( PDF ) Avaliação das atividades genotóxica e antigenotóxica de duguetia furfuracea em bactérias e camundongos

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UNIVERSIDADEFEDERALDEGOIÁS

INSTITUTODECIÊNCIASBIOLÓGICAS

PROGRAMADEPÓS‐GRADUAÇÃOEMBIOLOGIA



AVALIAÇÃODASATIVIDADESGENOTÓXICAE

ANTIGENOTÓXICADEDUGUETIAFURFURACEAEM

BACTÉRIASECAMUNDONGOS



CAROLINARIBEIROESILVA



GOIÂNIA

Goiás‐Brasil

Fevereirode2008



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Milhares de livros grátis para download.

UNIVERSIDADEFEDERALDEGOIÁS

INSTITUTODECIÊNCIASBIOLÓGICAS

PROGRAMADEPÓS‐GRADUAÇÃOEMBIOLOGIA



AVALIAÇÃODASATIVIDADESGENOTÓXICAE

ANTIGENOTÓXICADEDUGUETIAFURFURACEAEM

BACTÉRIASECAMUNDONGOS



CAROLINARIBEIROESILVA



Orientadora:Profa.Dra.LEECHENCHEN



Dissertação apresentada ao Instituto de

CiênciasBiológicasdaUniversidadeFederal

de Goiás, como requisito parcial para

obtençãodotítulodeMestreemBiologia.



GOIÂNIA

Goiás‐Brasil

Fevereirode2008



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iii



“Em algum lugar, alguma coisa incrível está esperando para ser conhecida.”

Carl Sagan



AGRADECIMENTOS



 Agradeço primeiramente à Deus, por ter me abençoado, “tirando as pedras do

caminho”,tornandopossívelaconquistadestetítulo!

 Em seguida, agradeço à minha “Grande Família”: ao papai por sempre estar me

apoiando,tantofinanceiramentequantopsicologicamente,nosmomentosquepreciseiser

amparada; à mamãe pelo amor e carinho incondicional; com a distância pude percerber

quanto “o colinho da mamãe” é precioso! Às minhas irmãs, Graciély e  Andressa, pelos

momentos agradáveis juntas, pelo apoio e amizade. Ao meu amor, Bruno, “agora meu

noivo”,obrigadoporestarsempreaomeulado,peloamorecompanheirismo,sendomeu

aconchegoemtodososmomentos.

 AgradeçoatiaValdapelocarinho,compreensãoeamizade,pormeacolheremsua

casaenquantomeadaptavananovacidade.

Agradeço à prof. Dra. Lee Chen Chen, orientadora e amiga, que além de tornar

possível a conclusão do meu mestrado, me recebeu e acreditou que a realização desse

sonho fosse possível, com valiosas orientações tanto nos projetos de pesquisa quanto na

vidapessoal!

 Agradeço aos coordenadores e professores do Programa de Pós‐Graduação em

Biologiada UniversidadeFederal de Goiás, quemuito contribuírampara meucrescimento

profissional,pelosseusvaliososensinamentoseamizade.

Agradeçoaoprof.HelenoDiasFerreira,pelaboavontadeedisposiçãonarealização

dacoletadaplanta,queéoobjetodeestudodestetrabalho.Etambémàprof.Dra.Suzana

da Costa Santos, do Laboratório de Produtos Naturais/IQ/UFG, por disponibilizar o

laboratórioparasecagem,trituraçãoepelaliofilizaçãodasfolhasdaplanta.

Agradeçoaosmeusnovosamigos–Juliana,KaioeLaryssa–pelaamizade,confiança

e pelas dicas e ajuda indispensáveis para um maior conhecimento dos experimentos, do

laboratórioedaUFG.

 AgradeçotambémàminhanovaamigaPablinepelocompanheirismo:companheira

como aluna especial, companheira nos estudos para a prova de seleção do mestrado,

companheiradedisciplinasecompanheiradelaboratório.Passamospormuitasdificuldades,

mastambémnosdivertimosmuito!

Agradeçoàsestagiáriaseamigas–Daniela,LarissaeTatiana– pelocompanheirismo

eajudanosexperimentos.

Agradeço à Vera e à Dona Marinalva, por deixar o laboratório mais aconchegante,

tornandoosdiasmenosexaustivos.Sentireifaltadasnossasconversas...

Agradeço às amigas do Laboratório de Botânica – Lília e Maria Teresa – pelo

companheirismo e pela boa vontade nos momentos que precisei solicitar confecção de

exsicata, empréstimos de livros, informações sobre anatomia vegetal e conversas

agradáveis.

Agradeço à Gleice pela torcida no processo de seleção do mestrado e pela grande

disposiçãoemnos ajudarsempre, facilitandoeorganizando adocumentaçãoque precisei.

Ah,senãofosseaGleicenapós‐graduação!

Agradeço às minhas sempre amigas – Karla, Paula e Val – a nossa amizade se

consolidou, porque nem mesmo a distância impediu de nos ajudarmos, consolarmos e

dividirmostristezasealegrias.Então...vamoscomemoraraconclusãodomeumestrado!



ÍNDICE



LISTADEILUSTRAÇÕES.................................................................................................... ix

LISTADETABELAS............................................................................................................. xiii

LISTADEABREVIATURAS.................................................................................................. xiv

RESUMO............................................................................................................................ xvi

ABSTRACT.......................................................................................................................... xviii



1.INTRODUÇÃOGERAL..................................................................................................... 1

1.1.CâncereFitoterapia.............................................................................................. 1

1.2.PlantasMedicinais................................. ............................................................... 7

1.3.Cerrado................................................................................................................. 10

1.4.Duguetiafurfuracea(St.Hil.)BentheHook.f.(1862)(Sofre‐do‐rim‐quem‐quer) 13

1.5.Mutação,GenotoxicidadeeCarcinógenos............................ ............................... 18

1.6.ProcessosdeReparo............................................................................................. 23

1.6.1.FunçõesSOS.................................................................................................  26

1.7.Antimutagenicidade/Antigenotoxicidade........................................................... 29

1.8.TestedeInduçãodoprofagoλ–Induteste.......................................................... 30

1.9.TestedoMicronúcleoemmedulaósseaderoedoresinvivo............................... 32

2.OBJETIVOS.................................................................................................................... 37

3.REFERÊNCIASBIBLIOGRÁFICAS..................................................................................... 38



vii

CapítuloI



AVALIAÇÃODASATIVIDADESGENÓTOXICAEANTIGENOTÓXICADEDUGUETIA

FURFURACEAPELOTESTEDEINDUÇÃODOPROFAGOλ(INDUTESTESOS).



Resumo.......................................................................................................................... 59

Abstract......................................................................................................................... 61



1. INTRODUÇÃO.................................................................................................... 62

2. MATERIALEMÉTODOS..................................................................................... 63

A) Planta,Duguetiafurfuracea(St.Hil.)BentheHook.f.(1862)………………… 63

B) CepasBacterianas........................................................................................  64

C) MeiosdeCultura,ReagentesQuímicoseSoluções.................................... 64

2.1. ProcedimentoExperimental.................................................................. 65

2.1.1.Induteste............................................................. ............................... 65

3. RESULTADOS..................................................................................................... 66

4. DISCUSSÃO........................................................................................................ 72

5. CONCLUSÃO...................................................................................................... 73

6. AGRADECIMENTOS........................................................................................... 73

7. REFERÊNCIASBIBLIOGRÁFICAS........................................................................ 73



viii

CapítuloII



AVALIAÇÃODASATIVIDADESMUTAGÊNICAEANTIMUTAGÊNICADEDUGUETIA

FURFURACEAPELOTESTEDOMICRONÚCLEOEMMEDULAÓSSEADE

CAMUNDONGOS



Resumo..................................................................................................................... 79

Abstract....................................................................................................................  81



1. INTRODUÇÃO.............................................................................................. 83

2. MATERIALEMÉTODOS............................................................................... 84

A) Planta,Duguetiafurfuracea(St.Hil.)BentheHook.f.(1862)…………… 84

B) Camundongos......................................................................................... 84

C) ReagentesQuímicoseSoluções............................................................. 85

2.1. ProcedimentoExperimental............................................................. 85

2.1.1. TestedoMicronúcleo................................................................ 85

2.1.2. AnáliseCitogenética.................................................................. 86

2.1.3. AnáliseEstatística...................................................................... 86

3. RESULTADOS............................................................................................... 87

4. DISCUSSÃO.................................................................................................. 94

5. CONCLUSÃO................................................................................................ 96

6. AGRADECIMENTOS..................................................................................... 96

7. REFERÊNCIASBIBLIOGRÁFICAS.................................................................. 96



LISTADEILUSTRAÇÕES



INTRODUÇÃOGERAL



Figura1.Tiposdecâncermaisincidentes,estimadosparaoanode2008,napopulação

brasileira(INCA,2007)........................................................................................................ 2



Figura 2. Estruturasdevimblastina,vincristina,etoposida,teniposidaeTaxol(Almeida

etal.,2005).......................................................................................................................... 5



Figura 3. Distribuição geográfica dos principais biomas do Brasil, destacando a área

ocupadapeloCerrado(Ribeiro&Walter,1998)................................................................ 10



Figura4.FlorefolhasdeDuguetiafurfuracea.................................................................. 14



Figura5.FrutodeDuguetiafurfuracea(Proençaetal.,2000).......................................... 14



Figura6.Aplanta,Duguetiafurfuracea............................................................................. 15



Figura7.ViasBEReNER,dereparodeDNA(Nolletal.,2006)........................................ 25



Figura 8. Circuito regulatório dos genes lexA e recA, envolvidos nas Funções SOS. O

repressor CI de bacteriófagos também é clivado por RecA ativada, permitindo que os

genesdociclolíticodofagosejamexpressos.AdaptadodeLewin,2001.......................... 28



Figura9.Ciclolíticoeciclolisogênico(Lewin,2001).......................................................... 32



Figura 10. Resumo do processo de maturação das células da linhagem eritrocitária

(Ribeiro,2003)...................................................................................................................... 35



Figura11.ConcentraçãodeRNAduranteamaturaçãodoeritrócito(Ribeiro,2003)....... 36

Figura12.Formaçãodemicronúcleosemeritrócitosdemedulaóssea(Ribeiro,2003). 36



CapítuloI



AVALIAÇÃODASATIVIDADESGENÓTOXICAEANTIGENOTÓXICADEDUGUETIA

FURFURACEAPELOTESTEDEINDUÇÃODOPROFAGOλ(INDUTESTESOS).



Figura 1. Fração de Sobrevivência da cepa E. coli (WP2s (λ)) em função da dose do

extratodeDuguetiafurfuracea................................................................ ........................... 68



Figura2.FatordeInduçãodacepaE.coli(WP2s(λ))emfunçãodadosedoextratode

Duguetiafurfuracea............................................................................................................. 69



Figura 3. Curva de Sobrevivência da cepa E. coli (WP2s (λ)) em função da dose do

extratodeDuguetiafurfuraceaco‐tratadocom0,5µgdeMMC/placa............................. 71



Figura4.FatordeInduçãodacepaE.coli(WP2s(λ))emfunçãodadosedoextratode

Duguetiafurfuraceaco‐tratadocom0,5µgdeMMC/placa..............................................  71



xii

CapítuloII



AVALIAÇÃODASATIVIDADESMUTAGÊNICAEANTIMUTAGÊNICADEDUGUETIA

FURFURACEAPELOTESTEDOMICRONÚCLEOEMMEDULAÓSSEADE

CAMUNDONGOS



Figura 1. Frequência de EPCMN após 24 horas de tratamento com o extrato de

Duguetiafurfuraceaecontroles.........................................................................................  89



Figura 2. Frequência de EPCMN após 48 horas de tratamento com o extrato de

Duguetiafurfuraceaecontroles.........................................................................................  89



Figura3.RazãoEPC/ENCapós24horasdetratamentoecontroles................................. 90



Figura4.RazãoEPC/ENCapós48horasdetratamentoecontroles................................. 90



Figura 5. Frequência de EPCMN após 24 horas de tratamento com o extrato de

Duguetiafurfuracea+MMCecontroles.............................. .............................................. 93



Figura 6. Frequência de EPCMN após 48 horas de tratamento com o extrato de

Duguetiafurfuracea+MMCecontroles.............................. .............................................. 93



Figura 7. Razão EPC/ENC após 24 horas de tratamento com o extrato de  Duguetia

furfuraceaco‐tratadocomMMCecontroles..................................................................... 94



Figura 8. Razão EPC/ENC após 48 horas de tratamento com o extrato de  Duguetia

furfuraceaco‐tratadocomMMCecontroles..................................................................... 94



xiii

LISTADETABELAS



CapítuloI



AVALIAÇÃODASATIVIDADESGENÓTOXICAEANTIGENOTÓXICADEDUGUETIA

FURFURACEAPELOTESTEDEINDUÇÃODOPROFAGOλ(INDUTESTESOS).



Tabela1.Principaiscaracterísticasdascepasbacterianasutilizadas................................. 64



Tabela 2. Valores de média e desvio padrão do número de sobreviventes e plaques

formados,FraçãodeSobrevivência(S)eFatordeIndução(FI)emfunçãodasdosesdo

extratodeDuguetiafurfuracea................................................................ ........................... 67



Tabela 3. Valores da média e desvio padrão do número de sobreviventes e plaques 

formados,FraçãodeSobrevivência(S)eFatordeIndução(FI)emfunçãodasdosesdo

extratodeDuguetiafurfuraceaco‐tratadocomMitomicinaC.......................................... 70



CapítuloII



AVALIAÇÃODASATIVIDADESMUTAGÊNICAEANTIMUTAGÊNICADEDUGUETIA

FURFURACEAPELOTESTEDOMICRONÚCLEOEMMEDULAÓSSEADE

CAMUNDONGOS



Tabela1.Efeitodaadministraçãodoextratoliofilizado defolhasdeDuguetiafurfuracea

(ED)porgavageemcamundongosecontroles................................................................... 88



Tabela2.Efeitodaadministraçãodoextratoliofilizado defolhasdeDuguetiafurfuracea

(ED)porgavage+MMCi.p.emcamundongosecontroles................................................ 91



xiv

LISTADEABREVIATURAS



µg Micrograma

ACG Acetogenina

AT Adenina/Timina

ATP Adenosinatrifosfato

BER Reparoporexcisãodebase

CEME CentraldeMedicamentosdoMinistériodaSaúde

CNPq ConselhoNacionaldeDesenvolivmentoCientíficoeTecnológico

DL50 DoseLetal50%

DNA Ácidodesoxirribonucléico

ED ExtratodeDuguetiafurfuracea

ENC EritrócitosNormocromáticos

EPC EritrócitosPolicromáticos

EPCMN EritrócitosPolicromáticosMicronucleados

FADH2 Flavinaadeninadinucleotídeo

FI FatordeIndução

FUNAPE FundaçãodeApoioàPesquisa

GC Guanina/Citosina

HTP Hematoporfirínicos

INCA InstituoNac ionaldoCâncer

i.p. Intraperitonial

Kg Quilogramas

LB LuriaBoth

mg Miligramas

min Minutos

mL Mililitros

MMC MitomicinaC

MN Micronúcleos

NADH Nicotinamidaadeninadinucleotídeo

NER Reparoporexcisãodenucleotídeos

OMS OrganizaçãoMundialdeSaúde

p.c. Pesocorpóreo

PMA Acetatodeforbolmiristato

RNA Ácidoribonucléico

S FraçãodeSobrevivência

THF Tetra‐hidrofurânicos

TPA 12‐O‐tetradecanoil‐forbol‐13‐acetato

UFG UniversidadeFederaldeGoiás

UV Ultravioleta





xvi

RESUMO



A planta Duguetia furfuracea (St. Hil.) Benth e Hook. f. (1862), pertence à família

Annonaceae, é conhecida popularmente como sofre‐do‐rim‐quem‐quer, araticum‐do‐

cerrado e ata‐do‐mato. Esta planta ocorre em vários estados brasileiros, como Amazonas,

Bahia,DistritoFederal,Goiás,MinasGerais,MatoGrosso,MatoGrossodoSuleSãoPaulo.É

comumente utilizada pela população como anti‐reumática e para combater cólicas renais.

Estudosanteriorestêmdescritoaatividadeterapêuticadaplantacomaçãotripanomicida,

antiprotozoárica eantiplasmódica. Devido àgrande  utilização daplantaD. furfuracea pela

população, o presente trabalho teve como objetivo avaliar  as atividades

genotóxica/mutagênica,antigenotóxica/antimutagênicaecitotóxicadoextratoliofilizadode

folhasdeD.furfuraceapelotestedeinduçãodoprofagoλ(Induteste)emcepasdeE.coli e

pelo teste do micronúcleo em medula óssea de camundongos (Teste do Micronúcleo). O

testedeinduçãodoprofagoλfoirealizadodeacordocomMoreauetal. (1976),utilizando

as cepas de E. coli WP2s(λ) e RJF013. Para a avaliação das atividades genotóxica e tóxica

foramempregadas asdoses de 1mg, 2mg, 5mg e 10mg,enquanto quenaavaliação da

ação antigenotóxica foram testadas as doses de 0,5 mg, 1 mg, 2 mg, 5 mg e 10 mg co‐

tratadas com 0,5 µg de mitomicina C. O teste do micronúcleo em medula óssea de

camundongosfoirealizadodeacordocomametodologiadeSchmid(1975).Paraaavaliação

daatividademutagênica,osanimaisforamtratadoscomtrêsdiferentesdosesdoextratoda

planta (100, 200 e 300 mg/Kg p.c.), enquanto que para a avaliação da atividade

antimutagênica foram administradas as mesmas doses (100, 200 e 300 mg/Kg p.c.)

concomitantementedeumadosede4mg/KgdemitomicinaC.Agenotoxicidadefoiavaliada

pelafreqüênciadeeritrócitospolicromáticosmicronucleados(EPCMN)eacitotoxicidadefoi

analisadapelarazãoeritrócitospolicromáticosenormocromáticos(EPC/ENC).Osresultados

obtidos na avaliação da mutagenicidade mostraram que todas as doses do extrato de D.

furfuracea não aumentaram significativamente o número de EPCMN (p>0,05), quando

comparadoscomogrupocontrolenegativo.A citotoxicidadefoievidenteemtodasasdoses

testadas (p<0,05). Em relação à antimutagenicidade, todas as doses administradas

reduziramsignificativamenteafreqüênciadeEPCMN,emrelaçãoaogrupocontrolepositivo

(p<0,05).Emambosostestes,osresultadosobtidosmostraram‐seconcordantes,nosquais

o extrato de D. furfuracea apresentou atividade citotóxica; porém, não demonstrou

xvii

atividadegenotóxicaembactériaseaçãomutagênicaemcamundongos.Poroutrolado,foi

observadaaçãoantigenotóxicaeantimutagênica.



xviii

ABSTRACT



The plant Duguetia furfuracea (St. Hil.) Benth and Hook. f. (1862), belongs to the

family Annonaceae, is popularly known as sofre‐do‐rim‐quem‐quer, araticum‐do‐cerrado

andata‐do‐mato.ThisplantoccurresinseveralBrazilianstates,asAmazonas,Bahia,Distrito

Federal, Goiás, Minas Gerais, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul and São Paulo. It is

commonlyusedbypeopleas anti‐rheumaticandto curerenalcolic. Previousstudies have

described therapeutic activity of this plant with trypanocidal, antiplasmodial and

antiprotozoal effects. Due to the large utilization of this plant by the local people, the

presentworkaimedtoevaluatethegenotoxic/mutagenic,antigenotoxic/antimutagenicand

cytotoxicactivitiesoflyophilizedleafextractofD.furfuraceabythelisogenicinductiontest

(Inductest)andthemicebonemarrowmicronucleusassay(MicronucleusTest).Thelisogenic

induction test was performed according Moreau et al., (1976) using E. coli WP2s(λ) and

RJF013 strains. To evaluate the genotoxic and toxic activities, the doses employed were 1

mg,2mg,5mge10mg,whiletoevaluatetheantigenotoxicactionthedoseswereof0,5

mg,1mg,2mg,5mge 10mgco‐treatedwith0,5µgdemitomycinC.Micronucleustestin

thebonemarrowofmicewasperformedaccordingtoSchmid(1975).Toevaluatemutagenic

activity, mice were treated with three different doses of plant extract (100, 200 and 300

mg/Kgbody weight),to evaluate antimutagenicactivity,mice were treated with thesame

dosesco‐administeredwith4mg/kgofmitomycinC.Thegenotoxicactionwasevaluatedby

thefrequencyofmicronucleatedpolychromaticerythrocytes(MNPCE)andcytotoxicitywas

evaluated by the polychromatic and normochromatic erythrocytes ratio (PCE/NCE). The

resultsobtainedfromtheevaluationofmutagenicity ofthisplantshowedthattheextractof

D. Furfuracea didn’t increase significantly (p>0.05) the frequency of MNPCE compared to

negative control. Cytotoxicity was evident in all applied doses (p<0.05). Concerning

antimutagenicity, all doses of extract reduced significantly the frequency of MNPCE

compared to the positive control group (p<0.05).In both tests, the results obtained

demonstrated that the extract of D. furfuracea presented cytotoxicity; however, it didn’t

showgenotoxicormutageniceffectsinbacteriaandmicebonemarrowrespectively.Inthe

otherhand,itwasobservedaantigenotoxicandantimutagenicaction.



1. INTRODUÇÃOGERAL



1.1.CâncereFitoterapia



O câncer é uma das doenças que mais causam temor na sociedade, por ter se

tornadoum estigmade mortalidadee dor.Naverdade, apalavracâncer,deorigem latina

(cancer) significando “caranguejo”, deve ter sido empregada em analogia ao modo de

crescimentoinfiltrante,quepodesercomparadoàspernasdocrustáceo,queasintroduzna

areiaoulamaparasefixaredificultarsuaremoção(Almeidaetal.,2005).

Atualmente, a definição científica de câncer refere‐se ao termo neoplasia,

especificamente aos tumores malignos, pelo crescimento descontrolado de células

transformadas.Existemquase200tiposquecorrespondemaosváriossistemasdecélulasdo

corpo, os quais se diferenciam pela capacidade de invadir  tecidos e órgãos, vizinhos ou

distantes(Almeidaetal.,2005).

Em 2005, de um total de 58 milhões de mortes ocorridas no mundo, o câncer foi

responsávelpor7,6milhões,oquerepresentou13%detodasasmortes.Dototaldeóbitos

porcâncerocorridosem2005,maisde70%ocorreramempaísesdemédiaoubaixarenda

(OrganizaçãoMundialdaSaúde(OMS),2006).NoBrasil,as estimativasparaoanode2008,

válidastambémparaoanode2009,apontamqueocorrerão466.730casosnovosdecâncer.

Os tipos mais incidentes, à exceção do câncer de pele do tipo não melanoma, serão os

cânceresdepróstataedepulmão,nosexomasculino,eoscânceresdemamaedecolodo

útero,nosexofeminino,acompanhandoomesmoperfildamagnitudeobservadanomundo

(Figura1)(INCA,2007).

Os fatores de risco de câncer podem ser externos (ambientais) ou endógenos

(hereditários) (INCA, 2007). A maioria dos casos (cerca de 80%) está relacionada ao meio

ambiente, onde encontra‐se um grande número de fatores de risco. Entende‐se por

ambiente,omeioemgeral(água,terraear),oambienteocupacional(quandoinsa lubre),o

ambiente social e cultural(estilo e hábitos de vida) e o ambiente de consumo (alimentos,

medicamentos). As mudanças provocadas no meio ambiente pelo próprio homem, os

hábitose estilos devida adotados pelaspessoas podemdeterminar os diferentestipos de

câncer(Almeidaetal.,2005).



Figura 1. Tipos de câncer mais incidentes, estimados para o ano de 2008, na população

brasileira(INCA,2007).



Em 2005,pesquisadores da HarvardSchool of Public Health,liderados por Goodarz

Danaei, estimaram que 35% das mortes por câncer no mundo poderiam ser atribuídas ao

efeitocombinadodenovefatoresderisco,separadosemcincogrupos:dietaeinatividade

física, substâncias aditivas (uso de tabaco e álcool), saúde sexual e reprodutiva (infecções

sexualmente transmissíveis), riscos ambientais (poluição do ar, combustíveis sólidos,

tabagismopassivo)econtaminaçãovenosapelovírusdahepatiteBeC(INCA,2007).

Assim,tantofatoresderiscodecâncerambientaisquantohereditários,estãointer‐

relacionadoseinteragemdeváriasformasparadarinícioàsalteraçõescelularespresentes

na etiologia do câncer (INCA, 2007). Tais alterações celulares que geram as neoplasias

podem ocorrer em genes especiais denominados protooncogenes, que a princípio, são

inativos em células normais. Quando ativados, os protooncogenes transformam‐se em

oncogenes, responsáveis pela malignização (transformação) das células normais. Estas

células diferentessão, então, denominadas cancerosas,ou melhor, tumorais. Essas células

alteradas passam então a se comportar de forma anormal, multiplicando‐se de maneira

descontrolada.Comaconstantemultiplicaçãocelular,háanecessidadedequenovosvasos

sangüíneos sejam formados para que haja  a nutrição destas células, em um processo 

denominadoangiogênese.Amanutenção eoacúmulode massadessascélulasformamos

tumores malignos e elas também podem adquirir a capacidade de se desprenderem do

tumor e de migrarem, invadindo inicialmente os tecidos vizinhos, podendo chegar ao

interiordeumvaso sangüíneooulinfáticoe,através destes,disseminarem‐se,chegandoa

órgãosdistantesdolocalondeotumorseiniciou,formandoasmetástases(Almeidaetal.,

2005).

Ascélulascancerosassão,geralmente,menosespecializadasnassuasfunçõesqueas

suascorrespondentesnormais.Conformeascélulascancerosasvãosubstituindoasnormais,

ostecidosinvadidos vãoperdendosuasfunções;assim,porexemplo,ainvasãoneoplásica

dospulmõesgeraalteraçõesrespiratórias;comistoháadisfunçãoorgânicaquepodelevarà

falênciadoórgãoou,emcasosmaisgraves,levaàmortedopaciente.Caberessaltarque,na

verdade,oncologiamédicaéaespecialidadenamedicinaquefocaotratamentosistemático

do paciente com câncer com quimioterapia e outros tipos de tratamento (Almeida et al.,

2005).

Existem três tipos principais de tratamento para o câncer: cirurgia, radioterapia e

quimioterapia(Murad, 1996).Mais recentementetem‐seusado aterapiadefotorradiação

com derivados hematoporfirínicos (HTP) (Machado, 2000) e a imunoterapia (Salmonm,

1998), sendo que o objetivo de cada um destes tratamentos é erradicar o câncer,

normalmente por meio da terapia combinada, onde é associado mais de um tipo de

tratamento(Almeidaetal.,2005).

A técnica cirúrgica pode levar à remoção de tumores com eficácia, se não houver

metástase;nocasodaleucemia,porexemplo,costumasernecessárioousodeoutrostipos

conjuntos de terapia, incluindo o transplante de medula. A radioterapia (geralmente raios

gama,radioisótoposcomocobalto‐60,raios‐Xeatéprótonsemésonspinegativos)éusada

comumente em conjunto com a cirurgia, como incremento da eficiência do tratamento.

Mesmoisoladamente,aradioterapiapodediminuirtumoresgrandes,diminuirarecorrência

eachancedemetástase,sendoumametodologiaantineoplásicamuitousada;entretanto,

mesmo que sejam usados os sensitizadores (que diminuem os efeitos colaterais) o

tratamentoporradiaçãoésujeitoaseveraslimitações(Murad,1996).

Com esses métodos de tratamento citados, um terço dos pacientes consegue ser

curado através de medidas locais (cirurgia ou radioterapia), que são eficazes quando o

tumoraindanãosofreumetástaseporocasiãodotratamento.Todavia,nosdemaiscasos,a

neoplasia caracteriza‐se pelo desenvolvimento precoce de micrometástases, indicando a

necessidadedeumaabordagemsistêmica,quepodeserefetuada,emcercade60‐70%dos

casoscomaquimioterapia(Almeidaetal.,2005).

Oobjetivo primáriodaquimioterapiaé destruirascélulasneoplásicas, preservando

asnormais.Entretanto,amaioriadosagentesquimioterápicosatuadeformanão‐específica,

lesando tanto células malignas quanto normais (Murad, 1996; Salmonm, 1998),

particularmenteas célulasderápido crescimento,comoas gastrointestinais,capilarese as

dosistemaimunológico.Istoexplicaamaior partedosefeitoscolateraisdaquimioterapia:

náuseas, perda de cabelo e susceptibilidade maior às infecções (Machado, 2000; Oliveira,

2002).

Porém,ocorporecupera‐sedestesinconvenientesapósotratamento,eousoclínico

dessesfármacos exigequeos benefíciossejam confrontadoscom atoxicidade, naprocura

de um índice terapêutico favorável (Murad, 1996; Salmonm, 1998). Muitos estudos estão

sendofeitos para amaioreficiência daquimioterapia e acombinaçãodediversos agentes

antineoplásicos,tendo‐seconseguidoresultadossurpreendentescomíndicesdecurade75

a90%emdiversostiposdecâncer(Almeidaetal.,2005).

Existe uma grande variedade de tipos de compostos utilizados em quimioterapia

oncológica(Almeidaetal.,2005),dentreelesencontram‐secompostossintéticoseprodutos

naturais extraídos de plantas. Dentre alguns produtos naturais citotóxicos, usados

clinicamentenotratamentodeneoplasias,têmseosalcalóidesvegetais(produtosnaturais

nitrogenados derivados biossinteticamente de aminoácidos) como:  i) alcalóides da vinca

(vimblastina e vincristina) (Oliveira,2002) (Figura 2) – ação pela inibição do fuso mitótico,

ligando‐se às proteínas microtubulares e, conseqüentemente, interrompendo a divisão

celular na metáfase (Oliveira,  2002); ii) taxol (Figura 2), éster alcalóide derivado do teixo

ocidental(Taxusbrevifolia)edoteixoeuropeu(Taxusbaccata),(conhecidocomercialmente

comoPaclitaxel®)(Oliveira,2002)–açãotambémpelainibiçãodofusomitótico,dimerização

da tubulina e estabilização dos túbulos, protegendo‐os da despolimerização, o que 

estabiliza,provocaobloqueiodamultiplicaçãocelular,oque resultanaperdadaviabilidade

celular(Oliveira,2002);iii)podofilotoxinas(ouepipodofilotoxinas)(Salmonm,1998;Chabner

& Calabresi, 1995), tendo‐se como exemplos principais a etoposida (VP‐16) e teniposida

(VM‐26),(Figura2),derivadossemi‐sintéticosdapodofilotoxina,extraídadaraizdopodofilo

(Podophyllumpeltatum)(Salmonm,1998;Chabner&Calabresi,1995)–açãopelobloqueio

dascélulasnasfasesSeG2einibiçãodaenzimatopoisomeraseII,oquepromovelesãono

DNA. Pode‐se citar também o uso da enzima asparaginase (Lasparagina amino hidrolase,

Elspar), particularmente em tratamento de leucemia aguda infantil (Machado, 2000;

Chabner&Calabresi,1995),isoladade váriasbactérias, queatuapeladiminuiçãocatabólica

de asparagina sérica, assim como dos níveis sangüíneos de glutamina. Nas células

neoplásicas, isto provoca a inibição da síntese de proteínas, resultando no bloqueio da

proliferação celular. Por último, é digno de nota ressaltar o uso recente de vacinas

antitumorais, ainda em fase de teste, através da interação antígeno‐anticorpo visando a

imunizaçãodoorganismo(Jageretal.,2002).



Figura2.Estruturasdevimblastina,vincristina,etoposida,teniposidaeTaxol(Almeidaetal.,

2005).



Nestecontextoéimportantemencionarqueasplantas,alémdeseuusonamedicina

popularcomfinalidadesterapêuticas,têmcontribuído,aolongodosanosparaaobtenção

de vários fármacos, até hoje amplamente utilizados na clínica (Farnsworth, 1980; Teske  e

Trentini,1995).

Nos últimos anos tem‐se verificado um grande avanço científico envolvendo os

estudosquímicosefarmacológicosdeplantasmedicinaisquevisamobternovoscompostos

com propriedades terapêuticas. Isto pode ser claramente observado pelo aumento de

trabalhos publicados nesta área, tanto em congressos como em periódicos nacionais e

internacionais,alémdosurgimentodenovosperiódicosespecíficossobreprodutosnaturais

ativos, como Phytomedicine, Phytochemical Analysis, Natural Product Letter, etc. (Filho &

Yunes,1998).

Quando se procura obter substâncias ativasde plantas, um dos principais aspectos

quedeveserobservadoconsistenasinformaçõesdamedicinapopular.Dadosdaliteratura

revelamqueémuitomaisprovávelencontraratividadebiológicaemplantasorientadaspelo

seu uso na medicina popular do que em plantas escolhidas ao acaso (Montellano, 1975;

Farnsworth, 1981). Cerca de 75% dos compostos puros naturais empregados na indústria

farmacêutica foram isolados seguindo recomendaçõesda medicina popular (Silva Júnior &

Vizzoto,1996).Outrosaspectosimportantesquedevemserlevadosemconsideraçãosãoas

informaçõesbotânico‐taxonômicasequímico‐taxonômicas(Cordell,1995;Júnior&Scheffer,

1994).

A fitoterapia constitui uma forma de medicina que vem crescendo visivelmente ao

longodos anosonde atualmente omercadomundial de fitofármacosgira emtorno de15

bilhões de dólares. Talvez o principal fator a contribuir consideravelmente para o

crescimento em questão consista na evolução dos estudos científicos, particularmente os

estudos químicos e farmacológicos, que comprovam,cada vez mais, a eficácia dasplantas

medicinais, principalmente aquelas empregadas na medicina popular com finalidades

terapêuticas(Filho&Yunes,1998).

Entretanto, a necessidade de se chegar aos compostos puros responsáveis pelos

efeitos biológicos apresentados pelos extratos, leva a uma obrigatória integração entre a

químicaeafarmacologiamolecular,cujoelopodelevaràobtençãode substânciasnaturais

ousintéticasdegrandeinteressequímico‐medicinal(Filho&Yunes,1998).

Em nosso país, os estudos científicos envolvendo produtos naturais ativos, suas

indicações e contra‐indicações, podem proporcionar  aos fitofármacos um maior nível de

aceitação médica, respaldados pela comprovação de sua eficácia terapêutica em

experimentosfarmacológicospré‐clínicoseclínicos(Filho&Yunes,1998).

Este fato é de extrema importância, considerando‐se que o Brasil se encontra

atualmente nas primeiras posições no mercado mundial de fármacos, necessitando

urgentemente que as indústrias de fitofármacos existentes se desenvolvam para competir

inclusiveanívelinternacional.Ainstalaçãodeindústriasenvolvendoa síntese defármacosa

partirdeprodutosnaturaispoderia,assim,serumconsiderávelpólodecrescimentoparaa

químicaeafarmacologia(Filho&Yunes,1998).



1.2.PlantasMedicinais



 Éprovávelqueautilizaçãodasplantascomomedicamentosejatãoantigaquantoo

própriohomem.Numerosasetapasmarcaramaevoluçãodaartedecurar,porém,torna‐se

difícil delimitá‐las com exatidão, já que a medicina esteve por muito tempo associada a

práticas mágicas,místicas e ritualísticas. Consideradas ou não seresespirituais, as plantas,

por suas propriedades terapêuticas ou tóxicas, adquiriram fundamental importância na

medicinapopular(Martinsetal.,2000).

Contudo, as civilizações antigas muito contribuíram com o conhecimento das

propriedades terapêuticas dos vegetais. Fragmentos de papiros médicos contendo

instruçõesereceitasdecomoprepararváriosmedicamentosapartirdeplantasmedicinais

datamdecercade2400 a.C.(AlmassyJúnioret al.,2005).Ascivilizações daChina,Índia e

norte da Áfricadeixaram evidências escritasdo uso deplantaspara o tratamentode uma

grandevariedadedeenfermidades(Phillipson,2001).NoBrasil,oconhecimentodousodas

plantas medicinais é  o resultado de uma miscigenação cultural envolvendo africanos,

europeuseindígenas,comintroduçãodeespéciesexóticaspeloscolonizadoreseescravos,

(Engelke,2003)desdeseudescobrimentoem1500(Petrovick,1999).

Assim, os africanos utilizavam muito comumente o guiné (Petiveria alliacea L.) e o

melão‐de‐são‐caetano (Momordica charantia L.), pois, entre os negros, quando alguém

adoeciaeraporqueestavapossuídoporespíritomau,eocurandeiroseencarregava,então,

deexpulsá‐lopormeiodeexorcismoepelousodestasplantas(AlmassyJúnioretal.,2005).

Já a influência européia  no Brasil teve início com a chegada dos jesuítas, que

trouxeram várias plantas medicinais, como camomila (Chamomilla  recutita (L.) Rauschert),

melissa(MelissaofficinalisL.),malva(MalvasylvestrisL.),funcho(FoeniculumvulgareMill.),

alecrim(RosmarinusoffcinalisL.),abardana(Arctiumminus(Hill)Bernh.)eodente‐de‐leão

(TaraxacumofficinaleWeber).Porisso,amaioriadasplantasmedicinaisdeorigemeuropéia

foiadaptadaetem‐sereproduzidoespontaneamentenoBrasil(AlmassyJúnioretal.,2005).

Os índios utilizavam ipecacuanha (Psychotria ipecacuanha (Brot.) Stokes), jaborandi

(Pilocarpusjaborandi),guaraná(PaulliniacupanaKunth),taiuiá(Cayaponiaspp.)eaerva‐de‐

bugre(CaseariasylvestrisSw.)nacuradosenfermos(AlmassyJúnioretal.,2005).

Dessa forma, por meio da tentativa e do erro, pouco a pouco, os povos mais

primitivos da história humana passaram a conhecer as plantas de seu ecossistema e a

reconhecer suas propriedades, inclusive as medicinais. Tal conhecimento era repassado

sucessivamenteentreasgerações,principalmentepelatradiçãooral,fatoestequecontinua

ocorrendo até hoje em comunidades mais isoladas, ou que não desenvolveram a escrita

(AlmassyJúnioretal.,2005).

Esta relação entre povos e plantas é denominada de etnobotânica, que pode ser

definidacomooestudodassociedadeshumanas,passadasepresentes,etodosostiposde

inter‐relações:ecológicas,evolucionáriasesimbólicas;reconhecendoadinâmicanaturaldas

relaçõesentreoserhumanoeasplantas(Azevedo&Kruel,2007).

Comumente, as pesquisas etnobotânicas além de abordarem populações

tradicionais,comoindígenasecaiçaras,tambémseconcentramempopulaçõesdecidadese

depequenosnúcleos urbanoscom origemrural.Nestaspopulações,tem sidoobservadaa

utilizaçãodasplantascomoumdospoucosrecursosterapêuticosparatratarsuasdoenças

maisfreqüentes(Pillaetal.,2006).

Atualmente,otratamentodasenfermidadeshumanasa partirdeplantasmedicinais,

ou seus derivados, encontra‐se em expansão por todo o mundo (Farnsworth, 1997).

Entretanto,durantemuitosanosapesquisacomplantasmedicinaisfoisubestimada nomeio

científico,sótomandoimpulsorecenteegradualmente,àmedidaquealgunsestudosforam

semostrandopromissores.MasonúmerodeespéciesestudadasnoBrasil,aolongodemais

de40 anos depesquisas com plantasmedicinais aindaé reduzido(Pavan‐Fruehauf, 2000).

Apesardo aumentodeestudosnessaárea, osdadosdisponíveis revelamque apenas15a

17%dasplantasforamestudadasquantoaoseupotencialmedicinal(Soejarto,1996).

A Organização Mundial da Saúde estima que 80% das pessoas dependam da

medicinatradicional,emespecialnasnaçõesemdesenvolvimento(Farnsworth,1997).Ouso

de plantas medicinais, conhecido hoje como fitoterapia (Almassy Júnior et al., 2005) tem

ressurgidocomoumaopçãomedicamentosabemaceitaeacessívelaospovos,enocasodo

Brasil é adequada para as necessidades locais de centenas de municípios brasileiros no

atendimento primário à saúde. A expansão da fitoterapia pode ser atribuída a diversos

fatores tais como: aos efeitos adversos de fármacos sintéticos, a preferência dos

consumidores por tratamentos “naturais”, a validação científica das propriedades

farmacológicas de espécies vegetais, o desenvolvimento de novos métodos analíticos

colocados à disposição do controle de qualidade, o desenvolvimento de novas formas de

preparaçõeseadministraçõesdeprodutosfitoterápicos,ummelhorconhecimentoquímico,

farmacológicoeclínicodasdrogasvegetaiseseusderivados,além,também,domenorcusto

secomparadocomosfármacossintéticos(Meloetal.,2007).

Além disso, o Brasil possui uma farmacopéia popular muito diversa baseada em

plantas medicinais, visto que, o país é possuidor da maior diversidade vegetal do planeta,

aproximadamente55milespéciesdeplantassuperiores(Engelke,2003).Dentreasinúmeras

plantasutilizadasnamedicinapopularaCEME(CentraldeMedicamentosdoMinistérioda

Saúde) realizou a inclusão de dezenas de plantas brasileiras mais usadas popularmente.

Entre elas estão a espinheira‐santa (Maytenus ilicifolia) do sul do Brasil, o capim‐santo

(Cymbopogon citratus), o quebra‐pedra (Phyllanthus niruri e outras espécies do mesmo

gênero), o mastruço (Chenopodium ambrosioides), o mentrasto (Ageratum conyzoides), a

embaúva (Cecropia glaziovi), a colônia (Alpinia  zerumbet) e várias outras muito usadas no

país(Lorenzi&Matos,2002).

Asplantas sintetizam compostos químicos apartir dos nutrientes, daágua e da luz

que recebem. Muitos desses compostos ou grupos deles, denominados princípios ativos,

podemprovocardiversasreaçõesnoorganismo.Algumasdessassubstânciaspodem ounão

ser tóxicas, dependendo da dosagem em que venham a ser utilizadas. Assim, “planta

medicinaléaquelaquecontémumoumaisdeumprincípioativo,conferindo‐lheatividade

terapêutica”(Martinsetal.,2000).

Dessa forma, o reino vegetal, além de ser o maior reservatório de moléculas

orgânicas conhecido, é um poderosolaboratório de síntese.A  partir de plantas achadas e

usadas pelo conhecimento popular, foram descobertos diversos medicamentos  (Alves &

Silva, 2002), como os analgésicos, tranqüilizantes, diuréticos, laxativos e antibióticos entre

outros (Meyers, 1983; Principe, 1985), que são usados até os nossos dias pela medicina.

Aindahojediversasmoléculascomestruturacomplexadependemdesíntesebiológica, pois

asínteseemlaboratórionãopodeserfeitaouéeconomicamenteinviável;porissoplantas

medicinais são usadas como matéria‐prima para a fabricação de medicamentos (Alves &

Silva,2002).



1.3.Cerrado



 O Brasil, reconhecidamente, é o país detentor de uma das mais altas taxas em

biodiversidade. Contendo em seu território extensas áreas de florestas tropicais, abriga a

maior diversidadebiológicae genética terrestre.Estimativas citam aexistência de 40 a55

milespéciesvegetaisfanerogâmicasnosbiomasbrasileiros(Pavan‐Fruehauf,2000).

NoBrasil,considera‐seaocorrênciadeseisgrandesbiomasbrasileiros:oCerrado,os

Campose FlorestasMeridionais, aFloresta Atlântica,aCaatinga, aFloresta Amazônicaeo

Pantanal(Figura3)(Ribeiro&Walter,1998).



Figura3.DistribuiçãogeográficadosprincipaisbiomasdoBrasil,destacandoaáreaocupada

peloCerrado(Ribeiro&Walter,1998).

O Cerradoestá localizadobasicamente no Planalto Central do Brasileé o segundo

maiorbiomadopaísemárea,apenassuperadopelaFlorestaAmazônica(Ribeiro&Walter,

1998;Guarim‐Neto&Morais,2003;Klink &Machado,2005).OCerradoéconsideradoum

complexovegetacionaldegrandeheterogeneidadefitofisionômica(Ribeiro&Walter,1998),

ocupando mais de dois milhões de km

, o que representa cerca de 23% do território

brasileiro(Ribeiro&Walter,1998;Guarim‐Neto&Morais,2003).

O Cerradoabrangecomo área contínua os estados de Goiás, Tocantins e oDistrito

Federal, partedos estados da Bahia,Ceará, Maranhão, Mato Grosso, MatoGrosso do Sul,

MinasGerais,Piauí,RondôniaeSãoPauloetambémocorreemáreasdisjuntasaonortenos

estados do Amapá, Amazonas, Pará e Roraima, e ao sul, em pequenas “ilhas” no Paraná.

Fora do Brasil ocupa áreas na Bolívia e Paraguai, enquanto paisagens semelhantes são

encontradasnaColômbia,Guiana,SurinameeVenezuela,recebendooutrasdenominações

como Llanos, por exemplo (Ribeiro & Walter, 1998). Deste modo, Proença et al. (2000),

considera o Cerrado o mais brasileiro dos biomas sul‐americanos, pois, excetuando‐se

algumas pequenas áreas encontradas em outros países, ele está totalmente inserido no

territórionacional.

ObiomaCerradoéapontadocomograndedetentordediversidadebiológica,sendo

a formação savânica com maior diversidade vegetal do mundo, especialmente quando se

consideramasespécieslenhosas(Guarim‐Neto&Morais,2003).Estebiomapossuimaisde

7.000 espécies de plantas (Klink & Machado, 2005), muitas delas com valor alimentício e

medicinal(Almeidaetal.,1998).

Asdiferençasclimáticasassociadasafatoresedáficoseàintensidadeefreqüênciado

fogo são refletidas nas diversas fisionomias do cerrado sensu lato, variando desde

campestres (cerrado ralo) a florestais (cerradão) (Ribeiro & Walter 1998). A maioria das 

árvoresdocerradotêmraízesextensasquebuscamaáguanasprofundezasdosolo,esuas

folhas são sempre verdes, mesmo no auge da seca; suas cascas grossas e corticentas

protegem os troncos da ação do fogo. A vegetação rasteira apresenta xilopódios, bulbos,

rizomasegemassubterrâneasqueresistemdormentesmesmoquandotodaaparteaérea

da planta desaparece, rebrotando com as primeiras chuvas de primavera, geralmente em

setembro(Proençaetal.,2000).

 OssolosdoCerradosãogeralmentepobreseácidose,durantemuitotempo,foram

considerados impróprios para a agricultura. As grandes fazendas de cerrado eram

tradicionalmente utilizadas para criação extensiva de gado, o que causava relativamente

poucodanoàfloraeàfauna(Proençaetal.,2000).

Entretanto, ao longo dos últimos 50 anos (Anacleto, 2005), a progressiva

mecanizaçãodalavouraeafacilidadedelimpareadubaraterratêmcontribuídoparauma

devastação acelerada da vegetação nativa (Ratter et al., 1997), transformando áreas

naturaiscontínuasemmanchasisoladas(Anacleto,2005).Somenteaspastagensplantadas

com gramíneas africanas ocupam uma área equivalente à área da Espanha,

aproximadamente500milkm

,enquantoaáreatotaldestinadaàconservaçãoédeapenas

33milkm

,claramenteinsuficienteparaa preservaçãodessebioma.Alémdisso,estima‐se

que20%dasespéciesendêmicasestãoameaçadas,pois,nãosesituamnasáreaslegalmente

protegidas(Klink&Machado,2005).

Aflora doCerrado,porém, aindaé poucoconhecida.Ainda hácarênciade estudos

voltados para a identificação de plantas úteis do Cerrado, principalmente quando

comparada à diversidade e à área ocupada. O desconhecimento de sua riqueza e

possibilidadesseagravaquandoRatteretal.(1997)estimamquecercade40%do biomajá

tenhasidodevastadoequandoKaplanetal.(1994)afirmamque oCerradopossuisomente

1,5% desua extensãoprotegida por lei, sendoatualmente a vegetaçãoem maior riscono

país. É preciso considerar que os recursos naturais oferecidos por ele, uma vez extintos,

estarão indisponíveis às futuras gerações. Entre estes, pode‐se considerar o recurso

terapêuticooferecidopelasplantasmedicinais.

Gottlieb & Borin (1994) relataram que há  possivelmente mais espécies vegetais

(diversidadeespecífica) em áreasamostrais de Floresta Amazônicaquenas de Cerrado de

mesmo tamanho, salientando, porém, que a diversidade taxonômica é certamente muito

maior no último. Esta diversidade é  relativa aos táxons mais elevados (gênero, família e

ordem), mostrando a importância do Cerrado para pesquisas com plantas medicinais. Isto

porque, quanto maior for a diversidade taxonômica em níveis superiores, maior é o

distanciamento filogenéticoentre as espécies e maior é adiferença e diversidade química

entreelas.Porisso,agamaeopotencialdecompostosbioativos produzidospelasespécies

doCerradoseriammaioresqueasdaFlorestaAmazônica.IstoseevidenciaquandoKaplan

et al. (1994) afirmam que, utilizando se o mesmo método de extração fitoquímica, há

diferenças muito contrastantes, visto que as espécies de Mata Atlântica apresentam

pequenonúmero decompostos emgrandesquantidades e asdeCerrado,grandenúmero

de compostos estreitamente relacionado, mas em quantidades tão pequenas que só

poderiamseridentificadosporanáliseespectral.Poressas característicasobiomaCerrado

deveriaserconsideradoáreaprioritáriadepesquisascomplantasmedicinaiseconservação

derecursosnaturais(Guarim‐Neto&Morais,2003).



1.4.Duguetiafurfuracea(St.Hil.)BentheHook.f.(1862)(Sofre‐do‐rim‐quem‐quer)



AplantaDuguetia furfuracea(St.Hil.)BentheHook.f.(1862)(Figura6),pertenceà

família Annonaceae, e é conhecida popularmente como “sofre‐do‐rim‐quem‐quer”,

araticum‐seco(Rodrigues&Carvalho,2001),“ata‐do‐mato”(GuarimNeto&Morais,2003),

marolinho,araticum‐do‐campo,araticum ‐do‐cerrado,atabravaeatadelobo(Toledoetal.,

2006). Esta planta ocorre em vários estados brasileiros, como Amazonas, Bahia, Distrito

Federal,Goiás,MinasGerais,MatoGrosso,MatoGrossodoSul eSãoPaulo(Proençaetal.,

2000).Ochádesuasfolhas(Figura4)éindicadoparacombaterdismenorréia,metrorragiae

diarréia(Sangali,2000).Rodrigues& Carvalho(2001)eCarolloet al.,(2006a),relatam que

suasfolhassãoanti‐reumáticasepodemserusadaseminfuso.SegundoPott&Pott(1994),

cascaseraízescombatemreumatismo;o frutoéusadoparaamolecerferidas.Silva(1998)

citaqueseufruto(Figura5)éconsumido“innatura”.Ochádaraizéusadocomocalmante,

anti‐reumático,paracólicasrenaisedoresdecoluna.Gottsberge(1987)comentaquearaiz

é usada contra dores de estômago. Gavilanes & Brandão (1998) e Carollo et al., (2006a)

referem‐seaofatodeassementesseremutilizadascontrapediculose.

Duguetiafurfuraceaéumarbustodecampocerradoebeiradecórrego,sendotodaa

plantadeumtombege‐douradopoucocomum,tantofolhasquantofloresefrutos(Proença

etal.,2000).Apresentaarbustocomtroncoslenhososmúltiplos,combasesubterrâneaque

o torna resistente ao fogo, formando aglomerados (forma moitas) de 1 a 3 m de altura.

Possui ramos finos, folhas simples inteiras, geralmente com galhas (caroços), lanceoladas,

pecioladas,alternas,ápiceagudo,baseatenuada,margensinteiras,coriáceas,decoloração

mais pálida na face inferior. As flores (Figura 4) são solitárias e axilares, com três sépalas

imbricadas e seis pétalas róseas; (Corrêa, 1984; Bontempo, 1994; Barroso et al.,1999) os

frutos são carnosos, de abril a julho, outubro e novembro e em fevereiro (Proença et al.,

2000).



Figura4.FlorefolhasdeDuguetiafurfuracea.



Figura5.FrutodeDuguetiafurfuracea(Proençaetal.,2000).



Figura6.Aplanta,Duguetiafurfuracea.



AfamíliaAnnonaceaeA.L.deJussieurepresentaumagrandefamíliapantropical,que

compreendeaproximadamente130gênerose2200espécies.NoBrasilocorrem33gêneros

ecercade250espécies,distribuídasempraticamentetodasasformaçõesnaturaisdonosso

país (Souza & Lorenzi, 2005).Existe um consenso quanto à posição filogenética desta

família, encontrando‐se na base das dicotiledôneas. Pertence à subclasse Magnoliidae,

ordem Magnoliales, que, no Brasil, é representada pelas famílias Magnoliaceae D.C.,

Winteraceae Lindl., Annonaceae Juss., Canelaceae Endl., Myristicaceae Horan.,

MonnimiaceaeLindl.,HernandiaceaeDumort.eLauraceaeLindl.,emboraospontosqueas

interligamaindanãoestejamclaros(Almeida,1998;Chaseetal.,1993;Doyle&LeThomas,

1999).

Atriagem de espéciesvegetais dessafamília éde grande importânciauma vezque

têmsidoidentificadassubstânciascomdiferentesatividadesbiológicas,comoporexemplo,

citotóxica, antiplasmódica, antiprotozoárica, antiparasitária, pesticida, antimicrobiana,

antifúngica,antimalárica,imunossupressora,antioxidanteeantitumoral(Sousaetal.,2000;

Franaetal.,2000;Garciaetal.,2000).

Acetogeninas(ACGs)sãosubstânciasque têmsidoisoladasdediferentesespéciese

gênerosdafamíliaAnnonaceaeetêmdespertadograndeinteressenosestudosfitoquímicos

dessafamília(Almeidaetal.,1998).Essassubstânciasforamprimeiramenteidentificadaspor

Jolad et al., (1982), a partir do extrato etanólico das raízes de Uvaria accuminata, onde

apresentaramatividadecitotóxica,antiparasitáriaeantitumoral.

Atualmente,éconhecidoquediferentesespéciesegênerosdeanonáceasproduzem

tiposparticularesdeACGs(Tormoetal.,1999);assim,maisde400moléculascomdiversas

estruturasquímicasjáforamidentificadas(Quinnetal.,2007).AsACGssãoclassificadasde

acordo com as características estruturais que apresentam e, em geral, tem um esqueleto

constituídode35a37átomosdecarbono,comumanelγ‐lactônico,α,β‐insaturadoeumou

doisanéistetra‐hidrofurânicos(THF)quepodemounãoseradjacentes;edoisasetegrupos

hidroxilas,sendoquedoisdestesflanqueiamoTHF(Zafra‐Poloetal.,1998).

Existem muitos trabalhos que procuram  elucidar as possíveis atividades biológicas

das ACGs: Zafra‐Polo et al., (1998) atribuem‐lhes atividade citotóxica, antimitótica,

antimicrobiana e antimalárica; Morre et al., (1995) e Oberlies et al., (1997) relataram a

atividade antitumoral  em testes in vitro e in vivo em diferentes linhagens de células

neoplásicas,sendoquealgumas ACGsforamefetivasnainativaçãodelinhagens  decélulas

multirresistentesaalgumasdrogassemcausartoxicidadeemoutrascélulashumanas.Shiet

al.,(1995)avaliaramosefeitosbiológicos damucocina,umaacetogeninaisoladadeRollinia

mucosa (jacq.) Baill. (Annonaceae). Esta acetogenina mostrou‐se um potente agente

antitumoral, inibindo células tumorais sólidas A‐549 (câncer de pulmão) e PACA‐2 (câncer

pancreático) com  potencial 10.000 vezes maior que adriamicina (doxorrubicina). Mais

recentemente, Yuan et al., (2003) pesquisaram os efeitos biológicos da annonacin, uma

acetogeninaisoladaa partirdesementes daespécieAnnona reticulata.Nesteestudo,eles

verificaramqueestaACGfoicapazdeinduziratranscriçãodep21ebloquearociclocelular

de células neoplásicas na fase G1. Além disso, a  annonacin foi significativamente mais

citotóxicaàscélulasneoplásicasqueseencontravamnafaseS.

OprincipalmeiodeaçãodasACGsé pelainibiçãodocomplexo MitocondrialI(oxi‐

redutase ubiquinona‐NADH) da cadeia transportadora de elétrons (mais importante modo

deobtençãodeenergiadascélulas).OcomplexoMitocondrialItemcomofunçãotransferir

elétrons do NADH para a ubiquinona, fechando esse processo com uma translocação de

prótonsatravésdamembranaparaformarumgradienteeletroquímicoquelevaàsíntesede

ATP (González et al., 1998; Hollingworth et al., 1994). Assim, apesar da inibição do

crescimento de culturas de células tumorais necessitar de outros fatores para ser efetiva,

como disponibilidade intracelular da substância e facilidade de difusão pela membrana,

sabe‐sequeascélulastumoraissãoasque maisconsomemATP,oquepoderiaexplicar,pelo

menosemparte,a maiortoxicidadedasACGsa essestiposcelulares(Tormoet al.,1999).

Ainda,supunha‐sequeofatorque maisinfluenciavaapotência damoléculade ACGeraa

polaridade.Contudo,pormeiodeestudosdecinéticaficoudemonstradoqueossubtiposde

ACGsinteragemdemaneirasdiferentescomaenzima,provavelmentedevidoaosdiferentes

arranjostantodosgrupamentoslateraisdacadeiaalquil,quantodosistemaTHF,quepode

serclassificadoem:mono‐THFebis‐THFadjacenteounãoadjacente(Gonzálezetal.,1998;

Tormoetal.,1999;Zafra‐Poloetal.,1998).

NafamíliaAnnonaceae,ogêneroDuguetia,compreendecercade80espéciesnativas

compredominâncianaAméricatropicalecentral,distribuídosnabaciaAmazônicaeGuiana,

emboraalgunsrepresentantessejamencontradosna regiãosuldaAméricadoSul(Pereira

et al., 2003; Carollo et al., 2005; Muhammad et al., 2001). Este gênero não está entre os

mais estudados fitoquimicamente, tais estudos têm se concentrado nos gêneros Annona

(120espéciescatalogadas),Goniothalamus(115),Monodora(20),Rollinia(65),Uvaria(150)

eXylopia(100‐150).DiversosalcalóidesjáforamisoladosdeváriasespéciesdeDuguetiae,

peloestudofitoquímicobiomonitoradodeD.panamensis,utilizandooensaiodetoxicidade

frente a Artemia salina, foi obtida uma substância ativa o 2,4,5‐trimetoxilestireno, porém

apresentando baixa toxicidade frente a esse microcrustáceo e também fraca atividade

antitumoral(Siqueiraetal.,2001).

Da espécie Duguetia glabriuscula, Siqueira  et al., 1997, isolou do extrato hexânico

dasfolhase dascascasdocaule, osesquiterpeno,(+)‐10β,14‐allo‐aromadendranodiol,que

possuiatividadeantimicrobianaconsiderável.

Demodogeral,dasespéciesdogêneroDuguetiajáforamisoladosváriosalcalóidese

váriostiposdeestruturasdesesquiterpenos(Pereiraetal.,2003;Fechine etal.,2002;Maia 

et al., 2006; Leboeuf et al., 1980). Desses constituintes, os alcalóides têm sido mais

amplamente testados, exibindo atividades antimalárica, antimicrobiana e citotóxica

(Muhammadetal.,2001;Temponeetal.,2005).

A análisefitoquímica das partes aéreas(folhas e ramos) deD. furfuracea reveloua

presençadesesquiterpenos(Carollo etal.,2005),flavonóideseváriosalcalóides(Carolloet

al., 2006a; Carollo et al., 2006b). Dados da literatura descrevem que, de modo geral,

sesquiterpenos apresentam potencial como agentes anticancerígenos (Fraga, 2006). A

presença de alcalóides foi mencionada em ampla gama de atividades biológicas, entre as

quais, pode‐se citar principalmente atividades: anti‐hipertensivas, antimaláricas,

antitumorais, diuréticos, antivirais, entre muitos outras (Henriques et al., 2004). Os

flavonóides são comumente indicados como antiinflamatórios, anticarcinogênicos,

diuréticos, antimicrobianos, antiviróticos e antioxidantes (Almassy Júnior et al., 2005;

Zuanazzi&Montanha,2004).

EstudosrealizadosporCarolloetal.,(2006a),descrevemasatividadestripanomicida,

antiplasmódicaeantiprotozoárica,daspartesaéreas(follhaseramos)deD.furfuracea.

Toledoetal.,(2006),avaliaramaaçãofitotóxicadoextratoaquosoaquenteeafrio

daspartesaéreasdeD.furfuracea,emratasprenhesemostraramatoxicidadedosextratos

testados,emembriõesderatos.

Contudo, chás e extratos vegetais, além de apresentar ação benéfica, podem

produzir efeitos colaterais como qualquer droga.Muitas dessas plantas podem inclusive

apresentaratividadetóxicaegenotóxica.Entretanto,namaioriadosexperimentosquetêm

sidorealizados,osextratosvegetaispodemtambémreduzirataxademutações(Erdtmann,

2003).

Muitos testes de detecção de atividades genotóxicas têm sido propostos para

identificação de possíveis carcinógenos (Zeiger, 1998). Uma vez que, testes de

mutagenicidade sãoreferenciais paracarcinogenicidade. Pois, o cânceré tipicamenteuma

doençade organismos multicelularese osfatores que determinammutagenicidade nestes

organismosquasesempretambémproduzemneoplasias(Erdtmann,2003).



1.5.Mutação,GenotoxicidadeeCarcinógenos



Osorganismosvivosestãofreqüentementeexpostosasubstânciasmutagênicasque

podemcausardanoscelulares.Osdanospodemserinduzidosporagentesquímicos,físicos

oubiológicosequeafetamprocessosvitaiscomoaduplicaçãoeatranscriçãogênica,bem

comoalteraçõescromossômicas,levandoaprocessoscancerososemortecelular.Pelofato

de causarem lesões no material genético, essas substâncias são conhecidas como

genotóxicas(Costa&Menk,2000).

A ingestão de alimentos é uma das principais vias de exposição do homem a

diferentescompostos, visto queuma misturacomplexa de agentesquímicos éencontrada

nadieta.Algumasdassubstânciaspresentesnosalimentospodemterefeitosmutagênicos

e/ou carcinogênicos; isto é, podem induzir mutações no DNA e/ou podem  favorecer o

desenvolvimento de tumores enquanto outras podem atenuar ou anular estes efeitos.

(Antunes&Araújo,2000).

Acredita‐se que cerca de um terço de todos os cânceres humanos possam estar

relacionadoscomohábitoalimentar(Ames,1983;Renner,1990).Poroutrolado,temsido

observadoqueadietaricaemfrutaselegumesestáassociadaàreduçãodoriscodecâncer

(Block, 1992). Alguns antioxidantes provenientes da dieta também assumem papel de

relevância nessa prevenção, como ácido ascórbico,α‐tocoferol,β‐caroteno, glutationa e

ubiquinol (Halliwell & Aruoma, 1993). De acordo com Aruoma (2002), extratos de  plantas

também podem ter atividade antioxidante, especialmente pela presença de compostos

fenólicos,comoflavones,isoflavones,flavonols,catequinaseácidosfenólicos.

Alémdisso,aexposiçãodossereshumanosadeterminadassubstânciaspresentesno

meioambienteounoseulocaldetrabalhopodelevaraodesenvolvimentodecâncer.Jáno

final doséculo XVIII foirelatado que a ocorrênciade câncer deescroto emlimpadores de

chaminés poderia estar relacionada com a deposição de fuligem e alcatrão nas pregas

escrotais. Posteriormente foi mostrado que a aplicação repetida de alcatrão de hulha na

pele de animais levava ao eventual desenvolvimento de tumores malignos no sítio da

aplicação. Hoje sabemos que o alcatrão de hulha contém hidrocarbonetos aromáticos

carcinogênicos,comoobenzo[α]pireno.NoséculoXIXfoiobservadaumaassociaçãoentrea

exposição de pintores a aminas aromáticas, tal como benzidina, e o desenvolvimento de

câncer na bexiga. Somente após 1930 foi demonstrada a associação entre a exposição de

animaisadiversasaminasaromáticaseodesenvolvimentodessetipodecâncer.Atualmente

sãoconhecidasváriassubstânciasquímicascarcinogênicas(Otteneder&Lutz,1999).

AGenéticaToxicológica,éosetordagenéticaqueestudaosprocessosquealterama

base genética da vida, quer seja na estrutura físico‐química do DNA (ácido

desoxirribonucléico), processo este classificado de mutagênese; quer seja na alteração do

determinismo genético  ao nível celular  ou orgânico, identificados respectivamente como

carcinogêneseeteratogênese(Erdtmann,2003).

Um composto é dito como genotóxico quando, sob o aspecto genético, perturba a

vidaouinduzàmortetantoaníveldecélulacomodeorganismo(Erdtmann,2003).Podeser

definido funcionalmente como tendo a habilidade de alterar a replicação do DNA e a

transmissão genética. Assim, as alterações que perturbam o genoma, sejam elas

mutagênicasounão,sãoconsideradasgenotóxicas(Fairbairnetal.,1995).

Poroutrola doumcompostoéditomutagênicoquandoécapazdeaumentarataxa

demutaçãoemumorganismoalémdaespontânea.Umamutaçãopodeserdefinidacomo

umamudançaestáveleherdávelnumaseqüêncianucleotídicadoDNA,demodoqueessas

modificaçõespodemsercromossômicasougênicas(Gatehouseet al.,1990).Asalterações

cromossômicas podem estar relacionadas à estrutura cromossômica, em conseqüência de

deleções,duplicações,inversõese translocaçõesmaiores, ouaonúmero decromossomos,

emdecorrênciadefalhasnacitocinese,pornãodisjunçãomitótica,etc.Asmutaçõesgênicas

são devidas à substituição de bases (transições e transversões); frameshifts; ou inserções,

deleçõesetranslocações(Gatehouseetal.,1990;Suzukietal.,1992).Destaforma,agentes

que causam mutações são considerados genotóxicos, apesar de nem todos os agentes

genotóxicosseremmutagênicos(Vogel,1989).

Aocorrência demutações, emsuamaioria, édeletériaàcélula. Entretanto,podem

também ocorrer mutações favoráveis, conferindo alguma vantagem à célula, embora a

freqüênciasejasuficienteparaforneceravariaçãonecessáriaparaaseleçãonaturaleentão

aevolução(Lehningeretal.,1995).

Chama‐se carcinogênese o processo de conversão de uma célula normal em uma

célula maligna, sendo que os agentes indutores desse processo são denominados

carcinógenos.Usualmenteénecessáriaaexposiçãorepetidaaoscarcinógenosparaquehaja

o desenvolvimento de tumores malignos. Esse desenvolvimento ocorre muito lentamente

devidoànaturezacomplexadacarcinogênese,aqualpodeserdivididaemtrêsestágios:a

iniciação,apromoçãoeaprogressão,seqüênciadeeventosquefoiesclarecidanodecorrer

dos últimos 20 anos (Balmain, 2000). Freqüentemente, após a alteração inicial, aparecem

novaspopulaçõescelularesquerepresentamaevoluçãodecélulasnormaisparacélulaspré‐

neoplásicas,pré‐malignasemalignas(Sun,1990;DiGiovani,1992).

A iniciação é causada por uma alteração irreversível do DNA, como a reação dessa

molécula com substâncias carcinogênicas. Assim, mecanismos de detoxificação de

carcinógenos, reparo do DNA e eliminação das células que  tenham DNA modificado (por

apoptose,porexemplo)sãoimportantesparaaproteçãocontraainiciaçãodocâncer.Para

queainiciaçãoocorra,énecessárioquehajanãosóamodificaçãodoDNA,mastambéma

sua replicação e a proliferação celular, de modo que a mutação inicial possa se fixar. A

maioria dos cânceres humanos são originários de células epiteliais (carcinoma), pois as

mesmasestãoexpostasaoscarcinógenos(presentesnoarounosalimentos)eseproliferam

rapidamente(Brownetal.,1994).

Emgeral,oscarcinógenossãosubstânciaseletrofílicasousãometabolizadosparaas

mesmas durante o seu processo de detoxificação. Tais substâncias são atraídas por

moléculascomaltadensidadeeletrônica,comoéocasodasbasesdoDNA,asquaisacabam

seligandoelevandoàformaçãodeadutos(Bartsch,1996).AbasedoDNAmaissuscetívela

esse tipo de ataque é a guanina, mas já foram relatados adutos formados com todas as

bases(Dipple,1995).SendoformadosnoDNAatravésdemecanismosquímicosespecíficos,

tais adutos podem levar a mutações em proto‐oncogenes ou em genes supressores de

tumoreiniciaroprocessodecarcinogênese(Lehman& Harris,1994;Kinzler&Vogelstein,

1996).

 Ainiciaçãoéseguidapelapromoção,aqual envolve aseleçãoeexpansãodascélulas

iniciadas,podendolevaraodesenvolvimentodeumtumorbenigno.Duranteapromoçãodo

tumor, o material genético alterado da célula iniciada altera a expressão dos genes que

regulam a diferenciação e o crescimento celular. Quando administrados em altas doses,

muitos carcinógenos são tanto iniciadores como promotores. Entretanto, uma dose baixa

nãoindutoradetumorsetornaefetivaseadministradajuntamentecomcertassubstâncias

não carcinogênicas conhecidas como promotoras de tumor. Exemplos de promotores de

tumor são o acetato de forbol miristato (PMA), um composto normalmente usado para

induzir a explosão respiratória em células fagocíticas, e o 12‐O‐tetradecanoil‐forbol‐13‐

acetato(TPA).Muitospromotoresdetumorsãopotentesindutoresdeinflamação,masnão

háumprincípioqueexpliqueaaçãodetodos.Elespodemlevaraalteraçõesreversíveisda

proliferação celular e expressão fenotípica. A remoção do promotor pode resultar em

retorno do tecido para um estado quase normal, embora ainda esteja iniciado (Kensler &

Taffe,1986;Nairetal.,2000).

O estágio final da carcinogênese consiste na progressão de uma lesão benigna ou

pré‐malignapara umamaligna, oque envolve alteraçõesadicionaisno DNA (porexemplo,

nos genes supressores de tumor). A conversão de tumores benignos para malignos é

acompanhada por perda no controle do crescimento, invasão de tecidos, metástase e

instabilidadegenéticaaumentada.Algunsexemplossãoaprogressãodepóliposbenignosdo

cólonparaadenocarcinomaedenóduloshepáticosbenignosparahepatoma(Sun,1990).

Oscarcinógenosquímicospodemserconsideradoscarcinógenosdiretoseindiretos.

Os primeiros, um grupo relativamente pequeno, independem de metabolização pelo

organismoelesam diretamenteomaterialgenético; incluemosagentesalquilantes,como 

os quimioterápicos tipo ciclofosfamida, clorambucil e busulfan, entre outros. Os

carcinógenos indiretos dependem de metabolização prévia para se combinar  com sítios

nucleofílicos das células‐alvo, incluindo o DNA, o RNA e proteína (Miller & Miller, 1981;

Williams e Weisburger, 1986). É evidente  que, para os carcinógenos serem metabolizados

eficientemente,ossistemasenzimáticosdevemestaríntegros;daíaimportânciadoestado

nutritivodoorganismoedacomposiçãodadietaosquais,entreoutrosfatores,influenciam

aqueles sistemas. Um terceiro grupo de carcinógenos não são genotóxicos, isto é,

apresentamresultados negativosemtestesdemutagenicidade;noentanto,induzemcâncer

emroedores,particularmentenofígado.Épossível que,porseremtóxicos,levemàmorte

celularrepetida,comregeneraçãopersistenteeperdadocontroledaproliferaçãocelular.A

ocorrência concomitante de hiperoxidação celular, alteração dos sistemas enzimáticos de

detoxificação ou ainda metilação aberrante das bases dos ácidos  nucléicos, em conjunto,

podemcontribuirparaodesenvolvimentoda neoplasia(Newberneetal.,1987).Esteúltimo

grupo de carcinógenos, por estar principalmente relacionado a distúrbios da proliferação

celular,aproximam‐semaisdogrupodecarcinógenospromotores(epigenéticos)doquedos

iniciadores(genotóxicos)(Camargo,1991).

Alémdisso,danosemDNAemutaçõesocorremmesmonaausênciadeexposiçãoa

carcinógenosgenotóxicosatravésdeumtratamentoespecíficoouumhábitoparticular.Os

agentesquelevamaessesdanosincluemprodutosnormaisdometabolismocelular,como

espécies reativas de oxigênio, produtos da peroxidação lipídica, agentes alquilantes,

estrógenos,espéciesreativasdenitrogênio,agentesclorinantesecertosintermediáriosde

algumasviasmetabólicas(Burcham,1999),efontesexógenasinevitáveis,taiscomoradiação

UV, radiação ionizante, radioisótopos de ocorrência natural e numerosas substâncias

químicas genotóxicas presentes naturalmente ou como contaminantes na dieta e no ar

(Ames,1989;Guptaetal.,1999;Otteneder&Lutz,1999).



1.6.ProcessosdeReparo



Ésabido que oDNA celularé suscetívela modificaçõesquímicas quandoexposto a

vários agentes ambientais, quimioterapêuticos, ou endógenos produzidos por processos

celulares. As lesões produzidas por estas reações químicas podem levar a mutações e/ou

mortecelular(Nolletal.,2006).

 Ogenomadeumacélulademamíferotípicaacumulamuitosmilharesdelesõesnum

período de 24 horas. Entretanto, graças ao reparo do DNA, menos do que uma lesão em

1.000 torna‐se uma mutação. O DNA é uma molécula relativamente estável, mas sem os

sistemas de reparo, o efeito acumulativo de muitas reações de ocorrência rara, porém

lesivas,poderiamtornaravidaimpossível(Lehningeretal.,1995).

 Onúmeroeadiversidadedossistemasdereparorefletemaimportânciadoreparo

do DNA para a sobrevivência  da célula e a diversidade das fontes de lesão do DNA.

(Lehningeretal.,1995).OsprincipaissistemasdereparonaE.colisão:

 Reparo de despareamento – os despareamentos nem sempre são corrigidos para

corresponder à informação da fita molde, desta forma o sistema deve de alguma

forma discriminar entre o molde e a fita recém‐sintetizada. A  célula  realiza esta

discriminaçãocarimbandooDNAvelho(molde)comgruposmetilaparadistingui‐lo

das fitas recém‐sintetizadas. O sistema de reparo dos despareamentos da E. coli

inclui pelo menos nove componentes protéicos que funcionam tanto na

discriminaçãodafitacomonopróprioprocessodereparo(Lehningeretal.,1995).

 Reparo de excisão de bases (BER) – toda célula possui uma classe de enzimas

chamadas de DNA glicosilases que reconhecem lesões particularmente comuns do

DNA(comoosprodutosdasdesaminaçõesdacitosinaeadenina)eremovemabase

afetadaclivandoaligaçãoN‐glicosídica.Istocriaumsítioapurínicoouapirimidínico

no DNA, ambos comumente referidos como sítios AP ou abásicos. Cada DNA

glicosilase é geralmente específica para um tipo de lesão. Desde que um sítio AP

tenhasidoformado,umoutrogrupodeenzimasdeverepará‐lo.Oreparonãoéfeito

simplesmentepelainserçãode umanovabaseereformaçãodaligaçãoN‐glicosídica.

Aocontrário,adesoxirribose5´‐fosfatodeixadaatráséremovidae substituídacom

um novo nucleotídeo. Este processo começa com enzimas chamadas de AP

endonucleases,quecortamafitadoDNAcontendoosítioAP.Aposiçãodaincisão

relativaaosítioAP(5´ou3´)variacomdiferentesAPendonucleases.Umsegmento

doDNAincluindoosítioAPé entãoremovido,oDNAésubstituídopelaaçãoda DNA

polimeraseIeocorteremanescenteéseladopelaDNAligase(Figura7)(Lehningeret

al.,1995).

 Reparo de excisão de nucleotídeos (NER) – lesões do DNA que causam grandes

distorçõesnaestruturahelicoidaldoDNAgeralmentesãoreparadaspelosistemade

excisão de nucleotídeos (Lehninger et al., 1995). Este sistema envolve a quebra de

uma ligação fosfodiéster em ambos os lados da lesão, no mesmo filamento,

resultando na excisão de um oligonucleotídeo. Isto deixa um espaço que é

preenchidopelasíntesedereparo,eumaligasefechaasquebras(Griffiths,1998).Na

E.coliaenzima‐chaveéconstituídadetrêssubunidades,produtosdosgenesuvrA,

uvrBeuvrC,eéchamadadeexcinucleaseABC.Estaenzimareconhecemuitostipos

delesões,incluindodímerosdeciclobutanosdapirimidina,fotoprodutos6‐4evários

outrostiposdeadutosdebases.Aatividade nucleotídicadaexcinucleaseABCénova

nosentidodequedoiscortessãofeitosnoDNA(Figura7).Otermo“excinuclease”é

destinado para distinguir esta atividade daquela das endonucleases padrão

(Lehningeretal.,1995).

 ReparoDireto–váriostiposdelesõessãoreparadassemaremoçãodabaseoudo

nucleotídeo. O exemplo melhor caracterizado é a fotorreativação do dímero

ciclobutanodapirimidina,umareaçãopromovidapelaDNAfotoliase.Osdímerosde

pirimidina resultam de uma reação induzida pela luz e a fotoliase usa a energia

derivadadaluzabsorvidaparareverterestalesão.Asfotoliasesgeralmentecontêm

dois cofatores que servem como agentes absorvedores da luz, ou cromóforos. Um

doscromóforosésempreoFADH

.OoutroéumfolatonaE.colienalevedura.Um

outroexemploéoreparodaO

‐metilguanina,queseformanapresençadeagentes

alquilanteseéumalesãoaltamentemutagênicaecomum.Elatendeaparearcoma

timinaaoinvésdacitosinaduranteareplicaçãoe,portanto,causamutaçõesGCem

AT. O reparo direto da O

‐metilguanina é realizado pela O

‐metilguanina DNA

metiltransferase,quecatalisa atransferênciado grupometila daO

‐metilguaninaa

um resíduo específico de Cys na mesma proteína. Esta metiltransferase não é

estritamente uma enzima, porque um único evento de transferência de metila

inativa a proteína. O consumo de uma molécula protéica inteira para corrigir uma

únicabaselesadaéumaoutrailustraçãovivadaimportânciacentraldamanutenção

daintegridadecelulardoDNA(Lehningeretal.,1995).

Todas as espécies controlam geneticamente a taxa de suas mutações pelos vários

processosdereparodoDNA(Erdtmann,2003)queestápresenteemtodasascélulas,visto

que a manutenção da integridade da  informação contida no DNA tem importância vital

(Lehninger,1998;Eyfjord&Bodvarsdottir,2005).Assim,torna‐seclaroqueadeficiênciade

reparo leva a uma variedade de doenças e suscetibilidade ao câncer (Griffiths, 1998). São

conhecidasousetêmsuspeitasdeváriasdoençasgenéticashumanasqueenvolvemdefeitos

de reparo, como câncer, ataxia telangiectasia, xeroderma pigmentoso, aterosclerose,

doenças neurodegenerativas, entre outros (Breivik & Gaudernack, 2004; Li et al., 2001,

Griffiths,1998).

 



Figura7.ViasBEReNER,dereparodeDNA(Nolletal.,2006).



1.6.1.FunçõesSOS



AslesõesproduzidasnoDNA bacterianoporagentesquímicosoufísicossãocapazes

de desencadear diversas respostas celulares, englobadas genericamente sob a  designação

de funções SOS. Assim, a avaliação da amplitude de expressão destas respostas permite,

com adequados níveis de precisão e de sensibilidade, a determinação da atividade

genotóxicadoagente(AlcântaraGomes,1991).

Atualmentejá são conhecidas, em bactérias,especialmente em E. coli, cerca de 20

diferentesmanifestações,entreasquaisdevemsercitadas(AlcântaraGomes,1991):

 a mutagênese resultante da atuação de mecanismos infiéis de reparo do DNA,

responsável pela maior parte dos eventos que conduzem a modificações do

conteúdoinformacionaldocromossomo;

 afilamentaçãobacteriana;

 ainduçãodoprofagoembactériaslisogênicas(AlcântaraGomes,1991).

Todosestes processostêmemcomumofatodeseremcausadospeladesrepressão

de certos genes bacterianos devido à clivagem dos respectivos repressores por uma

protease,queéativadaporsinaisintra‐celularesdesencadeados,entreoutrosfatores,pela

produçãodelesõesnoDNA(AlcântaraGomes,1991).

A maior parte das respostas para danos no DNA em E. coli são controlados pelo

sistemaregulatórioSOS.Quandoocromossomobacterianoforextensamentelesadoocorre

aindução da expressãode maisde 40genes destesistema (Friedberget al., 2005),sendo

que os elementos reguladores‐chave, são um repressor, chamado de repressor LexA, e a

proteínaRecA(Lehningeretal.,1995).OaumentodaexpressãodestesgenesSOSresultana

elaboraçãodeumconjuntoderespostasfisiológicasquetemsidodenominadoderespostas

SOS(Friedbergetal.,2005).

OrepressorLexAregulaatranscriçãodetodososgenesSOS.Ainduçãodaresposta

SOS envolve a remoção do repressor LexA e a inativação por autoclivagem em dois

fragmentos protéicos. A clivagem ocorre numa ligação peptídica Ala‐Gly que divide a

proteína em dois fragmentos aproximadamente iguais. Por si só, o repressor LexA sofre

autoclivagem apenas em pH elevado. Em pH neutro, a reação de autodigestão requer a

proteína RecA e esta atividade RecA é algumas vezes chamada de atividade co‐protease

(Lehningeretal.,1995).

 É a proteína RecA que fornece a ligação entre o sinal biológico (lesão do DNA) e a

indução das funções SOS. A proteína RecA facilita a clivagem do repressor LexA apenas

quandoaRecAestiverligadaaumafitasimplesdeDNA(RecA‐ssDNA).Lesõesextensasdo

DNA levam a numerosas lacunas da fita simples no DNA e estas lacunas fornecem o sinal

molecular que ativa a proteína RecA, levando à clivagem da proteína repressora LexA e à

induçãodasfunçõesSOS(Lehningeretal.,1995;Friedbergetal.,2005).

O mecanismomolecular que regula o sistema SOS está esquematizadona figura 8.

EmcélulasdeE.colinormais(estadonãoinduzido),oprodutodogenelexA

agecomoum

repressordemaisde40genespelaligaçãocomumhomodimériconasequênciaoperacional

similar para cada gene ou operon (Figura  8). A sequência do operador ligada  na proteína

LexAsãocomumentereferidoscomoSOSboxes(Friedbergetal.,2005).

 QuandoogenomadecélulasdeE.coliédanificadoouareplicaçãonormaldoDNAé

interrompida,umsinalintracelularparainduçãodasfunçõesSOSéativado(Friedbergetal.,

2005). Este sinal intracelular ativa a proteína RecA que se transforma em RecA ativada

promovendoaauto‐clivagemdoprodutodogenelexA(etambémaclivagemdorepressorCI

de bacteriófagos), permitindo a desrepressão dos genes que estavam sob o seu controle.

Quando o sinal indutor cessa, a proteína LexA não é mais clivada, voltando a reprimir

novamenteaexpressãodaquelesgenes(Aksenov,1999;Lewin,2001).

Durante a indução da resposta SOS, a prote ína RecA também cliva e, portanto,

inativaosrepressoresquepermitemqueobacteriófagoλevírusbacterianosrelacionados

sejam propagados num estado dormente (lisogênico) dentro de uma bactéria hospedeira.

Estesrepressoresaparentementedesenvolveram‐separamimetizarorepressorLexAe eles

também são clivados em ligações peptídicas específicas Ala‐Gly. Isto leva à replicação do

víruseàlisedacélulaparaliberarasnovaspartículasvirais,permitindoqueobacteriófago

façaumasaídaapressadadeumacélulabacterianaqueestejaemperigo(Lehningeretal.,

1995).

 Assimcomoacélulacomeçaaserecuperarapartirdosinaldeinduçãodasfunções

SOS,aregiãossDNAdesapareceemconseqüênciadeváriosreparosdeDNAeaquantidade

de proteína RecA presente nos filamentos RecA‐ssDNA diminui. A  síntese contínua da

proteínaLexAexistentelevaaumaumentodopooldeLexA,noqual,nofinaldoprocesso,

leva a desrepressão dos genes SOS e o retorno para o estado não induzido (Figura 8)

(Friedbergetal.,2005).

 Dessaforma,emboratodasasfunçõesSOSsejam,provavelmente,induzidasporum

mecanismocomum,elasnãosedesreprimemsimultaneamente.Essasdiferençasnacinética

dedesrepressãotalvezpossamserexplicadaspordiferentesgrausdeafinidadedorepressor

aooperadoraoqualelesefixa(Leitão&AlcântaraGomes,1994).AsrespostasSOSincluem

arecombinaçãogenética(recAouruvAB),reparoporexcisão(uvrA,uvrB),inibiçãodadivisão

celular (sulA(sfiA)) e a reparação mutagênica (umuDC) (Leitão & Alcântara Gomes, 1994;

Lewin,2001).

Logo,aavaliaçãodaamplitudedeexpressãodasfunçõesSOSconstituiumexcelente

indicador da ocorrência de danos no DNA, isto é, permite caracterizar a atividade

mutagênica ou potencialmente oncogênica de um determinado agente físico ou químico

(AlcântaraGomes,1991).



Figura8.CircuitoregulatóriodosgeneslexAerecA,envolvidosnasFunçõesSOS.Orepressor

CIdebacteriófagos também é clivadoporRecA ativada, permitindo queosgenes do ciclo

líticodofagosejamexpressos.AdaptadodeLewin,2001.



1.7.Antimutagenicidade/Antigenotoxicidade



A antimutagênese trata de um processo genético normal, cuja função é manter a

estabilidade da estrutura hereditária. Este fenômeno, considerado uma variedade do

processo mutagênico, se manifesta na redução da freqüência de injúrias genéticas

implementado por um sistema multicompetente de antimutágenos endógenos que são

ativados a níveis moleculares, celulares ou do organismo (Goncharova, 1993). Portanto,

assimcomoadetecçãoeidentificaçãodemutágenoséumatarefaessencial,éigualmente

importante a detecção e identificação de antimutágenos, uma vez que podem oferecer

grandesvantagens paraa medicinae saúde pública,na prevençãodemutações somáticas

ougerminativasedasdoençasaelasrelacionadas(Barraietal.,1992;Karekaretal.,2000).

O termo agente “antimutagênico” foi usado originalmente por Novick e Szilard em

1952 para descrever os agentes que reduzem a freqüência de mutação espontânea ou

induzida,independentedomecanismoenvolvido(VonBorsteletal.,1996).Osestudoscom

osagentesantimutagênicosforaminiciadosnosanoscinqüenta,porémrecentementeéque

o interesse de diversos grupos de pesquisa, distribuídos por todo o mundo, têm se

concentrado na identificação de agentes antimutagênicos, principalmente os de origem

natural (Wargovich, 1997). Pois, as plantas contêm uma grande variedade de metabólitos

secundários, os quais desempenham funções importantes, tanto para a própria planta

quantoparaoorganismoqueaingere.Umadasfunçõesdestesmetabólitoséacapturade

radicais livres e a proteção contra o excesso de oxidação causado por irradiação UV,

oxidantes químicos ou o ataque de patógenos ou outros tipos de stress. Muitos destas

substânciastêmsidoisoladasapartirdeplantasqueestãosendointensivamenteestudadas

por suas propriedades medicinais (Matkowski & Wolniak, 2005). Uma vez que muitos

compostosantimutagênicosencontradosnasplantasetambémnosalimentossãoagentes

antioxidanteseatuamseqüestrandoosradicaislivresdeoxigênio(Antunes&Araújo,2000).

Os mecanismos de ação dos agentes antimutagênicos foram  classificados em dois

processosmaiores,denominadosdesmutagêneseebioantimutagênese.Nadesmutagênese,

os agentes protetores, ou antimutagênicos, atuam diretamente sobre os compostos que

induzemmutaçõesnoDNA,inativando‐osquímicaouenzimaticamente,inibindoaativação

metabólica de pró‐mutagênicos ou seqüestrando moléculas reativas. Na bio‐

antimutagênese, os antimutagênicos atuam sobre o processo que leva a indução de

mutações, ou no reparo das lesões causadas no DNA (Kada et al., 1978). Posteriormente,

uma outra classificação mais detalhada foi sugerida, considerando o modo de ação dos

antimutagênicos e/ou anticarcinogênicos, bem como o ambiente de ação, extra ou

intracelular(DeFlora&Ramel,1988).

O potencial antimutagênico de uma substância pode ser avaliado em sistemas

biológicos diversos, os mesmos empregados para o estudo e identificação dos agentes

mutagênicos. Os sistemas celulares de mamíferos, utilizados para a avaliação da

mutagenicidadee/ouantimutagenicidade,abrangemtantoostestesinvitro quantotestesin

vivo(Antunes&Araújo,2000).

Emqualquer umdesses sistemas‐teste,otratamentocom osagentes mutagênicos,

queinduzemasmutações,ecomoantimutagênico,poderáinibiroaparecimentodelesões

noDNA(Antunes&Araújo,2000).Assimédegrande importânciaoestudodeplantasque

apresentam propriedades medicinais, com o objetivo de avaliar as suas possíveis

propriedadesantigenotóxicas e/ou antimutagênicas,visto que atualmente,um dosfatores

maisimportantesnalongevidadehumanaéaprevençãoe/oucontroledetumores(Rhee&

Park,2001).



1.8.TestedeInduçãodoprofagoλ–Induteste



Patrice Moreau et al., (1976) desenvolveram o Teste de Indução do profagoλ

(lambda) – Induteste, baseando‐se no princípio da indução lisogênica que pode ser

consideradocomoumindicadorda produçãodelesõesnoDNAedainibiçãodareplicação

semi‐conservativa.Estetestefundamenta‐senaavaliaçãoquantitativadeumadasfunções

SOSqueéaautoclivagemdaproteínaCI,repressoradoprofagoλ,mediadapelaco‐protease

RecA(Little,1991).

 Obacteriófagoλéumfagotemperado,significandoqueainfecçãocomofagonem

sempreresultanadestruiçãodacélulahospedeira.ODNAdofagoinvasortemdoisdestinos

possíveis: a reprodução que leva à geração de novas partículas virais e à lise da célula,

denominadadeciclolítico(Lehninger,1995);oupormeiodeumciclolisogênico,noqualo

genomaviralestápresente emumabactériaemformalatente,conhecidacomoprofago.O

profagoestáintegradoaogenomabacterianoeéherdadodeformasemelhanteaosgenes

dacélulahospedeira(Figura9)(Lewin,2001).

 Neste estado, o profago não se expressa por estar reprimido por um repressor CI,

também chamado de repressor doλ. Este repressor impede a transcrição de genes

essenciais ao ciclo lítico do bacteriófago, ou seja, a duplicação viral independente do

cromossomo bacteriano. A indução lisogênica implica na desestabilização desse sistema,

quando orepressor CIé clivado e osgenes que coordenam aentrada do profagono ciclo

lítico passam a ser expressos (Bakk & Metzler, 2004; Roberts & Devoret, 1983; Lehninger,

1995).

 OrepressorCIpossuicertahomologiacomorepressorLexA(quereprimeosgenes

envolvidos narepostaSOS), na regiãopróximaao resíduos quecorrespondem aosítio de

clivagem;destaforma,aproteínaRecAativadaécapazdepromovertantoaautoclivagem

deLexAquantodorepressorCI(Little,1991;Myles&Sancar,1989;Walker,1985).Quando

CI é clivado, oprofago passa a sintetizar  as proteínas relacionadas ao ciclo lítico, que irão

culminar com a lise bacteriana e a liberação de partículas virais (Figura 9) (Roberts &

Devoret,1983).

 OIndutesteutilizabasicamenteduascepasbacterianasdeE. coli:acepaindicadora

RJF013eacepalisogênica,WP2s(λ).Comestetesteépossívelavaliaraaçãogenotóxicade

umasubstânciaisoladaoumisturacomplexa,umavezqueainduçãolisogênicadoprofagoλ

e a formação de plaques refletem o nível de transformação da proteína RecA em RecA

ativada,queéinduzidapelapresençadelesõesnoDNA.



Figura9.Ciclolíticoeciclolisogênico(Lewin,2001).



1.9.TestedoMicronúcleoemmedulaósseaderoedoresinvivo



O Teste do Micronúcleo em medula óssea de roedores in vivo é um teste

amplamenteutilizadoparadetecçãode agentesclastogênicos(quequebramcromossomos),

edeagentesaneugênicos(queinduzemaneuploidiaousegregaçãocromossômicaanormal)

(MacGregoretal.,1987;Hayashietal.,1994),sendointernacionalmenteaceitocomoparte

da bateria de testes recomendada para a avaliação do potencial mutagênico e para o

registrodenovosprodutosquímicosqueentramnomercadomundial (Ribeiro,2003).Este

teste foi inicialmente desenvolvido em eritrócitos de medula óssea de camundongos

(Schmid,1976),maspodesertambémrealizadoemratos(Georgeetal.,1990).

OprocedimentooriginalparaoTestedoMicronúcleofoidesenvolvidoporSchmide

colaboradores (Matter & Schmid, 1971; Schmid et al.,1971; Nichols et al., 1972; Schmid,

1973) e, subsequentemente, modificado por Heddle e colaboradores (Heddle, 1973;

Salamoneetal.,1980;Heddle&Salamone,1981),quetambémestabeleceramaorigemdo

micronúcleo(Carrano&Heddle,1973;Heddle&Carrano,1977).

Estetestepodeserexecutadopraticamenteem qualquerpopulaçãodecélulasque

estejamconstantementeemdivisão,sendoamedulaósseademamíferosumadasregiões

maisadequadas,vistoquesuascélulaslevamde22a24horasparacompletarumciclode

divisão (Heddle, 1973). Os eritroblastos, na medula óssea, sofrem duplicação e se

diferenciamemeritrócitospolicromáticos(Figura10e11)(Ribeiro,2003).

Os micronúcleos (MN) aparecem nas células filhas, em decorrência de danos

induzidosnas célulasparentais(Ribeiro,2003).Os doisfenômenos básicosqueacarretam

naformaçãodoMNemcélulasmitóticassãoaquebracromossômicaeanão‐disjunçãono

aparato mitótico. MN são formados de fragmentos cromossômicos acêntricos ou

cromatídicos e cromossomos inteiros ou cromátides que se atrasaram na anáfase e não

foramincluídosnonúcleodacélula‐filhanatelófase(Figura12)(Fordetal.,1988;Lindholm

etal.,1991;FordeCorell,1992;Catalánetal.,2000;Falcketal.,2002).AformaçãodeMN

emcélulasemdivisãoresultadequebrascromossômicasdevidoaonãoreparoouperdade

reparo de lesões no DNA, ou a má‐segregação devido a uma não‐disjunção no aparato

mitótico. Esses eventos podem ser induzidos por estresse oxidativo, exposição a agentes

clastogênicosouaneugênicos,defeitosgenéticosnosgenesdereparoe/oudecontroledo

ciclo celular, bem como a uma deficiência nos nutrientes requeridos como cofatores no

metabolismo do DNA e na maquinaria de segregação cromossômica (Kimura et al., 2004,

Umegaki&Fenech,2000;Rajagopalanetal.,2004;MacGregor,2005;Fenechetal.,2005).

Todos esses eventos que causam a formação do MN como rearranjos cromossômicos,

expressão gênica alterada, ou aneuploidia são efeitos associados com a instabilidade

cromossômica geralmente observada no câncer (Rajagopalan et al., 2004; Fenech, 2002;

Ames&Wakimoto,2002).

Quandooseritroblastosexpelemseunúcleo,aosetransformarememeritrócitos,os

micronúcleos permanecem no citoplasma onde são facilmente reconhecíveis (Figura 12)

(Rabelo‐Gay,1991).

Os MN são analisados em eritrócitos policromáticos  (EPC, eritrócitos jovens) de

medula óssea de camundongos ou ratos (Ribeiro, 2003). Durante um período de 10 a 24

horas, os eritrócitos jovens são policromáticos (RNA‐positivos), isto é coram‐se em azul e

não em vermelho, para coloração Giemsa convencional. Se contarmos os micronúcleos

apenas nesse tipo de célula, saberemos que eles se formaram na mitose anterior, na

presença do agente mutagênico. Como o período entre a última divisão e a formação do

eritrócito policromático (EPC) é de 8 a 12 horas, é óbvio que só se vai encontrar

micronúcleos induzidos pelo agente cerca de 10 horas após o tratamento. Além disso, o

intervalo mínimo dentro do qual os micronúcleos podem ser detectados  corresponde à

duraçãodoestágiodepolicromático,entre10a24horas(Rabelo‐Gay,1991).

Amorfologiadosoutrostiposdecéluladamedulanãopermite dizerseelasestavam

mitoticamenteativasduranteoperíododoexperimento.Os micronúcleossãotipicamente

arredondados,comdiâmetrode1/20a1/5dodiâmetrodoeritrócito.Ataxaespontâneade

eritrócitos policromáticos com micr onúcleo é baixa e consistente, cerca de 3 por 1000

(Rabelo‐Gay,1991).

Alternativamente, em camundongo, os MN podem ser analisados em eritrócitos

normocromáticoscirculantes(ENC,eritrócitosmaduros),umavezque,aocontráriodobaço

de rato e do homem, o baço de camundongo não remove (seqüestra) do sangue os

eritrócitoscontendomicronúcleos(Ribeiro,2003).

OTeste doMNtem sidolargamente utilizadonaavaliação dopotencialgenotóxico

deagentesfísicosequímicos(Maffeietal.,2002;Chungetal.,2002;Dingetal.,2003),no

biomonitoramento de populações humanas ocupacionalmente expostas a agentes

mutagênicos(Machado‐Santellietal.,1994;Majeretal.,2001;Laffonetal.,2002;Bolognesi

etal.,2004)napesquisadecompostosinibidoresdecarcinogênese(Royetal.,2003;Izzotti

etal.,2001)eemestudosecotoxicológicos(Gauthieretal.,1999;Lorenteetal.,2002).

Os resultados positivos obtidos com o Teste do Micronúcleo fornecem fortes

evidências de genotoxicidade sistêmica da substância química avaliada. Sob condições

experimentaisapropriadas(istoé,quandoocorreexposiçãodamedulaóssea),osresultados

negativospodemindicarqueaconclusãodequeasubstânciateste nãoégenotóxicainvivo

(Ribeiro,2003).



Figura10.Resumodoprocessodematuraçãodascélulasdalinhagemeritrocitária(Ribeiro,

2003).



Figura11.ConcentraçãodeRNAduranteamaturaçãodoeritrócito(Ribeiro,2003).



Figura12.Formaçãodemicronúcleosemeritrócitosdemedulaóssea(Ribeiro,2003).



2. OBJETIVOS

2.1.ObjetivoGeral



 Analisar o extrato de Duguetia furfuracea pelo teste do micronúcleo em medula

óssea de camundongos e pelo teste de indução do profagoλ(Induteste SOS), em

relaçãoàssuaspossíveisatividadesgenotóxicaeantigenotóxica.



2.2.ObjetivosEspecíficos



 Determinarapossívelatividadegenotóxicaeantigenotóxicadoextratoliofilizadode

folhasdeDuguetiafurfuraceapelotestedeinduçãodoprofagoλ(IndutesteSOS).



 Determinar a possível atividade mutagênica e antimutagênica do extrato liofilizado

de folhas de Duguetia furfuracea pelo teste do micronúcleo em medula óssea de

camundongosinvivo.

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

CapítuloI

___________________________________________________________________________



AVALIAÇÃODASATIVIDADESGENÓTOXICAEANTIGENOTÓXICADE

DUGUETIAFURFURACEAPELOTESTEDEINDUÇÃODOPROFAGOλ

(INDUTESTESOS)



CAROLINARIBEIROESILVA



UniversidadeFederaldeGoiás

InstitutodeCiênciasBiológicas

DepartamentodeBiologiaGeral

LaboratóriodeRadiobiologiadeMicrorganismoseMutagênese



AVALIAÇÃODASATIVIDADESGENÓTOXICAEANTIGENOTÓXICADE

DUGUETIAFURFURACEAPELOTESTEDEINDUÇÃODOPROFAGOλ

(INDUTESTESOS)



SILVA,C.R.

;CHEN‐CHEN,L.



[email protected];

[email protected]

LaboratóriodeRadiobiolo gia deMicrorganismoseMutagênese/ICB/UFG_CampusII,

74001‐970,Goiânia‐GO



RESUMO



A planta, Duguetia furfuracea (St. Hil.) Benth e Hook. F. (1862), pertence à  família

Annonaceae,éconhecidapopularmentecomosofre‐do‐rim‐quem‐quer,araticum‐seco,ata‐

do‐mato,marolinho,araticum‐do‐campo,araticum‐do‐cerrado,atabravaeatadelobo.Esta

plantaocorreemváriosestadosbrasileiros,comoAmazonas,Bahia,DistritoFederal,Goiás,

Minas Gerais, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul e São Paulo. São descritos na literatura

diversas aplicações de D. furfuracea na medicina popular: o chá de suas folhas é indicado

para combater dismenorréia, metrorragia, diarréia e reumatismo; o chá da raiz é usado

como calmante,anti ‐reumático,  para cólicas renais e dores de coluna e de estômago e as

sementes são utilizadas contra pediculose. Estudos anteriores têm descrito a atividade

terapêuticadaplantacomaçãotripanomicida,antiprotozoáricaeantiplasmódica.Oobjetivo

dopresentetrabalhofoiavaliarasatividadesgenotóxica,antigenotóxicaetóxicadoextrato

liofilizado de folhas de D. furfuracea pelo teste de indução do profagoλ– Induteste. O

procedimentoexperimentalfoirealizadodeacordocomMoreauetal.,(1976),utilizandoas

cepasdeE.coliWP2s(λ)eRJF013.Paraaavaliaçãodasatividadesgenotóxicaetóxicaforam

empregadas as doses de 1 mg, 2 mg, 5 mg e 10 mg, enquanto que na avaliação da ação

antigenotóxicaforam testadas asdosesde 0,5mg, 1mg, 2 mg,5 mg e10 mgco‐tratadas

com 0,5 µg de MMC. Os resultados mostraram ação tóxica sem, contudo, apresentar

atividadegenotóxica.Poroutrolado,foiobservadaaçãoantigenotóxica.

PALAVRAS‐CHAVE: Duguetia furfuracea, toxicidade, antigenotoxicidade, E. coli,

IndutesteSOS.



ASSESSMENTOFTHEGENOTOXICANDANTIGENOTOXICACTIVITIESOF

DUGUETIAFURFURACEAbyLYSOGENICINDUCTIONTEST(INDUCTEST)



SILVA,C.R.

;CHEN‐CHEN,L.



[email protected];

[email protected]

LaboratóriodeRadiobiolo gia deMicrorganismoseMutagênese/ICB/UFG_CampusII,

74001‐970,Goiânia‐GO



ABSTRACT



TheplantDuguetiafurfuracea(St.Hil.)BentheHook.F.(1862),belongstothefamily

Annonaceae, is popularly known as sofre‐do‐rim‐quem‐quer, araticum‐seco, ata‐do‐mato,

marolinho, araticum‐do‐campo, araticum‐do‐cerrado, ata brava e ata de lobo. This plant

occurres in several Brazilian states, as Amazonas, Bahia, Distrito Federal, Goiás, Minas

Gerais,MatoGrosso,MatoGrossodoSuleSãoPaulo.SeveralapplicationsofD.furfuracea

are described in folk medicine: the tea of their leaves is used to combat dysmenorrhea,

metrorrhagia,diarrheaandrheumatism,theteaoftherootisutilizedasatranquilizer,anti‐

rheumaticfor renalcolic painsinthe  columnand stomachandthe seedsare usedagainst

pediculosis.Previousstudieshaveshownterapeuticactivityofthisplantwithtrypanocidal,

antiplasmodialandantiprotozoalactivity.Inthepresentwork,thegenotoxic,antigenotoxic

and cytotoxic activities of lyophilized leaf extract of D. furfuracea were evaluated by the

lysogenicinduction test(Inductest). Theexperimental procedurewasperformed according

Moreauetal.,(1976)usingE.coliWP2s(λ)andRJF013strains.Toevaluatethegenotoxicand

toxicactivities,thedosesemployedwere1mg,2mg,5mge10mg,whiletoevaluatethe

antigenotoxicactionthedoseswereof0,5mg,1mg,2mg,5mge10mgco‐treatedwith0,5

µgdeMMC. Theresultsshowedtoxic action,however,itdidn’tshowgenotoxiceffects.In

theotherhand,itwasobservedantigenotoxicaction.



KEYWORDS:Duguetiafurfuracea,toxicity,antigenotoxicity,E.coli,InductestSOS.



1.INTRODUÇÃO



Desde os tempos mais antigos, os produtos naturais, particularmente aqueles

origináriosdeplantas,têmsidoumaimportantefontedeagentesterapêuticos.Cercade25

a 30% de todas as drogas disponíveis na terapêutica são derivados de produtos naturais

(plantas, microorganismos e animais) (Vicentini et al., 2001; Teixeira et al., 2003; Calixto,

2005). As plantas medicinais são utilizadas mundialmente para o tratamento de doenças

(Bagatiniet al.,2007),entretanto,poucainformaçãoencontra‐sedisponívelsobreosriscos

queoferecemàsaúdehumana(Leiteetal.,2006).Jáseconhecenaliteratura,queoscháse

infusõesde plantas medicinaispodem contersubstâncias tóxicascom efeitosmutagênicos

(Vicentinietal.,2001;Erdtmann,2003;Bagatinietal.,2007).Poroutrolado,oconsumode

chás pode suprimir os efeitos de agentes mutagênicos que estejam atuando sobre o

organismohumano(Silvaetal.,2004).Dessaforma,éextremamenteimportantequetestes

queavaliamagenotoxicidadedepreparaçõesvegetaissejamrealizadosafimdeavaliarseu

potencial mutagênico (Waters et al., 1999). Os ensaios de detecção com a utilização de

microorganismos têm como finalidade principal avaliar compostos  químicos que são

potencialmente capazes de induzir processos carcinogênicos, avaliando, dessa maneira, a

atividademutagênicaetambémomododeaçãodeagentesgenotóxicos.Oconhecimento

destes mecanismos de interação com o DNA fornecem informações sobre a natureza da

alteração primáriaenvolvida, o tipo de mutação preferencialmente induzida e a influência

deprocessosdereparaçãonaatividadegenotóxica(Friedberg,1995;Hofnung&Quillardet,

1986).

A planta Duguetia furfuracea (St. Hil.) Benth e Hook. F. (1862), pertence à família

Annonaceae, e é conhecida popularmente como “sofre‐do‐rim‐quem‐quer”, araticum‐seco

(Rodrigues & Carvalho, 2001), “ata‐do‐mato” (Guarim Neto & Morais, 2003), marolinho,

araticum‐do‐campo,araticum‐do‐cerrado,atabravaeatadelobo(Toledoetal.,2006).Esta

plantaocorreemváriosestadosbrasileiros,comoAmazonas,Bahia,DistritoFederal,Goiás,

Minas Gerais, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul e São Paulo (Proença et al., 2000). São

descritos na literatura diversas aplicações de D. furfuracea na medicina popular: suas

sementes, raízes, cascas, folhas e frutos são utilizados para combater dismenorréia,

metrorragia,diarréia,reumatismoetambémutilizadacomocalmante,paradoresnosrinse

de coluna (Sangali, 2000; Pott & Pott, 1994; Silva, 1998; Gottsberge, 1987; Rodrigues &

Carvalho,2001;Carolloetal.,2006a;Gavilanes&Brandão,1998).

Toledoetal.,2006avaliaramaaçãofitotóxicadoextratoaquosoaquenteeafriodas

partesaéreasdeD.furfuraceaemratasprenhesemostraramatoxicidadeemembriõesde

ratos.

Estudo fitoquímico realizado por Carollo et al., (2006a), das partes aéreas de D.

furfuracearesultounoisolamentoecaracterizaçãodealcalóideseflavonóides.Estasfrações

apresentaramatividadestripanomicida,antiplasmódicaeantiprotozoárica.

Assim, considerando a grande utilização da planta D. furfuracea pela população e

pela descrição de várias atividades terapêuticas encontradas na literatura, o presente

trabalhotevecomoobjetivoavaliaropotencialgenotóxicoeantigenotóxiodeD.furfuracea,

embactérias pelo teste deindução do profagoλ‐IndutesteSOS (Moreau et al., 1976). O

induteste SOS fundamenta‐se na avaliação quantitativa de uma das funções SOS, que é a

autoclivagemdorepressordoprofagoλmediadapelacoproteaseRecA(Little,1991).Certos

profagosficamnormalmentemantidosemestadodelatênciaembactériaslisogênicaseque

podemserinduzidosasedesenvolveremdemaneiraautônoma,quandooDNAdascélulas

queosabrigamélesadoouasuareplicaçãoébloqueada(Moreauetal.,1976).Jáseconhece

naliteraturaqueosagentesgenotóxicospodempromoverainduçãodasfunçõesSOS,entre

asquais,a indução do profagoλ. Assim, monitorando esta função,pode‐se avaliar a ação

genotóxicadeumcompostoemestudo.



2.MATERIALEMÉTODOS



A)Planta,Duguetiafurfuracea(St.Hil.)BentheHook.f.



OextratodaplantamedicinalDuguetiafurfuraceafoiobtidoapartirdasfolhas,que

foramcoletadasnoBairroItanhangánomunicípiodeGoiâniaeidentificadapeloprofessor

Heleno Dias Ferreira. As folhas foram submetidas à secagem, trituração e em seguida foi

preparadapormétododeinfusão.Oinfusofoisubmetidoaoprocessodeliofilização.Uma

exsicatafoidepositadanoHerbáriodaUFG,sobonúmero29.975.



B)CepasBacterianas



As cepas bacterianas que foram utilizadas no presente trabalho são as seguintes:

WP2s(λ)(cepalisogênica),RJF013(cepaindicadora),derivadasdeE.coliK‐12(Tabela1).



Tabela1.Principaiscaracterísticasdascepasbacterianasutilizadas.



Designação Genótiporelevante Outrascaracterísticas

RJF013 Amp

 uvrD3,trpE

WP2s(λ) uvrA trpE



C)MeiosdeCultura,ReagentesQuímicoseSoluções



MeioLB

Triptona(Difco)............................................................ 10g

ExtratodeLevedura(Difco)......................................... 5g

CloretodeSódio‐NaCl(Vetec)................................... 10g

Águadestiladaestéril................................................... 1000mL

Ágar(Difco)..................................................................  15g



MeioLB

(1/2)(malt/amp)



Triptona(Difco)............................................................. 5g

ExtratodeLevedura(Difco).......................................... 2,5g

CloretodeSódio–NaCl(Vetec).................................... 10g

Águadestiladaestéril.................................................... 990mL

Ágar(Difco)................................................................... 15g

Maltose(20%)(Merck)................................................. 10mL

Ampicilina.....................................................................0,02mg/mL



TopÁgar

Cloretodesódio–NaCl(Vetec).................................... 5g

Ágar(Difco)................................................................... 6g 

Águadestilada............................................................... 1000mL



TampãoM9

HPO

(Vetec).......................................................... 3g

(CinéticaQuímica).......................................... 1,5g

Cl(Synth).................................................................  0,5g

NaCl(Vetec)............................... ................................... 0,25g

Águadestiladaestéril.................................................. 500mL

CaCl

(0,1M)(Vetec)..................................................... 2,5mL

MgSO

(1M)(Synth)...................................................... 2,5mL



MitomicinaC(MMC)

MMC(Sigma)................................................................ 0,5µg

Águadestiladaestéril................................................... 5,0µL



2.1.ProcedimentoExperimental



2.1.1.Induteste



O procedimento experimental quantitativo para avaliação da atividade genotóxica

e/ou antigenotóxica, baseado nos trabalhos de Moreau et al., (1976), foi realizado da

seguinte maneira: a cepa lisogênica WP2s(λ) em fase exponencial de crescimento, foi

centrifugadaa5.000rpmpor15minutoseressuspensaemigualvolumeemtampãosulfato

de magnésio(M9). Para a avaliação da atividade genotóxica, amostras de 1 mLda cultura

foram incubadas nas doses de 1 mg; 2 mg; 5 mg e 10 mg do extrato de D. furfuracea,

enquantoquenaavaliaçãodaatividadeantigenotóxicafoiadicionadaumadoseúnica(0,5

µg)demitomicinaC(MMC)juntamentecomasdosesde0,5mg;1mg;2mg;5mge10mg

do extratoda  planta em estudo. As culturas foram incubadaspor 25minutosa  37ºC com

agitaçãoeaeraçãoconstantes.Apósincubação,foramdiluídasemtampãoM9e0,1mLda

bactérialisogênicafoiadicionadaa0,3mLdaculturaRJF013(bactériaindicadora),seguindo‐

seoacréscimode2,5mLdetop‐ágar.OconjuntofoivertidosobreplacasLB

(1/2)(malt/amp)

,em

duplicatas, as quais foram incubadas em estufa a 37ºC por 24 horas. Foram também

incluídoscontroles:positivo(MMC)enegativo(H

Odestiladaestéril).Decorridas24horas,

oscentros infecciosos foramcomputados e osresultados expressospelo Fator deIndução

em função da concentração de D. furfuracea. O Fator de Indução (FI) é calculado pelo

númerodeplaquesnaplacateste(F)sobreonúmerodeplaques naplacacontrolenegativo

).Paraanálisedaatividadeantigenotóxica,oFatordeIndução(FI)édadopelonúmerode

plaquesnaplacateste(F)sobreonúmerodeplaquesnaplacacontrolepositivo(F

).

ParaelucidarainativaçãocelularemfunçãodadosedeD.furfuraceaparalelamente

foifeitaumacurvadesobrevivência.Paraaavaliaçãodaatividadetóxica,culturasdeE.coli

WP2s(λ)emfaseexponencialdecrescimentoforamcentrifugadas,ressuspensasemtampão

M9 e incubadas nas doses de 1 mg; 2 mg; 5 mg e 10 mg do extrato de D. furfuracea,

enquantoquenaavaliaçãodaatividadeanticitotóxicafoiadicionadaumadoseúnica(0,5µg)

deMMCjuntamentecomasdosesde0,5mg;1mg;2mg;5mge10mgdoextratodaplanta

em estudo. As culturas foram incubadas por 25 minutos a 37ºC com agitação e aeração

constantes.DiluídasemtampãoM9,foramsemeadasemplacascommeioLB.Após24horas

de incubação na estufa a 37ºC,procedeu‐se a contagem de colônias. Os resultados foram

expressos pela Fração de Sobrevivência (S) que é dada pelo número de colônias na placa

teste(N) sobreonúmerodecolôniasnaplacacontrolenegativo(N

)emfunçãodadosede

D. furfuracea. Paraverificaro perfilde inativaçãobacteriana provocadapeloextratode D.

furfuraceaco‐tratadocomMMC,aFraçãodeSobrevivência(S)foicalculadapelonúmerode

colôniasnaplacateste(N)sobreonúmerodecolôniasnaplacacontrolepositivo(N

).



3.RESULTADOS



Osresultados obtidosnaavaliação datoxicidadee genotoxicidadedo extratodeD.

furfuraceapodemserobservadosnaTabela2enasfiguras1e2.



Tabela 2. Valores da média e desvio padrão do número de sobreviventes e plaques

formados, Fração de Sobrevivência (S) e Fator de Indução (FI) em função das doses do

extratodeDuguetiafurfuracea.



Tratamento

⎯x±s

(sobrevivência)



⎯

x±s

(indução)



S FI

Controlenegativo* 1,96x10

±0,85x10

 4,13x10

±1,47x10

 1,00 1,00

1mgED 2,34x10

±1,23x10

 9,7x10

±4,3x10

 1,19 2,34

2mgED 1,64x10

±0,99x10

 3,48x10

±1,39x10

 0,83 0,84

5mgED 1,01x10

±0,31x10

 4,47x10

±2,76x10

 0,52 1,08

10mgED 8,10x10

±1,62x10

 2,09x10

±0,58x10

 0,41 0,51

Controlepositivo** 2,18x10

±1,67x10

 9,7x10

±0,4x10

 0,01 23,4

*Águadestiladaestéril;**0,5μg/5μLdeMitomicinaC;ExtratodeDuguetiafurfuracea(ED). 



Naavaliaçãodatoxicidade doextratodeD.furfuracea,expressapelaFraçãode

Sobrevivência(S) emfunçãodadose(Tabela2),pôde‐seobservarque paraadosede1mg,

não foi constatada a inativação celular, porém houve um aumento do número de

sobreviventes (S=1,19) em relação ao controle negativo. A partir da dose de 2 mg, já se

constatou uma diminuição do número de sobreviventes (S=0,83) em relação ao controle

negativo. Na dose de 5 mg, a fração de sobrevivência obtida foi de 0,52.A inativação

máximaconstatadafoinadosede10mgobtendoafraçãodesobrevivênciaiguala0,41.No

controlepositivo(MitomicinaC),afraçãodesobrevivênciaobtidafoide0,01quefoimuito

inferioremrelaçãoàsfraçõesdesobrevivênciaobtidasàsdiferentesdosesdoextrato.Este

resultado está em concordância com o esperado, pois já se sabe que Mitomicina C é um

agente citotóxico (Estream & Vanleeuwen, 2000; Kraut & Drnovsek‐Olup, 1996). Os

resultados obtidos na avaliação da toxicidade do extrato de D. furfuracea também foram

representadosnaFigura1.

NaavaliaçãodagenotoxicidadedoextratodeD. furfuracea,expressapeloFatorde

Indução (FI) em função da dose (Tabela 2), verificou‐se que na dose de 1 mg houve um

pequeno aumento na indução do profagoλ(FI=2,34). Nas doses de 2 mg, 5 mg e 10 mg

foramobtidososvaloresde0,84;1,08e0,51,respectivamente.Osvaloresobtidospelofator

deindução(FI)mostraramumapequenadiminuiçãodainduçãodoprofagoλemrelaçãoao

grupo controle negativo, no entanto estão em concordância com os valores obtidos pela

fraçãodesobrevivência(S)quetambémapresentouumadiminuiçãonessasmesmasdoses.

Possivelmente,apequenainduçãoobservadanadosede1mgdoextratodeD.furfuracea,

sedeveparcialmenteaoaumentodonúmerodesobreviventesjáverificadoparaestadose

na curva de inativação celular (Figura 1). Não foi verificado o aumento da indução do

profagoλparaasdosesde2mg,5mge10mg.Nocontrolepositivo(MitomicinaC),oFI

obtidofoide23,4.Estevalorestáemconcordânciacomoda literaturaequejásesabeque

o agente Mitomicina C é altamente genotóxico e mutagênico (Kang et al., 2006). Os

resultados obtidos na avaliação da genotoxicidade do extrato de D. furfuracea também

foramrepresentadosnaFigura2.



Figura1.FraçãodeSobrevivênciadacepaE.coli (WP2s(λ)),emfunçãodadosedoextrato

deDuguetiafurfuracea.

Figura 2. Fator de Indução da cepa E. coli (WP2s (λ)) em função da dose do extrato de

Duguetiafurfuracea.



Osresultadosobtidosnaavaliaçãodainativaçãobacterianaedaantigenotoxicidade

provocada pelo extrato de D. furfuracea co‐tratado com 0,5 µg de MMC, podem ser

observadosnaTabela3enasfiguras3e4.



Tabela 3. Valores da média e desvio padrão do número de sobreviventes e plaques

formados, Fração de Sobrevivência (S) e Fator de Indução (FI) em função das doses do

extratodeDuguetiafurfuraceaco‐tratadocomMitomicinaC.



Tratamento

⎯x±s

(sobrevivência)



⎯

x±s

(indução)



S FI

Controlepositivo* 9,3x10

±2,04x10

 2,03x10

±0,45x10

1,00 1,00

0,5mgED+MMC 5,76x10

±1,29x10

1,09x10

±0,20x10

6,19 0,53

1mgED+MMC 4,70x10

±2,36x10

1,2x10

±0,78x10

 5,05 0,59

2mgED+MMC 6,61x10

±2,28x10

8,1x10

±3,34x10

 7,1 0,39

5mgED+MMC 4,27x10

±1,67x10

7,0x10

±1,65x10

 4,59 0,34

10mgED+MMC 1,44x10

±0,72x10

8,3x10

±1,45x10

 1,54 0,40

Controlenegativo** 2,01x10

±0,22x10

1,2x10

±0,65x10

 21,61 0,05



*0,5μg/5μLdeMitomicinaC(MMC);**Águadestiladaestéril; ExtratodeDuguetiafurfuracea(ED).



Pelatabela, observou‐sequepara asdoses do extratode D. furfuracea co‐tratadas

comMMC,ocorreuumaumento donúmerodecélulas sobreviventesquandocomparadas

com o controle positivo, mostrando dessa maneira, que o extrato atenuou os efeitos

citotóxicosdaMMC.Oaumentomáximodonúmerodesobreviventesocorreunadosede2

mg, obtendo uma fração de sobrevivênciade 7,1. Enquanto que a dose de 10 mg

apresentouomenoraumentodonúmerodesobreviventes(S=1,54).Nasdosesde0,5mg;1

mg e 5 mg foram obtidos os valores (S) de 6,19; 5,05 e 4,59, respectivamente. Estes

resultadostambémforamrepresentadosnaFigura3.

NaavaliaçãodaatividadeantigenotóxicadoextratodeD.furfuracea,expressapelo

Fator de Indução (FI) em função da dose (Tabela 3) e (Figura 4), pôde‐se verificar uma

diminuiçãodainduçãodoprofagoλemtodasasdosestestadasquandocomparadascomo

controlepositivo.Adosede5mgapresentouamaiordiminuiçãodeinduçãodoprofagoλ

(FI=0,34).Nasdosesde0,5mg;1mg;2mge10mgforamobtidososvaloresde0,53;0,59;

0,39e0,40,respectivamente.OsvaloresobtidosmostraramqueoextratodeD.furfuracea

co‐tratadocomMMC,diminuiuoníveldeinduçãodoprofagoλemaproximadamente55%.

OsresultadosobtidosnaavaliaçãodaantigenotoxicidadedoextratodeD.furfuraceaforam

tambémrepresentadosnaFigura4.



Figura3.CurvadeSobrevivênciadacepaE.coli(WP2s(λ))emfunçãodadosedoextratode

D.furfuracea+0,5µgdeMMC/placa.



Figura 4. Fator de Indução da cepa E. coli (WP2s(λ)) em função da dose do extrato de D.

furfuraceaco‐tratadocom0,5µgdeMMC/placa.

4.DISCUSSÃO



Oobjetivodopresentetrabalhofoiavaliarasatividadesgenotóxica,antigenotóxicae

tóxica da planta Duguetia furfuracea, pelo teste de indução do profagoλ. Este teste,

desenvolvidoporPatriceMoreauetal.,(1976),baseia ‐senoprincípiodainduçãodoprofago

λ,queéumadasmanifestaçõesdasfunçõesSOS.Jáseconhecenaliteraturaqueagentes

genotóxicos podem causar a indução das funções SOS. Estudos realizados anteriormente

mostraramqueagentesquedanificamoDNAouqueinterferemnareplicação,comoaMMC

ealuzUV,provocamainduçãodoprofagoλ(Osterhoutetal.,2007).Assim,comautilização

deste ensaio é possível avaliar a ação genotóxica ou antigenotóxica de agentes físicos,

químicosebiológicos.

Na avaliação da atividade tóxica e genotóxica do extrato de D. furfuracea, foi

demonstradoaçãotóxicanas dosesmaiselevadas(5mge10 mg),porémnãoapresentou

ação genotóxica considerável, visto que não foi verificado um aumento considerável da

indução do profagoλpara todas as doses utilizadas. A ação tóxica do extrato de D.

furfuraceaencontradanestetrabalho,estáemconcordânciacomosresultadosobtidospor

Toledoetal.,(2006),quetambémmostraramtoxicidadeemembriõesderatos,utilizandoo

extratodaspartesaéreasdeD.furfuracea.

Os resultados obtidos na avaliação da atividade antigenotóxica do extrato de D.

furfuracea, mostraram uma diminuição da indução do profagoλpara todas as doses co‐

tratadas com MMC, quando comparadas com o controle  positivo, apresentando uma

atenuação média de indução de 55%, assim pôde‐se mostrar que esta planta possui ação

antigenotóxica.

FoitambémrealizadaacurvadesobreviênciadacepadeE.coliWP2s(λ)co‐tratadas

com D. furfuracea e MMC e os resultados obtidos mostraram que o número de

sobreviventes aumentou em todas as doses testadas quando comparadas com o controle

positivo,mo strandodessamaneira,queoextratodeD.furfuraceaatenuouaaçãocitotóxica

deMMC.

A análise fitoquímica das partes aéreas de D. furfuracea revelou a presença de

sesquiterpenos (Carollo et al., 2005), flavonóides e vários alcalóides (Carollo et al., 2006a;

Carolloetal.,2006b).Dadosdaliteraturadescrevemquesesquiterpenospodemapresentar

potencial como agentes anticancerígenos (Fraga, 2006). A presença de alcalóides foi

mencionada em ampla gama de atividades biológicas, entre as quais, pode‐se citar

principalmente atividades: anti‐hipertensivas, antimaláricas, antitumorais, diuréticos,

antivirais, entre muitos outras (Henriques et al., 2004). Os flavonóides são comumente

indicados como antiinflamatórios, anticarcinogênicos, diuréticos, antimicrobianos,

antiviróticoseantioxidantes(AlmassyJúnioretal.,2005;Zuanazzi&Montanha,2004).

Os resultados obtidos do extrato de D. furfuracea exibiram o perfil de um agente

antitumoral, por ser tóxico, não genotóxico e antigenotóxico. A ação tóxica pode ser

atribuída,pelomenosparcialmente,pelaaçãodosalcalóides,umavezquejáforamisolados

alcalóides de outras espécies do gênero Duguetia, os quais mostraram ação citotóxica

(Pereiraetal.,2003;Fechineetal.,2002;Maia etal.,2006;Leboeufetal.,1980;Muhammad

etal.,2001;Temponeetal.,2005).Aaçãoantigenotóxicapossivelmentepodeseratribuída,

pelomenosparcialmente,pelaaçãodosflavonóides,devidoàsuaatividadeantioxidante.



5.CONCLUSÃO



Pelos resultados obtidos, concluiu‐se que o extrato liofilizado de folhas de D.

furfuraceaapresentou atividadetóxica eanticitotóxica contraMMC,ausência deatividade

genotóxicaconsideráveleaçãoantigenotóxicacontraMMC.



6.AGRADECIMENTOS



 OsautoresagradecemaoCNPqeFUNAPE,peloapoiofinanceiro.



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

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CapítuloII

___________________________________________________________________________

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AVALIAÇÃODASATIVIDADESMUTAGÊNICAEANTIMUTAGÊNICADE

DUGUETIAFURFURACEAPELOTESTEDOMICRONÚCLEOEM

MEDULAÓSSEADECAMUNDONGOS



CAROLINARIBEIROESILVA



UniversidadeFederaldeGoiás

InstitutodeCiênciasBiológicas

DepartamentodeBiologiaGeral

LaboratóriodeRadiobiologiadeMicrorganismoseMutagênese



AVALIAÇÃODASATIVIDADESMUTAGÊ NICAEANTIMUTAGÊNICADE

DUGUETIAFURFURACEAPELOTESTEDOMICRONÚCLEOEMMEDULAÓSSEA

DECAMUNDONGOS