( PDF ) Estudo das variações morfológica craniana e citogenética em Akodon cursor (rodentia:sigmodontinae) no Estado de Minas Gerais

EDMAR GUIMARÃES MANDUCA

ESTUDO DAS VARIAÇÕES MORFOLÓGICA CRANIANA E

CITOGENÉTICA EM Akodon cursor (RODENTIA:SIGMODONTINAE)

NO ESTADO DE MINAS GERAIS

Dissertação apresentada à

Universidade Federal de

Viçosa, como parte das

exigências do Programa de

Pós-Graduação em Biologia

Animal, para obtenção do

título de Magister Scientiae.

VIÇOSA

MINAS GERAIS – BRASIL

2008

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EDMAR GUIMARÃES MANDUCA

ESTUDO DAS VARIAÇÕES MORFOLÓGICA CRANIANA E

CITOGENÉTICA EM Akodon cursor (RODENTIA:SIGMODONTINAE)

NO ESTADO DE MINAS GERAIS

Dissertação apresentada à

Universidade Federal de

Viçosa, como parte das

exigências do Programa de

Pós-Graduação em Biologia

Animal, para obtenção do

título de Magister Scientiae.

APROVADA: 30 de abril de 2008.

Profª. Gisele Mendes Lessa Prof. Renato Neves Feio

(Co-Orientadora) (Co-Orientador)

Profª. Sônia Aparecida Talamoni Prof. Rubens Pazza

Prof. Jorge Abdala Dergam

(Orientador)

ii

“A UNIVERSIDADE poderá formar o cidadão,

mas somente a FAMÍLIA pode edificar o homem.”

iii

À minha família, aos amigos, e à Polyana

por todo carinho.

iv

AGRADECIMENTOS

Uma pesquisa científica não corresponde ao trabalho de uma só

pessoa. Para o desenvolvimento de um estudo científico é necessário que

façamos uniões entre pesquisadores das diversas áreas em busca do melhor

resultado possível. Sendo assim, nos deparamos ao longo da elaboração de

uma dissertação de mestrado com várias linhas de pesquisa, idéias e

pensamentos. Cada uma destas pessoas contribui com um ladrilho, calçando

o “nosso” caminho para a glória. Dessa forma, tenho a agradecer a muita

gente. Alguns talvez nem saibam o quão foram essenciais ao longo desta

jornada. As linhas e parágrafos que se seguem são uma pequena maneira de

traduzir o meu agradecimento a cada um de vocês.

Agradeço a CAPES pela bolsa concedida durante 22 meses, a qual foi

fundamental para minha permanência e desenvolvimento do trabalho em

Viçosa.

À Universidade Federal de Viçosa pela estrutura fornecida, desde o

espaço físico aos funcionários atenciosos e professores capacitados que me

transmitiram grandes ensinamentos.

Agradeço a Deus pela oportunidade dada e a força necessária para

concluir este projeto.

Aos amigos Jânio Moreira e Pablo Gonçalves, com os quais comecei

essa viagem pelo mundo dos pequenos roedores. Grandes professores e

exemplos a serem seguidos para a carreira acadêmica tanto quanto para a

vida pessoal.

À professora Gisele Lessa, pela amizade, companheirismo e carinho

dedicados. Sempre preocupada e atenciosa, foi uma das maiores

responsáveis pela elaboração deste trabalho.

v

Ao professor Jorge Dergam, pela amizade e por aceitar o desafio de

desvendar os mistérios que envolvem a taxonomia dos pequenos roedores.

Ao professor Renato Feio, pela amizade e acolhimento nos primeiros

anos de caminhada no Museu João Moojen, pelos ensinamentos e pelo

futebol de toda semana.

Aos funcionários do Departamento de Biologia Animal pela atenção

e solicitude para resolver problemas de cunho burocrático.

Aos amigos do Museu João Moojen, Rodolfo & Clever (com & para

mostrar que realmente formam uma dupla!) que sempre que possível (e

também quando era impossível) ajudaram com coletas, trabalhos

laboratoriais e na elaboração da dissertação. Colaboraram, e muito, para o

sucesso deste trabalho.

Ao amigo Rômulo D’ângelo pelas discussões e ajudas na parte da

estatística multivariada.

Aos demais amigos do Museu João Moojen, Maressa, André, Osiel,

Michel, Lêlê, Eliana, Emanuel, Jussara, Vitim, Larissa, Finin, São Pedro,

Henrique, Diego, Jhonny e todos os demais. Obrigado pela ajuda no campo,

dúvidas de informática, papos sobre biologia, papos nada a ver, pelas

bagunças, festas... Valeu!

Aos amigos do Laboratório Beagle, Lucioni, Uedson (Jacobina),

Hilton, Lilian e Gisele e em especial a Néia que colaborou de forma essencial

para a elaboração do capítulo sobre citogenética. Obrigado a vocês pelo

apoio, amizade, discussões e farras.

Aos amigos da BIO 2000 (Jânio, Calambau, Véio, Breno, Marcos,

Eduardo), sempre presentes, mesmo que a distância, ajudando na árdua

caminhada.

Aos amigos da República Oca, Wilson, Jacob, Finin, Bruno, São

Pedro e Jerry, com os quais fiz grande amizade durante os dois últimos anos

em Viçosa.

vi

Aos novos amigos que aqui fiz: Vinícius, Cíntia, Lucimar, dentre

tantos outros, que fizeram destes dois anos uma estadia muito melhor nesta

cidade.

Ao biólogo Alessandro Brinati , por ceder seus exemplares coletados

em Espera Feliz.

Ao Museu de Ciências Naturais da PUC Minas, na pessoa da

professora Tudy Câmara e de seus alunos Gislene e Danilo, pela

disponibilidade e abertura de sua coleção para que eu pudesse medir

exemplares de Akodon depositados na referida instituição e por ceder

amostras citogenéticas.

À minha família pelo apoio, mesmo que muitas vezes não

compreendendo muito bem o significado e aplicação da minha pesquisa.

“Mas esse rato serve para quê mesmo?”

À maior culpada por este trabalho, Polyana, pelo incentivo, apoio

carinho e paciência. Desde o início sofreu e se alegrou comigo por este

momento. Sua presença foi essencial para o andamento deste trabalho,

dando-me suporte em todas as etapas, desde o ingresso no curso até as

revisões finais dos capítulos.

Por fim, agradeço a todos que direta ou indiretamente contribuíram

para este trabalho possibilitando a conclusão de mais esta etapa de minha

vida. Obrigado!

vii

BIOGRAFIA

Edmar Guimarães Manduca, 4º filho de Edson Manduca e Maria

Lúcia Guimarães Manduca, nasceu em Belo Horizonte, Minas Gerais, em 06

de agosto de 1981.

Concluiu o Ensino Médio em dezembro de 1999, no Colégio Pio XII

de Belo Horizonte. Em fevereiro de 2000 iniciou o curso de Ciências

Biológicas na Universidade Federal de Viçosa. Durante a graduação foi

estagiário no Museu de Zoologia João Moojen da UFV. Em 28 de janeiro de

2005 graduou-se Licenciado e Bacharel em Ciências Biológicas. Em fevereiro

de 2006 ingressou no curso de Mestrado em Biologia Animal, na

Universidade Federal de Viçosa, defendendo a tese em março de 2008.

viii

SUMÁRIO

RESUMO .................................................................... Erro! Indicador não definido.

ABSTRACT................................................................ Erro! Indicador não definido.

1. INTRODUÇÃO GERAL .................................................................................. 1

2. ARTIGOS CIENTÍFICOS .............................................................................. 11

2.1. Manduca, E.G., G. Lessa & J.A. Dergam. 2008. Análise da variação

craniométrica em Akodon cursor (Rodentia:Sigmodontinae) no Estado de Minas

Gerais. ............................................................................................................................... 12

2.2. Manduca, E.G., C.B. Lima, J.A. Dergam & G. Lessa. 2008. Análise citogenética

em Akodon cursor (Rodentia:Sigmodontinae) no Estado de Minas Gerais.............. 46

CONCLUSÕES GERAIS ................................................................................... 67

ANEXO FOTOGRÁFICO ................................................................................... 68

ix

RESUMO

MANDUCA, Edmar Guimarães, M.Sc., Universidade Federal de Viçosa, abril

de 2008. Estudo das variações morfológica craniana e citogenética em

Akodon cursor (Rodentia:Sigmodontinae) no Estado de Minas Gerais.

Orientador: Jorge Abdala Dergam dos Santos. Co-Orientadores: Gisele

Mendes Lessa e Renato Neves Feio.

Akodon cursor é um roedor sigmodontíneo com ampla distribuição no leste do

Brasil. Ocorre desde Pernambuco até o Paraná apresentando grande variação

morfológica craniana e citogenética em suas populações. Muitos esforços têm

sido realizados com o intuito de desvendar os padrões de distribuição dos

diferentes citótipos e distinguir as formas morfológicas desta espécie com

relação a outras do gênero. Morfologicamente a espécie apresenta grande

similaridade externa e interna a outras espécies do gênero. Citogeneticamente

distingue-se das demais por apresentar número diplóide variando de 2n = 14,

15 e 16 e por apresentar um dos maiores polimorfismos cromossômicos

dentre os mamíferos. Populações desta espécie em remanescentes de Mata

Atlântica do Estado de Minas Gerais têm sido pouco exploradas ou

analisadas com base em um número reduzido de indivíduos. Desta forma, o

objetivo deste trabalho foi avaliar a variação intra e interpopulacional da

morfologia craniana e citogenética de exemplares de A. crusor coletados em

algumas áreas no Estado de Minas Gerais. Foram tomadas 20 medidas

cranianas para a elaboração das análises morfométricas. As estatísticas

descritiva e multivariada foram realizadas para a visualização dos padrões

morfométricos. Análises citogenéticas foram utilizadas para visualização dos

padrões polimórficos intra e interpopulacionais das populações de A. cursor

em território mineiro. A estatística multivariada apontou uma diferenciação

na morfologia craniana entre os exemplares das diferentes áreas ao longo do

eixo de forma. Os métodos citogenéticos permitiram a visualização de

polimorfismos intra e interpopulacionais que, de acordo com o teste de χ

2

,

encontram-se em equilíbrio de Hardy-Wienberg. As técnicas de bandeamento

C e Ag-NOR não evidenciaram diferenças entre as populações analisadas. O

x

Parque Estadual da Serra do Brigadeiro possivelmente representa a

população com maior distribuição altitudinal deste roedor. O fator altitudinal

pode representar uma variável para explicar a diferença observada na

morfologia craniana das populações analisadas. A avaliação da população

presente no Parque Estadual da Serra do Brigadeiro e a adição de novas áreas

com maior número de exemplares fornecerão uma nova base de dados para a

compreensão da evolução da espécie em termos morfológicos e citogenéticos.

xi

ABSTRACT

MANDUCA, Edmar Guimarães, M.Sc., Universidade Federal de Viçosa,

April 2008. Study of variations in cranial morphology and cytogenetic

of Akodon cursor (Rodentia: Sigmodontinae) in the State of Minas

Gerais. Adviser: Jorge Abdala Dergam dos Santos. Co-Advisers: Gisele

Mendes Lessa and Renato Neves Feio.

Akodon cursor is a sigmodontine rodent with wide distribution in the eastern

of Brazil. It occurs from Pernambuco to Paraná presenting high levels of

morphological and cytogenetic variation in their populations. Many efforts

have been made in order to uncover the distribution patterns of different

cytotypes and to distinguish the morphological forms of this species in

relation to the others from the same genus. Morphologically the species has

great internal and external similarity to other species of the genus.

Cytogenetically distinguishes from others for having its diploid number

ranging from 2n = 14, 15 and 16 and too for having one of the greatest

chromosome polymorphisms among mammals. Populations of this species

in the Atlantic Forest remnants of the State of Minas Gerais has been little

explored or analyzed based in a reduced individuals number. In this way,

the objective of this study was to evaluate the intra and interpopulation

variation in skull and cytogenetics morphology of specimens of A. crusor

collected in some areas in the state of Minas Gerais. Twenty measures have

been taken for the establishment of cranial morphometric analysis. The

descriptive and multivariate statistics were held to the view of the

morphometric patterns. Cytogenetic analyses were used to view the

polymorphims patterns intra and interpopulation of A. cursor in Minas

Gerais State. The multivariate statistics showed a differentiation in cranial

morphology between specimens of different areas along the shape axis.

The cytogenetic methods allowed the view of polymorphisms intra and

interpopulations that, according to the χ2 test, are in Hardy-Wienberg

balance. The banding techniques C and Ag-NOR did not reveal differences

between populations studied. The Parque Estadual da Serra do Brigadeiro

xii

possibly represents the population with higher altitudinal distribution of this

rodent. The altitudinal factor may represent a variable to explain the

observed difference in skull morphology in studied populations. The

assessment of the population present in Parque Estadual da Serra do

Brigadeiro and the addition of new areas with a bigger number of specimens

will provide a new database for understanding the evolution of the species in

morphological and cytogenetic terms.

1

1. INTRODUÇÃO GERAL

A Ordem Rodentia é a que possui maior riqueza de espécies dentre

os mamíferos e inclui os ratos, camundongos, ratos-de-espinho e capivaras,

dentre outros. Com 2.277 espécies descritas (Musser & Carleton, 2005), e

outras descritas posteriormente para a América do Sul (Weksler et al. 2006;

Costa et al., 2007; D’élia & Pardiñas, 2007), é uma Ordem de extrema

importância do ponto de vista ecológico, possuindo elementos essenciais

para a manutenção das diversas relações ecológicas entre os diferentes

organismos.

Dos mamíferos presentes atualmente no continente Sul Americano

aproximadamente 43% pertencem à Ordem Rodentia. Destes roedores, 377

espécies estão alocadas na subfamília Sigmodontinae (Musser & Carleton,

2005). No Brasil, são conhecidas 117 espécies válidas para esta subfamília

(Oliveira & Bonvicino, 2006).

A Mata Atlântica, no sudeste do Brasil, contém uma significativa

diversidade de linhagens dos Sigmodontinae sendo considerada um centro

geográfico importante na diversificação deste grupo (Smith & Patton, 1999).

Detentora de uma fisionomia vegetal bastante variada, a Mata Atlântica

constitui um valioso mosaico de ambientes para a alta diversidade biológica

(Tabarelli et al., 2005; Lino, 1992; Terborgh, 1992). Este ecossistema apresenta

aproximadamente 77 espécies de pequenos roedores descritos, dentre os

quais 35 são endêmicos (e.g. Delomys sublineatus, Phaenomys ferrugineus,

Thaptomys nigrita), alguns com distribuição restrita a maciços florestais

específicos (e.g. Parque Nacional do Caparaó – Akodon mystax e Oxymycterus

caparaoe) (Myers et al. 2000; Hershkovitz, 1998; Fonseca et al. 1996).

A taxonomia dos sigmodontíneos é complexa, devido principalmente

à sua grande diversidade. Ela favorece a presença de caracteres

homoplásticos (e.g. convergências e paralelismos) entre os organismos,

dificultando a determinação de filogenias para o grupo (Pardiñas et al., 2002;

D’élia, 2003).

2

O estudo da morfologia corporal e craniana complementado com

dados citogenéticos, tem auxiliado na revisão e delimitação de táxons dentro

dos roedores (Van-Gelder, 1969; Bonvicino & Almeida, 2000; Geise et al.,

2005; Gonçalves et al., 2005; Paresque et al., 2007), além de esclarecer padrões

cariotípicos e morfológicos de espécies e populações ao longo de suas

distribuições geográficas (Christoff, 1997; Fagundes et al., 1998; Fagundes et

al., 2000; Bonvicino et al., 2003; Ventura et al., 2004; Gonçalves & Oliveira,

2004; Geise et al., 2005; Lessa et al., 2005; Paresque et al., 2007).

Um táxon que merece destaque por apresentar grande variedade

morfológica e citogenética é o gênero Akodon. Diversos estudos realizados

com as espécies brasileiras têm permitido a caracterização e determinação

dos limites geográficos de distribuição das diferentes linhagens dentro deste

táxon (Christoff, 1997, Christoff et al., 2000, Geise et al., 2005).

O gênero Akodon Meyen, 1833 foi descrito como “animais de forma

inalterada e peles normais, com coloração dorsal cinza, marrom ou olivácea,

sem nenhuma marca especial”. Os olhos são considerados como de

“tamanho normal” e a cauda, como de “tamanho moderado”. As garras são

“normais”, mas variáveis em tamanho (Gyldenstope, 1932). Esta descrição

não inclui caracteres diagnósticos que permitam uma determinação

satisfatória do grupo sem que haja conflitos de identidade com outros táxons.

Neste mesmo manuscrito é listado um total de 44 espécies para o gênero

Akodon. Porém algumas destas espécies foram posteriormente consideradas

como sinonímias, principalmente devido ao avanço no grau de resolução de

novas técnicas sistemáticas como a morfometria, a citogenética e a biologia

molecular (Geise et al., 1998; Geise et al., 2001; Gonçalves et al., 2007). Dessa

forma, a real diversidade e delimitação do táxon têm se estruturado melhor

sob a ótica da sistemática filogenética (Gonçalves et al. 2007).

Atualmente são reconhecidas 41 espécies para todo o gênero. Sua

distribuição é restrita à América do Sul (Musser & Carleton, 2005), com 10

espécies no Brasil e quatro no Estado de Minas Gerais (Oliveira & Bonvicino,

2006). Os membros deste gênero presentes em território brasileiro, têm

3

tamanho pequeno (85-128mm, 16-56g), orelhas grandes (12-20mm) e cauda

pouco menor que o comprimento do corpo (56-111mm). A pelagem do dorso

varia do castanho-claro ao castanho-escuro, sem um limite definido com

relação à coloração ventral, que é cinza-amarelada ou cinza-esbranquiçada.

As orelhas são pouco pilosas (Oliveira & Bonvicino, 2006).

Estes animais habitam formações florestais, áreas abertas adjacentes e

campos de altitude ao longo de toda a Mata Atlântica, nos Campos do Sul,

nas áreas florestais da Caatinga e nas formações vegetais abertas e fechadas

do Cerrado (Oliveira & Bonvicino, 2006). São animais de hábito terrestre e

dieta insetívora-onívora (Graipel et al., 2003).

Akodon cursor (Winge, 1887) é uma das espécies deste diverso gênero

de roedores sigmodontíneos. Possui ampla distribuição ao longo do domínio

da Mata Atlântica, ocorrendo desde o Estado da Paraíba até o Paraná e no

leste de Minas Gerais (Oliveira & Bonvicino, 2006). Sua localidade-tipo é

Lagoa Santa, rio das Velhas, Minas Gerais. Segundo Pardiñas et al. (2003) esta

espécie aparentemente ocorre no nordeste da Argentina, Província de

Misiones, mas a identificação do espécime ainda é duvidosa, deixando

incerto o limite de distribuição geográfica da espécie (Musser & Carleton,

2005).

Akodon cursor demonstra um dos maiores graus de polimorfismos

cromossômicos conhecidos para os mamíferos até o momento, apresentando

um número diplóide (2n) que varia de 14 até 16 e uma grande variação dos

valores do número fundamental autossômico (NF), que varia de 18 a 26, o

que possibilita a identificação de 28 citótipos distintos ao longo de sua

distribuição na Mata Atlântica (Fagundes et al., 1998). Trabalhos realizados

para uma única população de Guaraqueçaba no Paraná registraram animais

com 2n igual a 14, 15 e 16, distribuídos em 18 citótipos distintos, sendo oito

destes registros inéditos para a ciência. Este fato demonstra a alta

variabilidade citogenética desta espécie (Sbalqueiro & Nascimento, 1996;

Nascimento, 1998).

4

Morfologicamente a espécie é muito semelhante a outras dentro do

gênero, principalmente a A. montensis, sendo o método citogenético uma

ferramenta muito útil na distinção destes dois táxons, já que A. montensis

apresenta número diplóide variando de 24 a 26 (Christoff, 1997).

O Estado de Minas Gerais possui áreas de Mata Atlântica ainda

conservadas e prioritárias para estudos ecológicos, evolutivos e

biogeográficos (Conservação Internacional, 2000). Dentre estas áreas

destacam-se a Estação de Pesquisa, Treinamento e Educação Ambiental Mata

do Paraíso (EPTEA), localizada no município de Viçosa e o Parque Estadual

da Serra do Brigadeiro (PESB), que abrange oito municípios mineiros

(Araponga, Divino, Ervália, Fervedouro, Miradouro, Muriaé, Pedra Bonita,

Sericita) com gradiente altitudinal (1000 até 1985 metros) importante sob o

ponto de vista biológico como possível atuante na diferenciação de táxons

por especiação parapátrica, na qual não há isolamento geográfico evidente

(Gonçalves, 2007). Essas áreas, que são diversas com relação ao número de

espécies de sigmodontíneos que abrigam (Gonçalves et al., 1998; Lessa et al.,

1999; Manduca et al., 2006a), carecem de estudos mais detalhados sobre as

populações destes pequenos roedores. Estes animais fazem parte de um

grupo de difícil visualização em campo e carente de estudos taxonômicos.

Revisões realizadas com base em material depositado em museus e/ou

novas coletas em locais ainda não amostrados têm proporcionado a descrição

de novas espécies (Patterson, 2000; Weksler et al., 2006; Costa et al., 2007).

Nas áreas de Mata Atlântica propostas para a realização deste

trabalho, não há estudos detalhados das populações de Akodon cursor.

Entretanto, estudos citogenéticos e morfológicos já foram realizados com esta

espécie em diversas localidades do país. O estudo das amostras de Minas

Gerais é reduzido, o que pode obscurecer a real diversidade da espécie. Do

ponto de vista citogenético as populações mineiras possuem apenas dados

primários referentes às amostras coletadas no PESB (Manduca et al., 2006b).

Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi estudar as populações do

sigmodontíneo Akodon cursor presente em remanescentes mineiros de Mata

5

Atlântica, com o objetivo de avaliar a variação intra e interpopulacional de

caracteres morfológicos cranianos e citogenéticos, compreender o padrão de

distribuição dos parâmetros analisados nestas populações, contrapondo-os

com outros trabalhos já publicados, buscando preencher lacunas do

conhecimento do grupo ao longo de sua distribuição geográfica.

6

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7

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11

2. ARTIGOS CIENTÍFICOS

2.1. Manduca, E.G., G. Lessa & J.A. Dergam. 2008. Variação craniométrica em

Akodon cursor (Rodentia:Sigmodontinae) no Estado de Minas Gerais.

2.2. Manduca, E.G., C.B. Lima, J.A. Dergam & G. Lessa. 2008. Análise

citogenética em Akodon cursor (Rodentia:Sigmodontinae) no Estado de

Minas Gerais.

12

2.1. Manduca, E.G., G. Lessa & J.A. Dergam. 2008. Análise da variação

craniométrica em Akodon cursor (Rodentia:Sigmodontinae) no Estado de

Minas Gerais.

13

Análise da variação craniométrica em Akodon cursor

(Rodentia:Sigmodontinae) no Estado de Minas Gerais.

Edmar Guimarães Manduca, Gisele Lessa & Jorge Abdala Dergam

Introdução

Os roedores sigmodontíneos do gênero Akodon são abundantes tanto

nas Florestas Ombrófila Mista e Ombrófila Densa da encosta atlântica como

nas Florestas Estacional Decidual e Semidecidual no leste da América do Sul

(Oliveira & Bonvicino, 2006). Corresponde ao gênero mais diverso da tribo

Akodontini, sendo uma das maiores subdivisões dentro da subfamília

Sigmodontinae (Musser & Carleton, 2005).

O gênero Akodon não apresenta limites específicos bem definidos

quando determinados por caracteres morfológicos (Smith & Patton, 1993).

Esta similaridade morfológica entre as espécies do gênero reduz a utilidade

de espécimes coletados que não apresentem dados genéticos associados

(Geise et al., 2005). Recentemente, estudos morfológicos associados a dados

moleculares buscam características que podem ser úteis para a distinção de

espécies dentro deste gênero (Gonçalves et al., 2007).

Entretanto, estudos morfológicos apontam que espécies crípticas (e.g.

A. cursor e A. montensis) poderiam ser corretamente identificadas, mas que

dependeriam de amostras locais relativamente grandes (Geise et al., 2005), o

que demonstra a relevância de estudos com indivíduos de uma mesma

população.

A descrição de padrões de variação em caracteres morfológicos ou

genéticos dentro e entre populações é fundamental para a definição dos

limites entre unidades evolutivas independentes na natureza. Um passo

importante no reconhecimento destas unidades é a identificação de grupos

de populações que compartilhem características morfológicas ao longo de

sua distribuição geográfica (Dos-Reis et al., 2002). O reconhecimento da

variação morfológica craniana intraespecífica e geográfica de uma

14

determinada espécie é um passo importante para posteriores comparações

envolvendo outros táxons (Brandt & Pessôa, 1994; Dos-Reis et al., 2002).

Para as populações de A. cursor do Estado de Minas Gerais, ainda são

poucos os trabalhos com enfoques morfológicos (Geise et al., 2005; Gonçalves

et al., 2007).

Dessa forma, a análise de exemplares de A. cursor no Estado de Minas

Gerais fornecerá uma nova base de dados para posterior comparação com os

táxons crípticos a essa espécie e uma avaliação mais acurada acerca das

variações morfológicas cranianas das populações desta espécie,

principalmente devido à presença da população com maior distribuição

altitudinal conhecida para a espécie na área do Parque Estadual da Serra do

Brigadeiro (Geise, com. pess.).

Sendo assim, buscamos avaliar os padrões na morfologia craniana

intra e inter populacionais de A. cursor provenientes de áreas no Estado de

Minas Gerais utilizando ferramentas estatísticas (uni e multivariadas) para a

visualização de variações nas populações em estudo.

Material e Métodos

Amostras

Foi analisado um total de 184 exemplares previamente identificados

como A. cursor oriundos de oito localidades do Estado de Minas Gerais

(Figura 1) depositados nas coleções do Museu de Zoologia João Moojen

(MZUFV) e no Museu de Ciências Naturais da PUC Minas (MCN-PUC). A

identificação do material foi feita com base nas etiquetas de identificação,

avaliação de caracteres diagnósticos para a espécie (e.g. comprimento da

série molar) e, quando possível, com a definição do número diplóide do

espécime. Para a análise de variação intrapopulacional foi selecionada a

amostra do Parque Estadual da Serra do Brigadeiro (PESB), por apresentar

menor número de crânios avariados. Nas análises geográficas foram

adicionadas a amostra do PESB os indivíduos do município de Abre Campo

(AC), de Espera Feliz (EF) e de Viçosa (VIC). Localidades com reduzido

15

número de espécimes (Canaã, Leme do Prado, Mariana e Pedra do Anta)

foram analisadas apenas qualitativamente, não sendo consideradas nas

análises estatísticas.

Figura 1. Localidades referentes às amostras de Akodon cursor provenientes de remanescentes de

Mata Atlântica do Estado de Minas Gerais utilizadas nas análises morfométricas cranianas. 1- Abre

Campo (n=3), 2- Parque Estadual da Serra do Brigadeiro (n=77), 3- Espera Feliz (n=12), 4- Viçosa

(n=88), 5- Canaã (n=1), 6- Pedra do Anta (n=1), 7- Mariana (n=1) e 8- Leme do Prado (n=1).

Morfometria

Para as análises morfométricas foram selecionados vinte caracteres

cranianos. Estes caracteres foram medidos por meio de um paquímetro

digital com precisão de 0,01mm. Os caracteres foram definidos de acordo

com literatura específica (Voss, 1991; Oliveira, 1992; Christoff, 1997;

Gonçalves, 2001). Os caracteres avaliados e suas definições se encontram

listados abaixo e podem ser observados no esquema da Figura 2:

CTC (Comprimento total do crânio): distância máxima medida entre a borda

anterior dos nasais e a borda posterior do occipital.

16

LIO (Largura do interorbital): distância mínima interobital.

CN (Comprimento dos nasais): distância entre a borda anterior dos nasais e a

sutura naso-frontal.

CFI (Comprimento do forâmen incisivo): distância entre a borda anterior e a

borda posterior do forâmen incisivo.

DIA (Diastema): distância entre o alvéolo posterior dos incisivos e o alvéolo

anterior do primeiro molar.

LZI (Largura do arco zigomático): maior distância entre as bordas laterais do

arco zigomático.

LCC (Largura da caixa craniana): largura entre as regiões anteriores da

sutura dos esquamosais e o occipital.

LRO (Largura rostral): largura do rostro medida na altura do forâmen

infraorbital.

SMS (Série molar superior): distância entre a borda do alvéolo anterior do

primeiro molar e a borda do alvéolo posterior do terceiro molar.

LPZ (Largura da placa zigomática): distância medida na base da placa

zigomática do limite anterior ao posterior.

CP (Comprimento palatal): distância entre a borda posterior do alvéolo do

incisivo e a borda do palato.

CPP (Comprimento da ponte palatal): distância entre a borda posterior do

forâmen incisivo e a borda do palato.

LCO (Largura entre os côndilos occipitais): maior distância entre as bordas

externas dos côndilos occipitais.

CBA (Comprimento basilar): distância entre a borda posterior do alvéolo do

incisivo e a borda anterior do forâmen magnum.

CI (Comprimento interparietal): distância antero-posterior do eixo mediano

do interparietal.

LI (Largura interparietal): distância máxima entre os limites laterais do

interparietal.

LP (Largura palatal): largura entre as séries molares medida entre o primeiro

e o segundo molar.

17

CO (Comprimento orbital): distância interna entre a sutura do frontal com o

maxilar até a raiz do esquamosal presente no arco zigomático.

AMC (Altura máxima do crânio): distância entre a sutura basiesfenóide-

basioccipital e a sutura fronto-parietal.

LMB (Largura máxima da bula): distância máxima entre a junção da sutura

basiesfenódie e basioccipital e a borda externa da bula.

L R O

L I O

CO

L I

C I

L C C

CN

CTC

L Z I

C F I

D I A

SMS

L M B

L P

CP

CPP

LCO

CBA

LPZ

AMC

Figura 2. Vista dorsal, ventral e lateral do crânio de A. cursor (MZUFV 1263) ilustrando os caracteres

morfométricos medidos. CTC (Comprimento total do crânio), LIO (Largura do interorbital), CN (Comprimento dos

nasais), CFI (Comprimento do forâmen incisivo), DIA (Diastema), LZI (Largura do arco zigomático), LCC (Largura da caixa

craniana), LRO (Largura rostral), SMS (Série molar superior), LPZ (Largura da placa zigomática), CP (Comprimento palatal),

CPP (Comprimento da ponte palatal), LCO (Largura entre os côndilos occipitais), CBA (Comprimento basilar), LI (Largura do

interparietal), CI (Comprimento do interparietal), LP (Largura palatal), CO (Comprimento orbital), AMC (Altura máxima do

crânio), LMB (Largura máxima da bula). Barra = 10mm.

18

Variação intrapopulacional

Um passo importante para o reconhecimento de unidades geográficas

é a compreensão de níveis de variabilidade intrapopulacionais tais como

variações ontogenéticas e dimorfismos sexuais. Este fato deve ser observado

para evitar erros na interpretação de dados sobre diferentes populações de

um táxon. O estudo da variação intrapopulacional possibilita a seleção

prévia de caracteres menos influenciados pelos fatores etários ou sexuais

(Brandt & Pessôa, 1994; Pessôa & Reis, 1994; Bandouk & Dos-Reis, 1995).

Considerando-se que diante de uma mesma população os fatores

ambientais influenciam os indivíduos de uma forma semelhante, espécimes

de uma mesma localidade são úteis em análises de variações morfométricas,

pois constituem uma forma de controlar possíveis efeitos de fatores residuais

sobre a variação observada permitindo observar as variações que decorrem

exclusivamente do sexo e idade de cada indivíduo (Moreira, 2007).

Como ponto inicial no estudo da variabilidade etária em A. cursor os

indivíduos utilizados nas análises morfológicas obtiveram suas idades

estabelecidas a partir da avaliação do desgaste da série molar superior (M1,

M2 e M3) com base nas condições de ocorrência de dobras e projeções de

esmalte de cada molar. Como este desgaste decorre de um conjunto de

variáveis foi estabelecida uma alocação dos espécimes em idades relativas.

As terminologias utilizadas nas descrições das topologias dentárias seguem

Reig (1977).

As mudanças observadas nos crânios de A. cursor devido à idade

foram testadas estatisticamente com o uso de análises de variância (ANOVA)

para cada sexo separadamente e em conjunto. Para identificar as categorias

etárias que apresentaram variáveis com médias significativamente distintas

foi realizado teste de Tukey, estabelecido o nível de significância de 5%.

Informações sobre o grau de obliteração de suturas e o

desenvolvimento de estruturas cranianas têm sido utilizadas por diversos

autores para determinar classes etárias relativas em roedores (Christoff, 1997;

Lessa & Pessôa, 2005). Como método auxiliar na determinação das diferenças

19

devido à idade foram avaliadas duas características ao longo do intervalo

ontogenético dos animais: (1) o grau de desenvolvimento do osso lacrimal e

(2) a forma da caixa craniana.

Para observar a variação sexual, cada caráter foi comparado por sexo

dentro de uma mesma classe etária. Para avaliar diferenças significativas

entre os sexos foi realizado o teste t de Student.

Todas as análises univariadas foram realizadas através do software

Statistica 6.0 para Windows (Statsoft, 2001).

Na busca por padrões gerais de variação no tamanho e forma ao

longo das amostras foram realizadas Análises de Componentes Principais

(ACP) a partir da matriz de variância-covariância (Manly, 1994) das 20

variáveis log-transformadas para a amostra do PESB com todas as idades.

Este análise exploratória é apontada como indicadora da variação

multidimensional do fator de tamanho em estudos ontogenéticos com

roedores (Reis et al., 1990; Gonçalves, 2001; Lessa & Pêssoa, 2005). Para

verificar o grau de variação entre os sexos para todas as variáveis

simultaneamente e em todas as classes de idade combinadas, foi realizada

uma Análise Canônica Independente-do-Tamanho (Reis et al., 1990).

As análises multivariadas foram executadas utilizando-se o software

Matlab 4.2 para Windows (Math Works, 1994).

Variação geográfica

Para os dados ausentes (estruturas danificadas e ou quebradas) foi

utilizada uma rotina de verossimilhança máxima de expectativa-

maximização (Dempster et al., 1977). Este procedimento estima os dados

ausentes ajustando interativamente a matriz de variância-covariância dos

caracteres sem alterar acentuadamente a estrutura original dos dados.

Da mesma forma como realizado para a amostra do PESB, foram

executadas ACP como método exploratório para avaliar os padrões gerais de

tamanho e forma entre quatro populações de A. cursor (AC, EF, VIC e PESB).

20

Em seguida foram realizadas análises discriminantes independente do

tamanho com a determinação de grupos geográficos a priori.

Dos vinte caracteres craniométricos medidos, dois deles (CI e LI)

foram excluídos da análise geográfica por apresentarem grande variabilidade

intrapopulacional, de forma semelhante proposta em outros trabalhos (Peres-

Neto, 1995).

Posteriormente foram construídos dendogramas utilizando

agrupamentos baseados nas Distâncias de Mahalanobis. Como forma de

representar graficamente a similaridade multivariada, medida a partir da

distância de Mahalanobis, foi utilizado o método de UPGMA (Unweighted

Pair-Group Method using Arithmetic Averages).

Características qualitativas dos crânios provenientes das oito

localidades foram avaliadas de forma aditiva a fim de verificar possíveis

variações interpopulacionais. Foram avaliadas alterações na forma e

tamanho dos crânios, forma da placa zigomática, o tamanho e forma dos

foramens pós-glenóide e escamosal, a forma das fossas pterigóide e

parapterigóide e a forma do forâmen incisivo.

Resultados

Categorias Etárias

As idades relativas dos indivíduos utilizados nas análises

morfológicas foram estimadas a partir da avaliação do desgaste da superfície

de oclusão da série molar superior (Figura 3). Dessa forma definimos cinco

categorias etárias relativas (1 a 5) de acordo com o desgaste dos molares de

A. cursor em nossa amostra, sendo elas:

Classe 1: M1 e M2 sem desgaste, com suas cúspides bem acuminadas,

posterolofos presentes; M1 com cônulos anterolingual e anterolabial bem

evidentes, anteroflexo mediano bem marcado; M3 não-eclodido ou recém

eclodido ainda com cúspides e flexos não desgastados.

Classe 2: M1, M2 e M3 pouco desgastados, com a superfície oclusiva estreita

e cúspides pouco desgastadas; M1 com anteroflexo mediano bem marcado,

21

muros anterior e posterior estreitos; M1 e M2 com paraflexos e metaflexos

distintos circundando o paracone e o metacone respectivamente, posterolofos

distintos; M3 com cúspides moderadamente desgastadas, sendo o hipocone o

mais desgastado, mas ainda distintas. Paraflexo, metaflexo e hipoflexos ainda

presentes.

Classe 3: M1, M2 e M3 moderadamente desgastados com as cúspides

linguais apresentando formato mais arredondado (M1 e M2) ou reto (M3);

M1 com anteroflexo mediano marcado, muros anterior e posterior estreito;

M1 e M2 com paraflexos e metaflexos circundando o paracone e o metacone

respectivamente, posterolofos bem reduzidos; M3 com metaflexo reduzido e

hipoflexo vestigial, paracone e protocone ainda distintos.

Classe 4: M1, M2 e M3 gastos, com superfície oclusiva bem expandida,

cúspides arredondadas; M1 com anteroflexo mediano vestigial ou ausente,

muros muito expandidos; M2 com paraflexo vestigial ou ausente; M3

apresentando formato triangular e com a presença apenas do paracone.

Classe 5: M1, M2 e M3 gastos, com superfície oclusiva muito expandida,

cúspides (quando presentes) restritas a margem da coroa; M1 com

anteroflexo mediano ausente, flexos reduzidos, vestgiais ou ausentes; M2

com aspecto quadrangular; M3 cilíndrico.

Com relação às características qualitativas relacionadas à idade, o

lacrimal apresentou aumento de tamanho ao longo do desenvolvimento

etário de A. cursor. A caixa craniana demonstrou variação no tamanho e na

forma ao longo da ontogenia da espécie (Figura 4). Para os indivíduos mais

jovens a caixa craniana apresenta-se em um formato arredondado e no

decorrer do desenvolvimento ontogenético esta estrutura aumenta em

tamanho e toma formatos com traços mais retos, perdendo a característica

inicial. Na Figura 5 é apresentada a série ontogenética de A. cursor

demonstrando o padrão de desenvolvimento ao longo das classes de idade.

22

Variação intrapopulacional

Análises Univariadas

As análises de variância (ANOVA) revelaram diferenças de tamanho

na média das variáveis entre as categorias etárias relativas de A. cursor.

Foram identificadas 16 variáveis (CTC, CN, CFI, DIA, LZI, LCC, LRO, LPZ,

CP, LCO, CPP, CBA, LP, CO, AMC, LMB) que apresentaram aumento de

tamanho na média entre as categorias etárias relativas quando analisados os

sexos em conjunto. Este fato demonstra a variação craniana durante a

ontogenia de A. cursor. Apenas a largura interorbital (LIO), o comprimento

da série molar superior (SMS) e a largura (LI) e comprimento (CI) do

interparietal não apresentaram diferenças significativas entre as classes de

idade reconhecidas, demonstrando uma grande variabilidade destes

caracteres morfométricos entre as classes de idade relativas (Tabela 1). Para

ambos os sexos foi observado um padrão de aumento de tamanho das

variáveis na média entre as classes de idade. De uma maneira geral as

variáveis estudadas apresentam um crescimento contínuo durante a

ontogenia da espécie. Porém, algumas delas (CN, CFI, LCC, LPZ, CO)

tiveram um aumento em suas dimensões nas primeiras categorias etárias (1 e

2).

Quando os sexos foram avaliados separadamente observou-se que

machos e fêmeas apresentaram caracteres que aumentaram

significativamente de tamanho em média entre as categorias etárias relativas

sendo 15 (CTC, CN, CFI, DIA, LZI, LCC, LRO, LPZ, CP, SMS, CPP, CBA, LP,

CO, AMC) nos machos e oito (CTC, CN, CFI, DIA, SMS, CP, CBA, LP) nas

fêmeas. A variável SMS (Série molar superior) apresentou-se não

significativa quando avaliados os sexos combinados e significativa com os

sexos separados.

De acordo com o teste de Tukey pode-se detectar quais foram as

classes de idade relativa que apresentaram diferenças significativas entre as

médias das variáveis mensuradas (Tabela 1).

23

As classes de idade relativas foram avaliadas de duas a duas para

diagnosticar a similaridade entre as médias observadas. Este procedimento

foi realizado para a amostra total e com cada sexo. Durante esta etapa foi

Figura 3. Padrões de desgaste dentário da superfície de oclusão da série molar superior

em A. cursor. (A) Idade 1, (B) Idade 2, (C) Idade 3, (D) Idade 4 e (E) Idade 5.

Figura 4. Variação morfológica etária observada na alteração do formato da caixa

craniana (A-C) e desenvolvimento do lacrimal (D-F) ao longo da ontogenia de A. cursor

provenientes do PESB. Idade 1 (A e D), Idade 3 (B e E) e Idade 5 (C e F).

Figura 5. Vista dorsal da série ontogenética de Akodon cursor. Idades 1-5 da esquerda para a

direita. Barra = 10mm.

24

identificado que as classes de idade 3 e 4 apresentaram maior número de

variáveis com médias estatisticamente iguais. Para a amostra total foram

identificadas 19 variáveis com médias iguais, sendo apenas a média da

variável largura palatal (LP) significativamente distinta. Para as amostras de

cada sexo foi verificado que machos e fêmeas apresentam igualdade de

médias para todas as variáveis entre as classes de idade relativas 3 e 4.

Variação sexual

O teste t revelou diferenças estatisticamente significativas na média de

12 caracteres entre machos e fêmeas (Tabela 2). Apenas para a variável SMS

(Série molar superior) na idade 2 as fêmeas apresentaram tamanho médio

estatisticamente superior aos machos. Foi possível observar que nas idades 4

e 5, machos e fêmeas exibem um maior número de variáveis

significativamente distintas (5) o que demonstra um possível aumento no

dimorfismo sexual durante a ontogenia da espécie.

A análise do dimorfismo sexual com as classes de idade combinadas

mostrou uma diferença significativa para as variáveis LCC (Largura da caixa

craniana) e LRO (Largura rostral) com os machos com valores médios

estatisticamente maiores aos das fêmeas.

Componentes de Variação

A maior proporção de variabilidade adicionada à amostra total dos

exemplares da população de Akodon cursor provenientes da Serra do

Brigadeiro foi pelo resíduo (59,33%). Quando avaliados os indivíduos das

classes de idade relativas de 3 a 5 o resíduo contribuiu com 74,41% da

variação nos dados obtidos. O fator etário é a segunda maior fonte de

variação contribuindo com 32,28% na variação dos dados. A variação etária é

influenciada principalmente por 10 caracteres que possuem valores

superiores a média geral (Tabela 3). Quando analisadas apenas as classes de

idade relativas de 3 a 5 a contribuição do fator etário cai para 10,87%.

25

Tabela 1. Estatística descritiva, análise de variância (ANOVA) e teste de Tukey[ ] para os sexos combinados das 20 variáveis estudadas em crânios de Akodon cursor

provenientes do PESB. Letras diferentes no teste de Tukey [ ] indicam médias significativamente distintas.

Variável

Classes de Idade

Total

F p Idade 1 Idade 2 Idade 3 Idade 4 Idade 5

N

Média DP N Média DP N Média DP N Média DP N

Média DP N Média DP

CTC 6 25.370[A]

0.661

15 27.864[B]

0.813 24 28.707[C]

0.891 23 29.085[CD]

0.919 9 29.844[D]

1.041

77

28.528 1.390

28.42

0.000

LIO 6 5.215[A]

0.169

15 5.281[A] 0.154 24 5.374[A] 0.202 23 5.360[A] 0.148 9 5.438[A]

0.128 77 5.347 0.174

2.36 0.615

CN 6 9.057[A]

0.376

15 10.307[B]

0.499 24 10.797[C]

0.461 23 10.960[C] 0.450 9 11.327[C]

0.682 77 10.677 0.735

24.83

0.000

CFI 6 5.415[A]

0.362

15 6.026[B] 0.324 24 6.382[C] 0.327 23 6.452[C] 0.328 9 6.731[C] 0.300 77 6.299 0.457

19.19

0.000

DIA 6 6.243[A]

0.249

15 7.089[B] 0.357 24 7.518[C] 0.298 23 7.668[C] 0.372 9 8.188[D]

0.522 77 7.458 0.586

32.28

0.000

LZI 5 13.468[A]

0.617

14 14.468[B]

0.536 24 14.714[B]

0.525 21 14.892[BC]

0.555 8 15.356[C]

0.393 72 14.703 0.665

11.16

0.000

LCC 6 11.406[A]

0.522

15 11.986[B]

0.243 24 12.037[B]

0.353 23 12.053[B] 0.371 9 12.034[B]

0.391 77 11.982 0.389

4.26

0.003

LRO 6 4.220[A]

0.258

15 4.596[AB]

0.324 24 4.689[B] 0.227 23 4.798[BC] 0.306 9 5.052[C] 0.288 77 4.709 0.336

9.08

0.000

SMS 6 4.565[A]

0.152

15 4.509[A] 0.132 24 4.561[A] 0.124 23 4.506[A] 0.146 9 4.564[A]

0.131 77 4.535 0.135

0.79 0.529

LPZ 6 2.138[A]

0.131

15 2.388[B] 0.161 24 2.421[B] 0.214 23 2.472[B] 0.159 9 2.447[B] 0.207 77 2.411 0.197

4.15

0.004

CP 6 10.262[A]

0.279

15 11.242[B]

0.404 24 11.718[C]

0.399 23 11.920[C] 0.445 9 12.503[D]

0.798 77 11.664 0.709

25.52

0.000

LCO 6 6.283[A]

0.413

15 6.574[AB]

0.222 24 6.666[AB]

0.214 22 6.662[AB] 0.230 9 6.991[B] 0.949 76 6.655 0.414

3.17

0.018

CPP 6 3.740[A]

0.371

15 3.816[A] 0.213 24 3.917[AB]

0.261 23 3.990[AB] 0.251 9 4.155[B] 0.291 77 3.933 0.279

3.47

0.001

CBA 6 19.211[A]

0.765

15 21.410[B]

0.621 24 22.226[C]

0.799 22 22.598[C] 0.778 9 24.084[D]

1.148 76 22.154 1.388

37.67

0.000

CI 6 1.560[A]

0.354

15 1.593[A] 0.306 24 1.660[A] 0.338 23 1.558[A] 0.335 9 1.631[A]

0.264 77 1.605 0.319

0.34 0.849

LI 6 6.413[A]

1.166

15 6.769[A] 1.415 24 7.0704[A]

1.187 23 6.652[A] 0.767 9 6.503[A]

1.507 77 6.769 1.160

0.71

0.586

LP 6 2.872[A]

0.209

15 3.205[B] 0.222 24 3.352[B] 0.175 23 3.544[C] 0.167 9 3.835[D]

0.226 77 3.400 0.306

30.58

0.000

CO 6 8.402[A]

0.386

15 9.111[B] 0.347 24 9.159[B] 0.352 23 9.304[BC] 0.303 8 9.575[C] 0.298 76 9.177 0.420

11.93

0.000

AMC 6 8.767[A]

0.375

15 9.198[B] 0.280 24 9.294[B] 0.233 23 9.329[B] 0.332 9 9.465[B] 0.255 77 9.265 0.325

6.09

0.000

LMB 6 3.753[A]

0.414

15 4.101[B] 0.448 24 4.081[B] 0.467 22 4.395[B] 0.381 9 4.104[B] 0.411 76 4.153 0.455

3.29

0.000

26

Tabela 2. Teste t para variação sexual das cinco classes de idade para as 20 variáveis estudadas em crânios de Akodon cursor provenientes do PESB, Minas Gerais.

Valores de t negativos indicam que a média dos machos é maior. Valores p em negrito indicam diferenças estatisticamente significativas entre as médias da

variável para cada sexo.

Classes de Idade

Idade 1 Idade 2 Idade 3 Idade 4 Idade 5

Média(n)

DP

t

p Média(n)

DP

t

p Média(n) DP

t

p Média(n) DP

t

p Média(n)

DP

t

p

CTC

♀

25.22 (1)

0.00

0.20

0.86

27.68 (4) 0.72

-0.47

0.65

28.55 (13) 0.96

-0.82 0.42

28.68 (12) 0.67

-2.44

0.02

28.92 (3)

1.04

-2.35

0.05

♂

25.05 (3)

0.73 27.93 (9) 0.97 28.87 (10) 0.84

29.53 (11) 0.98

30.31 (6)

0.73

LIO

♀

5.15 (1) 0.00

-0.30

0.79

5.35 (4) 0.19

0.90

0.39

5.41 (13) 0.23

0.94 0.36

5.31 (12) 0.14

-1.64

0.12

5.47 (3) 0.11

0.45

0.66

♂

5.23 (3) 0.22 5.26 (9) 0.15 5.33 (10) 0.16

5.41 (11) 0.15

5.42 (6) 0.14

CN

♀

9.30 (1) 0.00

1.46

0.28

10.44 (4) 0.71

0.33

0.75

10.69 (13) 0.41

-1.14 0.27

10.93 (12) 0.34

-0.32

0.75

10.67 (3)

0.19

-2.74

0.03

♂

8.77 (3) 0.32 10.33 (9) 0.45 10.91 (10) 0.52

10.99 (11) 0.56

11.66 (6)

0.59

CFI

♀

5.47 (1) 0.00

1.15

0.37

5.95 (4) 0.31

-0.77

0.46

6.41 (13) 0.40

0.33 0.74

6.35 (12) 0.27

-1.55

0.14

6.53 (3) 0.40

-1.54

0.17

♂

5.21 (3) 0.19 6.10 (9) 0.35 6.36 (10) 0.23

6.56 (11) 0.37

6.83 (6) 0.21

DIA

♀

6.44 (1) 0.00

1.20

0.35

6.96 (4) 0.24

-0.82

0.43

7.49 (13) 0.33

-0.37 0.71

7.54 (12) 0.26

-1.84

0.08

7.62 (3) 0.27

-3.67

0.01

♂

6.08 (3) 0.26 7.15 (9) 0.43 7.54 (10) 0.27

7.81 (11) 0.44

8.47 (6) 0.35

LZI

♀

13.79 (1)

0.00

0.53

0.65

14.64 (4) 0.24

0.80

0.44

14.51 (13) 0.58

-2.20 0.04

14.64 (10) 0.59

-2.11

0.05

15.12 (3)

0.24

-1.43

0.20

♂

13.30 (3)

0.81 14.35 (9) 0.69 14.97 (10) 0.36

15.12 (11) 0.43

15.50 (5)

0.42

LCC

♀

11.00 (1)

0.00

-1.01

0.42

12.09 (4) 0.13

0.84

0.42

11.95 (13) 0.41

-1.56 0.13

11.87 (12) 0.27

-2.86

0.01

11.84 (3)

0.34

-1.04

0.33

♂

11.54 (3)

0.46 11.96 (9) 0.28 12.17 (10) 0.24

12.25 (11) 0.37

12.13 (6)

0.41

LRO

♀

4.11 (1) 0.00

-0.46

0.69

4.50 (4) 0.30

-0.49

0.63

4.65 (13) 0.20

-0.91 0.38

4.69 (12) 0.22

-1.85

0.08

4.75 (3) 0.11

-3.38

0.01

♂

4.30 (3) 0.36 4.60 (9) 0.36 4.74 (10) 0.27

4.92 (11) 0.35

5.20 (6) 0.21

SMS

♀

4.32 (1) 0.00

-5.11

0.04

4.66 (4) 0.09

4.00

0.00

4.52 (13) 0.13

-1.85 0.08

4.46 (12) 0.12

-1.69

0.11

4.45 (3) 0.09

-2.29

0.06

♂

4.54 (3) 0.04 4.44 (9) 0.10 4.61 (10) 0.11

4.56 (11) 0.16

4.62 (6) 0.11

LPZ

♀

2.30 (1) 0.00

1.24

0.34

2.33 (4) 0.09

-0.63

0.54

2.44 (13) 0.22

0.35 0.73

2.43 (12) 0.18

-1.48

0.15

2.43 (3) 0.29

-0.19

0.85

♂

2.10 (3) 0.14 2.39 (9) 0.19 2.40 (10) 0.23

2.52 (11) 0.12

2.46 (6) 0.19

CP

♀

10.19 (1)

0.00

0.11

0.92

11.24 (4) 0.33

-0.07

0.95

11.63 (13) 0.44

-0.97 0.34

11.74 (12) 0.34

-2.24

0.04

11.72 (3)

0.36

-2.90

0.02

♂

10.16 (3)

0.21 11.25 (9) 0.49 11.80 (10) 0.36

12.12 (11) 0.47

12.90 (6)

0.64

27

Tabela 2. (Continuação) Teste t para variação sexual das cinco classes de idade para as 20 variáveis estudadas em crânios de Akodon cursor provenientes do PESB,

Minas Gerais. Valores de t negativos indicam que a média dos machos é maior. Valores p em negrito indicam diferenças estatisticamente significativas entre as

médias da variável para cada sexo.

Classes de Idade

Idade 1 Idade 2 Idade 3 Idade 4 Idade 5

Média(n)

DP

t

p Média(n) DP

t

p Média(n) DP

t

p Média(n) DP

t

p Média(n) DP

t

p

LCO

♀

5.98 (1) 0.00

-0.41 0.72

6.69 (4) 0.26

1.18 0.26

6.64 (13) 0.20

-0.78 0.44

6.60 (12) 0.24

-1.45 0.16

6.61 (3) 0.23

-0.84

0.43

♂

6.26 (3) 0.59

6.53 (9) 0.22

6.71 (10) 0.24

6.74 (10) 0.21

7.18 (6) 1.13

CPP

♀

3.44 (1) 0.00

-0.74 0.54

3.95 (4) 0.25

1.72 0.11

3.84 (13) 0.23

-1.16 0.26

3.92 (12) 0.18

-1.51 0.15

4.00 (3) 0.29

-1.16

0.28

♂

3.88 (3) 0.51

3.73 (9) 0.19

3.96 (10) 0.25

4.07 (11) 0.30

4.23 (6) 0.28

CBA

♀

18.86 (1) 0.00

-0.04 0.97

21.16 (4) 0.43

-0.85 0.41

22.07 (13) 0.88

-0.91 0.37

22.24 (12) 0.69

-2.69 0.01

22.81 (3) 0.53

-4.01

0.01

♂

18.90 (3) 0.88

21.50 (9) 0.75

22.38 (10) 0.71

23.03 (10) 0.68

24.72 (6) 0.73

CI

♀

0.84 (1) 0.00

-14.72

0.00

1.44 (4) 0.22

-0.89 0.39

1.68 (13) 0.38

0.27 0.79

1.54 (12) 0.33

-0.31 0.76

1.44 (3) 0.19

-1.75

0.12

♂

1.69 (3) 0.05

1.61 (9) 0.34

1.64 (10) 0.32

1.58 (11) 0.36

1.73 (6) 0.25

LI

♀

4.52 (1) 0.00

-10.38

0.01

6.26 (4) 2.05

-0.66 0.52

7.22 (13) 0.85

0.84 0.41

6.85 (12) 0.74

1.29 0.21

5.92 (3) 1.67

-0.80

0.45

♂

6.32 (3) 0.15

6.86 (9) 1.29

6.80 (10) 1.57

6.44 (11) 0.77

6.79 (6) 1.49

LP

♀

3.02 (1) 0.00

0.70 0.56

3.28 (4) 0.15

0.54 0.60

3.31 (13) 0.17

-1.21 0.24

3.51 (12) 0.15

-0.89 0.38

3.75 (3) 0.14

-0.78

0.46

♂

2.79 (3) 0.29

3.20 (9) 0.26

3.40 (10) 0.19

3.58 (11) 0.19

3.88 (6) 0.26

CO

♀

8.69 (1) 0.00

0.67 0.57

9.05 (4) 0.07

-0.45 0.66

9.11 (13) 0.37

-0.67 0.51

9.26 (12) 0.30

-0.74 0.47

9.42 (3) 0.29

-1.20

0.28

♂

8.29 (3) 0.51

9.15 (9) 0.44

9.21 (10) 0.35

9.35 (11) 0.31

9.67 (5) 0.29

AMC

♀

8.66 (1) 0.00

0.71 0.55

9.22 (4) 0.22

0.69 0.50

9.31 (13) 0.26

0.27 0.79

9.19 (12) 0.33

-2.23

0.04

9.34 (3) 0.06

-1.05

0.33

♂

8.53 (3) 0.16

9.11 (9) 0.27

9.28 (10) 0.22

9.48 (11) 0.27

9.53 (6) 0.30

LMB

♀

4.43 (1) 0.00

2.28 0.15

4.15 (4) 0.58

0.04 0.97

3.95 (13) 0.53

-1.59 0.13

4.36 (12) 0.44

-0.41 0.68

3.84 (3) 0.55

-1.43

0.20

♂

3.74 (3) 0.26

4.14 (9) 0.41

4.26 (10) 0.35

4.43 (10) 0.31

4.24 (6) 0.29

n = número amostral; DP = Desvio padrão; CTC (Comprimento total do crânio), LIO (Largura do interorbital), CN (Comprimento dos nasais), CFI (Comprimento do forâmen incisivo), DIA (Diastema), LZI (Largura do

arco zigomático), LCC (Largura da caixa craniana), LRO (Largura rostral), SMS (Série molar superior), LPZ (Largura da placa zigomática), CP (Comprimento palatal), CPP (Comprimento da ponte palatal), LCO (Largura

entre os côndilos occipitais), CBA (Comprimento basilar), LI (Largura do interparietal), CI (Comprimento do interparietal), LP (Largura palatal), CO (Comprimento orbital), AMC (Altura máxima do crânio), LMB

(Largura máxima da bula).

28

Tabela 3. Valores percentuais de contribuição dos componentes de variação (Sexo, Idade e Interação)

para as variáveis morfométricas avaliadas na população de A. cursor do PESB.

Idades 1 a 5 Idades 3 a 5

Variável N Sexo Idade Interação Resíduo

N Sexo Idade Interação Resíduo

CTC 77 6,2 62,02 0 31,78 56 19,64 10,04 2,18 68,14

LIO 77 0 8,64 1,02 90,34 56 0,00 0,00 9,01 90,99

CN 77 0 56,36 5,56 38,08 56 4,56 1,33 14,31 79,81

CFI 77 0,66 54,49 0 44,85 56 0,03 7,61 0,00 92,36

DIA 77 2,8 60,94 6,96 29,3 56 5,73 17,68 20,93 55,66

LZI 72 4,45 39,21 4,47 51,87 53 25,10 14,57 0,00 60,33

LCC 77 11,29 16,68 0,52 71,51 56 22,80 0,64 0,00 76,57

LRO 77 11,64 31,51 0 56,85 56 17,84 11,02 5,12 66,03

SMS 77 0 0 39,49 60,51 56 30,06 4,11 0,00 65,83

LPZ 77 0 17,59 0 82,41 56 0,00 2,14 0,00 97,86

CP 77 5,78 54,56 7,88 31,78 56 15,83 10,01 18,76 55,40

LCO 76 0,78 13,62 6,05 79,55 55 3,52 3,89 7,52 85,07

CPP 77 3,67 8,45 17,83 70,05 56 23,08 9,4 0,00 67,48

CBA 76 6,32 67,56 3,14 22,98 55 14,17 30,25 11,45 44,13

CI 77 0,1 0 8,08 91,82 56 0,00 0,00 0,00 100,00

LI 77 0 0 2,74 97,26 56 0,03 0,00 0,00 99,97

LP 77 0 67,56 0,87 31,57 56 3,61 61,60 0,00 34,79

CO 76 1,23 39,13 0 59,64 55 4,25 19,90 0,00 75,85

AMC 77 0 39,85 3,71 56,44 56 2,68 0,00 5,13 92,19

LMB 76 0 7,45 4,61 87,94 55 7,11 13,17 0,00 79,72

Média 2,75 32,28 5,64 59,33 10,00 10,87 4,72 74,41

CTC (Comprimento total do crânio), LIO (Largura do interorbital), CN (Comprimento dos nasais), CFI (Comprimento do forâmen

incisivo), DIA (Diastema), LZI (Largura do arco zigomático), LCC (Largura da caixa craniana), LRO (Largura rostral), SMS (Série

molar superior), LPZ (Largura da placa zigomática), CP (Comprimento palatal), CPP (Comprimento da ponte palatal), LCO

(Largura entre os côndilos occipitais), CBA (Comprimento basilar), LI (Largura do interparietal), CI (Comprimento do interparietal),

LP (Largura palatal), CO (Comprimento orbital), AMC (Altura máxima do crânio), LMB (Largura máxima da bula).

Análises Multivariadas

A ACP foi calculada para explorar os padrões de variação nos fatores

de tamanho e forma ao longo das cinco classes etárias dos indivíduos

coletados no PESB. O primeiro Componente Principal (CP1) sumarizou

38,04% do total da variação e o segundo Componente (CP2) 26,72%, o que

explica um total de 64,76% da variação etária dentro da amostra. Todos os

caracteres encontraram-se positivamente correlacionados com o CP1,

podendo este ser interpretado como um eixo de variação no fator tamanho.

Entretanto não foi possível uma total separação das classes de idade pelo

CP1 sendo a distinção entre a classe de idade relativa 1 e as demais melhor

evidenciada pelo eixo do CP2. Esta análise não foi concordante com a

29

estatística univariada a qual foi útil na distinção das classes de idade pela

ANOVA, o que determina uma diferença da classe 1 com as demais em

relação ao tamanho das variáveis (Figura 6A).

Uma das exigências da ACP é de que as variáveis apresentem uma

correlação linear entre si, o que ocorre de uma maneira geral para variáveis

morfométricas, visto que um organismo cresce ”por inteiro” (Peres-Neto,

1995). Dessa forma, foram excluídas as variáveis CI e LI por possuírem

elevada variabilidade entre as classes de idade. Em seguida realizou-se uma

nova ACP. Nesta segunda análise o CP1 sumarizou 57,68% do total da

variação e o CP2 14,29%, totalizando 71,97% da variação. Novamente o CP1

obteve todos os caracteres positivamente correlacionados. Nesta análise foi

possível observar que as classes de idade estão claramente distribuídas em

ordem crescente no espaço morfométrico multivariado, mesmo ocorrendo

algumas áreas de sobreposição. Elipses com intervalo de confiança de 95%

obtidas para os centróides facilitam a interpretação dos padrões

discriminantes para as classes etárias (Figura 6B). A partir deste gráfico é

possível observar a consonância da ACP com as análises univariadas,

observando maior similaridade entre os indivíduos das classes 3 e 4 em

relação às demais.

A análise Canônica Discriminante Independente do Tamanho para a

variação sexual dentro da população do PESB corroborou as análises

univariadas demonstrando um reduzido dimorfismo sexual entre os sexos

apontado pela alta sobreposição dos escores individuais. Os machos

apresentaram tamanhos ligeiramente superiores aos das fêmeas (Figura 7).

30

1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9

2.7

2.75

2.8

2.85

2.9

2.95

3

3.05

3.1

3.15

1

2

3

4

5

CP1 (38,04%)

CP2 (26,72%)

1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9

2.7

2.75

2.8

2.85

2.9

2.95

3

3.05

3.1

3.15

1

2

3

4

5

CP1 (38,04%)

3.1 3.2 3.3 3.4 3.5

0.24

0.26

0.28

0.3

0.32

0.34

0.36

0.38

0.4

1

2

3

4

5

CP1 (57,68%)

CP2 (14,29%)

3.1 3.2 3.3 3.4 3.5

0.24

0.26

0.28

0.3

0.32

0.34

0.36

0.38

0.4

1

2

3

4

5

CP1 (57,68%)

CP2 (14,29%)

Figura 6. Análise de Componentes Principais (CP1 e CP2) dentro da população de Akodon cursor

proveniente do PESB. (A) Projeção dos escores individuais identificados pela idade relativa (1, 2, 3, 4 e

5) e elipses de 95% de confiança dos centróides das amostras com os 20 caracteres morfométricos; (B)

Projeção dos escores individuais identificados pela idade relativa (1, 2, 3, 4 e 5) e elipses de 95% de

confiança dos centróides das amostras sem os caracteres CI e LI.

A

B

31

Figura 7. Projeção dos escores individuais de indivíduos machos (o) e fêmeas (+) de Akodon

cursor provenientes do PESB para a análise discriminante canônica independente do

tamanho.

Variação geográfica

As análises de Componentes Principais e Discriminante Canônica

evidenciaram uma separação entre as populações do Parque Estadual da

Serra do Brigadeiro (PESB) e de Viçosa (VIC) com a população de Espera

Feliz (EF) assumindo uma posição intermediária entre elas. A população de

Abre Campo (AC) apresentou áreas de sobreposição com as populações de

EF e do PESB na análise de componentes principais. Para a Análise de

Componentes Principais realizada com as amostras de AC, EF, VIC e do

PESB, o primeiro componente principal (CP1) representou 58,56% da

variação enquanto o segundo componente principal (CP2) respondeu por

10,98%. Todos os 18 caracteres apresentaram coeficientes positivos com

relação ao CP1, podendo dessa forma ser interpretado com um eixo de

variação do tamanho. Ao longo do eixo CP1 observou-se que somente a

população de AC mostrou-se mais distinta, mas ainda assim apresentando

sobreposição as demais, possivelmente um artefato da baixa amostragem

(n=3). Entretanto, no eixo CP2, foi possível visualizar uma separação entre as

32

populações de EF, de VIC e do PESB (Figura 8).

Na análise discriminante canônica independente do tamanho, as duas

primeiras variáveis VC1 e VC2 explicaram 50,15% e 29,51%, respectivamente,

da discriminação morfométrica craniana entre os grupos. De acordo com essa

análise, as populações de Viçosa e do PESB discriminam-se ao longo de VC1

e encontram-se totalmente sobrepostas ao longo do eixo VC2. A população

de EF mostrou-se distinta com relação às demais ao longo do eixo VC2. No

eixo de VC1 apresentou uma sobreposição com a população do PESB.

3.3 3.35 3.4 3.45 3.5 3.55

-0.36

-0.35

-0.34

-0.33

-0.32

-0.31

-0.3

1

2

3

4

PC1 (58,56%)

PC2 (10,98%)

Figura 8. Análise de Componentes Principais com as elipses de 95% de confiança dos

centróides das amostras das populações de Akodon cursor de remanescentes de Mata

Atlântica do Estado de Minas Gerais. 1- Abre Campo, 2- Parque Estadual da Serra do

Brigadeiro, 3- Espera Feliz e 4- Viçosa.

Assim como na ACP a população de Abre Campo apresentou uma

elipse de 95% de confiança dos dados com grande amplitude para a análise

canônica. Esta população apresentou sobreposição com as demais ao longo

do eixo VC1 sendo discriminada somente pelo eixo de VC2 (Figura 9).

Provavelmente devido ao artefato de amostragem a população de Abre

Campo apresentou intervalos de confiança de grandes amplitudes. Portanto

as considerações a respeito desta população devem ser cautelosas até que um

maior número de exemplares seja adicionado à amostra.

33

Os vetores de correlação, entre as variáveis analisadas, que mais

contribuíram para a diferenciação entre as populações foram o comprimento

total do crânio (CTC), o comprimento do forâmen incisivo (CFI), a largura da

caixa craniana (LCC) e o comprimento basilar (CBA) (Figura 10).

Com base na análise qualitativa dos exemplares examinados não

foram encontradas características distintas entre as populações sob estudo.

De uma forma geral os crânios de A. cursor analisados apresentaram os ossos

nasais e lacrimais ultrapassando a parte anterior dos incisivos, os foramens

incisivos ultrapassando a linha de M1 atingindo a altura do protoflexo, a

placa zigomática muito variável podendo obter aspecto “reto” ou

“arredondado”, foramens pós-glenóide e pós-escamosal similares em

tamanho, ausência de cristas supra-orbitais, séries molares paralelas, fossa

pterigóide em forma de “U” atingindo o limite posterior de M3 e a fossa

parapterigóide estreita na porção anterior com leve expansão na região

posterior.

O padrão de agrupamento fornecido pelo UPGMA demonstra uma

separação da população de Abre Campo com relação às demais. As

populações de Viçosa e Espera Feliz mostraram-se mais similares de acordo

com o fenograma obtido (Figura 11).

34

-3 -2.5 -2 -1.5 -1 -0.5 0 0.5 1

-5

-4

-3

-2

-1

0

1

2

3

4

VC1 (50,15%)

VC2 (29,51%)

Figura 9. Análise Discriminante Canônica Independente do Tamanho com as elipses de 95%

dos centróides das amostras das populações de remanescentes de Mata Atlântica do Estado

de Minas Gerais. 1- Abre Campo, 2-Parque Estadual da Serra do Brigadeiro, 3- Espera Feliz e

4- Viçosa.

-1 -0.5 0 0.5 1

-18

-16

-14

-12

-10

-8

-6

-4

-2

0

Correlação de VC1 com as variáveis

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

Figura 10. Correlação das 18 variáveis com relação ao eixo

da variável canônica 1 (VC1). 1- CTC, 2- LIO, 3- CN, 4- CFI, 5- DIA,

6- LZI, 7- LCC, 8- LRO, 9- SMS, 10- LPZ, 11- CP, 12- LCO, 13- CPP, 14- CBA,

15- LP, 16- CO, 17- AMC, 18- LMB.

35

0510152025

1

2

3

4

Figura 11. Fenograma construído por UPGMA ilustrando os padrões de similaridade

morfométrica inferidos a partir das Distâncias de Mahalanobis. Abreviações das localidades:

1- Abre Campo, 2-PESB, 3- Espera Feliz e 4- Viçosa.

Discussão

Variação intrapopulacional

O aumento nas dimensões cranianas é mais acentuado durante o início

do desenvolvimento ontogenético da espécie de acordo com os dados

obtidos em nosso estudo. Apesar da diferença entre as classes de idade

relativas, o fator responsável pela maior variação dos dados correspondeu ao

resíduo (59,33%) contra 32,28% correspondentes ao fator etário. Estes dados

diferem de estudos em geral, os quais têm demonstrado que o fator

ontogenético é responsável pela maior parte da variação encontrada em

populações de roedores, como Oryzomys (Brandt & Pessôa, 1994) e

Zygodontomys (Voss et al., 1990). Entretanto, a maior fonte de variação

referida ao fator residual foi encontrada também para a população do roedor

Thaptomys nigrita proveniente do PESB (Moreira, 2007).

Distância de Mahalanobis

36

Alterações qualitativas ao longo da ontogenia craniana em roedores

têm sido apontadas como indicativas para a classificação etária de indivíduos

(Brandt & Pêssoa, 1994; Christoff, 1997; Lessa & Pêssoa, 2005). A análise

qualitativa dos crânios de A. cursor em nosso estudo permitiu a visualização

da alteração da forma da caixa craniana e desenvolvimento do lacrimal ao

longo da ontogenia da espécie demonstrando a aplicação de carcacteres

qualitativos na determinação de classes etárias em A. cursor. Para a região

rostral também foi evidenciado um grande desenvolvimento, fato este

evidenciado em outros trabalhos com A. cursor provenientes de várias

localidades do país (Christtof, 1997).

As análises de componentes principais auxiliaram na distinção das

classes etárias, principalmente quando retirados os caracteres com alta

variabilidade (CI e LI). Com esta análise foi possível a visualização do

crescimento contínuo ao longo da ontogenia da espécie, padrão comum

encontrado em diversos estudos (Oliveira, 1992; Pessôa & Reis, 1992; Brandt

& Pessôa, 1994; Pessôa & Reis, 1994; Lessa & Pessôa, 2005).

O dimorfismo sexual pode ocorrer entre os sigmodontíneos (Suaréz et

al.,1998) mas em geral é pouco observado (Voss, 1988). Estudos com espécies

das tribos oryzomyini (Brandt & Pessôa, 1994) e akodontini (Moreira, 2007)

demonstraram baixo dimorfismo em caracteres secundários para as espécies

estudadas. Trabalhos realizados com Akodon cursor apontaram distinções

quanto à relevância do dimorfismo sexual para a espécie (Geise et al., 2005).

Neste mesmo trabalho os autores demonstraram que dentre 20 caracteres

avaliados para amostras da Bahia, Minas Gerais, Rio de Janeiro e São Paulo,

14 deles mostraram-se significativamente distintos entre os sexos. Christtof

(1997), por outro lado, não detectou diferenças significativas em amostras do

Espírito Santo, Minas Gerais, Paraná, Rio de Janeiro e São Paulo entre

indivíduos de sexos diferentes. Para a população de A. cursor do PESB não

foram evidenciadas distinções relevantes entre os sexos sendo observada

apenas uma pequena variação em dois caracteres (LCC e LRO) que se

mostraram distintos entre os sexos na análise univariada com a amostra total.

37

Tanto a variação adicionada pelo sexo quanto pela interação entre o sexo e a

idade apresentam pequena contribuição confirmando o reduzido dimorfismo

observado pelo teste t. A análise discriminante canônica independente do

tamanho reforçou o baixo dimorfismo na amostra estudada.

Variação geográfica

Padrões de variação geográfica em caracteres morfológicos podem ser

causados pelas condições ecológicas atuais e fatores históricos (Thorpe,

1987). Muitos trabalhos com roedores têm demonstrado a diferenciação de

populações ao longo da distribuição geográfica auxiliando na determinação

dos limites geográficos ou na descrição de novas espécies (Dos-Reis et al.,

1990; Lessa et al., 2005; Gonçalves et al., 2007; Moreira, 2007).

Análises estatísticas multivariadas têm permitido uma melhor

compreensão sobre a diversidade morfológica de vários táxons. Estudos com

roedores caviídeos (Lessa et al., 2005) e sigmodontíneos (Gonçalves et al.,

2007; Moreira, 2007) têm demonstrado a presença de variações morfológicas

ao longo da distribuição geográfica destes táxons seja por fatores ecológicos

ou históricos. Estes estudos apontam distinções entre as populações no

espaço morfométrico multivariado identificando diferenciações em nível

específico (Gonçalves et al., 2007) ou variações clinais entre populações (Lessa

et al., 2005)

Considerando-se as populações com maior número de indivíduos

avaliadas neste estudo (EF, VIC, PESB) as análises multivariadas exibem uma

distinção destas ao longo dos eixos de variação. Pela observação do gráfico

gerado pela análise de componentes principais não é possível separar estas

populações em termos de tamanho (eixo CP1). Por outro lado, estas

populações com amostras maiores mostraram-se claramente distintas,

quando avaliados os intervalos de confiança, ao longo do eixo CP2 que está

mais relacionado à forma do crânio.

Aos componentes de tamanho e forma têm sido atribuídos pesos

distintos na taxonomia e sistemática, sendo a variação na forma considerada

38

como o mais previsível da variação genética (Straney, 1987). Estudos

morfológicos sugerem que a variação na forma craniana está correlacionada

com diferenças genéticas (Patton & Brylski, 1987). Posteriormente Smith &

Patton (1988) relacionaram o tamanho e a forma craniana com componentes

de diferenciação ecológicos e históricos, sugerindo que unidades evolutivas

independentes poderiam ser reconhecidas por unidades geográficas que

apresentassem padrões semelhantes na forma craniana e na variação genética

(Smith & Patton, 1988). Sendo assim, os resultados obtidos em nosso trabalho

correspondem a unidades geográficas distintas ao longo do eixo

representativo da forma craniana. As populações de VIC e do PESB

mostraram-se totalmente distintas de acordo com a análise dos Componentes

Principais o que foi corroborado pela Análise Discriminante Canônica

Independente do Tamanho.

Uma das hipóteses explicativas para a diferenciação morfológica

observada para estas populações pode estar associada ao efeito altitudinal.

Sabe-se que áreas de altitude no Sul e Sudeste do Brasil são detentoras de

espécies endêmicas (e.g. Akodon mystax, Oxymycterus caparoe), que possuem

suas histórias evolutivas correlacionadas aos eventos que levaram a

formação dos ambientes campestres (campos de altitude) onde são

encontradas (Hershkovitz, 1998; Gonçalves et al., 2007). Dessa forma, a

variação altimétrica entre VIC (~700m) e o PESB (1300-1500m) determina

uma mudança que tanto pode atuar na variação da temperatura e/ou na

diferenciação da composição vegetacional. Estes efeitos poderiam atuar de

forma distinta sobre as populações estudadas justificando as diferenças

observadas na forma craniana.

Registros de Akodon cursor em altitudes em torno dos 1.500m, como os

encontrados no PESB, não são comuns, sendo possivelmente esta população

a que apresenta maior altitude de distribuição reconhecida (Geise com.

pess.). A população de A. cursor de VIC encontra-se a uma altitude média de

700m, bem inferior a observada para a população do PESB. Já a população de

Espera Feliz apresentou-se em uma posição intermediária entre as

39

populações do PESB e de VIC com relação à altitude. Este município,

localizado aos arredores do Parque Estadual da Serra do Brigadeiro,

apresenta altitude média de 1.100m. Estes dados podem corroborar uma

hipótese de que o incremento na altitude possa influenciar a diferenciação

morfológica em A. cursor. O fenograma obtido em nosso estudo é mais um

indicativo favorável a hipótese de diferenciação ao longo de um gradiente

altitudinal. A amostra de Abre Campo com altitude média em torno de 600m

apresentou maior dissimilaridade com relação às demais enquanto que as

amostras mais próximas foram Viçosa e Espera Feliz, as quais possuem uma

menor diferença com relação ao gradiente de altitude.

Outro fator relevante para a compreensão da diferenciação

morfológica craniana observada seria a influência da competição

interespecífica sobre a população de A. cursor presente no PESB. Esta

competição, ao longo do tempo evolutivo, pode resultar em fenômenos como

o deslocamento de caracteres (Arthur, 1987). Vários trabalhos vêm

demonstrando a relação entre morfologia e ecologia, especialmente quanto

ao uso de hábitat e a dieta (Scheibe, 1987). Na área de VIC, para o gênero

Akodon, só é encontrada a espécie A. cursor (Paglia et al., 1995; Lessa et al.,

1999). Nas áreas do PESB (Moreira et al., no prelo) e de EF (Brinati, com.

pess.) são encontrados em simpatria indivíduos de A. cursor e A. serrensis. A

presença de A. serrensis é restrita a ambientes com altitudes superiores a

1000m sendo este um dos motivos de sua ausência na região de VIC. Com

isso, a presença de A. serrensis na área do PESB pode ser um fator que

influenciou e ainda influencia o uso do habitat e a dieta da espécie A. cursor,

fato este que pode refletir na modificação do formato do crânio que foi

observado entre estas áreas através das análises multivariadas.

Estudos citogenéticos realizados com as populações do PESB e de VIC

não foram suficientes para diagnosticar diferenças marcantes entre as

populações (Manduca et al., neste volume). Ambas as populações

apresentaram diferentes citótipos entre seus indivíduos, sendo apenas um

restrito ao PESB e os demais comuns as duas localidades. Com relação aos

40

estudos moleculares, A. cursor apresenta grande variabilidade haplotípica

com pequeno padrão geográfico (Geise et al., 2001). Recente trabalho

publicado com dados moleculares oriundos de espécimes coletados no PESB

não destacam qualquer diferenciação destes com outras populações de A.

cursor (Gonçalves et al., 2007). Entretanto, os dados morfológicos obtidos em

nosso estudo sugerem, mesmo que de forma incipiente, um padrão

morfológico para A. cursor que provavelmente está associado à influência da

altitude.

A adição de um maior número de indivíduos de diferentes localidades

em cotas altimétricas distintas podem auxiliar no entendimento desta

variação reportada durante nosso estudo. Futuras análises moleculares

poderão contribuir para o entendimento da variação morfológica

diagnosticada para estas populações, auxiliando o entendimento da

distribuição geográfica da diversidade morfológica desta espécie e com a

definição dos possíveis fatores (e.g. altitude, temperatura, vegetação)

determinantes destas modificações.

Agradecimentos

Aos biólogos Jânio Moreira e Pablo Gonçalves pelo auxílio nas coletas

no PESB e suporte nas análises estatísticas. Ao biólogo Rômulo D’ângelo pela

ajuda com os softwares estatísticos. Ao biólogo Rodolfo Stumpp pelo auxílio

na localização de espécimes no acervo do MZUFV e coletas em Viçosa. À

UFV na pessoa do professor Renato Neves Feio, curador da coleção zoológica

do MZUFV. Ao biólogo Alessandro Brinati pelos exemplares de Espera Feliz

cedidos para estudo. Ao Museu de Ciências Naturais da PUC-MG na pessoa

da Profª Tudy Câmara pela disponibilização do acervo mastozoológico.

41

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45

Anexo

Espécimes analisados

Os dados morfológicos são oriundos de exemplares depositados no

Museu de Zoologia João Moojen, Viçosa (AB, GL, MPB, MZUFV, PMR, PRG)

e Museu de Ciências Naturais da PUC-Minas (MCN-PUC).

[1] Município de Abre Campo, Zona da Mata, Minas Gerais: MCN-PUC 402,

403, 404. [n=3]

[2] Parque Estadual da Serra do Brigadeiro (PESB), Minas Gerais: MZUFV

516, 617, 618, 619, 679, 680, 1077, 1149, 1157, 1158, 1160, 1161, 1162, 1163, 1164,

1165, 1166, 1167, 1168, 1169, 1170, 1171, 1173, 1175, 1176, 1179, 1181, 1182,

1183, 1185, 1186, 1214, 1216, 1217, 1219, 1220, 1226, 1227, 1228, 1230, 1232,

1233, 1235, 1241, 1244, 1245, 1263, 1264, 1265, 1268, 1269, 1277, 1284, 1288,

1298, 1301, 1625, 1629, 1636, 1647, 1649, 1652, 1657, 1890, 1892, 1893, 1894,

1895, 1896, 1897, 1898, 1909, 1910, 1917, 2042, 2086, 2088. [77]

[3] Município de Canaã, Minas Gerais: GL 434. [n=1]

[4] Município de Espera Feliz, Minas Gerais: AB 049, MZUFV 397, 399, 2099,

2102, 2103, 2107, 2117, 2110, 2231, 2242, 2246. [n=12]

[5] Município de Leme do Prado, Vale do Jequitinhonha, Minas Gerais:

MZUFV 2404. [n=1]

[6] Município de Mariana, Minas Gerais: MCN-PUC 118. [n=1]

[7] Município de Pedra do Anta, Minas Gerais: MCN-PUC 406. [n=1]

[8] Município de Viçosa, Minas Gerais: PMR 005, 008, 015, 016, MPB 045, 061

MZUFV 200, 205, 214, 223, 225, 415, 416, 417, 418, 423, 425, 427, 428, 429, 430,

431, 433, 434, 437, 438, 439, 440, 442, 443, 450, 591, 592, 593, 594, 635, 637, 640,

645, 648, 652, 660, 697, 698, 723, 726, 850, 854, 855, 858, 860, 861, 871, 872, 873,

877, 878, 883, 910, 911, 912, 954, 1072, 1944, 1948, 1949, 1950, 1951, 1966, 1967,

1969, 1975, 1978, 2011, 2014, 2015, 2045, 2085, 2090, 2091, 2198, 2205, 2311,

2327, 2335, 2336, 2340, 2385. [n=88]

46

2.2. Manduca, E.G., C.B. Lima, J.A. Dergam & G. Lessa. 2008. Análise

citogenética em Akodon cursor (Rodentia:Sigmodontinae) no Estado de

Minas Gerais.

47

Análise citogenética em Akodon cursor (Rodentia:Sigmodontinae) no

Estado de Minas Gerais.

Edmar G. Manduca, Claudinéia B. Lima, Jorge A. Dergam e Gisele Lessa

Introdução

O gênero Akodon compreende atualmente 41 espécies sendo

distribuído por toda a América do Sul. Está incluído na Família Cricetidae,

Subfamília Sigmodontinae, Tribo Akodontini (Musser & Carleton, 2005).

A espécie Akodon cursor tem distribuição conhecida no Brasil, sendo

encontrado na Mata Atlântica e em áreas de transição com o Cerrado.

Apresenta características morfológicas bastante semelhantes a outras

espécies do gênero (e.g. Akodon montensis), o que pode dificultar a sua

identificação em campo. As técnicas citogenéticas, por outro lado, são

extremamente úteis na diferenciação desses táxons (Christoff, 1997).

Akodon cursor é caracterizado por apresentar grande variabilidade

cariotípica, tanto no número diplóide (2n) como no número fundamental

(NF). Em uma amostra de 311 espécimes distribuídos nos Estados da Bahia,

Paraná, Pernambuco, Rio de Janeiro e São Paulo, foram encontrados animais

com 2n variando de 14 a 16 e NF entre 26 a 18 (Fagundes et al., 1998). Nas

populações do nordeste, apenas o cariótipo 2n=16 foi detectado (Maia &

Langguth, 1981).

Essa grande diversidade cariotípica é explicada por diferentes

processos que envolvem inversões pericêntricas, fusões cêntricas, trissomias

e monossomias, observadas principalmente nas amostras do Sul e do Sudeste

do Brasil (Fagundes, et al., 1997; Fagundes et al., 1998; Nascimento, 1998).

Fagundes e colaboradores (1998) sumarizaram todas as informações

cariotípicas acerca de A. cursor ao longo de sua distribuição geográfica.

Porém, neste estudo não se tem registros de dados citogenéticos relativos a

amostras desta espécie em Minas Gerais. Este fato demonstra uma lacuna no

conhecimento sobre a distribuição dos diferentes citótipos de A. cursor no

48

Estado mineiro e nas relações destas populações com a história da evolução

cariotípica da espécie.

Neste estudo descrevemos os citótipos de indivíduos de Akodon

cursor coletados no Estado de Minas Gerais, a fim de determinar o grau de

variabilidade destas populações e sua relevância em relação aos dados já

existentes ao longo da distribuição geográfica da espécie.

Material e Métodos

Amostras citogenéticas

Uma amostra de 55 indivíduos de A. cursor (30 ♂ e 25 ♀) foi obtida de

quatro localidades: Parque Estadual da Serra do Brigadeiro (PESB)

(♀=8;♂=16), localizado entre oito municípios mineiros (Araponga, Divino,

Ervália, Fervedouro, Pedra Bonita, Miradouro, Muriaé e Sericita) sendo um

dos pontos mais altos da Zona da Mata Mineira (1985m); Estação de

Pesquisa, Treinamento e Educação Ambiental Mata do Paraíso (EPTEA)

(♀=16;♂=13), fragmento de Mata Atlântica localizado no município de

Viçosa, ao norte da Zona da Mata de Minas Gerais; Parque Estadual do Rio

Doce (PERD) (♂=1), o maior fragmento de Mata Atlântica do Estado, com

aproximadamente 33.000ha; e Leme do Prado (LP) (♂=1), município

localizado na região do Vale do Jequitinhonha em uma área de transição

entre os domínios de Mata Atântica e Cerrado. Como forma de comparação

dos dados obtidos neste estudo utilizamos informações relativas à

distribuição geográfica dos diferentes citótipos em estudos já publicados.

Sendo assim, outras seis áreas amostrais fazem parte deste trabalho. No

mapa da Figura 1 é possível identificar os locais sob análise.

Os animais sacrificados tiveram suas peles e crânios preparados. Os

espécimes-testemunho encontram-se depositados no acervo mastozoológico

do Museu de Zoologia João Moojen da Universidade Federal de Viçosa

(MZUFV).

49

Figura 1. Localidades com registros dos diferentes citótipos de Akodon cursor. Losangos

correspondem às áreas amostradas no presente estudo (1- EPTEA; 2-PESB; 3-PERD; 4-LP).

Círculos abertos correspondem às áreas que apresentam citótipos comuns às amostras

mineiras em diferentes regiões (5- localidades do Estado do Rio de Janeiro; 6- Salesópolis-SP;

7- Iguapé-SP; 8- Guaraqueçaba-PR; 9- Una-BA; 10- Rio Formoso-PE, ver Fagundes et al., 1998

para mais detalhes).

Preparações citogenéticas

Os cromossomos metafásicos de cada espécime foram obtidos a partir

da técnica de Ford & Hamerton (1956), com modificações. Após uma injeção

subcutânea de solução de colchicina 0,05% na proporção de 1 mL para cada

100g de peso, cada animal, foi deixado em repouso durante uma hora. Em

seguida foram sacrificados e as células da medula óssea extraídas em solução

hipotônica (KCL 0,075M), permanecendo nesta por 30 minutos a 37ºC. Após

esse período, a suspensão celular foi fixada em solução de metanol e ácido

acético (3:1) e centrifugada durante 10 minutos a 1000RPM. O sobrenadante

50

foi descartado e essa operação repetida mais duas vezes. Em seguida à

fixação, a suspensão celular foi gotejada sobre uma lâmina histológica para a

elaboração das diferentes técnicas.

Coloração Convencional (Giemsa)

Algumas lâminas foram coradas em solução de Giemsa a 5% por 5 a 7

minutos. Esta metodologia foi utilizada para determinação do número e

morfologia dos cromossomos.

Técnica de Bandeamento C (Heterocromatina Constitutiva)

Para evidenciar as regiões heterocromáticas, procedeu-se ao protocolo

de Sumner (1972), com modificações. As lâminas foram expostas a uma

solução de HCl 0,2N a 47ºC por 2 minutos, seguida por imersão em solução

salina 2XSSC a 60ºC por 10 minutos, exposição das lâminas a uma solução de

hidróxido de bário 5% a 47ºC por 60 a 70 segundos e retorno à solução salina

2XSSC a 60ºC por mais 20 minutos. Entre cada passo supracitado foi efetuada

imersão das lâminas em água destilada.

Técnica Ag-NOR (Regiões Organizadoras de Nucléolo)

Para visualizar as regiões organizadoras de nucléolo (NOR´s) as

lâminas foram cobertas com uma mistura contendo quatro gotas de solução

aquosa de nitrato de prata 50%, duas gotas de gelatina (em solução aquosa

com 1% de ácido fórmico) e duas gotas de água destilada e cobertas com

lamínula. Em seguida, foram incubadas em câmara úmida e acondicionadas

em estufa a aproximadamente 60ºC. Após cerca de 2 minutos as lâminas

foram monitoradas até que atingissem uma coloração marrom caramelo e

então lavadas em água corrente para retirada da lamínula (Howell & Black,

1980).

51

Análises citogenéticas

Como forma de analisar diferenças cromossômicas intra e inter

populacionais dos espécimes amostrados, foram contadas pelo menos 20

metáfases de cada espécime, com o intuito de estabelecer seus valores 2n e

NF. As melhores metáfases foram fotografadas em microscópio óptico AXIO

acoplado a uma câmera Canon A620. Os homólogos foram pareados e

agrupados em ordem decrescente de tamanho e com base nos padrões de

bandeamentos observados e seguiram a classificação morfológica proposta

por LEVAN et al. (1964).

Análises Estatísticas

As amostras da EPTEA e do PESB foram tratadas estatisticamente

para verificar o equilíbrio de Hardy-Weinberg com relação aos pares

cromossômicos envolvidos nos polimorfismos detectados. Para a referida

análise foi utilizado o teste de χ

2

. Considerou-se p como a freqüência das

formas acrocêntricas e q como a freqüência das formas submetacêntricas no

par 2 e metacêntricas no par 4. Foi utilizada a probabilidade ao nível de

significância de 5% (p<0,05) com 2 graus de liberdade.

Resultados

Polimorfismo cromossômico

Foram diagnosticados oito diferentes citótipos, denominados aqui de

A a H (Tabela 1) e apresentados na Figura 2. O par sexual presente nos oito

citótipos é representado por um cromossomo X acrocêntrico pequeno e um Y

acrocêntrico diminuto.

O citótipo A foi o único que apresentou 2n = 16 e NF = 25 sendo

restrito a um único indivíduo coletado em LP. Este espécime apresentou os

pares 1, 2 e 3 como submetacêntricos, o par 4 heteromórfico - um

cromossomo metacêntrico e um acrocêntrico - e os pares 5, 6 e 7

homomórficos, sendo metacêntrico, acrocêntrico e metacêntrico diminuto,

respectivamente. Os citótipos com 2n = 14 (B-H) contemplaram toda a

52

amostra restante (n = 54), com variação no NF de 18 a 21. O citótipo B (2n =

14, NF = 18) foi responsável pelo maior número de exemplares representados

(15), sendo encontrado na EPTEA e no PESB. O citótipo C (2n = 14, NF = 19)

obteve registro na EPTEA, no PESB e no PERD com seis, sete e um

indivíduos, respectivamente, totalizando 14 espécimes. O NF = 19, nesse

citótipo, é decorrente do heteromorfismo apresentado pelo par 4, com um

cromossomo metacêntrico e seu correspondente acrocêntrico. O citótipo D

(2n = 14, NF = 20) foi encontrado em seis exemplares, três na EPTEA e três no

PESB. O valor do NF nesse citótipo é devido ao par 4 apresentar-se

homomórfico metacêntrico e o par 2 homomórfico acrocêntrico. O citótipo E

apresenta 2n = 14, NF = 19, assim como o citótipo C. Foi encontrado em sete

indivíduos, sendo seis destes coletados na EPTEA e apenas um no PESB.

Diferentemente do citótipo C, o valor de seu NF decorre de um

heteromorfismo no par 2 que apresenta um cromossomo submetacêntrico e o

correspondente acrocêntrico. O par 4 apresenta-se como homomórfico

acrocêntrico. O citótipo F, encontrado em nove indivíduos (dois na EPTEA e

sete no PESB), apresentou 2n = 14, NF =20. Este valor de NF é encontrado

devido ao heteromorfismo dos pares 2 e 4, sendo o par 2 composto por um

submetacêntrico acompanhado de um acrocêntrico e o par 4 de um

cromossomo metacêntrico acompanhado também por um acrocêntrico. O

citótipo G (2n = 14, NF = 21) foi representado por um único indivíduo

coletado no PESB. Neste caso o heteromorfismo do par 2 - apresentando um

cromossomo submetacêntrico e um acrocêntrico - e a condição homomórfica

do par 4 - com dois cromossomos metacêntricos - são responsáveis pelo valor

do NF. O citótipo H foi identificado na EPTEA e no PESB, com apenas um

indivíduo em cada área. Apresenta 2n = 14, NF = 20 e difere dos demais por

apresentar a condição homomórfica nos pares 2 e 4, sendo os cromossomos

submetacêntricos e acrocêntricos, respectivamente. Na Tabela 2 encontram-se

sintetizados os dados sobre proporção sexual e número de ocorrências de

cada citótipo nas áreas amostradas. De acordo com a Tabela 2 é possível

verificar o maior número de citótipos no PESB (7) seguido pela EPTEA (6) e o

53

PERD e LP com apenas um citótipo cada. O PESB foi avaliado com base em

24 espécimes e apresentou sete citótipos, enquanto a EPTEA, que foi avaliada

com 29 indivíduos, apresentou uma forma citotípica a menos. As localidades

do PERD e LP estão representadas apenas por um único indivíduo, o que

justifica a presença de apenas um citótipo nas respectivas áreas.

Tabela 1. Citótipos encontrados no presente estudo (2n = 16 e 14), com referência aos trabalhos e

localidades onde já foram previamente reportados. Localidades destacadas em negrito correspondem

às amostras do presente estudo. Referências: 1-Yonenaga, 1972; 2-Yonenaga et al., 1975; 3-Yonenaga-

Yassuda, 1979; 4-Maia & Langguth, 1981; 5-Yonenaga-Yassuda et al., 1983; 6- Geise, 1995; 7-Sbalqueiro

& Nascimento, 1996; 8-Fagundes et al., 1998. Para localidade ver legenda da Figura 1.

Citótipo (n) Pares autossômicos 2n

NF

Referências Localidade (Fig.1)

A (1) 1S, 2S, 3S, 4H, 5M, 6A, 7M 16 25 4 4 e 10

B (15) 1+3M, 2A, 4A, 5M, 6A, 7M 14 18 1, 2, 3, 5, 6, 7, 8 1, 2, 5, 6, 7 e 8

C (14) 1+3M, 2A, 4H, 5M, 6A, 7M 14 19 1, 2, 3, 5, 6, 7, 8 1, 2, 3, 5, 6, 7 e 8

D (6) 1+3M, 2A, 4M, 5M, 6A, 7M 14 20 1, 2, 6, 7, 8 1, 2, 5, 6, 7 e 8

E (7) 1+3M, 2H, 4A, 5M, 6A, 7M 14 19 1, 2, 6, 7, 8 1, 2, 5, 6, 7 e 8

F (9) 1+3M, 2H, 4H, 5M, 6A, 7M 14 20 2, 3, 5, 6, 7, 8 1, 2, 5, 6, 7, 8 e 9

G (1) 1+3M, 2H, 4M, 5M, 6A, 7M 14 21 5, 6, 7, 8 2, 5, 6, 7 e 8

H (2) 1+3M, 2S, 4A, 5M, 6A, 7M 14 20 7, 8 1, 2 e 8

Total (55)

n = número de indivíduos, M = metacêntrico, A = acrocêntrico, S = submetacêntrico, H =

heteromórfico (cromossomos acrocêntrico e meta/submetacêntrico), 1+3M = rearranjo complexo

envolvendo inversões pericêntricas e fusões cêntricas dos cromossomos 1 e 3 (Vide Fagundes et al.,

1997 para mais detalhes).

Os polimorfismos encontrados nos pares 2 e 4 foram analisados na

amostra total e comparativamente entre as populações da EPTEA e do PESB

por apresentarem maior número de indivíduos analisados.

Com relação ao polimorfismo encontrado no par 2 foi possível

detectar que a condição homomórfica acrocêntrica foi a mais comum,

ocorrendo em 63,63% de todos os indivíduos analisados, seguida da

condição heteromórfica e da condição homomórfica submetacêntrica com

30,90% e 5,45% respectivamente. Para o par 4 as condições homomórfica

acrocêntrica e heteromórfica obtiveram o mesmo valor (43,63%) e a condição

homomórfica metacêntrica representou apenas 12,72% da amostra.

54

A

B

C

D

E

F

G

H

Figura 2. Citótipos encontrados em Akodon cursor nas amostras dos remanescentes de Mata Atlântica

de Minas Gerais. (A) macho, 2n = 16, 1S, 2S, 3S, 4H, 5M, 6A, 7M; (B) macho, 2n = 14, 1+3M, 2A, 4A,

5M, 6A, 7M; (C) fêmea, 2n = 14, 1+3M, 2A, 4H, 5M, 6A, 7M; (D) macho, 2n = 14, 1+3M, 2A, 4M, 5M,

6A, 7M; (E) fêmea, 2n = 14, 1+3M, 2H, 4A, 5M, 6A, 7M; (F) macho, 2n=14, 1+3M, 2H, 4H, 5M, 6A, 7M;

(G) macho, 2n=14, 1+3M, 2H, 4M, 5M, 6A, 7M; (H) fêmea, 2n = 14, 1+3M, 2S, 4A, 5M, 6A, 7M.

55

Tabela 2. Tamanho da amostra dos diferentes citótipos e proporção sexual dos espécimes

coletados nos remanescentes de Mata Atlântica do Estado de Minas Gerais amostrados.

(Vide Tabela 1 para descrição dos citótipos).

Citótipo

EPT

E

A

PESB

PERD

LP

Total

♀ ♂ ♀ ♂ ♀ ♂ ♀ ♂ ♀ ♂

A - - - - - - - 1 - 1

B 1 5 5 4 - - - - 6 9

C

1

5

3

4

1

-

5

9

D

1

2

3

-

4

2

E

3

-

1

-

3

4

F 1 1 4 3 - - - - 5 4

G

-

1

-

1

H 1 - 1 - - - - - 2 -

Total

8

16

13

1

-

1

25

30

∑ Total 24 29 1 1 55

EPTEA- Estação de Pesquisa, Treinamento e Educação Ambiental Mata do Paraíso; PESB-

Parque Estadual da Serra do Brigadeiro; PERD- Parque Estadual do Rio Doce; LP- Município

de Leme do Prado.

Quando analisadas as populações da EPTEA e do PESB identificou-se

algumas diferenças quanto a freqüência dos polimorfismos dos pares 2 e 4.

Com relação ao par 2 as populações mostraram-se extremamente

semelhantes sendo a condição homomórfica acrocêntrica dominante (62,5%

na EPTEA e 65,51% no PESB). Em seguida a condição heteromórfica resultou

em 33,33% da amostra da EPTEA e a 31,03% no PESB. O par homomórfico

submetacêntrico foi representado por uma baixa freqüência nas duas

populações sendo de 4,16% na EPTEA e 3,44% no PESB. O par 4 apresentou

condições de maior freqüência distintas entre as populações. Na área da

EPTEA a condição homomórfica acrocêntrica foi responsável pela maior

freqüência de registros representando 54,16% da amostra, enquanto na

população do PESB esta condição contribuiu para 37,93%. A condição

heteromórfica para este par foi a que obteve maior valor para a população do

PESB (48,27%) enquanto na área da EPTEA foi responsável por 33,33%. Com

relação a condição homomórfica metacêntrica as duas populações

apresentaram valores similares (13,79% para o PESB e 12,5% para a EPTEA).

Para o teste de χ

2

tanto os citótipos encontrados na EPTEA quanto os

do PESB não apresentaram diferenças significativas para os polimorfismos

encontrados, demonstrando assim que estes pares de homólogos encontram-

56

se em equilíbrio de Hardy-Weinberg. A Tabela 3 contêm os valores

observados e esperados para os indivíduos homozigotos e heterozigotos para

os pares 2 e 4, bem como os valores relativos ao teste de χ

2

das amostras das

populações da EPTEA e do PESB.

Tabela 3. Frequências das formas cromossômicas, números observados e esperados e valores de χ

2

para os polimorfismos encontrados nos pares 2 e 4 das populações da EPTEA e do PESB.

Local n

PAR 2

p q χ

2

p

A(o;e) H(o;e) S(o;e)

EPTEA 24 0,625(15; 15,04) 0,333(8; 7,91) 0,041(1; 1,04) 0,791 0,208 0,002 p > 0,95

PESB 29 0,655(19; 19,04) 0,31(9; 8,91) 0,034(1; 1,04) 0,81 0,189 0,002 p > 0,95

Local n

PAR 4

p q χ

2

p

A(o;e) H(o;e) M(o;e)

EPTEA 24 0,541(13; 12,04) 0,333(8; 9,91) 0,125(3; 2,04) 0,708 0,291 0,896 0,7< p >0,5

PESB

29

0,379

(11; 11,17)

0,482

(14; 13,65)

0,137

(4; 4,17)

0,62

0,379

0,018

p

> 0,95

n=número de indivíduos; A=Acrocêntrico; H=Heteromórfico; S=Submetacêntrico; M=Metacêntrico;

o=observados; e=esperados; p=freqüência da forma acrocêntrica; q=freqüência da forma

submetcêntrica/metacêntrica.

Técnica Bandeamento C (Heterocromatina Constitutiva)

A análise de bandeamento C foi realizada com os indivíduos de 2n =

14 e revelou blocos heterocromáticos teloméricos em praticamente todos os

indivíduos analisados. O par sexual, de uma maneira geral, apresentou um X

com marcação intersticial e o Y praticamente todo heterocromático. Alguns

indivíduos obtiveram marcações mais distintas, como foi o caso de um

exemplar da EPTEA em que o par 1+3 apresentou marcações

pericentroméricas (Figura 3). Um indivíduo, também coletado na EPTEA,

apresentou o par 1+3 com os braços heterocromáticos e o par 6 com

marcações teloméricas bem evidentes (Figura 4).

57

Figura 3. Técnica de bandeamento C. As setas

evidenciam as regiões com presença de

heterocromatina pericentromérica e telomérica nos

cromossomos 1+3 e 5. Destaque também para o

par sexual.

Figura 4. Indivíduo com o braço do

cromossomo 1+3 e a região telomérica

do par 6 bastante evidenciadas pela

heterocromatina.

Técnica Ag-NOR (Regiões Organizadoras de Nucléolo)

Para a técnica Ag-NOR foram analisados indivíduos com 2n = 14 e 16.

A impregnação por prata possibilitou a visualização de regiões

organizadoras de nucléolo em praticamente todos os cromossomos. Alguns

apresentaram marcações ocasionais provavelmente devido à precipitação

inesperada do nitrato de prata, comum em experimentos deste tipo. Os pares

4 e 5 mostraram marcações mais constantes, aparecendo em praticamente

todas as metáfases analisadas. Para a localidade LP, indivíduo de 2n = 16, foi

possível observar uma região marcada no par 1 submetacêntrico (Figura 5).

Indivíduos da EPTEA e do PESB apresentaram marcações nos pares 4 e 5 e

em alguns casos no cromossomo X e o par 1+3, que foi marcado,

provavelmente por apresentar região heterocromática. Na Figura 6 pode-se

observar o padrão mais comum encontrado para as marcações de NOR e

ainda o cromossomo sexual marcado.

58

Figura 5. Regiões organizadoras de

nucléolo (setas) visualizadas no par 1

submetacêntrico do indivíduo 2n = 16.

Figura 6. Regiões organizadoras de nucléolo

(setas) encontradas no par 4 e no cromossomo

sexual.

Discussão

A grande variabilidade cariotípica documentada para a espécie Akodon

cursor (Yonenaga, 1972; Yonenaga et al., 1975; Yonenaga et al., 1983;

Sbalqueiro & Nascimento, 1996; Fagundes et al., 1997; Fagundes et al., 1998;

Nascimento, 1998) foi reforçada no presente estudo com a distinção de oito

citótipos em populações de Minas Gerais. Os distintos citótipos observados

no presente estudo foram identificados como resultado de dois processos

cromossômicos principais, já evocados por Fagundes e colaboradores (1997).

O primeiro processo envolve diferentes combinações de inversões

pericêntricas nos pares 2 e 4 originando formas homomórficas acrocêntricas,

heteromórficas e homomórficas submetacêntrica e metacêntrica para os pares

2 e 4, respectivamente. O segundo refere-se a um complexo rearranjo

envolvendo fusão cêntrica associada com inversões pericêntricas dos pares 1

e 3. Os citótipos encontrados foram coincidentes com outros já descritos na

literatura, sendo os indivíduos com 2n = 14 iguais as amostras encontradas

nos Estados da Bahia (Fagundes et al., 1998), Paraná (Nascimento, 1998), Rio

de Janeiro (Geise, 1995) e São Paulo (Yonenaga, 1972; Yonenaga et al., 1975;

Yonenaga et al., 1983; Fagundes et al., 1998) e o indivíduo 2n = 16 possuindo

citótipo igual a indivíduos descritos para o Estado de Pernambuco (Maia &

Langguth, 1981). Animais com 2n = 16 são reconhecidos pela primeira vez no

Estado de Minas Gerais. Este dado corresponde ao segundo registro deste

59

número diplóide fora da região Nordeste. No presente estudo não foi

identificado nenhum indivíduo com 2n=15.

Com relação ao citótipo vinculado ao valor 2n =16, encontrado apenas

em um único indivíduo deste estudo coletado no município de Leme do

Prado, foi verificado que o mesmo (2n=16 NF=25) possuía registro único

para o Estado de Pernambuco sendo reportado pela primeira vez fora desta

localidade o que amplia em mais de 1200 km a sua área de distribuição. O

reconhecimento desta população é importante, pois fornece uma nova base

de dados sobre a evolução cariotípica desta espécie e seu valor adaptativo.

Um maior número de indivíduos desta população nos permitirá também

observar se este citótipo ocorre em simpatria com os outros já descritos na

literatura ou mesmo a identificação de novas formas.

Com relação ao polimorfismo observado nos pares 2 e 4, as amostras

do presente estudo (EPTEA e PESB) apresentaram freqüência de ocorrência

parecidas com a de outros trabalhos. O par 2 apresentou a maior freqüência

(79,1%) de cromossomos acrocêntricos no presente trabalho. De forma

similar, foi observado por Sbalqueiro & Nascimento (1996) e Fagundes e

colaboradores (1998), para populações do Sul e Sudeste do Brasil, a maior

freqüência para a mesma forma cromossômica onde o valor foi de 58,6%.

Para a forma submetacêntrica do par 2 foi observado uma freqüência de 21%

no presente estudo contra apenas 3% nas populações do Sul e Sudeste. Esta

diferença na freqüência observada para o polimorfismo cromossômico do

par 2 pode ser um reflexo de estruturação citogenética distinta nas

populações de Minas Gerais com uma maior fixação da forma

submetacêntrica do par 2. É possível que as populações mineiras, devido

principalmente a geografia do Estado, tenham uma estruturação citogenética

distinta das populações costeiras.

Assim como o par 2, o par 4 apresentou uma maior freqüência de

cromossomos acrocêntricos (43,6%) o que também foi observado para as

amostras do Sul e Sudeste (27,6%). A freqüência de cromossomos

60

metacêntricos para este par foi de 12,7% em nossa amostra contra 19% na

comparação realizada.

Dados encontrados em Fagundes e colaboradores (1998) demonstram

que nas amostras do Nordeste brasileiro as formas submetacêntrica e

metacêntrica dos pares 2 e 4, respectivamente, apresentam freqüências muito

mais elevadas em contraposição as formas acrocêntricas. Estes dados nos

permitem inferir que as populações da EPTEA e do PESB estão

citogeneticamente estruturadas de forma mais similar com as amostras do

Sudeste e Sul do Brasil permitindo a ratificação dos padrões de distribuição

dos polimorfismos cromossômicos para os pares 2 e 4 ao longo da sua

distribuição geográfica.

Com relação ao polimorfismo dos pares 2 e 4, as freqüências

observadas para os mesmos mostraram-se em equilíbrio genético, conforme

os preceitos da Lei de Hardy-Weinberg. De acordo com o teste de χ

2

não

ocorreu nenhuma diferença estatística significativa entre o tipo de

polimorfismo encontrado em cada um dos pares. Portanto, o grande

polimorfismo verificado encontra-se balanceado, não ocorrendo o

favorecimento de qualquer um dos citótipos encontrados o que, em

conseqüência, aponta para pouco ou nenhum significado evolutivo. Em seu

trabalho com uma população do Sul do Brasil, Nascimento (1998) verificou

também que o polimorfismo encontrava-se em equilíbrio. Desta forma, estes

polimorfismos podem ser considerados como mudanças neutras, não

estando envolvidos com o processo de especiação, uma vez que,

aparentemente, não reduzem a fertilidade e/ou viabilidade dos

heterozigotos. Este fato também pode ser utilizado para explicar o amplo

polimorfismo detectado para esta espécie.

Para a técnica de bandeamento C foi observado que a heterocromatina

apresentou-se constantemente nas regiões teloméricas e, com menores

intensidade e freqüência, nas pericentroméricas. Não houve diferença

substancial entre os indivíduos das áreas amostradas quanto ao padrão de

banda C. De acordo com outros trabalhos (Yonenaga-Yassuda, 1979;

61

Nascimento, 1998) o padrão de bandas C para A. cursor ocorre nas regiões

pericentroméricas, sendo alguns blocos intersticiais identificados como

provável ocorrência de regiões organizadoras de nucléolo (Fagundes, 1993) o

que poderia explicar também os dados obtidos no presente estudo, já que

esta região foi identificada a partir da técnica de impregnação por prata.

As regiões organizadoras de nucléolo (NOR) foram identificadas

principalmente nos pares 4 e 5, sendo registradas eventualmente no

cromossomo X e na região telomérica do par 1+3. Os dados de NOR não

apresentaram distinções marcantes entre os indivíduos das diferentes áreas

estudadas. Dados semelhantes foram observados por Fagundes (1993) e

Nascimento (1998), sendo que o último autor comenta ter encontrado

números reduzidos de marcações nos cromossomos sexuais o que parece

comum ao presente estudo. As marcações visualizadas no par 1+3 podem ser

artifício da preparação, correspondendo na verdade a regiões

heterocromáticas do cromossomo. Este fato foi ressaltado por Nascimento

(1998).

As populações estudadas apresentaram padrões similares entre si e

com outros dados publicados para a espécie permitindo assim preencher

uma parcela da lacuna sobre a diversidade cariotípica de A. cursor em áreas

de Mata Atlântica do Estado de Minas Gerais. Estudos enfocando as

populações do norte do Estado podem ainda fornecer mais informações

sobre a diferenciação entre as formas 2n = 14 e 15 e 2n = 16, pois se tratam de

populações intermediárias entre estes citótipos. Da mesma forma, a análise

de um número maior de populações, principalmente em condições

intermediárias, pode auxiliar na compreensão se a variação citogenética é

adaptativa ou não.

Agradecimentos

Aos biólogos Jânio Moreira, Pablo Gonçalves e Rodolfo Sttump pela ajuda e

coleta do material em campo. À Profª Tudy Câmara (PUC Minas) pelo

62

exemplar de Leme do Prado. Ao Prof. Dejair Message por disponibilizar o

fotomicroscópio. A CAPES pela bolsa concedida.

63

Referências

Christoff, A.U. 1997. Contribuição a sistemática das espécies do gênero

Akodon (Rodentia:Sigmodontinae) do leste do Brasil: estudos anatômicos,

citogenéticos e de distribuição geográfica. Tese (Doutorado em Ciências),

Universidade de São Paulo, São Paulo.

Fagundes, V. 1993. Análises cromossômicas e dos complexos sinaptonêmicos

em roedores brasileiros das famílias Cricetidae e Echimyidae.

Dissertação (Mestrado em Genética), Universidade de São Paulo, São

Paulo.

Fagundes, V.; Vianna-Morgante, A.M. & Yonenaga-Yassuda, Y. 1997.

Telomeric sequences localization and G-banding patterns in the

identification of a polymorphic chromosomal rearrangement in the

rodent Akodon cursor (2n = 14, 15 e 16). Chromosome Research, (5): 228-

232.

Fagundes, V.; Christoff, A.U. & Yonenaga-Yassuda, Y. 1998. Extraordinary

chromosomal polymorphism with 28 different karyotypes in the

neotropical species Akodon cursor (Muridae, Sigmodontinae), one of the

smallest diploid number in rodents (2n = 16, 15 and 14). Hereditas, (129):

263-274.

Ford, C. & Hamerton, J. 1956. A colchicines hypothonic citrate squash

sequence for mammalian chromosomes. Stain Technology (31): 247-251.

Geise, L. 1995. Os roedores Sigmodontinae do Estado do Rio de Janeiro

(Rodentia, Muridae). Sistemática, citogenética, distribuição e variação

geográfica. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas – Genética).

Universidade Federal do Rio de Janeiro. Rio de Janeiro, xxvii+396p.

64

Howell, W.M. & Black, D.A. 1980. Controled silver-staining of nucleolus

organizer regions with a protective colloidal developer: a 1-step method.

Experientia, 36: 1014-1015.

Levan, A.; Fredga, K. & Sanberg, A.A. 1964. Nomenclature for centromeric

position on chromossomes. Hereditas (52): 1-11.

Maia, V. & Langguth, A. 1981. New karyotypes of brazilian Akodont rodents

with notes on taxonomy. Zeitschrift fur Säugertierkunde, 46 (4): 241-249.

Musser, G.G. &. Carleton, M.D. 2005. Subfamily Sigmodontinae. Vol 2:1086--

1186, In: Mammal Species of the World, Third Edition. (Eds.) Wilson,

D.E. & Reeder, D.M. Johns Hopkins University Press, Baltimore, MD. 2

Volumes, 2141pp.

Nascimento, A.P. 1998. Estudos citogenéticos em Akodon cursor (Winge, 1887)

(Rodentia, Cricetidae) de Guaraqueçaba, Paraná, Brasil. Tese (Mestrado

em Genética), Universidade Federal do Paraná, Paraná.

Sbalqueiro, I.J. & Nascimento, A.P. 1996. Occurrence of Akodon cursor

(Rodentia, Cricetidae) with 14, 15 and 16 chromosome cytotypes in the

same geographic area in Southern Brazil. Revista Brasileira de Genética,

19(4): 565-569.

Sumner, A.T. 1972. A simple tecnique for demostrating centromeric

heterochromatin. Experimental Cellulae Research, 75: 304-306.

Yonenaga, Y. 1972. Chromosomal polymorphisms in the rodent Akodon

arviculoides spp. (2n = 14) resulting from two pericentromeric inversions.

Cytogenetics, 11: 488-499.

Yonenaga, Y.; Kasahara, S.; Almeida, E.J.C. & Peracchi, A.L. 1975.

Chromosomal banding patterns in Akodon arviculoides (2n = 14), Akodon

65

sp. (2n = 24 and 25), and two male hybrids with 19 chromosomes.

Cytogenetics Cell Genetics, 15: 388-399.

Yonenaga-Yassuda, Y. 1979. New karyotypes and somatic and germ-cell

banding in Akodon arviculoides (Rodentia, Cricetidae). Cytogenetics Cell

Genetics, 23: 241-249.

Yonenaga-Yassuda, Y.; Assis, M.F.L.; Kasahara, S.; L’Abbate, M.L. & Souza,

M.J. 1983. Nucleolar organizer regions in Akodon arviculoides (Cricetidae,

Rodentia): evidence for the activity of rDNA genes in both X

chromosomes of females. Cytogenetics and Cell Genetics, 35: 143-147.

66

Anexo

Espécimes analisados

Os dados citogenéticos são oriundos de exemplares depositados no

Museu de Zoologia João Moojen, Viçosa (GL, MZUFV).

Akodon cursor – BRASIL: [1] Estação de Pesquisa, Treinamento e Educação

Ambiental Mata do Paraíso (EPTEA), Viçosa, Minas Gerais: LSR 003, MZUFV

1944, 1945, 1947, 1948, 1949, 1950, 1951, 1952, 2012, 2013, 2014, 2015, 2045,

2090, 2091, 2198, 2205, 2334, 2335, 2336, 2366, 2382, 2385.

[2] Parque Estadual da Serra do Brigadeiro (PESB), Minas Gerais: GL 52,

MZUFV 1157, 1165, 1230, 1233, 1264, 1269, 1277, 1301, 1629, 1636, 1647, 1657,

1890, 1891, 1892, 1894, 1897, 1898, 1899, 1908, 1909, 1910, 1914, 1915, 1916,

2042, 2086, 2088.

[3] Parque Estadual do Rio Doce (PERD), Minas Gerais: MZUFV 1303

[4] Município de Leme do Prado, Vale do Jequitinhonha, Minas Gerais:

MZUFV 2404

67

CONCLUSÕES GERAIS

Com base no estudo realizado conclui-se que para Akodon cursor em

remanescentes de Mata Atlântica do Estado de Minas Gerais:

 Foi possível determinar 5 classes de idade relativas com base no padrão de

desgaste dos molares de Akodon cursor.

 Para a maior parte dos caracteres avaliados não há diferenças significativas entre

as classes de idade relativas 3 e 4, o que proporciona o agrupamento das mesmas em

uma análise de variação geográfica.

 Os efeitos etário e sexual sobre a variabilidade crânio morfométrica de Akodon

cursor são reduzidos.

 Não foram detectadas diferenças qualitativas entre os crânios avaliados das

diferentes populações.

 De acordo com análises multivaridas ocorre diferenciação na forma do crânio

entre as amostras analisadas, sendo esta diferença possivelmente determinada pelo

fator altitude.

 As amostras analisadas confirmaram o alto polimorfismo citogenético para a

espécie, causado pelo rearranjo dos pares 1, 2 e 4.

 Foram encontrados oito diferentes citótipos para a espécie sendo o indivíduo de

Leme do Prado o único a apresentar 2n=16 com citótipo comum a indivíduos de

Pernambuco. Os demais citótipos foram iguais aos demais registros para o Sul e

Sudeste do país.

 As análises de banda C e NOR não foram satisfatórias para diferenciar as

populações estudadas.

 As formas polimórficas dos pares 2 e 4 apresentam-se em equilíbrio de Hardy-

Weinberg com base no teste de χ

2

.

68

ANEXO FOTOGRÁFICO

Indivíduo de Akodon cursor (MZUFV 2374, ♀) coletado na região de Viçosa.

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