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UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA

FACULDADE DE MEDICINA VETERINÁRIA E ZOOTECNIA

TAXAS DE OVULAÇÃO E PRENHEZ EM NOVILHAS NELORE CÍCLICAS

APÓS UTILIZAÇÃO DE PROTOCOLOS PARA INSEMINAÇÃO ARTIFICIAL

EM TEMPO FIXO (IATF), COM DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE

PROGESTERONA, ASSOCIADAS OU NÃO A APLICAÇÃO DE eCG

MARCELO FIGUEIRA PEGORER

Botucatu – SP

2009

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UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA

FACULDADE DE MEDICINA VETERINÁRIA E ZOOTECNIA

TAXAS DE OVULAÇÃO E PRENHEZ EM NOVILHAS NELORE CÍCLICAS

APÓS UTILIZAÇÃO DE PROTOCOLOS PARA INSEMINAÇÃO ARTIFICIAL

EM TEMPO FIXO (IATF), COM DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE

PROGESTERONA, ASSOCIADAS OU NÃO A APLICAÇÃO DE eCG

MARCELO FIGUEIRA PEGORER

Tese apresentada junto ao Programa

de Pós-Graduação em Medicina

Veterinária para obtenção do título de

Doutor.

Orientador: Prof.Dr. Ciro Moraes Barros

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FICHA CATALOGRÁFICA ELABORADA PELA SEÇÃO TÉCNICA DE AQUISIÇÃO E TRATAMENTO

DA INFORMAÇÃO

DIVISÃO TÉCNICA DE BIBLIOTECA E DOCUMENTAÇÃO - CAMPUS DE BOTUCATU - UNESP

BIBLIOTECÁRIA RESPONSÁVEL: Selma Maria de Jesus

Pegorer, Marcelo Figueira.

Taxas de ovulação e prenhez em novilhas Nelore cíclicas após utilização de

protocolos para inseminação artificial em tempo fixo (IATF), com diferentes

concentrações de progesterona, associados ou não a aplicação de eCG /

Marcelo Figueira Pegorer. – Botucatu [s.n.], 2009.

Tese (doutorado) –

Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Medicina

Veterinária e Zootecnia, Botucatu, 2009.

Orientador: Ciro Moraes Barros

Assunto CAPES: 50501054

1. Bovino - Reprodução - Estudos experimentais 2. Ovulação 3. Inse-

minação artificial 4. Obstetrícia veterinária

CDD 636.20824

Palavras-chave: IATF; eCG; Inseminação artificial; Novilhas Nelore;

Progesterona

Nome do Autor: Marcelo Figueira Pegorer

iii

Título: TAXAS DE OVULAÇÃO E PRENHEZ EM NOVILHAS NELORE

CÍCLICAS APÓS UTILIZAÇÃO DE PROTOCOLOS PARA INSEMINAÇÃO

ARTIFICIAL EM TEMPO FIXO (IATF), COM DIFERENTES

CONCENTRAÇÕES DE PROGESTERONA, ASSOCIADAS OU NÃO A

APLICAÇÃO DE eCG

COMISSÃO EXAMINADORA

Prof. Dr. Ciro Moraes Barros

Presidente e Orientador

Departamento de Farmacologia

IBB – UNESP - Botucatu

Prof. Dr. Sony Dimas Bicudo

Membro

Departamento de Reprodução Animal e Radiologia Veterinária

FMVZ – UNESP - Botucatu

Prof. Dr. Marcelo Marcondes Seneda

Membro

Departamento de Reprodução Animal

UEL – Londrina

Prof. Dr. Pietro Sampaio Baruselli

Membro

Departamento de Reprodução Animal

FMVZ – USP – São Paulo

Prof. Dr. Roberto Sartori Filho

Membro

Departamento de Produção Animal

ESALQ – USP - Piracicaba

Data da Defesa: 27 de Abril de 2009.

Dedico este trabalho...

A minha esposa ANDREIA e ao meu filho MATHEUS,

pela força e compreensão nos momentos mais difíceis.

Agradeço...

Especialmente ao meu orientador, Professor Dr. Ciro Moraes Barros, pelos

valiosos ensinamentos.

Aos meus pais Neide e José, que me ensinaram a acreditar e sempre seguir

lutando, e aos meus irmãos Marinho, Luciana e Eliziel.

À Professora Dra. Luzia Trinca pela paciência e colaboração nas análises

estatísticas.

À Professora Dra. Eunice Oba, pela colaboração nas dosagens plasmáticas

de progesterona.

Aos meus amigos: Paulo Fernandes, Renato Simões, Thais Naban, Vinicius

Pinheiro, Eduardo, Fernanda, Cínthia, Carolina.

Agradeço, especialmente, aos amigos Ronaldo Ereno e Rafael Satrapa pelo

auxílio no desenvolvimento dos experimentos;

Aos professores do Departamento de Reprodução Animal da FMVZ -

UNESP - Botucatu, pelos ensinamentos e pela amizade criada durante a

minha formação.

Aos funcionários do Departamento de Reprodução Animal da FMVZ e do

Departamento de Farmacologia (Instituto de Biociências - UNESP -

Botucatu).

Aos proprietários das fazendas Cristal, Estância Rosalito, Sr. Rosário

Pegorer, e Fazenda Pontal, Sr. Pedro Pegorer, por ceder suas instalações e

animais.

Aos funcionários das fazendas onde os experimentos foram realizados, que

colaboraram direta ou indiretamente para obtenção dos dados.

A empresa Biogenesis-Bagó, pelos produtos hormonais cedidos para a

realização dos experimentos e seu representante o Sr. Reuel Gonçalves.

MUITO OBRIGADO!

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 - Peso (média ± EPM) de novilhas Nelore, ao início (D0) e ao

final do experimento (D12), tratadas com dispositivos

intravaginais contendo 0,558g (grupo 0,5G) ou 1g (grupo

1G) de progesterona e suas associações com PGF2α

(grupos 0,5G/PGF e 1G/PGF) submetidas a exames diários

de ultrassonografia transretal..................................................

Tabela 2 -

Efeito do nível de progesterona do

dispositivo intravaginal

(0,558g ou 1g) e da PGF2α

nos parâmetros de recrutamento

e crescimento folicular em novilhas Nelores tratadas para

sincronização da ovulação.......................................................

Tabela 3 -

Taxas de sincronização do folículo dominante (animais com

folículos >5mm no D9/ total de animais tratados), ovulação

e prenhez em novilhas Nelores sincronizadas com

diferentes níveis de progesterona, associadas (0,5G/PGF;

1G/PGF) ou não (0,5G; 1G) à PGF2α no dia da inserção do

dispositivo intravaginal...........................................................

Tabela 4 -

Taxa de sincronização do folículo dominante (folículos >

5mm no D9/ total de animais tratados), diâmetro folicular

(média ± EPM) no D9 e taxas ovulação e prenhez, em

novilhas Nelores cíclicas sincronizadas com dispositivos

intravaginais contendo 0,558g (grupo 0,5G) ou 1g (grupo

1G) de progestrona e com PGF2α no D0, associadas

(0,5G/PGF/eCG; 1G/PGF/eCG) ou não (0,5G/PGF;

1G/PGF) a 300 UI de eCG na retirada do dispositivo (D8)....

Tabela 5 -

Concentração plasmática de progesterona (média

EPM) no

início (D0) e no dia da retirada do dispositivo intravaginal

(D8) em novilhas Nelores cíclicas tratadas com dispositivo

intravaginal contend

o 0,558 (grupo 0,5G) ou 1 g (grupo 1G)

de P4 associados à PGF2 no D0...........................................

vii

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 - Protocolo para pré-sincronização (D -17 a D -5) e

sincronização (D 0 a D 12) do ciclo estral de novilhas

Nelores cíclicas utilizando dispositivo intravaginal

contendo 1 ou 0,558 g de progesterona, associadas ou

não a aplicação de 150µg de PGF2α no D0. O

crescimento folicular foi acompanhamento por meio de

exames de ultrassonografia realizados diariamente entre

os dias 0 e 8, e a cada 12 horas entre os dias 9 e 12.........

Figura 2 -

Protocolo para sincronização da ovulação de novilhas

Nelores cíclicas utilizando dispositivos intravaginais

contendo 1 (grupo 1G) ou 0,558g (grupo 0,5G) de

progesterona, associadas (grupos 1G/PGF e 0,5G/PGF)

ou não a PGF2α no início do tratamento (D0).....................

Figura 3 -

Concentração plasmática de progesterona em novilhas

Nelores tratadas com dispositivo intravaginal contendo

0,558g (grupo 0,5G) ou 1g de P4 (grupo 1G) associadas

(0,5G/PGF; 1G/PGF) ou não à PGF2α no

D0.........................................................................................

Figura 4 -

Níveis plasmáticos de progesterona em novilhas Nelores

tratadas com dispositivo intravaginal contendo 0,558 g

(grupo 0,5G) ou 1 g (grupo 1G) de P4.................................

Figura 5 -

Níveis plasmáticos de progesterona em novilhas Nelores

tratadas (com PGF) ou não (sem PGF) com 150 µg de

PGF2α (d-cloprostenol) no D0.............................................

Figura 6 -

Probabilidades de ovulação e de prenhez em novilhas

Nelores cíclicas de acordo com o diâmetro do folículo

dominante, determinadas no dia 9 do protocolo de

sincronização da ovulação, utilizando benzoato de

estradiol (2mg, IM) e dispositivo intravaginal de

progesterona durante 9 dias, 150 µg de d-croplostenol no

dia da retirada do dispositivo e benzoato de estradiol vinte

e quatro horas mais tarde (n = 143).....................................

viii

Figura 7 -

Taxas de ovulação e de prenhez em novilhas Nelores

cíclicas de acordo com o diâmetro do folículo dominante,

determinadas no dia 9 do protocolo de sincronização da

ovulação, utilizando benzoato de estradiol (2mg, IM) e

dispositivo intravaginal de progesterona durante 9 dias,

150 µg de d-

croplostenol no dia da retirada do dispositivo

e benzoato de estradiol (1 mg, IM) vinte e quatro horas

mais tarde (n = 143).............................................................

Figura 8 -

Percentagem de novilhas Nelores tratadas com dispositivo

intravaginal contendo 0,558g (n = 67) ou 1g (n = 76) de P4

que apresentaram no dia 9 do protocolo de sincronização

do estro, diâmetros de 5 a 7; 7,1 a 8,5; 8,6 a 10 e >10 mm.

LISTA DE ABREVIATURAS

IATF Inseminação artificial em tempo fixo

eCG Gonadotrofina coriônica eqüina

P4 progesterona

estradiol

BE benzoato de estradiol

PGF2α prostaglandina F2α

D dia

LH hormônio luteinizante

IA inseminação artificial

GnRH Hormônio liberador de gonadotrofinas

FSH Hormônio folículo estimulante

IGF-1 fator de crescimento ligado à insulina

bST somatotropina

CL corpo lúteo

E2 estradiol

LHR receptor de LH

ECP cipionato de estradiol

PEPE P4-BE-PGF2α-BE

g grama

mL miliLitro

0,5G tratamento com dispositivo intravaginal com 0,558 g de P4

1G tratamento com dispositivo intravaginal com 1g de P4

SG colheita de sangue

US exame ultrassonográfico

IM intramuscular

Kg quilograma

mg miligrama

MHz megaHertz

EPM erro padrão da média

∅ FD diâmetro do folículo dominante

ng nanograma

CIDR dispositivo intravaginal liberador de progestrona

TRIU B dispositivo intravaginal liberador de progestrona

Cronipres

dispositivo intravaginal liberador de progestrona

SUMÁRIO

Página

RESUMO...............................................................................................

ABSTRACT............................................................................................. 15

1 INTRODUÇÃO................................................................................... 17

2 REVISÃO DA LITERATURA............................................................. 19

2.1

Dinâmica folicular......................................................................

2.2

Sincronização do estro e ovulação............................................

2.2.1

GnRH.............................................................................. 24

2.2.2

Progesterona e estradiol................................................. 25

2.2.3

Gonadotrofina coriônica equina (eCG)............................ 27

OBJETIVOS........................................................................................

HIPÓTESES A SEREM TESTADAS.................................................

MATERIAL E MÉTODOS....................................................................

5.1 Experimento 1............................................................................. 31

5.2 Experimento 2............................................................................. 35

5.3 Experimento 3............................................................................. 38

6 RESULTADOS.......................................................................................

7 DISCUSSÃO......................................................................................... 51

CONCLUSÕES......................................................................................

COMENTÁRIOS FINAIS.......................................................................

10 REFERÊNCIAS..................................................................................... 58

TRABALHO CIENTÍFICO.....................................................................

xii

PEGORER, M.F. Taxas de ovulação e prenhez em novilhas Nelore cíclicas

após utilização de protocolos para inseminação artificial em tempo fixo

(IATF), com diferentes concentrações de progesterona, associadas ou

não a aplicação de eCG. Botucatu, 2009. 89p. Tese (Doutorado) – Faculdade

de Medicina Veterinária e Zootecnia, Campus de Botucatu, Universidade

Estadual Paulista.

RESUMO

Alguns estudos indicam que altos níveis de progesterona (P4) plasmática

diminuem a pulsatilidade de LH e, conseqüentemente, o crescimento folicular.

Isto pode diminuir a eficiência de protocolos para inseminação artificial em

tempo fixo (IATF) que se baseiam na utilização de dispositivos intravaginais

contendo P4. Objetiva-se com o presente trabalho avaliar a influência de

diferentes concentrações de P4, associadas ou não à aplicação de eCG, nas

taxas de ovulação e prenhez de novilhas da raça Nelore submetidas a

protocolos para IATF. No experimento (exp.) 1, novilhas Nelore (n=15), cíclicas

e pré-sincronizadas com tratamento hormonal, foram distribuídas

aleatoriamente em quatro grupos experimentais. No dia da inserção do

dispositivo intravaginal (D0) todos os animais receberam 2 mg de benzoato de

estradiol (BE) e um dispositivo intravaginal contendo 0,558g de P4 (Triu B

grupo 0,5G, n = 4) ou 1g de P4 (Cronipress

, grupo 1G, n = 4), ou 0,558g de

P4 e PGF2α (150 µg d-cloprostenol, grupo 0,5G/PGF , n = 4) ou 1 g de P4 e

PGF2α (grupo 1G/PGF, n = 3). Oito dias mais tarde (D8) administrou-se PGF2α

em todos os animais e o dispositivo foi removido. Vinte e quatro horas após a

remoção do dispositivo intravaginal, as novilhas foram tratadas com BE (1 mg,

IM). Entre os dias D0 e D12 foram realizados, diariamente, exames

ultrassonográficos dos ovários e mensurado o diâmetro folicular. Foram

colhidas amostras de sangue para dosagem da P4 nos dias 0,1,2,4,8 e 10. No

exp. 2, novilhas cíclicas da raça Nelore (n=292) foram tratadas com os mesmos

protocolos do primeiro experimento. Entretanto, 30 a 36h após a aplicação do

BE todos animais foram submetidos a IATF (D10). Em uma amostragem de

novilhas de cada grupo os ovários foram examinados, por meio de

ultrassonografia, nos dias 9 e 12, para determinar a taxa de ovulação após

cada tratamento. No exp. 3, novilhas Nelore cíclicas (n=459) receberam os

tratamentos descritos para os grupos 0,5G/PGF e 1G/PGF, associados à

administração de 300 UI de eCG (grupos 0,5G/PGF/eCG e 1G/PGF/eCG) no

momento da retirada do dispositivo (D8). Foram realizadas, em alguns animais

de cada grupo, colheitas de sangue para dosagem da P4 plasmática (D8), e

exames ultrassonográficos dos ovários para determinação do diâmetro do

folículo dominante no D9 e taxa de ovulação no D12. Para comparação dos

níveis plasmáticos de P4 foi utilizada a análise de variância para medidas

repetidas e as variáveis binomiais (taxa de ovulação e prenhez) foram

analisadas por meio de regressão logística. No exp.1, as concentrações

plasmáticas de progesterona foram maiores nos animais que receberam o

dispositivo contendo 1 g de P4 do que aqueles que receberam o dispositivo

contendo 0,558g de P4; e menores nas novilhas que receberam PGF2

α no D0.

Tanto no segundo quanto no terceiro experimentos, não houve diferença

significativa nas taxas de ovulação (65 a 77%) e prenhez (exp. 2: 26 a 33%;

exp.3: 39 a 43%) nas novilhas dos diversos grupos experimentais. No terceiro

experimento os animais tratados com dispositivos contendo menores

concentrações de P4 apresentaram maior diâmetro do folículo dominante

(10,3±0,2 vs 9,3±0,2 mm; P<0,01) no D9. Conclui-se que a redução da

concentração de P4 no dispositivo intravaginal (1,0 vs 0,558g) ou a

administração de PGF2α no início dos tratamentos, diminuem as

concentrações plasmáticas de P4 entre os dia 1 e 8 dos protocolos de IATF.

Entretanto, embora a utilização de dispositivos intravaginais contendo menos

progesterona tenha contribuído para o aumento do folículo dominante no D9,

não alterou significativamente as taxas de ovulação e de prenhez das novilhas

Nelore. Além disso, a associação de eCG aos protocolos de IATF não

aumentou significativamente o crescimento folicular e as taxas de ovulação e

prenhez dos animais.

Palavras-chave: IATF, progesterona, novilhas Nelore, inseminação artificial,

eCG

PEGORER, M.F. Ovulation and pregnancy rates in cyclic Nellore heifers

after fixed-time artificial insemination protocols (FTAI) using different

concentration of progesterone, associated or not with eCG. Botucatu,

2009. 89p. Tese (Doutorado) – Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia,

Campus de Botucatu, Universidade Estadual Paulista.

ABSTRACT

Previous reports indicate that high concentration of plasmatic progesterone (P4)

decreases LH pulse frequency, and consequently follicular growth. This may

reduce the efficiency of fixed-time artificial insemination (FTAI) protocols that

utilize P4 in Bos indicus heifers. The objective of the present work was to

evaluate the influence of different P4 concentrations associated or not with eCG

in the ovulation and pregnancy rates of Nellore heifers submitted to hormonal

protocols for FTAI. In experiment (exp.) 1, heifers (n=15) pre-synchronized with

a hormonal treatment were randomly allocated in four experimental groups. At

the time of intravaginal device insertion (D0) all animals received 2 mg of

estradiol benzoate (EB) and an intravaginal progesterone-releasing device

containing 0.558g of P4 (TRIU

, group 0.5G, n=4) or 1g of P4 (Cronipress

group 1G, n = 4), or 0.558g of P4 and PGF2α (150 µg d-cloprostenol, group

TRIU/PGF, n = 4), or 1g of P4 and PGF2α (group 1G/PGF, n = 3). Eight days

later (D8), PGF2α (150 µg d-cloprostenol) was administered to all heifers, the

P4 source was removed. Twenty four hours after removing the intravaginal

device, the heifers were treated with EB (1 mg, i.m.). Ovarian ultrasonographic

examinations were performed daily, from the day D0 to D12 to measure follicles

diameter. Blood samples were collected during the days 0, 1, 2, 4, 8 and 10 to

evaluate plasma P4 concentration. In exp. 2, cyclic Nellore heifers (n=292) were

treated with the same protocols as in the exp. 1. However, 30 to 36 h later all

animals were fixed-time inseminated on D10. In exp. 3, heifers (n=459)

received the treatments described to groups 0.5G/PGF and 1G/PGF associated

with 300 IU of eCG (i.m., groups 0.5G/PGF/eCG and 1G/PGF/eCG) at the time

of intravaginal device removal (D8). In a subset of heifers from each group

blood samples were collected on D8 and ovarian ultrasonography was

performed to determine the diameter of the dominant follicle on D9 (exp.3) and

the ovulation rate on D12 (exp. 2 and 3). The analysis of variance to repeated

measurements was used to compare progesterone levels, and the binary

variables (ovulation and pregnancy rates) were analyzed by logistic regression.

In exp. 1 P4 concentrations were higher in animals that had received the device

content 1g of P4 than in those that had received the device content 0.558g of

P4, and lower in heifers that had received PGF2α on D0. In both exp. 2 and 3

there was no difference on ovulation (65 to 77%) and pregnancy (exp. 2: 26 to

33%; exp.3: 39 to 43%) rates among the several groups. In exp. 3, the animals

which received the devices with a lower concentration of P4 had a larger

diameter of the dominant follicle (10.3±0.2 vs 9.3±0.2 mm; P<0.01) on D9. It is

concluded that reduction of P4 concentration in the intravaginal device (1.0 to

0.558g) or the administration of PGF2α at the beginning of the treatments

decrease blood concentrations of P4 between days 1 and 8 of the FTAI

protocols. However, although the use of intravaginal devices with 0.558g of P4

contributed to increase the dominant follicle diameter on D9, there was no

significant increase on ovulation and pregnancy rates. Additionally, the

association of eCG to FTAI protocols did not improve follicular growth or

ovulation and pregnancy rates.

Key-words: FTAI, progesterone, Nellore heifers, artificial insemination, eCG

1- INTRODUÇÃO

A maioria dos rebanhos bovinos está localizada em regiões tropicais

e subtropicais do planeta, onde ocorrem altos índices pluviométricos e altas

temperaturas. Nestas regiões predominam os animais Bos indicus, devido a

sua conhecida rusticidade, alta resistência aos ectoparasitas e grande

capacidade de adaptação a ambientes adversos.

É consenso entre a comunidade científica e os criadores que a

técnica de inseminação artificial (IA) é uma importante ferramenta para acelerar

a evolução genética dos rebanhos. Um dos maiores entraves para o amplo uso

desta biotécnica é a detecção do estro (cio), por requerer tempo e pessoal

adequadamente treinado. Em fêmeas bovinas a curta duração (em torno de 11

horas) associada à incidência de estro noturno (PINHEIRO et al., 1998),

dificulta a detecção do mesmo e prejudica a implantação de programas

convencionais de IA (BARROS et al., 1995, PINHEIRO et al., 1998, MIZUTA,

2003).

A partir do conhecimento detalhado da dinâmica folicular (PIERSON

& GINTHER, 1988; SAVIO et al., 1988; SIROIS & FORTUNE, 1988) tornou-se

possível o desenvolvimento de tratamentos hormonais capazes de regular o

crescimento folicular e o momento da ovulação, viabilizando a inseminação

artificial em tempo fixo (IATF, ou seja, IA com tempo pré-determinado, sem a

necessidade de observar cio) em taurinos (TWAGIRAMUNGU et al., 1992a,b;

THATCHER et al., 1993; PURSLEY et al., 1994) e zebuínos (BARROS et al.,

1998; FERNANDES et al., 2001).

Existem diversos protocolos hormonais que resultam taxas de

prenhez em vacas ao redor de 50 a 60% (BARUSELLI et al., 2004; CUTAIA et

al., 2003). No entanto, os resultados obtidos em novilhas zebuínas são

menores, de 15 a 47% (MARQUES et al, 2005; PERES 2008, DIAS 2007).

Uma possível explicação refere-se às altas taxas plasmáticas de progesterona

nos programas que utilizam dispositivos intravaginais de

progesterona/progestágenos, causando retroalimentação negativa na

hipotálamo e consequentemente menor pulsatilidade do hormônio luteinizante

(LH; BERGFELD et al., 1995; BURKE et al., 1996, CALLEJAS et al., 2006).

Como conseqüência desse processo ocorre menor crescimento do folículo

dominante e menores taxas de ovulação e prenhez. Recentemente, Carvalho

et al. (2008) demonstraram que a utilização de PGF2α no D0 (dia da inserção

do dispositivo intravaginal de progesterona) em protocolo de IATF, reduz os

níveis circulantes de progesterona (5,2 ± 0,1 vs 3,3 ± 0,0 ng/mL; P<0,05),

levando a um maior crescimento do folículo dominante (0,9 vs 1,2 mm/dia) e

maiores taxas de ovulação (52,7 vs 79,4%).

Outro fármaco, a gonadotrofina coriônica equina (eCG), vem sendo

bastante utilizado em protocolos de IATF, em vacas recém paridas, com o

objetivo de melhorar o crescimento e a maturidade folicular. Sua atividade

semelhante ao FSH e LH pode estimular o crescimento do folículo e/ou facilitar

a ovulação (CAVALIERI et al., 1997). Em recente estudo sua utilização

promoveu aumento nas taxas de prenhez das vacas em anestro pós-parto com

baixa condição corporal (CUTAIA et al., 2003; BARUSELLI et al., 2004).

Desta forma, a utilização de dispositivos intravaginais com menores

quantidades de progesterona (P4), ou ainda, qualquer mecanismo que possa

reduzir os níveis circulantes de progesterona, como a utilização de PGF2α no

início do protocolo hormonal em novilhas cíclicas, e/ou o uso da eCG, poderiam

melhorar o desenvolvimento folicular resultando em maiores taxas de ovulação

e prenhez.

2 - REVISÃO DE LITERATURA

2.1 DINÂMICA FOLICULAR

O período entre dois estros consecutivos é denominado ciclo

estral. Com o advento da avaliação da atividade ovariana através de

ultrassonografia transretal, foi possível observar padrões de crescimento e

regressão de folículos antrais em forma de ondas durante o ciclo estral bovino

(SAVIO et al., 1988). O crescimento folicular em padrão de ondas ocorre em

todos os estágios da vida de uma fêmea, no período anterior à puberdade

(ADAMS et al., 1992) durante a gestação (GINTHER et al., 1996) e no pósparto

(MURPHY et al., 1990; SAVIO et al., 1990).

O ciclo estral é regulado por mecanismos endócrinos e

neuroendócrinos envolvendo principalmente os hormônios hipotalâmicos

(GnRH), hipofisários (LH e FSH) e gonadais (estradiol, progesterona e inibina;

HAFEZ, 1993).

O GnRH é um decapeptídio sintetizado por células

neuroendócrinas na área pré-óptica do hipotálamo e após ser liberado na forma

de pulsos (CLARKE et al., 1988) atinge a adenohipófise através do sistema

porta-hipotalâmico-hipofisário, onde determina a secreção das gonadotrofinas

(LH e FSH). Essas gonadotrofinas são liberadas de maneira pulsátil na

circulação sistêmica e atuam nas gônadas regulando a gametogênese e a

secreção dos hormônios esteróides (STANISLAUS et al., 1998).

A emergência da onda folicular é caracterizada por um

crescimento sincrônico de mais de 20 pequenos folículos com diâmetro a partir

de 2 mm (CARVALHO et al., 2008; ERENO, 2008; GINTHER et al., 1989,

ALVAREZ et al., 2000). O número de folículos recrutados em novilhas zebuínas

geralmente é maior que nas taurinas (CARVALHO et al., 2008; ALVAREZ et

al., 2000). GONG et al.(1996) acreditam que o número de folículos que

emergem numa onda de crescimento está diretamente relacionado aos níveis

circulantes de IGF-1, e que vacas tratadas com hormônio do crescimento

[somatotropina (bST)] podem aumentar o número de folículos recrutados. Além

disso, existem indicações (ALVAREZ et al., 2000) que os animais Bos indicus

apresentam níveis circulantes mais elevados de IGF-1. Desta forma, foi

sugerido que os maiores níveis de IGF-1 plasmáticos encontrados nestes

animais, seria uma das razões para a grande atividade folicular durante a

emergência da onda (CARVALHO et al., 2008).

Cada onda folicular é precedida por um aumento nas

concentrações circulantes de FSH (ADAMS et al., 1992). Após a emergência

da onda, enquanto os folículos continuam a crescer, os níveis de FSH vão

declinando até atingirem níveis basais (GINTHER et al., 1997). Essa queda nas

concentrações de FSH se dá pela ação do estradiol (E2) e da inibina

secretados pelos folículos em crescimento (GINTHER et al., 1996).

Aproximadamente 2,5 a 3,0 dias após a emergência folicular,

quando o maior folículo atinge o diâmetro de 6,2 a 8,4 mm para Bos indicus

(SARTORELLI et al., 2005; CASTILHO et al., 2007; GIMENES et al., 2008) e

cerca de 8,5 mm para Bos taurus (GINTHER et al., 1996) ocorre o evento

denominado de desvio folicular (GINTHER et al., 2001a). Desta forma, um

folículo continua a crescer e se torna dominante, enquanto os demais folículos,

denominados subordinados, sofrem regressão (MAPLETOFT et al., 2000).

Os mecanismos envolvidos no processo de desvio folicular são

complexos e não compreendidos completamente. Sabe-se que neste momento

as concentrações de FSH encontram-se em níveis basais (GINTHER et al.,

1997). Fatores intrafoliculares também são candidatos a ativação deste

processo, tais como sistema IGF, esteróides, os peptídeos ativina A e inibina A,

receptores para gonadotrofinas entre outros (ARMSTRONG & WEBB, 1997;

BERISHA et al., 2003, FORTUNE et al., 2004, IRELAND, 2004).

A expressão do LHR (receptor do hormônio luteinizante), em

novilhas da raça Holandesa, foi detectado nas células da granulosa de folículos

≥ 8 mm (BAO et al. 1997; BEG et al. 2001), cerca de 8 horas antes do desvio

folicular (BEG et al. 2001), o que levou Beg et al. (2001) e Ginther et al.

(2001b), a sugerir que o início da expressão do LHR nas células da granulosa

seria a causa para a seleção e consequentemente para a aquisição da

dominância folicular. Entretanto, Fortune et al. (2001), utilizando hibridização in

situ, e Ereno (2008) utilizando RT-PCR, não detectaram a expressão do LHR

no futuro folículo dominante, imediatamente antes da seleção folicular.

Recentemente, Nogueira et al. (2007) e Ereno (2008), verificaram que a

expressão do LHR em células da granulosa de fêmeas da raça Nelore ocorre

entre 7 e 8 mm de diâmetro folicular. Portanto, estes últimos achados não

corroboram a hipótese de que expressão de LHR em células da granulosa

ocorre antes da divergência folicular.

Está bem documentado que o estrógeno endógeno produzido

pelos folículos ovarianos acentua a amplitude dos pulsos de LH durante a fase

folicular do ciclo estral, através do aumento de receptores do hormônio

liberador de LH na pituitária anterior e do conseqüente aumento da capacidade

estrogênica dos folículos pré-ovulatórios (STUMPF et al., 1989). Esse

mecanismo de retroalimentação positiva entre o E2 e o LH é crítico no

processo de maturação final do folículo ovulatório, induzindo o comportamento

estral e a ovulação (FIKE et al, 1997).

No início da fase de recrutamento folicular, os dois maiores

folículos apresentam uma taxa de crescimento semelhante, mas após o desvio

folicular, o folículo subordinado tem sua taxa de crescimento reduzida

(GINTHER et al., 2001b; 2003; ERENO, 2008). Em vacas holandesas a taxa de

crescimento do FD variou de 1,5 a 2,1 mm/dia antes do desvio (KULIK et al.,

1999; GINTHER et al., 1997; GINTHER et al., 2001b) enquanto nas nelores

variou de 0,9 a 1,4 mm/dia (CASTILHO et al., 2007; SARTORELLI et al., 2005).

Na presença de um corpo lúteo funcional e de níveis de P4 acima

de 1 ng/mL, esse primeiro FD não é capaz de induzir o pico de LH, e nem

provocar comportamento de estro e ovulação (FORTUNE, 1993). Segundo

Roberson et al. (1989), na presença de altas concentrações plasmáticas de

progesterona (acima de 5 ng/mL) há decréscimo na freqüência de pulsos de

LH. Desta forma, o folículo dominante acaba sofrendo atresia e não ovula. A

presença do CL caracteriza a fase lútea do ciclo estral. Nesta fase, o CL produz

P4 em quantidades crescentes do quarto ao décimo dia do ciclo estral e a

secreção se mantém estável até que ocorra a luteólise, entre o 15° e o 20° dia

(HAFEZ, 1993). O LH secretado pela adeno-hipófise é regulado pela P4 e E2

ovarianos. Durante a fase lútea do ciclo estral, ambos os hormônios inibem a

secreção de LH por retro-alimentação negativa sobre o eixo hipotalâmico-

hipofisário (CLARKE, 1988).

Após a luteólise a concentração plasmática de P4 regride a valores

abaixo de 1 ng/mL, permitindo um aumento na freqüência dos pulsos de LH

(WILTBANK et al., 2002). O aumento na freqüência dos pulsos de LH estimula

a maturação do folículo dominante que passa a secretar quantidades

crescentes de E2 (FORTUNE et al., 2001). O E2, na ausência de P4, estimula

a síntese de receptores de GnRH na hipófise tornando-a mais sensível ao

GnRH ao mesmo tempo que aumenta a frequência e amplitude dos pulsos de

GnRH (HANSEL & CONVEY, 1983) e estimula a síntese de gonadotrofinas,

resultando no pico de LH (HURNIK, 1987) e consequente ovulação do folículo

dominante (MUKASA-MUGERWA, 1989).

Existem vários trabalhos sobre a dinâmica folicular em zebuínos

(FIGUEIREDO et al., 1997; GAMBINI et al., 1998; ALVAREZ et al., 2000;

SARTORELLI et al., 2005; CASTILHO et al., 2007; GIMENES et al., 2008)

demonstrando que as características de crescimento folicular e dominância são

similares aqueles dos taurinos exceto que os zebuínos aparentam ter um

menor diâmetro máximo do FD (10-12 mm) e do CL (17-21 mm; FIGUEIREDO

et al., 1997; SARTORELLI et al., 2005; CASTILHO et al., 2007; GIMENES et

al., 2008) do que as raças européias (14-20 mm e 20-30 mm, para e CL

respectivamente; KASTELIC et al., 1990; BO et al., 1993).

Carvalho et al. (2008), utilizando animais sincronizados com

dispositivo intravaginal, constataram que o diâmetro máximo do FD foi menor

em novilhas B. indicus quando comparadas às B. taurus (9,5±0,5 mm vs

11,6±0,5mm), assim como a taxa de crescimento do folículo dominante nas

novilhas zebuínas foram menores do que aqueles encontrados nas raças

européias (0,9±0,1mm/dia vs 1,1±0,1 mm/dia, respectivamente). Por isso,

concluíram que o menor tamanho do FD está diretamente relacionado à sua

menor taxa de crescimento.

Aquisição de capacidade ovulatória

Sartori et al. (2001) observaram que após a administração de 40

mg de LH, nenhuma vaca da raça Holandesa com folículo de 7,0 (0/9) ou 8,5

mm (0/9) ovulou, comparadas com 80% (8/10) de ovulações em vacas com

folículos de 10 mm. Portanto, a capacidade ovulatória em Bos taurus foi

verificada em folículos a partir de 10 mm de diâmetro, ou seja, um dia após o

desvio folicular.

Gimenes et al. (2008), realizaram um experimento com novilhas

Nelore, Gir e cruzadas (Nelore x Gir) a fim de verificar o diâmetro nos quais os

folículos adquirem capacidade ovulatória. As fêmeas tratadas com 25 mg de

LH quando o folículo dominante atingiu diâmetro entre 7,0 e 8,4 mm; 8,5 e 10,0

mm e acima de 10,0 mm, apresentaram taxas ovulatórias de 33, 80 e 90%,

respectivamente. De forma similar, em vacas da raça Nelore, a administração

de LH induziu ovulação em 90% dos animais com folículos entre 9 e 10 mm e

20% nas vacas com folículos entre 7,5 e 8 mm de diâmetro (SIMÕES et al.,

2009). Esses dados são sugestivos de que a capacidade ovulatória em Bos

indicus é adquirida com diâmetros inferiores aos observados em Bos taurus.

Embora um aumento na expressão do LHR das células da granulosa seja

necessário para a aquisição de dominância folicular, somente esse aumento

parece não ser suficiente para a instalação plena da capacidade ovulatória. Tal

mecanismo, ainda não elucidado, parece ser decorrente de um aumento, ainda

maior, na quantidade de LHR, associada às alterações nas vias de sinalização

intracelular que o LHR possui na fase pós-divergência.

2.2. SINCRONIZAÇÃO DO ESTRO E OVULAÇÃO

O principal mecanismo de regulação do ciclo estral é a regressão

do CL, que normalmente ocorre nas fêmeas bovinas ao redor do dia 16 a 18 do

ciclo. Assim sendo, o CL é um fator chave em vários processos reprodutivos,

tais como a ovulação e a duração do ciclo estral (MILVAE et al., 1996). As

formas de controle do ciclo estral em bovinos estão baseadas na extensão ou

redução da fase luteínica, utilizando progestágenos ou prostaglandinas, e na

alteração da onda folicular, utilizando E2 ou GnRH (BURKE et al., 1996).

A PGF2α é o tratamento mais comum utilizado para sincronização

do cio em bovinos (revisado por ODDE, 1990). No entanto, a PGF2α não induz

a luteólise durante os primeiros 5 ou 6 dias após o estro (MOMONT & SEGUIN,

1984). Além disso, a manifestação do cio pode se estender por um período de

até 6 dias, sendo influenciada pela capacidade de resposta do CL à droga

(MOMONT & SEGUIN, 1984) e pela fase do desenvolvimento da onda folicular

(KASTELIC & GINTHER, 1991).

Embora da administração de PGF2α resulte boas taxas de

manifestação do estro nas fêmeas B. taurus (70-90%; GALINA & ARTHUR,

1990), os resultados em B. indicus têm sido bastante variáveis. Pinheiro et al.

(1998) observaram manifestação de estro abaixo de 50%, mesmo na presença

de CL funcional, quando administraram PGF2α em vacas nelores, com

resultado bastante semelhante ao observado por Gambini et al. (1998), em

vacas da raça Gir. A combinação de fatores, baixa e variável resposta do estro,

mais a alta incidência de anestro dos animais mantidos em pastagens tropicais,

explicam a baixa eficiência dos programas de sincronização do cio utilizando

somente a PGF2α (CAVALIERI et al., 1997; PINHEIRO et al., 1998).

Uma forma bastante eficiente, mas pouco utilizada de sincronizar

a onda folicular consiste na ablação mecânica de folículos maiores de 5 mm de

diâmetro, através da aspiração folicular guiada por ultrassom, resultando uma

nova onda em torno de 1,9 ± 0,1 dias após o procedimento (BURATINI et al.,

2000). No entanto, este procedimento se torna dispendioso pela necessidade

de um aparelho de ultrassom e fica impraticável quando se trabalha com um

grande número de animais. Desta forma a estratégia mais viável para

sincronização de nova onda folicular refere-se à utilização de hormônios, como

o GnRH ou o E2 associado à P4.

2.2.1 GnRH

O tratamento com GnRH induz a ovulação do folículo dominante,

através da liberação hipofisária do LH. Em torno de 2 horas após sua

administração, ocorre pico de LH e 24 a 32 horas é induzida a ovulação do FD,

iniciando uma nova onda cerca de 2 dias após a aplicação (PURSLEY et al.,

1995).

Vários protocolos foram propostos para sincronização do cio

utilizando-se a combinação de GnRH e PGF2α (PURSLEY et al., 1997). Um

destes tratamentos ficou conhecido como Ovsynch (PURSLEY et al., 1995) e

consiste na aplicação de GnRH, sete dias após PGF2α e uma segunda

aplicação de GnRH cerca de 48 horas após a PGF2α com a IATF 16 horas

mais tarde. No entanto, a capacidade do GnRH em iniciar uma nova onda

folicular é limitada em vacas (66%; GEARY et al., 2000) e principalmente em

novilhas (56%; PURSLEY et al, 1995). A falha em induzir ovulação na primeira

aplicação de GnRH, resulta em baixa taxa de sincronização da onda folicular, o

que comprometeria as taxas de concepção (PERRY et al., 2004). Infelizmente,

as novilhas inseminadas após sincronização do estro, utilizando protocolo

Ovsynch, apresentam taxas de concepção abaixo do ideal tanto para B. taurus

(38,9%; revisado por DAY, 2005), quanto para B. indicus (21 e 43%; revisado

por BO et al., 2003). Dados da literatura sugerem que novilhas apresentam

menor resposta ovulatória à primeira aplicação de GnRH, por possuírem maior

proporção de 3 ondas de crescimento folicular, resultando menores taxas de

sincronização da onda (PURSLEY et al., 1995). Além disso, o diâmetro do

folículo no momento da aplicação do GnRH influencia diretamente sua

capacidade ovulatória (MARTINEZ et al., 1999; SARTORI et al., 2001), uma

vez que a expressão de receptores de LH nas células da granulosa ocorre

após o desvio folicular, em torno de 2,5 dias após a emergência da onda,

quando o folículo atinge cerca de 8,5 mm de diâmetro (XU et al., 1995;

GIMENES et al., 2008).

Outro fator limitante destes protocolos é a incidência de estro

antes da IATF, que pode ocorrer devido a não sincronização ao primeiro GnRH

(WILLIAMS et al., 2002; ROY et al., 1999). Williams et al. (2002) relataram que

a inseminação das novilhas que mostraram estro antes da segunda injeção de

GnRH, apresentaram um aumento nas taxas de prenhez de 42,4 para 57,5%.

Uma alternativa bastante interessante para evitar ovulações antecipadas é a

utilização de um dispositivo de P4 durante o protocolo.

2.2.2 PROGESTERONA E ESTRADIOL

As tentativas iniciais em sincronizar o cio em bovinos utilizando

progestágenos baseavam-se no conhecimento de que a P4 previne a

ocorrência de cio e ovulação (CHRISTIAN et al., 1948).

Estudos realizados para avaliar diferentes protocolos à base de

progestágenos/progesterona mostraram que tratamentos longos para

regressão espontânea do CL (

≥14 d) foram eficientes em sincronizar o estro.

No entanto, a utilização da progestrona por período maiores que 13 dias levam

à formação de folículos dominantes de maior tamanho (persistentes; CUSTER

et al., 1994; KINDER et al., 1996) e de reduzida fertilidade. A baixa fertilidade é

atribuída à maturação espontânea do oócito (quebra da vesícula germinativa e

expansão do cumulus) presente no folículo persistente (REVAH & BUTLER,

1996).

Tratamentos que induzem à regressão do folículo persistente e

levam à emergência de uma nova onda de crescimento folicular melhoraram as

taxas de prenhez em programas de IA (MCDOWELL et al., 1998).

Inicialmente, o E2 foi utilizado em conjunto com a P4 com o intuito

de induzir luteólise (WILTBANK et al., 1961). Durante a década de 1990,

observou-se que os tratamentos com E2 inibiam o crescimento do folículo

antral (BO et al., 1991). A administração de 5 mg de 17β estradiol em

associação com implantes de P4 sincronizam a emergência de uma nova onda

de crescimento folicular, em média, cerca de 4,3 ± 0,2 dias mais tarde (BO et

al., 1995). Outros estudos avaliaram o efeito de diferentes ésteres de E2 na

indução da emergência da onda folicular. O uso do valerato de E2 (VE;

MAPLETOFT et al., 1999) ou do cipionato de E2 (ECP; THUNDATHIL et al.,

1998) provoca a regressão folicular, mas a emergência da onda acontece de

forma menos previsível, devido sua longa meia-vida, do que a determinada por

fármacos de ação mais curta, como o 17β-estradiol (BÓ et al., 1995) e o

benzoato de estradiol (BE; CACCIA & BÓ, 1998). O BE, aplicado por via

intramuscular em combinação com 50mg de P4 resultou na emergência de

nova onda folicular em 4,1 ± 0,1 dias, com variação de 3,5 a 5 dias (MORENO

et al., 2001).

Nos últimos anos tornaram-se disponíveis na América do Sul

vários dispositivos intravaginais que liberam P4 (CIDR



, DIB



, PRID



Cronipress



, Primer



). O uso destes dispositivos intravaginais liberadores de

P4 associados à administração de BE é um dos tratamentos mais utilizados

para a IATF de vacas (MACMILLAN & BURKE, 1996; BO et al., 2002, 2003). O

tratamento mais conhecido consiste na administração de BE (2,0 mg, via IM)

no momento da inserção do dispositivo (Dia 0), aplicação de PGF2α no dia da

remoção do dispositivo (Dia 8) e 1,0 mg de BE (via IM) 24 horas mais tarde. A

IATF é realizada 30 a 36 horas após a última aplicação de BE. Portanto, neste

protocolo são utilizados os seguintes hormônios: progesterona-estrógeno-

prostaglandina-estrógeno (protocolo PEPE; revisado por BARROS & ERENO,

2004). No entanto a utilização deste protocolo em novilhas Nelore, não

apresenta bons resultados (BARUSELLI et. al., 2001).

Alguns estudos demonstram que altas concentrações de P4

circulantes diminuem a pulsatilidade do LH (BERGFELD et al., 1995; BURKE et

al., 1996; CALEJAS et al., 2006), reduzem o crescimento do folículo dominante

e a eficiência dos protocolos baseados na utilização da P4 (BARUSELLI et al

2001). Colazo et al. (2008) realizaram um experimento para averiguar a

resposta do GnRH em induzir a liberação de LH sob altos níveis de P4, tanto

em novilhas, quanto em vacas. Os autores observaram que níveis elevados de

P4 plasmática reduzem a liberação de LH pela hipófise após a administração

de GnRH tanto em novilhas quanto em vacas, de forma linear, não observando

diferenças entre as duas categorias.

Mantovani et al. (2004) relataram que a utilização da PGF2α no

quinto dia, durante o tratamento com dispositivos contendo P4, em novilhas

mestiças, foi efetiva em reduzir os níveis plasmáticos de P4, aumentar o

crescimento do folículo dominante e a taxa de ovulação. Carvalho et al (2008)

utilizaram o mesmo tratamento e observaram uma melhora nas taxas de

ovulação no grupo que recebeu PGF2α em relação ao controle [79,4% (27/34)

vs 52,7% (19/36)]. No entanto, Marques et al. (2005) testaram a eficácia da

aplicação da PGF2α no dia da inserção do progestágeno em relação às taxas

de prenhez em novilhas Nelore, ciclando ou pré-púberes, e não observaram

diferenças [com PGF2α: 25,8% (50/194) vs sem PGF2α: 24,7% (49/198)].

2.2.3 GONADOTROFINA CORIÔNICA EQUINA (eCG)

Outro fármaco que poderia contribuir para aumentar o

crescimento final do folículo pré ovulatório seria a gonadotrofina coriônica

equina (eCG). A eCG é uma gonadotrofina glicoprotéica produzida pela

placenta de equinos durante a gestação (COMBARNOUS, 1992). Quando

administrada em outras espécies a eCG se liga aos receptores de FSH e de

LH, sendo a única gonadotrofina capaz de se ligar simultaneamente a esses

dois receptores, exceto nos equinos (MURPHY & MARTINUK, 1991). Na égua

o eCG estimula a formação das glândulas luteais acessórias para auxiliarem na

manutenção da gestação (Ginther, 1996). Nos bovinos essa gonadotrofina

apresenta longo tempo de ação, variando de 50 a 100 horas, devido à

proporção de ácido siálico (10 a 15%) presente na sua molécula (SCHAMS et

al., 1978).

Sá Filho et al. (2004), utilizando vacas lactantes em anestro,

verificaram que o uso da eCG em protocolos de IATF, após a retirada do

implante auricular de progestágeno, não induziu aumento no diâmetro máximo

do folículo ovulatório (eCG: 13,0±0,6 vs não eCG: 12,8±0,8 mm), embora

apresentassem aumento nas taxas de ovulação [eCG: 71% (19/26) vs não

eCG: 50% (14/24); p<0,05]. Mesmo assim, outros trabalhos indicam que a

adição de eCG (400 UI, IM) ao protocolo PEPE aumentou a taxa de prenhez

em zebuínos [38,9% (42/108) vs 54,7% (58/106), P<0,05; BARUSELLI et al.,

2003] ou mestiços [indicus x taurus; 46,8% (44/96) vs 59,1% (58/98), P<0,05;

CUTAIA et al., 2003] principalmente se os animais se encontrarem em anestro

pós-parto e com baixo escore corporal (≤ 2, em uma escala de 0 a 5, revisado

por BARUSELLI et al., 2004). Marques et al. (2003) reportaram que vacas

tratadas com eCG no dia da remoção do dispositivo de P4, apresentaram uma

melhora nos níveis circulantes de P4 12 dias após o fim do tratamento (8,6±0,9

vs 4,5±0,7 ng/ml), o que poderia favorecer a manutenção da gestação.

Da mesma forma, novilhas nelores sincronizadas com o protocolo

PEPE, associado ao eCG (400 UI, IM) apresentaram uma melhora nas taxas

de prenhez [com eCG: 34,9% (68/195) vs sem eCG: 15,7% (31/197), P<0,05;

MARQUES et al., 2005].

O presente estudo tem como objetivo avaliar os efeitos do tratamento

com diferentes níveis de progesterona plasmática no desenvolvimento folicular,

nas taxas de ovulação e prenhez, utilizando no protocolo de sincronização do

estro dispositivos intravaginais contendo 0,558 ou 1 g de progesterona

associadas ou não á PGF2α ao início do tratamento. Além disso, determinar se

a aplicação de 300 UI de eCG na retirada do dispositivo pode resultar em maior

crescimento folicular e maiores taxas de ovulação e prenhez, apesar dos

resultados não apresentarem ainda taxas satisfatórias.

3 – OBJETIVOS

Objetiva-se com o presente trabalho determinar se:

1) A utilização de dispositivos intravaginais contendo 0,558g de P4

e/ou a aplicação da PGF2α no dia da inserção de dispositivo

intravaginal no protocolo de sincronização do estro levam à

redução dos níveis plasmáticos de progesterona durante o

período de tratamento;

2) A redução dos níveis plasmáticos de P4 resulta em aumento do

diâmetro do folículo dominante no dia 9 do protocolo de

sincronização do estro;

3) O aumento do diâmetro do folículo dominante no D9 do protocolo

de IATF resulta em maiores taxas de ovulação e prenhez.

4) A utilização do eCG aumenta o tamanho do folículo dominante,

aumentando as taxas de ovulação e prenhez.

4 – HIPÓTESES A SEREM TESTADAS

• A utilização de dispositivo intravaginal contendo 0,558 g de P4 em

comparação a dispositivo contendo 1 g de P4, resulta em

menores níveis plasmáticos de P4 e contribui para o aumento do

diâmetro do folículo dominante e maiores taxas de ovulação e

prenhez.

• A administração de eCG no momento da retirada do dispositivo

intravaginal favorece o aumento do diâmetro do folículo

dominante e resulta em maiores taxas de ovulação e prenhez.

5 - MATERIAL E MÉTODOS

5.1 – EXPERIMENTO 1

5.1.1 – Localização e animais

O experimento foi conduzido na Estância Rosalito (latitude 22° 55´

S e longitude 49°40´O), localizada no município de Santa Cruz do Rio Pardo,

estado de São Paulo, durante o mês de março de 2006.

Inicialmente, foram utilizadas novilhas (n = 20) da raça Nelore,

com 2 a 3 anos de idade, pesando 296,9 ± 3,6 kg (média ± EPM), com

condição corporal de 2,8 ± 0,02 [média ± EPM; variando de 1 a 5 (LOWMAN

1976)], mantidas em pastagens de Brachiaria brizantha e suplementadas com

sal mineral e água a vontade. Os animais foram pesados individualmente no

começo (D -17) e no final (D12) do experimento, sempre no início do período

da manhã.

5.1.2 – Grupos Experimentais

Novilhas da raça Nelore (n = 20), com presença de corpo lúteo ao

exame ultrassonográfico, foram pré sincronizadas, utilizando-se um dispositivo

intravaginal contendo 1 g de progesterona (D -17) durante 9 dias (Cronipres

Biogenesis-Bagó, Buenos Aires, Argentina). No dia da retirada do dispositivo (D

-9) os animais receberam 150 µg de d-cloprostenol (Croniben

, Biogenesis,

Buenos Aires, Argentina, via IM) e vinte e quatro horas depois (D -8) 1 mg de

benzoato de estradiol (BE, Bioestrogen, Biogenesis-Bagó, Buenos Aires,

Argentina, via IM). Os animais foram avaliados de 60 a 72 horas após a

aplicação do BE para determinar a ovulação (Figura 1).

Em cinco animais os tratamentos não foram efetivos em

sincronizar a onda de crescimento folicular (folículos menores que 5 mm no D8)

sendo descartados na sequencia do experimento.

As novilhas que apresentaram ovulação (constatada pelo exame

ultrassonográfico; n = 15) foram distribuídas aleatoriamente em quatro grupos

experimentais.

Os animais dos grupos 0,5G (n = 4) e 1G (n = 4) receberam no D0

um dispositivo contendo 0,558g (TRIU-B

, Biogenesis-Bagó, Buenos Aires,

Argentina, via intravaginal) ou 1g de P4 (CRONIPRES

, Biogenesis-Bagó,

Buenos Aires, Argentina, via intravaginal) e também 2 mg de benzoato de

estradiol (BE, Bioestrogen

, Biogenesis-Bagó, Buenos Aires, Argentina, via IM).

Os animais dos grupos 0,5G/PGF (n = 4) e 1G/PGF (n = 3) receberam o

mesmo tratamento dos grupos 0,5G e 1G, mais 75 µg de d-cloprostenol

(Croniben®, Biogenesis-Bagó, Buenos Aires, Argentina, via IM) no dia da

inserção do dispositivo intravaginal (D0).

5.1.3 Ultrassonografia e Dinâmica Folicular

Todos os animais foram monitorados diariamente do dia da

inserção do dispositivo intravaginal (D0) até 48 horas após sua retirada (D8)

por ultrassonografia (Aloka SSD 900, transdutor de 9 MHz) transretal,

realizadas pelo mesmo operador. Nos dias D11 e D12 os exames foram

realizados a cada 12 horas.

O transdutor de ultrassom foi movimentado sobre a superfície dos

ovários e, quando necessário, a imagem do monitor foi “congelada” para

mensuração do tamanho dos folículos (≥ 2mm). Duas imagens diferentes de

cada folículo foram obtidas e mensuradas. Quando se observou acentuada

diferença entre as mensurações, obteve-se uma terceira imagem para

confirmar o tamanho correto do folículo. Após cada exame, foram desenhados

diagramas da posição dos folículos em relação a outras estruturas ovarianas,

de forma a permitir a identificação de cada folículo durante dias sucessivos.

O momento do início da onda de crescimento folicular foi

determinado pelo aparecimento de um grupo de folículos maiores de 2 mm. A

taxa de crescimento (mm/dia) foi calculada pela diferença entre o diâmetro

mínimo e o diâmetro máximo, dividida pelo período de crescimento

(FIGUEIREDO et al., 1997; CARVALHO et al., 2008).

Considerou-se como o momento da ovulação a média entre a última vez que o

folículo ovulatório foi visto e a primeira ocasião em que o mesmo não foi

detectado no monitor do ultrassom.

Figura 1. Protocolo para pré-sincronização (D -17 a D -5) e sincronização (D 0

a D 12) do ciclo estral de novilhas Nelores cíclicas utilizando dispositivo

intravaginal contendo 1 ou 0,558 g de progesterona, associadas ou não a

aplicação de 150µg de PGF2α no D0. O crescimento folicular foi

acompanhamento por meio de exames de ultrassonografia realizados

diariamente entre os dias 0 e 8, e a cada 12 horas entre os dias 9 e 12.

5.1.3 – Coleta de sangue e radioimunoensaio da progesterona

Foram realizadas coletas de sangue através de venopunção da

veia coccígea em tubos heparinizados (BD Vacutainer

, New Jersey, USA; 10

mL) nos dias 0, 1, 2, 4, 8 e 10 do tratamento (Figura 1). Após a colheita as

amostras foram mantidas em recipientes com gelo por no máximo 5 horas. As

amostras foram centrifugadas a 1600 xg por 20 minutos e armazenadas a -

20°C, para posterior dosagem de progesterona. As concentrações plasmáticas

de P4 foram determinadas, em um único ensaio, com “Kit” da DSL

Progesterona (DSL 32400, Diagnostic Systems Laboratories, Inc., Webster,

Texas, USA). O coeficiente de variação intraensaio foi de 1,49%.

D10

US diariamente

PGF

αα

PGF

αα

Progesterona Progesterona

US 12/12 hs

D11

SG SG SG

–

exame ultrassonografico

SG – colheita de sangue

BE – benzoato de estradiol

5.1.4 – Análise estatística

As variáveis peso dos animais ao início e ao final do experimento,

início da onda de crescimento folicular, número de folículos recrutados,

diâmetro folicular no D8 e D9, diâmetro máximo do folículo dominante e taxa de

crescimento do folículo dominante foram comparadas por análise de variância

através do programa PROC GLM (SAS 9.1, 2002). Para análise dos níveis

plasmáticos de progesterona foi utilizada a análise de variância para medidas

repetidas, através do programa PROC GENMOD do SAS 9.1 (2002),

verificando efeito principal da aplicação de PGF2α no D0, uso de dispositivos

intravaginais com diferentes concentrações de P4 (0,558 vs 1g), tempo e suas

interações.

5.2 - EXPERIMENTO 2

5.2.1 Localização e animais

O experimento foi conduzido na Fazenda Cristal (latitude 22°31’

S; longitude 50°04’ O), localizada no município de Campos Novos Paulista,

estado de São Paulo, e na Fazenda Pontal (latitude 14°27’ S; Longitude 51°43’

O), localizada no município de Nova Xavantina, estado de Mato Grosso,

durante os meses de novembro e dezembro de 2006. Foram utilizadas novilhas

(n = 292) da raça Nelore, com dois a três anos de idade, pesando entre 270 e

430 kg, com condição corporal de 2,8 ± 0,02 (média ± EPM; variando de 1 a 5;

Lowman et al., 1976), mantidas em pastagens de Brachiaria brizantha ou

Brachiaria decumbens, suplementadas com sal mineral e água a vontade.

5.2.2. Grupos experimentais

Os animais foram previamente submetidos a dois exames

ultrassonográficos dos ovários, com 10 dias de intervalo, a fim de determinar a

presença de CL. Somente as novilhas com CL em pelo menos uma das

ultrassonografias foram utilizadas no experimento. Estas novilhas foram

distribuídas ao acaso em quatro grupos experimentais contendo 1g (grupo 1G)

ou 0,558g (grupo 0,5G) de P

, associadas (com PGF) ou não (sem PGF) à

aplicação de PGF2α no dia da inserção do dispositivo intravaginal (D0).

No momento da introdução do dispositivo foi determinada a

condição corporal de todos os animais e 22 animais foram pesados.

As novilhas dos Grupos 0,5G (n = 76) e 1G (n = 70) receberam

um dispositivo intravaginal contendo progesterona (Triu B

; Biogenesis-Bagó,

Buenos Aires, Argentina, 0,558g P4 ou Cronipres

; Biogenesis-Bagó, Buenos

Aires, Argentina, 1g P4) no D0, respectivamente e benzoato de estradiol

(Bioestrogen

, Biogenesis-Bagó, Buenos Aires, Argentina, 2mg, via IM). Nove

dias mais tarde (D8) foi administrada 150µg de d-cloprostenol (Croniben

Biogenesis-Bagó, Buenos Aires, Argentina, via IM), e o dispositivo intravaginal

foi removido. Vinte e quatro horas após a remoção do dispositivo as novilhas

foram tratadas com BE (1,0 mg, via IM) e 30-36 h depois os animais foram

inseminados artificialmente (IATF) sem observação de cio (Figura 2).

US: exame ultra-sonográfico dos ovários

OV: ovulação

Figura 2. Protocolo para sincronização da ovulação de novilhas Nelores cíclicas

utilizando dispositivos intravaginais contendo 1 (grupo 1G) ou 0,558g (grupo

0,5G) de progesterona, associadas (grupos 1G/PGF e 0,5G/PGF) ou não a

PGF2α no início do tratamento (D0)

Os animais dos grupos 0,5G/PGF (n = 75) e 1G/PGF (n = 71)

foram tratados de forma similar aos grupos 0,5G e 1G, respectivamente, exceto

que receberam 2 doses de PGF2α (150µg d-cloprostenol; via IM; no D0 e D8).

5.2.3 – Touros e inseminadores

Foram utilizadas doses de sêmen comerciais de 12 touros,

previamente analisadas e aprovadas quanto às características de motilidade e

vigor. As doses de sêmen utilizadas foram distribuídas proporcionalmente entre

os grupos tratados.

A maioria das inseminações foi realizada por um único

inseminador experiente, as demais foram realizadas por outros dois

1 ou 0,558g P4

BE IATF

D-10

D9 D10

D12

OV BE

PGF2

αα

PGF2

αα

inseminadores, também bastante experientes, distribuídas proporcionalmente

entre os grupos.

5.2.4 – Ultrassonografia

Após a última aplicação de BE (D 9) foi realizado o exame

ultrassonográfico (Aloka SSD 500, transdutor de 5,0 MHz) em

aproximadamente metade dos animais de cada grupo [0,5G (n = 28); 1G (n =

35); 0,5G/PGF (n = 34); 1G/PGF (n = 31)] para identificação do FD. As novilhas

que não apresentaram folículos maiores que 5 mm no dia da ultrassonografia

(D9) foram considerados como não sincronizados. Portanto, a taxa de

sincronização foi determinada pela razão entre o número de animais com FD

no D9 maiores que 5 mm e o total de animais tratados.

No décimo segundo dia, 72 horas após a aplicação da segunda

dose do BE, foi realizado novo exame ultrassonográfico para determinar a taxa

de ovulação dos folículos detectados no D9.

O Diagnóstico de gestação foi realizado por exame

ultrassonografico cerca de 35 dias após a IATF.

5.2.5 – Análise Estatística

As variáveis taxas de sincronização do folículo dominante,

ovulação e prenhez foram analisadas por regressão logística, através do

programa PROC GENMOD (SAS 9.1, 2002). Para as análises de taxas de

prenhez foram consideradas no modelo o efeito do tipo de dispositivo

intravaginal, aplicação ou não da PGF no D0, fazenda, inseminador, touro,

ECC e interações.

5.3 – EXPERIMENTO 3

5.3.1 – Animais e localização

O experimento 3 foi conduzido durante a estação reprodutiva de

novembro 2007 a maio de 2008, nas mesmas fazendas do experimento 2.

Foram utilizadas novilhas Nelores (n = 459), com idade entre 2 e 3 anos e

condição corporal de 2,8 ± 0,01 [média ± EPM; escore de condição corporal

variando de 1 a 5 (Lowman et al., 1976)].

5.3.2 Grupos experimentais

As novilhas foram distribuídas ao acaso em quatro grupos

experimentais. Dois grupos idênticos aos do experimento 2 [grupos 0,5G/PGF

(n=109) e 1G/PGF (n=119)] e dois novos grupos (0,5G/PGF/eCG e

1G/PGF/eCG) semelhantes aos primeiros, exceto que os animais receberam

300 UI de eCG (Novormon, Shering-Plough, New Jersey, USA; via IM) no

momento da retirada do dispositivo intravaginal (D8).

5.3.3 – Colheita de sangue e radioimunoensaio de P4

Foram selecionados aleatoriamente alguns animais de cada

grupo [0,5G/PGF (n = 38); 1G/PGF (n = 47); 0,5G/PGF/eCG (n = 39) e

1G/PGF/eCG (n = 43)] para colheita das amostras. Após a colheita, as

amostras (10 mL) foram imediatamente centrifugadas a 1600 xg por 20 minutos

e o plasma obtido armazenado a –20

C, até o momento da análise por meio de

técnica de radioimunoensaio. As concentrações plasmáticas de progesterona

foram determinadas de acordo com a técnica de radioimunoensaio descrita por

Knickerbocker et al. (1986), modificadas por Carriere e Lee (1994). Os

coeficientes de variação intra e interensaios foram de 4,56% e 11,48%,

respectivamente.

5.3.4 – Ultrassonografia

Os exames ultrassonográficos dos animais foram realizados de

forma semelhante ao segundo experimento. Além disso, no momento da

aplicação do BE (D9) foram realizadas medidas do diâmetro do folículo

dominante de um grupo de novilhas [0,5G/PGF (n= 48); 1G/PGF (n = 41);

0,5G/PGF/eCG (n = 51); 1G/PGF/eCG (n = 55)].

O diagnóstico de gestação foi realizado por exame de

ultrassonografia cerca de 35 dias após a IATF.

5.3.5 – Touros e inseminadores

Foram utilizadas doses de sêmen comerciais previamente

analisadas quanto às características de motilidade e vigor, de oito touros,

sendo seis da raça Nelore e dois Brangus. As doses de sêmen foram

distribuídas proporcionalmente entre os grupos tratados.

Todas as inseminações foram realizadas por um único

inseminador experiente.

5.3.6 – Análise estatística

As variáveis taxas de sincronização do folículo dominante,

ovulação e prenhez foram analisadas por regressão logística, através do

programa PROC GENMOD do SAS 9.1 (2002). Para as análises de taxas de

ovulação e prenhez foram considerados no modelo o efeito da quantidade de

progestrona no dispositivo intravaginal, utilização de 300UI de eCG no dia 8 do

protocolo, fazenda, touro, ECC e suas interações.

As medidas do diâmetro folicular no D9 e concentração

plasmática de P4 no D0 e D8 foram comparadas por análise de variância

através do programa PROC-GLM do SAS 9.1 (2002).

6 – RESULTADOS

6.1 – Experimento 1

Em todos os grupos houve uma significativa perda de peso das

novilhas ao final do experimento, devido principalmente ao manejo intenso a

que foram submetidas (tabela 1).

Não houve diferença significativa no intervalo entre a inserção do

dispositivo intravaginal de P4 (D0) e a emergência da nova onda de

crescimento folicular, assim como o número de folículos recrutados (>2 mm)

entre os grupos 0,5G e 1G, com ou sem PGF2α (tabela 2).

Tabela 1. Peso (média ± EPM) de novilhas Nelore, ao início (D0) e ao final do

experimento (D12), tratadas com dispositivos intravaginais contendo 0,558g

(grupo 0,5G) ou 1g (grupo 1G) de progesterona e suas associações com

PGF2α (grupos 0,5G/PGF e 1G/PGF) submetidas a exames diários de

ultrassonografia transretal.

Peso (kg)

Tratamentos N inicial final Valor de P

0,5G 4 307 ± 12,5 288 ± 10,9 0,001

1G 4 342 ± 21,9 329 ± 24,8 0,01

0,5G/PGF 4 325 ± 10,2 311 ± 11,7 0,009

1G/PGF 3 318 ± 6,5 307 ± 10,1 0,03

As novilhas do grupo 0,5G apresentaram taxa de ovulação de

50% (n=4/8), e não diferiram daquelas do grupo1G, que apresentaram taxa de

ovulação de 43% (n=3/7). Os animais que não receberam a PGF2α no D0

apresentaram maiores taxas de ovulação (63%; n=5/8) do que aqueles que

receberam a PGF2α no início do tratamento (22%; n=2/7).

Tabela 2. Efeito do nível de progesterona do dispositivo intravaginal (0,558g ou

1g) e da PGF2α nos parâmetros de recrutamento e crescimento folicular em

novilhas Nelores tratadas para sincronização da ovulação.

Não houve diferença significativa P>0,1

N folículos recrutados: número de folículos recrutados

∅FD: diâmetro do folículo dominante

No início do experimento (D0) os níveis circulantes de P4 não

foram significativamente diferentes, variando de 5,8 a 7,5 ng/ml. Cerca de 24

horas após a inserção do dispositivo houve uma elevação nos níveis

plasmáticos P4 em todos os grupos. No D1 o grupo 0,5G/PGF apresentou o

menor valor de progesterona e foi significativamente menor que os outros

grupos (P = 0,01). Nos dias D2 e D4 não houve diferença significativa entre os

tratamentos (P = 0,06 e 0,07, respectivamente), mas no dia da retirada do

dispositivo intravaginal (D8) os níveis circulantes de P4 foram maiores nos

animais do grupo 1G (P = 0,004). No D10 não houve diferença entre os

tratamentos (P = 0,07).

grupos Tratamento Inicio da

onda

N folículos

recrutados

∅

∅∅

∅ FD

no D8

∅

∅∅

∅ FD

no D9

∅

∅∅

∅ máximo

do FD

Taxa de

crescimento

(dias) (> 2 mm) (mm) (mm) (mm) (mm/dia)

0,5G

Sem PGF

(n = 4)

2,8±0,1 32,0±1,3 7,0±0,4 7,9±0,5 8,5±0,2 0,78±0,06

Com PGF

(n = 4)

3,0±0,0 25,0±2,3 6,6±0,5 7,0±0,5 8,1±0,2 0,69±0,06

Sem PGF

(n = 4)

3,2±0,2 21,5±2,6 6,8±1,3 7,0±0,1 8,1±1,1 0,56±0,29

Com PGF

(n = 3)

2,3±0,5 22,0±2,1 6,7±0,6 8,0±1,5 8,4±0,3 0,64±0,10

EFEITOS PRINCIPAIS

0,5G (n = 8) 2,7±0,2 28,3±2,1 6,8±0,3 7,5±0,4 8,5±0,2 0,7±0,05

1G (n = 7) 2,9±0,3 21,7±1,8 6,8±0,7 7,5±0,8 8,2±10,2 0,62±0,09

Sem PGF (n = 8) 2,9±0,1 26,8±2,4 6,9±0,6 7,5±0,5 8,3±0,5 0,63±0,06

Com PGF (n = 7) 2,7±0,3 23,4±1,8 6,7±0,3 7,5±0,6 8,3±0,5 0,7±0,05

Levando-se em consideração o período de efeito dos tratamentos

(D1 a D8), de modo geral, os níveis circulantes de progesterona foram mais

altos para os animais do grupo 1G e mais baixos para aqueles do grupo

0,5G/PGF. Os animais dos demais tratamentos (0,5G; 1G/PGF) apresentaram

níveis circulantes de P4 intermediários (Figura 3).

Figura 3. Concentração plasmática de progesterona em novilhas Nelores

tratadas com dispositivo intravaginal contendo 0,558g (grupo 0,5G) ou 1g de

P4 (grupo 1G) associadas (0,5G/PGF; 1G/PGF) ou não à PGF2α no D0.

Comparando o efeito principal de dispositivo (0,558g vs 1g), os

níveis plasmáticos de P4 nos dias D1, D4, D8 e D10 foram maiores nas

novilhas do grupo 1G, do que naquelas do grupo 0,5G (Figura 4). Da mesma

forma os animais tratados com PGF2α no D0 apresentaram menores níveis

circulantes de P4 nos dias D1, D2 e D8 (Figura 5).

D0 D1

D10

Dias após o início do tratamento

progesterona (ng/mL)

0,5G (n=4)

1G (n=4)

0,5G/PGF (n=4)

1G/PGF (n=3)

Figura 4. Níveis plasmáticos de progesterona em novilhas Nelores tratadas

com dispositivo intravaginal contendo 0,558 g (grupo 0,5G) ou 1 g (grupo 1G)

de P4.

D0 D1 D2 D4 D8 D10

Dias após o início dos tratamentos

progesterona (ng/ml)

sem PGF (n=8)

com PGF (n=7)

Figura 5. Níveis plasmáticos de progesterona em novilhas Nelores tratadas

(com PGF) ou não (sem PGF) com 150 µg de PGF2α (d-cloprostenol) no D0.

Diferença significativa, P<0,05

6.2 – Experimento 2

Os resultados apresentados entre as duas Fazendas onde foram

realizados os experimentos não foram significativamente diferentes (P = 0,26).

Não houve efeito significativo de touros (P = 0,91) e inseminadores (P = 0,86)

dentro de cada fazenda. Assim sendo, os resultados obtidos nas duas

fazendas foram agrupados.

Os tratamentos foram efetivos em sincronizar o ciclo estral dos

animais, originando taxas de ovulações superiores a 65%.

A utilização da PGF2α no início do protocolo (D0) não interferiu

nas taxas de ovulação ou prenhez em relação aos animais dos grupos sem

PGF2α (P = 0,74; Tabela 3)

Tabela 3. Taxas de sincronização do folículo dominante (animais com folículos

> 5mm no D9/ total de animais tratados), ovulação e prenhez em novilhas

Nelores sincronizadas com diferentes níveis de progesterona, associadas

(0,5G/PGF; 1G/PGF) ou não (0,5G; 1G) à PGF2α no dia da inserção do

dispositivo intravaginal.

*não houve diferença significativa entre os grupos (P > 0,05)

Tratamentos

SINCRONIZAÇÃO

DA ONDA (%)

OVULAÇÃO (%)

PRENHEZ (%)

0,5G

28/25 (89,3) 28/19 (67,8) 76/23 (30,2)

35/33 (94,3) 35/27 (77,1) 70/18 (25,7)

0,5G/PGF

34/34 (100) 34/26 (76,5) 75/25 (33,3)

1G/PGF

31/26 (83,9) 31/20 (64,5) 71/20 (28,2)

Efeitos principais

0,5G

62/59 (95,2) 62/45 (72,6) 151/48 (31,8)

66/59 (89,4) 66/47 (71,2) 141/38 (26,9)

Com PGF 65/60 (92,3) 65/46 (70,7) 146/45 (30,8)

Sem PGF

63/58 (92,1) 63/46 (73) 146/41 (28)

6.3 – Experimento 3

As taxas prenhez apresentadas nas fazendas onde foram

realizados os experimentos não foram significativamente diferentes (P = 0,69).

Do mesmo modo, não houve efeito significativo de touros (P > 0,3).

Todos os tratamentos foram eficientes em sincronizar o

crescimento folicular, resultando em taxas de ovulação de 60 a 70% (tabela 4).

A utilização de dispositivos intravaginais contendo menores níveis

de P4 (0,558g) resultou no D9 em folículos dominantes de maior diâmetro (P <

0,01). No entanto, a utilização de dispositivo intravaginal contendo 0,558 g não

afetou significativamente as taxas de ovulação (P = 0,42) e de prenhez (P =

0,45; Tabela 4).

O emprego da eCG no momento da retirada do dispositivo não

influenciou o tamanho do folículo dominante no D9 (P = 0,78), assim como as

taxas de ovulação (P = 0,79) ou prenhez (P = 0,49; Tabela 4).

Tabela 4. Taxa de sincronização do folículo dominante (folículos > 5mm no D9/

total de animais tratados), diâmetro folicular (média ± EPM) no D9 e taxas

ovulação e prenhez, em novilhas Nelores cíclicas sincronizadas com

dispositivos intravaginais contendo 0,558g (grupo 0,5G) ou 1g (grupo 1G) de

progestrona e com PGF2α no D0, associadas (0,5G/PGF/eCG; 1G/PGF/eCG)

ou não (0,5G/PGF; 1G/PGF) a 300 UI de eCG na retirada do dispositivo (D8).

*Diferença significativa entre os diâmetros foliculares dos grupos 0,5G e 1G (P<0,01)

∅ FD: diâmetro do folículo dominante

As taxas de ovulação e prenhez aumentaram, de acordo com o

aumento do folículo dominante no D9 (Figura 6; P<0,01) do protocolo de

sincronização do ciclo estral.

TRATAMENTOS SINCRONIZAÇÃO

DA ONDA (%)

∅

∅∅

∅ FD ± EPM no D9

OVULAÇÃO (%) PRENHEZ (%)

0,5G/PGF

38/34 (89,5) 10,3 ± 0,35 mm

(n = 48)

38/27 (71) 109/42 (38,5)

1G/PGF

47/37 (78,7) 9,3 ± 0,34 mm

(n = 50)

47/30 (63,8) 119/47 (39,5)

0,5G/PGF/eCG

39/38 (97,4) 10,2 ± 0,29 mm

(n = 51)

39/30 (76,9) 115/50 (43,4)

1G/PGF/eCG

43/40 (93) 9,4 ± 0,29 mm

(n = 55)

43/28 (65,1) 116/46 (39,6)

EFEITOS PRINCIPAIS

0,5G 77/72 (93,5) 10,3 ± 0,22* mm

(n = 99)

77/57 (74) 224/92 (41)

1G 90/77 (85,5) 9,3 ± 0,21* mm

(n = 105)

90/58 (64,4) 235/93 (39,5)

0 UI eCG 85/71 (83,5) 9,8 ± 0,24 mm

(n = 98)

85/57 (67) 228/89 (39)

300 UI eCG 82/78 (95,1) 9,7 ± 0,2 mm

(n = 106)

82/58 (70,7) 231/96 (41,5)

100

2 4 6 8 10 12 14 16

Tamanho do folículo dominante (mm)

probabilidade de ovulação e

prenhez (%)

ovulação

prenhez

Figura 6. Probabilidades de ovulação e de prenhez em novilhas Nelores

cíclicas de acordo com o diâmetro do folículo dominante, determinadas no dia 9

do protocolo de sincronização da ovulação, utilizando benzoato de estradiol

(2mg, IM) e dispositivo intravaginal de progesterona durante 9 dias, 150 µg de

d-croplostenol no dia da retirada do dispositivo e benzoato de estradiol vinte e

quatro horas mais tarde (n = 143).

As taxas de ovulação aumentaram significativamente em folículos

maiores de 7,1 mm (mensurados no D9; Figura 7). No entanto, as taxas de

prenhez foram significativamente maiores quando os folículos se encontravam

maiores que 8,6 mm, no D9. Folículos com diâmetros menores que 7 mm

(mensurados no D9) apresentaram taxas de prenhez ao redor de 13% (Figura

7).

Figura 7. Taxas de ovulação e de prenhez em novilhas Nelores cíclicas de

acordo com o diâmetro do folículo dominante, determinadas no dia 9 do

protocolo de sincronização da ovulação, utilizando benzoato de estradiol (2mg,

IM) e dispositivo intravaginal de progesterona durante 9 dias, 150 µg de d-

croplostenol no dia da retirada do dispositivo e benzoato de estradiol (1 mg,

IM) vinte e quatro horas mais tarde (n = 143).

Embora não haja diferença significativa, 21% (16/76) dos animais

tratados com dispositivo intravaginal contendo 1 g de P4 apresentaram

diâmetro folicular entre 5 a 7 mm (mensurado no D9) contra apenas 9% (6/67)

dos animais tratados com dispositivos contendo 0,558 g de P4 (Figura 8). Além

disso, 45% (30/67) dos animais tratados com dispositivo intravaginal contendo

0,558g de P4, apresentaram no D9 do protocolo de sincronização do estro

folículos com diâmetro maiores que 10 mm. Nos animais do grupo tratado com

dispositivo intravaginal contendo 1 g de P4, 36% (27/76) apresentaram (no D9)

folículos maiores de 10 mm (Figura 8).

100

5 - 7 (n=22)

7,1 - 8,5 (n=20) 8,6 - 10 (n=45) >10 (n=57)

Diâmetro do folículo no dia 9 (mm

)

axas de ovulação e prenhe

z (%)

ovulação

prenhez

Letras diferentes indicam diferença significativa, P<0,05

5 - 7 (n=22) 7,1 - 8,5 (n=20) 8,6 - 10 (n=44) > 10 (n=57)

Tamanho do folículo dominante no D9 (mm)

Percentagens de animais (%)

TRIU

CRON

Figura 8. Percentagem de novilhas Nelores tratadas com dispositivo

intravaginal contendo 0,558g (n = 67) ou 1g (n = 76) de P4 que apresentaram

no dia 9 do protocolo de sincronização do estro, diâmetros de 5 a 7; 7,1 a 8,5;

8,6 a 10 e >10 mm.

No terceiro experimento, os animais tratados com dispositivo

intravaginal contendo 0,558 ou 1 g de P4 apresentaram concentrações

plasmáticas de progesterona semelhantes tanto no D0 (P = 0,94) quanto no D8

(P = 0,69; Tabela 5).

Tabela 5. Concentração plasmática de progesterona (média

EPM) no início

(D0) e no dia da retirada do dispositivo intravaginal (D8) em novilhas Nelores

cíclicas tratadas com dispositivo intravaginal contendo 0,558 (grupo 0,5G) ou 1

g (grupo 1G) de P4 associados à PGF2 no D0.

Progesterona plasmática (ng/mL)

Grupo D0 D8

0,5G 3,92 ± 0,54

(n = 24)

4,39 ± 0,35

(n = 43)

1G 3,86 ± 0,47

(n = 30)

4,58 ± 0,30

(n = 54)

7 – DISCUSSÃO

No presente estudo a utilização de dispositivos intravaginais

contendo diferentes níveis de progesterona (0,558g vs 1,0g) e a aplicação da

PGF2α no início do protocolo (D0) alteraram os níveis circulantes de

progesterona (exp.1). Porém, estes tratamentos, assim como a utilização de

300 UI de eCG no momento da retirada do dispositivo intravaginal não

alteraram significativamente as taxas de sincronização do ciclo estral, ovulação

e prenhez, contrariando a hipótese inicial deste trabalho. Por outro lado, a

utilização de dispositivos contendo menores concentrações de progesterona

(0,5 grama) promoveu aumento significativo do diâmetro do folículo dominante

no D9 do protocolo de IATF (exp. 3).

Embora os níveis de P4 tenham variado conforme as

concentrações de P4 dos dispositivos ou ainda à aplicação ou não de PGF2α

no início do protocolo de sincronização do estro, o tamanho dos folículos

dominantes no D8 e D9 não se alterou de forma significativa. Estes resultados

estão em desacordos com outros trabalhos, que indicam uma relação inversa

entre os níveis circulantes de P4 e o tamanho do folículo dominante

(CALLEJAS et al., 2006; CARVALHO et al., 2008; PERES 2008). O

crescimento do folículo dominante (0,56 a 0,78 mm/dia) foi menor do que o

relatado por outros autores (0,9 a 1,4 mm/dia; SARTORELLI et al. 2005;

CASTILHO et al., 2007; ERENO, 2008). É possível que o estresse induzido

pelo intenso manejo e indicado pela significativa perda de peso dos animais,

tenha influenciado negativamente a pulsatilidade do LH, reduzindo o

crescimento dos folículos dominantes e, portanto, prejudicando um possível

efeito positivo da redução dos níveis de progesterona no desenvolvimento

folicular.

Tanto no segundo quanto no terceiro experimentos, a utilização

de dispositivos com diferentes doses de progesterona não influenciou de modo

significativo às taxas de ovulação ou prenhez. Resultados semelhantes foram

observados por Peres (2008) em novilhas tratadas com dispositivos

intravaginais de 1° ou 3° uso (CIDR



). No entanto, Dias (2007), do mesmo

grupo de pesquisa, ao comparar as taxas de prenhez em novilhas cíclicas

tratadas com dispositivos intravaginais de 1°, 2° ou 3° uso (CIDR



) observou

melhora significativa dos resultados. As taxas de prenhez observadas por

Peres (2008), assim como as do presente estudo, foram mais altas que as

relatadas por Dias (2007), o que pode ter minimizado um possível efeito

positivo do uso de dispositivos contendo menos progesterona.

É interessante notar no presente estudo que, no experimento 2,

as taxas de ovulação e prenhez foram mais baixas do que no experimento 3 e

o uso do dispositivo contendo menos progesterona aumentou, embora não

significativamente, as taxas de prenhez. No entanto, no ano seguinte, quando

houve uma melhora geral nas taxas de prenhez (exp. 3), este efeito não foi

detectado. Embora os dois experimentos tenham sido realizados em condições

semelhantes (fazenda, manejo dos animais, inseminadores, condição corporal)

é possível que a condição de maturidade sexual tenha sido diferente. O

experimento 2 foi realizado no início da estação de monta (novembro e

dezembro), enquanto que o terceiro experimento se estendeu de novembro a

maio. Byerley et al. (1987) relataram que novilhas cobertas no primeiro cio

após a puberdade apresentaram menores taxas de concepção quando

comparadas com aquelas cobertas ao terceiro cio. Segundo estes autores a

fertilidade de novilhas cíclicas tende a aumentar conforme o número de ciclos

estrais que elas apresentam quando colocadas em reprodução. Foi relatado

que o tamanho e peso do útero, cérvix e vagina aumentam rapidamente após a

puberdade e que tal fato pode estar ligado à estimulação exercida pelo

aumento nas concentrações de estradiol e progesterona durante a fase pós-

púbere, sendo um importante indicador de maturidade sexual (HONARAMOOZ

et al., 2004; DESJARDINS & HAFS, 1969). Além disso, novilhas cíclicas (com

presença de corpo lúteo) apresentaram maior diâmetro uterino em relação ás

novilhas pré-púberes (Sá FILHO et al., 2008, comunicação pessoal).

No primeiro experimento a aplicação de PGF2α reduziu os níveis

circulantes de progesterona nos dias 1, 2 e 8 após o início dos tratamentos.

Estes resultados eram esperados, devido ao efeito luteolítico da PGF2α, e

foram semelhantes aos observados por CARVALHO et al. (2008) nos dias 3, 6

e 8 após a utilização do agente luteolítico, em protocolo hormonal semelhante

ao do presente trabalho.

A utilização da PGF2α no início do protocolo PEPE não resultou

em aumento significativo nas taxas de ovulação e prenhez corroborando os

resultados apresentados por Marques et al. (2005), em novilhas da raça Nelore

tratadas com protocolos similares aos dos experimentos 2 e 3. Por outro lado,

Carvalho et al. (2008), ao utilizarem novilhas cíclicas e pré-sincronizadas

observaram que os animais tratados com PGF2α apresentaram aumento no

tamanho dos folículos dominantes nos dias 8 e 9 e maiores taxas de

ovulações.

É interessante notar que a principal diferença entre os

experimentos acima citados é que Carvalho et al. (2008) utilizaram novilhas

pré-sincronizadas enquanto que nos outros trabalhos as novilhas se

encontravam em dias aleatórios do ciclo estral. A resposta à aplicação da

PGF2α em dia aleatórios do ciclo pode ser bastante variável. Vacas no início

do ciclo (1° ao 5° dia) apresentam pouca ou nenhuma resposta à PGF2α e

seus análogos (LAUDERDALE, 1972), mas a regressão do corpo lúteo pode

ser de até 100% quando a PGF2α é aplicada no dia 7 do protocolo Ovsynch

em vacas leiteiras (VASCONCELOS et al., 2000) ou em vacas Nelore

sincronizadas com benzoato de estadiol e progesterona (LOSI et al., 2004).

Para evitar a fase refratária do corpo lúteo, Peres (2008) adiou a aplicação da

PGF2α para o dia 7 do protocolo PEPE em vacas solteiras e observou melhora

significativa no tamanho do folículo ovulatório no D11 (11,54±0,21 vs

10,84±0,21 mm) e nas taxas de prenhez (52 vs 36,4%). Portanto, a variação da

resposta à aplicação da PGF2α pode explicar, ao menos em parte, os

resultados acima.

A relação positiva entre o diâmetro folicular e a taxa de ovulação

já é bastante conhecida e foi descrita por diversos autores, em novilhas

Nelores (GIMENES et al., 2008; CARVALHO et al, 2008; CASTILHO et al.,

2007). No presente estudo observou-se correlação entre o tamanho do folículo

e as taxas de ovulação e de prenhez, corroborando com os resultados da

literatura. No entanto, a ovulação de folículos com até 8 mm de diâmetro

(mensurados no D9), resultaram em baixas taxas de prenhez (ao redor de

14%). Uma possível explicação para este resultado seria a ocorrência de

luteólise prematura (BRIDGES et al., 2004). Pequenos folículos tendem a

formar CL pequenos com baixa capacidade de produzir progesterona, sendo

incapazes de bloquear a produção de PGF2α pelo endométrio

(VASCONCELOS et al., 2001). Por outro lado, Peres (2008) observou que

novilhas que ovularam folículos menores que 10 mm (mensurados no dia da

IATF) e manifestaram cio, apresentaram maior taxa de concepção quando

comparadas àquelas que não demonstraram estro. Este resultado indica que a

capacidade desses folículos em produzir estradiol também pode ser um fator

importante em estimar a fertilidade subseqüente (MUSSARD et al., 2002). Em

protocolos de IATF a indução de ovulação de folículos imaturos é indesejada,

uma vez que alterações no ambiente uterino, causadas pela baixa exposição

ao estradiol pré-ovulatório, podem ser responsáveis por menores taxas de

concepção (PERRY et al., 2007).

Existem trabalhos (PEREZ 2008; BARUSELLI et al., 2004) que

relatam um efeito positivo da gonadotrofina coriônica eqüina (eCG) em

aumentar o tamanho folículo ovulatório, melhorando as taxas de ovulação e

prenhez. A capacidade da eCG em se ligar a receptores de LH e FSH pode ser

o mecanismo responsável pelo aumento do diâmetro folicular e da taxa de

sincronização (MURPHY et al., 1991). No presente estudo a aplicação de 300

UI de eCG não influenciou significativamente as taxas de prenhez (39,0 vs

41,5%), contrastando com os dados de Marques et al. (2005), que avaliaram o

efeito da administração de PGF2α no D0 e da eCG no momento da retirada do

dispositivo intravaginal de P4 (CIDR

, D8) em novilhas Nelore. Os animais que

receberam eCG (400 UI, IM) apresentaram maiores taxas de prenhez (15,7 vs

34,9%). O efeito positivo do eCG, no estudo realizado por Marques et al.

(2005), pode ter sido favorecido pelas baixas taxas de prenhez observadas nos

animais do grupo controle (15,7%). Da mesma forma, Peres (2008) trabalhando

com elevado número de novilhas Nelore (n = 1153) observou significativo

aumento na taxa de prenhez dos animais tratados com eCG (47%) quando

comparados a aqueles que receberam esta gonadotrofina (41,3%).

No presente estudo não foi observado aumento significativo no

tamanho do folículo dominante. Um dos fatores que pode ter contribuído para

este resultado foi o curto espaço de tempo entre a aplicação da eCG (D8) e a

mensuração do folículo dominante (D9). Por outro lado, não houve aumento

significativo nas taxas de ovulação ou prenhez nos animais que receberam a

eCG, corroborando com os resultados de diâmetro folicular.

Em suma, a maioria dos resultados apontam para um efeito

benéfico da eCG que poderia ser mais ou menos acentuada a depender da

condição corporal e/ou maturidade sexual das novilhas ao início do tratamento,

porém não observados neste trabalho.

8 - CONCLUSÕES

1) Tanto o uso de dispositivos intravaginais contendo menores

quantidades de progesterona como a utilização da PGF2α no início do

tratamento de animais que apresentavam corpos lúteos funcionais foram

efetivas em reduzir os níveis plasmáticos de progesterona a partir do D1 até o

D8 do tratamento de sincronização do ciclo estral.

2) Embora a utilização de dispositivo intravaginal com menor nível

de progesterona (0,558g) tenha propiciado aumento do diâmetro do folículo

dominante no D9, não induziu incremento significativo nas taxas de ovulação e

prenhez.

3) Houve correlação positiva entre o diâmetro folicular e as taxas

de ovulação e de prenhez.

4) A utilização da eCG não foi efetiva em aumentar as taxas de

ovulação e de prenhez, contrariando a hipótese inicial deste trabalho.

9 – COMENTÁRIOS FINAIS

O grau de desenvolvimento do aparelho reprodutivo pode ter uma

importante influência na resposta aos protocolos de IATF, o que explicaria, pelo

menos em parte, a variação dos resultados observados na literatura em

novilhas Nelores.

Além das modificações nos tratamentos hormonais tradicionais,

os parâmetros utilizados para selecionar os animais que iniciarão a atividade

reprodutiva, tais como seleção genética para fertilidade, adequada nutrição e

desenvolvimento corporal, tamanho de cérvix e útero, entre outros, devem ser

levadas em consideração na implementação de programas de IATF em

novilhas Nelores.

Mais estudos são necessários para entender as particularidades

da fisiologia reprodutiva das novilhas Nelores, a fim de aprimorar os protocolos

de IATF e melhorar as taxas de prenhez.

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Trabalho científico escrito de acordo com as normas da revista

Theriogenology

, exceto pela posição das tabelas e figuras.

Taxas de ovulação e prenhez em novilhas nelores cíclicas após utilização de protocolos

para inseminação artificial em tempo fixo (IATF), com diferentes concentrações de

progesterona, associadas ou não à aplicação de eCG.

Marcelo F. Pegorer

; Ronaldo L. Ereno

; Rafael A. Satrapa

;

Luzia A. Trinca

; Ciro M. Barros

Depto. de Reprodução Animal – FMVZ

, Depto. de Farmacologia

,Depto. De

Bioestatística

- IB-UNESP, Botucatu-SP.

Corresponding author: Ciro M. Barros; fax: +55 14 3815-3744; e-mail:

[email protected]

Abstract 1

Previous reports indicate that high concentration of serum progesterone (P4) decreases LH 2

pulse frequency, and consequently follicular growth. This may reduce the efficiency of fixed-3

time artificial insemination (FTAI) protocols that utilize P4 in Bos indicus heifers. The 4

objective of the present work was to evaluate the influence of different P4 concentrations 5

associated or not with eCG in the ovulation and pregnancy rates of Nellore heifers submitted 6

to hormonal protocols for FTAI. In experiment (exp.) 1, heifers (n=15) pre-synchronized 7

with a hormonal treatment were randomly allocated in four experimental groups. At the time 8

of intravaginal device insertion (Day 0 = D0) all animals received 2 mg of estradiol benzoate 9

(EB) and a intravaginal progesterone-releasing device containing 0.558g of P4 (Triu®, group 10

0.5G, n=4) or 1g of P4 (Cronipres®, group 1G, n = 4), or 0.558g of P4 and PGF2α (150 µg 11

d-cloprostenol, group 0.5G/PGF, n = 4), or 1g of P4 and PGF2α (group 1G/PGF, n = 3). 12

Eight days later (D8), PGF2α (150 µg d-cloprostenol) was administered to all heifers, the P4 13

source was removed. Twenty four hours after removing the intravaginal device, the heifers 14

were treated with EB (1 mg, i.m.). Blood samples were collected during the days 0, 1, 2, 4, 8 15

and 10 to evaluate plasma P4 concentration. In exp. 2, cyclic Nellore heifers (n=292) were 16

treated with the same protocols as in the exp. 1. However, 30 to 36 h later all animals were 17

fixed-time inseminated on D10. In exp. 3, heifers (n = 459) received the treatments described 18

to groups 0.5G/PGF and 1G/PGF associated with 300 UI of eCG (i.m., groups 19

0.5G/PGF/eCG and 1G/PGF/eCG) at the time of intravaginal device removal (D8). In a 20

subset of heifers from each group blood samples were collected on D8 and ovarian 21

ultrasonography was performed to determine the diameter of the dominant follicle on D9 22

(exp.3) and the ovulation rate on D12 (exp. 2 and 3). The analysis of variance to repeated 23

measurements was used to compare P4 levels, and the binary variables (ovulation and 24

pregnancy rates) were analyzed by logistic regression. In exp. 1, P4 concentrations were 25

higher in animals that had received the device content 1g of P4 than in those that had 26

received the device content 0.558g of P4, and lower in heifers that had received PGF2α on 27

D0. In both exp. 2 and 3 there was no difference on ovulation (65 to 77%) and pregnancy 28

(exp.2: 26 to 33%; exp.3: 39 to 43%) rates among the several groups. In exp. 3, the animals 29

which received the devices with a lower concentration of P4 had a larger diameter of the 30

dominant follicle (10.3±0.2 vs 9.3±0.2 mm; P<0.01) on D9. It is concluded that reduction of 31

P4 concentration in the intravaginal device (1.0 to 0.558g) or the administration of PGF2α at 32

the beginning of the treatments decrease blood concentrations of P4 between days 1 and 8 of 33

the IATF protocols. However, although the use of intravaginal devices with lower P4 34

contributed to increase the dominant follicle diameter on D9, there was no significant 35

increase on ovulation and pregnancy rates. Additionally, the association of eCG to FTAI 36

protocols did not improve follicular growth or ovulation and pregnancy rates. 37

Key-words: FTAI, progesterone, Nellore heifers, artificial insemination, eCG 40

1. Introdução 49

Dentre as biotécnicas utilizadas na reprodução animal a inseminação artificial 50

continua a ser uma das mais importantes para acelerar a evolução genética dos rebanhos [1]. 51

Um dos maiores entraves para a incorporação desta técnica pelos criadores consiste na 52

observação do cio, que requer tempo e mão de obra especializada. Além disso, nas fêmeas 53

zebuínas, a curta duração do estro (em torno de 11 horas) [2] e a incidência de cios noturnos 54

[3] dificultam ainda mais a detecção e prejudicam a implantação de programas convencionais 55

de inseminação artificial [4,5]. A partir do conhecimento detalhado da dinâmica folicular 56

[6,7,8] tornou-se possível o desenvolvimento de tratamentos hormonais capazes de regular o 57

crescimento folicular e o momento da ovulação, viabilizando a inseminação artificial em 58

tempo fixo (IATF, ou seja, IA com tempo pré-determinado, sem a necessidade de observar 59

cio) em taurinos [9,10,11] e zebuínos [12,13]. 60

Existem diversos protocolos hormonais para inseminação em tempo fixo (IATF) que 61

originam taxas de prenhez ao redor de 50 a 60% em vacas zebuínas [4,14,15]. No entanto os 62

resultados em novilhas zebuínas (Bos indicus) são em torno de 15 a 30%; [16,17]. 63

Recentemente Carvalho et al. [18] demonstraram que a utilização de PGF2α no D0 (dia da 64

inserção do dispositivo intravaginal de progesterona) em protocolo de IATF, reduziu os 65

níveis circulantes de progesterona (5,2 ± 0,1 vs 3,3 ± 0,0 ng/mL; P<0,05), levando a um 66

maior crescimento do folículo dominante (1,2 mm/dia vs 0,9 mm/dia) e melhores taxas de 67

ovulações (79,4% vs 52,7%; P<0,05). 68

Alguns autores [19,20,21] relatam que a elevação dos níveis plasmáticos de 69

progesterona causam uma retroalimentação negativa no hipotálamo resultando em menor 70

pulsatilidade do hormônio luteinizante (LH). Desta forma ocorreria menor crescimento do 71

folículo dominante, que por sua vez não teria tamanho suficiente para ovular durante o pico 72

de LH, resultando em menores taxas de prenhez. Assim sendo, a utilização de dispositivos 73

intravaginais contendo menores concentrações de progesterona (0,558g), ou ainda, qualquer 74

mecanismo que possa reduzir os níveis circulantes de P4, como a utilização de PGF2α no 75

início do protocolo hormonal, em novilhas cíclicas, poderia resultar em melhores taxas de 76

ovulação e prenhez. 77

Outra forma para aumentar o crescimento e maturidade final do folículo dominante, 78

seria pela utilização da gonadotrofina coriônica equina (eCG). Sua atividade semelhante ao 79

FSH e ao LH pode estimular o crescimento folicular e/ou facilitar a ovulação [22] 80

promovendo aumento na taxa de prenhez das vacas em anestro pós-parto com baixa condição 81

corporal [15,23]. 82

Objetiva-se com o presente trabalho determinar se a redução dos níveis de 83

progesterona plasmática em protocolos de IATF contribui para aumentar as taxas de ovulação 84

e prenhez em novilhas cíclicas da raça nelore tratadas com dispositivos intravaginais 85

contendo progesterona. Além disso, determinar se a utilização da eCG contribui com o 86

aumento do tamanho do folículo dominante, melhorando as taxas de ovulação e prenhez. 87

2. Material e Método 89

2.1. Experimento 1 90

2.1.1. Localização e animais 91

O experimento foi conduzido na Estância Rosalito (latitude 22°55´S e longitude 92

49°40´O), localizada no município de Santa Cruz do Rio Pardo, estado de São Paulo, durante 93

o mês de março de 2006. 94

Foram utilizadas novilhas (n = 15) da raça Nelore, com dois a três anos de idade, 95

pesando 296,9 ± 3,6 kg (média ± EPM), com condição corporal de 2,81 ± 0,02 (média ± 96

EPM em uma escala de 1 a 5 [24]), mantidas em pastagens de B. brizantha e suplementadas 97

com sal mineral e água a vontade. Os animais foram pesados individualmente no começo (D 98

-17) e no final (D12) do experimento, sempre no início do período da manhã. 99

100

101

2.1.2. Grupos Experimentais 102

Novilhas da raça Nelore (n=15), com presença de corpo lúteo ao exame 103

ultrassonográfico, foram previamente sincronizadas utilizando-se um dispositivo intravaginal 104

contendo 1 grama de progesterona (D -17) durante 9 dias (Cronipres

, Biogenesis-Bagó, 105

Buenos Aires, Argentina) mais 2 mg de benzoato de estradiol (BE, Bioestrogen, Biogenesis-106

Bagó, Buenos Aires, Argentina, via IM) no início do tratamento (D0). No dia da retirada do 107

dispositivo (D -9) os animais receberam 150 µg de d-cloprostenol (Croniben®, Biogenesis, 108

Buenos Aires, Argentina, via IM) e vinte e quatro horas depois (D -8) 1 mg de benzoato de 109

estradiol (BE). Os animais foram avaliados de 60 a 72 horas após a aplicação do BE para 110

determinar a ovulação. 111

As novilhas que apresentaram ovulação (constatada pelo exame ultrassonográfico; 112

n=15) foram distribuídas aleatoriamente em quatro grupos experimentais. Os animais dos 113

grupos 0,5G e 1G receberam, respectivamente, um dispositivo contendo 0,558g e 1g de P4 e 114

2 mg de benzoato de estradiol. Os animais dos grupos 0,5G/PGF e 1G/PGF receberam os 115

mesmos tratamentos, mais 150 µg de d-cloprostenol (Croniben®, Biogenesis-Bagó, Buenos 116

Aires, Argentina, via IM) no dia da inserção do dispositivo intravaginal (D0). 117

118

2.1.3 Coleta de sangue e radioimunoensaio da progesterona 119

Foram realizadas colheitas de sangue através da punção da veia coccígea em tubos 120

heparinizados (BD Vacutainer

, New Jersey, USA; 10 ml) nos dias 0, 1, 2, 4, 8 e 10 do 121

tratamento (Figura 1). Após a colheita as amostras foram mantidas em recipientes com gelo 122

por no máximo 5 horas. As amostras foram centrifugadas a 1600 xg por 20 minutos e 123

armazenadas a -20°C, para posterior dosagem da progesterona. As concentrações plasmáticas 124

de progesterona foram determinadas, em um único ensaio, com “Kit” de Progesterona da 125

DSL (32400, Diagnostic Systems Laboratories, Inc., Webster, Texas, USA). O coeficiente de 126

variação intra-ensaio foi de 1,49%. 127

2.2 Experimento 2 128

2.2.1. Localização e animais 129

O experimento foi conduzido na Fazenda Cristal (latitude 22°31’ S; longitude 130

50°04’O), localizada no município de Campos Novos Paulista, estado de São Paulo, e na 131

Fazenda Pontal (latitude 14°27’ S; Longitude 51°43’ O), localizada no município de Nova 132

Xavantina, estado de Mato Grosso, durante os meses de novembro e dezembro de 2006. 133

Foram utilizadas novilhas (n = 292) da raça Nelore, com dois a três anos de idade, pesando 134

entre 270 e 430 kg, com condição corporal de 2,81 ± 0,02 (média ± EPM em uma escala de 1 135

a 5 [24]), mantidas em pastagens de B. brizantha ou B. decumbens, suplementadas com sal 136

mineral e água a vontade. 137

138

2.2.2. Grupos experimentais 139

Os animais foram previamente submetidos a dois exames ultrassonográficos dos 140

ovários, com 10 dias de intervalo, a fim de determinar a presença de corpo lúteo. Somente as 141

novilhas com CL em pelo menos uma das ultrassonografias foram utilizadas no experimento. 142

Estas novilhas foram distribuídas ao acaso em quatro grupos experimentais. As novilhas dos 143

Grupos 0,5G (n = 76) e 1G (n = 70) receberam, respectivamente, um dispositivo intravaginal 144

contendo 0,558 g (Triu B

; Biogenesis-Bagó, Buenos Aires, Argentina) ou 1 g (Cronipres

; 145

Biogenesis-Bagó, Buenos Aires, Argentina) de progestrona no D0, e benzoato de estradiol 146

(Bioestrogen

, Biogenesis-Bagó, Buenos Aires, Argentina, 2mg, via IM). Nove dias mais 147

tarde (D8) foi administrada 150µg de d-cloprostenol (Croniben

, Biogenesis-Bagó, Buenos 148

Aires, Argentina, via IM), e o dispositivo intravaginal foi removido. Vinte e quatro horas 149

após a remoção do dispositivo as novilhas foram tratadas com BE (1,0 mg, via IM) e 30-36 h 150

depois os animais foram inseminados artificialmente sem observação de cio (IATF). 151

Os animais dos grupos 0,5G/PGF (n = 75) e CRON/PGF (n = 71) foram tratados de 152

forma similar aos grupos 0,5G e 1G, respectivamente, exceto que receberam 2 doses de 153

PGF2α (75µg d-cloprostenol; via IM; no D0 e D8). 154

No momento da introdução do dispositivo foi determinada a condição corporal de 155

todos os animais, de acordo com os mesmos critérios utilizados no primeiro experimento. 156

157

2.2.3. Touros e inseminadores 158

Foram utilizadas doses de sêmen comerciais de 12 touros, previamente analisados 159

quanto às características de motilidade e vigor [26]. As doses de sêmen utilizadas foram 160

distribuídas proporcionalmente entre os grupos tratados. 161

A maioria das inseminações foi realizada por um único inseminador experiente, as 162

demais foram realizadas por outros dois inseminadores, também experientes, distribuídos 163

proporcionalmente entre os grupos. 164

165

2.2.5. Ultrassonografia 166

Após a última aplicação de BE (D-9) foram realizados exames ultrassonográficos 167

(Aloka SSD 500, transdutor de 5,0 MHz) em aproximadamente metade dos animais de cada 168

grupo [0,5G(n = 28); 1G (n = 35); 0,5/PGF (n = 34); 1G/PGF (n = 31)] para identificação do 169

folículo dominante (FD). As novilhas que não apresentaram folículos maiores que 5 mm no 170

dia da ultrassonografia (D9) foram consideradas como não sincronizadas. Portanto, a taxa de 171

sincronização foi determinada pela razão entre o número de animais com FD no D9 maiores 172

que 5 mm e o total de animais tratados. 173

No décimo segundo dia, 72 horas após a aplicação da segunda dose do BE, foi 174

realizado novo exame ultrassonográfico para determinar a taxa de ovulação dos folículos 175

detectados no D9. 176

Cerca de 35 dias após a IATF foram realizados o diagnóstico de gestação, por exame 177

ultrassonográfico. 178

179

2.3 Experimento 3 180

2.3.1. Animais e localização 181

O experimento 3 foi conduzido durante a estação reprodutiva de novembro 2007 a 182

maio de 2008, nas mesmas fazendas do experimento 2. Foram utilizadas novilhas Nelores (n 183

= 459), com idade entre 2 e 3 anos e condição corporal de 2,8 ± 0,01 (média ± EPM, em uma 184

escala variando de 1 a 5 [24]). 185

186

2.3.2. Grupos experimentais 187

As novilhas foram distribuídas ao acaso em quatro grupos experimentais. Dois grupos 188

idênticos aos do experimento 2 (grupos 0,5G/PGF e 1G/PGF) e dois novos grupos 189

(0,5G/PGF/eCG e 1G/PGF/eCG) semelhante aos primeiros, exceto que os animais receberam 190

300 UI de eCG (Novormon, Shering-Plough, New Jersey, USA; via IM) no momento da 191

retirada do dispositivo intravaginal (D8). 192

193

2.3.3. Colheita de sangue e radioimunoensaio de progesterona 194

Foram selecionados aleatoriamente alguns animais de cada grupo [0,5G/PGF (n = 195

38); 1G/PGF (n = 47); 0,5G/PGF/eCG (n = 39) e 1G/PGF/eCG (n = 43)] para colheita das 196

amostras. Após a colheita, as amostras (10 ml) foram imediatamente centrifugadas a 1600 xg 197

por 20 minutos e o plasma obtido armazenado a –20

C, até o momento da análise por meio 198

de técnica de radioimunoensaio. As concentrações plasmáticas de progesterona foram 199

determinadas de acordo com a técnica de radioimunoensaio descrita por Knickerbocker et al. 200

[27], modificadas por Carriere e Lee [28]. Os coeficientes de variação intra e inter ensaios 201

foram de 4,56% e 11,48%, respectivamente. 202

203

2.3.4. Ultrassonografia 204

Os exames ultrassonográficos dos animais foram realizados de forma semelhante ao 205

segundo experimento. Além disso, no momento da aplicação do BE (D9) foram realizadas 206

mensurações do diâmetro do folículo dominante em um grupo de novilhas [0,5G/PGF (n= 207

48); 1G/PGF (n = 41); 0,5G/PGF/eCG (n = 51); 1G/PGF/eCG (n = 55)]. 208

O diagnóstico de gestação foi realizado cerca de 30 dias após a IATF, por exame 209

ultrassonográfico. 210

211

2.3.5. Touros e inseminadores 212

Foram utilizadas doses de sêmen comerciais de 8 touros, sendo seis da raça Nelore e 213

dois Brangus, previamente analisadas quanto às características de motilidade e vigor [26]. As 214

doses de sêmen foram distribuídas proporcionalmente entre os grupos tratados. 215

Todas as inseminações foram realizadas por um único inseminador experiente. 216

217

2.4. Análise estatística 218

Para análise dos níveis plasmáticos de progesterona do experimento 1 foi utilizada a 219

análise de variância para medidas repetidas, através do programa PROC GENMOD do SAS 220

[25], verificando efeito principal da aplicação de PGF2α no D0, uso de diferentes 221

dispositivos intravaginais com diferentes concentrações de progesterona (0,558 vs 1 grama de 222

P4), tempo e suas interações. 223

As variáveis taxas de sincronização do folículo dominante, ovulação e prenhez, do 224

segundo e terceiro experimentos, foram analisadas por regressão logística, através do 225

programa PROC GENMOD do SAS [25]. Para as análises de taxas de prenhez foram 226

consideradas no modelo o efeito do tipo de dispositivo intravaginal, aplicação ou não da PGF 227

no D0, fazenda, inseminador (exp. 2), touro, condição corporal e interações. As medidas do 228

diâmetro folicular no D9 e nível plasmático de progesterona no D0 e D8 foram analisados 229

por análise de variância através do programa PROC-GLM do SAS [25]. 230

231

3. Resultados 232

3.1. Experimento 1 233

No início do experimento (D0) os níveis circulantes de progesterona não foram 234

significativamente diferentes, variando de 5,8 a 7,5 ng/mL. De maneira geral os níveis 235

circulantes de progesterona durante o período foram mais altos para os animais do grupo 1G 236

e mais baixos para aqueles do grupo 0,5G/PGF. Os animais dos demais tratamentos (grupos 237

0,5G e 1G/PGF) apresentaram níveis circulantes de P4 intermediários (Figura 1). 238

239

240

Figura 1. Níveis plasmáticos de progesterona em novilhas Nelores tratadas com dispositivos 241

intravaginais contendo 0,558g (grupo 0,5G) ou 1 g de progesterona (grupo 1G) associadas 242

(0,5G/PGF; 1G/PGF) ou não à PGF2α no D0. 243

244

245

246

247

248

D4 D8

D10

Dias após o início do tratamento

progesterona (ng/mL)

0,5G (n=4)

1G (n=4)

0,5G/PGF (n=4)

1G/PGF (n=3)

3.2. Experimento 2 249

Não houve efeito significativo de fazendas (P = 0,26), touros (P = 0,91) e 250

inseminadores (P = 0,86). Assim sendo os resultados obtidos nas duas fazendas foram 251

agrupados. 252

Os tratamentos foram efetivos em sincronizar o ciclo estral dos animais, originando 253

taxas de ovulações superiores a 65%. A utilização de dispositivos intravaginais contendo 254

0,5G de P4 não resultou em melhores taxas de prenhez, (P = 0,67; Tabela 1). 255

256

Tabela 1. Taxas de sincronização do folículo dominante (folículos >5 mm no D9/total de 257

animais tratados), ovulação e prenhez em novilhas Nelores sincronizadas com dispositivos 258

intravaginais contendo 0,558 g (grupo 0,5G) ou 1 g de P4 (grupo 1G) e associadas à 75 µg de 259

PGF2α no dia da inserção do dispositivo intravaginal (grupos 0,5G/PGF; 1G/PGF). 260

*não houve diferença significativa entre os grupos (P > 0,05)

261

262

A utilização da PGF2α no início do protocolo (D0) não interferiu nas taxas de 263

ovulação ou prenhez (P = 0,74). 264

265

266

267

Tratamentos

SINCRONIZAÇÃO DA

ONDA (%)

OVULAÇÃO (%)

PRENHEZ (%)

0,5G

28/25 (89,3) 28/19 (67,8) 76/23 (30,2)

35/33 (94,3) 35/27 (77,1) 70/18 (25,7)

0,5G/PGF

34/34 (100) 34/26 (76,5) 75/25 (33,3)

1G/PGF

31/26 (83,9) 31/20 (64,5) 71/20 (28,2)

Efeitos principais

0,5G

62/59 (95,2) 62/45 (72,6) 151/48 (31,8)

CRON

66/59 (89,4) 66/47 (71,2) 141/38 (26,9)

Com PGF 65/60 (92,3) 65/46 (70,7) 146/45 (30,8)

Sem PGF

63/58 (92,1) 63/46 (73,0) 146/41 (28,0)

3.3. Experimento 3 268

Não houve efeito significativo de fazendas (P = 0,69), touros (P > 0,3) e 269

inseminadores (P = 0,4). Assim sendo os resultados obtidos nas duas fazendas foram 270

agrupados. 271

A utilização de dispositivos intravaginais contendo 0,558 g de P4 (grupo 0,5G) 272

resultou no D9 em folículos dominantes de maior diâmetro (P < 0,01). No entanto, não afetou 273

significativamente as taxas de ovulação (P = 0,42) e de prenhez (P = 0,45; Tabela 2). 274

O emprego da eCG no momento da retirada do dispositivo não influenciou o tamanho 275

do folículo dominante no D9 (P = 0,78), assim como as taxas de ovulação (P = 0,79) ou 276

prenhez (P = 0,49). 277

278

279

280

281

282

283

284

285

286

287

288

289

290

291

292

Tabela 2. Taxa de sincronização do folículo dominante (folículos >5mm no D9/total de 293

animais tratados), diâmetro folicular (∅ FD; média ± EPM) no D9 e taxas ovulação e 294

prenhez em novilhas Nelores sincronizadas com dispositivos intravaginais contendo 0,558g 295

ou 1 g de P4 mais a PGF2α no D0 (grupos 0,5G/PGF e 1G/PGF), associadas a 300 UI de 296

eCG (TRIU/PGF/eCG; CRON/PGF/eCG) na retirada do dispositivo (D8). 297

298

299

*Diferença significativa entre os diâmetros foliculares dos grupos 0,5G e 1G (P<0,01)

300

∅FD: diâmetro do folículo dominante.

301

302

Os animais tratados com os dispositivos intravaginais contendo 0,558g e 1g de P4 303

apresentaram concentrações plasmáticas de P4 semelhantes tanto no D0 (P = 0,94) quanto no 304

D8 (Tabela 3). 305

306

TRATAMENTOS SINCRONIZAÇÃO DA

ONDA (%)

∅

∅∅

∅ FD ± EPM no D9

OVULAÇÃO (%) PRENHEZ (%)

0,5G/PGF

38/34 (89,5) 10,3 ± 0,35 mm

(n = 48)

38/27 (71) 109/42 (38,5)

1G/PGF

47/37 (78,7) 9,3 ± 0,34 mm

(n = 50)

47/30 (63,8) 119/47 (39,5)

0,5G/PGF/eCG

39/38 (97,4) 10,2 ± 0,29 mm

(n = 51)

39/30 (76,9) 115/50 (43,4)

1G/PGF/ECG

43/40 (93) 9,4 ± 0,29 mm

(n = 55)

43/28 (65,1) 116/46 (39,6)

EFEITOS PRINCIPAIS

0,5G 77/72 (93,5) 10,3 ± 0,22* mm

(n = 99)

77/57 (74) 224/92 (41)

1G 90/77 (85,5) 9,3 ± 0,21* mm

(n = 105)

90/58 (64,4) 235/93 (39,5)

0 UI ECG 85/71 (83,5) 9,8 ± 0,24 mm

(n = 98)

85/57 (67) 228/89 (39)

300 UI eCG 82/78 (95,1) 9,7 ± 0,2 mm

(n = 106)

82/58 (70,7) 231/96 (41,5)

Tabela 3. Nível plasmático de progesterona (média

EPM) no início (D0) e no dia da retirada 307

do dispositivo intravaginal (D8) em novilhas Nelores cíclicas tratadas com 0,558 g (grupo 308

0,5G) ou 1g (grupo 1G) de P4 associados à PGF2 no D0. 309

P4 - D0 (ng/mL) P4 – D8 (ng/mL)

0,5G 3,92 ± 0,54

(n = 24)

4,39 ± 0,35

(n = 43)

1G 3,86 ± 0,47

(n = 30)

4,58 ± 0,30

(n = 54)

310

311

4. Discussão 312

No presente estudo a utilização de dispositivos intravaginais contendo diferentes 313

níveis de progesterona (0,558g vs 1,0g) e a aplicação da PGF2α no início do protocolo (D0) 314

alteraram os níveis circulantes de progesterona (exp.1). Porém, estes tratamentos, assim 315

como a utilização de 300 UI de eCG no momento da retirada do dispositivo intravaginal não 316

alteraram significativamente as taxas de sincronização do ciclo estral, ovulação e prenhez, 317

contrariando a hipótese inicial deste trabalho. Por outro lado, a utilização de dispositivos 318

contendo 0,558g de P4 promoveu aumento significativo do diâmetro do folículo dominante 319

no D9 do protocolo de IATF (exp. 3). 320

Tanto no segundo quanto no terceiro experimentos, a utilização de dispositivos com 321

diferentes doses de progesterona não influenciou de modo significativo as taxas de ovulação 322

ou prenhez. Resultados semelhantes foram observados por Peres [29] em novilhas tratadas 323

com dispositivos intravaginais de 1° ou 3° uso (CIDR



). No entanto, Dias [30], do mesmo 324

grupo de pesquisa, ao comparar as taxas de prenhez em novilhas cíclicas tratadas com 325

dispositivos intravaginais de 1°, 2° ou 3° uso (CIDR



) observou melhora significativa dos 326

resultados. As taxas de prenhez observadas por Peres [29], assim como as do presente estudo, 327

foram mais altas que as relatadas por Dias [30], o que pode ter minimizado um possível 328

efeito positivo do uso de dispositivos contendo menos progesterona. 329

É interessante notar no presente estudo que, no experimento 2, as taxas de ovulação e 330

prenhez foram mais baixas do que no experimento 3 e o uso do dispositivo contendo 0,558g 331

de progesterona aumentou, embora não significativamente, as taxas de prenhez. No entanto, 332

no ano seguinte, quando houve uma melhora geral nas taxas de prenhez (exp. 3), este efeito 333

não foi detectado. Embora os dois experimentos tenham sido realizados em condições 334

semelhantes (fazenda, manejo dos animais, inseminadores, condição corporal) é possível que 335

a condição de maturidade sexual tenha sido diferente. O experimento 2 foi realizado no início 336

da estação de monta (novembro e dezembro), enquanto que o terceiro experimento se 337

estendeu de novembro a maio. Byerley et al. [31] relataram que novilhas cobertas no 338

primeiro cio após a puberdade apresentaram menores taxas de concepção quando comparadas 339

com aquelas cobertas ao terceiro cio. Segundo estes autores a fertilidade de novilhas cíclicas 340

tende a aumentar conforme o número de ciclos estrais que elas apresentam quando colocadas 341

em reprodução. 342

No primeiro experimento a aplicação de PGF2α reduziu os níveis circulantes de 343

progesterona nos dias 1, 2 e 8 após o início dos tratamentos. Estes resultados eram esperados, 344

devido ao efeito luteolítico da PGF2α, e foram semelhantes aos observados por Carvalho et 345

al. [18] nos dias 3, 6 e 8 após a utilização do agente luteolítico, em protocolo hormonal 346

semelhante ao do presente trabalho. 347

A utilização da PGF2α no início do protocolo PEPE não resultou em aumento 348

significativo nas taxas de ovulação e prenhez corroborando os resultados apresentados por 349

Marques et al. [16], em novilhas da raça Nelore tratadas com protocolos similares aos dos 350

experimentos 2 e 3. Por outro lado, Carvalho et al. [18], ao utilizarem novilhas cíclicas e pré-351

sincronizadas observaram que os animais tratados com PGF2α apresentaram aumento no 352

tamanho dos folículos dominantes nos dias 8 e 9 e maiores taxas de ovulações. 353

É interessante notar que a principal diferença entre os experimentos acima citados é 354

que Carvalho et al. [18] utilizaram novilhas pré-sincronizadas enquanto que nos outros 355

trabalhos as novilhas se encontravam em dias aleatórios do ciclo estral. A resposta à 356

aplicação da PGF2α em dia aleatórios do ciclo pode ser bastante variável. Vacas no início do 357

ciclo (1° ao 5° dia) apresentam pouca ou nenhuma resposta à PGF2α e seus análogos [32], 358

mas a regressão do corpo lúteo pode ser de até 100% quando a PGF2α é aplicada no dia 7 do 359

protocolo Ovsynch em vacas leiteiras [33] ou em vacas Nelore sincronizadas com benzoato 360

de estadiol e progesterona [34]. Para evitar a fase refratária do corpo lúteo, Peres [29] adiou a 361

aplicação da PGF2α para o dia 7 do protocolo PEPE em vacas solteiras e observou melhora 362

significativa no tamanho do folículo ovulatório no D11 (11,54±0,21 vs 10,84±0,21 mm) e nas 363

taxas de prenhez (52 vs 36,4%). Portanto, a variação da resposta à aplicação da PGF2α pode 364

explicar, ao menos em parte, os resultados acima. 365

Alguns trabalhos relatam efeito positivo da gonadotrofina coriônica eqüina (eCG) no 366

tamanho do folículo pré-ovulatório, melhorando as taxas de ovulação e prenhez [29,15]. A 367

capacidade da eCG em se ligar a receptores de LH e FSH pode ser o mecanismo responsável 368

pelo aumento do diâmetro folicular e da taxa de sincronização [35]. No presente estudo a 369

aplicação de 300 UI de eCG não influenciou significativamente as taxas de prenhez (39,0 vs 370

41,5%), contrastando com os dados de Marques et al. [16], que avaliaram o efeito da 371

administração de PGF2α no D0 e da eCG no momento da retirada do dispositivo intravaginal 372

de P4 (CIDR

, D8) em novilhas Nelore. Os animais que receberam eCG (400 UI, IM) 373

apresentaram maiores taxas de prenhez (15,7 vs 34,9%). O efeito positivo do eCG, no estudo 374

realizado por Marques et al. [16], pode ter sido favorecido pelas baixas taxas de prenhez 375

observadas nos animais do grupo controle (15,7%). Entretanto, Peres [29] trabalhando com 376

elevado número de novilhas Nelore (n = 1153) observou significativo aumento na taxa de 377

prenhez dos animais tratados com eCG (47%) quando comparados a aqueles que não 378

receberam esta gonadotrofina (41,3%). Em suma, a maioria dos resultados apontam para um 379

efeito benéfico da eCG que poderia ser mais ou menos acentuado a depender da condição 380

corporal e/ou maturidade sexual das novilhas ao início do tratamento, porém não observado 381

neste trabalho. 382

Desta forma pode-se concluir que a aplicação de PGF2α ao início do protocolo de 383

IATF, assim como o uso de dispositivo intravaginal contendo 0,558g de progesterona resulta 384

em menores níveis plasmáticos de P4, durante o período de tratamento, em novilhas pré-385

sincronizadas. O uso de dispositivos intravaginais contendo 0,558g de P4 foram efetivos em 386

aumentar o diâmetro do folículo pré-ovulatório no D9, mas não resultaram em maiores taxas 387

de ovulação ou de prenhez. A utilização da eCG não foi efetiva em aumentar o diâmetro do 388

folículo dominante (no D9) e melhorar as taxas de ovulação ou de prenhez, contrariando a 389

hipótese inicial do trabalho. 390

391

5. Referências 392

[1] Pegorer MF, Ereno RL, Pinheiro VG, Barros CM. Novos tratamentos e informações 393

sobre a sincronização da ovulação para inseminação artificial em tempo fixo de vacas e 394

novilhas zebuínas. In: 2 Congresso Internacional de Reproducción Bovina, 2008, 395

Bogotá – Biotecnologia aplicada a todas las explotaciones productivas, 2008; 83-92. 396

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