( PDF ) Avaliação radiológica do reparo ósseo após laserterapia em osteotomias experimentais em femores de ratos

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UNIVERSIDADE DO VALE DO PARAÍBA

INSTITUTO DE PESQUISA E DESENVOLVIMENTO

DANILLO BARBOSA

AVALIAÇÃO RADIOLÓGICA DO REPARO ÓSSEO APÓS

LASERTERAPIA EM OSTEOTOMIAS EXPERIMENTAIS EM

FEMORES DE RATOS

São José dos Campos, SP.

2006

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DANILLO BARBOSA

AVALIAÇÃO RADIOLÓGICA DO REPARO ÓSSEO APÓS

LASERTERAPIA EM OSTEOTOMIAS EXPERIMENTAIS EM

FEMORES DE RATOS

Dissertação apresentada ao Programa de

Pós-Graduação em Bioengenharia da

Universidade do Vale do Paraíba, como

complementação dos créditos necessários

para obtenção do título de Mestre em

Engenharia Biomédica.

Orientador: Prof. Dr. Antonio Guillermo José Balbin Villaverde

Co-Orientadora: Prof. Dra. Emilia Ângela Loschiavo Arisawa

São José dos Campos, SP.

2006

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DEDICATÓRIA

...Agradeço a “DEUS”, o dom da VIDA...

...Minha incansável e guerreira Mãe, por todos os seus esforços em educar seus filhos...

...Meu Pai, por sua fé, inabalável...

...Minha Irmã, por sua sensatez nas horas mais difíceis...

...Minha Tia Rosalina (Rosa), por sua luta diária pela vida...

...Minha Madrinha Geralda (in memóriam), por sua proteção divina...

...Minhas companheiras inseparáveis, Nicole e Mocinha...

...Minha querida e fiel Aline, por sua imensa beleza e pureza...

...Todos meus amigos que torcem pelo meu sucesso...

AGRADECIMENTOS

...Professor Balbin, por sua amizade e respeito e atenção a minha pessoa... ...Professora

Mirela, por sua intensa ajuda e extremo caráter como pessoa

...Professora Daniela Carvalho, por ser umas das responsáveis pelo meu crescimento

intelectual desde a graduação...

...Professora Claúdia, por sua ajuda decisiva em nosso trabalho...

...Ana Maria Barbosa, pelos seus ensinamentos primorosos no manejo dos animais...

...Dayana e Carol, por darem continuidade ao nosso trabalho...

...Alisson, Darcy, Enio, Geraldo e Renato, por todos os momentos que passamos juntos

nesse período, e pela sincera amizade...

...Departamento de Radiologia e Diagnóstico da Unesp, em São José dos Campos, pelo

respeito expresso a minha pessoa, especialmente a Carola Ágreda pela ajuda e a todos os

alunos do Doutorado da Unesp pela sincera amizade...

...Funcionários e Professores do IP&D pelo carinho e atenção o qual demonstraram com

minha pessoa...

O verdadeiro homem de bem é aquele que pratica a lei de

justiça, de amor e caridade, na sua maior pureza. Interroga-se a

sua consciência sobre seus próprios atos, pergunta se não

violou essa lei, se não cometeu o mal, se fez todo o bem que

podia se não deixou escapar voluntariamente uma ocasião de

ser útil, se ninguém tem do que se queixar dele, enfim, se fez aos

outros, aquilo que queria que os outros fizessem por ele.

“O homem de Bem” (Kardec, Cap. XVII)

AVALIAÇÃO RADIOLÓGICA DO REPARO ÓSSEO APÓS

LASERTERAPIA EM OSTEOTOMIAS EXPERIMENTAIS EM

FEMORES DE RATOS

RESUMO

A utilização da laserterapia tem apresentado efeitos positivos em processos de regeneração

óssea, baseado em medidas morfogênicas, bioquímicas e radiográficas. Desta forma, o

presente estudo objetivou avaliar radiologicamente o processo de regeneração óssea em ratos.

Os animais foram divididos aleatoriamente nos seguintes grupos: GC controle n=15, G(660)

n=15 e G(830) n=15. Os animais receberam medicação pré-anestésica de Acepromazina na

dose de 0,02lmL/Kg e Butorfanol na dose de 0,01mL/Kg, após 15 minutos foi aplicado o

anestésico Zoletil 0,1mL/Kg através de injeção intramuscular utilizando a mesma via. Todos

os animais foram submetidos à osteotomias no fêmur direito utilizando a trefina de 2,8mm de

diâmetro. Os tempos experimentais instituídos para cada grupo foram de 7, 14 e 21 dias. O

tratamento consistiu no emprego da laserterapia com intervalos de 48 horas entre as

aplicações, sendo a 1

aplicação imediatamente após o término dos procedimentos. Os

parâmetros utilizados foram: densidade de energia 40J/cm

, potência 5,0x10

-3

comprimento de onda 660nm e 830nm, área do feixe 0,08cm

, distância da pele 1cm e tempo

de 40s por ponto. Para as tomadas radiográficas utilizou-se o parelho de raios X digital 765

Gendex com 65 KVp, 7mA e 0,032s de tempo de exposição. Os valores obtidos das

médias das densidades ópticas de cada uma das amostras foi submetida à análise de variância

(ANOVA) seguida pelo teste de comparação múltiplia (Tukey-Kramer). Os resultados

observados na avaliação das tomadas radiográficas mostra-nos que os grupos GC, G(660) e

G(830) no tempo experimental de 7 dias apresentaram uma evolução óssea significativa entre

si p<0,012, destaca-se o G(830) que apresentou a maior densidade óptica; os resultados dos

grupos GC, G(660) e G(830) no tempo experimental de 14 dias apresentaram mudanças

perceptíveis na morfologia das amostras e um aumento gradativo nas médias densitométricas

com valores significativos p<0,0001. No tempo experimental de 21 dias observa-se o melhor

desenvolvimento de todos os grupos com uma maior reparação óssea principalmente dos

G(660) e G(830) apresentando valores significativos p<0,017. Conclui-se a terapia laser de

baixa potência com o comprimento de onda de 830nm demonstrou ser mais eficaz nos 3

períodos experimentais no estudo, de acordo com as tomadas radiográficas digitais que

apresentaram um maior aumento na radiopacidade e uma melhor morfologia das amostras.

Palavras-Chave: reparo ósseo, laserterapia, avaliação radiológica, ratos Wistar.

RADIOLOGICAL EVALUATION OF REPAIR ÓSSEO AFTER

LASERTERAPIA IN EXPERIMENTAL OSTEOTOMIAS IN

FEMORES OF RATS

ABSTRACT

The use of the laserterapia has presented positive effect in processes of bone regeneration,

based in morphogenic measures, biochemists and x-ray. In such a way, the present study it

objectified radiographic to evaluate the process of bone regeneration in rats. The animals had

been divided randomly in the following groups: GC has controlled n=15, G660 n=15 and

G830 n=15. The animals had received daily pay-anesthetical medication from Acepromazina

in the dose of 0,02lm/Kg and Butorfanol in the dose of 0,01ml/Kg after 15 minutes was

applied the Zoletil anaesthetic 0,1ml/Kg through injection to intramuscular using the same

way. All the animals had been submitted to the osteotomias in femur right using the trefina of

2.8mm of diameter. The instituted experimental times for each group had been of 7, 14 and 21

days. The treatment immediately consisted of the job of the laserterapia with intervals of 48

hours between the applications, being 1a application after the ending of the procedures. The

used parameters had been: energy density 40Jcm2, Power 5,0 x 10-3W, wave length 660nm

and 830nm, area of the beam 0,08cm2, distance of the skin 01cm and time of 40 for point. For

the radiographic taking the 765 DC® Gendex with 65 was used even of rays X digital KVp,

7me and 0,032s of exposition time. The gotten values of the averages of the optic densities of

each one of the samples were submitted to the analysis of variance (ANOVA) followed by the

test of multiple comparison (Tukey-Kramer). The results observed in the evaluation of the

radiographic taking show-in that the groups GC, G660 and G830 in the experimental time of

7 days had presented significant a bone evolution between itself p<0,0116, the G830 is

distinguished that presented the biggest optic density, the results of groups GC, G660 and

G830 in the experimental time of 14 days had presented perceivable changes in the

morphology of the samples and a gradual increase in the densitometric averages with

significant values p<0,0001. In the experimental time of 21 days one mainly observes

optimum development of all the groups with a bigger bone repairing of the G660 and G830

presenting significant values p<0,0169. It is concluded laser therapy of low power with the

wave length of 830nm demonstrated to be more efficient in the 3 experimental periods in the

study, in accordance with the digital radiographic taking that had presented a bigger increase

in the radiopacity and one better morphology of the samples.

Word-Key: Bone Repair, low-laser therapy, Radiological Evaluation, Wistar rats

LISTA DE ILUSTRAÇÕES

Figura 1 - Assepsia do animal com álcool iodado .......................................................... 22

Figura 2 - Incisão na pele de 4 cm ................................................................................... 22

Figura 3 - Incisão na musculatura de 4 cm ...................................................................... 23

Figura 4 - Exposição do fêmur do animal ........................................................................ 23

Figura 5 – Realização do defeito ósseo ............................................................................ 24

Figura 6 – Broca trefina 2,8mm ......................................................................................... 24

Figura 7 – Fêmur com defeito ósseo ................................................................................ 25

Figura 8 – Sutura das camadas ......................................................................................... 25

Figura 9 – Nova assepsia ................................................................................................. 26

Figura 10 - Aplicação do laser infravermelho 830nm ...................................................... 26

Figura 11 - Aplicação do laser vermelho 660nm .............................................................. 27

Figura 12 – Broca trefina acoplada ao micro motor ........................................................ 27

Figura 13 - Sensor radiológico ......................................................................................... 28

Figura 14 - RVG/USB/TROPHY .................................................................................... 28

Figura 15 – Valores médios da densidade óptica dos grupos GC, G(660) e (830) aos 7 dias ... 29

Figura 16 –

Valores médios da densidade óptica dos grupos GC, G(660) e (830) aos 14 dias .. 30

Figura 17 –

Valores médios da densidade óptica dos grupos GC, G(660) e (830) aos 21 dias .. 31

Figura 18 –

Valores médios da densidade óptica GCxGCxGC 7/14/21 dias 32

Figura 19 –

Valores médios da densidade óptica G(660)xG(660)xG(660) 7/14/21 dias ...... 33

Figura 20 – Valores médios da densidade óptica G(830)xG(830)xG(830) 7/14/21 dias ...... 34

Figura 21 – Valores médios da densidade óptica dos grupos GC, G(660) e (830) para

7/14/21 dias ................................................................................................... 35

Figura 22 – Imagens radiológicas – 7 dias .................................................................................. 36

Figura 23 - Imagens radiológicas – 14 dias ................................................................................ 37

Figura 24 - Imagens radiológicas – 21 dias ......................................................................... 38

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 - Divisão dos grupos, quantidade de animais por grupo, tipo de procedimento

cirúrgico, dias de sacrifícios e tratamento........................................................ 18

Tabela 2 - Protocolo de irradiação laser 660nm e 830nm ............................................... 20

Tabela 3 - Características técnicas do equipamento Emissor Visível .............................. 68

Tabela 4 - Características técnicas do equipamento Emissor Infravermelho ................... 68

Tabela 5 - Características gerais do aparelho ................................................................... 68

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

ATP – Adenosina Trifosfato

COBEA – Colégio Brasileiro de Experimentação Animal

DMO – Densidade Mineral Óssea

GaAlAs – Arseneto de Gálio-Alumínio

KCl – Cloreto de Potássio

LILT – Low Intensity Laser Therapy

mA – Miliamperes

mm – Milímetro

mL – Mililitro

nm – Nanômetros

PVP-I 10% -

SNC – Sistema Nervoso Central

TNT – Tecido não Tecido

UMBs – Unidades Multicelulares Básicas

SUMÁRIO

1. INTRODUÇÃO ........................................................................................................... 01

2. REVISÃO DA LITERATURA .................................................................................. 03

2.1 Tecido ósseo ............................................................................................................... 03

2.1.1 Células ósseas .......................................................................................................... 06

2.1.2 Papel metabólico do tecido ósseo ............................................................................ 07

2.1.3 Periósteo e Endósteo ................................................................................................ 08

2.1.4 Tipos de tecido ósseo .............................................................................................. 09

2.1.5 Histogênese .............................................................................................................. 09

2.1.6 Ossificação intramembranosa .................................................................................. 10

2.1.7 Ossificação endocondral ......................................................................................... 10

2.1.8 Ativação da remodelação óssea .............................................................................. 11

2.2 Laser de Baixa Potência ............................................................................................. 11

2.2.1 Laser de Baixa Intensidade no reparo ósseo .......................................................... 13

3. OBJETIVOS GERAIS ............................................................................................... 17

3.1 Objetivos específicos ................................................................................................ 17

4. MATERIAL E MÉTODO ......................................................................................... 18

4.1 Modelo experimental .................................................................................................. 18

4.2 Anestesia .................................................................................................................... 19

4.3 Cirurgia ...................................................................................................................... 19

4.4 Aplicação do laser ...................................................................................................... 20

4.5 Tempos experimentais ................................................................................................ 21

4.6 Tomadas radiológicas ................................................................................................. 21

4.7 Análise estatística ....................................................................................................... 21

4.8 Procedimentos ............................................................................................................ 22

5. RESULTADOS ........................................................................................................... 29

5.1. 7 dias ......................................................................................................................... 29

5.2 14 dias ........................................................................................................................ 30

5.3 21 dias ........................................................................................................................ 31

5.4 GC: 7 x 14 x 21 dias .................................................................................................. 32

5.5 G(660): 7 x 14 x 21 dias ............................................................................................ 33

5.6 G(660): 7 x 14 x 21 dias ............................................................................................. 34

5.7 CG x G(660) x G(830): 7, 14, 21 dias ....................................................................... 35

5.8 Imagens radiológicas – 7 dias .................................................................................... 36

5.9 Imagens radiológicas – 14 dias .................................................................................. 37

5.10 Imagens Radiológicas – 21 dias ............................................................................... 38

6. DISCUSSÃO ................................................................................................................ 39

7. CONCLUSÃO ............................................................................................................. 44

REFERENCIAS .............................................................................................................. 45

ANEXO A – Certificado de Aprovação do Estudo pelo Comitê de Ética ....................... 49

ANEXO B – Descrição estatística .................................................................................... 50

APÊNDICE A ................................................................................................................... 68

1. INTRODUÇÃO

O laser foi citado por Mester e colaboradores (1985) como uma das descobertas

mais significativas do século XX no campo de ciência médica. Isto envolve novas

perspectivas nas áreas de pesquisa biológica e aplicação na área médica. O laser de baixa

intensidade foi utilizado como estímulo para a proliferação celular por Mester, Mester e

Mester (1985). Seu efeito estimulante foi primeiramente utilizado no tratamento de feridas e

atualmente este recurso terapêutico é investigado no reparo de diversos tecidos biológicos,

incluindo o tecido ósseo, sendo este o menos estudado. Os efeitos da radiação eletromagnética

como o laser de baixa intensidade, no crescimento e reparo ósseo, têm sido investigados de

maneira limitada, segundo Baruska, Yaakobi e Oron (1995).

A terapia laser de baixa potência vem sendo usada cada vez mais na medicina em

geral e sugere-se que seu efeito pode ser benéfico na resolução de muitas condições

patológicas diferentes como na ortopedia, neurologia e reumatologia (KHADRA, 2005).

Os mecanismos biológicos relacionados à irradiação em tecido ósseo ainda não estão

claramente bem definidos. Uma hipótese foi descrita por Lubart et al. (1992) e Freitas,

Baranauskas e Cruz-Hofling et al. (2000), onde os mesmos descrevem que a energia laser

excita as porfirinas e os citocromos, que são cromóforos intracelulares, promovendo um

aumento da atividade celular, aumentando a concentração de adenosina trifosfato (ATP),

fosfatase alcalina e liberando cálcio.

O laser de baixa intensidade pode promover maior velocidade nos processos de

cicatrização e reparo, aceleração da neovascularização, maior formação do tecido de

granulação, aumento no número de fibroblastos, maior número de fibras colágenas, aumento

na síntese de ATP, liberação de histamina pré-formada, redução do pH intracelular e

alterações na proliferação e motilidade celular, fagocitose, reposta imune e respiração

(KITCHEN; PARTRIDGE, 1991).

Trelles e Mayayo (1987) sugeriram que o laser de baixa potência pode modular a

função de osteócitos, promovendo a aceleração do metabolismo e formação mais rápida do

calo ósseo. A radiação laser de baixa potência tem apresentado efeitos positivos na cura de

fraturas ósseas em animais, baseado em medidas morfogênicas, bioquímicas e radiográficas

(LUGER et al., 1998). A laserterapia não só diminuiu o tempo de reparo como também

produziu uma maior área de reparo ósseo (FREITAS; BARANAUSKAS; CRUZ-HOFLING,

2000). A utilização da radiação laser de baixa potência no reparo tecidual pode ser observada

em alguns estudos em ratos como modelos experimentais apresentando resultados positivos

(YAAKOBI; MALTZ; ORON, 1996).

Esta pesquisa objetivou avaliar a ação da laserterapia utilizando dois comprimentos

de ondas diferentes (660nm e 830nm) em osteotomias nos femores de ratos, sendo o foco

principal do estudo a observação do processo de reparo ósseo através de tomadas

radiográficas digitais.

2. REVISÃO DA LITERATURA

2.1 Tecido ósseo

Na evolução dos tecidos de sustentação, o osso ocupa uma importante posição

representando a solução biológica à necessidade de um material sólido de construção para o

esqueleto de todos os animais superiores (SCHENK, 2000). Os ossos têm funções

metabólicas, servindo de armazenado primário do cálcio e fósforo (DAMJANOV, 1996). O

osso é o elemento estrutural primário do corpo humano, protegendo órgãos vitais e dando

suporte aos músculos que permitem movimentos do esqueleto. Difere de materiais estruturais

de engenharia, pois ele é auto-reparador e pode alterar suas propriedades e geometria em

resposta a mudanças na demanda mecânica (KAPLAN et al., 1994).

Considera-se que o osso apresenta duas funções primordiais: (a) tecido de

sustentação, fornecendo estabilidade e (b) serve como banco de cálcio para homeostasia do

cálcio líquido no organismo. Estas funções determinam suas propriedades estruturais nos

níveis macroscópico, microscópico e ultra-estrutural. O papel mecânico é refletido na forma

externa dos ossos, forma e tamanho da cavidade medular, na espessura do córtex diafisário, e

na arquitetura da esponja nas metáfises e epífises. Elas dão prova da cooperação de vários

mecanismos adaptativos resultando em uma resistência máxima alcançada por um mínimo de

material (FROST, 1997; FROST, 1998).

É de consenso geral que o osso é um órgão individual do sistema esquelético, mas o

termo osso tem pelo menos três significados:

(a) O primeiro é a matriz óssea mineralizada, excluindo o osteóide que se adapta

rigorosamente à definição de osso como tecido duro. O osteóide é a matriz orgânica que será

mineralizada, por vezes chamada de pré-osso.

(b) O segundo significado de “osso” é matriz óssea mineralizada ou não, isto é, incluindo

ambos, osso mineralizado e osteóide.

moles, bem como definido previamente. Pode-se referir a combinação de osso e tecido mole

associada à medula como “tecido ósseo”. Tecido é definido como uma agregação de células

similarmente especializadas unidas na execução de uma função específica (PARFITT et al.,

1987).

Rho, Kuhn-Spearing Zioups (1998) sugeriram uma organização estrutural

hierárquica para melhor compreensão das propriedades mecânicas do material ósseo

compreendendo:

(a) Macroestrutura: osso trabecular e cortical, a macroestrutura pode ser compreendida

como dois tipos de osso macroscopicamente diferentes: osso cortical, que predomina em

ossos longos das extremidades, e osso trabecular, que predomina nas vértebras e na pelve

(ERIKSEN; AXELROD; MELSEN, 1994). O endósteo do osso cortical tem um nível mais

elevado de atividade de remodelamento, resultando de mais deformação mecânica e/ou

proximidade do espaço medular. Nas superfícies endosteais, a reabsorção tende a exceder a

formação, levando à expansão do espaço medular em ossos longos (ERIKSEN; AXELROD;

MELSEN, 1994). O osso cortical é compacto e denso como visto no eixo de ossos longos e

pode ser recoberto por tecido conjuntivo.

O osso trabecular consiste de finas placas ou espículas com espessuras variando de

50 a 400 µm. Essas trabéculas são interconectadas num padrão de cacho de abelhas,

oferecendo assim, grande resistência mecânica. Em áreas submetidas a tensões mecânicas, o

padrão trabecular desenvolve uma estrutura que garante adaptação máxima para o padrão de

tensão dado. Por exemplo, a arquitetura do colo do fêmur espelha as linhas de tensão

desenvolvidas durante o carregamento mecânico produzido pelas cargas funcionais. O osso

cortical perfaz 80% da massa do esqueleto, com o osso trabecular constituindo os 20%

restantes. No entanto, como o osso trabecular é metabolicamente mais ativo por unidade de

volume, o metabolismo do esqueleto é quase que igualmente distribuído entre os dois tipos de

ossos (ERIKSEN; AXELROD; MELSEN, 1994).

(b) Microestrutura (de 10 a 500 µm): sistemas de havers, ósteons e trabéculas, são

representadas pelo sistema de Havers, e são formados por canais vasculares

circunferencialmente rodeados por osso lamelar que compõe o mais complexo tipo de osso

cortical. Este arranjo complexo do osso ao redor do canal vascular é chamado de ósteon. O

ósteon é um cilindro irregular e ramificado com anastomoses composto por um canal neuro

vascular centralmente disposto rodeado por camadas permeadas por células da matriz óssea

(KAPLAN et al., 1994).

planamente arranjadas, que representam a submicroestrutura do osso. Quando estas fibras

estão dispostas em camadas concêntricas ao redor de um canal central, forma-se um ósteon ou

canal de Havers (RHO; KUHN-SPEARING; ZIOUPS, 1998). No osso cortical e trabecular,

as fibras colágenas são arranjadas numa orientação alternada que dá um claro padrão lamelar

quando vista sob luz polarizada. Esta orientação ortogonal aumenta a resistência óssea. No

osso imaturo, que pode ser formado como osso primário ou em estados de grandes

modificações, como turnover ósseo, as fibras colágenas são arranjadas de maneira

desorganizada, o que compromete a resistência óssea (ERIKSEN; AXELROD; MELSEN,

1994).

(d) Nanoestruturas (de alguns centos de nanômetros a 1 µm): colágeno fibrilar e

minerais embebidos, quanto à nanoestrutura pode-se afirmar que o osso é um material

compósito poroso de duas fases, sendo estas primeiramente compostas por colágeno e matriz

mineral, que juntas são responsáveis por suas propriedades mecânicas. De uma forma simples,

pode-se dizer que as fibras de colágeno resistem às forças de tração e a matriz mineral resiste

à compressão (ALBERTS et al., 1989).

(e) Sub-Nanoestrutura (menor que alguns centos de nanômetros): estrutura molecular dos

elementos constituintes, como os minerais, colágeno e proteínas orgânicas não-colágenas, a

subnanoestrutura que representa a fase inorgânica ou mineral é composta basicamente por

fosfato de cálcio análogo a hidroxiapatita de cálcio cristalino. A fase orgânica da matriz

extracelular cumpre vários papéis determinando propriedades estruturais, mecânicas e

bioquímicas do osso. Aproximadamente 90% da matriz orgânica é composta por colágeno

tipo I, o restante consiste em proteínas não-colágenas, outros tipos de colágeno, lipídios e

outras macromoléculas. A interação dos hormônios e fatores de crescimento, presentes no

tecido ósseo, com os receptores celulares regulam o fluxo de íons cálcio na célula, evento este

que pode ser chave do controle da mineralização da matriz (KAPLAN et al., 1994).

2.1.1. Células ósseas

(a) Osteoblastos

Os osteoblastos são as células que sintetizam a parte orgânica (colágeno tipo I,

proteoglicanas e glicoproteínas) da matriz óssea. São capazes de concentrar fosfato de cálcio

participando da mineralização da matriz óssea. Dispõem-se sempre nas superfícies ósseas,

lado a lado. Quando em intensa atividade sintética, são cubóides, com citoplasma muito

basófilo. Porém, em estado pouco ativo tornam-se achatados e a basofilia citoplasmática

diminui. Uma vez aprisionado pela matriz recém-sintetizada, o osteoblasto passa a ser

chamado de osteócito. A matriz se deposita ao redor do corpo da célula e de seus

prolongamentos formando assim as lacunas e canalículos. Os osteoblastos em fase de síntese

mostram as características ultra-estruturais das células produtoras de proteínas. A matriz óssea

recém-formada adjacente aos osteoblastos ativos e que não está ainda calcificada, recebe o

nome de osteóide (JUNQUEIRA; CARNEIRO, 2004).

(b) Osteócitos

São células encontradas no interior da matriz óssea, ocupando as lacunas das quais

partem canalículos. Cada lacuna contém apenas um osteócito. Dentro dos canalículos os

prolongamentos dos osteócitos estabelecem contactos através de junções comunicantes, por

onde podem passar pequenas moléculas e íons de um osteócito para outro (JUNQUEIRA;

CARNEIRO, 2004). Os osteócitos são derivados dos osteoblastos, de tempos em tempos, um

osteoblasto é designado para tornar-se um osteócito, para a extrusão de matriz. Como todos os

outros osteoblastos, o pré-osteócito previamente estabeleceu suas conexões com osteócitos

situados mais profundamente no osso, por intermédio de processos citoplasmáticos inclusos

dentro de canalículos (SCHENK, 2000).

Os osteoclastos são células móveis extensamente ramificadas com partes dilatadas

que contêm seis a 50 ou mais núcleos. As ramificações são muito irregulares, com forma e

espessura variáveis. Os osteoclastos têm citoplasma granuloso, algumas vezes vacúolos,

fracamente basófilo nos osteoclastos jovens e acidófilo, nos maduros. Estas células originam-

se de precursores mononucleados provenientes da medula óssea que, ao contacto com o tecido

ósseo, une-se para formar os osteoclastos multinucleados (JUNQUEIRA; CARNEIRO, 2004).

2.1.2 Papel metabólico do tecido ósseo

O esqueleto contém 99% do cálcio do organismo e funciona como uma reserva

desse íon, cuja concentração no sangue (calcemia) deve ser mantida constante, para o

funcionamento normal do organismo. Há um intercâmbio contínuo entre o cálcio do plasma

sangüíneo e o dos ossos. O cálcio absorvido da alimentação, e que faria aumentar a

concentração sangüínea deste íon, é depositado rapidamente no tecido ósseo, e, inversamente,

o cálcio dos ossos é mobilizado quando diminui sua concentração no sangue. Existem dois

mecanismos de mobilização do cálcio depositado nos ossos, o primeiro é a simples

transferência dos íons dos cristais de hidroxiapatita para o líquido intersticial, do qual o cálcio

passa para o sangue. Esse mecanismo, puramente físico, é favorecido pela grande superfície

dos cristais de hidroxiapatita e tem lugar principalmente no osso esponjoso. As lamelas ósseas

mais jovens, pouco calcificadas, que existem mesmo no osso adulto, devido à remodelação

contínua, são as que recebem e cedem Ca

com maior facilidade. Essas lamelas são mais

importantes na manutenção da calcemia do que as lamelas antigas, muito calcificadas e cujos

papeis principais são de suporte e proteção. O segundo mecanismo da mobilização do cálcio é

de ação mais lenta e decorre da ação do hormônio da paratireóide, ou paratormônio, sobre o

tecido ósseo. Este hormônio causa aumento no numero de osteoclastos e reabsorção da matriz

óssea, com liberação de fosfato de cálcio e aumento da calcemia. A concentração de (PO

)

não aumenta no sangue, porque o próprio paratormônio acelera a excreção renal de íons

fosfato. O paratormônio atua sobre receptores localizados nos osteoblastos. Em reposta a esse

sinal, o osteoblastos deixam de sintetizar colágeno e iniciam a secreção do fator estimulador

dos osteoclastos (JUNQUEIRA; CARNEIRO, 2004).

2.1.3 Periósteo e endósteo

As superfícies internas e externas dos ossos são recobertas por células osteogênicas e

tecido conjuntivo, que constituem o endósteo e periósteo, respectivamente. As principais

funções do periósteo e do endósteo são a nutrição do tecido ósseo e o fornecimento de novos

osteoblastos, para o crescimento e a reparação desse tecido (DAMJANOV, 1996). A camada

mais superficial do periósteo contém principalmente fibras colágenas e fibroblastos, na sua

porção profunda o periósteo é mais celular e apresenta células osteoprogenitoras. Estas células

se multiplicam por mitose e se diferenciam osteoblastos, desempenhando papel importante no

crescimento dos ossos e na reparação das fraturas. O endósteo é constituído por uma camada

de células osteogênicas achatadas revestindo as cavidades do osso esponjoso, o canal

medular, os canais de Havers e os de Volkmann (JUNQUEIRA; CARNEIRO, 2004).

2.1.4 Tipos de tecido ósseo

(a) Tecido ósseo primário

Em cada osso o primeiro tecido ósseo que aparece é o tipo primário ou não lamenar

sendo substituído gradativamente por tecido ósseo lamenar ou secundário. O tecido ósseo

primário apresenta fibras colágenas dispostas em várias direções sem organização definida,

com menor quantidade de minerais, facilitando assim a entrada dos raios X (JUNQUEIRA;

CARNEIRO, 2004).

(b) Tecido ósseo secundário (lamelar)

O tecido ósseo secundário é geralmente encontrado em indivíduos adultos, sua

principal característica é possuir fibras colágenas organizadas em lamelas de 3 a 7 µm de

espessura, que ficam paralelas umas às outras, ou se dispõem em camadas concêntricas em

torno de canais com vasos, formando o sistema de Havers ou ósteons (JUNQUEIRA;

CARNEIRO, 2004).

2.1.5 Histogênese

O tecido ósseo é formado por um processo chamado de ossificação

intramembranosa, que ocorre no interior de uma membrana conjuntiva, ou pelo processo de

ossificação endocondral, Este ultimo se inicia sobre um molde de cartilagem hialina, que

gradualmente é destruído e substituído por tecido ósseo formado a partir de células do

conjuntivo. Tanto na ossificação intramembranosa como na endocondral, o primeiro tecido

ósseo formado é o do tipo primário. Este é pouco substituído por tecido secundário ou

lamelar. Portanto, durante o crescimento dos ossos podem-se observadas lado a lado áreas de

tecido primário, áreas de reabsorção e áreas de tecido secundário. Uma combinação de

formação e remoção de tecido ósseo persiste durante o crescimento do osso (JUNQUEIRA;

CARNEIRO, 2004).

2.1.6 Ossificação intramembranosa

A ossificação intramembranosa encontra-se no interior de membranas de tecido

conjuntivo, contribui para o crescimento de ossos curtos e para o crescimento em espessura

dos ossos longos. O local da membrana conjuntiva, onde a ossificação começa é denominada

de ossificação primária, sendo que o processo se inicia pela diferenciação de células

mesenquimatosas que se transformam em grupos de osteoblastos. Estes sintetizam o osteóide

que logo se mineraliza, englobando alguns osteoblastos que se transformam em osteócitos.

Como vários desses grupos surgem simultaneamente no centro de ossificação, há confluência

das traves ósseas formadas, dando ao osso um aspecto esponjoso. Entre as traves formam-se

cavidades que são penetradas por vasos sangüíneos e células mesenquimatosas

indiferenciadas, que irão dar origem à medula óssea (JUNQUEIRA; CARNEIRO, 2004).

2.1.7 Ossificação endocondral

A ossificação endocondral tem início sobre uma peça de cartilagem hialina, com

morfologia semelhante ao que será formado, porém de tamanho menor. Este tipo de

ossificação é o principal responsável pela formação dos ossos longos e curtos. A ossificação

endocondral consiste em dois processos: inicialmente, a cartilagem hialina sofre

modificações, havendo hipertrofia dos condrócitos, redução da matriz cartilaginosa a finos

tabiques, sua mineralização e a morte dos condrócitos por apoptose. Posteriormente, as

cavidades previamente ocupadas pelos condrócitos são invadidas por capilares sangüíneos e

células osteogênicas vindas do conjuntivo adjacente, essas células diferenciam-se em

osteoblastos, que depositarão matriz óssea sobre os tabiques de cartilagem calcificada

(JUNQUEIRA; CARNEIRO, 2004).

2.1.8 Ativação da remodelação óssea

A taxa de remodelação haversiana fisiológica isto é, o número de unidades

multicelulares básicas (UMBs) sob a forma de porcentagem do numero total de ósteons em

cortes transversais corticais, ou calculada por unidade de área de corte transversal varia de

osso para osso e também com a idade (OLAH; SCHENK, 1996). A remodelação óssea é

ativada sistematicamente pelos hormônios do crescimento, tiroidiano e paratiroidiano e

inibida pela calcitonina, cortisona e possivelmente o cálcio.

Localmente o giro ósseo é grandemente estimulado por fatores mecânicos tais como

fraturas, defeitos cirúrgicos, inserção de implantes ou qualquer processo inflamatório. A

vascularização temporária também desencadeia a revascularização e substituição óssea via

remodelação mediada por UMBs. Uma característica comum desta estimulação é a fase de

retardo entre ativação e o início da fase de reabsorção (OLAH; SCHENK, 1996).

2.2 Laser de Baixa Potência

A palavra laser é um acrônimo de Light Amplification by Stimulated Emission of

Radiation, ou seja, luz amplificada por emissão estimulada de radiação. As características que

diferem a luz laser de uma lâmpada comum são: monocromaticidade, coerência e

direcionalidade. A possibilidade de focalização em pequenas áreas e a emissão de altas

densidades de energia faz do laser um instrumento de grande interesse e importância para

aplicações nas áreas da saúde, tanto no diagnóstico como na terapia. (NICOLAU, 2001).

O laser pode apresentar diferentes meios ativos: sólido, liquido ou gasoso. O laser de

diodo é um chip semicondutor que funciona como um diodo elétrico, onde a região ativa

lembra um “sanduíche” de materiais semicondutores diferentes. Na maioria dos

semicondutores a energia é liberada em forma de calor, porém, em materiais como o Gálio, o

Alumínio e o Arsênio, a energia é liberada em forma de fótons. Estes possuem comprimentos

de onda no espectro vermelho e infravermelho (620 a 1500nm), os quais são determinados

pelo tipo de material semicondutor utilizado (BRUGNERA; PINHEIRO, 1998).

Os parâmetros que descrevem um laser são: o comprimento de onda, potência e

energia, forma de emissão e densidades de potência e energia; esses parâmetros devem ser

ajustados de forma que suas doses sejam equilibradas e benéficas para a patologia em questão

(BASFORD, 1989).

O uso do laser tornou-se parte de nossa linguagem num período relativamente curto

de tempo. As aplicações dos lasers estão em quase todos os campos de conhecimento

humano, desde medicina, ciência e tecnologia a negócios e entretenimento (BAXTER, 1997).

O laser foi citado por Mester e colaboradores (1985) como sendo uma das

descobertas mais significativas do século XX no campo da ciência médica. Isto envolve novas

perspectivas nas áreas de pesquisa biológica e aplicaçãos na prática médica. O espectro

eletromagnético inclui além do infravermelho e do ultra-violeta, raios X, Gamma,

microondas, luz visível e ondas de rádio. Estes diferentes tipos de radiação têm em comum a

existência de campos elétricos e magnéticos alternativos que oscilam em sincronia e

perpendicularmente na direção da propagação. A intensidade do campo elétrico aumenta até

um valor máximo positivo depois diminui passando pelo zero até um máximo negativo, antes

de subir novamente ao zero e completar outro ciclo. Esta variação sinusoidal no campo

elétrico é espelhada em ângulos retos por uma variação idêntica no campo magnético. É esta

combinação da flutuação de campos elétrico e magnético que dá a radiação o nome

eletromagnético. Similarmente o comprimento de onda também caracteriza a radiação

eletromagnética, a medida que altas freqüências são sinônimos de ondas mais curtas e vice-

versa (BAXTER, 1997).

O laser de baixa intensidade foi primeiro utilizado como estímulo para a proliferação

celular por Mester e colaboradores (1985), pois até então, este tipo de laser só era utilizado

como luz guia para lasers de alta potência em cirurgias. O efeito estimulante foi

primeiramente observado no tratamento de feridas e, atualmente, este recurso terapêutico é

investigado no reparo de diversos tecidos biológicos, incluindo o tecido ósseo, sendo este

último o menos estudado.

O laser de baixa intensidade pode promover; maiores velocidades de cicatrização e

reparo, aceleração da neovascularização, oclusão de feridas, maior formação do tecido de

granulação, maior número de fibroblastos, maior número de fibras colágenas, aumento na

síntese de ATP, liberação de histamina pré-formada, redução do pH intracelular e alterações

na proliferação e motilidade celular, fagocitose, reposta imune e respiração (KITCHEN;

PARTRIDGE, 1991).

Genovese (2000) salienta que a terapia laser de baixa potência pode acarretar

diminuição da intensidade de dor não só pela inibição da enzima cicloxiigenase, mas também

pelo fato de atuar como um fator equilibrador do potencial da membrana em repouso,

dificultando a transmissão do estimulo nervoso. A terapia laser de baixa intensidade tem sido

usada no tratamento de muitas patologias com relatos de múltiplos efeitos clínicos incluindo

promoção de cura em tecidos moles e ósseo. Os efeitos do comprimento de onda, tipo de

feixe, nível e intensidade de energia e regime de exposição do laser terapêutico continuam não

explicados. Além disso, não existem determinações especificas de dosimetria e mecanismo de

ação para diferentes tipos celulares (COOMBE et al., 2001).

2.1.1 Laser de Baixa Potência no reparo ósseo

O estudo da reparação de defeitos ósseos é muito importante visto ser um desafio

para muitos profissionais da área de saúde (LINDE et al., 1993; PECORA et al., 1997),

juntamente ao comportamento mecânico excelente, o osso revela um potencial único para

regeneração, sendo capaz de reparação de fraturas ósseas sem que seja observada qualquer

cicatriz. Para que uma mineralização sem distúrbios ocorra, existem requisitos básicos, como

uma concentração adequada de íons cálcio e fosfato, presença de matriz a ser calcificada,

agentes de nucleação e controle de agentes reguladores (promotores e inibidores). Além

destes, a formação óssea depende de dois pré-requisitos indispensáveis: suporte sangüíneo

amplo e suporte mecânico. Essa ação é regulada sistemicamente por hormônios circulantes,

fatores de crescimento e citocinas sendo a remodelação óssea um processo de equilíbrio

constante entre a reabsorção e a formação óssea (BERNE, 1990; HARRISON, 1996).

Acredita-se que esta regeneração ocorra baseada em dois mecanismos combinados: a

indução da proliferação e diferenciação de células mesenquimais indiferenciadas e, a indução

da proliferação onde células osteoprogenitoras pré-formadas (ARISAWA et al., 2000).

Marino (2003) investigou o efeito da terapia laser de baixa no reparo ósseo em tíbias

de ratos e citou a existência de uma suposta ação modulatória sobre o processo inflamatório,

atribuída a terapia laser de baixa intensidade, possíveis ações como controle de liberação de

fatores quimiotáticos, aumento da atividade fagocitária e/ou aumento de vascularização,

certamente contribuíram para uma osteossíntese inicialmente mais ativa, ao propiciarem a

instalação de condições ambientais favoráveis.

Os efeitos da radiação eletromagnética, como o laser de baixa intensidade, no

crescimento e reparo ósseo, têm sido investigados de maneira limitada, segundo Baruska,

Yaakobi e Oron (1995). O laser é freqüentemente estudado na cicatrização muscular, nervosa

e dérmica. A radiação laser de baixa potência tem apresentado efeitos positivos na cura de

fraturas ósseas em animais, baseado em medidas morfogênicas, bioquímicas, radiográficas e

ao microscópio eletrônico (LUGER et al., 1998).

Trelles e Mayayo (1987) sugeriram que o laser de baixa potência pode modular a

função de osteócitos, promovendo a aceleração do metabolismo e reação mais rápida do calo

ósseo em defeitos ósseos realizados em tíbias de ratos. Em outro estudo feito realizando-se

fraturas circulares na tíbia de 292 ratos, com o laser GaAlAs 830nm, com 10 J/cm

, 150 mW,

25 segundos. Baruska, Yaakobi e Oron (1995) relataram que a radiação laser de baixa

intensidade pode alterar a atividade e o número de osteoblastos e osteoclastos, refletindo na

alteração da atividade de fosfatase alcalina e fosfatase ácida, promovendo o reparo ósseo no

local da lesão em modelos in vivo. O tratamento se deu no 5

e 6

dias pós-osteotomia,

utilizando 3 J/cm

, 100 mW, 830nm, 50 segundos, 2 pontos por animal, as análises

histomorfométricas revelaram um acúmulo mais rápido de tecido ósseo no local irradiado,

tendo aproximadamente dobrado a velocidade de reparo.

Estudo realizado em ratos por Luger et al. (1998), constatou que a carga máxima

suportada e a rigidez estrutural do calo da tíbia fraturada foram significantemente mais

elevadas no grupo que recebeu tratamento com radiação laser com a seguinte dosimentria:

GaAlAs 830nm 12 J/cm

e 30 segundos. Os calos ósseos foram testados com distração após 2,

4 e 6 semanas. Com 2 semanas, os calos estavam muito imaturos. Com 4 semanas a

resistência do calo era semelhante à observada na fratura completamente curada, e em 6

semanas as fraturas estavam totalmente curadas.

Um estudo avaliou os efeitos da terapia laser de baixa intensidade em células

osteoblásticas humanas, utilizando o laser de Arseneto de Gálio-Alumínio (AsGaAl 830nm),

com densidades de energia de 1,7 a 24,1 J/cm

por até 10 dias. A viabilidade celular não foi

afetada pela radiação laser, sendo esta maior que 90% em todos os grupos experimentais. A

proliferação ou ativação celular não foi significativamente afetada por quaisquer níveis de

energia ou regimes de exposição investigados. A investigação da concentração do cálcio

intracelular revelou uma tendência de mudança transitória positiva após irradiação. O

aumento do cálcio intracelular indicou que as células osteoblásticas respondem com rapidez a

terapia laser de baixa intensidade (COOMBE et al., 2001).

A aplicação diária do laser terapêutico por um período superior a sete dias melhorou

a neoformação trabecular em estudo feito com fratura de tíbia de ratos. A utilização do laser

de baixa potência demonstrou neste estudo que os processos foto-biológico não relacionados a

efeitos térmicos provavelmente constituem os mecanismos básicos envolvidos na recuperação

do tecido lesado (FREITAS; BARANAUSKAS; CRUZ-HOFLING, 2000). Os efeitos do

laser de baixa potência em outras áreas ortopédicas como a osteointegração de dispositivo

ósseo protético implantado ainda não são claros.

3. OBJETIVOS GERAIS

Este estudo foi delineado para comparar a resposta do tecido ósseo, frente a dois

comprimentos de ondas diferentes (660nm e 830nm) em osteotomias experimentais em

fêmores de ratos.

3.1 Objetivos específicos

Analisar os efeitos da terapia laser de baixa potência em osteotomias experimentais

em fêmores de ratos através de tomadas de radiografia digital.

4. MATERIAL E MÉTODO

O presente trabalho foi desenvolvido em obediência as Normas para

Experimentação Animal e de acordo com os Princípios Éticos de manuseio e cuidado com

animais de laboratório preconizados pelo COBEA (Colégio Brasileiro de Experimentação

Animal, 1991), descritos por Cardoso (2004). Além disto, adotaram-se as normas para prática

didático-científica de vivisseção de animais (Lei 6638 de 08/05/1979), obtendo aprovação

pelo Comitê de Ética e Pesquisa da Universidade do Vale do Paraíba sob o protocolo n

L213-

2005 (Anexo A).

4.1 Modelo experimental

Para este estudo foram utilizados 45 ratos Wistar, Rathus Norvegicus com peso de

250 gramas. Os animais passaram por período de quatro dias de ambientação no Biotério de

passagem do Instituto de Pesquisa e Desenvolvimento (IP&D) UniVap, em ambiente

climatizado (23

C), umidade relativa (40 a 60%) e fotoperíodo (ciclo de 12 horas claro-

escuro) controlados, sendo os mesmos alimentados com ração e água a vontade. Os animais

foram divididos aleatoriamente, em 3 grupos, descritos na tabela 1:

Tabela 1 – Divisão dos grupos, quantidade de animais por grupo, tipo de procedimento

cirúrgico, dias de sacrifícios e tratamento.

Tempos

experimentais (dias)

Gru

pos

Procedimentos

7 14 21

Tratamento

Controle (C) 15 Osteotomia 5 5 5 Nenhum

Laser (L660) 15 Osteotomia 5 5 5 48hs-48hs

Laser (L830) 15 Osteotomia 5 5 5 48hs-48hs

4.2 Anestesia

Os procedimentos foram realizados em sala cirúrgica do IP&D, sendo realizada uma

cuidadosa desinfecção da sala cirúrgica utilizando-se álcool 70%. Todos os envolvidos no

procedimento utilizaram vestimentas adequadas como aventais, gorros, luvas e máscaras.

Todos os materiais utilizados nas cirurgias foram colocados em embalagens adequadas

devidamente seladas, passando por processo de esterilização em autoclave (Sercon) ciclo 2,

por 45 minutos à 120ºC. No dia da cirurgia os animais receberam uma medicação pré-

anestésica com injeção intramuscular (seringa e agulha estéril descartável – BD



) de

Acepromazina (Acepran 0,2% Univest S.A.) na dose de 0,02 mL/Kg e Butorfanol



(Lab Forte

Dodge Ltda) na dose de 0,01mL/Kg. Após 15 minutos foi aplicado o anestésico Zoletil 50



(Virbac) na dose de 0,1 mL/Kg através de injeção intramuscular com seringa de insulina

descartável (Becton Dickson Indústrias Cirúrgicas Ltda) na região medial do quadríceps

contralateral.

4.3 Cirurgia

Todos os animais foram submetidos à realização da osteotomia na região do fêmur

direito. Após a anestesia descrita anteriormente, os animais foram submetidos à tricotomia na

região com uma navalha e aplicação de solução tópica de polividona Iodo - PVP-I 10% (LM

FARMA



). Como procedimento de biossegurança foi utilizado campo estéril de TNT (tecido

não tecido) na região da cirurgia e para colocação dos instrumentais esterilizados. Com uma

lâmina de bisturi nº 15 (Paramount



) foi realizada uma incisão de aproximadamente três

centímetros de comprimento na superfície da pele (Figura 2) e uma incisão muscular (Figura

3), sendo afastados os tecidos moles e o periósteo com auxílio de um instrumental apropriado,

tornando exposta a região femoral. O defeito ósseo foi realizado com uma broca especifica

(Figura 6) denominada trefina de 2,8mm de diâmetro, com auxílio do motor elétrico de baixa

rotação (DENTEC 405N

), na velocidade de 1100 rpm e freqüência de 025s, sob irrigação

constante e abundante com soro fisiológico durante todo procedimento cirúrgico (Figura 12).

Após a realização do defeito ósseo na região femoral, foram suturadas as camadas musculares

com fio reabsorvível e a pele com fio de seda estéril nº 4. A área operada sofreu nova assepsia

com álcool iodado, sendo os animais mantidos em gaiolas limpas e em local apropriado,

climatizado, com água e ração ad libitum.

4.4 Aplicação do laser

Para a aplicação da laserterapia os animais não receberam nenhuma medicação.

Eram posicionados em decúbito lateral sobre uma plataforma e imobilizados manualmente. A

laserterapia foi realizada a cada 48 horas, (Tabela 1) sendo que a 1

aplicação se deu

imediatamente após o procedimento cirúrgico (Figura 10 e 11). Foram irradiados 3 pontos na

região desejada com 40 segundos cada ponto. Os animais do grupo controle receberam o

mesmo tipo de manipulação que os animais irradiados, porém com o equipamento desligado.

A dosimetria utilizada é descrita na tabela 2, as características técnicas do emissor visível, as

do emissor infravermelho e as características gerais do aparelho são mostradas

respectivamente nas tabelas 3, 4 e 5.

Tabela 2 – Protocolo de irradiação laser 660nm e 830nm

Parâmetros de Irradiação Valor

Densidade de Energia (DE) 40 J/cm2

Potência 5,0 mW

Comprimento de Onda 660nm/830nm

Área de Feixe 0,8cm

Distância da Pele 01 cm

Tempo 40 s

Número de Pontos 3 pontos por animal

4.5 Tempos experimentais

Após o período de tratamento instituído para cada grupo experimental, 7,14 e 21

dias, os animais dos respectivos grupos foram submetidos à eutanásia. Para tanto os animais

receberam uma medicação pré-anestésica, cujo intuito era de promover a anestesia por ação

depressora no Sistema Nervoso Central (SNC), deixando os animais sem qualquer tipo de

estresse. Após uma injeção intramuscular de Acepromazina (Acepran 0,2% Univest S.A.) na

dose de 0,02 mL e Butorfanol



na dose de 0,01 mL, passados 10 minutos os animais foram

sacrificados através da administração de cloreto de potássio (KCL) 20% intracárdico.

4.6 Tomadas radiológicas

Para as tomadas radiográficas dos fêmores foi utilizado o aparelho de raios X digital

765 DC® Gendex com os seguintes parâmetros: 65 kVp, 7mA, e 0,032s de tempo de

exposição. Para captação das imagens, utilizou-se um sistema de radiografia digital direto,

que emprega o dispositivo de carga acoplada (CCD): o RVG

(Trophy Radiologie, Vincennes,

Toulose, France). Esse sistema digital foi acoplado a um computador Pentium III com 1,4

GHz, 128Mb de memória, HD 40Gb, Monitor LG de 17. O sensor CCD foi fixado a uma

mesa com o cilindro do aparelho de raios X posicionado a uma distância focal de 40cm, de

forma que o feixe central de raios X incidisse perpendicularmente ao sensor. Cada peça

anatômica foi colocada no sensor com o defeito ósseo ocupando a porção central deste. As

imagens obtidas foram armazenadas no formato TIFF, resolução padronizada. Posteriormente,

a análise da densidade óptica foi realizada no programa Image Tool 2.03



, utilizando-se a

ferramenta Histogram (densidade óptica x número de pixels), demarcando-se a região central

do defeito ósseo. Com isso, obteve-se um gráfico bidimensional, fornecendo os valores de

tons de cinza da imagem radiográfica. Foram realizadas duas leituras das médias das

densidades de cada imagem radiográfica, no intervalo de uma semana cada, pelo mesmo

examinador. Os valores obtidos foram submetidos à análise estatística pelos ANOVA e

Tukey-Kramer.

4.7 Análise estatística

Os valores médios das leituras ópticas foram submetidos à análise de variância

ANOVA, seguido pelo teste de comparação múltipla de Tukey-Kramer, quando necessário.

Os resultados foram expressos com média ± erro padrão da média (Média ± E.P.M), sendo os

valores de p≤ 0,05 (5%) considerados significantes.

4.8 Procedimentos

Figura 1 – Assepsia do animal com álcool iodado

Figura 2 – Incisão na pele de 4 cm

Figura 3 – Incisão na musculatura de 4 cm

Figura 4 – Exposição do fêmur do animal

Figura 5 – Realização do defeito ósseo

Figura 6 – Broca trefina 2,8mm

Figura 7 – Fêmur com defeito ósseo

Figura 8 – Sutura das camadas

Figura 9 – Nova assepsia

Figura 10 – Aplicação do laser infravermelho 830 nm

Figura 11 – Aplicação do laser vermelho 660nm

Figura 12 – Broca trefina acoplada ao micro motor

Figura 13 – Sensor Radiológico

Figura 14 – RVG/USB/TROPHY

5. RESULTADOS

5.1 - 7 dias

A análise estatística dos valores obtidos referentes à densidade óptica obtida dos

grupos em estudo, GC (grupo controle), G(660) (grupo tratado com laser de 660 nm) e

G(830) (grupo tratado com laser de 830 nm), permitiu avaliar e comparar a existência ou não

de alterações na morfologia e na radiopacidade das tomadas radiográficas da amostra de cada

espécime no tempo experimental de 7 dias. A obtenção das médias absolutas de densidade

óptica revelou um aumento gradativo na morfologia e um aumento na radiopacidade das

tomadas radiográficas.

Figura 15. Valores médios da densidade óptica em relação ao tempo experimental de 7

dias, média ± E.P.M. GC, G(660) e G(830) respectivamente. (n=5 e *p< 0,0001).

128

130

132

134

136

138

140

142

GC G(660) G(830)

Grupos

Densidade Óptica

77 7

5.2 - 14 dias

Nos grupos GC, G(660) e G(830), no tempo experimental de 14 dias e com 5

aplicações de laserterapia, foi observado uma mudança perceptível na morfologia da amostra

dos espécimes; ressalta-se o aumento na radiopacidade das tomadas radiográficas,

expressando um resultado estatisticamente significativo.

Figura 16. Valores médios da densidade óptica em relação ao tempo experimental de 14

dias, média ± E.P.M. GC, G(660) e G(830) respectivamente. (n=5 e *p< 0,01).

132

134

136

138

140

142

GC G(660) G(830)

Grupos

Densidade Óptica

14 14 14

5.3 - 21 dias

A análise dos resultados obtidos com os grupos de 21 dias permitiu observar um

aumento na média absoluta do G(660) nesse período. Foi observado nesse período um

preenchimento quase total no local do defeito nos 3 grupos experimentais, porém no G(660) e

G(830) esse preenchimento foi maior, como é mostrado na figura 17.

Figura 17. Valores médios da densidade óptica em relação ao tempo experimental de 21

dias, média ± E.P.M. GC, G(660) e G(830) respectivamente. (n=5 e *p< 0,017).

136

138

140

142

144

GC G(660) G(830)

Grupos

Densidade Óptica

21 21 21

5.4 - GC: 7 x 14 x 21 dias

A figura 18 representa os valores médios da densidade óptica dos espécimes

pertencentes ao GC nos diferentes tempos experimentais estudados. Observa-se que houve um

aumento gradativo nesses valores, correlacionando com o processo de reparo no defeito ósseo

cirurgicamente criado. Após o período de 7 dias a densidade óptica média apresentou valores

de 132,6, para o período de 14 dias temos uma média de 136,0 e para o período de 21 temo

uma média de 139,0. Observa-se que os 3 grupos controles analisados apresentaram

diferenças em sua morfologia inicial mesmo sem nenhum tratamento empregado, isso se deve

ao foto do osso ser órgão auto reparador, com uma considerável capacidade de se regenerar.

Os resultados dos grupos controles indicaram um valor estatisticamente significativo.

Figura 18. Valores médios da densidade óptica em relação a todos os tempos

experimentais do estudo, média ± E.P.M. GC 7 dias, GC 14 dias e GC 21 dias

respectivamente. (n=5 e *p<0,004).

128

130

132

134

136

138

140

142

GC GC GC

Grupos

Densidade Óptica

714 21

5.5 - G(660): 7 x 14 x 21 dias

A mesma comparação foi realizada com os dados obtidos da densidade óptica nos

espécimes do grupo G(660). Observa-se que no tempo experimental de 7 e 14 dias temos uma

média óptica de 137,2 e 138,0 respectivamente, já para o tempo experimental de 21 dias

temos uma média óptica de 141. Isso leva-nos a acreditar que os animais do G(660) obtiveram

um maior ganho ósseo a partir do 14

dia de tratamento conforme ilustra a representação

gráfica abaixo. Os resultados dos GC indicam uma diferença estatisticamente significativa.

Figura 19. Valores médios da densidade óptica em relação a todos os tempos

experimentais do estudo, média ± E.P.M. G(660) 7 dias, G(660) 14 dias e

G(660) 21

dias, respectivamente. (n=5 e *p<0,006).

134

136

138

140

142

144

G(660) G(660) G(660)

Dias

Densidade Óptica

71421

5.6 – G(830): 7 x 14 x 21 dias

Foi realizada a comparação das médias da densidade óptica dos espécimes do

G(830). Observamos nos valores obtidos do período de 7 e 14 dias cuja média representam

140,4 e 140,8 respectivamente, valores próximos. Para o período de 21 dias nota-se um

amento nessa média, 142,0. De acordo com a figura 20 observa-se um crescimento linear nos

dois primeiros períodos seguida de uma leve inclinação para o tempo de 21 dias, indicando

um maior desenvolvimento ósseo no ultimo período. É importante salientar que os grupos

tratados com laser 830nm, apresentaram em todas as etapas do estudo um desenvolvimento

maior e melhor do que os grupos tratados com laser 660nm, sendo que as dosimetrias foram

às mesmas para ambos os grupos, diferenciando apenas no comprimento de onda dos

mesmos. Quando comparado às médias absolutas de todos os grupos G(830) de todos os

tempos experimentais, obtivemos um valor não significativo entre as médias desses grupos.

Figura 20. Valores médios da densidade óptica, média ± E.P.M. G(830) 7 dias, G(830)

14 dias e G(830) 21 dias, respectivamente. (n=5 e *p<0,2181).

138

140

142

144

G(830) G(830) G(830)

Dias

Densidade Óptica

21147

5.7 - CG x G(660) x G(830): 7, 14, 21 dias

Para uma melhor visualização dos resultados deste estudo comparamos todas as

médias absolutas entre todos os grupos e todos os períodos experimentais. Observamos no 1

grupo GC como se deu sua evolução gráfica, observamos que sua linha com marcadores

expressos representando as médias de cada grupo no altera sua direção, e cresce sempre no

mesmo sentido, indicando um crescimento ósseo normal, sem a inclusão de nenhum

tratamento paralelo que influenciasse nos resultados obtidos. Nota-se no 2

grupo G(660) que

a linha com os marcadores varia susceptivelmente entre os dois períodos experimentais de 7 e

14 dias e sua linha modifica-se novamente no período experimental de 21 dias, indicando-nos

um estimulo ao crescimento ósseo mais significante nos últimos dias do tempo experimental.

Os grupos G(830) apresentaram valores médios absolutos aproximados, sendo que não houve

diferença estatisticamente significativa

Figura 21. Valores médios da densidade óptica, média ± E.P.M. GC 7 dias, GC 14 dias e

GC 21 dias; G(660) 7 dias, G(660) 14 dias e G(660) 21 dias; G(830) 7 dias, G(830)

14dias e G(830) 21 respectivamente. (n=5 e p<0,0001).

126

128

130

132

134

136

138

140

142

144

)

Dias

Densidade Óptic

***

77714 14 1421 21 21

5.8 - Imagens radiológicas – 7 dias

Grupo Controle 7 dias

Grupo Tratado Laser 660nm 7 dias

Grupo Tratado Laser 830 nm 7 dias

Figura 22. Imagens radiológicas – 7 dias

5.9 - Imagens radiológicas – 14 dias

Grupo Controle 14 dias

Grupo Tratado Laser 660 nm 14 dias

Grupo Tratado Laser 830 nm 14 dias

Figura 23. Imagens radiológicas – 14 dias

5.10 - Imagens Radiológicas – 21 dias

Grupo Controle 21 dias

Grupo Tratado Laser 660 nm 21 dias

Grupo Tratado Laser 830 nm 21 dias

Figura 24. Imagens radiológicas – 21 dias

6. DISCUSSÃO

A terapia laser é descrita como uma ferramenta importante para estimular

positivamente o osso, tanto in vivo quanto in vitro. Resultados de estudos experimentais

indicam que as propriedades físicas e fotoquímicas de algumas ondas, ou comprimento de

onda, são responsáveis pelas respostas positivas do tecido ósseo (PINHEIRO; GERBI, 2006;

STEIN et al., 2005). O laser de baixa potência parece acelerar o tempo de regeneração de

defeitos ósseos, porém o efeito da terapia laser na osteointegração de dispositivos protéticos

implantados no osso ainda é obscuro (GUZZARDELLA et al., 2001).

Karu (1989) aponta, com base nos resultados obtidos em estudos experimentais, que

a universalidade dos efeitos da terapia laser de baixa potência na estimulação do metabolismo

celular é devida aos receptores primários que compõem a cadeia respiratória. Além disso, são

dependentes da dose de luz e, dessa maneira, em doses baixas, a irradiação causa regulação da

oxi-redução do metabolismo celular e em altas doses ocorrem danos fotodinâmicos. A

intensidade do efeito de biomodulação depende do estado da célula antes da irradiação, o que

explicaria o porquê do efeito bioestimulante nem sempre ser observado. Os efeitos

terapêuticos da terapia laser de baixa potência são explicados pelas mudanças nas atividades

fisiológicas das células.

O uso de parâmetros corretos demonstra ser eficaz na promoção de um efeito

regenerativo positivo no osso (WEBER, 2006). A importância da padronização dos

parâmetros é enfatizada para as aplicações de lasers de baixa intensidade na biologia e na

medicina. Embora as aplicações terapêuticas sejam iminentes a variedade de protocolos exige

uma interpretação atenta dos achados clínicos (KESAWA, 2004).

A escolha do protocolo de aplicação da laserterapia no presente estudo, que

compreendeu os tempos experimentais de 7, 14 e 21 dias, com a 1

aplicação imediatamente

após a osteotomia e as demais com intervalos de 48 horas entre as aplicações, foi baseado em

estudos realizados por Pinheiro et al. (2003) e Gerbi et al. (2005).

Labbe et al. (1990) observaram que a fotoestimulação por laser de baixa potência

provocou um incremento na síntese do acido ascórbico e na hidroxiprolina em culturas de

fibroblastos, o que poderia gerar uma melhora na qualidade da reparação óssea. Há uma

evidência ampla que a ação da luz em sistemas biológicos dependa de pelo menos dois

parâmetros importantes: da densidade da energia e a intensidade (SOMMER, 2001).

Anneroth et al. (1998) avaliaram os efeitos da terapia laser de baixa potência na

faixa do infravermelho próximo, e obtiveram resultados que sugeriram que tais efeitos

dependem da penetração da luz nos tecidos e nos fluidos teciduais. A energia pode ser

absorvida onde a concentração do fluido é maior como os tecidos onde acorre o processo

inflamatório agudo.

No presente estudo, os animais de GC foram submetidos à simulação da irradiação,

não sendo feita nenhuma restrição de ordem alimentar ou a administração de qualquer

fármaco que pudesse influenciar no resultado na pesquisa. Observou-se que foram visíveis,

nos diferentes tempos experimentais estudados, diferenças nas imagens radiográficas com

relação à morfologia dos defeitos ósseos cirurgicamente criados na fase inicial (7 dias) e final

(21 dias). A representação gráfica dos valores médios obtidos através da densitrometria óptica

registrou crescimento linear, sem alteração na direção da reta, que caracteriza o processo de

reparo tecidual normal, explicado pela grande capacidade reparadora apresentada por esse

tecido.

Ao compararmos os resultados obtidos em GC com aqueles referentes ao G(660),

observou-se que os valores densitométricos, apresentados pelo grupo irradiado, foram

superiores aos de GC, indicando que a aplicação do laser, nos parâmetros utilizados, em

G(660) favorece e acelera o processo de reparo tecidual em defeitos ósseos cirúrgicos,

também confirmado pela visualização das imagens radiográficas.

Estudo realizado por Nicolau et al. (2003), utilizando a terapia laser de baixa

potência na regeneração do tecido ósseo em fêmores de 48 ratos, 24 no grupo irradiado e 24

no grupo de controle, o grupo irradiado foi tratado com laser GaAlAs 660nm, 10 J/cm

. A

autora concluiu que a terapia laser de baixa potência aumenta a atividade no osso, tanto de

reabsorção quanto de neoformação, em torno do local do reparo sem mudar a estrutura do

tecido ósseo.

Ao serem comparados os valores obtidos em GC com aqueles de G(830), em todos

os tempos experimentais estudados, evidenciou-se que o grupo irradiado apresentou maior

radiopacidade nas tomadas radiográficas bem como melhor morfologia do defeito ósseo.

Resultados semelhantes foram observados ao se comparar G(660) e G(830), observando-se

que neste último as imagens radiográficas dos espécimes apresentavam o fechamento da loja

cirúrgica, dificultando a identificação macroscópica da área do defeito, no tempo

experimental de 21 dias. A análise densitométrica confirmou essa avaliação macroscópica,

apresentando valores acima dos demais grupos estudados.

A avaliação dos efeitos da terapia laser de baixa intensidade em células

osteoblásticas humanas utilizando o laser AsGaAl 830nm com densidade de energia entre 1,7

a 24,1 J/cm

, permitiu observar que a viabilidade celular não foi afetada pela radiação laser,

sendo esta maior que 90% em todos os grupos experimentais. A proliferação ou ativação

celular não foi significativamente afetada por quaisquer níveis de energia ou regimes de

exposição investigados. A investigação da concentração do cálcio intracelular revelou uma

tendência de mudança transitória positiva após irradiação, o aumento do cálcio intracelular

indicou que as células osteoblásticas respondem com rapidez a terapia laser de baixa

intensidade (COOMBE et al., 2001).

Estudo realizado por Weber (2003), revelou que a utilização do laser diodo

infravermelho GaAlAs, 830nm, em defeitos ósseos em fêmores ratos, com irradiação em

quatro pontos diferentes, durante 7 dias e dose de 10J/cm

, determinou um aumento na

atividade de remodelação óssea no grupo irradiado quando comparado ao grupo controle.

Segundo o autor esses achados permitiram concluir que o laser diodo infravermelho GaAlAs,

830nm, apresentou um efeito de biomodulação positiva sobre o processo de cicatrização

óssea.

Brito (2004) utilizou o laser AlGaAs, 830 nm no processo de reparação óssea em

cinco grupos de ratos sendo um controle e quatro irradiados com diferentes fluências, 4, 8 e

10J/cm

e potência de 100mW para todos os grupos. Os resultados obtidos foram favoráveis

em todos os grupos, após a análise histológica que permitiu observar aumento na quantidade

de trabéculas ósseas neoformadas, ressaltando que o grupo de 4J/cm

apresentou melhores

resultados.

Segundo Gerbi et al. (2005) investigações envolvendo ratos Wistar, com defeitos

ósseos em seus fêmores e aplicação de laser GaAlAs 830nm, 4J/cm

, em 3 pontos e 48 horas

de intervalo entre as aplicações, evidenciaram uma quantidade superior de fibras colágenas e

aumento na quantidade de trabéculas, com aspecto organizado, no grupo tratado com laser em

relação ao grupo controle.

No presente estudo pode-se observar que o crescimento dos valores densitométricos

foi crescente e positivo, a partir do tempo experimental inicial até o final, em todos os grupos

estudados. Notou-se, ainda, que a aplicação da laserterapia nos parâmetros utilizados em

quaisquer dos grupos experimentais favoreceu a diminuição do tempo de reparo tecidual e

incrementou a densidade óssea.

No entanto, cabe ressaltar que a partir dos resultados obtidos após a aplicação da

laserterapia com comprimento de onda em 830nm, nos parâmetros utilizados no presente

estudo, observou-se maior ganho ósseo, quando comparado aos resultados de GC e G(660).

Portanto, nossos resultados parecem sugerir que a aplicação da laserterapia de baixa potência,

nesse comprimento de onda, possibilitou uma aceleração no tempo do reparo ósseo e maior

ganho no tecido ósseo neoformado, indicando ser esse protocolo mais eficiente em processos

de reparo em lesões de tecido ósseo.

7. CONCLUSÃO

Desta forma, este estudo sugere que:

- A terapia laser de baixa potência com o comprimento de onda de 660nm, nos

parâmetros utilizados no presente estudo, demonstrou acelerar o processo de reparo ósseo em

defeitos ósseos cirúrgicos quando compara ao grupo controle;

- A terapia laser de baixa potência com o comprimento de onda de 830nm, nos

parâmetros utilizados no presente estudo, demonstrou acelerar o processo de reparo ósseo em

defeitos ósseos cirúrgicos quando compara ao grupo controle;

- A terapia laser de baixa potência com o comprimento de onda de 830nm, nos

parâmetros utilizados no presente estudo, demonstrou ser a mais eficaz em todos os tempos

experimentais estudados, apresentando aumento significativo na densidade óptica e melhor

morfologia final da loja cirúrgica.

8. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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ANEXO A

Certificado de Aprovação do Estudo Pelo Comitê de Ética

ANEXO B

Descrição estatística

Grupo Controle 7 dias (Dias Pós-Cirúrgicos)

Controle

Medida

Média

Amostra 1 134 134 134 134

Amostra 2 131 131 131 131

Amostra 3 134 134 134 134

Amostra 4 133 133 133 133

Amostra 5 131 131 131 131

Média

Final

(DMO)

132,6

Grupo Laser 660nm 7 dias (DPC)

Laser 660nm

Medida

Média

Amostra 1 137 137 137 137

Amostra 2 136 136 136 136

Amostra 3 137 137 137 137

Amostra 4 139 139 139 139

Amostra 5 137 137 137 137

Média

Final

(DMO)

137,2

Grupo Laser 830nm 7 dias (DPC)

Laser 830nm

Medida

Média

Amostra 1 140 140 140 140

Amostra 2 141 141 141 141

Amostra 3 142 142 142 142

Amostra 4 139 139 139 139

Amostra 5 140 140 140 140

Média

Final

(DMO)

140,4

Análise Estatística

¾ ANOVA

¾ TESTE PARAMÉTRICO

¾ POS-TESTE (p<0,05)

¾ TUKEY-KRAMER

Grupos Média Tamanho da Amostra Desvio Padrão (SD) Erro padrão Médio (EPM)

Controle 132,6 05 1,517 0,6782

660nm 137,2 05 1,342 0,6000

830nm 140,4 05 1,140 0,5099

Analise da Variância (ANOVA)

F= 43,370

Valor de p≤0,0001 (considerado estatisticamente significante)

Tukey-Kramer – Teste de Comparação Múltipla

Comparação Valor de q Valor de p Diferença

Controle vs 660nm 08,333 p<0,001 -5,000

Controle vs 830nm 13,000 p<0,001 -7,800

660nm vs 830nm 04,667 p<0,05 -2,800

Resumo dos Dados

Grupos Mínima Máxima Menor (95%CI) Maior (95%CI)

Controle 131 134 130,72 134,48

660nm 136 139 135,93 139,27

830nm 139 142 138,98 141,82

Grupo Controle 14 dias (DPC)

Controle

Medida

Média

Amostra 1 135 135 135 135

Amostra 2 133 133 133 133

Amostra 3 136 136 136 136

Amostra 4 139 139 139 139

Amostra 5 137 137 137 137

Média

Final

(DMO)

136,0

Grupo Laser 660nm 14 dias (DPO)

Laser 660nm

Medida

Média

Amostra 1 136 136 136 136

Amostra 2 138 138 138 138

Amostra 3 137 137 137 137

Amostra 4 137 137 137 137

Amostra 5 142 142 142 142

Média

Final

(DMO)

138,0

Grupo Laser 830nm 14 dias (DPC)

Laser 830nm

Medida

Média

Amostra 1 143 143 143 143

Amostra 2 140 140 140 140

Amostra 3 142 142 142 142

Amostra 4 140 140 140 140

Amostra 5 139 139 139 139

Média

Final

(DMO)

140,8

Análise Estatística

¾ ANOVA

¾ TESTE PARAMÉTRICO

¾ POS-TESTE (P<0,05)

¾ TUKEY-KRAMER

Grupos Média Tamanho da Amostra Desvio Padrão (SD) Erro padrão Médio (EPM)

Controle 136,0 05 2,236 1,0000

660nm 138,0 05 2,345 1,0490

830nm 140,8 05 1,643 0,7348

Analise da Variância (ANOVA)

F= 6,606

Valor de p= 0,012 (considerado estatisticamente significante)

Tukey-Kramer – Teste de Comparação Múltipla

Comparação Valor de q Valor de P Diferença

Controle vs 660nm 2,132 p>0,05 -2,000

Controle vs 830nm 5,117 p<0,01 -4,800

660nm vs 830nm 2,985 p>0,05 -2,800

Resumo dos Dados

Grupos Mínima Máxima Menor (95%CI) Maior (95%CI)

Controle 133 139 133,22 138,78

660nm 136 142 135,09 140,91

830nm 139 143 138,70 142,84

Grupo Controle 21 dias (DPC)

Controle

Medida

Média

Amostra 1 139 139 139 139

Amostra 2 138 138 138 138

Amostra 3 141 141 141 141

Amostra 4 140 140 140 140

Amostra 5 137 137 137 137

Média

Final

(DMO)

139,0

Grupo Laser 660nm 21 dias (DPC)

Laser 660nm

Medida

Média

Amostra 1 140 140 140 140

Amostra 2 142 142 142 142

Amostra 3 141 141 141 141

Amostra 4 143 143 143 143

Amostra 5 140 140 140 140

Média

Final

(DMO)

141,2

Grupo Laser 830nm 21 dias (DPC)

Laser 830nm

Medida

Média

Amostra 1 140 140 140 140

Amostra 2 142 142 142 142

Amostra 3 142 142 142 142

Amostra 4 144 144 144 144

Amostra 5 142 142 142 142

Média

Final

(DMO)

142,0

Análise Estatística

¾ ANOVA

¾ TESTE PARAMÉTRICO

¾ POS-TESTE (P<0,05)

¾ TUKEY-KRAMER

Grupos Média Tamanho da Amostra Desvio Padrão (SD) Erro padrão Médio (EPM)

Controle 139,0 05 1,581 0,7071

660nm 141,2 05 1,304 0,5831

830nm 142,0 05 01,44 0,6325

Analise da Variância (ANOVA)

F= 5,839

Valor de p= 0,0169 (considerado estatisticamente significante)

Tukey-Kramer – Teste de Comparação Múltipla

Comparação Valor de q Valor de P Diferença

Controle vs 660nm 3,422 p>0,05 -2,200

Controle vs 830nm 4,666 p<0,01 -3,000

660nm vs 830nm 1,244 p>0,05 -0,800

Resumo dos Dados

Grupos Mínima Máxima Menor (95%CI) Maior (95%CI)

Controle 133 139 133,22 138,78

660nm 136 142 135,09 140,91

830nm 139 143 138,70 142,84

Grupos Controles (7/14/e 21 dias)

Controle (7) Controle (14) Controle (21)

134 135 139

131 133 138

134 136 141

133 139 140

131 137 137

Média Final -132,6 Média Final -136 Média Final -139

Análise Estatística

¾ ANOVA

¾ TESTE PARAMÉTRICO

¾ POS-TESTE (P<0,05)

¾ TUKEY-KRAMER

Grupos Média Tamanho da Amostra Desvio Padrão (SD) Erro padrão Médio (EPM)

C(7) 132,6 05 1,517 0,6782

C(14) 136 05 2,236 1,000

C(21) 139 05 1,581 0,7071

Analise da Variância (ANOVA)

F= 15,694

Valor de p= < 0,004 (considerado estatisticamente significante)

Tukey-Kramer – Teste de Comparação Múltipla

Comparação Valor de q Valor de P Diferença

C(7) 4,206 p<0,05 -3,400

C(14) 7,918 p<0,001 -6,400

C(21) 3,712 p>0,05 -3,000

Resumo dos Dados

Grupos Mínima Máxima Menor (95%CI) Maior (95%CI)

C(7) 131 134 130,72 134,48

C(14) 133 139 133,22 138,78

C(21) 137 141 137,04 140,90

Grupos G(660) (7/14/e 21 dias)

G(660) G(660) G(660)

134 135 139

131 133 138

134 136 141

133 139 140

131 137 137

Média Final -132,6 Média Final -136 Média Final -139

Análise Estatística

¾ ANOVA

¾ TESTE PARAMÉTRICO

¾ POS-TESTE (P<0,05)

¾ TUKEY-KRAMER

Grupos Média Tamanho da Amostra Desvio Padrão (SD) Erro padrão Médio (EPM)

C(7) 137,2 05 1,095 0,4899

C(14) 138 05 2,345 1,049

C(21) 141,2 05 1,304 0,5831

Analise da Variância (ANOVA)

F= 8,000

Valor de p= < 0,0062 (considerado estatisticamente significante)

Tukey-Kramer – Teste de Comparação Múltipla

Comparação Valor de q Valor de P Diferença

GC(7) 1,069 p>0,05 -0,8000

GC(14) 5,345 p<0,001 -4,000

GC(21) 4,276 p<0,05 -3,200

Resumo dos Dados

Grupos Mínima Máxima Menor (95%CI) Maior (95%CI)

GC(7) 138 139 135,84 138,56

GC(14) 136 142 135,09 140,91

GC(21) 140 143 139,58 142,82

Grupos G(830) (7/14/e 21 dias)

G(830) G(830) G(830)

134 135 139

131 133 138

134 136 141

133 139 140

131 137 137

Média Final -132,6 Média Final -136 Média Final -139

Análise Estatística

¾ ANOVA

¾ TESTE PARAMÉTRICO

¾ POS-TESTE (P<0,05)

¾ TUKEY-KRAMER

Análise da Variância (ANOVA)

F= 1,733

Valor de p= < 0,2181 (considerado não significante)

Tukey-Kramer – Teste de Comparação Múltipla

Grupos Média Tamanho da Amostra Desvio Padrão (SD) Erro padrão Médio (EPM)

G(830) 140,4 05 1,140 0,5099

G(830) 140,8 05 1,643 0,7348

G(830) 142,0 05 1,414 0,6325

Resumo dos Dados

Grupos Mínima Máxima Menor (95%CI) Maior (95%CI)

G(863) 134 142 138,98 141,82

G(830) 139 143 138,76 142,84

G(830) 140 144 140,24 143,76

Grupos GC x GC x GC x G(660) x G(660) x G(660) x G(830) x G(830) x G(830)

Grupos Média Desvio Padrão

Erro Padrão

Médio

CON(07 DIAS)

132,6 1,517 0,6782

CON(14 DIAS)

136 2,236 1,000

CON(21 DIAS)

139 1,581 0,7071

G(660 07 DIAS)

137,2 1,095 0,4899

G(660 14 DIAS)

138 2,345 1,049

G(660 21 DIAS)

141,2 1,304 0,5831

G(830 07 DIAS)

140,4 1,140 0,5099

G(660 14 DIAS)

140,8 1,643 0,7348

G(660 21 DIAS)

142 1,414 0,6325

Análise Estatística

¾ ANOVA

¾ TESTE PARAMÉTRICO

¾ POS-TESTE (P<0,05)

¾ TUKEY-KRAMER

Análise da Variância (ANOVA)

F= 16,651

Valor de p= < 0,0001 (considerado estatisticamente significante)

Tukey-Kramer – Teste de Comparação Múltipla

Comparação

Diferença da

Média

Valor de q Valor de p

CON(7 DIAS) X CON(14 DIAS)

-3,400 4,636 p>0,05

CON(7 DIAS) X CON(21 DIAS)

-6,400 8,727 p<0,001

CON(7 DIAS) X G(660 07 DIAS)

-4,600 6,273 P<0,01

CON(7 DIAS) X G(66014 DIAS)

-5,400 7,364 p<0,001

CON(7 DIAS) X G(660 21 DIAS)

-8,600 11,727 p<0,001

CON(7 DIAS) X G(830 07 DIAS)

-7,800 10,636 p<0,001

CON(7 DIAS) X G(830 14 DIAS)

-8,200 11,182 p<0,001

CON(7 DIAS) X G(830 21 DIAS)

-9,400 12,818 p<0,001

CON(14 DIAS) X CON(21 DIAS)

-3,000 4,091 p>0,05

CON(14 DIAS) X G(660 07 DIAS)

-1,200 1,636 p>0,05

CON(14 DIAS) X G(660 14 DIAS)

-2,000 2,727 p>0,05

CON(14 DIAS) X G(660 21 DIAS)

-5,200 7,091 p<0,001

CON(14 DIAS) X G(830 07 DIAS)

-4,400 6,000 p<0,01

CON(14 DIAS) X G(830 14 DIAS)

-4,800 6,545 p<0,01

CON(14 DIAS) X G(830 21 DIAS)

-6,000 8,182 p<0,001

CON(21 DIAS) X G(660 07 DIAS)

-1,800 2,455 p>0,05

CON(21 DIAS) X G(660 14 DIAS)

-1,000 1,364 p>0,05

CON(21 DIAS) X G(660 21 DIAS)

-2,200 3,000 p>0,05

CON(21 DIAS) X G(830 07 DIAS)

-1,400 1,909 p>0,05

CON(21 DIAS) X G(830 14 DIAS)

-1,800 2,455 p>0,05

CON(21 DIAS) X G(830 21 DIAS)

-3,000 4,091 p>0,05

G(660 07 DIAS) X G(660 14 DIAS)

-0,8000 1,091 p>0,05

G(660 07 DIAS) X G(660 21 DIAS)

-4,000 5,455 p<0,05

G(660 07 DIAS) X G(830 07 DIAS)

-3,200 4,364 p>0,05

G(660 07 DIAS) X G(830 14 DIAS)

-3,600 4,909 p<0,05

G(660 07 DIAS) X G(660 21 DIAS)

-4,800 6,545 p<0,01

G(660 14 DIAS) X G(660 21 DIAS)

-3,200 4,364 p>0,05

G(660 14 DIAS) X G(830 07 DIAS)

-2,400 3,273 p>0,05

G(660 14 DIAS) X G(830 14 DIAS)

-2,800 3,818 p>0,05

G(660 14 DIAS) X G(830 21 DIAS)

-4,000 5,455 p<0,05

G(660 21 DIAS) X G(830 07 DIAS)

-0,8000 1,091 p>0,05

G(660 21 DIAS) X G(830 14 DIAS)

-0,4000 0,5455 p>0,05

G(660 21 DIAS) X G(830 21 DIAS)

-0,8000 1,091 p>0,05

G(830 07 DIAS) X G(830 14 DIAS)

-0,4000 0,5455 p>0,05

G(830 07 DIAS) X G(830 21 DIAS)

-1,600 2,182 p>0,05

G(830 14 DIAS) X G(830 21 DIAS)

-1,200 1,636 p>0,05

Resumo dos Dados

Grupos Mínimo Máximo Menor (95%CI) Maior (95%)

CON(07 DIAS) 131 134 130,72 134,48

CON(14 DIAS) 133 139 133,22 138,78

CON(21 DIAS) 137 141 137,04 140,96

G(660 07 DIAS) 136 139 135,84 138,56

G(660 14 DIAS) 136 142 135,09 140,91

G(660 21 DIAS) 140 143 139,58 142,82

G(830 07 DIAS) 139 142 138,98 141,82

G(830 14 DIAS) 139 143 138,7 142,84

G(830 21 DIAS) 140 144 140,24 143,76

APÊNDICE

Tabela 3 - Características técnicas do equipamento “Emissor Visível”

Emissor Visível

Comprimento de Onda – 660nm (típico)

Potência óptica do emissor: 150mW

*Dose 1 J (Joule) Fluência 035J/cm

*Dose 2 J (Joule) Fluência 070J/cm

*Dose 4 J (Joule) Fluência 140/Jcm

Tabela 4 - Características técnicas do equipamento “Emissor Infravermelho”

Emissor Infravermelho

Comprimento de Onda – 810nm (típico)

Potência óptica do emissor: 200mW

*Dose 1 J (Joule) Fluência 035J/cm

*Dose 2 J (Joule) Fluência 070J/cm

*Dose 4 J (Joule) Fluência 140/Jcm

Tabela 5 - Características gerais do aparelho

Tensão de Operação: 90 á 230V

Potência Elétrica: 5W

Condições Ambientais:

Temperatura de 10

á 40

Umidade Relativa de 10% á 75

Pressão Atmosférica de 700hPa – 1060hPa

Acessórios: Óculos de segurança/Base e suporte

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