( PDF ) Síntese e atividade leishmanicida e tripanocida da 4,5,10-tricloro-1,7-fenantrolina e 4,6-dicloro-10-metilpirido[3,2-g]quinolina

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UNIVERSIDADE REGIONAL DE BLUMENAU – FURB

CENTRO DE CIÊNCIAS EXATAS E NATURAIS – CCEN

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM QUÍMICA – PPGQ

SÍNTESE E ATIVIDADE LEISHMANICIDA E TRIPANOCIDA DA

4,5,10-TRICLORO-1,7-FENANTROLINA E 4,6-DICLORO-10-METIL-

PIRIDO[3,2-g]QUINOLINA

LEANDRO GUSTAVO MARTINS

BLUMENAU – SC

2007

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LEANDRO GUSTAVO MARTINS

SÍNTESE E ATIVIDADE LEISHMANICIDA E TRIPANOCIDA DA

4,5,10-TRICLORO-1,7-FENANTROLINA E 4,6-DICLORO-10-METIL-

PIRIDO[3,2-g]QUINOLINA

Dissertação submetida à Universidade Regional

de Blumenau como requisito parcial para a

obtenção do grau de Mestre em Química.

Orientador: Prof. Dr. Ricardo Andrade Rebelo

BLUMENAU – SC

2007

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“Hay hombres que lucham um dia

y son buenos,

Hay otros que lucham um año

y son mejores

Hay quienes lucham muchos años

y son mui buenos

Pero hay los que lucham toda la vida

Esos son los imprescindibles.”

B. Brecht

A Deus por tudo em minha vida.

À minha mãe, por tudo que tenho e principalmente pelos incentivos

incondicionais em todos os momentos da minha vida.

Ao Prof. Dr. Ricardo Andrade Rebelo pela orientação, confiança e apoio

oferecidos durante todas as etapas desse trabalho e vida acadêmica.

À Profª. Dra. Iêda Maria Begnini e aos demais professores pelo incentivo, e

amizade em todas as etapas do curso de mestrado e formação acadêmica.

Aos meus familiares pelo apoio e carinho destinados. Em especial ao Paulo

David (in memoriam) por tudo que aprendi com seus ensinamentos.

Ao Prof. Mário Steindel pela realização dos ensaios antiprotozoários.

À FURB por proporcionar um ambiente adequado para a minha formação

acadêmica.

Ao Profº Dr Luciano da Silva pelas críticas e sugestões para o aprimoramento

deste trabalho.

Aos Prof

.Dra. Flávia Aparecida Fernandes da Rosa e Prof. Dr. Edésio Luiz

Simionatto por terem aceitado participar da banca examinadora.

RESUMO

Os diazatriciclos pirido[3,2-g]quinolina e 1,7-fenantrolina são moléculas

planares com nitrogênios protonáveis, capazes de intercalação e interação com as

bases nitrogenadas do DNA. Importante atividade citotóxica está associada ao

isômero linear piridoquinolina, tal como, antimalarial, antielmíntica, tripanocida,

antitumoral e antibacteriana.

Neste trabalho investigamos a síntese de novas estruturas diazatricíclicas,

análogas às estruturas descritas na literatura com atividade citotóxica, empregando

metodologia de dupla ciclização de derivados fenilenodiamínicos do ácido de

Meldrum. Contemplarmente buscou-se estabelecer o potencial leishmanicida e

tripanocida dos compostos obtidos. A metodologia requer na preparação de ambos

os isômeros, 1,3-fenilenodiaminas substituídas. Desta forma, o isômero angular

preferencial

38 foi obtido quando da ciclização térmica do derivado 5-cloro. O

bloqueio da posição 2 com um grupamento metila, conduziu a formação do isômero

linear desejável 45. Cloreto de fosforila demonstrou ser eficiente na cloração dos

anéis heterocíclicos, obtendo-se as 4,5,10-tricloro-1,7-fenantrolina (39) e 4,6-

dicloro-10-metil-pirido[3,2-g]quinolina (46). Os compostos 39 e 46 não apresentaram

atividade antiprotozoária in vitro contra cepas de L. amazonensis e Trypanosoma

cruzi.

O composto 46 foi submetido à reação de substituição nucleofílica na

presença de excesso de 2-amino-5-(dietilamino)-pentano a 170

C. O produto 64

dissubstituído foi isolado após sucessivas cromatografias em coluna. Sua estrutura

molecular foi parcialmente confirmada por ressonância magnética nuclear de

H e

C. Sua atividade antiprotozoária não foi ainda determinada.

NH N N N

N N

O Cl

Cl Cl

N N

ClCl

NH HN

NEt

Palavras-chave: síntese, pirido[3,2-g]quinolina, 1,7-fenantrolina, antiprotozoários.

ABSTRACT

The diazatricycles pyrido[3,2-g]quinoline and 1,7-phenantroline are plane

structures with protonable nitrogens, capables of intercalating and interact with the

DNA nitrogens bases. Important cytotoxic activities are associated with the linear

isomer of pyridoquinolines, such as antimalarial, antihelmintic, trypanocidal,

antibacterial and antitumoral.

In this work we investigated the synthesis of new diazatricycles structurally

related to cytotoxic compounds described in the literature. The methodology is based

on the double cyclisation of phenylenodiamine Meldrum’s acid derivatives.

Complementarily it was aimed to establish the leishmanicidal and tripanocidal

potential of the obtained compounds. The methodology required in the preparation of

both isomers, substituted 1,3-phenylenodiamines. When 5-chloro-1,3-

phenylenediamine was used it was observed the preferential formation of the angular

isomer, the phenanthroline 38, under thermal cyclization. For the formation of the

linear pyridoquinoline it was necessary to have blocked the position 2. Therefore, 2-

methyl-1,3- phenylenediamine under similar condition led to isomer 45. Phosphoryl

chloride was shown to be efficient in the cloration of heterocyclic rings leading to the

the 4,5,10-trichloro-1,7-phenantroline (39) and 4,6-dichloro-10-methyl-pyrido[3,2-

g]quinoline (46). Compounds 39 e 46 were inactive against Trypanosoma cruzi and

Leishmania amazonensis in vitro bioassays.

Compound 46 was submitted to a nucleophilic substitution reaction in the

presence of excess of 2-amino-5-(diethylamino)-pentane at 170

C. The

dissubstituted product 64 was isolated after a very laborious work up. Its partial

structural elucidation was performed by means of

H and

C RMN and its

antiprotozoal activity remains to be determined.

NH N N N

N N

O Cl

Cl Cl

N N

ClCl

NH HN

NEt

Key-words: synthesis, pyrido[3,2-g]quinoline, 1,7-phenanthroline, antiprotozoal.

LISTA DE FIGURAS

FIGURA 1 – Representação estrutural da meridina (1), elipticina (2) e cloroquina (3)

.......................................................................................................................17

FIGURA 2 – Representação esquemática do mecanismo de ação dos agentes

quimioterápicos.......................................................................................................... 19

FIGURA 3 – Exemplos de compostos empregados na terapia humana antichagásica

................................................................................................................................... 29

FIGURA 4 – Compostos estudados para tratamento da Doença de Chagas........... 30

FIGURA 5 – Agentes tripanocidas em infecções humanas e veterinárias............... 32

FIGURA 6 - Compostos com propriedades para intercalação no DNA.................... 35

FIGURA 7 – Composto protótipo 10-aminoalquilfenotiazina..................................... 35

FIGURA 8 – Isômeros fenantrolínicos de interesse apresentando o sistema de

numeração recomendado pela IUPAC...................................................................... 36

FIGURA 9 – Mecanismo de formação da acroleína.................................................. 37

FIGURA 10 – Síntese da cloro-1,7-fenantrolina por Wiederkerhr (1952)................. 37

FIGURA 11 – Síntese da dicloro-1,7-fenantrolina por Molock e Boykin (1983)........ 39

FIGURA 12 – Síntese 4,5,10-tricloro-1,7-fenantrolina empregada por Graf et al

(2002)......................................................................................................................... 40

FIGURA 13 – Isômeros fenantrolínicos apresentando o sistema de numeração

recomendado pela IUPAC......................................................................................... 41

FIGURA 14 – Isômeros fenantrolínicos halosubstituídos apresentando o sistema de

numeração recomendado pela IUPAC...................................................................... 41

FIGURA 15 – Representação esquemática da nomenclatura de acordo com a face

de ligação das piridoquinolinas.................................................................................. 42

FIGURA 16 – Exemplo de numeração empregada nas piridoquinolinas.................. 42

FIGURA 17 – Estruturas 40 e 41 sintetizadas e estudadas por Hall et al. (1977)

quanto a sua atividade antialérgica........................................................................... 43

FIGURA 18 – Síntese da 4,6-dicloro-pirido[3,2-g]quinolina e reação de substituição

com nucleófilo nitrogenado, por Molock e Boykin (1983).......................................... 44

FIGURA 19 – Síntese pirido[3,2-g]quinolina empregando condensação de

Friedländer................................................................................................................. 45

FIGURA 20 – Síntese da pirido[3,2-g]quinolina susbtituídas por Matias et al. (1996)

empregando reação por transferência de fase.......................................................... 46

FIGURA 21 – Estruturas mono e bis-piridoquinolina testadas como antitumorais... 47

FIGURA 22 – Rota sintética de piridoquinolinas 4,6-substituídas empregada por

Gallo et al. (2003)....................................................................................................... 48

FIGURA 23 – Síntese de 4,6-piridoquinolinas apresentando amina terciária na

cadeia lateral. Em destaque a reação de substituição aromática nucleofílica entre 58

e o nucleófilo amina secundária................................................................................ 48

FIGURA 24 – Esquema reacional de obtenção da 4,5,10-tricloro-1,7-fenantrolina

(39)............................................................................................................................ 63

FIGURA 25 – Representação da ligação de hidrogênio intramolecular................... 64

FIGURA 26 – Representação da estrutura linear indicando a equivalência das

posições..................................................................................................................... 65

FIGURA 27 – Esquema reacional de obtenção da 4,6-dicloro-10-metil-pirido[3,2-g]-

quinolina (46).............................................................................................................. 67

FIGURA 28 – Numeração da 4,6-dicloro-10-metil-pirido[3,2-g]quinolina 46 e análogo

58................................................................................................................................ 68

FIGURA 29 – Modelo estrutural da piridoquinolina e 2-amino-5-dietilamino-pentano

.................................................................................................................................... 70

FIGURA 30 – Cromatograma do 2-amino-5-dietilamino-pentano após purificação por

destilação simples e à pressão reduzida................................................................... 71

FIGURA 31 – Representação das estruturas 10-metil-pirido[3,2-g]quinolina

substituídas (47, 57, 60 e 64).................................................................................... 73

FIGURA 32 – Estruturas triciclicas obtidas por Silva et al. (2007)............................ 74

LISTA DE TABELAS

TABELA 1 – Estrutura química de antimoniais trivalentes empregados na clínica

médica, com os respectivos nomes químicos e comerciais...................................... 22

TABELA 2 – Estrutura química de antimoniais pentavalentes empregados na clínica

médica, com os respectivos nomes químicos e comerciais...................................... 23

TABELA 3 – Outros medicamentos empregados na terapia de leishmaniose, com os

respectivos nomes químicos e comerciais................................................................ 24

TABELA 4 – Principais reações colaterais observadas no tratamento específico da

doença de chagas por autores argentinos e brasileiros............................................ 29

TABELA 5 - Atividade antiparasitária in vitro do derivado pirazolinaftoquinônicos e

quinonimínicos........................................................................................................... 30

TABELA 6 – Deslocamento químico de

H de RMN dos isômeros

fenantrolínicos ........................................................................................................... 40

TABELA 7 – Deslocamento químico de

C de RMN de derivados fenantrolínicos

halosubstituídos ....................................................................................................... 41

TABELA 8 – Comparativo de sinais de RMN

C da 4,6-dicloro-10metil-pirido[3,2-g]-

quinolina (46) e literaura............................................................................................ 68

TABELA 9 – Comparativo de sinais de RMN

H da 4,6-dicloro-10-metil-pirido[3,2-g]

quinolina (44) e 4,6-dicloro-2,8,10-trimetil-pirido[3,2-g]quinolina (58) obtido por Gallo

et al. (2003)... ............................................................................................................ 68

TABELA 10 – Comparativo de sinais de RMN

C da 10-metil-pirido[3,2-g]quinolina

substituída.................................................................................................................. 73

TABELA 11 – Atividade antiparasitária in vitro contra formas epimastigotas de T.

cruzi e promastigotas de Leishmania amazonensis e ensaios de citotoxicidade..... 75

LISTA DE ABREVIAÇÕES E GLOSSÁRIO

Adenopatia - Termo utilizado para designar o aumento do volume dos gânglios

linfáticos

Adinamia - Debilidade muscular que impede os movimentos

Astenia - Fraqueza, cansaço físico intenso

CDCl

- Clorofórmio deuterado

CG - Cromatografia gasosa

DMEM - Meio de Eagle modificado por Dulbeccos

IV - Infravermelho

MTT - Brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazol

ppm - Partes por milhão

RMN

H - Ressonância magnética nuclear de hidrogênio

RMN

C - Ressonância magnética nuclear de carbono

TMS - Tetrametilsilano

SUMÁRIO 
Fundamentação Teórica                 ......................................................................................   19   
1. Quimoterápicos              .................................................................................................   19   
2. LEISHMANIOSE              ...............................................................................................   21   
3. DOENÇAS DE CHAGAS            ..................................................................................   28   
DIAZATRICICLOS                 ..................................................................................................   35   
1. Fenantrolinas                ....................................................................................................   37   
2. Piridoquinolina                ..................................................................................................   43   
OBJETIVOS                 ............................................................................................................   51   
1 ObjetivoS geraIS              ................................................................................................   51   
2 Objetivos específicos              .........................................................................................   51   
MATERIAL E MÉTODOS                 .......................................................................................   52   
1 MATERIAL                .........................................................................................................   52   
1.1 Reagentes              .......................................................................................................   52   
1.1.1 Purificação do 2-amino-5-dietilaminopentano            ............................................   52   
1.1.1.1 Análise cromatográfica do 2-amino-5-dietilaminopentano          .......................   53   
1.2 Equipamentos               .................................................................................................   53   
2 Procedimentos de SÍNTESE              .............................................................................   54   
3. BIOENSAIOS (Silva et al.,2007)                ......................................................................   61   
RESULTADOS E DISCUSSÃO              ..............................................................................   64   
1 SÍNTESE E CARACTERIZAÇÀO DA 4,5,10-TRICLORO-1,7-FENANTROLINA 
(39)                ...........................................................................................................................   64   
2 SÍNTESE E CARCTERIZAÇÀO DA 4,6-DICLORO-10-METIL-PIRIDO[3,2-g]- 
QUINOLINA (46)              ......................................................................................................   67   

6.2.1 Síntese e caracterização da 4,6-bis-(4-dietilamino-1-metil-butilamino)-10-

metil-pirido[3,2-g]quinolina (64) ............................................................................... 70

6.3 BIOENSAIO ANTIPROTOZOÁRIO ...................................................................... 76

7. conclusão ............................................................................................................... 78

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................................................... 79

1. INTRODUÇÃO

A Química Medicinal se dedica a estudar as razões moleculares da

ação dos fármacos (substância química empregada como medicamento), a relação

entre a estrutura química e a atividade farmacológica, incluindo o planejamento e o

desenho estrutural de novas substâncias que possuam propriedades

farmacoterapêuticas úteis, capazes de originar novos fármacos. Essa tarefa,

complexa, envolve uma multiplicidade de fatores responsáveis pela resposta

terapêutica de uma substância exógena que precisa apresentar elevada eficácia,

reflexo das propriedades farmacodinâmicas – aquelas que regem as interações

responsáveis pelo reconhecimento molecular do fármaco pelo biorreceptor e resulta

na resposta terapêutica desejada (incluindo interação com enzimas e DNA) e/ou

transformação metabólica em outras drogas (pró-droga) e farmacocinética – aquela

que governam os fatores de absorção, distribuição, metabolismo e eliminação do

fármaco na biofase, resultando no perfil de biodisponibilidade, além de possuir

reduzida toxidez. (BARREIRO; FRAGA, 2001)

Nos primórdios da química medicinal descrita há 5100 anos, aplicada

no Império Chinês, é mencionada a utilização de extratos brutos de inúmeras ervas,

raízes, etc. (SILVERMAN, 1992) Com o avanço das técnicas sintéticas e a

necessidade do conhecimento da estrutura-atividade dos compostos, estes foram

sendo isolados e caracterizados objetivando a substância pura.

Com o contínuo avanço dessa ciência até os dias atuais, o número de

terapias químicas incorporadas à medicina é muito elevado. Os produtos naturais

que há algumas décadas atrás eram essenciais nas terapias químicas, hoje

contemplam uma porcentagem reduzida no mercado mundial devido à química

sintética explorar e aplicar modificações estruturais para complementar, ampliar,

minimizar e eliminar as propriedades, ora desejáveis ora indesejáveis, dos

compostos bioativos.

“De modo geral, drogas utilizadas em clínica médica hoje não

são mais descobertas. E sim, relacionadas a um composto

protótipo; o qual está sujeito à atividade farmacológica ou

biológica distinta. Sendo suas características ampliadas ou

minimizadas como toxicidade, solubilidade, problemas de

metabolismo e outras atividades biológicas.”

SILVERMAN (1992)

A ação seletiva de drogas antiparasitárias depende da existência de

diferenças bioquímicas aproveitáveis entre o parasito e a célula hospedeira. A

extensão desta diferença depende principalmente da distância, em termos

evolutivos, entre o hospedeiro e o parasita. (RANG et al., 2001) Esse parâmetro é o

desejado para o desenvolvimento de drogas para tratamento e prevenção das

doenças infecciosas. Os fármacos utilizados para esses tratamentos nos dias atuais

foram descobertos principalmente nas décadas de 1940 a 1970, sendo que a sua

evolução não acompanhou a observada nos antitumorais e antimicrobianos, que

sofreram um “boom” na década de 1940-1950 e 1980-1990 respectivamente, com a

descoberta de inúmeras estruturas moleculares. (SILVERMAN, 1992)

A estrutura molecular e a versatilidade dos isômeros fenantrolínicos

bem como dos análogos piridoquinolínicos em reações de substituição e

condensação possibilitam ampla gama de aplicações. Sua semelhança estrutural

aos compostos bioativos relacionados na literatura apresenta-se como importante

tema na química medicinal, promovendo estudos de interações dessas moléculas

com os sítios de intercalação do DNA (relacionando mecanismo de ação à

propriedade/categoria terapêutica) e avaliação das atividades antitumoral,

antialérgica, em infecções respiratórias, antimalarial, antibacteriana, antifúngica;

entre outras. (GALLO et al., 2003; MATIAS; MAHAMOUD; BARBE, 1996; HALL et

al., 1977; CHEVALIER et al., 2001)

Os derivados fenantrolínicos e piridoquinolínicos apresentam-se como

subunidades estruturais em alguns produtos naturais de importância biológica.

Destacamos o alcalóide Meridina 1 que incorpora em sua estrutura os núcleos 1,7-

fenantrolínico e pirido[3,2-g]quinolínico. O alcalóide elipticina 2 é um importante

agente antitumoral, por conseguinte, a síntese de análogos piridoquinolínicos

metilados apresenta-se como uma proposta de investigação interessante, já que os

produtos obtidos poderão exibir propriedades citotóxicas.

A proposição sintética deste trabalho adota procedimentos descritos na

literatura para policiclos nitrogenados com funcionalização na posição γ ao

heteroátomo. Tais substituintes contêm grupamento amino terciário e vêm sendo

empregados em drogas descritas na literatura como o antimalárico cloroquinolina 3.

Os compostos obtidos foram caracterizados por técnicas espectroscópicas, e

a avaliação das atividades leishmanicida e tripanocida foi conduzida in vitro.

NCl

1 2 3

FIGURA 1 – Representação estrutural da meridina (1), elipticina (2) e cloroquina (3).

2. FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA

2.1. Quimoterápicos

O desenvolvimento da quimioterapia ocorrido na segunda metade do

século XX representa um dos mais importantes progressos terapêuticos na história

da medicina. (TAVARES, 1999)

A quimioterapia moderna começou com o trabalho de Paul Ehrlich no

início do século XX – particularmente com a descoberta em 1907 das propriedades

de um corante chamado vermelho de tripan I, quando usado contra tripanossomíase

experimental.

O termo “quimioterapia” foi utilizado por Ehrlich para descrever o uso de

substâncias químicas sintéticas destinadas a destruir agentes infecciosos. Na

atualidade o termo “quimioterapia” também é aplicado a certas substâncias químicas

(naturais ou sintéticas) empregadas para inibir o crescimento de células malignas ou

cancerosas no interior do organismo. (TAVARES, 1999) Sendo assim possuem um

espectro de ação englobando: bactérias, vírus, protozoários, helmintos e células

cancerosas.

As drogas quimioterápicas têm por finalidade atuarem em vários alvos no

interior da célula parasita. Suas funções modificam de acordo com os alvos de ação

dos fármacos, demonstrados na Figura 2.

- Classe I: os parasitos utilizam para fornecimento de energia algumas fontes

primárias de carbono, dentre elas a glicose. Essa classe não representa um alvo

promissor por duas razões. Em primeiro lugar, não existe uma diferença muito

pronunciada entre as células parasitárias e as células humanas quanto ao

mecanismo utilizado para a obtenção de energia a partir da glicose, uma vez que

ambos utilizam à via Embden-Meyerhof e o ciclo do ácido cítrico. Em segundo lugar,

mesmo se as vias de glicose fossem bloqueadas, inúmeros outros compostos

(aminoácidos, lactados e outros) poderiam ser utilizados pelos parasitos como

substâncias alternativas. (GILMAN; GOODMAN, 1996)

- Classe II: atuam inibindo a utilização de energia dos compostos da Classe I na

formação de pequenas moléculas, como, por exemplo, aminoácidos, nucleotídeos e

outros. (RANG, 2001) Essa classe considera alvos mais adequados, uma vez que

algumas vias envolvidas nas reações da classe II não são observadas nas células

humanas, existindo apenas nas células dos parasitos. (GILMAN; GOODMAN, 1996)

- Classe III: inibem a organização das pequenas moléculas em moléculas maiores

como, por exemplo, peptideoglicano, proteínas, ácidos nucléicos e outros. (RANG,

2001). Essa apresenta alvo ainda mais promissor e específico para a ação das

drogas no combate e controle das doenças devido à especificidade do substrato.

Conseguindo assim uma ação mais restrita às estruturas exclusivas dos parasitos.

FIGURA 2 – Representação esquemática do mecanismo de ação dos agentes

quimioterápicos.

2.2. LEISHMANIOSE

A leishmaniose é uma doença infecciosa zoonótica, amplamente distribuída

em todo o mundo, que afeta o homem e os animais. Esta parasitose ocorre na Ásia,

Europa, África e Américas, sendo que existem relatos sobre a doença, no continente

americano, desde a época colonial. Em 1571, Pedro Pizarro relatou que os povos

situados nos vales quentes do Peru eram dizimados por uma doença que

desfigurava o nariz, a qual foi posteriormente caracterizada como leishmaniose.

A descoberta dos agentes etiológicos das leishmanioses, entretanto, só

ocorreu o final do século XIX, quando Cunningham em 1885, na Índia, descreveu

formas amastigotas em casos de Calazar. Em 1898, o pesquisador russo Borovisky

demonstrou ser um protozoário o agente etiológico do Botão do Oriente. Em 1903,

Leishman e Donovan realizaram as primeiras descrições do protozoário responsável

pelo Calazar indiano, denominado mais tarde de Leishmania donovani. Igualmente

em 1903, Wright descreveu o parasito do Botão do Oriente na Síria, conhecido

atualmente como Leishmania tropica. A partir de 1904, diferentes relatos

demonstram que o calazar não ocorria exclusivamente na Índia, visto que alguns

casos também foram registrados na China.

Como o Calazar na região do Mediterrâneo atingia principalmente crianças,

as evidências de diferenças entre o organismo causador do Calazar de uma região

para outra justificaram o estabelecimento de uma espécie Leishmania infantum por

Nicole, em 1908.

No continente americano, várias doenças que criavam lesões, freqüentes em

determinadas regiões, eram chamadas de úlcera de Bauru, ferida brava, uta, úlcera

dechiclero. A correlação destas lesões com um protozoário do gênero Leishmania foi

estabelecida por Gaspar Vianna em 1909, no Instituto Oswaldo Cruz, recebendo o

nome de Leishmania braziliensis.

Em 1993 a Organização Mundial de Saúde (OMS) considerou a Leishmaniose

como a segunda doença de importância pública, causada por protozoário. (RATH et

al., 2003)

2.2.1. Áreas Endêmicas

A leishmaniose prevalece nos quatro continentes, sendo considerada

endêmica em 88 países, dos quais 72 são países considerados em

desenvolvimento.

Segundo a OMS, 90% dos casos de leishmaniose visceral são

registrados em Bangladesh, Brasil, Nepal, Índia e Sudão; 90% dos

casos de leishmaniose mucocutânea ocorrem no Brasil, Bolívia e

Peru e 90% dos casos da leishmaniose cutânea ocorrem no

Afeganistão, Brasil, Irã, Peru, Arábia Saudita e Síria.

No Brasil, a leishmaniose visceral encontra-se disseminadas em 17

estados das regiões Nordeste, Centro-Oeste e Sudeste.

A ampliação da área de distribuição geográfica da AIDS (resultando

em uma diminuição da imunidade), a extensão da Leishmaniose

para camadas mais pobres da população e a crescente

urbanização da leishmaniose atingiu no Brasil 422,5 mil pessoas. E

nos últimos dois anos foram detectados 66,8 mil novos casos da

doença que permanece sem controle. No Estado de São Paulo

foram registrados 87 casos da leishmaniose visceral aguda, sendo

que em sete casos foi relatado o óbito. (RATH et al., 2003)

2.2.2. Fármacos empregados no tratamento da leishmaniose

Apesar do uso medicinal de compostos de antimônio ser conhecido desde a

Antiguidade para diversos fins terapêuticos, somente em 1912, Gaspar Vianna

observou que o tártaro hemético 4 era eficaz na terapêutica da leishmaniose

tegumentar americana. Três anos mais tarde, na Itália, também foi comprovada a

eficácia desta droga no tratamento de Calazar. Devido aos efeitos tóxicos e graves

efeitos colaterais indesejáveis associados ao emprego de 4, e.g. intolerância

gastrintestinal e efeitos cardiotóxicos, os antimoniais trivalentes (Tabela 1) passaram

a ser substituídos por compostos estibiados pentavalentes (Tabela 2).

TABELA 1 – Estrutura química de antimoniais trivalentes empregados na clínica

médica, com os respectivos nomes químicos e comerciais.

Fórmula Estrutural

Nome

Químico

Nome

Comercial

COOH

Sb OH

Tartarato de

antimônio e

potássio

Tártaro

Hemético

NaO

Antimoniato de

bis-catecol-3,5-

dissulfonato

sódico

Stibophem,

Repodral e

Fuadina

COONa

SSb

SCH

C O

Tioglicolato de

sódio e

antimônio

Bramachari, em 1920, desenvolveu o primeiro composto, a uréia estibamina

(5). Em 1936, Schmidt introduziu na terapia médica o gluconato de antimônio (V)

sódico (6).

Durante a Segunda Guerra Mundial, surgiu na França um medicamento

alternativo ao até então gluconato de antimônio (V) sódico (6), o antimoniato de N-

metilglucamina ou antimoniato de meglumina (7).

TABELA 2 – Estrutura química de antimoniais pentavalentes empregados na clínica

médica, com os respectivos nomes químicos e comerciais.

Fórmula Estrutural Nome Químico

Nome

Comercial

Uréia estibamina Estibamine

CHOH

COO-

O Sb

CHOH

COO-

.9H

Gluconato de

antimônio(V)

sódico ou

Estibogluconato

de sódio

Pentostam e

Solustibosan

NHCH

COH

(OH)

Antimoniato de

N-metilglucamina

Glucantime,

Antimoniato

meglumina

No Brasil, o medicamento à base de antimônio, utilizado como primeira

escolha na terapêutica da leishmaniose, é o antimoniato de metilglucamina (7). Este

é especialmente eficaz no tratamento de leishmaniose cutânea, mucocutânea e

visceral. O medicamento provoca a regressão rápida das manifestações clínicas e

hematológicas da doença, bem como a esterilização do parasito. Devido às baixas

dosagens (decorrente da toxicidade) e tratamento descontínuos, falhas começaram

a ocorrer na terapia e conseqüente aumento das formas resistentes do parasito.

A OMS preconiza que as doses de antimoniais não devem

ultrapassar 20 mg/kg/dia, limitadas em 850 mg de antimônio.

Devido à sua elevada toxidade, mialgias, dores abdominais,

alterações hepáticas e distúrbios cardiológicos são efeitos

colaterais freqüentemente associados ao uso destas drogas.

Em determinados casos, além de destruir o parasito, o

medicamento acaba por levar o paciente ao óbito. O antimônio

pode ser detectado no cabelo do paciente tratado com antimoniais

pentavalentes após um ano do término do tratamento (Tabela 2).

Além dos antimoniais, outras drogas têm sido empregadas no tratamento das

diversas formas da leishmaniose, entre as quais se destacam a pentamidina (8),

anfotericina B (9), paromomicina (10) e miltefosine (11) representados na Tabela 3.

TABELA 3 – Outros medicamentos empregados na terapia de leishmaniose, com os

respectivos nomes químicos e comerciais.

Fórmula Estrutural

Nome

Químico

Nome

Comercial

OCH(CH

)

Isotionato de

Pentamidina

Lomidina

O OH OH

OH OH

COOH

Anfotericina B Fungizone

OHCH

Paromomicin

Humatin

O CH

OCH

(CH

)

(CH

)

Miltefosine

Não

encontrado

As substâncias do grupo das diaminas como 8 são particularmente úteis em

casos que não respondem aos antimoniais ou para pacientes com hipersensibilidade

ao antimônio. A alta toxicidade desta droga também é fator limitante do uso.

Hipoglicemia, hipotensão, alterações cardiológicas, nefrotoxicidade e, até mesmo,

morte repentina foram descritas.

O composto 9 é um antibiótico antifúngico indicado para o tratamento da

leishmaniose mucocutânea americana, embora não se considere de primeira

escolha, sendo utilizada nos casos onde existe falha com a terapia de antimoniais.

Nefrotoxicidade pode levar a depleção nos níveis de potássio e magnésio no

organismo.

O antibiótico aminoglicosídeo 10 é ativo contra espécies de leishmania

visceral in vitro e in vivo. Testes foram realizados na Índia, onde o tratamento

antimonial padrão não é muito efetivo e as taxas de mortalidade são altas.

Atualmente, todos os medicamentos disponíveis são injetáveis. Foi

verificado que o miltefosine (11), uma droga anticâncer alquilfosfolipídica, é ativo

contra Leishmania sp, in vitro e in vivo, e pode vir a ser o primeiro tratamento oral

para a leishmaniose visceral. Resultados em testes biológicos indicam que a droga é

bem tolerada. (RATH et al., 2003)

2.2.3. Ciclo reprodutivo

O mosquito hospedeiro intermediário, do gênero Flebotomo, que ao sugar

sangue de um animal (ou do homem) infectado, também se contamina, e em seus

intestinos e glândulas salivares esses protozoários se multiplicam, sendo então as

chamadas formas de leptomonas encontradas no buco-faringe desses mosquitos.

Os mosquitos ao sugarem sangue injetam na picada a sua saliva e as formas

infectantes da Leishmania sp., que atingindo a circulação sanguínea desse novo

hospedeiro (chamado por isso hospedeiro definitivo) reproduzirá a doença numa das

formas clínicas anteriormente citadas.

O período chamado de incubação (período que vai da picada pelo mosquito

infectado até o aparecimento dos primeiros sintomas) varia entre 10 e 25 dias,

podendo, entretanto, chegar até um ano. Após esse período aparecem em geral

pápulas na pele do animal ou do homem infectado, pápulas essas nada

características, porém pruriginosas, determinando sensação de calor e dor. Ocorre

também nessa fase adenopatia dos gânglios próximos à picada pelo mosquito.

Nessa ocasião, sendo feita punção desses gânglios inflamados, deverá ser

encontrada as formas infectantes do protozoário. O gânglio linfático inflamado

necrosa, e assim lesado acaba por vir a evacuar esse material purulento, ficando em

seu local uma úlcera, denominada de cancro espúndico.

Nessa forma clínica a doença é facilmente diagnosticável pela exibição de

úlceras cutâneas características. Em alguns casos, entretanto, a doença cutânea

assume formas não ulcerosas, chamadas de impetiginóide ou tuberiformes, além de

verrugosas framboesóides, esta última assim denominada pela sua semelhança com

a fruta framboesa. O evoluir dessa doença, sem tratamento adequado, leva a lesões

graves e deformantes, inclusive com perdas irrecuperáveis muitas vezes do nariz e

da epiderme do rosto, locais mais afetados.

Na sua forma visceral, as lesões sendo internas, levando a esplenomegalia,

além de febre e dor abdominal. Sua evolução pode ocasionar também

hepatomegalia.

2.3. DOENÇAS DE CHAGAS

A tripanosomíase ou doença de chagas é causada por parasitos flagelados do

gênero Trypanosoma. Os que infectam o homem são os T. rhodesiense, T.

gambiense e T. cruzi. As duas primeiras espécies são transmitidas pela mosca tse-

tsé (Glossina morsitans e G. palpalis); causam a chamada tripanossomíase africana

– tripanossomíase gambiense e tripanossomíase rodesiana – ou doença do sono. A

última espécie causa a doença de Chagas, cujos vetores são insetos do gênero

Triatoma sp. (PINGE-FILHO et al., 2005)

Várias outras espécies de tripanosomos infectam apenas animais domésticos,

como o gado bovino, ovino, suíno, caprino e outros.

Desde 1909 quando foi primeiramente caracterizada, muitos esforços foram

realizados para erradicação, quando 75% de redução foi detectada na América do

Sul (Argentina, Brasil, Chile, Venezuela, Paraguai e Uruguai) como conseqüência do

sucesso do controle do vetor. Mas a Doença de Chagas continua como problema de

doença regional, ou seja, são registradas constantemente pequenas endemias

localizadas (POZAS et al., 2005). Poucos progressos foram realizados para o

controle desta séria doença.

A tripanossomíase é a mais letal das doenças parasitárias tropicais e

subtropicais no Norte e Sul das Américas responsável por um milhão de infecções e

mais de 50.000 mortes/ano. Atualmente em escala mundial existem 16-18 milhões

de infectados com a forma crônica da Doença de Chagas, causam mais de 400.000

mortes por ano e mais de 100 milhões de pessoas com risco iminente de contrair a

doença. (SPERANDEO; BRUN, 2003) No Brasil, aproximadamente 5-6 milhões de

pessoas estão infectadas, sendo 300.000 pessoas infectadas somente no estado de

São Paulo. (TAKEARA, 2003 apud CANESIN e BARRETO, 1997) e 120.000 novos

casos de infecção foram relatados por ano segundo Schinor et al. (2004).

A Doença de Chagas Aguda (DCA) corresponde ao período inicial da infecção

pelo Trypanosoma cruzi no homem e em vários mamíferos, podendo apresentar-se

aparente ou inaparente. Define-se basicamente pela alta parasitemia detectável por

exames parasitológicos diretos do sangue, tendo duração geralmente efêmera no

ser humano (entre três e oito semanas), podendo ser letal em crianças de baixa

idade e indivíduos imuno-comprometidos ou evoluir para uma forma crônica de

longa duração que se caracteriza por baixíssima parasitemia e um elevado e

consistente teor de anticorpos. Quando específica e adequadamente tratada, a DCA

pode ser curada em proporções que variam geralmente entre 30 e 90%.

Nas crianças (maioria dos casos agudos descritos), é freqüente um estado

geral comprometido, com presença de adinamia, palidez e astenia, normalmente nas

duas primeiras semanas dos pacientes sintomáticos. Nos casos de transmissão

vetorial podem aparecer os chamativos sinais de porta de entrada, ou chagomas de

inoculação, sendo o mais indicativo deles o “complexo oftalmo-ganglionar”,

conhecido como “sinal de Romaña”, que corresponde a uma reação imunológica

complexa à penetração e difusão do parasito na conjuntiva e adjacências,

perdurando por algumas semanas mesmo após a queda do quadro febril.

Nos últimos 30 anos os nitro-heterociclos como Nifurtimox (12) e Benznidazol

(13), são as únicas escolhas para o tratamento da Doença de Chagas. As duas

drogas possuem um limiar de eficiência durante a fase crônica e apresenta vários

efeitos indesejáveis (Tabela 4). Devido a sua toxicidade e estudos informam que

apenas 50% dos pacientes apresentam redução da duração e severidade dos

efeitos da fase aguda. Violeta genciana é um agente tripanocida que atua

esterilizando o parasito. Sua utilização não é bem aceita por médicos e pacientes

pelos efeitos colaterais como alteração da cor da pele e hemólise. (PIZZOLATTI,

2002; SPERANDEO; BRUN, 2003; ROMANHA, 2002 e TAKEARA, 2003)

FIGURA 3 – Exemplos de compostos empregados na terapia humana

antichagásica.

TABELA 4 - Principais reações colaterais observadas no tratamento específico da

doença de chagas por autores argentinos e brasileiros

Sintoma/sinal Benznidazol Nifurtimox

Anorexia ++ +++

Cefaléia + ++

Dermatopatia +++ +

Excitação psíquica - +++

Gastralgia + +++

Insônia + ++

Náuseas ++ +++

Perda de peso + +++

Polineuropatia + ++

Vômitos ++ +++

Também se deve assinalar que eventuais fracassos terapêuticos podem

ocorrer em até 50% (ou mais) dos pacientes tratados em DCA, a depender

provavelmente de cepas de T. cruzi mais resistentes às drogas disponíveis.

Infelizmente, esta resistência é cruzada entre o nifurtimox e o benznidazol, sendo

inócua a substituição de um por outro fármaco em caso de fracasso; esta

Nifurtimox (Lampi

)

Benznidazol (Rochagan

)

substituição, no entanto, é válida somente para casos de efeitos colaterais

importantes que levem a suspender o uso de uma droga.

O espectro de atividades das quinonas, naturais ou sintéticas, tem sido

extensamente estudo em uma gama de propriedades antimicrobianas até

antineoplásicas. Estudo sobre a influência de diferentes substituintes heterocíclicos

mostrou que derivados pirazolilnaftoquinônicos e quinonimínicos (14-16) quando

comparados in vitro com a droga padrão benznidazol (contra T. cruzi) e melarsoprol

(17) (contra T. rhodesiense) apresentam boa inibição da atividade do parasito com

valores apresentados na Tabela 5. O modo de ação de suas atividades citotóxicas

apresenta-se como intercalante no DNA, onde substituinte com anéis aromáticos

têm potencializado a ação. (SPERANDEO; BRUN, 2003)

14 15 16

FIGURA 4 - Compostos estudados para tratamento da Doença de Chagas.

TABELA 5 – Atividade antiparasitária in vitro dos derivados pirazolilnaftoquinônicos

e quinonimínicos

Compostos T. cruzi T. rhodesiense

Benznidazol (13) 0,56 -

Melarsoprol (17) - 0,0061

14 0,87 1,2

15 0,69 0,4

16 0,43 0,4

Valores são expressos em IC

(µg/mL)

Outra forma de controle pode ser adotada pela aplicação de interferon gama

(INF-у) e fator de necrose tumoral (TNF-α). São pouco utilizados na terapêutica pela

toxidade da aplicação e custo elevado do procedimento. (PINGE-FILHO, 2005)

Derivados nitro-heterociclos, como 12, 13 e 20, que contenham diferentes

tipos de heterociclos e/ou substituintes com função amida têm sido sintetizados

desde que seu esqueleto foi associado à atividade biológica, como tripanocida,

bactericida, fungicida e esquistossomicida.

Os agentes tripanocidas que manifestaram atividade em infecções humanas

ou veterinárias pertencem a uma das seguintes classes químicas:

1. Antibióticos: anfotericina (9), puromicina, tripanocina, vermicilina;

2. Compostos nitro-heterocíclicos: benznidazol (13), flunidazol, furaltadona;

3. Derivados fenantridínicos: dimídio, estilato carbídio, homídio,

isometamídio;

4. Derivados quinolínicos: quinapiramina, tozocida;

5. Derivados da uréia: suramina (18);

6. Diamidinas: diminazeno, pentamidina (8);

7. Organoarsenicais: espirotripano, melarsoprol (17), triparsamida (19).

São hoje considerados obsoletos como tripanocidas os seguintes fármacos:

tartarato potássico de antimônio; derivados fenantridínicos: fenídio, diamidinas:

dimetilestilbamidina, estilbamidina, fenamidina, propamidina.

OOH

N N

NaO

FIGURA 5 – Agentes tripanocidas em infecções humanas ou veterinárias.

Devido à importância epidemiológica, a quimioterapia da Doença de Chagas

continua um problema sem solução. De fato, não existe nenhum tratamento

recomendado para prevenir a contaminação.

Em 2004, foi divulgada pela imprensa em rede nacional uma nota oficial da

Secretaria de Saúde do estado de Santa Catarina, que relatou 31 casos de doença

de Chagas de provável transmissão oral, sendo que cinco deles evoluíram a óbito. É

notória a possibilidade de transmissão do mal de Chagas por ingestão de líquidos e/

ou alimentos contaminados com formas evolutivas do parasito. No município de

Catolé da Rocha na Paraíba, onde de um total de 90 pessoas que participaram de

Nitrofural (Furacin

)

Triparsamida 19

Melarsoprol

Suramina sódica

uma festividade, 30 destas apresentaram reações sorológicas positivas para doença

de Chagas, em mais de dois testes. Vários desses pacientes também se

apresentaram positivos pelo xenodiagnóstico. Relata-se ainda, um deles, do qual foi

obtido material de necropsia, foi diagnosticada cardiopatia chagásica aguda. Este

artigo foi apresentado no XXIII Congresso Brasileiro de Medicina Tropical e IV

Congresso Brasileiro de Infectologia realizada na Cidade de Curitiba - PR em

fevereiro de 1987. Outros casos de transmissão oral da doença de Chagas têm sido

relatados na literatura especializada, dentre eles oito casos de provável transmissão

oral da doença no estado de Macapá. Em uma matéria da revista Veja na sua seção

guia de 2 de abril de 2005, baseado em um estudo da Universidade Federal do

Pará, alerta-se para o risco de se adquirir a doença de Chagas via ingestão de suco

do açaí, já que 16 pessoas radicadas no Norte do Brasil contraíram essa

enfermidade depois de consumirem polpa de açaí “in natura” sem a devida

pasteurização. Apesar da contaminação oral da doença ser rara, quando esta forma

de transmissão ocorre, tende a desenvolver em humanos, infecções agudas e

graves, tipo não muito comum da doença.

3. DIAZATRICICLOS

Moléculas que podem ligar-se ao DNA por intercalação são de consideráveis

interesses para o estudo da estrutura do DNA e como potenciais agentes

quimioterápicos. Essas moléculas freqüentemente contêm duas diferentes regiões

que interagem com o DNA, anéis aromáticos planares que podem localizar-se entre

as bases nucleotídicas e uma cadeia catiônica lateral que realiza interação

eletrostática com DNA. Uma série de diazatriciclos com sistemas

dialquilaminopropilamina tem sido estudada por Molock e Boykin (1983).

Os diazatriciclos pirido[3,2-g]quinolina e 1,7-fenantrolina são moléculas

planares com nitrogênios protonáveis, capazes de intercalação e interação com as

bases nitrogenadas do DNA. (MOLOCK, BOYKIN, 1983; MATIAS, MAHAMOUD,

BARBE, 1996)

Sartorius e Schneider (1997) estudaram e compararam o potencial de

intercalação ao DNA de compostos aromáticos e aromáticos substituídos.

Mostraram que a distribuição das cargas π é essencial para uma ligação, modelo do

tipo sanduíche, às nucleobases.

Derivados naftalênicos somente interagem com o DNA se a cadeia lateral

substituinte tiver cargas positivas. A função amida de 21 é insuficiente para ativar a

intercalação, confirmando que a interação depende do tamanho do substituinte da

cadeia lateral e posição do nitrogênio no substituinte. Sistemas tricíclicos como 22 e

23 intercalam sem a assistência de radicais com cargas positivas. Indica que a

intercalação depende do tamanho do núcleo aromático independente do substituinte

da cadeia lateral.

21 22 23

FIGURA 6 - Compostos com propriedades para intercalação no DNA.

Conforme Silverman (1992), a variação da cadeia lateral de um composto

protótipo demonstra que substituintes análogos podem refletir diferenças

significativas nas atividades biológicas apresentadas. Isso pode ser verificado nas

10-aminoalquilfenotiazinas (24), onde R igual a [CH

CH(CH

)N(CH

)

] ou

[CH

N(CH

)

] apresenta atividade antiespasmódica e anti-histamínica.

Entretanto, quando R igual a [CH

N(CH

)

] tem redução na sua atividade

antiespasmódica e anti-histamínica, mas apresenta atividade sedativa e

tranqüilizante. E com cadeia lateral [CH

CH(CH

)CH

N(CH

)

] a atividade

tranqüilizante é diminuída, contudo a atividade antipruriginosa é relevante.

FIGURA 7 – Composto protótipo 10-aminoalquilfenotiazina.

3.1. FENANTROLINAS

Embora o termo fenantrolina considere todos os isômeros diazafenantrenos,

são usualmente aplicados apenas aqueles diazafenantrenos contendo um átomo de

nitrogênio em cada um dos anéis periféricos do fenantreno. Esta definição está de

acordo com a nomenclatura do Chemical Abstracts, que designa inúmeros isômeros.

Destacam-se as formas de interesse no trabalho: 1,7-fenantrolina (25) e 1,10-

fenantrolina (26).

10 9

25 26

FIGURA 8 – Isômeros fenantrolínicos de interesse apresentando o sistema de

numeração recomendado pela IUPAC.

A primeira fenantrolina a ser preparada foi a 1,7-fenantrolina por Skraup e

Vortmann em 1882. A reação de Skraup é ainda um dos métodos utilizados para a

síntese de 1,7-fenantrolinas. Nesta reação empregam-se 5-aminoquinolinas

substituídas na presença de glicerol e ácido sulfúrico. A protonação do glicerol

catalisa a desidratação via íon carbônio secundário para gerar o enol. A eliminação

da segunda molécula de água por catálise ácida conduz à acroleína (27).

HO OH

H H

-H

O OH

-H

FIGURA 9 – Mecanismo de formação da acroleína.

A reação procede via adição de Michael, gerando o aldeído saturado, o qual

cicliza via adição nucleofílica com formação de álcool. A rearomatização,

desidratação e posterior oxidação conduzem à fenantrolina correspondente. A 5-

cloro-6-hidroxi-1,7-fenantrolina (28) foi obtida por este método (WIEDERKERHR,

1952) conforme Figura 10.

-2H

FIGURA 10 – Síntese da 5-cloro-6-hidroxi-1,7-fenantrolina por Wiederkerhr (1952)

Apenas no início da década de 80 novos avanços na síntese de

fenantrolinas foram efetuados. Molock e Boykin (1983) sintetizaram uma série de

1,7-; 1,10- e 4,7-fenantrolinas a partir das correspondentes fenilenodiaminas,

empregando derivados 5-alcoximetilênicos do éster malônico ou diésteres do

acetileno.

Esta rota é conhecida como síntese de Conrad-Limpach e inicia-se pela

condensação da m-fenilenodiamina (29) com etoximetilenomalonato de dietila

(EMME) produzindo o m-bis-(1,2-dicarboetoxivinilamino)benzeno (30). A

termociclização em parafina a 245°C produziu a 1,4,7,10-tetraidro-2,8-

dicarboetoxi-1,7-fenantrolina-4,10-diona (31). A presença de HCl 6M promove a

hidrólise ácida (a saponificação empregando KOH 6M não pode ser feita por gerar

um sal insolúvel) do diéster 31 ao diácido 32 que sofre posteriormente

descarboxilação gerando a 1,7-fenantrolina-4,10-diona (33), sob atmosfera de

nitrogênio e aquecimento a 330°C. O tratamento da fenantrolona com oxicloreto de

fósforo forneceu a 4,10-dicloro-1,7-fenantrolina (34).

EtO

POCl

descarboxilação

Hidrólise Ácida

FIGURA 11 – Síntese da dicloro-1,7-fenantrolina por Molock e Boykin (1983)

Graf et al. (2002) via substituição nucleofílica tipo Michael; sintetizaram

derivados da 1,7-fenantrolina empregando como composto de partida a 1,3-

fenilenodiamina 35. A utilização de dois equivalentes do metoximetileno do ácido de

Meldrum (36) (gerado in situ) com ortoformato de trimetila formou 37. A

regiosseletividade apresentada na dupla decarboxilação/desacetonização de 37

originou o isômero angular preferencial 38. Posterior cloração de 38 conduziu a

4,5,10-tricloro-1,7-fenantrolina (39), conforme Figura 12. Os rendimentos obtidos em

outras rotas sintéticas são inferiores aos descritos acima. A formação de

metoximetileno do ácido de Meldrum se dá de forma simples e com possibilidade de

formação de grandes quantidades de produto.

O O

MeO

FIGURA 12 – Síntese 4,5,10-tricloro-1,7-fenantrolina empregada por Graf et al

(2002)

Molock e Boykin (1982) estudaram as propriedades dos compostos

fenantrolínicos e arrolaram os deslocamentos químicos referentes aos hidrogênios e

carbono presentes em sua estrutura. Seus resultados são apresentados na Tabela 6

e Tabela 7 respectivamente.

TABELA 6 - Deslocamento químico de

H de RMN dos isômeros fenantrolínicos.

δ (H

) (ppm) em CDCl

Fenantrolina 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

1,7-

- 9,1 7,43 8,08 7,78 8,03 9,02 7,57 9,47

1,10-

- 9,15 7,53 8,15 7,68 7,68 8,15 7,53 9,15 -

4,7-

8,73 7,50 8,75 - 8,18 8,18 - 8,75 7,50 8,73

1,7-fenantrolina

1,10-fenantrolina

4,7-fenantrolina

FIGURA 13 – Isômeros fenantrolínicos apresentando o sistema de numeração

recomendado pela IUPAC

TABELA 7 - Deslocamento químico de

C de RMN de derivados fenantrolínicos

halosubstituídos

Fenantrolina 1 1a 2 3 4 4a 5 6 6a 8 9 10 10a

4,7-

dicloro-1,10-

146,8 150,2 123,7 142,7 126,7 123

4,10-

dicloro-1,7-

151,5 149,9 125,2 143 124,9 130,3 125,6 146,6 147,3 122,5 141,8 123,1

1,10-

dicloro-4,7-

142,7 150,6 149,9 122,3 122,3 132,1

4,10-dicloro-1,7-fenantrolina

4,7-dicloro-1,10-fenantrolina

1,10-dicloro-4,7-fenantrolina

1a'

4a'

1a'

4a'

FIGURA 14 – Isômeros fenantrolínicos halosubstituídos apresentando o sistema de

numeração recomendado pela IUPAC

3.2. PIRIDOQUINOLINA

O Chemical Abstract usa a nomenclatura piridoquinolina, para compostos

aza-substituídos derivados do antraceno.

N N

pirido[2,3-g]quinolina pirido[3,2-g]quinolina

FIGURA 15 – Representação esquemática da nomenclatura de acordo com a face

de ligação das piridoquinolinas

Considera-se ainda a numeração do triciclo conforme o exemplo a seguir:

4,6-tricloro-10-metil-pirido[3,2-g]quinolina

FIGURA 16 – Exemplo de numeração empregada nas piridoquinolinas.

Piridoquinolinas são moléculas planares com nitrogênios protonáveis, o que

facilita sua intercalação entre o par de bases do DNA. Sua atividade antimalarial,

anti-helmíntica e antitumoral foi investigada. (MATIAS et al.; 1996)

Hall et al. (1977) sintetizaram e testaram a atividade antialérgica de

compostos 1,7-fenantrolínicos (40) e pirido[3,2-g]quinolínicos (41), tendo alguns

derivados apresentado atividade até 250 vezes superior ao composto controle

utilizado.

R = CH

ou C

R = H

Z = grupo alquil ou H

R = CH

ou C

R = H

Z = grupo alquil ou H

40 41

FIGURA 17 – Estruturas 40 e 41 sintetizadas e estudadas por Hall et al. (1977)

quanto a sua atividade antialérgica.

Molock e Boykin (1983) descreveram a síntese da 4,6-dicloro-10-metil-

pirido[3,2-g]quinolina, contribuindo com estudos de síntese em múltiplas etapas de

compostos diazatriciclos. Empregando inicialmente reação de adição tipo Michael

de EMME à fenilenodiamina 42, esta conduziu a formação de enamina 43 que

sofreu ciclização térmica gerando o correspondente piridoquinolina-diéster-diona 44.

Este foi saponificado e descarboxilado formando 45 e convertido a 46 em 80% de

rendimento. Finalmente, o composto 46 foi submetido à reação de substituição

nucleofílica empregando 3-dimetilaminopropilamina originando 47 com 91% de

rendimento.

N N

(i)

(ii)

(iii)

(iv)

(v)

(vi)

FIGURA 18 – Síntese da 4,6-dicloro-pirido[3,2-g]quinolina e reação de substituição

por nucleófilo nitrogenado, por Molock e Boykin (1983).

Quast et al (1984) sintetizaram a pirido[3,2-g]quinolina 48 em rendimentos

globais moderados (35%) a partir da condensação de Friedländer, empregando

(i) refluxo 12 h/dimetil-

acetilenodicarboxilato

(ii) éter difefílico/ 260º - 265ºC/45 min

(iii) KOH 7%/refluxo – 12 h

(iv) Parafina 338º C/ 3 h

(v) POCl

/ 2 h

(vi) 3-dimetilamino-propilamina 165º -

175º C / 2 h

aldeído 4,6-diaminoisoftálico a fim de investigar propriedade antialérgica e antibiótica

de alguns dos seus derivados (Figura 19).

OHC

CHO

R=H, Me, t-Bu, Ph, CO

H E CO

FIGURA 19 – Síntese de pirido[3,2-g]quinolinas empregando a condensação de

Friedländer. (QUAST et al. (1984))

Matias et al. (1996), com o intuito de avaliar a atividade antimalarial de

derivados piridoquinolínicos, prepararam 4,6-dialcoxipirido[3,2-g]quinolinas e 4,6-

ditiopirido[3,2-g]quinolinas partindo da condensação do 2-metil-1,3-fenilenodiamina

(42) com acetoacetato de etila na presença de sulfato de cálcio e etanol em meio

ácido, formando o 2,6-bis-(carboetoximetilvinilamino)tolueno 49 em 2 horas, seguido

pela ciclização térmica em éter difenílico que conduziu à piridoquinolona 50 em 80%

de rendimento após 50 minutos de aquecimento a 250º C. A alquilação de 50 nas

posições 4 e 6 via catálise por transferência de fase com brometo de

tetrabutilamônio (TBAB) conduziu à formação de uma série de alcoxipirido[3,2-

g]quinolinas (51) e tiopirido[3,2-g]quinolinas (52) com rendimento entre 33-68% e

50-70%, respectivamente. Valores expressivos de concentração inibitória (IC

)

foram obtidos contra cepas de Plasmodium sp.

R R

(CH

)

(CH

)

(CH

)

(CH

)

(CH

)

X = C

(i)

(ii)

(iii)

(i) C

OH/CaSO

/ 80

(ii) Ph

O/ 250-260

(iii) RX/Tolueno/KOH 50%/TBAB

(iv) P

/Piridina

(iv)

(iii)

a: R = (CH

)

-N(CH

)

b: R = (CH

)

-N(CH

)

c: R = (CH

)

-N(C

)

d: R = (CH

)

-N[CH(CH

)

]

e: R =

f: R =

g: R =

h: R =

i: R =

FIGURA 20 – Síntese da pirido[3,2-g]quinolina susbtituídas por Matias et al. (1996)

empregando reação por transferência de fase.

Chevalier et al. (2001) estabeleceram o potencial de inibição da bomba de

efluxo de fluoroquinolonas em cepas resistentes de Enterobacter aerogenes,

empregando derivados piridoquinolínicos previamente sintetizados por Matias et al.

(1996). Testes indicaram que os compostos 51a, 51b e 51f apresentam

provavelmente ação como substrato competidor da bomba de efluxo e mostrou

efeitos similares com outras cepas de bactérias clínicas.

Segundo Malesani et al. (1984), mono- (53) e bis-piridoquinolinas ou

benzonaftiridinas (54) foram testadas em células de tumores ascíticos promovendo

inibição das células tumorais devido ao seu potencial intercalante, propriedade esta

associada à sua estrutura planar, tricíclica aromática e certa característica lipofílica.

Os testes demonstraram que a bis-piridoquinolina possui maior atividade que a

mono-piridoquinolina.

OMe

R = –CH

–CH

–OH; –CH

–CH(CH

)–OH; –

CH(CH

)–CH

–OH; –CH(C

)–CH

–OH–; –

–CH

–NH–CH

–CH

–OH

MeO

OMe

R = –CH

–CH(OH)–CH

–; –CH

–(CH

)

–CH

–;

–CH

–(CH

)

–NH–(CH

)

–CH

–; –CH

–(CH

)

–

NH–(CH

)

–CH

–; –CH

–(CH

)

–NH–(CH

)

–

NH–(CH

)

–CH

–

FIGURA 21 – Estruturas de mono e bis-piridoquinolinas testadas como antitumorais.

Gallo et al. (2003) a partir de 42 obtiveram através de duas etapas: reação

substituição nucleofílica alifática e termociclização, o composto linear 55

empregando o método de Matias et al (1996). 55 reage posteriormente com 1-

bromo-2-cloroetano, formando 56, que em seguida reage com a N,N-1,2-dietil-

diaminoetano originando o composto 57 (Figura 22). Outra rota sintética para a

introdução de um grupo doador de elétrons está descrita na Figura 23, que parte do

composto clorado 58 reagindo a 90º C por 14 horas com 59 empregando fenol como

solvente. Excesso do fenol é eliminado a vácuo, sendo o produto extraído com

e lavado com NaOH 10%. A fase orgânica é filtrada, concentrada e

cromatografada com metanol-amônia 0-10% originando em maior porcentagem 60.

(Br)Cl

Cl(Br)

NEt

R =

FIGURA 22 – Rota sintética de piridoquinolinas 4,6-substituídas empregada por

Gallo et al. (2003)

fenol

FIGURA 23 – Síntese de 4,6-piridoquinolinas apresentando amina terciária na

cadeia lateral. Em destaque a reação de substituição aromática nucleofílica entre 58

e o nucleófilo amina secundária.

Testes biológicos in vitro realizados por Gallo et al. (2003), indicaram que

pirido[3,2-g]quinolinas do tipo 57 atuam como anti MDR (Multidrug Resistance),

restaurando a atividade original das substâncias empregadas na quimioterapia. A

P-glicoproteína humana (P-gp) está relacionada ao MDR e causa um decréscimo no

acúmulo do agente terapêutico. As piridoquinolinas interagem com a P-gp inibindo-a.

4. OBJETIVOS

4.1 OBJETIVOS GERAIS

• Estabelecer o escopo da metodologia para as estruturas diazatricíclicas

aromáticas substituídas a partir dos derivados 1,3-fenilenodiamínicos do ácido

de Meldrum, empregando metodologia de dupla ciclização;

• Investigar a atividade leishmanicida e tripanocida in vitro dos compostos

obtidos.

4.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

• Sintetizar novos adutos fenilenodiamínicos do ácido de Meldrum a partir de

1,3-fenilenodiaminas comercialmente disponíveis;

• Sintetizar 1,7-fenantrolinas e pirido[3,2-g]quinolinas a partir de precursores

fenilenodiamínicos derivados do ácido de Meldrum;

• Investigar as reações de substituição nucleofílica aromática dos diaza-

heterociclos com nucleófilos nitrogenados;

• Caracterizar todos os novos compostos sintetizados por técnicas de

ressonância nuclear magnética de

H e

C e infravermelho;

• Submeter os compostos sintetizados a ensaios biológicos a fim de

estabelecer o seu potencial leishmanicida e tripanocida.

5. MATERIAL E MÉTODOS

5.1 MATERIAL

5.1.1 Reagentes

Produtos comerciais de pureza analítica foram empregados sem prévia

purificação, exceto quando mencionado no procedimento.

Nas análises cromatográficas em camada delgada (CCD) para o

monitoramento de reações e avaliação da pureza de reagentes e produtos, foram

empregadas placas de vidro de 2,5 cm por 7,5 cm revestidas com sílica gel

contendo indicador fluorescente (GF

254

- Merck). Os eluentes empregados como

fases móveis estão citados nos procedimentos. A revelação das cromatoplacas se

deu em câmera com radiação ultravioleta.

Na purificação dos compostos sintetizados empregaram-se técnicas de

cristalização, extração, cromatografia em coluna e cromatografia flash. Nas técnicas

cromatográficas foram empregados respectivamente os adsorventes sílica gel 60

(Merck) com granulometria de 63 – 200 µm e sílica gel G com granulometria de

40-63 µm.

5.1.1.1 Purificação do 2-amino-5-dietilaminopentano

O nucleófilo 2-amino-5-dietilaminopentano, procedência Aldrich, foi

previamente submetido à destilação simples e à pressão reduzida, sendo a pureza

do destilado avaliado por cromatografia gasosa.

5.1.1.1.1 Análise cromatográfica do 2-amino-5-dietilaminopentano

O produto destilado foi previamente diluído em diclorometano e submetido à

análise por cromatografia gasosa nas seguintes condições: coluna capilar de sílica

fundida (Simplicity-1/Supelco) com 30 m x 0,25 mm x 0,25 μm. Hélio foi empregado

como gás de arraste com vazão de 1 mL/min, estando o injetor a 250

C e o detector

a 280

C. A injeção da amostra de 0,2 μL foi conduzida no modo split/1:50,

empregando-se a seguinte rampa de aquecimento: temperatura inicial 60

C durante

4 min, seguido de aquecimento à taxa de 5

C/min até 190

C, permanecendo nesta

temperatura por 2 min, seguido de aquecimento à taxa de 10

C/min até 250

permanecendo nesta temperatura por 10 min, totalizando 48 min de análise.

5.1.2 Equipamentos

Balança analítica Metler modelo AB 204-S foi empregada na determinação

das massas dos materiais e as medidas de ponto de fusão não corrigidas foram

conduzidas em aparelho de aquecimento gradual do tipo Kofler.

As análises por espectrometria no infravermelho (IV) foram conduzidas em

espectrômetro Shimadzu Modelo Prestige – 21/FT8400S, empregando pastilhas de

KBr.

A análise por cromatografia gasosa foi realizada em equipamento da marca

Shimadzu, modelo GC – 14 B, empregando diclorometano (VETEC) como diluente.

As análises de RNM

C e

H foram realizadas em aparelho Bruker AC – 200

MHz para

H e 50 MHz para

C e Inova 300 - 300 MHz para

H e 50 MHz para

Utilizando clorofórmio deuterado (CDCl

) contendo tetrametilsilano (TMS) como

padrão interno, sendo os deslocamentos químicos expressos em valores de ppm e

as constantes de acoplamento (J) em Hertz (Hz).

5.2 PROCEDIMENTOS DE SÍNTESE

2,2-dimetil-1,3-dioxano-4,6-diona (Ácido de Meldrum) (62)

O O

Em Erlenmeyer de 250 mL foram colocados à temperatura ambiente ácido

malônico (26g; 0,25 mol), anidrido acético (30 mL; 0,30 mol) e ácido sulfúrico (0,75

mL). A mistura sob agitação magnética foi resfriada em banho de gelo, quando

então foi adicionado gota a gota 20 mL (0,27 mol) de acetona, mantendo-se a

temperatura reacional abaixo de 25 ºC. A solução foi agitada por mais 30 minutos

em banho de gelo e levada ao refrigerador por 24 horas. O sólido cristalino foi

coletado por filtração a vácuo e lavado com água gelada. A recristalização foi

conduzida pela dissolução em acetona (55 mL) a temperatura ambiente e posterior

adição de água destilada (110 mL), mantendo-se a mistura em banho de gelo por 1

hora. O sólido incolor assim obtido foi filtrado a vácuo, lavado com água gelada e

seco em estufa a vácuo, fornecendo 62 em 38-40 %.

p.f. 96,3 – 96,4 ºC (Segundo Graf e colaboradores (2002) p.f. 94 – 95 ºC)

5-Cloro-1,3-bis[(2,2-dimetil-4,6-dioxo-1,3-dioxano-5-ilidenometil)amino]benzeno

(37)

Em balão de fundo redondo de 250 mL foram colocados 62 (9,24g; 70 mmol) e

ortoformato de trimetila (100 mL) e levado a refluxo por 2 h sob atmosfera de N

. À

esta solução foi adicionada a 5-cloro-1,3-fenilenodiamina (35) (4,27g; 30 mmol) e o

refluxo continuado por mais 1 hora. A mistura foi então resfriada à temperatura

ambiente quando se adicionou éter de petróleo ou hexano (20 mL). O precipitado

formado foi coletado sob filtração a vácuo e lavado com etanol gelado.

Recristalizado em acetato de etila, forneceu o bis-aduto 37 em 65 % rendimento.

p.f. 221,5-223,3

C dec. (Segundo Graf e colaboradores (2002) p.f. 221

C).

H RMN (CDCl

, 200 MHz)

1,75 (s, 12H); 7,15 (s, 1H); 7,17 (s, 2H); 8,64 (d, 2H);

11,24 (d, 2H);

C RMN (CDCl

, 50 MHz)

27,1; 89,1; 105,6; 105,8; 115,6; 137,7;

140,5; 152,1; 162,9 ; 165,2.

5-cloro-1H,7H-[1,7]-fenantrolina-4,10-diona (38)

Em balão de fundo redondo de 50 mL foi adicionado éter difenílico (20 mL). A este,

sob refluxo, foi adicionado rapidamente o bis-aduto 37 (0,515 g; 1,14 mmol). Após a

completa adição retirou-se o aquecimento. A mistura foi resfriada à temperatura

ambiente, adicionando-se então 20 mL de hexano, mantendo-se a mistura em

repouso por 15 minutos. O precipitado formado foi filtrado a vácuo, lavado com

hexanos. O sólido coletado foi solubilizado em DMF a quente e adicionado água

para precipitação. O precipitado amarelo foi filtrado, lavado com água e seco em

estufa a vácuo fornecendo 38 em rendimento de 74 %.

p.f. > 250

C (Segundo Graf e colaboradores (2002) p.f. > 250

C).

4,5,10-Tricloro-1,7-fenantrolina (39)

A fenantrolona 38 (246 mg; 1 mmol) foi colocada em frasco de fundo

redondo de 50 mL com 5 mL de oxicloreto de fósforo recentemente destilado. A

mistura foi refluxada por 1 hora e resfriada em banho de gelo, quando então,

adicionou-se gelo picado (10 g) e 40 mL de água. Em seguida procedeu-se à

neutralização cuidadosa com solução de NH

OH 10 %. O produto foi filtrado e

lavado com várias porções de água. O precipitado foi solubilizado em clorofórmio,

filtrado e concentrado em evaporador rotatório, fornecendo o diazatriciclo 39 como

um sólido marrom em 20 % de rendimento.

p.f. 184-186

C (Segundo Graf e colaboradores (2002) p.f. 187-190

C).

4,5,10-tricloro-1,7-fenantrolina (39) – Procedimento Alternativo I adaptado

segundo Molock e Boykin (1983)

Frasco de fundo redondo 5 mL com 2 mL de oxicloreto de fósforo

recentemente destilado quando adicionou-se a fenantrolona 38 (104 mg; 0,42

mmol). A mistura foi refluxada por 1 hora, adicionando-se meio gota de água e

refluxando-se por mais 2 horas. A mistura reacional foi resfriada em banho de gelo e

adicionada, gota a gota com auxílio de uma pipeta Pasteur, a uma solução de

hidróxido de amônia 10 % (20 mL) com gelo picado (10 g) e em banho de gelo. O

produto foi filtrado e lavado com 2 mL de água, dioxano e xileno. O precipitado

marrom foi coletado a vácuo e seco (rendimento bruto 54 %). A purificação foi

realizada por coluna cromatográfica empregando como eluente acetato de etila. As

frações contendo o produto puro foram combinadas e concentradas em evaporador

rotatório, fornecendo o sólido amarelo 39 em rendimento de 26 %.

p.f. 186-187

C (Segundo Graf e colaboradores (2002) p.f. 187-190

C).

4,5,10-tricloro-1,7-fenantrolina (39) – Procedimento Alternativo II

A um frasco de fundo redondo de 5 mL com 2 mL de oxicloreto de fósforo

recentemente destilado foi adicionado 38 (0,104 g; 0,42 mmol). A mistura foi

refluxada por 2 horas. O excesso de POCl

foi removido por destilação a pressão

reduzida. À mistura reacional foi resfriada em banho de gelo e adicionada, gota à

gota com auxílio de pipeta Pasteur, à uma solução de NH

OH a 10 % (20 mL) com

gelo picado (10 g) e em banho de gelo. O produto foi filtrado e lavado com água. O

precipitado marrom foi coletado a vácuo e seco fornecendo o produto bruto em 63 %

de rendimento. A purificação foi realizada por coluna cromatográfica empregando

como eluente acetato de etila. As frações contendo o produto puro foram

combinadas e concentradas em evaporador rotatório, fornecendo o sólido amarelo

39 em rendimento de 41 %.

p.f. 187-189

C (Segundo Graf e colaboradores (2002) p.f. 187-190

C).

H RMN (CDCl

, 200MHz)

7,71 (d, 2H); 8,22 (s, 1H); 8,81 (d, 1H); 8,91 (d, J=4,7

Hz, 1H);

C RMN (CDCl

, 50 MHz)

122,7; 123,0; 126,0; 126,4; 131,7; 132,9; 141,7;

143,7; 147,3; 148,5; 150,4; 151,0.

2-metil-1,3-bis[(2,2-dimetil-4,6-dioxo-1,3-dioxano-5-metilideno)amino]benzeno

(63)

Em balão de fundo redondo de 100 mL foram colocados 62 (2,745g; 18,8

mmol) e ortoformato de trimetila (27 mL; 0,25 mol) sendo a mistura levada a refluxo

por 2 h sob atmosfera de nitrogênio. A esta solução foi adicionada a 2-metil-1,3-

fenilenodiamina (42) (1,059 mg; 8,68 mmol) e o refluxo continuado por mais 1 hora,

resfriada à temperatura ambiente, sendo a seguir adicionado hexanos (25 mL). Após

20 minutos em repouso o sólido foi coletado por filtração a vácuo, lavado com etanol

gelado (15 mL) e seco em estufa a vácuo. Recristalizado em acetato de etila,

forneceu bis-aduto 63, sólido bege claro em 75 % rendimento.

p.f. 248,4-251,7

C (decomp.)

IV (KBr) 3159 cm

-1

, 2995 cm

-1

, duas absorções em 1735 cm

-1

, 1678 cm

-1

, 1597 cm

-1

1500 cm

-1

, 1436 cm

-1

, 1205 cm

-1

e 1006 cm

-1

10-metil-1H,9H-pirido[3,2-g]quinolina-4,6-diona (45)

Em balão de fundo redondo de 100 mL foi adicionado éter difenílico (40 mL)

e levado a refluxo. A este foi adicionado rapidamente o bis-aduto 63 (955 mg; 2,22

mmol). Após a completa adição retirou-se o aquecimento. A mistura foi resfriada à

temperatura ambiente, adicionando-se então 40 mL de hexanos, mantendo-se a

mistura em repouso por mais 15 minutos. O precipitado formado foi filtrado a vácuo,

lavado com hexanos e seco em estufa a vácuo. O sólido coletado foi solubilizado em

DMF a quente (40 mL) e adicionando água para precipitação. O precipitado foi

coletado a vácuo e seco em estufa a vácuo. Após o produto foi agitado com hexanos

(20 mL) e seco em estufa a vácuo fornecendo 45 em rendimento de 85 %.

p.f. > 250

C decomp. (Segundo Molock e Boykin (1983) p.f. > 250 ºC decomp.)

4,6-dicloro-10-metil-pirido[3,2-g]quinolina (46)

5 6

Oxicloreto de fósforo (7 mL), recentemente destilado, foi colocado em frasco

de fundo redondo de 20 mL, aquecido à temperatura de 60 ºC e adicionado a

piridoquinolona 45 (0,456 g, 2,01 mmol). A mistura foi refluxada por 2 horas. A

mistura reacional foi resfriada em banho de gelo e adicionada gota a gota com

auxílio de uma pipeta Pasteur à solução de NH

OH 10 % (30 mL) contendo 15 g de

gelo picado, estando o frasco em banho de gelo. O precipitado marrom foi coletado

a vácuo, lavado com 7 mL de água, dioxano e xilenos e seco em estufa a vácuo.

Finalmente, este foi dissolvido em cicloexano a quente, filtrado e resfriado à

temperatura ambiente. O sólido amarelo formado foi coletado e seco em estufa a

vácuo, fornecendo 46 em 49 % de rendimento.

p.f. 201,6-202,4

C (Segundo Molock e Boykin (1983) p.f. 202-204 ºC).

IV (KBr) 3064 cm

-1

, 2920 cm

-1

, 2362 cm

-1

, 1589 e 1533 cm

-1

, 1446 cm

-1

, 1139 cm

-1

786 cm

-1

C RMN (CDCl

, 50 MHz)

; 150,46; 145,64; 143,66; 137,82; 125,08;

121,13; 118,62; 12,98.

H RMN (CDCl

, 200 MHz)

8,97; 8,93; 7,55; 3,36.

4,6-bis-(4-dietilamino-1-metil-butilamino)-10-metil-pirido[3,2-g]quinolina (64)

A 4,6-dicloro-10-metil-pirido[32,-g]quinolina (46) (288,9 mg; 1,10 mmol) foi

colocada em balão de fundo redondo de 5 mL com 1,74 mL (11 mmol) de 2-amino-5-

dietilamino-pentano 97 %. A mistura foi aquecida a 160 – 170 ºC por 8 horas e 30

minutos. Sendo controlada por cromatografia em camada delgada (eluição -

MeOH:Amônia 3:1 e AcOEt). Excesso de amina foi removido por destilação à

pressão reduzida. A mistura reacional foi basificada com KOH 10 % (pH 12),

extraída com três porções de 10 mL de clorofórmio. Fase orgânica foi concentrada

em evaporador rotatório fornecendo um resíduo oleoso. O óleo formado foi lavado

com hexanos a frio (3x10 mL) e posteriormente com hexanos a quente (5 X 10 mL).

O material extraído na lavagem a quente foi purificado por cromatografia flash com o

eluente MeOH e amônia (0 – 40 %) que forneceu um óleo marrom (21 mg). A

porção residual da lavagem a quente foi então submetida à extração contínua em

Soxhlet com 75 mL de hexanos por 10 horas. O material residual desta extração foi

finalmente purificado por cromatografia flash, sendo também eluído com MeOH e

amônia (0 – 40%), obtendo-se um sólido amarelo (19 mg) com ponto de fusão 61,9

ºC – 62,4 ºC. Os dados espectrais abaixo referem-se a mistura das duas frações

purificadas por cromatografia flash.

H RMN (CDCl

, 200MHz)

9,51(d, 1H); 8,63 (d, 2H); 6,29 (t, 2H); 4,86 (s, 1H); 3,65

(s, 1H); 3,28 (s, 3H); 2,00-2,60 (m); 0,80-1,80(m).

C RMN (CDCl

, 50 MHz)

151,41; 150,93; 145,66; 132,34; 117,53; 112,24; 95,95;

52,43; 48,52; 46,67; 34,10; 23,96; 19,82; 13,27; 11,00.

5.3. BIOENSAIOS (SILVA et al.,2007)

Dos compostos sintetizados

Solubilizados em Dimetilsulfóxido (DMSO) na concentração de 50 mg/mL,

filtrados em membrana de 0,22 mm e mantidos a 4°C até o uso. Como substâncias

controle foram utilizadas Benznidazol (Rochagan

) para os experimentos com T.

cruzi e a Anfotericina B para Leishmania amazonensis.

Parasitas

Neste estudo foram utilizadas formas tripomastigotas sangüíneas e

epimastigotas de cultivo celular da cepa Y de T. cruzi. e promastigotas de cultura de

Leishmania amazonensis (cepa 575), mantidos no Laboratório de Protozoologia da

UFSC.

Formas epimastigotas de T. cruzi foram cultivadas em meio de infusão de

fígado-triptose (LIT), enriquecido com 10% de soro inativo de coração fetal bovino

(FBS) e mantido a 28 ºC. Formas tripomastigotas foram coletadas no sangue de

ratos Swiss no 7º dia após a infecção. As formas promastigotas de L. amazonensis

foram cultivadas em meio de Schneider enriquecido com 5% FBS e mantido a 28 ºC.

Avaliação in vitro da atividade antiparasitária dos compostos sintetizados

contra formas epimastigotas de T. cruzi e promastigotas de Leishmania

amazonensis.

Os ensaios foram realizados em placas de culturas de 96 orifícios contendo

200 µL de uma suspensão de 5x10

parasitas/mL e diferentes concentrações do

composto estudado (1,000 a 1 µM) diluídos em dimetil-sulfóxido (DMSO).

Como controle, os parasitos foram incubados na ausência de compostos, na

presença de 1% de DMSO, 100 µM de Benznidazol para T. cruzi e 1 µM de

Anfotericina B para L. amazonensis.

Após adição dos compostos as amostras foram homogeneizadas e incubados

a 28°C por 72 horas. As placas foram avaliadas em microscópio pela contagem de

parasitas vivos em Câmara de Neubauer de acordo com Lunardi et al (2003).

Todos os ensaios foram realizados em triplicata.

Avaliação in vitro da atividade tripanocida dos compostos contra formas

tripomastigotas sanguíneos de T. cruzi (Cepas Y)

Os ensaios foram realizados em placas de culturas de 96 orifícios incubando

a 4 ºC por 48 horas, 200 µL de uma suspensão de 5x10

tripomastigotas/mL com

250 e 50 µM do composto estudado, diluído em DMSO como descrito por Brener

(1962).

Como controle, os parasitos foram incubados com 2% de DMSO e violeta

genciana (250 µg/mL).

Para avaliar a atividade dos compostos contra formas tripomastigotas

sangüíneos foi avaliado o número de parasitas vivos em 5 µL da suspensão em

microscópio com aumento de 400 vezes.

Todos os ensaios foram realizados em triplicata.

Toxicidade Celular – Citotoxicidade (CC)

A atividade dos compostos foi determinada em células Vero (ATC-CCL81)

utilizando o ensaio MTT (brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazol)

descrito por Sieuwerts et al (1995).

Células Vero (2x10

/mL) foram cultivadas por 72 horas em microplacas com

96 orifícios, no meio DMEM (meio de Eagle modificado por Dulbeccos) enriquecido

com 5% de FBS, 5% de CO

, 95% de umidade a uma temperatura de 37 ºC, na

presença dos compostos estudados em diferentes concentrações (1000, 200, 50 e

10 µM) (Roche

Como controle, os parasitos foram incubados na ausência de compostos, na

presença de 1% de DMSO, Benznidazol (100, 25 e 5 µg/mL).

Após a incubação, meio foi removido e incubado com 100 µL de solução de

MTT (2 mg/mL em DMEM) por 4 horas a 37 ºC/ 5 % CO

. Meio de cultura foi

removido e adicionado 100 µL de DMSO a cada orifício e homogeneizado por 5

minutos no agitador de microplacas. A leitura é feita na absorbância de 540 nm em

um leitor de elisa (ELX 800 Bio-Tek Instruments INC) e os resultados expresso como

percentagem de toxicidade nas células.

6. RESULTADOS E DISCUSSÃO

6.1 SÍNTESE E CARACTERIZAÇÀO DA 4,5,10-TRICLORO-1,7-FENANTROLINA

(39)

Na Figura 24 está representada a rota de síntese empregada na obtenção

do derivado 1,7-fenantrolínico 39.

O O

POCl

CH(OCH

)

3 h, reflux

1 h, reflux

3 h,

reflux

65%

70%

41%

FIGURA 24 – Esquema reacional de síntese da 4,5,10-tricloro-1,7-fenantrolina (39).

Esta tem início com a dupla adição de Michael envolvendo a 5-cloro-1,3-

fenilenodiamina (35) e o produto gerado in situ da reação entre o ácido de Meldrum

(62) e o ortoformato de trimetila. O bis-aduto 37 foi isolado com elevado grau de

pureza após adição de éter de petróleo ou hexanos ao meio reacional e lavagem do

sólido formado com etanol gelado. O produto puro foi obtido mediante cristalização

empregando acetato de etila. Sua análise por espectroscopia de ressonância

magnética nuclear de hidrogênio revelou 4 sinais distintos e uma relação típica

mediante a integração de 2:2:3:12. Os dubletos em 11,24 e 8,64 ppm, e com

constantes de acoplamento de aproximadamente 13,6 Hz, referem-se aos

hidrogênios N-H e =C-H (olefínico). Os 3 hidrogênios aromáticos apresentaram

deslocamento químico de 7,16 ppm, enquanto que os metílicos em 1,75 ppm

(singleto) e sinais em 7,27 e 2,17 referem-se ao clorofórmio deuterado utilizado

como solvente e acetona respectivamente (Anexo 1).

O espectro de RMN

C apresenta 10 sinais, dos quais apenas um na região

de carbono sp

, sendo tripleto em 77,013 refere-se ao clorofórmio deuterado

utilizado como solvente (Anexo 2). A sua estrutura molecular simétrica deveria

originar um espectro com no máximo 9 sinais. O fato de observarmos duas

carbonilas (165,2 e 162,9 ppm) esta associado a formação de ligação de hidrogênio

intramolecular, conforme representado em 37a.

O O

37a

FIGURA 25 – Representação da formação de ligação de hidrogênio intramolecular.

Na etapa seguinte, 37 foi adicionado a éter difenílico sob refluxo, formando o

triciclo angular 38. A termólise não somente promoveu a ciclização, como também a

descarboxilação e desacetonização. Este comportamento reacional distingue os

adutos do ácido de Meldrum daqueles dos ésteres do ácido malônico (Chen, 1991).

A formação preferencial do regioisômero angular pode ser explicada pela formação

de um intermediário 38a estabilizado por ligação de hidrogênio intramolecular. Ao

apresentar baixíssima solubilidade nos solventes comumente empregados na

espectroscopia de ressonância magnética nuclear, a estrutura molecular de 38 não

pôde ser comprovada por análise direta. No entanto, o seu derivado clorado

apresentou elevada solubilidade em clorofórmio. A cloração de 38 foi realizada com

cloreto de fosforila sob refluxo, conduzindo ao composto 4,5,10-tricloro-1,7-

fenantrolina (39), porém em baixo rendimento. Este rendimento provavelmente

deveu-se a dois fatores: (i) hidrólise durante a etapa de isolamento do produto, que

requer a neutralização do meio reacional por tratar-se de heterociclo básico, e (ii)

emprego de material de partida bruto.

A estrutura angular foi confirmada pelos 12 sinais observados em RMN

todos aromáticos (122,7-151,0 ppm) (Anexo 3). A estrutura linear simétrica deve

apresentar um número máximo de 7 sinais de carbono, conforme indicado na Figura

21. Dos 12 sinais observados, 7 apresentaram reduzida intensidade, própria dos

carbonos quaternários, sendo eles: 4, 5, 6, 5’, 4’, 11’ e 11 e algumas impurezas na

região dos alifáticos.

FIGURA 26 – Representação da estrutura linear indicando a equivalência das

posições.

Semelhantemente, o espectro de RMN

H (Anexo 4) apresentou sinais

compatíveis à estrutura angular assimétrica, destacando-se os dois dubletos em

8,81 e 8,90 ppm referentes aos dois hidrogênios “α” aos nitrogênios piridínicos. As

constantes de acoplamento observadas (4,8 e 4,7 Hz, respectivamente) são típicas

de sistemas π-deficientes, ou seja, aproximadamente a metade daquela observada

para

em sistemas aromáticos homocíclicos (Silverstein e Webster, 2000, p.

199). O singleto em 8,22 ppm refere-se ao hidrogênio benzenóide. Adicionalmente, a

integração revelou um sistema contendo uma relação igual a 1:1:1:2, totalizando 5

hidrogênios aromáticos. Sinais na região dos aifáticos são referentes a impurezas e

em 7,26 é sinal típico do clorofórmio deuterado utilizado como solvente.

6.2 SÍNTESE E CARCTERIZAÇÀO DA 4,6-DICLORO-10-METIL-PIRIDO[3,2-g]-

QUINOLINA (46)

Conforme descrito na Figura 27, a síntese da piridoquinolina 46 tem início

com a preparação do bis-aduto 63 em 75 % de rendimento. Semelhantemente ao

esquema reacional da Figura 24, o derivado alcoximetileno do ácido de Meldrum é

produzido in situ pela reação deste com ortoformato de trimetila. O produto final é

isolado do meio reacional por filtração após a adição de hexanos ou éter de petróleo.

Sua cristalização em acetato de etila forneceu o produto como um sólido bege em

elevado grau de pureza e com rendimento satisfatório (75%).

A caracterização parcial de 63 foi realizada por espectroscopia no

infravermelho empregando pastilhas de KBr (Anexo 5). Destaque para as bandas de

absorção em 3159 cm

-1

(deformação axial N-H); 2995 cm

-1

(deformação axial C-H

aromático); 1735 cm

-1

e 1678 cm

-1

(deformação axial C=O), esta última típica de

vinilólogo de amida; 1597 cm

-1

(deformação axial C=C); 1436 cm

-1

(deformação

angular C-H) e 1205 cm

-1

(deformação axial C-O).

A ciclização térmica em éter difenílico conduziu ao composto linear 46 em

rendimento elevado. Por serem comumente compostos de difícil purificação por

apresentarem baixa solubilidade nos solventes comumente disponíveis no

laboratório de química, o produto bruto foi exaustivamente lavado com hexanos para

remoção de éter difenílico e, após secagem, submetido à cloração com cloreto de

fosforila, obtendo-se 46 em rendimento global de 31 %, conforme representação

esquemática (Figura 27).

O O

POCl

CH(OCH)

3 h, reflux

1 h, reflux

3 h,

reflux

75%

85%

49%

FIGURA 27 – Modelo reacional esquemático da obtenção da 4,6-dicloro-10-metil-

pirido[3,2-g]quinolina (46).

Observou-se ao longo do trabalho que uma das etapas limitantes da rota

sintética proposta foi a cloração. O tempo de reação, relação estequiométrica e

métodos de extração foram estudados, tendo-se decidido pela diminuição no volume

de cloreto de fosforila empregado, pelo pré-aquecimento do cloreto de fosforila para

então proceder-se a adição da diona ao frasco reacional e alcalinização do meio

reacional vertendo-o à uma solução alcalina resfriada em banho de gelo. Tais

práticas conduziram a rendimentos mais elevados.

A análise comparativa dos dados de ressonância magnética nuclear de

carbono da piridoquinolina 46 descrita na literatura com os obtidos neste trabalho

(Anexo 6) confirma a estrutura proposta. Os dados espectrais estão arroladas na

Tabela 8. Dos oito sinais observados, número máximo esperado, quatro estão

relacionados aos carbonos quaternários 9a/10a,10, 4/6 e 4a/5a (Figura 28),

caracterizados pela intensidade de sinal reduzida. Tripleto em 77,000 refere-se ao

clorofórmio deuterado utilizado como solvente.

TABELA 8 – Comparativo de sinais de RMN

C da 4,6-dicloro-10-metil-pirido[3,2-

g]quinolina (46) e literatura.

Carbonos

2,8 9a, 10a 10 4,6 5 3,7 4a, 5a CH

Compostos

MB 149,9 145,4 142,9 137,7 124,6 120,7 118,1 12,9

46 150,4 145,6 143,6 137,8 125,0 121,1 118,6 12,9

A RMN

H (Anexo 7) apresentou quatro sinais que identificados na Tabela 9.

Estes, ao serem comparados com os sinais obtidos por Gallo et al (2003) para a

estrutura análoga 58, fornecem mais uma forte evidência de formação do isômero

linear proposto. A comparação com a estrutura 58 deveu-se ao fato de Molock e

Boykin (1983) não apresentarem em seu trabalho os dados espectrais de RMN

Os sinais abaixo de 3 ppm referem-se a impurezas na amostra e em 7,27 é sinal

típico do clorofórmio utilizado como solvente.

TABELA 9 – Comparativo de sinais de RMN

H da 4,6-dicloro-10-metil-pirido[3,2-

g]quinolina (46) e 4,6-dicloro-2,8,10-trimetil-pirido[3,2-g]quinolina (58)

Hidrogênios

5 2,8 3,7 CH

de 2,8 CH

de 10

Compostos

58 8,77 - 7,36 2,76 3,26

46 8,97 8,93 7,55 - 3,36

46 58

FIGURA 28 – Numeração da 4,6-dicloro-10-metil-pirido[3,2-g]quinolinas 46 e

análogo 58.

A utilização dessa metodologia de síntese apresenta-se eficiente quando

comparada a de Molock e Boykin (1983), que emprega derivados 5-alcoximetilênicos

do éster malônico ou diésteres do acetileno em parceria com as fenilenodiaminas.

Tais compostos não sofrem descarboxilação espontânea durante a termociclização,

diferentemente dos adutos do ácido de Meldrum. Portanto necessitam ser

saponificados e então descarboxilados para originarem os compostos heterocíclicos

de interesse. Convém salientar que as reações de ciclização dos derivados do ácido

de Meldrum são rápidas (em torno de 10 minutos), sendo o produto isolado por

filtração após diluição do meio reacional com éter etílico ou hexanos.

6.2.1 Síntese e caracterização da 4,6-bis-(4-dietilamino-1-metil-butilamino)-10-

metil-pirido[3,2-g]quinolina (64)

Os primeiros experimentos de substituição aromática nucleofílica entre o 2-

amino-5-dietilamino-pentano e a piridoquinolina 46 (Figura 29) foram insatisfatórios.

FIGURA 29 – Modelo estrutural da piridoquinolina e 2-amino-5-dietilamino-pentano

A análise da mistura reacional por cromatografia em camada delgada revelou

a formação de uma mistura complexa. Segundo Madrid et al. (2005), que empregou

2-amino-5-dietilamino-pentano como agente nucleofílico na reação de formação da

4-cloroquinolina (3), a presença de impurezas no nucleófilo impediu a formação do

produto desejado, sugerindo sua purificação prévia por destilação à pressão

reduzida. Sendo assim, decidiu-se pela destilação do nucleófilo, monitorando-se a

eficiência do processo de purificação por cromatografia gasosa. Após a destilação à

pressão reduzida do nucleófilo diamina foi possível avaliar a eficiência da técnica

mediante a separação de quantidade significativa de material residual não volátil e

pelo cromatograma obtido, constituído por um único sinal (Figura 30). Os picos

presentes no intervalo de 30 a 50 minutos referem-se ao adsorvente liberado a altas

temperaturas (acima de 220

C).

Data: Method: Ch=1

Chrom:LGM-NUD.C01 Atten:4

0 20 40

min

FIGURA 30 – Cromatograma do 2-amino-5-dietilamino-pentano após purificação por

destilação à pressão reduzida.

Procedimentos alterando o tempo da reação foram adotados sempre com o

acompanhamento da reação por cromatografia em camada delgada. Observou-se

que o tempo para o consumo total do reagente cai drasticamente quando a reação é

conduzida a 170

C, sendo concluída num tempo máximo de 8 horas, contra 22

horas a 120

A estequiometria também foi alvo de estudo, adotando-se uma relação 10:1

(nucleófilo:eletrófilo).

Investigou-se o procedimento reacional de Gallo et al. (2003) que emprega

fenol como solvente. A formação de mistura complexa impediu o isolamento de

qualquer produto. A fundamentação teórica para o emprego de fenol reside na

possibilidade de obtenção de produto intermediário mais reativo por apresentar

grupo de saída (fenolato) superior ao cloreto.

Diferente solventes de extração também foram testados, dentre eles, o álcool

isopropílico e o sistema binário benzina:benzeno (9:1) (Gallo et al., 2003). Nesta

etapa o resultado mais satisfatório foi alcançado quando a mistura reacional foi

submetida à extração com hexanos a quente em extrator Sohxlet.

O isolamento do produto final foi possível somente após cromatografia flash

em sílica gel empregando como eluente uma mistura metanol e amônia concentrada

sob condição de gradiente de polaridade (0 – 40 % v/v).

No procedimento adotado (p. 59), duas frações foram isoladas, sendo

posteriormente combinadas quando a análise por RMN

H revelou tratarem-se de

substâncias idênticas.

O espectro de RMN

H (Anexos 8 e 8a) confirma a ocorrência da reação de

substituição nucleofílica com a introdução de cadeia alifática (0,8-2,6 ppm). A metila

benzílica apresenta deslocamento de aproximadamente 3,30 ppm, semelhante ao

deslocamento observado no precursor diclorado, 3,36 ppm. A simplicidade do

padrão de sinais observado na região dos aromáticos indica a formação de um

produto simétrico. O dubleto em 8,6 ppm pode estar associado ao hidrogênio “α” ao

nitrogênio piridínico, por sua vez o tripleto em aproximadamente 6,3 ppm ao

hidrogênio “β”. Os sinais largos em 4,90 e 3,70 ppm, com proporcionalidade de 1:1,

referem-se aos hidrogênios ligados diretamente aos nitrogênios. Por razões

conformacionais os hidrogênios alifáticos não são equivalentes.

A análise de RMN

C (Anexo 9 e 9a-d) forneceu um espectro com a maioria

absoluta dos sinais desdobrados. Se ignorarmos os desdobramentos, adotando para

os deslocamentos valores médios, teremos um total de 15 (quinze) carbonos, 7 sp

(todos aromáticos) e 8 carbonos sp

. Estes dados são coerentes com a estrutura

molecular dissubstituída proposta. Sinais em 78 ppm referem-se ao clorofórmio

deuterado utilizado como solvente.

Na Tabela 10 e Figura 31 estão indicados os deslocamentos químicos de

carbono e as de estruturas análogas ao composto 64, respectivamente.

TABELA 10 – Comparativo de sinais de RMN

C da 10-metil-pirido[3,2-g]quinolina

substituídas

Compostos

47 57 60 64

151,2 159,90 159,17 151,414

150,2 150,55 157,65 150,938

145,5 145,90 146,44 145,664

133,8 132,20 133,00 132,340

117,3 115,80 119,17 117,536

109,4 109,80 116,61 112,240

96,2 96,90 107,96 95,957

- - 54,59 52,432

- 51,35 50,54 48,520

- 45,95 47,28 46,674

- 40,15 41,05 34,105

- 26,80 26,42 23,967

- - - 19,828

13,1 12,90 12,70 13,273

- 10,80 11,71 11,009

FIGURA 31 – Representação das estruturas 10-metil-pirido[3,2-g]quinolina

substituídas 47, 57, 60 e 64

Há grande semelhança nos deslocamentos químicos observados na região

dos aromáticos em 47 e 64. Com exceção de 47, todos os compostos têm seus

carbonos detectados e próprios de estruturas simétricas.

Complementarmente, o estado físico de 64 e seu ponto de fusão (61,9 – 62,4

C) assemelham-se ao composto 47 (pf. 76 – 78

C). O valor inferior observado para

o composto 64, embora apresentando maior massa molecular, deve-se

possivelmente a fator estéreo que diminui as interações por ligações de hidrogênio

por tratar-se de grupamento amino ligado a carbono secundário.

Investigação complementar se faz necessária para determinar se os

desdobramentos resultam de uma estrutura conformacional que perdeu a

coplanaridade do sistema aromático devido a presença de dois grupos volumosos

em posição “periplanar”.

6.3 BIOENSAIO ANTIPROTOZOÁRIO

Estudos quanto à atividade biológica dos compostos sintetizados neste

trabalho foram conduzidos pelo Laboratório de Protozoologia da Universidade

Federal de Santa Catarina.

Os compostos testados foram a 4,5,10-tricloro-1,7-fenantrolina (39) e 4,6-

dicloro-10-metil-pirido[3,2-g]quinolina (46). Os resultados quanto à atividade

leishmanicida e tripanomicida foram negativos para ambos.

Contudo estudos indicam que compostos tricíclicos nitrogenados

apresentam atividade antiparasitária.

Silva et al. (2007) sintetizaram e testaram à atividade leishmanicida e

tripanomicida de 65. A Tabela 11 apresenta os valores em IC

deste composto,

sendo que os ensaios antiparasitários também foram realizados com o seu precursor

diona 66 que não apresentou qualquer atividade. A atividade leishmanicida foi

superior à tripanocida, apresentando um satisfatório índice de seletividade

(aproximadamente 18), sendo este definido como o quociente da IC

para células

Vero pela IC

na avaliação leishmanicida (Guillon et al., 2007).

N N

FIGURA 32 – Estruturas tricíclicas obtidas por Silva et al. (2007)

TABELA 11 – Atividade antiparasitária in vitro contra formas epimastigotas de T.

cruzi, e formas promastigotas de Leishmania amazonensis e ensaio de

citotoxicidade

Compostos T. cruzi IC

(µM)

(Formas Epimastigotas)

L. amazonensis

(µM)

Vero Cells IC

(µM)

Benznidazol 12,5 nd 368,3

Anfotericina B nd 0,25 nd

65 20,4 8,6 141,3

Os testes antiprotozoários não foram realizados com 64 pela

indisponibilidade de material puro. Quando consideramos que piridoquinolinas

possam inibir o crescimento celular ao associarem-se ao DNA por intercalação,

espera-se que a presença das cadeias alifáticas com grupamento aminoterciário

possa conferir atividade à piridoquinolina pois tais grupos ampliam as interações

dipolo-dipolo e por ligações de hidrogênio com as bases nitrogenadas.

7. CONCLUSÃO

A metodologia empregada na preparação dos diazatriciclos mostrou-se

simples, eficiente e regiosseletiva. A regiosseletividade observada nas reações de

ciclização originou preferencialmente produtos angulares. O bloqueio da posição 2

com um grupamento metila, conduziu a formação do isômero linear desejável.

A formação dos derivados diazatriciclos clorados ocorreu em rendimentos

satisfatórios de 30 a 78 %, sendo caracterizados por análises no IV, RMN

H e

C e

ponto de fusão, apresentando dados compatíveis às estruturas propostas.

Os ensaios antiprotozoários, dos compostos 39 e 46, contra as formas

epimastigota e tripomastigota de Trypanosoma cruzi e forma promastigota de

Leishmania amazonensis forneceram resultados negativos.

A introdução de cadeias alifáticas no núcleo piridoquinolínico foi conduzida

com o nucleófilo nitrogenado 2-amino-5-(dietilamino)-pentano em condições

vigorosas. O produto majoritário formado foi isolado mediante exaustivo

procedimento de extração e purificação. Embora as análises de RMN sejam

indicativas da formação do composto 64 desejado, especialmente

C, análises

complementares se fazem necessárias para a completa caracterização deste

composto inédito.

A vasta aplicação desta classe de compostos piridoquinolínicos e

fenantrolínicos, justifica o aprimoramento de metodologias clássicas de síntese, e o

desenvolvimento de novas, buscando superar as limitações existentes.

Testes biológicos de 64 deverão ser realizados para verificar a importância

dos substituintes diaminados na atividade deste composto como agente

antiparasitário.

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ANEXOS

ANEXO 1 - Espectro: RMN

H 5-cloro-1,3-bis-[(2,2-dimetil-4,6-dioxo-1,3-

dioxano-5-metilideno)amino]benzeno (37) em CDCl

ANEXO 2 - Espectro de RMN

C do 5-cloro-1,3-bis-[(2,2-dimetil-4,6-dioxo-1,3-

dioxano-5-metilideno)amino]benzeno (37) em CDCl

ANEXO 3 - Espectro de RMN

C da 4,5,10-tricloro-1,7-fenantrolina (39) em

CDCl

ANEXO 4 - Espectro de RMN

H da 4,5,10-tricloro-1,7-fenantrolina (39) em CDCl

Cl Cl

ANEXO 5 - Espectro de infravermelho do composto 2-metil-1,3-bis[(2,2-

dimetil-4,6-dioxo-1,3-dioxano-5-metilideno)amino]benzeno (63) em KBr.

500750100012501500175020002500300035004000

1/cm

100

120

3159,40

2995,45

1735,93

1678,07

1597,06

1436,97

1205,51

1006,84

931,62

810,10

Deriv ado da 2-metil-1,3-f enilenodiamina

ANEXO 6 - Espectro de RMN

C da 4,6-dicloro-10-metil-pirido[3,2-g]quinolina

(46) em CDCl

ANEXO 7 - Espectro de RMN

H da 4,6-dicloro-10-metil-pirido[3,2-g]quinolina

(46) em CDCl

ANEXO 8 - Espectro de RMN

H da 4,6-bis-(4-dietilamino-1-metilbutil)amino-10-

metil-pirido[3,2-g]quinolina (64) em CDCl

ANEXO 8a - Espectro expandido (6,1-9,6 ppm) de RMN

H da 4,6-bis-(4-

dietilamino-1-metilbutil)amino-10-metil-pirido[3,2-g]quinolina (64) em CDCl

ANEXO 9 - Espectro de RMN

C da N´,N´-bis-(4-dietilamino-1-

metilbutil)amino-10-metil-pirido[3,2-g]quinolina (64) em CDCl

ANEXO 9a - Espectro expandido de RMN

C (0-36 ppm) da N´,N´-bis-(4-

dietilamino-1-metilbutil)amino-10-metil-pirido[3,2-g]-quinolina (64) em CDCl

ANEXO 9b – Espectro expandido de RMN

C (38-62 ppm) da N´,N´-bis-(4-

dietilamino-1-metilbutil)amino-10-metil-pirido[3,2-g]-quinolina (64) em CDCl

ANEXO 9c - Espectro expandido de RMN

C (94-125 ppm) da N´,N´-bis-(4-

dietilamino-1-metilbutil)amino-10-metil-pirido[3,2-g]-quinolina (64) em CDCl

ANEXO 9d – Espectro expandido de RMN

C (131-158 ppm) da N´,N´-bis-(4-

dietilamino-1-metilbutil)amino-10-metil-pirido[3,2-g]-quinolina (64) em CDCl

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