entre seus

representantes helmintos considerados de tamanho pequenos, capilariformes, ao qual possui

em sua morfologia comprimento menor que 7mm, sem inflações cefálicas e virtualmente sem

cápsula bocal; espículos curtos, torcidos e usualmente pontiagudos. Várias espécies deste

helminto na forma adulta têm como localização o intestino delgado dos ruminantes

(GEORGI, 1998).

O ciclo evolutivo possui uma fase pré-parasitária e parasitária. Após a cópula, a fêmea

inicia a postura dos ovos que são eliminados segmentados com as fezes do hospedeiro, sendo

que, em condições ideais de oxigênio, umidade há eclosão e liberação da larva de primeiro

estágio (L1). Estas por sua vez, alimentam-se de bactérias e microrganismos existentes nas

fezes, crescem e mudam posteriormente para L2 em seguida L3. Neste ultimo estágio são

consideradas larvas infectantes (FORTES, 2004).

Freqüentemente assintomáticas, em grandes quantidade infecções causados por este

parasito são capazes de produzir uma prolongada e debilitante diarréia aquosa, especialmente

nos caprinos mal alimentados (GEORGI, 1998). Em níveis mais baixos de infecção, a

inapetência e baixos índices de crescimento, acompanhados as vezes por fezes amolecidas,

constituem a sintomatologia comum (URQUHART et al., 1998).

2.2.3 Oesophagostomum sp (MOLIN, 1861)

Morfologicamente possuem boca anterior e cápsula bucal curta e cilíndrica. Orifício

oral circundado por um anel, portador de papilas cefálicas, delimitado posteriormente por uma

depressão. Coroa radiada formada por 2 séries de elementos, entretanto a externa pode faltar.

O sulco cervical ventral, anterior ao orifício excretor, circunda o corpo até a face dorsal.

Cutícula dilatada na região compreendida entre o anel oral e o sulco ventral, forma uma

expansão cefálica. Asa cervical presente ou ausente. Pápulas cervicais presentes. A porção

inicial do conduto esofagiano às vezes apresenta-se dilatada e com lancetas. Macho com 2

espículos iguais e gubernáculo presente. Fêmea com vulva situada há pouca distancia do anus.

Larva infectante com células intestinais triangulares (FORTES, 2004).

Localizado em sua forma nodular adulta no intestino grosso e as larvas na parede do

intestino delgado e grosso, são chamados normalmente de „vermes nodulares‟, sendo que

suas larvas parasitárias tendem a se encapsular devido a uma inflamação reativa um tanto

excessiva, de parte do hospedeiro previamente sensibilizado (GEORGI, 1998). O período pré-

patente de 40 dias (FORTES, 2004).

Os sinais clínicos em ruminantes e suínos estão usualmente associados aos estágios

larvais na parede do intestino, e não aos vermes adultos no lúmen, tais como fezes aquosas,

escuras e muito fétidas (GEORGI, 1998). Também podem ser encontradas fezes com pus e

sangue, como também notável perda de peso e emagrecimento progressivo (FORTES, 2004).

2.3 DROGAS ANTI-HELMÍNTICAS

2.3.1 Benzimidazóis

2.3.1.1 Mecanismo de ação

A partir dos anos 60 e 70 varias pesquisas promoveram o desenvolvimento de uma

serie de anti-helmínticos da família dos benzimidazois (albendazole, febendazol, mebendazol,

oxfendazol, oxibendazol e outros). O albendazole é uma droga classificada no grupo dos

benzimidazóis que tem como mecanismo de ação ao se ligar a tubulina, uma proteína de peso

molecular 25.000 dos helmínticos, o qual inibe a polimerização dos microtúbulos, gerando a

perda de função em várias partes da célula (MARTIN, 1997 ; MOLENTO, 2004). Desta

forma, ocorre uma interrupção do equilíbrio tubulina/microtúbulo, levando a uma cascata de

mudanças bioquímicas e fisiológicas que podem ser diretas ou indiretas resultando na perda

da homeostasia celular levando a morte o nematódeo (LACEY, 1988). Uma outra ação desta

droga é que pode inibir a enzima fumarato redutase no transporte de glicose, alterando os

mecanismos energéticos do parasito (LANUSSE, 1996).

2.3.1.2 Mecanismo de resistência

Os mecanismos de resistência podem ser específicos ou inespecíficos. Os mecanismos

específicos estão associados à ação da droga anti-helmíntica, enquanto os inespecíficos

referem-se as alterações no receptor da droga ou na modulação da concentração do fármaco

(WOLSTENHOLME et al., 2004).

Sabendo que microtúbulos são organelas citoplasmáticas que participam de

importantes processo tais como a formação do citoesquecelo celular, movimentação das

partículas celulares e formação do fuso mitótico durante a divisão celular (MARTIN, 1997),

a resistência aos benzimidazóis tem sido associada com modificações relacionadas a tubulina,

proteína que compõem os microtúbulos, na qual moléculas do fármaco ligam-se a esta,

alterando o equilíbrio tubulina/microtúbulo. Assim os parasitos resistentes caracterizam-se

pela diminuição dos sítios de alta afinidade à droga nas subunidades protéicas dos

microtúbulos (GUTTERIDGE, 1993).

Em nematódeos gastrintestinais de caprinos, pode-se verificar e agrupar a existência

de três teorias as quais explicam o aparecimento de alelos que codificam a resistência aos

benzimidazóis. A primeira seria as migrações e fluxo gênico, onde as migrações induzem

diferentes freqüências gênicas e o fluxo gênico atua como fixador destes genes ao conjunto

gênico da nova geração. Na segunda, os alelos que codificam resistência estão presentes na

população por um longo período como um alelo raro, esta é uma das explicações para a

grande prevalência da resistência aos benzimidazóis. A última seria a de mutações

espontâneas (MELO, 2001).

Estudos de populações de Haemonchus contortus resistente e sensível aos

benzimidazóis indicaram a existência de diferenças específicas de DNA genômico destas

populações (ROOS et al., 1990). Kwa et al. (1994) demonstraram que a resistência aos

benzimidazóis envolve uma mutação no aminoácido 200 e no 167 (SILVESTRE; CABARET,

2002) (Fenilalanina/Tirosina) do gene isotipo 1 β-tubulina, que parece ser o maior implicado

no mecanismo da resistência anti-helmíntica aos benzimidazóis (SAMSON H.;

BLACKHALL, 2005).

2.3.2 Lactonas Macrocíclicas

2.3.2.1 Mecanismo de ação

A partir da década de 80 criou-se a ivermectina que atua tanto em ectoparasitos como

endoparasitos, este por sua vez, é pertencente de um novo grupo, denominado lactona

macrocíclica (avermectinas). Os fármacos pertencentes a este grupo são ativos contra adultos,

estádios imaturos e larvas hipobióticas o qual causam paralisia deletéria ao abrir os canais de

cloro com portão glutamato somando-se ainda a supressão dos processos reprodutivos dos

parasitos. No entanto, sugere-se que a interrupção da ingestão de alimentos e morte do

nematódeos é a real ação nematocida desse composto (MELO, 2001).

As lactonas macrocíclicas (avermectinas e milbemicinas) são derivados químicos de

microrganismos do solo. A avermectina inclui a ivermectina, já a milbemicina inclui a

moxidectina. Seu mecanismo de atuação se dá pela conjugação do receptor de canal de cloreto

com porta de glutamato nas células nervosas dos nematódeos, fazendo com que o canal se

abra permitindo a entrada de íons de cloreto que levam a paralisia flácida (AIELLO ; MAYS,

2001).

2.3.2.2 Mecanismo de resistência

Um dos modos de ação da ivermectina é a inibição da bomba faringea (KOHLER,

2001) e que existem associações entre alelos que codificam o canal cloro com portão

glutamato com a resistência às lactonas macrocíclicas em H. contortus (BLACKHALL et al.,

1998). Pode-se verificar que, entre estes, existem diferenças entre cepas resistentes e sensíveis

a ivermectina, indicando que a resistência pode estar associada a mudança fisiológica no sítio

de ligação desta droga no músculo faringeal (SANGSTER ; GILL, 1999).

Diversas pesquisas moleculares demonstraram que uma proteína transmembranária

que atua no transporte de composto, incluindo drogas através das membranas celulares,

estaria diretamente ligada ao mecanismo de desenvolvimento da resistência, seria a

glicoproteína-P. Possivelmente a glicoproteína-P e os canais de cloro foram os locais

selecionados após tratamentos seqüenciais os quais são responsáveis pela produção de cepas

resistentes a ivermectina (MOLENTO, 2004).

2.4 RESISTÊNCIA ANTI-HELMÍNTICA

A Resistência Anti-helmíntica (R.A.) é um fenômeno pelo qual alguns organismos de

uma população são capazes de sobreviver após constante utilização de um composto químico

(MOLENTO, 2004). A resistência dos nematódeos gastrintestinais de caprinos aos anti-

helmínticos foi descrito inicialmente no Texas - Estados Unidos (THEODORIDES et al.,

1970), posteriormente, na Nova Zelândia (KETTLE et al., 1983) e França (KERBOUEF;

HUBERT, 1985). No Brasil a primeira suspeita de nematódeos gastrintestinais de caprinos

resistentes aos anti-helmínticos foi descrito por Vieira (1986) no estado do Ceará. Estudos

posteriormente indicaram R.A. de caprinos em Pernambuco (CHARLES et al., 1989 ;

SANTOS et al., 1993) e na Bahia (BARRETO; SILVA, 1999). No Ceará, outros relatos de

R.A. em caprinos utilizando oxfendazol e levamisol (VIEIRA; CAVALCANTE, 1999)

demonstram que esse problema está se disseminando.

2.4.1 Histórico da resistência aos benzimidazóis em caprinos

Em decorrência do processo evolutivo presente nas populações parasitárias, existe uma

vasta diversidade genética, na qual organismos mais aptos sobrevivem a determinados

desafios, a qual denomina-se seleção natural. Ao iniciar a utilização de um composto químico,

se estará iniciando também um processo de seleção dentro de uma determinada população

(MOLENTO, 2004). No Nordeste suspeitou-se de nematóides resistentes em caprinos no

Ceará (VIEIRA, 1986 ; VIEIRA; CAVALCANTE, 1999; MELO, 2001, MELO et al., 2003).

Em estudos posteriores foi diagnosticada também em Pernambuco, Bahia e Alagoas

(CHARLES et al., 1989; BARRETO; SILVA, 1999; BARRETO et al., 2002; BISPO et al.,

2002).

2.4.2 Histórico da resistência as lactonas macrocíclicas

O primeiro relato de nematóides resistentes a ivermectina foi no estado do Rio Grande

do Sul (ECHEVARRIA; TRINDADE, 1989). No nordeste brasileiro, existem relatos de baixa

eficácia da ivermectina, sendo detectado no estado da Bahia (BARRETO; SILVA, 1999), no

estado o Ceará (MELO et al., 1998 ; MELO et al., 2003). A resistência está presente também

no estado de Alagoas (AHID et al., 2007).

2.4.3 Estabelecimento da resistência anti-helmíntica

A R.A. de parasitos em caprinos está amplamente difundida (MOLENTO, 2004). Esta

por sua vez apresenta três fases: estabelecimento, desenvolvimento e dispersão, na qual o

estabelecimento é influenciado pelo tamanho, diversidade da população e taxa de mutação do

gene envolvido (SUTHERST; COMINS, 1979); Desenvolvimento, devido ao uso freqüente e

continuado de uma mesma base farmacológica destinada ao controle dos parasitos

(WALLER, 1994; PRICHARD, 1990) e dispersão dos genes na população, que é realizada

através da migração e fluxo gênico (HUMBERT et al., 2001).

De acordo com Melo et al. (1998) a R.A. é agravada pela freqüência de tratamentos

anti-helmínticos e pela rotação rápida de princípio ativo. A utilização de medicamentos de

longa persistência e aquisição de animais contaminados devem ser considerada como causas

predisponentes ao aparecimento da R.A. (MOLENTO, 2004). O processo de seleção dos

indivíduos resistentes em uma população de parasitas ocorre de maneira gradativa e, caso não

diagnosticada precocemente, somente será detectada quando forem observados alguns sinais

clínicos nos animais. Quando são envolvidas duas drogas de grupos distintos este fenômeno é

chamado de resistência cruzada (MOLENTO, 2004).

2.4.4 Diagnóstico da resistência anti-helmíntica

2.4.4.1 Testes in vivo

Os testes in vivo são largamente utilizados para monitorar a resistência em nematóides.

Porém em sua maioria se caracterizam pela baixa qualidade devido à variação interanimal

(CRAVEN et al., 1999). Neste tipo de teste há a necessidade de se estudar três aspectos

fundamentais da farmacologia da droga: o papel da farmacodinâmica no hospedeiro, a

interação do parasito e o hospedeiro e a farmacologia bioquímica da droga, ou seu modo de

ação (LACEY, 1988).

2.4.4.1.1 Teste controlado

A eficácia do anti-helmíntico é determinada pela comparação da população de

parasitos no grupo tratado com a do grupo não tratado. Este teste é o método mais confiável

para avaliar a atividade anti-helmíntica. Animais parasitados são aleatoriamente separados em

medicados e não medicados. Após a dosificação dos animais do grupo medicado é dado um

intervalo entre o tratamento e o sacrifício dos animais. Estes por sua vez, são necropsiados e a

carga parasitária é identificada e contada. Os adultos são diferenciados dos estágios larvais

(WOOD et al., 1995).

2.4.4.1.2 Teste de redução na contagem de ovos nas fezes

Animais parasitados são distribuídos aleatoriamente em dois grupos, um grupo que

sofrerá a ação de anti-helmíntico (tratado) e outro não (controle), utilizando-se no mínimo dez

animais para cada grupo testado. As contagens de ovos de nematódeos nas fezes seriam

avaliados tanto antes como depois (10 a 14) do tratamento o qual compara-se o percentual de

redução na eliminação de ovos nas fezes nos dois grupos (COLES et al., 1992). O diagnóstico

será positivo para „resistência‟ quando uma determinada droga que apresentava redução acima

de 99% da carga parasitária apresentar redução menor do que 95% contra determinado

organismo após certo período de tempo (MOLENTO, 2004).

Apesar de ser largamente utilizado para monitorar resistência em nematódeos

caracteriza-se por baixa qualidade, pois nem sempre existe uma boa correlação entre a

oviposição e o numero de parasitos adultos no hospedeiro, com exceção do nematóide

Haemonchus contortus devido a sua alta prolificidade (TAYLOR et al., 2002).

2.4.4.2 Testes in vitro

A maioria dos testes in vitro é de fácil execução e aplicação, além de poder ser

realizado em larga escala (O´GRADY; KOTZE, 2004). Dentre os testes in vitro, o mais

utilizado é eclosão de ovos (CRAVEN et al., 1999).

2.4.4.2.1 Teste de eclosão de ovos

É baseado na atividade ovicida do fármaco servindo de modelo para o

desenvolvimento de outros testes in vitro. O tiabendazol é o composto padrão classicamente

utilizado por ser mais solúvel que os demais compostos benzimidazóis. Realiza-se a

incubação dos ovos em soluções contendo o anti-helmíntico em diferentes concentrações

finais que variam de 0 a 2µg/mL. Ao final de 48 horas, realiza-se a leitura do teste,

classificando os achados em ovos ou larvas. Quando a DE50 ( dose efetiva para inibir 50% da

eclosão de ovos) for superior ou igual a 0,1µg/mL considera-se a presença de resistência na

população de nematóides testada. Este teste é indicado pela World Association for the

Advancement of Veterinary Parasitology (WAAVP) para detectar resistência aos

benzimidazóis (COLES et al., 1992).

2.4.4.2.2 Teste genético

A utilização de técnicas moleculares para o diagnostico de nematódeos resistentes aos

anti-helmínticos está restrita aos benzimidazóis (TAYLOR et al., 2002). Estas técnicas

oferecem vantagens no diagnóstico pelo fato de serem altamente específicas, sensíveis,

utilizam pequena quantidade de DNA (SANGSTER et al., 2002).

A resistência aos benzimidazóis é diagnosticada utilizando-se a amplificação do

fragmento do isotipo 1 da β-tubulina. Emprega-se para isto a Reação em Cadeia pela

Polimerase Alelo Específica (AS-PCR) para detectar esta mutação em nematódeos adultos de

Haemonchus contortus (KWA et al., 1994). Esta ferramenta molecular pode estimar cada

genótipo (RR: homozigoto resistente ; RS: heterozigoto; e SS: homozigoto sensível). Desta

forma o nível de resistência aos benzimidazóis numa população de nematóides pode ser

definida pela proporção de homozigotos mutantes (rr) (HUMBERT et al., 2001). A presença

do aminoácido fenilalanina ou tirosina no posição 200 do gene da β-tubulina, caracteriza a

cepa sensível e resistente aos benzimidazóis, respectivamente (ELARD et al., 1999).

2.4.5 Controle da resistência

Atualmente a principal forma de controle parasitário de caprinos baseia-se no uso

constante de compostos antiparasitários pertencentes a diversos grupos químicos, na maioria

das vezes, administrados sem levar em consideração os fatores epidemiológicos da região, os

quais interferem diretamente na população parasitária ambiental e, conseqüentemente, na

reinfecção do rebanho. A maioria dos produtores não adota o esquema de vermifugação

estratégico, nem realiza anualmente, de forma racional, a alternância dos grupos químicos

utilizados; com isso, os endoparasitos rapidamente desenvolvem resistência às drogas

disponíveis no mercado (MOLENTO, 2004). A possibilidade de integrar outras formas de

controle tem o objetivo de reduzir o número de larvas infectantes na pastagem e o número de

tratamentos antiparasitários e ainda diminuir o grau de infecção parasitária nos animais

(MOLENTO, 2005).

Além de diversas medidas para o controle da resistência, o fenômeno refugia ou

estoque de larvas influencia diretamente na diluição e atenuação da mesma, pois é a

quantidade da população de nematódeos em estágio de vida livre que permanecem na

pastagem sem sofrer a ação do anti-helmíntico, permanecendo com caráter susceptível.

Sabendo que o aparecimento da R.A. está intimamente ligado ao sucesso da progênie que

sobreviveu ao tratamento, ao acasalarem com as larvas em refugio podem contribuir para

diluição dos genes que codificam resistência nas próximas gerações. Esta é fundamental para

a manutenção da eficácia das drogas retardando o processo de seleção (MOLENTO, 2004).

3 OBJETIVOS

3.1 GERAL

Detectar a ocorrência de resistência aos anti-helmínticos em nematódeos

gastrintestinais de caprinos no município de Mossoró-RN.

3.2 ESPECÍFICOS

a) Detectar a ocorrência de resistência anti-helmíntica a albendazole em caprinos;

b) Detectar a ocorrência de resistência anti-helmíntica a ivermectina em caprinos;

c) Determinar o perfil de fazendas com presença de resistência ao albendazole e

ivermectina;

d) Determinar o perfil epidemiológico de nematódeos gastrintestinais na região.

e) Detectar qual o nematódeo mais prevalente

4 MATERIAL E MÉTODOS

4.1 LOCAL DE ESTUDO

Durante o período de janeiro a novembro de 2008 o experimento foi conduzido em

explorações tradicionais do sistema produtivo de caprinos no município de Mossoró-RN,

onde estão concentrados os maiores efetivos do Rio Grande do Norte (Fig. 1).

Figura 2 - Mapa do Estado do Rio Grande do Norte dividido por Mesorregiões

(PORTALBRASIL, 2006)

4.2 PROPRIEDADES

A escolha das propriedades foi feita por método de amostragem aleatória e as análises

laboratoriais foram enviadas e processadas no Laboratório de Parasitologia Animal da

Universidade Federal Rural do Semi-Árido (UFERSA), Mossoró-RN (Fig. 2).

Figura 2. A, B- Laboratório de Parasitologia Animal da UFERSA

Foram visitadas no total 30 propriedades rurais (Fig. 3), cadastradas junto aos

programas assistencialistas do Instituto de Assistência Técnica e Extensão Rural do RN

(EMATER-RN) e junto às Associações organizadas de criadores de caprinos no estado do Rio

Grande do Norte, com o objetivo de coletar fezes e obtenção de informações sobre os

métodos antiparasitários usados através do uso de questionários (Apêndice A).

Figura 3. A, B- Propriedades rurais de caprinos no município de Mossoró-RN

4.3 PRINCÍPIOS ATIVOS

Para o experimento foram utilizados dois grupos de medicamentos pertencentes aos

benzimidazóis (albendazole) e lactonas (ivermectina). Após firmada parceria com a empresa

produtora de medicamentos para uso veterinário, a BIOFARM-Tecnologia em veterinária,

forneceu os vermífugos comercialmente conhecidos como Biozen e Biomectina, que fazem

parte dos princípios ativos citados anteriormente.

4.4 ANIMAIS EXPERIMENTAIS

A seleção e inclusão dos animais no experimento obedeceram aos seguintes critérios:

diagnóstico positivo para helmintos gastrintestinais através da contagem do número de ovos

por grama de fezes (OPG); animais que não tinham sido tratados com qualquer tipo de droga

anti-helmíntica por um período mínimo de 30 dias.

Em cada propriedade, foram selecionados 45 animais da espécie caprina, de ambos os

sexos, jovens apresentando primeira e segunda muda dentária, marcados por meio de brincos

e/ou colares, em seguida distribuídos aleatoriamente por rebanho de caprinos em três grupos

de 15 animais cada: O Grupo I recebeu tratamento com albendazole a 10%; O Grupo II,

ivermectina e Grupo III, o controle não recebeu o tratamento convencional.

Figura 4. A, B- Caprino jovem marcado com colar

4.5 POSOLOGIA NOS TRATAMENTOS

As doses utilizadas seguiram as recomendadas pelos fabricantes. O Grupo I foi tratado

com anti-helmíntico à base de albendazole, administrado oralmente, na dose 10mg/Kg; o

Grupo II foi tratado com anti-helmíntico à base de ivermectina, administrado por via

subcutânea, na dose 0,2mg/Kg.

4.6 AMOSTRAS FECAIS

De cada animal hospedeiro (caprino), naturalmente infectado por nematódeos

gastrintestinais, foram coletadas amostras fecais diretamente da ampola retal, identificadas em

sacos plásticos e mantidas sob refrigeração até o processamento da determinação do número

de ovos por grama de fezes e obtenção das larvas. As coletas foram feitas no dia do

tratamento e 10 dias pós tratamento.

Figura 5. A- Coleta de fezes em caprino diretamente da ampola retal; B- Acondicionamento

da amostra coletada em sacos plásticos

4.7 AQUISIÇÃO DAS CORDENADAS GEOGRAFICAS DAS PROPRIEDADES

Cada propriedade visitada foi marcada geograficamente por uso de GPS e a estas, eleita

uma numeração as quais foram correspondentes as coordenadas geográficas adquiridas (Fig.

6).

Figura 6. A- GPS, Garmin, modelo Etrex H; B- Aquisição das coordenadas geográficas por

uso de GPS

4.8 EXAMES PARASITOLÓGICOS

Das amostras coletadas, foram retiradas dois gramas de fezes para a análise quantitativa,

realizada pela contagem de ovos por grama de fezes (OPG), técnica de Gordon & Whitlock

(1939). Para recuperação de larvas infectantes, foi utilizada a técnica de coprocultura

quantitativa descrita por Ueno (1995), e as larvas foram identificadas de acordo com as

características descritas por Keith (1953). De cada grupo experimental foram coletadas e

analisadas 100 larvas de terceiro estádio (L3) obtidas das culturas de cada grupo estabelecido

em cada propriedade.

Figura 7. A, B,C- Extração de larvas da coprocultura do tratamento controle, ivermectina e

albendazole

4.9 TESTE DE REDUÇÃO DA CONTAGEM DE OVOS POR GRAMA DE FEZES

Para o teste de redução da contagem de ovos por grama de fezes (RCOF) tomou-se

como dados, os resultados obtidos do exame de OPG, a qual fez-se as médias aritméticas do

número de ovos nas fezes, para cada grupo tratado (OPGt), comparadas com as médias

contadas no grupo controle (OPGc) determinada pela fórmula descrita por Coles et al.,

(1992):

RCOF = [ 1 - ( OPGt / OPGc ) ] x 100

Em que:

RCOF= Teste de redução da contagem de ovos por grama de fezes

OPGt= Média do número de ovos por grama de fezes do grupo de animais tratados.

OPGc = Média do número de ovos por grama de fezes do grupo controle

O resultado é positivo para resistência se a percentagem de redução da contagem de

ovos for inferior a 95% e se o limite inferior do intervalo de confiança a 95% for menor do

que 90%. De acordo com Prichard et al. (1980) e Edwards et al. (1986), considera-se

resistência quando o porcentual de redução do OPG, 10 dias após o tratamento, for inferior a

90%.

4.10 ANÁLISE DOS DADOS

Os dados obtidos foram analisados pelo programa estatístico RESO (1989) (Fig. 8) o

qual obedece às instruções WAAVP (COLES et al., 1992).

Figura 8. Tela inicial do programa estatístico RESO (1989)

5 RESULTADOS E DISCUSSÃO

Ao se comparar o desempenho dos medicamentos ivermectina e albendazole no

controle das espécies de endoparasitas específico para caprinos utilizados nas propriedades,

de acordo com os critérios estabelecidos pelo programa RESO, a ivermectina apresentou

menor resistência ao se comparar com o albendazole. Das 30 propriedades estudadas, ao se

analisar o percentual individual de Haemonchus contortus e Trichostrongylus sp, obteve-se

como resultados:

Em relação ao H. contortus, o percentual de população de helmintos resistentes frente

ao albendazole atingiu 90% das propriedades estudadas, enquanto que, a ivermectina apenas

em 36,6% (Tab. 1), resultados estes que se assemelham aos encontrados por Melo et al.

(2003).

Tabela 1- Prevalência (%) de H. contortus em caprinos, resistentes ao albendazole e

ivermectina em propriedade do município de Mossoró-RN, segundo classificações RESO.

H. contortus

Classificação RESO

Anti-helmínticos

Sensível (%)

Resistente (%)

Ivermectina

19 (63,4)

11 (36,6)

Albendazole

03 (10,0)

27 (90,0 )

O H. contortus foi também o helminto mais prevalente, sendo encontrado em todos os

grupos tratados. Resultado similares foram encontrados por Vieira & Cavalcante (1999) e

Barreto et al. (2002) no Nordeste brasileiro, Mattos et al. (2000) no Rio Grande do Sul.

Mattos et al. (2003) ao analisar a sensibilidade dos nematódeos gastrintestinais de caprinos a

ivermectina na região da Grande Porto Alegre, verificou que o H. contortus foi o helminto

mais prevalente, representando um percentual de 96% da população encontrada no grupo

controle.

Em relação ao Trichostrongylus sp, a prevalência foi 70% nas propriedades estudadas.

O percentual de população de helmintos resistentes atingiu para o tratamento ivermectina, a

percentagem de resistência em 33,3% das propriedades. No tratamento albendazole, 42,8%

(Tab. 2).

Tabela 2- Prevalência (%) de Trichostrongylus sp em caprinos, resistentes ao albendazole e

ivermectina em propriedade do município de Mossoró-RN, segundo classificações RESO.

Trichostrongylus sp

Classificação RESO

*Não presentes

Anti-helmínticos

Sensível (%)

Resistente(%)

Ivermectina

14 (66,7)

07 (33,3)

Albendazole

12(57,2)

09 (42,8)

*Propriedades que não foram encontrados Trichostrongylus sp

O percentual de helmintos resistentes para os dois princípios ativos é alto e torna-se

alarmante ao analisar o percentual de nematódeos que possuem resistência ao albendazole,

que atinge um percentual de 90% das propriedades (Tab. 3). Resultados semelhantes referem

à resistência de nematódeos de caprinos, frente aos benzimidazóis, foram obtidos por

Theodorides et al. (1970), Andersen ; Chistofferson (1973) e McGregor et al. (1980). Melo et.

al. (2003), ao conduzir um experimento utilizando 25 criações de ovinos e caprinos

localizadas no estado do Ceará, das criações de caprinos visitadas 87,5% apresentaram

nematódeos resistentes aos benzimidazóis e 37,5% a ivermectina.

Tabela 3- Rebanhos caprinos do município de Mossoró-RN com presença

de resistência anti-helmíntica ao albendazole e a ivermectina.

Propriedades

Anti-helmínticos

Sensível(%)

Resistente(%)

Ivermectina

17 (56,7)

13 (43,3)

Albendazole

3 (10,0)

27 (90,0)

Em ordem de resistência observou-se que o a espécie H. contortus foi a que obteve

maior índice de resistência, seguida pelos gêneros Trichostrongylus sp e Oesophagostomun

sp (Tab. 4), resultados estes que estão de acordo com os encontrado por Melo et al. (2003).

Os resultados do presente trabalho não divergem dos encontrados por Mattos et al. (2003) a

qual encontrou Haemonchus sp, Trichostrongylus sp, Ostertagia sp, uma vez que no

Nordeste não tem Ostertagia sp no Município de Mossoró-RN.

Tabela 4 - Prevalência de nematódeos de caprinos resistentes a ivermectina e ao albendazole.

Nematódeo

Droga anti-helmíntica

Ivermectina

Albendazole

Nº de Propriedades (%)

Haemonchus contortus

11 (36,6)

27 (90,0)

Trichostrongylus sp

07 (33,3)

09 (42,8)

Oesophagostomun sp

01 (6,6)

03 (20,0)

A redução na contagem de ovos nas fezes (RCOF) após o tratamento com ivermectina

e albendazole, variou entre 43% a 100% e 29% a 100%, respectivamente (Tab. 5). O

percentual de redução diverge do encontrado por Melo et al. (2003) sendo que, ao avaliar o

percentual de RCOF obtiveram como resultado uma variação de 60 a 100% e 2 a 96% para

ivermectina e benzimidazol, respectivamente. Resultados similares foram encontrados por

Mattos et al. (2003), ao testar a ivermectina na região sul do Brasil. Já Barreto & Silva (1999),

ao avaliarem no estado da Bahia o RCOF para albendazole após 10 dias de tratamento,

obtiveram a percentagem de 79,31%. Em Porto Alegre, Mattos et al. (2004), verificaram a

eficácia da ivermectina em 42,10 % aos 14 dias pós-tratamento. Vieira & Cavalcante (1999)

ao realizar em um experimento utilizando drogas anti-helmínticas derivadas dos

benzimidazóis e imizóis, por meio do RCOF, verificou que de 34 rebanhos caprinos no estado

do Ceará, os nematódeos gastrintestinais estavam resistentes em 17,6% ao oxfendazole

(derivado do benzimidazol), 20,6% ao levamizole e 35,3% apresentaram resistência múltipla

a ambos os grupos químicos avaliados.

Tabela 5 - Redução na contagem de ovos nas fezes (RCOF) de caprinos

tratados com ivermectina e albendazole após 10 dias pós-vermifugação.

Propriedade

Controle

Ivermectina

Albendazole

OPG

médio*

OPG

médio*

RCOF

(%)

OPG

médio*

RCOF

(%)

910

120

180

1740

150

360

650

520

100

920

250

830

130

310

1660

630

700

2210

630

850

110

190

1210

520

300

2150

110

940

2330

230

940

1542

417

2100

1110

700

100

220

717

408

292

785

123

292

709

309

345

564

400

520

100

900

100

464

610

100

230

330

100

690

100

720

100

190

550

100

733

1080

400

575

2980

100

* Média aritmética do número de ovos por grama de fezes dos animais de cada grupo.

Os resultados obtidos com a cultura de larvas demonstraram que 100% das infecções

helmínticas de caprinos eram por helmintos da superfamília Trichostrongyloidea e

Rhabdiasoidea. Os nematódeos encontrados foram Haemonchus. contortus, Strongyloides sp,

Trichostrongylus sp e Oesophagostomun sp (Tab. 6), que estão de acordo com resultados

encontrados por Ahid et al. 2008 ao avaliar os parasitos gastrintestinais de caprinos da região

oeste do Rio Grande do Norte. A identificação das larvas infectantes mostrou que os

nematódeos sobreviventes às medicações testadas foram principalmente Haemonchus.

contortus, seguido pelo Strongyloides sp. Resultados que concordam com os encontrados por

Ahid et al. (2007) em pesquisas feita em caprinos da zona da mata em Alagoas.

Tabela 6 - Composição da cultura de larvas, após 10 dias da administração dos tratamentos,

em caprinos nas propriedades estudadas.

Tratamentos

Propriedades

Controle (%)

Ivermectina (%)

Albendazole(%)

100

H. = H. contortus ; T. = Trichostrongylus sp; O. = Oesophagostomum sp; S.= Strongyloides sp

No presente trabalho as coordenadas geográficas de cada propriedade no município de

Mossoró-RN (Tab. 7) demonstraram que dentre 30 propriedades marcadas por GPS (Fig. 9),

houve nematódeos resistentes, que para o albendazole, a resistência ao medicamento

encontra-se largamente distribuída por todo município, concentrando-se principalmente nas

regiões oeste da cidade de Mossoró-RN (Fig. 10).

Tabela 7 – Coordenadas geografica via satélite das 30 propriedades visitadas.

Propriedades

Coordenadas

Propriedades

Coordenadas

S5.39998 W37.22451

S5.02743 W37.31698

S5.36225 W37.26400

S5.43615 W37.19981

S5.08793 W37.27585

S5.22715 W37.38785

S5.21180 W37.44444

S4.93007 W37.31671

S5.20653 W37.44746

S5.08889 W37.34192

S5.21079 W37.44513

S5.11494 W37.15999

S5.20655 W37.44748

S5.11547 W37.22690

S5.20725 W37.44717

S5.35315 W37.20858

S5.20922 W37.44695

S5.42394 W37.78753

S5.12480 W37.29022

S5.11960 W37.35032

S5.31344 W37.16932

S5.30678 W37.42174

S5.31518 W37.18233

S5.01919 W37.16245

S5.21105 W37.44497

S5.10854 W37.53341

S5.25670 W37.24236

S5.30430 W37.41069

S5.09899 W37.51077

S5.48784 W37.76234

Figura 9 - Vista aérea do município de Mossoró-RN na altitude de 73,6 Km. Pontos verdes

sinalizando as 30 propriedades visitadas

Figura 10- Vista aérea do município de Mossoró-RN na altitude de 73,6 Km. Pontos brancos

sinalizando as 27 propriedades resistentes ao albendazole

A resistência a ivermectina está distribuída no município de Mossoró-RN, mas em

menor proporção ao se comparar com o albendazole. A distribuição geográfica das 13

propriedades resistentes a ivermectina evidenciou-se uma concentração principalmente nas

regiões oeste e sudeste da cidade de Mossoró-RN (Fig. 11).

Figura 11- Vista aérea do município de Mossoró-RN na altitude de 73,6 Km. Pontos

vermelhos sinalizando as 13 propriedades resistentes a ivermectina

Em todas as propriedades que continham nematódeos resistentes a ivermectina, 100%

destas estavam resistentes ao albendazole simultaneamente.

A análise dos 30 questionários revelou que os anti-helmínticos mais usados

pertenciam aos grupos dos benzimidazóis e avermectinas, e em menor escala os imidazóis.

Em 19 propriedades (63,3%) os anti-helmínticos utilizados pertenciam apenas ao grupo dos

benzimidazóis, 10 (33,3%) a ivermectina e um (3,3%) ao imidazóis. Não foi evidenciado uso

simultâneo de dois ou mais princípios ativos em uma mesma propriedade. Tais dados

discordam de Vieira & Cavalcante (1999), ao realizar um estudo em rebanhos caprinos no

estado do Ceará verificaram que em 10 propriedades (29,4%) os anti-helmínticos utilizados

pertenciam apenas ao grupo dos imidazóis (20,6%) ou apenas ao dos benzimidazóis (8,8%) e

que algumas propriedades utilizavam simultaneamente grupos de princípios ativos diferentes.

O perfil epidemiológico das propriedades resistentes no município de Mossoró-RN

revelaram que, de acordo com os questionários, os criadores de caprinos adotavam um

sistema de manjo animal ineficiente, como também evidenciavam um despreparo e

desconhecimento do uso e dosagem correta dos anti-helmínticos utilizando em diversas

ocasiões subdosagem e superdosagem dos medicamentos. Os proprietários vermifugavam

todo o rebanho sem respeitar um intervalo considerável de dias entre uma administração e

outra. Evidenciou-se rápida rotação de grupos de princípios ativos em curtos intervalos de

tempo.

6 CONCLUSÕES

O nematóide mais prevalente em todos os tratamentos foi o Haemonchus contortus.

Os nematódeos H. contortus e Trichostrongylus sp ofereceram diante da ivermectina

um percentual de resistência menor que o albendazole.

A redução na contagem de ovos nas fezes (RCOF) após 10 dias do tratamento com

ivermectina e albendazole, variou entre 43% a 100%, 29% a 100% respectivamente

Por ordem de resistência o H. contortus foi o que obteve maior índice, seguido pelos

gêneros Trichostrongylus sp e Oesophagostomun sp.

Propriedades que continham helmintos resistentes a ivermectina e albendazole

adotavam manejo ineficiente, rápida rotação de principio ativo e sub/super dosagem.

Geograficamente a resistência aos anti-helmínticos ivermectina e albendazole está

difundida no município de Mossoró-RN, localizando-se principalmente nas regiões oeste e

sudeste.

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APÊNDICE

Questionário aplicado nas propriedades rurais sobre tipos e quantidade de animais, forma de

controle, utilização, periodicidade e utilização de anti-helmínticos, assistência médica

veterinária.

QUESTIONÁRIO RESISTÊNCIA ANTI-HELMÍNTICA

Questionário nº: ____ Microregião:_____________________________

Proprietário: _______________________________________

Nome fazenda: _______________________________________

Área (Ha): ___________________________________________

animais

Nº

Raça

Piquete

Caprinos

Ovinos

Bovinos

Equinos

outro:

Pastejo misto (caprinos com ovinos): Sim ( ) Não ( )

Pastejo misto (bovinos com ovinos e/ou caprinos) Sim ( ) Não ( )

Você acha que caprinos ou ovinos junto com bovinos prejudica os bovinos? Sim ( ) Não ( )

Estação de Monta: Início: ____________ Duração: ___________

Tratamento anti-helmíntico:

Cabritos/cordeiros: Antes desmame ( ) Após desmame ( ) Desmamados ( )

Nº Dosificação (Numero de doses):

J F M A M J J A S O N D

Faz, rodízio de drogas? Sim ( ) Não ( )

Que época do ano os animais apresentam sintomas de verminose? _____________________________

Na sua opinião dentre as doenças que acometem os caprinos e ovinos, qual a importância da verminose?

___________________________________________________________________________________

Quem recomenda o tratamento anti-helmíntico?

Veterinário e/ou laboratório particular ( ) Revista ( ) Rádio ( ) TV ( ) Representante comercial

“vendedor ” ( ) Casa veterinária ( ) Outro fazendeiro ( ) Própria Exp. ( )

Anti-helmínticos usados nos últimos cinco anos:

BZ ___________________________________________________________

LEV __________________________________________________________

NEGUVON ____________________________________________________

DISOFEN _____________________________________________________

RANIDE ______________________________________________________

MACROLACTONA (Ivermectin, Moxidectin, Milbemicina) __________________________________

Eficácia anti-helmínticos (Quando vermifuga o que acontece com os animais?

Melhora ( ) Fica na Mesma ( ) Piora ( )

Onde compra os anti-helmínticos?

_________________________________________________________________________________

Rebanho Caprino:

Cabras

Reprodutores

Cabritos desmamados

Capões

Total

Última medicação: Mês ______________ Produto usado_______________

Abortos_____________Mortalidade suspeita de verminose____________________

Quando realiza vermifugação faz:

Todo rebanho ( ) Somente animais com sintomas clínicos ( ) Somente Cabras/ovelhas ( )

Somente Cabritos/cordeiros ( )

Utiliza alguma medicação caseira para controlar verminose?

Sim ( ) Não ( )

Que medicação? _________________________________________________

ANEXO

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