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ANDRÉ GATTI
Estudo da função glomerular em Golden Retrievers normais portadores e afetados pela
distrofia muscular progressiva (GRMD)
São Paulo
2007
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ANDRÉ GATTI
Estudo da função glomerular em Golden Retrievers normais, portadores e
afetados pela distrofia muscular progressiva (GRMD)
Dissertação apresentada ao Programa de Pós-
Graduação em Anatomia dos Animais
Domésticos e Silvestres da Faculdade de
Medicina Veterinária e Zootecnia da
Universidade de São Paulo, para obtenção do
título de Mestre em Ciências
Departamento:
Cirurgia
Área de Concentração:
Anatomia dos Animais Domésticos e Silvestres
Orientador:
Prof. Dr. Pedro Primo Bombonato
São Paulo
2007
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Autorizo a reprodução parcial ou total desta obra, para fins acadêmicos, desde que citada a fonte.
DADOS INTERNACIONAIS DE CATALOGAÇÃO-NA-PUBLICAÇÃO
(Biblioteca Virginie Buff D’Ápice da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo)
T.1884 Gatti, André
FMVZ Estudo da função glomerular em Golden Retrievers normais,
portadores e afetados pela distrofia muscular progressiva (GRMD) /
André Gatti. – São Paulo : A. Gatti, 2007.
97 f. : il.
Dissertação (mestrado) - Universidade de São Paulo. Faculdade de
Medicina Veterinária e Zootecnia. Departamento de Cirurgia, 2007.
Programa de Pós-Graduação: Anatomia dos Animais Domésticos e
Silvestres.
Área de concentração: Anatomia dos Animais Domésticos e Silvestres.
Orientador: Prof. Dr. Pedro Primo Bombonato.
1. Clearance. 2. Creatinina. 3. EDTA-cromo. 4. Medicina nuclear.
5. Distrofia muscular. I. Título.
FOLHA DE AVALIAÇÃO
Nome: GATTI, André
Título: Estudo da função glomerular em Golden Retrievers normais, portadores e
afetados pela distrofia muscular progressiva (GRMD)
Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação
em Anatomia dos Animais Domésticos e Silvestres da
Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da
Universidade de São Paulo para obtenção do título de
Mestre em Ciências
Data: ____/____/2007
Banca Examinadora
Prof. Dr.__________________________ Instituição:__________________________
Assinatura________________________ Julgamento__________________________
Prof. Dr.__________________________ Instituição:__________________________
Assinatura________________________ Julgamento__________________________
Prof. Dr.__________________________ Instituição:__________________________
Assinatura________________________ Julgamento__________________________
A minha mãe Sonia, que sempre lutou muito para que seus filhos pudessem estudar e se tornar pessoas de
boa índole, que sempre me apoiou e me deu amor. Te amo!
Ao meu pai Maurício, por sempre ter me dado seu apoio.
A meu grande Amor Patricia, por ter compreendido a minha ausência em diversas ocasiões e por sempre ter
me apoiado e incentivado, por sempre ter acreditado em mim e nunca ter me deixado desistir. Te amo muito!
A meu Avô Mário (in memórian) que foi mais que um pai e contribuiu muito na formação do meu caráter.
Agradecimentos
Ao professor Pedro Primo Bombonato, pela orientação neste trabalho, pela amizade e, sobretudo,
pelo carinho com seus alunos.
Ao grande Amigo Fabio Marques Chefe da Radiofarmácia do Instituto de Medicina Nuclear da
Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo
Ao professor Benedicto Vladimir de Martim, pois sem ele nada disto teria acontecido.
Ao professor Carlos Alberto Buchpiguel, por ter permitido o desenvolvimento da pesquisa e a
realização dos exames nas instalações do Instituto de Medicina Nuclear da Faculdade de Medicina da
Universidade de São Paulo
Ao professor Carlos Eduardo Ambrósio (Cajú), por ter sido meu co-orientador e ter me ajudado
sempre que precisei.
Ao meu patrão Valter Hato que sempre me incentivou a estudar e serviu de exemplo em diversas
ocasiões e por ter permitido que eu trocasse de horário para poder cumprir os créditos durante o mestrado.
Aos amigos da pós-graduação Andréia, Gabriela, Marcelo, Marcelo, João, Camila, Fernando,
Renata, Evander, Carlos, pela amizade e os momentos compartilhados durante este período.
À equipe do canil GRMD - Brasil : Dani, Drica, Marininha, Cris, Carlinha, Thais, Alida, Juliana
(Guará), Juliana, Matheus, Flávio (Maranhão), Marcelo (Rosas), Marã, Rosa e ao Augusto, pela amizade,
pelos cuidados e carinho que todos sempre demonstraram com os cães e pelos momentos (bons e ruins) que
passamos juntos durante os vário plantões.
Aos funcionários do Departamento de Anatomia dos Animais Domésticos e Silvestres, Jaqueline,
Maicon, Índio, João e Raimundo, por estarem sempre prontos a ajudar.
Ao meu cunhado Daniel por ter me ajudado com as fórmulas matemáticas.
A toda a minha família querida que sempre me apoiou.
A todas as pessoas que de alguma forma contribuíram para a realização deste trabalho.
A CAPES, pelo apoio financeiro.
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RESUMO
GATTI, A. Estudo da função glomerular em Golden Retrievers normais, portadores e
afetados pela distrofia muscular progressiva (GRMD) [Study of glomerular function in
golden retrievers normals, carriers and affected by progressive muscular dystrophy (GRMD)].
2007. 100 f. Dissertação (Mestrado em Ciencias) – Faculdade de Medicina Veterinária e
Zootecnia, Universidade de São Paulo, São Paulo,2007.
As distrofias musculares em crianças e adolescentes acometem 1 em cada 3000 nascimentos.
A distrofia de Duchenne é de origem genética e herança recessiva ligada ao cromossomo X,
sendo determinada pela ausência da proteína distrofina, apresenta caráter invariavelmente
progressivo, natureza mórbida e fim letal. Até o momento não se conhece tratamento efetivo,
mesmo com todo o conhecimento que se tem da etiopatogenia. O objetivo deste estudo foi
avaliar, no modelo animal, utilizando cães golden retrievers normais portadores e afetados
pela distrofia muscular progressiva, a existência de alterações na função glomerular, através
da comparação entre os clearances de creatinina, clearance do radionuclídeo EDTA-cromo e
da concentração sérica de uréia e creatinina. Os animais foram divididos em 3 grupos de 9
animais sendo grupo 1 controle, grupo 2 portador e grupo 3 afetados.
Todos os animais foram submetidos ao mesmos protocolos de exames. Não foram
identificadas alterações significativas entre os grupos ou individualmente, sendo que todos os
resultados encontraram-se dentro dos limites de normalidade. Sendo assim lesões renais
primárias, obscuras aos testes convencionais, descartando-se uma correlação entre a distrofia
muscular e lesão na musculatura dos vasos renais que pudessem levar a alterações da função
do órgão.
Palavras-chaves: Clearance, Creatinina, EDTA-cromo, Medicina nuclear, Distrofia muscular.
ABSTRACT
GATTI, A. Study of glomerular function in golden retrievers normals, carriers and
affected by progressive muscular dystrophy (GRMD). 2007. 100 f. Dissertação (Mestrado
em Ciências) – Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo,
São Paulo, 2007.
The muscular dystrophys in children and teenagers is taken in 1 each 3000 births. The
Duchenne`s dystrophy is from genetics origin and recessive heritage linked to X cromossome,
and also determined by the lacre of dystrophyne protein; it shows progressive characteristics,
morbid nature and a letal end. So far there is no known effective treatment, even with all the
ethiopatogein knowledge. The goal of use of normal golden retrievers dogs, bling then
carriers and affected by the progressive muscular dystrophy, the changing existence in the
glomerular function through the comparison between the creatinine clearance, EDTA-crome
clearance and seric urea and creatinine. Aiming the early diagnostic of the renal pathology.
The animals were divided in 3 groups of 9 animals, bling group 1 control animals, group 2
carriers animals and group 3 affected animals. All of then were submitted to the some
examinations protocols Their was no relevant identification between the groups or either
individually, as all the results were within the expected and natural limits. Likewise, renal
primary wounds are not clear in traditional tests made in dystrophyc animals, mainly caused
by the muscular wounds in reanal vases harming this way the organ function.
Key words: Clearance, Creatinine, EDTA-crome, Nuclear Medicine, Muscular dystrophy.
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 - Média com desvio padrão do volume de urina na solução A...................................46
Figura 2 - Média com desvio padrão do volume de urina na solução B...................................48
Figura 3 - Média com desvio padrão da concentração de creatinina na urina da solução A....50
Figura 4 - Média com desvio padrão da concentração de creatinina na urina da solução B....52
Figura 5 - Média com desvio padrão do clearance de creatinina na solução A (mL/min).......54
Figura 6 - Média com desvio padrão do clearance de creatinina na solução B (mL/min)........56
Figura 7 - Média com desvio padrão do clearance de creatinina na solução A e Clearance de
creatinina na solução B (mL/min)...............................................................................58
Figura 8 - Média com desvio padrão do clearance de creatinina na solução A (mL/Kg/min).60
Figura 9 - Média com desvio padrão do clearance de creatinina na solução B (mL/Kg/min)..62
Figura 10 - Média com desvio padrão do clearance de creatinina na solução A e do Clearance
de creatinina na solução B (mL/Kg/min) ................................................................64
Figura 11 - Clearance de EDTA-Cromo...................................................................................66
Figura 12 - Média com desvio padrão da dosagem de uréia sérica..........................................68
Figura 13 - Média com desvio padrão da dosagem de creatinina sérica...................................69
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 - Média com desvio padrão do volume de urina na solução A.................................46
Tabela 2 - Média com desvio padrão do volume de urina na solução B.................................48
Tabela 3 - Média com desvio padrão da concentração de creatinina na urina da solução A...50
Tabela 4 - Média com desvio padrão da concentração de creatinina na urina da solução B....52
Tabela 5 - Média com desvio padrão do clearance de creatinina na solução A (mL/min).......54
Tabela 6 - Média com desvio padrão do clearance de creatinina na solução B (mL/min).......56
Tabela 7 - Média com desvio padrão do clearance de creatinina na solução A e clearance de
creatinina na solução B (mL/min) ...........................................................................58
Tabela 8 - Média com desvio padrão do clearance de creatinina na solução A (mL/Kg/min).60
Tabela 9 - Média com desvio padrão do clearance de creatinina na solução B (mL/Kg/min).62
Tabela 10 - Média com desvio padrão do clearance de creatinina na solução A e do Clearance
de creatinina na solução B (mL/Kg/min).................................................................64
Tabela 11 - Média com desvio padrão do clearance de EDTA-Cromo....................................66
Tabela 12 - Média com desvio padrão da dosagem de uréia sérica..........................................68
Tabela 13 - Média com desvio padrão da dosagem de creatinina sérica..................................69
Quadro 1 - Fórmulas matemáticas representando os resultados obtidos..................................70
LISTA DE APÊNDICES
Apêndice A - Contador automático Perkin Elmen Precisely 1480 Automatic Gamma
Counter Wizard™3” (utilizado para realizar a contagem de atividade radioativa nas
amostras de Sangue)...........................................................................................................................88
Apêndice B - ContadorautomáticoPerkinElmenPrecisely1480AutomaticGammaCounter
Wizard™3”
................................................................................................................................89
Apêndice C – Amostras de sangue sendo analisadas pelo contador automático......................90
Apêndice D – Animal afetado pela distrofia muscular progressiva..........................................91
Apêndice E – Animal afetado pela distrofia muscular progressiva em fase terminal..............92
Apêndice F – Animal afetado pela distrofia progressiva em plataforma utilizada para
alimentação...............................................................................................................................93
Apêndice G - Planilha com a curva de decaimento da atividade plasmática de EDTA,
expressando o valor do clearance de EDTA-Cr........................................................................94
Apêndice H – Planilha do Exel, com os resultados do Clearance de EDTA Cr......................95
Apêndice I – Planilha de procedimentos utilizada na rotina da Clínica de Medicina Nuclear da
Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo.......................................................96-97
ABREVIATURAS
A - Grupo afetado
ABDIM - Associação Brasileira de Distrofia muscular
BD - Becton, Dickenson and Company
C - Grupo controle
CK - Creatino-quinase
Ccr - Clearance de creatinina endógena
Cr - Creatinina
51
Cr-EDTA - Cromo - 51 ethylenediaminetetra-acetic acid
CXMD - Canine X-linked muscular dystrophy
DMB - Distrofia Muscular do tipo Becker
DMC - Distrofia Muscular do tipo Cinturas
DMD - Distrofia Muscular do tipo Duchenne
DMP - Distrofia Muscular Progressiva
DMPs - Distrofias Musculares Progressivas
DMS - Distrofia Muscular do tipo Steinert
DNA - Ácido desoxirribonucléico
FMVZ-USP - Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia de São
Paulo
FSHD - Facioscapulohumeral muscular dystrophy
GRN - Golden Retriever Normal
GRMD - Golden Retriever Muscular Dystrophy
HFMD - Hipertrophic Feline Muscular Dystrophy
IPEN-SP - Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares de São Paulo
MDX - X-linked murine dystrophy
mg - Miligrama
mg/Kg - Miligrama por quilo
mL - Mililitro
P - Grupo portador
TFG - Taxa de Filtragem Glomerular
Ur - Uréia
µCi - Microcurie
99
Tc-DTPA - Tecnécio – 99 diethylenetriaminepentaacetic
% - Porcentagem
®
- Marca registrada
™
- Trade Mark (Marca registrada)
% - Porcentagem
SUMÁRIO
1 INTRODUÇÃO....................................................................................................................20
2 REVISÃO DE LITERATURA...........................................................................................25
2.1 Aspectos relacionados a Distrofia Muscular de Duchenne...........................................26
2.2 Aspectos relacionados a função renal..............................................................................32
3 MATERIAL E MÉTODOS ................................................................................................36
3.1 Animais..............................................................................................................................37
3.2 Radiofarmacos...................................................................................................................38
3.3 Clearance de creatinina endógena...................................................................................38
3.4 Clearance de EDTA-Cromo.............................................................................................38
3.5 Bioquímica sérica e urinária............................................................................................39
3.6 Delineamento do experimento..........................................................................................39
3.7 Análise dos resultados.......................................................................................................41
3.7.1 Método.............................................................................................................................41
3.7.1.2 Hipótese de igualdade entre os grupos......................................................................41
3.7.1.3 Análise de Variância (ANOVA).................................................................................42
4 RESULTADOS.....................................................................................................................44
5 DISCUSSÃO.........................................................................................................................71
6 CONCLUSÕES ...................................................................................................................78
REFERÊNCIAS......................................................................................................................80
APÊNDICES............................................................................................................................87
INTRODUÇÃO
21
Introdução
1 INTRODUÇÃO
As afecções renais em cães e gatos são consideradas um desafio na Medicina
Veterinária, geralmente em muitas alterações o diagnóstico é feito tardiamente quando
a extensão da lesão renal já esta muito avançada.
Os caninos domésticos são acometidos por diversas doenças renais que podem
acarretar insuficiência funcional do órgão, porém isto não se traduz necessariamente
em uma “insuficiência renal”, pois esta condição depende da quantidade de
parênquima lesado e da severidade das lesões. (OSBORNE; FINCO, 1995).
A insuficiência renal primária pode ser determinada por várias doenças que
levam ao não funcionamento de pelo menos três quartos dos néfrons de ambos os rins,
quando não há hipertrofia compensatória. A diferenciação entre doença renal e
insuficiência renal é importante para se adotar uma conduta terapêutica adequada para
cada caso, uma vez que o tratamento para correção de um desequilíbrio hídrico,
eletrolítico, ácido-básico, nutricional e endócrino em pacientes com insuficiência renal
pode não ser adequado para o tratamento de pacientes com doença renal sem
apresentar insuficiência (OSBORNE; FINCO,1995).
Os dois parâmetros mais freqüentemente utilizados para avaliar a função renal
são as concentrações de uréia e creatinina plasmáticas, (BIEWENGA; VAN DEN
BRON 1981), porém, estes parâmetros mostram-se insatisfatórios uma vez que só se
acumulam significativamente no sangue quando já existem 50% ou mais de néfrons
não funcionais (GRANERUS, 2000). Estes valores também podem sofrer influências
extra-renais (MOE; HEIENE, 1995).
Diferentes pesquisadores têm calculado a taxa de filtragem glomerular (TFG)
através da diminuição das concentrações plasmáticas de radiofármacos que
22
Introdução
apresentam filtração glomerular, como
99m
Tc-DTPA e 51Cr EDTA. (FAWDRY et al.
1985; GLEADHILL et al. 1995; MOE; HEIENE, 1995)
As distrofias musculares em crianças e adolescentes acometem 1 em cada
3000 nascimento (EMERY, 1994), dentre as distrofias musculares a Distrofia
Muscular de Duchenne (DMD) é de origem genética e herança recessiva ligada ao
cromossomo “X”, determinada pela ausência da proteína distrofina, que normalmente
pode ser encontrada em vários tecidos e de maneira mais evidente na musculatura
esquelética. De caráter invariavelmente progressivo, natureza mórbida e fim letal, a
DMD ganhou grande importância nos meios científicos, principalmente porque todas
as tentativas de tratamento não foram comprovadamente eficazes, mesmo com todo o
entendimento que se tem da sua etiopatogenia. (BOGDANOVICH et al., 2004)
A ausência da proteína distrofina também é encontrada em outras espécies
animais, como cães, gatos, ratos, peixes e invertebrados. Ainda que estas espécies
apresentem fenótipos diferentes, devido a uma aparente resposta específica da
ausência da distrofina em cada uma delas, estes modelos animais vêm sendo estudados
na tentativa de se identificar um tratamento eficaz, através da integração dos achados.
Segundo Vainzof et al. (2005), estudos realizados nos modelos animais são cruciais
para aumentar os conhecimentos a respeito de doenças genéticas humanas e
investigação de novas terapias experimentais.
O modelo animal mais comum para a Distrofia Muscular de Duchenne é o mdx
mouse (COLLINS; MORGAN, 2003), devido a facilidade de manipulação do genoma
murino (VAINZOF et al., 2005). Apesar do mdx ser um homólogo desta doença, o
dano e a função muscular são comparativamente menos intensos do que em humanos,
resultando em um tempo de sobrevida próximo do normal. A ausência de distrofina
para o mdx é menos crítica para a função muscular do camundongo, que para os
23
Introdução
humanos (COLLINS; MORGAN, 2003). Ainda, esse modelo apresenta um número de
fibras revertentes, entre dois e três por cento, que passam a sintetizar novamente, de
forma espontânea a distrofina (VAINZOF et al., 2005)
Segundo Shelton e Engvall (2005), os roedores são importantes fontes de
estudo da patogênese e efeitos da manipulação genética e transplante celular, porém,
os estudos com caninos e felinos vêm fornecendo dados de maior relevância clínica,
uma vez que são modelos para o teste de novas terapias, avaliando os benefícios das
mesmas em termos de função, tem sido o mais estudado (COLLINS; MORGAN,
2003). O modelo GRMD (Golden Retriever Muscular Dystrophy) apresenta as
alterações musculares mais próximas daquela encontradas nos humanos, além de
existir diversas similaridades entre os cães afetados e os pacientes portadores de DMD
(HOWELL et al., 1997). Entre elas encontramos a atividade aumentada de CPK,
atrofia muscular associadas a contraturas, necrose muscular, degeneração e
mineralização com regeneração concomitante, fibrose do endomisio e perimisio e
cardiomiopatias. Assim, como em pacientes portadores da DMD, cães jovens
freqüentemente morrem devido à parada cardíaca ou respiratória, ainda que muitos
sobrevivam e alcancem alguns anos de vida (NGUYEN et al., 2002). Segundo Howell
et al., (1997) alguns animais GRMD vivem por mais de seis anos de vida, com outros
indo a óbito nos primeiros dias de vida, devido à forma “neonatal fulminante”da
doença.
Um homólogo da DMD é também observado em diferentes raças de cães,
como o Golden Retriever, Rottweiller, Pointer, Beagle e, dentre estas, o modelo de
distrofia muscular no Golden Retriever.
Caso seja encontrada a ocorrência de alterações na filtragem glomerular dos
cães portadores ou afetados, pode-se sugerir a utilização do método para avaliação de
24
Introdução
mulheres portadoras de distrofia muscular de Duchenne (DMD) com idade acima dos
quarenta anos, visando detectar precocemente alterações na taxa de filtragem
glomerular.
Nesta pesquisa pretende-se estudar a função renal nos cães da raça Golden
Retriever, normais, afetados e portadores de distrofia muscular, através da comparação
entre os clearance de creatinina e do radionuclídeo 51CrEDTA bem como através da
avaliação da concentração sérica da uréia e creatinina, visando-se diagnosticar
precocemente alterações e/ou doenças renais.
REVISÃO DE LITERATURA
26
Revisão de Literatura
2. REVISÃO DE LITERATURA
2.1 ASPECTOS RELACIONADOS A DISTROFIA MUSCULAR TIPO DUCHENNE
As distrofias musculares progressivas (DMPs) são miopatias hereditárias,
associadas à fraqueza muscular progressiva, destruição e regeneração das fibras
musculares e substituição final das fibras por tecido conjuntivo fibroso e adiposo.
(ENGEL, 1990; EMERY, 1994). Atualmente, são conhecidos mais de trinta tipos
diferentes de distrofias musculares progressivas, porém avanços em estudos de
biologia molecular sugerem que esse número possa ser ainda maior, sendo algumas
benignas e outras mais graves, podendo atingir crianças e adultos de ambos os sexos;
todas afetando a musculatura, porém diferenciando o grupo muscular acometido de
acordo com o tipo de DMP. (ZATZ PASSOS BUENO, 1995; ABDIM, 2003;).
Atualmente a classificação das distrofias é feita através do modo de herança, idade de
início, rapidez de progressão, distribuição dos músculos afetados e achados associados
nos músculos e outros órgãos. As principais DMP nos humanos são: Distrofia
Muscular de Duchenne (DMD), Distrofia Muscular do tipo Becker (DMB), Distrofia
Muscular do Tipo Cinturas (DMC), Distrofia Miotônica de Steinert (DMS) e Distrofia
Muscular Fácio-Escápulo-Umeral (FSH), sendo que a mais grave e a mais comum é a
Distrofia Muscular de Duchenne (DMD). (ABDIM, 2003)
A distrofia muscular tipo Duchenne tem caráter mundial não havendo
diferenças éticas, nem geográficas na sua distribuição populacional. (NICHOLS et al.,
1994; ZATZ; PASSO BUENO, 1995; BIBLIOMED, 2004)
27
Revisão de Literatura
A distrofia muscular de Duchenne é a mais comum desordem neuromuscular
recessiva associada ao cromossomo “X”, onde cerca de 2/3 dos casos são herdados da
mãe, que é chamada de portadora assintomática do gene, e nos 1/3 restantes dos casos
ocorre nova mutação na criança com distrofia, sem que o gene tenha sido herdado
(ABDIM, 2003; ERRINGTON et al., 2003). Portanto, cabe as mulheres apenas o
papel de portadoras do gene mutante, sendo que até hoje foram descritos raríssimos
casos de mulheres portadoras manifestas, com sinais e sintomas brandos ou alterações
laboratoriais pouco significativas (BIBLIOMED, 2004). A distrofia tipo Duchenne é
caracterizada pela ausência da proteína distrofina que causa degeneração progressiva
do músculo esquelético cardíaco. As crianças afetadas locomovem-se por meio de
cadeiras de rodas e geralmente vêm a óbito antes dos 30 anos de idade. (KORNEGAY
et al., 1988; SHELTON et al., 2001; BERGMAN et al., 2002; CHILDERS et al., 2002;
NGUYEN et al., 2002; BOGDANOVICH et al., 2004, LIU et al., 2004;). As mulheres
portadoras de DMD podem demonstrar fraqueza muscular e cardiomiopatia dilatada
(HOOGERWAARD et al., 1999).
Esse tipo de distrofia se manifesta na idade de três a cinco anos através de
dificuldade na atividade locomotora, hipertrofia das panturrilhas, baixa estatura, altos
índices de atividade de creatino-quinase (LUI et al., 2004) e em algumas crianças
retardamento mental.
A incapacidade de andar se verifica por volta dos 10 anos de idade, o óbito
ocorre próximo dos trinta anos de idade e se dá normalmente devido à falência
respiratória ou do músculo cardíaco (LUI et al., 2004).
Quanto à fisiopatologia da distrofia de Duchenne, sabe-se que ocorrem
deleções, duplicações ou mutações de ponto na banda Xp21 do gene responsável pela
síntese da proteína distrofina, localizado no braço curto do cromossomo X. (BERRY,
28
Revisão de Literatura
GASCHEN; AKERMAN, 1992; BIBLIOMED, 2004). A distrofina participa do
arranjo citoesquelético do miócito, ligando este ao sarcolema da matriz extracelular.
Portanto é uma proteína indispensável para o bom funcionamento do músculo
esquelético em geral, uma vez que a sua ausência possibilita o influxo de cálcio e
outras moléculas provenientes do líquido extracelular para o interior das fibras
musculares, culminando com a necrose dessas fibras (BIBLIOMED, 2004). A DMD é
então caracterizada por necrose e regeneração muscular. Eventualmente, a regeneração
pode não prosseguir com a necrose, resultando em progressiva perda muscular.
(NICHOLS et al., 1994).
Os primeiros sintomas da doença, nos humanos, são retardo do
desenvolvimento, dificuldade para correr e subir escadas, quedas freqüentes e aumento
das panturrilhas. (ENGEL, 1990; ZATZ; PASSO BUENO, 1995).
Após a perda da capacidade de deambulação, os músculos diminuem de
tamanho e a fraqueza dos músculos paraespinhais gera uma sifoescolióse progressiva;
ocorre ainda fraqueza dos músculos respiratórios e formação de cicatrizes na região
posterobasal do ventrículo esquerdo. (ENGEL, 1990). Os achados laboratoriais mais
freqüentes são: aumento, muito acentuado, dos valores de creatino-quinase (CK), que
chegam a estar cerca de vinte vezes o valor normal, esse aumento ocorre mais na fase
inicial da doença, diminuindo à medida que poucas fibras musculares restam para
serem destruídas. O diagnóstico definitivo é feito através do exame do DNA, e caso
este seja negativo, deve-se realizar a biópsia muscular (de preferência da panturrilha)
para a pesquisa da proteína distrofina através do método de Western-Blot.
(BIBLIOMED, 2004).
O modelo animal mais utilizado para estudo da distrofia muscular de Duchenne
é o camundongo mdx (X-linked murine dystrophy), no qual a homóloga mutação
29
Revisão de Literatura
também resulta em deficiência de distrofina. Assim como nos humanos os
camundongos mdx tem recorrente necrose das fibras musculares; no entanto a
regeneração é muito eficiente e os camundongos não sofrem perda generalizada de
fibras musculares e fraqueza. O modelo canino da distrofia muscular de Duchenne
denominado cxmd (canine X-linked muscular dystrophy), com similar mutação, pode
ser superior ao camundongo, uma vez que o tamanho e os sintomas dos cães são muito
próximos ao dos humanos. (NICHOLS et al., 1994).
A distrofia muscular ligada ao sexo e associada à deficiência de distrofina, tem
sido registrada em várias raças de cães, mas é melhor caracterizada no Golden
Retriever. (BERGGMAM, 2002). Howell et al. (1997) consideram os cães da raça
Golden Retriever, afetados pela distrofia muscular denominados GRMD (Golden
Retriever muscular Dystrophy), como excelentes modelos para o estudo da eficácia da
geneterapia em miopatias por deficiência de distrofina, pois há muitas similaridades
fenotípicas e genotípicas entre cães afetados e meninos com DMD. (SHELTON, 2001;
NGUYEN et al. 2002).
Até bem pouco tempo as miopatias espontâneas nos animais, especialmente
nos cães, eram consideradas raras. (MEIER, 1958 apud MCKERRELL, 2001, p 690).
Atualmente já são reconhecidas mais de vinte miopatias caninas , fato este atribuído ao
avanços nos métodos de investigação. (DUNCAN; GRIFFITHS, 1986 apud
MCKERRELL, 2001, P. 690). A hereditariedade está presente em muitas dessas
miopatias. Varias delas apresentam manifestações clínicas como: disfagia,
regurgitação, megaesôfago (podendo levar à pneumonia aspirativa), anormalidades da
marcha e redução na tolerância a exercícios. (MCKERRELL, 2001).
A distrofia muscular ligada ao cromossomo x dos Golden Retrievers (GRMD)
é uma das mais drásticas dentre as miopatias que acometem os cães. (MCKERRELL,
30
Revisão de Literatura
2001). Como nos humanos, nos cães também falta a transcrição do gene de Duchenne
e por conseqüência a proteína relacionada a distrofina. (SHELTON, 2001). O sinais
clínicos começam a se manifestar entre a sexta e oitava semana de idade, embora
alterações patológicas nos músculos possam ser encontradas desde o nascimento. Os
cães machos afetados cansam-se com facilidade, apresentam andadura alternante
anormal, caracterizada por passadas rígidas e curtas; podem ainda apresentar redução
na capacidade de abrir os maxilares e dificuldade na apreensão e deglutição de
alimentos; a maior parte da musculatura esquelética torna-se atrófica, porém certos
grupos musculares e a língua, apresentam-se com hipertrofia. (MCKERRELL, 2001).
A morte espontânea em neonatos distróficos é comum nas duas primeiras semanas de
vida porém ela normalmente ocorre por volta do seis meses; e caso os animais
sobrevivam a este período de crise podem chegar a viver de três a cinco anos. (2002;
SAMIEI, 2000; NGUYEN et al.).
A cardiomiopatia decorrente da DMD é comum tanto em humanos quanto em
cães, porém os pacientes portadores de DMD acabam por vir a óbito devido à atrofia
dos músculos respiratórios antes de desenvolverem cardiomiopatia. Outra diferença é
que os cães podem continuar a movimentar-se com os precoces problemas musculares,
uma vez que são quadrúpedes, mas os meninos afetados perdem a habilidade de
ficarem eretos e precisam utilizar-se de cadeiras de rodas. (SAMIEI, 2000).
Brazeau et al., (1992) enfatizam que além de todas as alterações musculares,
existe a possibilidade do acometimento de outros sistemas não musculares, no estado
distrófico da doença. Em seu estudo para avaliação da eficácia de uma determinada
droga que seria utilizada no tratamento das distrofias, observaram que os
camundongos mdx estudados apresentaram indícios de disfunção hepática e renal
baseados nas alterações séricas encontradas nos exames bioquímicos, bem como
31
Revisão de Literatura
durante a necropsia, pela diferença de peso desses órgãos em comparação com os
órgãos de animais normais. Além desses autores, outros também relatam alterações em
órgãos internos de humanos e animais distróficos. (BAROHN et al. 1988; MORIUCHI
et al. 1993; MUSATELLI et al., 1994)
Myatake et al. (1989 apud BRAZEAU, 1992,p. 180) e Nowak et al. (1982 apud
BRAZEAU, 1992, p. 180) observaram que pacientes com DMD apresentavam
alterações patofisiológicas na motilidade gástrica.
Moriuchi et al. (1993) pesaram o coração, fígado e rins, de pacientes humanos
com DMD, em autópsias, e observaram atrofia do fígado e do coração em pacientes
com idade mais avançada e atrofia dos rins, somente em alguns pacientes que se
apresentavam extremamente definhados.
Segundo Muscatelli et al. (1994) a hipoplasia congênita das glândulas adrenais
pode ocorrer como parte de uma síndrome junto a distrofia muscular de Duchenne
e/ou por deficiência de glicerol-quinase, sendo que o hipogonadismo
hipogonadotrópico, freqüentemente, está associado a esta desordem. Ainda é incerto
se há um único gene responsável por estas duas doenças, ou se são dois genes
distintos. A deficiência de glicerol quinase, por sua vez, tem sido descrita
isoladamente ou em complexos fenotípicos incluindo a hipoplasia congênita das
glândulas adrenais e a distrofia muscular de Duchenne. Outros achados clínicos no
complexo de deficiência de glicerol quinase são: retardamento mental, pequena
estatura e hipogonadismo hipogonadotrópico. (PILLERS et al., 1990).
Berry; Gaschen e Akerman, (1992) encontraram alterações radiográficas e
ultrassonográficas em vários órgãos de felinos com distrofia muscular hipertrófica,
denominada HFMD (Hypertrophyc Feline Muscular Dystrophy), distrofia esta,
considerada análoga à de Duchenne e à dos Golden Retrievers, uma vez que também
32
Revisão de Literatura
há ausência de distrofina no músculo (MCKERRELL, 2001). Foram por eles
observadas as seguintes alterações: hepatoesplenomegalia, renomegalia, efusão
peritoneal, mineralização das glândulas adrenais, espessamento da porção muscular do
diafragma, hipoecogenicidade do parênquima hepático e hiperecogenicidade da
cortical e medular renal.
2.2 ASPECTOS RELACIONADOS A FUNÇÃO RENAL
Segundo Dyce, et al. (1990) e Ellenport (1986) os rins dos carnívoros são
“retroperitoneais”, curtos, grossos e em forma de feijão. O rim direito relaciona-se
medialmente à glândula adrenal direita e à veia cava caudal, lateralmente à última
costela e à parede abdominal e ventralmente ao fígado e pâncreas. O rim esquerdo
relaciona-se cranialmente ao baço (ou estômago, quando este está cheio), medialmente
à glândula adrenal esquerda e à aorta, lateralmente à parede abdominal e ventralmente
ao cólon descendente. Na cadela, os pólos caudais de ambos os rins se relacionam aos
mesovários envoltos por tecido adiposo e aos ovários. O rim direito não está sujeito a
muita variação em sua posição, diferente do rim esquerdo, que está frouxamente
inserido pelo peritônio e cuja posição pode ser afetada pelo grau de distensão do
estômago.
De modo geral, a superfície renal é levemente convexa, exceto pela existência
de uma depressão na borda medial, denominada seio renal. O hilo renal abre-se neste
seio, e através dele passam o ureter, os vasos sanguíneos e nervos renais. Seu
parênquima é dividido em córtex e medula e é envolto por uma forte cápsula fibrosa.
A medula apresenta segmentos em forma de pirâmides, cujos ápices, as papilas renais,
o interior de expansões em forma de cálices. No caso do rim canino, que é
unipiramidal, não há cálices, e os ápices das pirâmides, unem-se formando a crista
33
Revisão de Literatura
renal (ELLENPORT, 1986; DYCE et al., 1997; KONIG; RUBERTE; LIEBICH,
2004).
A unidade morfofuncional do rim é o néfron. Este é composto de corpúsculo
renal, túbulo proximal, alça de Henle e túbulo contorcido distal.
Cada néfron drena para o interior de um ducto coletor. O córtex e a medula
renal possuem túbulos renais, vasos e tecido intersticial. Nos carnívoros, todos os
glomérulos estão localizados na região cortical. Na medula encontram-se porções dos
túbulos proximais, túbulos distais, alças de Henle e ductos coletores. Cada ducto
coletor recebe a drenagem de mais de um néfron, que se abre na extremidade de uma
papila, como ducto papilar. Os ductos papilares desembocam em uma dilatação
comum, chamada pelve renal, a qual representa a origem dilatada do ureter.
(ELLENPORT, 1986; DYCE et al., 1990; OSBORNE; FINCO, 1995; KONIG et al.,
2004;).
Os rins são responsáveis pela depuração do sangue e manutenção da
homeostasia. Sua função é exercida pelos néfrons através dos mecanismos de filtração
glomerular, reabsorção tubular e secreção tubular. (OSBORNE; FINCO, 1995).
O rim dos mamíferos é um órgão extremamente complexo, tanto
anatomicamente, como funcionalmente, exercendo algumas funções primordiais para a
manutenção da vida, com a regulação do equilíbrio hídrico, eletrolítico e ácido-básico.
O rim apresenta também o papel importante na síntese de hormônios que interferem
no mecanismo endócrino e metabólico, citando-se entre eles a eritropoetina,
imprescindível na maturação dos eritrócitos. É também nos rins que ocorre a ativação
de 25-diidroxicolecalciferol em 1,25-diidroxicolecalciferol. Hook e Hewitt (1986)
Malnic e Marcondes (1986), relatam a participação dos rins na síntese de
prostraglandinas e cininas.
34
Revisão de Literatura
Várias são as provas laboratoriais utilizadas para diagnóstico de lesões e
alterações da função renal, citando-se entre elas as que indicam a ocorrência de
glicosúria, proteinúria e cilindrúria e a avaliação quantitativa e qualitativa das células
do epitélio renal no sedimento urinário, as quais são indicativas de lesão renal. A uréia
é resultante do metabolismo protéico, é excretada pelos rins, sendo cerca de 40%
reabsorvida pelos túbulos renais. Portanto os níveis de uréia sanguínea são uma
indicação da função renal e servem como um índice da velocidade de filtração
glomerular. A uréia sanguínea pode estar elevada na insuficiência renal, metabolismo
do nitrogênio aumentado associado com diminuição do fluxo sanguíneo renal ou
alteração da função renal. Os testes seriados da uréia do sangue normalmente são
indicados para seguir o progresso do paciente, não ocorrendo elevação até que 70 a 75
% ou mais dos néfrons de ambos os rins se tornem afuncionais (KIRK,1987).
A creatinina é derivada da creatina e da fosfocreatina durante o metabolismo
muscular sendo excretada através dos glomérulos renais, e uma pequena quantidade
excretada pelos túbulos proximais. Os níveis de creatinina não são afetados pela
proteína alimentar, catabolismo protéico, sexo, idade ou exercício. A dosagem da
creatinina pode ser usada como medida razoável da velocidade de filtração glomerular,
pois há uma relação entre o grau de filtração glomerular e a concentração da creatinina
no plasma, para cada 50% da redução de filtração glomerular, a creatinina deve dobrar
(KIRK, 1987).
Em relação à atividade glomerular, esta é avaliada através da dosagem da
creatinina e uréia sérica, sendo este o teste mais utilizado na rotina, que estas
apresentam como limitação a influência de fatores extra renais, (como estado de
hidratação do paciente), além de só se apresentarem aumentadas quando já existem
50% de perda da função renal (GRANERUS, 2000).
35
Revisão de Literatura
O aumento da atividade de fosfatase alcalina na urina é considerado também
um indicador precoce de lesão renal (HEIENE; BIEWENGA; KOEMAN, 1991), e
pode ser usado para detectar lesões menos severas.
A mensuração da taxa de filtragem glomerular (TFG) é um método para avaliar
a função renal. A TFG não pode ser mensurada diretamente, mas é estimada usando
testes de depuração de creatinina e outros marcadores. Muitas técnicas têm sido
desenvolvidas e descritas durante os últimos anos: clearance de creatinina endógena,
clearance de 14C-Inulina, clearance de 99mTc-DTPA, clearance de meios de contraste
iodados como Iohexol
®
, clearance de
51
Cr-EDTA, além de técnicas cintilográficas de
captação de DTPA (KRAWIEC et al., 1986; COULTER; BARSANTI, 1993; FINCO;
MOE; HEIENE, 1995; BROWN et al., 1996; BARTHEEZ; DENIS; DIBARTOLA,
2000). A técnica cintilográfica tem a vantagem de ser um método rápido, não invasivo,
não necessitando de amostras de sangue ou urina, porém esta técnica apresenta como
desvantagem o alto custo da Gamma câmara que faz a captação da emissão de
radioatividade e transforma em imagens, e no caso dos animais, a necessidade de
realizar o procedimento com o animal anestesiado, uma vez que este necessita
permanecer parado durante o tempo do exame e mesmo os movimentos respiratórios,
quando o animal esta ofegante podem atrapalhar na interpretação dos resultados.
(KRAWIEC et al., 1986; DANIEL et al., 1999; BARTHEZ et al., 2000).
MATERIAL E MÉTODO
37
Material e Método
3. MATERIAL E MÉTODO
Foram realizados exames de uréia e creatinina sérica, clearance de creatinina,
clearance de EDTA-Cromo, em 27 cães da raça Golden Retriever afetados,
portadores e não afetados pela distrofia muscular. O experimento foi realizado nas
dependências do canil experimental Golden Retriever Muscular Dystrophy (GRMD
– Brasil) do Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina Veterinária e
Zootecnia e do Centro de Estudo do Genoma Humano da Universidade de São
Paulo.
3.1 ANIMAIS
Utilizou-se 27 cães da raça Golden Retriever, que foram divididos em 3 grupo
de 9 animais, sendo o grupo afetado constituído por (7 machos e 2 fêmeas todos
afetados com distrofia muscular), o grupo portador por (9 fêmeas portadoras de
distrofia muscular) e o grupo controle por (5 machos normais e 4 fêmeas normais). Os
animais do grupo afetado e portador pertencem ao Canil Experimental do Projeto
Genoma Humano USP, onde o estudo foi realizado, e os do grupo controle são
oriundos do canil Alternativas Dog Show e foram mantidos sobre a guarda dos
proprietários.
Todos os grupos receberam o mesmo tipo de manejo alimentar, com ração
Super Premium da marca Hill´s®, 3 vezes ao dia e água a vontade.
A triagem dos cães normais, afetados e portadores foi feita segundo o proposto
por Bartlett et al. (1996), que utilizou o teste de Reação da Cadeia em Polimerase
(PCR) para classificar os animais afetados, portadores e normais. Para purificação do
38
Material e Método
DNA genômico de células do cordão umbilical, utilizou-se o kit comercial GFX
TM
Genomic (GE Healthcare). A região contendo a mutação de ponto foi amplificada por
meio da Reação da Cadeia em Polimerase (PCR) utilizando o termociclador PTC-200
(MJ Research). Os pares de primers utilizados foram: GF2 (5’ – CTT AAG GAA
TGA TGG GCA TGG G – 3’) e GR2 (5’ – ATG CAT AGT TTC TCT ATC ATG C –
3’) localizados, respectivamente, no intron 6 e exon 7 do gene da distrofina canino. Os
amplicons gerados foram submetidos à digestão com a enzima Sau96 I (GE
Healthcare), capaz de reconhecer o sítio mutado. Os produtos da digestão enzimática
foram analisados em gel de poliacrilamida 8% e visualizados após coloração com
nitrato de prata.
3.2 RADIOFÁRMACOS
Utilizamos o ethylenediaminetetra-acetic acid (EDTA) marcado com
51
Cr
(
51
Cr-EDTA), fornecido já marcado pelo Instituto de Pesquisas Energéticas e
Nucleares de São Paulo (IPEN-SP), com eficiência comprovada acima de 99% . A
atividade será de 50µCi diluído em 3 ml de água destilada para injeção.
3.3 CLEARANCE DE CREATININA ENDÓGENA
O clearance de creatinina endógena, empregado para estimar a taxa de filtração
glomerular, foi executado com a técnica de coleta de dois períodos subseqüentes, de
20 minutos de acordo com o método descrito por Souza et al. (1995), nas próprias
dependências do Canil GRMD – Brasil.
39
Material e Método
3.4 CLEARANCE DE EDTA CROMO
O clearance de EDTA foi realizado através da técnica de 2 amostras com
intervalos de 2 horas e 4 horas após a aplicação do radiofármaco e os resultados da
filtragem glomerular foram obtidos através da utilização de uma planilha que é
utilizada na rotina clínica do Centro de Medicina Nuclear do Hospital das Clínicas da
Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo.
3.5 BIOQUÍMICA SÉRICA E URINÁRIA
Foram utilizadas amostras de soro obtidas após sinérise de sangue coletado por
punção da veia cefálica do antebraço, e amostras de urina coletadas por cateterização
uretral. Os exames de uréia e creatinina séricas e urinárias foram realizados no
laboratório de cultura celular do setor de anatomia da FMVZ-USP, no aparelho de
análises Labtest
®
.
3.6 DELINEAMENTO DO EXPERIMENTO
Os cães foram divididos em três grupos, sendo grupo afetado (composto por
sete cães machos e três fêmeas todos afetados pela distrofia muscular), grupo controle
(composto por 5 (cinco) machos e quatro fêmeas normais) e grupo portador (composto
por nove fêmeas portadoras do gene da distrofia muscular). Os animais foram
examinados clinicamente, sendo que em nenhum deles foi encontrado alterações que
impedissem a sua utilização no experimento.
40
Material e Método
Primeiramente foram realizados os exames de clearance de creatinina e uréia e
creatinina sérica, onde foi coletado uma amostra de 2 ml de sangue venoso através de
venopunção da veia cefálica do antebraço direito, utilizando-se seringa de 3 ml e
agulha hipodérmica 20X5,5. O sangue foi acondicionado em tubo vacutainer
®
seco e
mantido sobre refrigeração, para posterior processamento. Após a coleta de sangue foi
realizada a cateterização uretral dos animais com sonda uretral flexível Embramed nº8
ou º6.
Após a cateterização foi feito o esvaziamento total da vesícula urinária
(confirmada por ultrassonografia realizada com o aparelho GE Medical Systems
LOGIQ
™
100 PRO) e em seguida foi injetado pela sonda 5 ml de água ultrapura,
marcando-se a hora. Vinte minutos após a injeção da água ultrapura foi realizado novo
esvaziamento total da vesícula urinária e foi coletada uma alíquota da urina retirada e
anotado o volume total retirado, injetando-se novamente 5ml de água ultrapura.
Depois de vinte minutos foi realizado um novo esvaziamento da vesícula urinária,
separando-se nova alíquota e anotando-se o volume total da coleta, as alíquotas
separadas foram destinadas a dosagem de creatinina na urina.
O clearance de EDTA cromo foi realizado através da administração, por via
endovenosa, do radiofármaco nos cães, utilizando-se a veia cefálica do antebraço
direito, previamente cateterizada com cateter BD insyte® nº 22G. Foram coletadas
duas amostras de 15 mL de sangue, através de venopunção da veia cefálica do
antebraço esquerdo, utilizando-se seringa de 20 ml e agulha 20X5,5 BD (após 2 horas
e 4 horas da injeção). O sangue foi dessorado e no soro foi feita a contagem de
atividade radioativa no contador automático Perkin Elmen Precisely 1480
Automatic Gamma Counter Wizard™ 3”, para se calcular o clearance de
51
Cr
41
Material e Método
EDTA, através da utilização de uma tabela utilizada na rotina da Clínica de Medicina
Nuclear da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo.
3.7 ANÁLISE DOS RESULTADOS
Para cada um dos cães foram avaliadas as seguintes variáveis: Volume de
Urina A (ml/min), Ucr A (mg/ml), Volume de Urina B (ml/min), Ucr B (mg/ml), Ccr
solução A (ml/min), Ccr solução B (ml/min), Média (ml/min) entre Ccr solução A e
Ccr solução B, Ccr solução A (ml/kg/min), Ccr solução B (ml/kg/min), Média
(ml/kg/min) entre Ccr solução A e Ccr solução B, Uréia (mg/dl) e Creatinina (mg/dl).
3.7.1 MÉTODO
Para cada uma das variáveis estudadas foi realizado um experimento
balanceado com um fator (situação do cão) de três níveis (afetado, controle e
portador), ou seja:
y
ij
= µ + situação
i
+ e
ij
com i = 1,2,3 (afetado, controle e portador) e j = 1,2, ... ,9 (cada um dos 9 cães em
cada grupo).
y
ij
representa o j-ésimo cão do i-ésimo grupo, µ representa a média geral,
situação
i
representa o efeito do grupo i e e
ij
a componente aleatória do erro.
Supondo que e
ij
~ N(0, σ
2
) independentes então y
ij
~ N (µ + situação
i
, σ
2
).
42
Material e Método
3.7.1.2 HIPÓTESE DE IGUALDADE ENTRE OS GRUPOS
H
0
: situação
1
= situação
2
= situação
3
H
1
: situação
1
≠ situação
2
, ou situação
1
≠ situação
3
, ou situação
2
≠ situação
3
, ou
situação
1
≠ situação
2
≠ situação
3
3.7.1.3 ANÁLISE DE VARIANCIA (ANOVA)
A variabilidade total do experimento é representada por
A SQT pode ser decomposta em
Pelo teorema de Cochran temos que (SQGrupo/ σ
2
) ~ Quiquadrado
(3-1)
e (SQE/
σ
2
) ~ Quiquadrado
(3(9-1))
. Então sob H
0
(situação
1
= situação
2
= situação
3
) temos que
Quanto mais próximo F for de 1 mais evidências temos para não rejeitar H
0
, ou
seja, mais evidências temos de que não há diferença entre os grupos em relação à variável
estudada. Porém se F for muito maior que 1 temos evidências de há diferença entre, pelos
menos, dois dos grupos estudados em relação à variável resposta.
SQT
i
1
3
j
1
9
y
ij
y
..
2
SQGrupo
9
i
1
3
y
i.
y
..
2
eSQE
i
1
3
j
1
9
y
ij
y
i.
2
F
SQGrupo
3 1
SQE
3 9 1
43
Material e Método
O nível de significância considerado nas análises foi de 5%, portanto se o valor de
F for maior que 3,40 (ou p-valor menor que 0,05) teremos evidências para rejeitar a
hipótese nula (H
0
).
Quando H
0
foi rejeitada, usou-se o teste de médias de Tukey com o objetivo de
verificar quais grupos diferiram entre si. Este teste consiste em comparar as médias de
cada grupo, duas a duas, utilizando o módulo da diferença entre a média dos 9 cães de um
grupo e a média dos 9 cães de outro grupo e comparando com um valor tabelado. Se o
módulo da diferença for maior que o valor tabelado então há evidência de que há
diferença entre os dois grupos comparados.
O programa estatístico usado nas análises foi o MINITAB 14.2 processado em
ambiente Windows®.
RESULTADOS
45
Resultados
4 RESULTADOS
Foram encontradas diferenças significativas entre os três grupos de cães para o
parâmetro Vol. Urina A (p-valor = 0,021) (Tabela 1 e Figura 1) O grupo Afetados obteve
média significativamente superior à do grupo Portador, não foram encontradas diferenças
significativas entre os grupos Controle e Portador e Controle e Afetado.
46
Resultados
Tabela 1 – Médias com desvio padrão do volume de urina na solução A, em cães Golden
Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado, Controle e Portador, São Paulo 2007
PortadorControleAfetado
1,4
1,2
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
Vol. urina A (ml/min)
Figura 1 – Média com desvio padrão do volume de urina na solução A em cães Golden
Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado, Controle e Portador, São Paulo 2007
Parâmetro Situação Média
Desvio
Padrão
Mínimo Mediana Máximo
Afetado 0,70 0,30 0,21 0,67 1,25
Vol. urina A (ml/min) Controle 0,60 0,16 0,45 0,59 1,00
Portador 0,42 0,08 0,32 0,41 0,55
47
Resultados
Não foram encontradas diferenças estatísticas entre os três grupos de cães para os
parâmetros Vol. Urina B (Tabela 2 e Figura 2).
48
Resultados
Tabela 2 – Médias com desvio padrão do volume de urina na solução B em cães Golden
Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado, Controle e Portador, São Paulo
2007
PortadorControleAfetado
1,2
1,1
1,0
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
Vol. Urina B (ml/min)
Figura 2 - Média com desvio padrão do volume de urina na solução B em cães Golden
Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado, Controle e Portador, São Paulo 2007
Parâmetro
Situação Média
Desvio
Padrão
Mínimo Mediana Máximo
Vol. Urina B (ml/min)
Afetado 0,54 0,16 0,35 0,52 0,85
Normal 0,65 0,26 0,38 0,55 1,12
Portador 0,66 0,23 0,40 0,59 1,05
49
Resultados
Foram encontradas diferenças significativas entre os três grupos de cães para o
parâmetro concentração de creatinina na urina da solução A (Ucr A) (p-valor = 0,009)
(Tabela 3 e Figura 3). O grupo Afetados obteve média significativamente inferior às dos
grupos Portador e Controle, não foram encontradas diferenças significativas entre os
grupos Controle e Portador.
50
Resultados
T
abela 3 – Média com desvio padrão da concentração de creatinina na urina da solução A
em cães Golden Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado, Controle e Portador,
São Paulo, 2007
Parâmetro
Situação Média
Desvio
Padrão
Mínimo Mediana Máximo
Ucr A (mg/ml)
Afetado 1,12 0,33 0,89 1,02 1,96
Controle 1,41 0,22 1,14 1,37 1,80
Portador 1,52 0,21 1,24 1,49 1,88
PortadorControleAfetado
2,0
1,8
1,6
1,4
1,2
1,0
Ucr A (mg/ml)
Figura 3 - Média com desvio padrão da concentração de creatinina na urina da
solução A em cães Golden Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado,
Controle e Portador, São Paulo, 2007
51
Resultados
Não foram encontradas diferenças estatísticas entre os grupos Afetado, Controle e
Portador, para o parâmetro concentração de creatinina na urina da solução B Ucr B
(mg/ml), (Tabela 4 e Figura 4)
52
Resultados
Tabela4–MédiacomdesviopadrãodaconcentraçãodecreatininanaurinadasoluçãoB
em
cães Golden Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado, Controle e Portador,
São Paulo, 2007
PortadorControleAfetado
1,8
1,6
1,4
1,2
1,0
0,8
Ucr B (mg/ml)
Figura 4 - Média com desvio padrão da concentração de creatinina na urina da solução B
em cães Golden Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado, Controle e Portador,
São Paulo, 2007
Parâmetro
Situação Média
Desvio
Padrão
Mínimo Mediana Máximo
Ucr B (mg/ml)
Afetado 1,10 0,30 0,80 0,98 1,77
Controle 1,34 0,25 1,06 1,29 1,80
Portador 1,28 0,22 0,99 1,29 1,58
53
Resultados
Não foram encontradas diferenças estatísticas entre os três grupos de cães para os
parâmetros clearance de creatinina na solução A (Ccr A) em ml/min. (Tabela 5 e Figura
5).
54
Resultados
Tabela 5 – Média com desvio padrão do clearance de creatinina na solução A (ml/min)
em cães Golden Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado, Controle e Portador,
São Paulo, 2007
PortadorControleAfetado
140
130
120
110
100
90
80
70
60
50
Ccr sol. A (ml/min)
Figura 5 -Média com desvio padrão do clearance de creatinina na solução A (ml/min) em
cães Golden Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado, Controle e Portador,
São Paulo, 2007
Parâmetro
Situação Média
Desvio
Padrão
Mínimo Mediana Máximo
Ccr sol. A (ml/min)
Afetado 78,61 21,79 52,14 79,00 115,91
Controle 91,50 32,50 57,40 77,60 142,50
Portador 64,88 15,63 47,50 63,56 95,63
55
Resultados
Não foram encontradas diferenças estatísticas entre os três grupos de cães para os
parâmetros clearance de creatinina na solução B (Ccr B) em ml/min. (Tabela 6 e Figura
6).
56
Resultados
Tabela 6 - Média com desvio padrão do clearance de creatinina na solução B (ml/min) em
cães Golden Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado, Controle e Portador,
São Paulo, 2007
Ccr sol. B (ml/min)
Afetado 62,37 13,66 42,55 62,34 88,29
Controle 93,80 47,10 54,50 75,90 205,80
Portador 82,06 19,05 56,00 78,55 118,35
PortadorControleAfetado
225
200
175
150
125
100
75
50
Ccr sol. B (ml/min)
Figura 6 -Média com desvio padrão do clearance de creatinina na solução B (ml/min)
em cães Golden Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado, Controle e
Portador, São Paulo, 2007
Parâmetro
Situação Média
Desvio
Padrão
Mínimo Mediana Máximo
57
Resultados
Não foram encontradas diferenças estatísticas entre os três grupos de cães para o
parâmetro média do clearance de creatinina na solução A e clearance de creatinina na
solução B em (ml/min). (Tabela 7 e Figura 7).
58
Resultados
Tabela 7 – Média clearance de creatinina solução A e clearance de creatinina solução B
(ml/min) em cães Golden Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado, Controle
e Portador, São Paulo, 2007
PortadorControleAfetado
175
150
125
100
75
50
Média (Ccr A e Ccr B - ml/min)
Figura 7 -Média clearance de creatinina solução A e clearance de creatinina solução B
(ml/min) em cães Golden Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado, Controle
e Portador, São Paulo, 2007
Parâmetro
Situação Média
Desvio
Padrão
Mínimo Mediana Máximo
Média (Ccr A e Ccr B – ml/min)
Afetado 70,49 11,67 50,69 74,07 84,90
Controle 92,70 36,00 58,10 78,10 169,60
Portador 73,47 14,23 51,75 72,82 97,38
59
Resultados
Foram encontradas diferenças significativas entre os três grupos de cães para o
parâmetro Ccr da solução A (ml/kg/min) (p-valor = 0,002) (Tabela 8 e Figura 8). O grupo
Afetado obteve média significativamente superior às dos grupos Portador e Controle, não
foram encontradas diferenças significativas entre os grupos Controle e Portador.
60
Resultados
Tabela 8 – Média com desvio padrão clearance de creatinina solução A (ml/kg/min) em
cães Golden Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado, Controle e Portador,
São Paulo, 2007
PortadorControleAfetado
5,5
5,0
4,5
4,0
3,5
3,0
2,5
2,0
Ccr da solução A (ml/kg/min)
Figura 8 - Média com desvio padrão clearance de creatinina solução A (ml/kg/min) em
cães Golden Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado, Controle e Portador,
São Paulo, 2007
Parâmetro
Situação Média
Desvio
Padrão
Mínimo Mediana Máximo
Ccr da solução A (ml/kg/min)
Afetado 4,12 1,01 2,06 4,06 5,25
Controle 3,04 0,75 2,06 3,19 4,19
Portador 2,62 0,55 1,80 2,48 3,37
61
Resultados
Não foram encontradas diferenças estatísticas entre os três grupos de cães para o
parâmetro clearance de creatinina na solução B (Ccr B) (ml/kg/min) (Tabela 9 e Figura
9).
62
Resultados
Tabela 9 – Média com desvio padrão do clearance de creatinina na solução B (ml/kg/min)
em cães Golden Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado, Controle e
Portador, São Paulo, 2007
PortadorControleAfetado
5,5
5,0
4,5
4,0
3,5
3,0
2,5
2,0
Ccr da solução B (ml/kg/min)
Figura 9 -Média com desvio padrão do clearance de creatinina na solução B (ml/kg/min)
em cães Golden Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado, Controle e
Portador, São Paulo, 2007
Parâmetro
Situação Média
Desvio
Padrão
Mínimo Mediana Máximo
Ccr da solução B (ml/kg/min)
Afetado 3,25 0,52 2,34 3,12 3,88
Normal 3,05 0,99 2,04 2,84 5,28
Portador 3,37 0,98 2,46 3,01 5,19
63
Resultados
Foram encontradas diferenças significativas entre os três grupos de cães para o
parâmetro Média do clearance de creatinina na solução A (Ccr A) e do clearance de
creatinina da solução B (Ccr B) (ml/kg/min) (p-valor = 0,009). O grupo Afetado obteve
média significativamente superior às dos grupos Portador e Controle, não foram
encontradas diferenças significativas entre os grupos Controle e Portador (Tabela 10 e
Figura 10 )
64
Resultados
Tabela 10 – Média com desvio padrão dos clearance de creatinina solução A e clearance
de creatinina solução B (ml/kg/min) em cães Golden Retrievers (GRMD)
dos grupos: Afetado, Controle e Portador, São Paulo, 2007
PortadorControleAfetado
4, 5
4, 0
3, 5
3, 0
2, 5
2, 0
Média (Ccr A e Ccr B - ml/kg/min)
Figura 10 - Média com desvio padrão dos clearance de creatinina solução A e clearance
de creatinina solução B (ml/kg/min) em cães Golden Retrievers (GRMD) dos
grupos: Afetado, Controle e Portador, São Paulo, 2007
Parâmetro
Situação Média
Desvio
Padrão
Mínimo Mediana Máximo
Média (Ccr A e Ccr B –
ml/kg/min)
Afetado 3,82 0,23 3,37 3,79 4,16
Normal 3,04 0,71 2,05 3,05 4,35
Portador 3,00 0,66 2,23 2,92 4,27
65
Resultados
Foram encontradas diferenças significativas entre os três grupos de cães para o
parâmetro clearance de EDTA-Cromo (p-valor < 0,001) (Tabela 11 e figura 11). O grupo
dos afetados apresentou média significativamente maior que o grupo Controle e
Portadores. O grupo Controle apresentou média significativamente maior que o grupo
Portador.
66
Resultados
Tabela 11 – Média e desvio padrão do clearance de EDTA-Cromo em cães Golden
Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado, Controle e Portador, São Paulo,
2007
PortadorControleAfetado
7
6
5
4
3
2
Cromo
Figura 11 – Clearance de EDTA Cromo em cães Golden Retrievers (GRMD) dos grupos:
Afetado, Controle e Portador, São Paulo, 2007
Situação Média Desvio Padrão Mínimo Mediana Máximo
Afetado 5,21 1,00 4,00 4,90 6,80
Controle 3,54 0,74 2,20 3,60 4,40
Portador 2,47 0,28 2,10 2,40 2,90
67
Resultados
Foram encontradas diferenças significativas entre os três grupos de cães para o
parâmetro Uréia (p-valor = 0,009) (Tabela 12 e figura 12). O grupo controle apresentou
média significativamente inferior ao grupo Afetado. Não foram encontradas diferenças
significativas entre os grupos: Afetado e Portador.
Não foram encontradas diferenças significativas entre os grupos em relação à
creatinina (Tabela 13 e Figura 13).
68
Resultados
Tabela 12 – Média e desvio padrão da dosagem de uréia sérica em cães Golden
Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado, Controle e Portador, São Paulo,
2007
Parâmetro Situação Média
Desvio
Padrão
Mínimo Mediana Máximo
Uréia
Normal 31,44 4,98 22,00 32,00 40,00
Afetado 38,00 3,08 33,00 38,00 42,00
Portador 35,33 4,00 30,00 35,00 41,00
PortadorControleAfetado
45
40
35
30
25
20
Uréia
Figura12
– Média e desvio padrão da dosagem de uréia sérica em cães Golden Retrievers
(GRMD) dos grupos: Afetado, Controle e Portador, São Paulo, 2007
69
Resultados
Tabela 13 – Média e desvio padrão da dosagem de creatinina sérica em cães Golden
Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado, Controle e Portador, São Paulo,
2007
Parâmetro
Situação Média
Desvio
Padrão
Mínimo Mediana Máximo
Creatinina
Afetado 0,93 0,17 0,70 0,94 1,20
Controle 0,96 0,18 0,60 1,01 1,12
Portador 0,99 0,13 0,80 1,00 1,20
Por ta do rControleAf etado
1,2
1,1
1,0
0,9
0,8
0,7
0,6
Creatinina
Figura 13
– Média e desvio padrão da dosagem de creatinina sérica em cães Golden
Retrievers (GRMD) dos grupos: Afetado, Controle e Portador, São Paulo,
2007
70
Resultados
Quadro 1 – Fórmulas matemáticas representando os resultados obtidos
V
olume de urina A A>C>P
Volume de urina B
A<(C≈P)
Ucr A
P>C>A
Ucr B
C>P>A
Ccr Sol. A (ml/min)
C>A>P
Ccr sol. B (ml/min)
C>P>A
Média (Ccr A e CcrB) (ml/min)
C>(P≈A)
Ccr sol. A (ml/min/Kg)
A>(C≈P)
Ccr sol. B (ml/min/Kg)
A≈C≈P
Média (CcrA e CcrB) ml/min/Kg)
A>(C≈P)
EDTA – Cromo
A>C >P
Uréia sérica
A>P>C
Creatinina sérica
P>C>A
DISCUSSÃO
72
Discussão
5.
DISCUSSÃO
A insuficiência renal primária pode ser causada por várias doenças que acarretam o
não funcionamento de pelo menos três quartos dos néfrons de ambos os rins, quando não
há a compensação através de sua hipertrofia de um dos rins. (OSBORNE; FINCO, 1995).
Apesar dos grandes avanços na técnica diagnóstica das doenças renais na Clínica
Veterinária de Pequenos Animais, os indicadores brutos da função glomerular, creatinina e
uréia sérica, continuam sendo os parâmetros mais utilizados para avaliação da função
glomerular, apesar de todas as suas limitações, uma vez que só são encontradas alterações
nas concentrações plasmáticas quando já existem mais de 50% de néfrons afuncionais
(GRANERUS, 2000; BIWENGA; VAN DEN BRON, 1981). Isto pode retardar ou mesmo
impedir um diagnóstico correto, prejudicando significativamente o plano terapêutico e o
prognóstico (BROWN, 1996).
O clearance de creatinina é uma técnica de diagnóstico com maior precisão e
eficiência para os casos de disfunção glomerular e, portanto, da insuficiência renal. (Souza,
2002).
Optou-se neste estudo, em realizar também o clearance de creatinina e o clearance de
EDTA-Cromo, com o intuito de realizar o diagnóstico precoce de alterações da filtragem
glomerular.
O clearance de creatinina foi realizado pelo método de duas amostras subseqüentes de
20 minutos, como descrito por (SOUZA et al., 1995), uma vez que a técnica de clearance
de creatinina em 24 horas é mais complexa e exige a utilização de gaiolas metabólicas.
73
Discussão
O clearance de creatinina foi calculado através da fórmula:
(Ucr) creatinina urinária (MG/dL) X volume de urina (ml)
(Pcr) Creatina sérica (mg/dL) X tempo (min.) X peso (kg)
Sendo assim foram avaliados o volume de urina produzido, a concentração de
creatinina nas amostras de urina, a creatinina sérica, o tempo entre as coletas e o peso dos
animais, na expectativa de se obter a taxa de filtragem glomerular.
Foram encontradas diferenças entre os três grupos para o parâmetro volume de urina
na solução “A” (p-valor = 0,021), sendo que o grupo dos afetados obteve média
significativamente superior que os demais grupos A>C>P.
Já para o parâmetro concentração de creatinina na solução “A” (p-valor = 0,009), o
grupo dos afetados obteve média significativamente inferior ao demais grupos P>C>A.
Possivelmente estas diferenças encontradas no grupo dos afetados tenham ocorridos
em decorrência de uma maior diurese apresentada, uma vez que estes animais apresentam
grande dificuldade em manter a homeostase hídrica. Esta maior diurese acaba levando a
uma menor capacidade de concentração da urina. As quantidades de substâncias ou
elementos figurados presentes em amostras de urina dependem não só de fatores
intrínsecos aos processos de excreção e secreção, mas também do fator concentração da
urina (OSBORNE; FINCO, 1995; McCAW et al., 1989; PORTELLA, 2004).
O grupo dos afetados também apresentou alterações em relação ao parâmetro
clearance de creatinina na solução “A” (p-valor = 0,002), tendo apresentado média
significativamente superior à dos grupos portador e controle, sendo que entre os grupos
portador e controle não houve diferenças significativas A > (N ≈ P).
74
Discussão
Levando-se em consideração a fórmula anteriormente citada, podemos deduzir que o
aumento no clearance de creatinina ocorreu em decorrência dos animais do grupo afetados
apresentarem média de peso menor do que dos outro dois grupos. Estes resultados são
semelhantes aos encontrados por Souza (2002), que realizou exames similares em cães
Golden Retrievers não portadores, portadores e afetados pela distrofia muscular
progressiva, e não diferem dos valores de referências.
O grupo dos afetados também apresentou média significativamente superior aos
demais grupos quanto a média do clearance de creatinina na solução “A” e média de
clearance de creatinina na solução “B” em (ml/kg/min.) (p-valor 0,009), sendo que os
demais grupos não apresentaram diferenças significativas A > (N ≈ P).
Está superioridade demonstrada pelo grupo dos afetados se deve ao fato que este
grupo apresentou também parâmetros de volume de urina na solução “A” e clearance de
creatinina na solução “A” maior, tendo isto influenciado no resultado dos valores das
médias do clearance de creatinina na solução “A” e média de clearance de creatinina na
solução “B” em (ml/kg/min.).
Os resultados encontrados para o clearance de creatinina dos três grupos são
semelhantes aos encontrados por Carneiro (2002) e Souza (2002).
O clearance de rádio nuclídeos é uma técnica não invasiva, simples, segura e exata
(PADHY, 2004). Optou-se pela utilização do Clearance de EDTA-Cromo, utilizando-se o
método de duas amostras com intervalos de 120 e 240 minutos após a administração do
radiofármaco, seguindo o protocolo seguido pela Clínica do Centro de Medicina Nuclear
do Hospital das Clinicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. Os
cálculos do clearance foram obtidos através da utilização da planilha que é utilizada na
rotina da clínica. (Apêndice A).
75
Discussão
O grupo dos afetados apresentou média significativamente maior que os demais
grupos para o parâmetro clearance de EDTA-Cromo (p-valor < 0,001). O grupo controle
apresentou média significativamente maior que o grupo dos portadores A>N>P. Este
resultado é compatível com os resultados encontrados para o clearance de creatinina, aonde
o grupo afetado obteve média significativamente superior aos demais grupos, mostrando
uma maior filtração glomerular. Mesmo com essas diferenças entre todos os grupos, os
animais apresentam-se dentro dos valores de referencia descritos por (BIEWENGA; VAN
DEN BRON, 1981). No entanto, apesar desta técnica ser empregada com freqüência na
medicina humana para avaliação da filtragem glomerular, na literatura não existem outros
relatos da utilização desta técnica em cães Golden Retrievers com distrofia muscular.
Quanto ao parâmetro uréia (p-valor = 0,009), o grupo controle apresentou média
significativamente inferior aos demais grupos, sendo que não houveram diferenças
estatísticas entre os grupos afetado e portador (A≈P)>N. Este fato pode ser explicado uma
vez que a uréia não é considerada por vários autores como um marcador ideal da função
renal, uma vez que pode sofrer influências por diversos fatores como alimentação,
degradação muscular e é sabido que os animais afetados pela distrofia muscular
progressiva apresentam grande degradação muscular. (COLLINS; MORGAN, 2003;
SHELTON; ENGVALL, 2004).
Para o parâmetro creatinina não foram encontradas diferenças estatísticas
significativas entre os três grupos, a média do grupo portador foi igual a do grupo não
portador e afetado P≈N≈A. (FINCO; COULTER; BARSANTI, 2000, GUYTON et
al.1997).
Os resultados encontrados para o clearance de creatinina e creatinina sérica são muito
similares aos encontrados por Souza, (2002).
76
Discussão
Apesar das alterações estatísticas encontradas dentro dos grupos para alguns fatores
como anteriormente descrito, todos os animais apresentaram-se dentro dos limites de
normalidade dos parâmetros pesquisados, não tendo sido detectados sinais clínicos ou
laboratoriais que possam confirmar existência de alterações renais nos cães GRMD. No
entanto também não ficou descartada a possibilidade da existência de alterações
subclínicas na função renal, uma vez que no grupo afetado, mesmo os animais sendo
visivelmente desidratados em decorrência da dificuldade de deglutição e outras alterações
causadas pela distrofia, os animais apresentaram produção urinária e clearance de
creatinina superiores aos dos demais grupos, quando em condições renais fisiológicas, a
produção de urina deve diminuir se houver desidratação (FINCO, 1995), isto pode sugerir
que estejam ocorrendo alterações renais que não foram detectadas pelos exames
realizados, talvez a realização de biópsia renal ou mesmo o exame histológico dos rins
desses animais possam trazer mais informações sobre a existência ou não de doença renal
nos GRMD.
Outro fato a ser considerado é que a média de idade dos animais do grupo afetado
varia entre 8 meses e 4 anos, e é sabido que descartando-se as alterações congênitas que
acometem animais jovens, as demais doenças renais tem maior prevalência em animais
com idade superior aos 7 anos (FINCO, 1995).
Através dos testes realizados não foi possível comprovar uma lesão glomerular mais
evidente, porém também não é possível afirmar que não existam lesões glomerulares,
entretanto as diferenças existentes podem sinalizar ao clínico a necessidade de se redobrar
a atenção.
Durante o estudo, podemos perceber que o grau de dificuldade de realização das
técnicas utilizadas, foi diferente, sendo que o clearance de creatinina apesar de ser uma
técnica de baixo custo, é trabalhoso, exigindo a utilização de cateterização vesical, e
77
Discussão
também é sujeita a falhas, uma vez que existe a necessidade de esvaziar todo o conteúdo
vesical.
Estes fatos dificultam ainda a utilização desta técnica na rotina de clínicas e hospitais
veterinários.
O clearance de EDTA-Cromo mostrou ser uma técnica relativamente fácil de
realização, porém de alto custo, uma vez que a dose da medicação é relativamente cara.
Existe a necessidade de equipamentos para a realização da leitura de radiação nas amostras
de soro, que também é de alto custo, além disso, há necessidade de um conjunto de
medidas especiais para a utilização de medicamentos radioativos. Estes fatores tornam a
utilização desta técnica restrita à pesquisa, pelo menos até o momento.
CONCLUSÕES
79
Conclusões
6. CONCLUSÕES
Analisando-se os resultados obtidos neste estudo, chegou-se as seguintes conclusões
sobre a função renal dos cães com Distrofia Muscular do Golden Retriever:
1. Os animais afetados e portadores de distrofia muscular do Golden Retriever GRMD,
estudados, não apresentaram alterações da função glomerular segundo as provas
realizadas, tendo apresentado todos os resultados dentro dos limites de normalidades para
a espécie.
2. Apesar das alterações sofridas pelos animais afetados com a distrofia muscular
progressiva, a função glomerular mostrou-se preservada até o momento.
3. Os exames laboratoriais utilizados não foram suficientes para o diagnóstico precoce de
lesões renais em cães Golden Retrievers com distrofia muscular (GRMD), entretanto
podem sinalizar ao clínico, conjuntos de procedimentos que podem melhorar a condição e
a sobrevida dos animais afetados.
Referências
81
Referências Bibliográficas
REFERÊNCIAS
ABDIM Associação Brasileira de Distrofia Muscular. Doenças Neuromusculares,
2003. Disponível em: < HTTP://www.adbim.org.br/neuro.htm> Acesso em
10/08/2005
BAROHN, R. J.; LEVINE, E. J.; OLSEN, J. O.; MENDELL, J. R. Gastric
hypomotility in Duchenne´s muscular dystrophy. New England Journal Medicine,
1988.
BARTHEZ, P. Y.; DENNIS, C. J.; DIBARTOLA, S. P. Effect of sample number and
time on determination of plasma clearance of technetium Tc 99m pentetate and
orthoiodohippurate sódium I 131 in dogs and cats. American Journal of Veterinary
Reseach, v. 61, p. 280-285, 2000.
BARTLETT, R. J. et al. In vivo Targeted repair of a point mutation in the canine
dystrophin gene by a chimeric rna/dna oligonucleotide. Nature Biotechnology, v. 18,
p. 615-22, 2000.
BERGMAN, R. L.; INZANA, K. D.; MONROE, W. E.; SHELL, L. G.; LUI, L.A.;
ENGVALL, E.; SHELTON, G. D. Dystrophin-deficient muscular dystrophy in a
Labrador retriever. Journal of American Hospital Association, v. 38, n° 3, p. 255-
261, 2002.
BERRY, C. R.; GASCHEN, F. P.; ACKERMAN, N. Radiographic and
ultrassonographic features of hypertrophic feline muscular dystrophy in two cats.
Veterinary Radiology &Ultrassound, v. 33, n. 6, p. 357 – 364, 1992.
BIBLIOMED INC. Distrofia muscular de Duchenne. Disponível 2004, em :
<htt://www.espacorealmedico.com.br> Acesso em: 11 jun. 2006.
BIEWENGA, W. J.; VAN DEN BRON W. E.; Assessment of glomerular filtration
rate in dogs with renal insufficiency: analyses of the
51
Cr-EDTA clearance and its
relation to the plasma concentrations of urea and creatinine; Research in Veterinary
Science, v. 30, p. 158-160, 1981.
82
Referências Bibliográficas
BOGDANOVICH, S.; PERKINS, K. J.; KRAG, T. O. B.; KHURANA, T. S.;
Therapeutics for Duchenne muscular dystrophy: current approaches and future
directions. Journal of Molecular Medicine, v. 82, n. 2, p. 81-87, 2004.
BRAZEAU, G. A.; MATHEW, M.; ENTRIKIN, R. K. Serum and organ indices of the
mdx dystrophy mouse. Research Communications in Chemical Pathology and
Pharmacology, 77, n. 2, p. 179 – 189, 1982.
BROWN, S. A.; FINCO, D. R.; BOUDINOT, F. D.; WRIGT, J.; TAVER, S. L.;
COOPER, T. Evaluation of a single injectio method, using iohexol, for estimating
glomerular fitration rate in cats and dogs. American Journal of Veterinary
Research, v. 57, p. 105-110, 1996.
CARNEIRO, R. S. Contribuição ao estudo do clearance de creatinina e da excreção
fracionada de sódio, potássio e uréia e determinação de valores de referência de
indicadores de função renal em cães. Dissertação de Mestrado. Faculdade de
Ciências Agrárias e Veterinárias – Universidade Estadual Paulista, p. 86, 2002.
CHILDERS, M. K.; OKAMURA, C. S.; BOGAN, D. L.; BOGAN, J. R.; PETROSKI,
G. F.; McDONALD, K.; KORNEGAY, J. N. Eccentric concentration injury in
dystrophic canine muscle. Archieve of Physical Medicine Rehabilitation, v. 83, p.
1572-1578, 2002.
COLLINS, C. A.; MORGAM, J. E. Duchenne´s Muscular Dystrophy: animal models
used to investigate pathogenesis and develop therapeutic strategies. International
journal of experimental pathology, v. 84, p. 165–172, 2003.
DANIEL, G. B.; MITCHELL, S. K.; MAWBY, D.; SACKMAN, J. E. & SCHIMIDT,
D. Renal nuclear medicine: a review. Veterinary Radiology & ultrasound, v. 40, p.
572-587, 1999.
DYCE, K. M.; SACK, W. O.; WENSING, C. J. G. O aparelho urogenital. In:
Tratado de anatomia veterinária. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 1990. p. 110
– 139. 1997
ELLEMPORT, C. R. Aparelho urogenital. In: GETTY, R. Sisson/Grossman –
anatomia dos animais domésticos. Rio de Janeiro: Guanabara koogan, 1986, p.
1445–1465.
83
Referências Bibliográficas
EMERY, A. E. H. Treatment. In: Muscular dystrophy – The facts. New York:
Oxford University Press Inc., 1994 p. 39–61.
ENGEL, A. G. Doenças musculares (miopatias) e da junção neuromuscular. In:
WYNGAARDEN, J. B.; SMITH JR., L. H. CECIL – Tratado de medicina interna.
Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 1990. p. 1988–2001.
ERRINGTON, S. J.; FLETCHER, S.; MANN, C. J.; WILTON, S. D. Multiple exon
skipping in the dystrophyn gene: a more effective therapy? Neuromuscular
Disorders, v. 13, n. 7–8, p. 615 – 668, 2003.
FAWDRY, R. M ; GRUENEWALD, S. M; COLLINS, L. T; ROBERTS, D. J.
Comparative assessment of techniques for estimation of glomerular filtration rate with
99m Tc-DTPA. European Nuclear Medicine, n 11: 7–12, 1985
FINCO, D. R.; COULTER, D. B.; BARSANTI, J. A. Endogenous creatinine clearance
meansurement of glomerular filtration rate in dogs. American Journal of Veterinary
Research, v. 54, p. 1575-1578, 1995.
GLEADHILL, A; PETER, A. M; MICHELL, A. R. A simple method for measuring
glomerular filtration rate in dogs. Research Veterinary Science, n. 59 p. 118 – 123,
1995.
GRANERUS, G. Njurarna och ovre urinvagarna. Sweden: Studentlitteratur, lund.
2000.
GUYTON, A. C; HALL, J. E; Tratado de fisiologia médica, 9º ed. p. 296, 1997
HEIENE, R.; BIEWENGA, W. J.; KOEMAN, J. P. Urinary alkaline phosphatase and
γ-glutamyl transferase as indicators of acute renal damage in dogs. Journal os Small
Animal Pratice, v. 32, p. 521-524, 1991.
HOOGERWAARD, E. M.; BAKKER, E.; IPPEL, P. F.; OOSTERWIJK, J. C.;
MAJOOR KRAKAUER, D. F.; LESCHOT, N. J.; VAN-ESSEN, A. J.; BRUNNER,
H. G.; VAN-DER-WOUW, P. A.; WILDE, A.; DE-VISSER, M. Signs and symptoms
of Duchenne muscular dystrophy and Becker muscular dystrophy among carriers in
the Netherlands: A cohort study. Lancet, n. 19, p. 353, 1999.
84
Referências Bibliográficas
HOOK, J. B.; HEWITT, W. R. Toxiresponses of the kidney. In: Casarett and Doull´s
toxicology. 3ª ed. New York: Macmillan Publishing Company, 1986.
HOWELL, J. M.; FLETCHER, S.; KAKULAS, B. A.; O´HARA, M.;
LOCHMULLER, H.; KARPATI, G. Use of the dog model for Duchenne muscular
dystrophy in gene therapy trials. Neuromuscular Disorders, v. 7, p. 325–328, 1997.
KÖNIG, H. E.; RUBERTE, J.; LIEBICH, H. G. Aparelho urogenital. In: Anatomia
dos animais domésticos – Órgãos e sistemas. Porto Alegre: Artmed, 2004. p. 15-79.
KORNEGAY, J. N.; BOGAN, D. J.; BOGAN, J. R.; CHILRES, M. K.; CUNDIFF,
D. D.; PETROSKI, G. F.; SCHUELER, R. O. Contraction force generated by tarsal
joint flexion and extension in dogs wth Golden Retriever muscular dystrophy. Journal
of the Neurological Sciences, v. 11, p. 161-173, 1988.
KRAWIEC, D. R.; BADERTSCHER II, R. R.; TWARDOCK, A. R.; RUBIN, S. I.;
GELBERG, H. B. Evaluetion of 99m TC- diethylenetriaminepentaacetic acid nuclear
imaging forr quantitative determination of the glomerular filtration rate of dogs.
American Journal of Veterinary Research, v. 47, p. 2175-2179, 1986.
LIU, J. M. K.; OKAMURA, C. S.; BOGAN, D. J.; BOGAN, J. R.; CHILDERS, M.
K.; KORNEGAY, J. N. Effects of prednisone in canine muscular dystrophy. Muscle
& Nerve, v. 30, p. 767-773, 2004.
MALNIC, G.; MARCONDES, M. Fisiologia renal. 3º ed. São Paulo: Editora
Pedagógica e Universitária LTDA, 1986.
MCKERRELL, R. E. Miopatias caninas e felinas. In DUNN, J. K. Tratado de
medicina de pequenos animais. São Paulo: Roca, 2004. p. 255 - 271.
MEYER, D. J.; COLES, E. H.; RICH, L. J. Veterináry laboratóry medicine.
Philadelphia: W. B. Saunders Company, 1992. P. 27–120.
MIYATAKE, M.; MIIKE, T.; ZHAO, J.; YOSHIOKA, K.; UCHINO, M.; USUKU,
G. Possible systemic smooth muscle layer dysfunction due to a deficiency of
dystrophin in Duchenne muscular dystrophy. Journal of Neurology Science, v. 93
n.1, p. 11-17. 1989.
MOE, L.; HEIENE, R. Estimation of glomerular filtration rate in dogs with 99m Tc-
DTPA and iohexol. Research in Veterinary Science, v. 58, p. 138-143, 1995.
85
Referências Bibliográficas
MORIUCHI, T.; KAGAWA, N.; MUKOYAMA, M.; HIZAWA, K. Autopsy analyses
of the muscular dystrophies. Takushima Journal Experimental Medicine. 1991.
MUSCATELLI, F.; STROM, T. M.; WALKER, A. P.; ZANARIA, E.; RECAN, D.;
MEIDL, A.; BARDONI, B.; GUIOLI, S.; ZEHETNER, G.; RABL, W. Mutations in
the DAX-1 gene give rise to both X-linked adrenal hipoplasia congenital and
hypogonadotropic hypogonadism. Nature, v. 372, n. 6507, p. 672–676, 1994.
McCAW, D.L.; FLEMING, E.J.; MINICIUK, M.G. Interpreting the results of
urinalysis: A key to diagnosing renal disorders. Veterinary Medicine. p. 261 – 6,
1989.
NGUYEN, F.; GUIGAND, L.; GOUBAULT-LEROUX, I.; WYERS, M. Muscle
lesions asociated with distrophin deficiency in neonatal Golden Retriever pupies.
Journal Commpendium of Pathology, v.126, n 2-3, p. 100-108, 2002.
NICHOLS, P. L.; LYMN, R. W.; DRISCOLL, P. P.; CLEARFIELD, C. Gene therapy
in Duchenne muscular dystrophy. Nih Guide. v. 23, 1994.
NOWAK, K. J.; DAVIES, K. E. Duchenne muscular dystrophy and distrophin:
pathogenesis and opportunities for treatment. Journal List – EMBO Reports, v. 5, n.
9, p. 872–876. 2004.
OSBORNE , C. A.; FINCO, D. R. Canine and feline nefrology and urology. Media:
Williams & Wilkins, 1995. 960 p.
PADHY, A. K. Medición de La finciónrenal por técnicas de aclariamento de
radionuclidos. Alasbimn Journal, n 6, p. 23, 2004
PILLERS, D. A.; WELEBER, R. G.; POWELL, B. R.; HANNA, C. E.; MAGENIS,
R. E.; BUIST, N. R. Aland Island eye disease (Forsius-Eriksson ocular albinism)
and an Xp21 deletion in pacient with Duchenne muscular dystrophy, glycerol kinase
deficiency, and congenital adrenal hipoplasia. American Journal of Medical
Genetics, v. 36, n. 1, p. 23 -28, 1990.
86
Referências Bibliográficas
PORTELLA, V.G. Influências de métodos de coleta de urina e de técnicas clínico-
laboratoriais sobre os resultados da urinálise e provas de função renal de cães.
Dissertação de Mestrado. Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias –
Universidade Estadual Paulista, p. 86, 2004.
SAMIEI, H. V. Genetic surgery for muscular dystrophy in goldem retrievers. Genome
news network, June, 2000. Disponível em:
<http://www.genomenewsnetwork.org/articles/06_00/muscular_dystrophy.shtml>
Acesso em: 2007.
SHELTON, G. D.; LIU, L. A.; GUO, L. T.; SMITH, G. K.; CHRISTIANSEN, J. S.;
THOMAS, W. B.; SMITH, M. O.; KLINE, K. L.; MARCH, P. A.; FLEGEL, T.;
ENGVALL, E. Muscular dystrophy in female dogs. Journal Veterinary internal
Medicine, v. 15, n. 3, p. 240-244, 2001.
SHELTON, G. D. e ENGVALL, E. Canine and feline models of human inherited
muscle diseases. Neuromuscular Disorders. v. 15, p. 127–38, 2005.
SOUZA, P., Efeitos do rofecoxibe sobre a área sobre a função renal e a homeostase de
água e sódio de cães com glomérulopatias crônicas, submetidos a anestesia com
sefoflurano, Dissertação de mestrado, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias
– Universidade Estadual Paulista, p. 20, 2002.
VAINZOF, M.; YAMAMOTO, L. U.; KOSSUGUE, P. M.; FOGAÇA, L. L. Q.;
VELLOSO, F. Z.; AYUB, D.; MUNIZ, V. P.; ZATZ, M.; SILVA, H. C. A.;
MASSIRONI, S. M. G.; MIGLINO, M. A.; AMBROSIO, C. E.; MIYAZATO, L. G.;
MORAES, J. R. E.; DÁNGELES, F. H. F.; LACERDA NETO, J. C.; MORTARI, A.
C.; BORJES, A. S.; REZENDE, L. A. L.; RAHAL, S. C. Animal models of
neuromuscular disorders. Revista Neurociências, v. 13, n. 3, 2005.
ZATZ, M.; PASSO BUENO, M.R. Miopatias hereditárias: Avanços dos últimos dois
anos. In: NITRINI, R.; MACHADO, L. R.; YACUBIAN, E. M. T.; RABELLO, G. D.
Condutas em neurologia. São Paulo: Clínica neurológica HC\FM USP, 1995. P. 71–
78.
APÊNDICES
88
Apêndices
Apêndice A – contador automático Perkin Elmen Precisely 1480 Automatic Gamma
Counter Wizard™3” (utilizado para realizar a contagem de atividade
radioativa nas amostras de sangue).
89
Apêndices
Apêndice B - Contador automático Perkin Elmen Precisely 1480 Automatic Gamma Counter
Wizard™ 3”
.
90
Apêndices
Apêndice C – Amostras de sangue sendo analisadas pelo contador automático.
91
Apêndices
Apêndice D – Animal afetado pela distrofia muscular progressiva.
92
Apêndices
Apêndice E – Animal afetado pela distrofia muscular progressiva em fase terminal.
93
Apêndices
Apêndice F – Animal afetado pela distrofia progressiva em plataforma utilizada para
alimentação.
94
Apêndices
Apêndice G – Tabela com a curva de decaimento da atividade plasmática de EDTA,
expressando o valor do clearance de EDTA-Cr.
NOME:
Hércules
data 9-mar-07
IDADE (anos) 0 anos
ALTURA
(centímetros) 0 cm
PESO (quilos) 13,5 kg
Superfície corpórea =
peso elevado a 0, 425 x altura el evado a 0,725 x 0,0 07184
0,00 m2
TÉCNICA DE 2 a 4 AMOSTRAS
k (min-1) = 0,011093
T1//2 (min) = 62
tempo contagens ajuste
0 988
988
120 261 261
240 69 69
85,7
ml/min
6,3
ml/min kg
RESULTADOS
Controle
qualidade
Volume de Distribuição 7727,795314 mL
R2 esperado >
0,99247
RFG sem correção 85,7 mL/min
RFG p/ 1,73 m2 de SC #DIV/0! mL/min/1,73m2
'vol. Distr > 40%
do peso' 57,2%
desvio padrão (se
feito em
duplicata):
padrão < 2 desvio padrão
120 < 2 desvio padrão
240 < 2 desvio padrão
'' 1 amostra
'' 1 amostra
95
Apêndices
Apêndice H – Planilha do Exel, com os resultados do Clearance de EDTA Cr
Reg X-Clinic
NOME Hércules Winner
data 39150 39150
IDADE
ALTURA
PESO 13,5 15,6
Volume de Distribuição 7727,79531401113 9218,99242147325
RFG sem correção 85,7230683730513 96,6720280493017
RFG p/ 1,73 m2 de SC #DIV/0! #DIV/0!
RFG c/ correção Chantler*
RFG c/ correção p /1,73 m2
RFG c/ corr Brochmer p/ 1,73m2
RFG c/ corr Brochmer sem corrção SC
K (const clareamento) 0,0110928233590282 0,0104861815293534
T1//2 = 0,693/k 62,4728238763474 66,0869734192683
Relação dose injetada/padrão 0,983616756532559 1,0519493985898
volume de diluição padrão 1000 1000
intervalo amostra 1 (min) 120 120
intervalo amostra 2 (min) 240 240
intervalo amostra 3 (min)
cpm / mL amostra 1 (-BG)
cpm / mL amostra 2 (-BG)
cpm / mL padrão (-BG)
cpm / ml amostra 3 (-BG)
cpm / ml amostra 4 (-BG)*
Comentários
*intervalo amostra 4
Groth (ml/min) #REF! #REF!
Groth (ml/min/1,73m2) #REF! #REF!
Ham (ml/min) #REF! #REF!
Ham (ml/min/1,73m2) #REF! #REF!
cpm / mL amostra 1 (-BG)
cpm / mL amostra 2 (-BG)
cpm / mL padrão (-BG)
cpm / ml amostra 3 (-BG)
cpm / ml amostra 4 (-BG)*
BG
vol Amostra 1 2 2
vol Amostra 2 2 2
vol padrão 2 2
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