( PDF ) Estudo dos efeitos comportamentais, neuroquímicos e tóxicos do óleo essencial de Zingiber officinale Roscoe

Download PDF

ads:

UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARÁ

FACULDADE DE MEDICINA

DEPARTAMENTO DE FISIOLOGIA E FARMACOLOGIA

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM FARMACOLOGIA

ESTUDO DOS EFEITOS COMPORTAMENTAIS, NEUROQUÍMICOS E

TÓXICOS DO ÓLEO ESSENCIAL DE Zingiber officinale Roscoe

CÍCERO FRANCISCO BEZERRA FELIPE

Fortaleza-Ce

2004

ads:

Livros Grátis

http://www.livrosgratis.com.br

Milhares de livros grátis para download.

CÍCERO FRANCISCO BEZERRA FELIPE

ESTUDO DOS EFEITOS COMPORTAMENTAIS, NEUROQUÍMICOS E

TÓXICOS DO ÓLEO ESSENCIAL DE Zingiber officinale Roscoe

Fortaleza-Ce

2004

ads:

F353e Felipe, Cícero Francisco Bezerra

Estudo dos efeitos comportamentais, neuroquímicos e tóxicos do

óleo essencial de Zingiber officinale Roscoe/ Cícero Francisco

Bezerra Felipe; orientador: Glauce Socorro de Barros Viana. –

Fortaleza, 2004.

166f. :il.

Dissertação. Universidade Federal do Ceará. Faculdade de

Medicina, 2004.

1. Gengibre – química 2. Memória 3. Escopolamina 4.

Oxotremorina 5. Pilocarpina I.Viana, G.S.B (Orient.) II. Título

CDD: 615.32421

iii

Cícero Francisco Bezerra Felipe

Estudo dos efeitos comportamentais, neuroquímicos e tóxicos do óleo

essencial de Zingiber officinale Roscoe.

Dissertação apresentada à Coordenação do Programa de Pós-graduação

em Farmacologia do Departamento de Fisiologia e Farmacologia da

Faculdade de Medicina da Universidade Federal do Ceará - UFC, como

requisito parcial para a obtenção do título de Mestre em Farmacologia.

Orientadora:

Profa. Dra. Glauce Socorro de Barros Viana

Fortaleza-Ce

2004

Cícero Francisco Bezerra Felipe

Estudo dos efeitos comportamentais, neuroquímicos e tóxicos do óleo

essencial de Zingiber officinale Roscoe.

Dissertação apresentada à Coordenação do Programa de Pós-graduação

em Farmacologia do Departamento de Fisiologia e Farmacologia da

Faculdade de Medicina da Universidade Federal do Ceará - UFC, como

requisito parcial para a obtenção do título de Mestre em Farmacologia.

Data da aprovação: 02 de Fevereiro de 2004.

BANCA EXAMINADORA:

_____________________________________

Profa. Dra. Glauce Socorro de Barros Viana

Orientadora da Dissertação

______________________________________

Profa. Dra. Marta Maria de França Fonteles

Co-orientadora da Dissertação

_____________________________________

Prof. Dr. Carlos Maurício de Castro Costa

Depto. de Fisiologia e Farmacologia - UFC

“Finalmente, irmãos, tudo que é verdadeiro,

tudo o que é respeitável, tudo o que é justo,

tudo o que é puro, tudo o que é amável,

tudo o que é de boa fama, se alguma

virtude há, e se algum louvor existe, seja

isso que ocupe o vosso pensamento.”

Filipenses 4:8

AGRADECIMENTOS

A Deus, por Seu amor incondicional e Sua maravilhosa graça, sem os

quais, a vida não teria sentido;

Aos meus pais, Felipe e Necí, por todo amor, esforço e tempo dedicados

ao longo da minha caminhada;

As minhas irmãs, Aparecida Fátima e Virgínia, pelo carinho e alegria que

transmitem tão espontaneamente;

À Profa. Dra. Glauce Viana, pelo exemplo de profissionalismo e por

acreditar que vale a pena investir e capacitar o futuro pesquisador a

assumir uma postura íntegra e relevante na sociedade;

À Profa. Dra. Marta Fonteles, pelo compromisso, amizade, dedicação e

amor à profissão, ao ensino e à pesquisa;

Ao prof. Dr. Maurício por ter prontamente aceito fazer parte da banca de

avaliação deste trabalho e pelas sugestões apontadas para o

aprimoramento desta dissertação;

À Profa. Dra. Maria Goretti, pelo apoio e incentivo demonstrados antes,

durante e depois do meu ingresso no mestrado;

À Profa. Dra. Geanne Matos, por sua grande amizade e por ter aceitado o

convite de fazer parte da banca do meu exame de qualificação;

vii

Ao Prof. Dr. Manoel Andrade, por ter disponibilizado parte do seu tempo

para contribuir com a realização deste trabalho;

Ao Iri Sandro, pela valiosa amizade e por estar sempre disposto a ajudar;

À Lissiana Magna, por seu jeito meigo e carinhoso e por ser uma grande

amiga, a quem tenho grande estima, carinho e admiração;

À Danielle Silveira, outra grande amiga a quem sou bastante grato pela

ajuda e companheirismo demonstrados durante a execução deste

trabalho;

Às amigas Silvânia Vasconcelos e Kalyne Leal pela valiosa contribuição

e apoio no meu processo de aprendizado no dia-a-dia do laboratório;

Aos amigos Aline, Emanuelle, Flávio, Gislei, Juvênia, Lyvia, Patrícia e

Rivelilson, pelo companheirismo e amizade cultivados durante os dias de

aprendizado;

Aos bolsistas Kamyla Sales, André Luiz, Emídio Alves e Norberto, pela

preciosa ajuda e empenho prestados para a realização deste trabalho;

Ás técnicas Vilaní e Jacqueline, pela seriedade, zelo e profissionalismo

em tudo que fazem;

À Dra. Artemiza, pela sua atenção e por ter disponibilizado os animais

utilizados neste trabalho;

viii

Ao Laboratório de Neurofarmacologia, pela receptividade junto à

excelente equipe de profissionais que fazem desse laboratório um

referencial de seriedade, qualidade e compromisso com a pesquisa;

Ao CNPq, pelo apoio financeiro, sem o qual seria impossível a realização

deste trabalho.

SUMÁRIO

LISTA DE FIGURAS xiii

LISTA DE TABELAS xvi

LISTA DE ABREVIATURAS xviii

RESUMO xix

ABSTRACT xxii

1. INTRODUÇÃO 01

1.1.GENERALIDADES 01

1.2. ZINGIBER OFFICINALE ROSCOE (GENGIBRE) 04

• Historico

• Aspectos botânicos

• Aspectos químicos

• Aspectos farmacológicos

• Aspectos toxicológicos

2. OBJETIVOS

3. MATERIAIS E MÉTODOS 29

3.1. ANIMAIS 29

3.2. DROGAS 29

3.3. ESTUDO DOS EFEITOS COMPORTAMENTAIS DO OEG 31

• Procedimento experimental

• Teste do labirinto em cruz elevado (avaliação da

atividade ansiolítica)

• Teste do campo aberto (avaliação da atividade

locomotora)

• Teste do rota rod (avaliação da coordenação motora)

• Teste da esquiva-passiva (avaliação da memória

recente e tardia)

• Teste dos tremores induzidos por oxotremorina

(avaliação dos efeitos colinérgicos)

3.4. ESTUDO DOS EFEITOS NEUROQUÍMICOS DO OEG 43

• Método da cromatografia líquida de alta eficiência

(CLAE)

• Procedimento experimental

• Soluções reagentes

3.5. ESTUDO DOS EFEITOS TÓXICOS DO OEG 48

• Avaliação dos efeitos gerais (teste hipocrático) e da

toxicidade do OEG

•

valiação do OEG sobre a função hepática de ratios

tratados com tetracloreto de carbono (CCl4)

• Determinação da concentração de bilirrubina

• Determinação da atividade das enzimas alanina

transaminase (ALT/TGP) e aspartato transaminase

(AST/TGO)

• Determinação da enzima fosfatase alcalina (FA)

3.6. ANÁLISE ESTATÍSTICA 57

4. RESULTADOS 58

4.1. ESTUDO DOS EFEITOS COMPORTAMENTAIS DO OEG 58

• Teste do labirinto em cruz elevado (avaliação da

atividade ansiolítica)

• Teste do campo aberto (avaliação da atividade

locomotora)

• Teste do rota rod (avaliação da coordenação motora)

• Teste da esquiva-passiva (avaliação da memória

recente e tardia)

• Teste dos tremores induzidos por oxotremorina

(avaliação dos efeitos colinérgicos)

4.2. ESTUDO DOS EFEITOS NEUROQUÍMICOS DO OEG 81

• Determinação da concentraçãodas monoaminas e seus

metabólitos em hipocampo e corpo estriado de

camundongos

4.3. ESTUDO DOS EFEITOS TÓXICOS DO OEG 84

• Avaliação dos efeitos gerais (teste hipocrático) e da

toxicidade do OEG

• Avaliação do OEG sobre a função hepática de ratios

tratados com tetracloreto de carbono (CCl4)

5. DISCUSSÃO 91

5.1. ESTUDO DOS EFEITOS COMPORTAMENENTAIS E

NEUROQUÍMICOS DO OEG

5.2. ESTUDO DOS EFEITOS TÓXICOS DO OEG

105

6. CONCLUSÕES

111

xii

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 114

xiii

LISTA DE FIGURAS

INTRODUÇÃO

Figura 1.2.1.

Aspectos botânicos de Zingiber officinale

Roscoe.

Figura 1.2.2.

Cromatograma do óleo essencial extraído do

gengibre (Zingiber officinale Roscoe)

proveniente do município de Baturité – Ce.

Figura 1.2.3.

Estruturas químicas dos principais

componentes do óleo essencial do gengibre

(Zingiber officinale Roscoe) proveniente do

município de Baturité – Ce.

MATERIAIS E MÉTODOS

Figura 3.3.1.

Labirinto em Cruz Elevado (LCE). 35

Figura 3.3.2.

Campo aberto (CA). 37

Figura 3.3.3.

Rota rod (RR). 39

Figura 3.3.4.

Esquiva-passiva (EP).

Figura 3.4.1.

Aparelho de cromatografia líquida de alta

eficiência –CLAE.

RESULTADOS

Figura 4.1.1.

Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, i.p.) em

camundongos submetidos ao teste do campo

aberto (NC).

Figura 4.1.2.

Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, i.p.) em

camundongos submetidos ao teste do campo

xiv

aberto (NG).

Figura 4.1.3.

Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, i.p.) em

camundongos submetidos ao teste do campo

aberto (NR).

Figura 4.1.4.

Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, v.o.) em

camundongos submetidos ao teste do campo

aberto (NC).

Figura 4.1.5.

Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, v.o.) em

camundongos submetidos ao teste do campo

aberto (NG).

Figura 4.1.6. Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, v.o.) em

camundongos submetidos ao teste do campo

aberto (NR).

Figura 4.1.7.

Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, i.p.) em

camundongos submetidos ao teste da esquiva

passiva (Esquiva 15 min).

Figura 4.1.8.

Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, i.p.) em

camundongos submetidos ao teste da esquiva

passiva (Esquiva 24 h).

Figura 4.1.9.

Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, v.o.) em

camundongos submetidos ao teste da esquiva

passiva (Esquiva 15 min).

Figura 4.1.10.

Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, v.o.) em

camundongos submetidos ao teste da esquiva

passiva (Esquiva 24 h).

Figura 4.1.11.

Efeito do OEG (50 e 100 mg/Kg, i.p.) sobre os

tremores induzidos por oxotremorina em

camundongos.

Figura 4.3.1.

Efeito do OEG (50, 100 e 200 mg/Kg, i.p.)

sobre a concentração plasmática de bilirrubina

em ratos tratados com tetracloreto de carbono

(CCl4).

Figura 4.3.2.

Efeito do OEG (50, 100 e 200 mg/Kg, i.p.)

sobre a atividade da enzima ALT/TGP em soro

de ratos tratados com tetracloreto de carbono

(CCl4).

Figura 4.3.3. Efeito do OEG (50, 100 e 200 mg/Kg, i.p.)

sobre a atividade da enzima AST/TGO em

soro de ratos tratados com tetracloreto de

carbono (CCl4).

xvi

LISTA DE TABELAS

INTRODUÇÃO

Tabela 1.2.1.

Identificação e valores percentuais dos

principais constituintes químicos presentes no

óleo essencial de gengibre (Zingiber officinale

Roscoe), proveniente do município de Baturité -

Ce.

Tabela 1.2.2.

Concentração de minerais presentes no rizoma

do gengibre (Zingiber officinale Roscoe).

Tabela 1.2.3.

Perfil fitoquímico dos constituintes presentes no

rizoma do gengibre (Zingiber officinale Roscoe)

proveniente do município de Baturité - Ce.

MATERIAIS E MÉTODOS

Tabela 3.3.1.

Padrão de administração das drogas ao longo

dos oito dias de tratamento.

RESULTADOS

Tabela 4.1.1.

Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, i.p.) em

camundongos submetidos ao teste do labirinto

em cruz elevado.

Tabela 4.1.2.

Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, v.o.) em

camundongos submetidos ao teste do labirinto

em cruz elevado.

Tabela 4.1.3.

Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, i.p.) em

camundongos submetidos ao teste do rota rod.

xvii

Tabela 4.1.4.

Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, v.o.) em

camundongos submetidos ao teste do rota rod.

Tabela 4.2.1.

Efeito do OEG (100 mg/Kg, i.p.) sobre a

concentração das monoaminas e seus

metabólitos em hipocampo e corpo estriado de

camundongos.

Tabela 4.3.1.

Efeito do OEG (50, 100 e 200 mg/Kg, i.p.) sobre

a atividade da enzima fosfatase alcalina em

soro de ratos tratados com tetracloreto de

carbono (CCl4).

xviii

LISTA DE ABREVIATURAS

ANOVA- Análise de Variância

AMPC- Adenosina Monofosfato Cíclico

ALT- Alanina Transaminase

AST- Aspartato Transaminase

CA- Campo Aberto

DA- Dopamina

DOPAC- Ácido 3,4-diidroxifenilacético

EP- Esquiva-passiva

GABA- Ácido Gama Aminobutírico

HPLC- High Performance Liquid Cromatography

HVA- Ácido Homovanílico

IP- Intraperitoneal

RR- Rota Rod

LCE- Labirinto em Cruz Elevado

NC- Número de Cruzamentos

NG- Número de Grooming

NR- Número de Rearing

NE - Norepinefrina

OEG- Óleo Essencial de Gengibre

USA- United States of América

VO- Via Oral

5HT- 5-hidroxitriptamina

5HIAA- 5-hidroxiindolacético

xix

RESUMO

ESTUDO DOS EFEITOS COMPORTAMENTAIS, NEUROQUÍMICOS E

TÓXICOS DO ÓLEO ESSENCIAL DE Zingiber officinale Roscoe.

CÍCERO FRANCISCO BEZERRA FELIPE. Orientadora: Dra. Glauce

Socorro de Barros Viana. Dissertação de Mestrado. Programa de

Pós-graduação em Farmacologia. Departamento de Fisiologia e

Farmacologia - UFC.

O Gengibre (Zingiber officinale Roscoe) é uma planta bastante apreciada

em todo o mundo, não apenas como um condimento, mas também por

suas importantes propriedades medicinais. Os efeitos comportamentais e

neuroquímicos do óleo essencial do gengibre - OEG foram estudados em

camundongos tratados diariamente com o óleo essencial de gengibre

(OEG 25, 50 e 100 mg/Kg, i.p. e v.o.). No sétimo dia de tratamento foram

realizados os testes do labirinto em cruz elevado (LCE), campo aberto

(CA), rota rod (RR), esquiva-passiva (EP) e teste dos tremores induzidos

por oxotremorina. No oitavo dia do protocolo, os animais que receberam

OEG (100 mg/Kg, i.p.) foram sacrificados para o estudo dos efeitos

neuroquímicos do OEG em hipocampo e corpo estriado. Os efeitos

tóxicos do OEG foram estudados em camundongos (tratados com única

administração de OEG 200, 400 e 800 mg/Kg, i.p.) e ratos (nos quais foi

induzida lesão hepática por CCl4, e tratados com OEG 50, 100 e 200

mg/Kg, i.p. em única administração). Os resultados mostraram que o

OEG não possui efeito ansiolítico de acordo com o modelo do LCE; no

CA, o OEG (50 e 100 mg/Kg, i.p.) apresentou efeito sedativo ao reduzir o

NC, o NG e NR em 37%, 28% e 75%, respectivamente. Foi observada,

também, a ocorrência de efeito dose-dependente da droga, cujo efeito

máximo parece ser obtido com a dose de 100 mg/Kg (i.p.). A

administração oral do OEG também produziu sedação, porém o efeito só

foi observado no grupo tratado com a dose maior do óleo essencial. No

modelo do RR, o OEG não produziu alteração significativa na

coordenação motora dos animais tratados. No modelo da EP, o OEG

produziu um dano cognitivo nos animais tratados com a dose de 100

mg/Kg, i.p. e v.o. Mesmo após 24 horas da administração da droga, o

dano ainda era evidente. Quando associado à escopolamina, o OEG (50

e 100 mg/Kg, i.p. e v.o.) potencializou o efeito amnésico da droga. O

efeito anticolinérgico do OEG (100 mg/Kg, i.p.) foi comprovado ao

reverter os tremores induzidos por oxotremorina em camundongos. Em

relação aos efeitos neuroquímicos do OEG em corpo estriado, a droga

diminuiu a concentração de DA, aumentou NE, DOPAC e 5HT em 40%,

22%, 15% e 81%, respectivamente. No hipocampo observou-se que

houve uma diminuição de DA, DOPAC e um aumento de 5HT em 75%,

xxi

64% e 81%, respectivamente. A diminuição de DA no corpo estriado

explicaria o efeito sedativo da droga, e o conjunto de alterações

observadas no hipocampo parece contribuir também para o efeito

amésico do OEG. O estudo dos efeitos tóxicos do OEG revelou que a

droga é relativamente segura e destituída de efeitos tóxicos significativos

nos protocolos utilizados no presente estudo. A administração aguda do

óleo essencial (200, 400 e 800 mg/Kg, i.p.) não produziu outro efeito

sobre os animais, a não ser a sedação, efeito já observado com doses

menores do óleo essencial. A administração diária do OEG também não

produziu efeitos tóxicos além de diarréia observada nos animais tratados

com a droga nas doses de 50 e 100 mg/Kg, i.p. e v.o. O OEG (200

mg/Kg, i.p.) mostrou-se efetivo ao reverter a lesão hepática induzida por

CCl4 em ratos. O tratamento com o óleo essencial na dose de 200

mg/Kg, i.p. reduziu em 35% e 23% a atividade das enzimas ALT e AST,

respectivamente. O OEG parece exercer a ação hepatoprotetora ao

combater a peroxidação lipídica gerada pelo metabolismo hepático do

CCl4 que produz radicais livres, altamente lesivos.

Palavras-chave: Zingiber officinale Roscoe, memória, escopolamina,

oxotremorina e pilocarpina.

xxii

ABSTRACT

xxiii

STUDY OF THE BEHAVIORAL, NEUROCHEMICAL AND TOXIC

EFFECTS FROM THE ESSENTIAL OIL OF Zingiber officinale Roscoe.

CÍCERO FRANCISCO BEZERRA FELIPE. Supervisor: Dr. Glauce

Socorro de Barros Viana. Master degree’s thesis. Graduation

program in Pharmacology. Department of Phisiology and

Pharmacology - UFC.

Ginger (Zingiber officinale Roscoe) is a plant largely used around the

world, not just as a spice, but also for its medicinal properties. The

behavioral and neurochemical effects were studied in mice daily

administered with the essential oil of Ginger (EOG 25, 50 e 100 mg/Kg,

i.p. and p.o.). In the 7th day of treatment, it was assessed the elevated-

plus maze (EPM), open field (OF) rota rod (RR), passive avoidance (PA)

and oxotremorine-induce tremor tests, to evaluate the behavioral effects

of the drug. In the 8th day of the protocol, mice that received EOG (100

mg/Kg, i.p.) were killed to study the neurochemical effects of EOG on

hipoccampus and striatum. Toxic effects of EOG were studied in mice

(that received a single administration of EOG 200, 400 e 800 mg/Kg, i.p.),

and rats (with hepatic injury induced by CCl4, and treated with EOG 50,

100 e 200 mg/Kg, i.p. in a single administration). Results showed that

OEG does not have anxiolytic effects on EPM test; in OF test, EOG (50 e

100 mg/Kg, i.p.) showed a sedative effect, decreasing the number of

crossings, grooming and rearing in 37%, 28% and 75%, respectively, with

OEG 100 mg/Kg. It was also observed a dose-dependent effect of the

drug, which maximum effect observed with 100 mg/Kg (i.p.) of the drug.

The oral administration of EOG also induced a sedative effect, occuring

only in the group treated with the highest dose of the essential oil. In RR

test, EOG did not induce any significant alteration on motor coordination

of the animals. In PA test, EOG produced a cognitive impairment in

animals treated with EOG100 mg/Kg, i.p. and p.o. Even 24h after the drug

administration, the cognitive impairment was still evident. When

associated with scopolamine, EOG (50 e 100 mg/Kg, i.p. and p.o.)

potentiated the amnesic effect of scopolamine. The anticholinergic effect

of EOG (100 mg/Kg, i.p.) was proved to reverse the tremors induced by

oxotremorine in mice. EOG, in striatum decreased DA and increased the

concentrations of DOPAC, NE and 5HT in 40%, 15%, 22% and 81%,

respectively. In hippocampus, OEG decreased DA, DOPAC and

increased 5HT in 75%, 64% e 81%, respectively. The decrease of DA in

striatum justifies the sedative effect of the drug and the aterations

observed on hipoccampus seem to contribute to the amnesic effect of

EOG. The study of toxic effects of EOG showed that the drug is relatively

xxiv

safe and it does not have any toxic effects, according to the protocols

established in the present work. The acute administration of the essential

oil (200, 400 and 800 mg/Kg, i.p.) did not induce any other toxic effect

besides sedation. The daily administration of EOG did not produce any

toxic effect, besides the diarrhea, observed in animals that received EOG

50 and 100 mg/Kg, i.p. and p.o. EOG (200 mg/Kg, i.p.) was effective in

reversing the hepatic injury induced by CCl4 in rats. The treatment with

the essential oil (200 mg/Kg, i.p.) reduced in 35% and 23% the activity of

the enzymes ALT and AST, respectively. EOG seems to exert its

hepatoprotective action by decreasing lipid peroxidation generated by the

hepatic metabolism of CCl4, wich produces extremely danous free

radicals.

Key words: Zingiber officinale Roscoe, memory, scopolamine,

oxotremorine and pilocarpine.

1. INTRODUÇÃO

1.1. GENERALIDADES:

Dentre todas as terapias complementares disponíveis, a

fitoterapia (a prática do uso de plantas medicinais com finalidade

terapêutica) vem-se impondo atualmente e já não pode ser mais

considerada como simples modismo (Ávila et al., 1999). Segundo

Oliveira & Akisue (1998), planta medicinal é todo vegetal que contém

em um ou vários de seus órgãos, substâncias que podem ser

empregadas para fins terapêuticos ou precursores de substâncias para

tais fins.

As drogas de origem natural têm sido usadas desde a

antiguidade como remédios para o tratamento de uma série de

doenças. Apesar dos grandes avanços observados na medicina

moderna nas últimas décadas, as plantas ainda apresentam

importante contribuição à saúde da população. Desde a década

passada, o interesse em drogas derivadas de plantas, especialmente

os fitoterápicos, tem aumentado expressivamente. Estima-se que

cerca de 25% de todos os medicamentos modernos são direta ou

indiretamente derivados de plantas (Cragg et al., 1997; De Smet et al.,

1997; Shu, 1998). Atualmente, as principais companhias farmacêuticas

têm demonstrado grande interesse em investigar as plantas medicinais

como princípios para novas drogas, bem como para o

desenvolvimento de agentes fitoterápicos padronizados com eficácia,

segurança e qualidade comprovadas (Blumenthal, 1999; De Smet et

al., 1997).

Comparados com os medicamentos sintéticos, os fitoterápicos

possuem algumas diferenças bem claras (Calixto, 2000):

O(s) princípio(s) ativo(s) são por vezes desconhecidos;

1. INTRODUÇÃO

• Controle de qualidade e estabilidade é possível, mas não

facilmente realizáveil;

• Estudos toxicológicos e farmacológicos clínicos são

relativamente poucos;

• São amplamente utilizados pela população em geral;

• Possuem um amplo espectro de indicações terapêuticas e são

úteis no tratamento crônico;

• A ocorrência de efeitos colaterais parece ser menos freqüente

com os fitoterápicos, porém estudos bem controlados têm

revelado que eles também ocorrem;

• Possuem em geral menor custo em relação aos medicamentos

sintéticos.

As preparações medicinais à base de plantas são normalmente

muito populares nos países em desenvolvimento que possuem uma

longa tradição no uso destes vegetais, bem como em alguns países

desenvolvidos (Blumenthal et al., 1998; Grunwald, 1995; Roberts et al.,

1998). Na Europa, com o avanço dos métodos analíticos, o controle de

qualidade de drogas vegetais usadas no sistema alopático de

medicina tem-se tornado bem estabelecido e padronizado. Em países

como a Alemanha, estão oficializadas em torno de 300 monografias

publicadas pela Commision E, relacionando sobre cada planta,

nomenclatura, composição química, indicações, contra-indicações,

efeitos colaterais, interação medicamentosa, dosagem, ações

farmacológicas, farmacocinética e toxicologia (Blumenthal, 1999).

Desde 1980, mais de 300 estudos clínicos têm sido realizados com

fitoterápicos padronizados, incluindo Ginkgo, Hypericum, Kava-kava e

outros (Wagner, 1999).

1. INTRODUÇÃO

Apesar da sua imensa flora, aspectos culturais e o grande uso

de ervas medicinais, ainda são poucos os esforços feitos no Brasil

para estabelecer a qualidade, segurança e eficácia desses produtos.

Em 1994, o Ministério da Saúde criou uma comissão para avaliar a

situação dos agentes fitoterápicos no país. A comissão propôs uma

diretriz baseada, principalmente, nos regulamentos francês e alemão

(Calixto, 2000). Atualmente, os medicamentos fitoterápicos, no Brasil,

devem ser preparações padronizadas e, segundo a RDC N° 17,

24/02/2000, devem ser obtidos por processos tecnologicamente

adequados, empregando-se exclusivamente matérias-primas vegetais,

com finalidade profilática, curativa, paliativa ou para fins de

diagnóstico, devendo ser caracterizados pelo conhecimento da

eficácia e dos riscos de seus usos, assim como pela reprodutibilidade

e constância de suas qualidades. Não se considera medicamento

fitoterápico aquele que na sua composição, inclua substâncias ativas

isoladas, de qualquer origem, nem as associações destas com

extratos vegetais.

Indiscutivelmente o reino vegetal tem contribuído com inúmeras

substâncias bioativas, o que justifica o número crescente de plantas

que vêm sendo investigadas quanto a suas possíveis propriedades

farmacológicas (Evans, 1996). O organismo vegetal pode ser

considerado um laboratório biossíntético não só no que se refere aos

compostos químicos (carboidratos, proteínas e gorduras) utilizados

como alimentos pelos seres humanos e outros animais, mas também

no que se refere a uma infinidade de compostos, incluido cumarinas,

flavonóides, taninos, saponinas, alcalóides, terpenóides e ácidos

fenólicos, que representam o grupo de metabólitos secundários, que

são, em geral, responsáveis pelas ações biológicas da planta

(Bruneton, 1999; Robbers et al., 1997).

1. INTRODUÇÃO

1.2. ZINGIBER OFFICINALE ROSCOE (GENGIBRE):

• Histórico:

Os efeitos terapêuticos do gengibre são reconhecidos há

milhares de anos. O gengibre tem um papel importante na medicina

popular tradicional em várias partes do mundo, sendo mencionado,

inclusive, em certas escrituras religiosas. Por volta do ano 2000 a.C., a

literatura védica da Índia já mencionava o uso de vários condimentos e

suas respectivas indicações terapêuticas. Esta tradicional forma de

medicina, denominada medicina Ayurvedica, ainda é sistematicamente

e fielmente praticada na Índia (Lawless, 1995), na qual utiliza o

gengibre como remédio caseiro para o tratamento de problemas

pediátricos como a tosse por exemplo (Kapil et al., 1990; Mishra et al.,

1994).

O gengibre é uma planta altamente valorizada e estimada na

China, onde seus usos são diversos, seja na culinária chinesa, ou em

cerimônias religiosas (Ghazanfar, 1994). Na China e Japão, o gengibre

é um ingrediente bastante utilizado para o tratamento de desordens

gastrointestinais, hepáticas e para o tratamento da hipertensão arterial

(Iwu, 1993).

O mundo árabe há muito tempo reconhece as vantagens do uso

do gengibre o qual é utilizado como remédio para constipação, catarro,

acidez do estômago, bronquite e catarata. O suco do extrato do

gengibre é usado algumas vezes até como colírio, e o chá, como um

tônico geral. Acredita-se também no uso do gengibre como um

afrodisíaco (Ghazanfar, 1994). A medicina popular africana também

1. INTRODUÇÃO

valoriza bastante o uso deste rizoma como composto

carminativo, diurético e antiemético (Iwu, 1993).

Foi no primeiro século d.C. que os negociantes europeus

introduziram o gengibre na região do mediterrâneo, o qual chegou à

Inglaterra por volta do século 11 d.C. Logo após a conquista

espanhola, o gengibre foi introduzido nas Índias Ocidentais e México

pelos espanhóis e, a partir de então, foi comercializado e consumido

no mundo inteiro (The New Encyclopedia Brittanica, 1991). A

introdução do gengibre no Brasil é atribuída, por alguns autores, aos

holandeses (Corrêa, 1926).

• Aspectos botânicos:

Plantas aromáticas são definidas como vegetais que

apresentam algum tipo de aroma, caracterizado pela presença de

componentes voláteis, como os óleos essenciais. Várias plantas

aromáticas podem ser encontradas crescendo livremente ou cultivadas

desde o litoral e montanhas até o interior do nordeste do Brasil.

Algumas dessas plantas são espécies exóticas trazidas da Europa,

África e Ásia ao Brasil durante o período colonial, sendo cultivadas

atualmente para o uso como preparações medicinais caseiras (Matos

et al., 1999).

Zingiber officinale Roscoe (Figura 1.2.1a e 1.2.1b), membro da

família Zingiberaceae, apresenta-se como uma erva de rizoma perene,

reptante, articulado, anguloso e muito ramoso, de 1-2cm de

espessura, ligeiramente achatado, carnoso, revestido de epiderme

rugosa, amarelada ou pardacenta, tendo na parte superior, pequenos

1. INTRODUÇÃO

tubérculos anelados e muito aproximados, resultantes da base

dos antigos caules aéreos, e na parte inferior numerosas raízes

adventíceas, cilíndricas, brancas e carnosas (Figura 1.2.1c); os caules

são eretos, de 30-120cm de altura, guarnecidos de bastante folhas

dísticas, sendo as basilares reduzidas a simples bainhas glabras e

estriadas no sentido longitudinal; as bainhas superiores, amplexicaules

na base, terminam com um limbo séssil, linear, lanceolado,

acuminado, até 28cm de comprimento e 3cm de largura, com

numerosas punctuações translúcidas e as nervuras secundárias finas,

aproximadas e paralelas, partindo da nervura média e dirigindo-se

muito obliquamente para o ápice do limbo, sendo que no ponto de

junção deste com a bainha há uma língua bífida prolongada

lateralmente em duas aurículas; flores verde-amareladas ,

hermafroditas, zigomorfas, dispostas em espigas ovóides ou

elipsóides, de 4-6cm, no ápice dos escarpos ou pedúnculos de 15-

20cm, emitidos diretamente dos rizomas, revestidos, como as próprias

espigas, por grandes escamas invaginantes e imbricadas , obtusas,

decrescentes na base para o ápice; brácteas florais suborbiculares, às

vezes obovadas, até 25mm, esverdeadas, frequentemente com

margens as amareladas, punctuadas de roxo, cada uma envolvendo

uma só flor, curto-pedicelada; cálice de 1cm, 3 denteado, corola com

tubo de 2cm e lobos lanceolados, agudos; labelo ovado-oblongo,

purpúreo e com punctuações amarelas, mais curtos que os lobos da

corola; fruto cápsula 3-locular, abrindo-se em três valvas; sementes

azuladas e com albúmen carnoso (Corrêa, 1926).

1. INTRODUÇÃO

Figura 1.2.1. Aspectos botânicos de Zingiber officinale Roscoe.

As figuras a e b mostram um exemplar de Zingiber officinale Roscoe,

onde podem ser observados os componentes aéreos (caule, folhas e

flores) do vegetal; a figura c apresenta mais detalhadamente o rizoma

da planta. As ilustrações foram retiradas, respectivamente, dos

seguintes sites:

http://www.healathsma.com

http://www.dominioherbal.com

http://www.agriculture-industry-india.com

1. INTRODUÇÃO

• Aspectos químicos:

Purseglove (1972) afirma que o gengibre apresenta suas

propriedades organolépticas características em função de duas

principais classes de constituintes químicos: os constituintes voláteis,

presentes no óleo essencial, e os não voláteis.

Os óleos essenciais, também conhecidos como óleos etéreos ou

voláteis, são essências aromáticas concentradas que conferem

proteção à planta. Esses óleos são uma mistura de vários

componentes que podem ser encontrados nas mais variadas partes

das plantas, tais como nos brotos florais, folhas, casca, sementes,

lenho e raízes. Destas partes, os óleos essenciais podem ser

extraídos especialmente por destilação, mas também por outros

processos. Os componentes químicos dos óleos essenciais são

geralmente mono e sesquiterpenos e seus derivados, ésteres, álcoois,

aldeídos, cetonas e fenóis. Devido à diversidade da composição

química, estes compostos podem apresentar diferentes efeitos e

indicações terapêuticas. Dentre os hidrocarbonetos, existem as de

cadeias alifáticas, tais como os hidrocarbonetos mono e

sesquiterpenos, que são anti-sépticos e bactericidas, analgésicos,

antiinflamatórios, tranquilizantes e hipotensores. Os diterpenos são

expectorantes, e purgativos, enquanto alguns outros são anti-fúngicos

anti-virais e estimulantes. Estes compostos são geralmente atóxicos e

não causam reação cutânea (Matos et al., 1999).

Os constituintes voláteis presentes no rizoma do gengibre são

responsáveis por seu aroma característico, o qual é descrito como

doce, caloroso, delicado e cítrico (Van Beek et al., 1987). Os principais

constituintes do óleo essencial são os hidrocarbonetos

1. INTRODUÇÃO

sesquiterpenos: zingibereno (35%, sendo o mais abundante) e

farneseno (10%). Bisaboleno e β-sesquifelandreno contribuem com

uma menor parte desses constituintes. Os hidrocarbonetos

monoterpenos, encontrados em quantidades menores, ocorrem em

muitas formas: 1,8-cineol, linalol, borneal, neral e geraniol (Andrews et

al., 1995; Govindarajan, 1982).

Existem diferenças substanciais na composição de óleos

extraídos de rizomas cultivados em regiões diferentes ou até em uma

mesma região (Van Beek et al., 1987). A análise química do óleo

essencial do gengibre proveniente do município de Baturité - Ce é

mostrada nas figuras 1.2.2 e 1.2.3 e tabela 1.2.1. A análise dos

constituintes químicos do OEG foi realizada no Parque de

Desenvolvimento Tecnológico (PADETEC) da Universidade Federal do

Ceará. O procedimento empregou um cromatógrafo Gás-líquido

acoplado a Espectrômetro de Massa; a identificação dos constituintes

químicos foi feita por pesquisa em espectroteca, comparação visual

com espectros da literatura (Adams, 1989) e determinação dos Índices

de Kovats simulados (Alencar et al., 1990).

Os principais constituintes químicos não voláteis encontrados no

rizoma do gengibre são os gingeróis, os quais formam uma família de

compostos homólogos, diferenciados entre si pelo número de átomos

de carbono em sua cadeia lateral: 10, 12 e 14 átomos de carbono dão

origem ao [6]-, [8]- e [10]-gingerol, respectivamente, sendo o [6]-

gingerol o composto mais abundantemente encontrado. A

desidratação dos compostos ora citados origina [6]-, [8]- e [10]-shogaol

(Govindarajan, 1982). Além destes constituintes químicos, a

composição remanescente do gengibre inclui gorduras (~7%), fibras

(~2-4%), carboidratos, cêras, vitaminas e minerais (Tabela 1.2.2.)

1. INTRODUÇÃO

(Afzal et al., 2001). Uma análise fitoquímica realizada no Laboratório

de Farmacognosia do Departamento de Farmácia, da Faculdade de

Farmácia, Odontologia e Enfermagem da Universidade Federal do

Ceará (dados não publicados) mostrou a presença de outros

componentes químicos com conhecidas atividades farmacológicas.

Tais componentes são apresentados na tabela 1.2.3.

1. INTRODUÇÃO

Figura 1.2.2. Cromatograma do óleo essencial extraído de gengibre

(Zingiber officinale Roscoe) proveniente do município de Baturité - Ce.

O cromatograma acima consiste no registro dos principais

constituintes químicos presentes no óleo essencial do gengibre. A

técnica utilizada permite a separação, identificação e quantificação de

cada um dos componentes existentes no óleo essencial extraído dos

rizomas da planta.

1. INTRODUÇÃO

Figura 1.2.3. Estruturas químicas dos principais componentes do óleo

essencial de Zingiber officinale Roscoe.

A figura mostra as estruturas químicas de alguns dos constituintes do

óleo essencial do gengibre apresentados na tabela 1.2.1.

Fonte: Afzal et al., 2001.

Neral

Geranial Geraniol Acetato de Geranil

Linalol

Acetato de Citronil α-terpineol

Borneol

α-curcumeno

(-) Zingibereno

Acetato de Bornil

β-felandreno

β-bisaboleno

β-sesquifelandreno

Neral

Geranial Geraniol Acetato de Geranil

Linalol

Acetato de Citronil α-terpineol

Borneol

α-curcumeno

(-) Zingibereno

Acetato de Bornil

β-felandreno

β-bisaboleno

β-sesquifelandreno

1. INTRODUÇÃO

Tabela 1.2.1. Identificação e valores percentuais dos principais

constituintes químicos presentes no óleo essencial de gengibre

(Zingiber officinale Roscoe), proveniente do município de Baturité - Ce.

Constituinte I Kovak %

Canfeno 937 1,17

Benzaldeído 954 1,04

Beta-mirceno 977 0,83

Delta-9-careno 998 0,56

Beta-felandreno 1011 3,56

1,8-cineol 1013 2,78

Alfa-terpinoleno 1089 1,75

Citronelal 1142 0,53

Endo-borneol 1156 3,12

Alfa-terpineol 1182 1,48

Z-citral 1243 10,9

E-citral 1278 12,23

2-undecanona 1292 0,89

Propionato de citronelila 1352 0,37

Alfa-copaeno 1366 0,41

Formiato de geranila 1385 2,07

Z,E-alfa-farneseno 1426 0,37

Trans-cariofileno 1449 0,44

Zingibereno 1495 18,39

Farneseno 1507 12,5

Beta-sesquifelandreno 1521 10,08

E-farneseno 1543 0,84

Nerolidol 1553 1,05

Trans-beta-farneseno 1575 0,69

Beta-farneseno 1597 0,98

Beta-eudesmol 1627 0,46

1. INTRODUÇÃO

Tabela 1.2.2. Concentração de minerais presentes no rizoma de

gengibre (Zingiber officinale Roscoe).

Elemento Concentração

µg/g (peso seco)

0,89 (± 0,02)

358 (± 10)

145 (± 9)

Co*

18 (± 2)

28,2 (± 2)

443 (± 13)

129000 (± 1100)

As*

12 (± 10)

0,31 (± 0,02)

Hg*

6,0 (± 1)

Sb*

39 (± 3)

579 (± 23)

2,1 (± 0,2)

0,07 (± 0,003)

2,7 (± 0,6)

Cs*

24 (± 2)

Sc*

42 (± 4)

Eu*

44 (± 3)

* Concentração em ng/g (Afzal et al., 2001)

1. INTRODUÇÃO

Tabela 1.2.3. Perfil fitoquímico dos constituintes presentes no rizoma

de gengibre (Zingiber officinale Roscoe) proveniente do município de

Baturité - Ce.

Constituintes Resultado

Alcalóides Positivo

Flavonóides Positivo

Digitálicos Negativo

Saponinas Positivo

Taninos Catéquicos Positivo

Taninos Pirogálicos Negativo

1. INTRODUÇÃO

• Aspectos farmacológicos:

Os princípios ativos presentes no gengibre parecem estar

representados pelos constituintes voláteis (cujos principais

componentes são os sesquiterpenos bisaboleno, zingibereno e

zingiberol) e não voláteis (gingeróis) os quais possuem uma variedade

de efeitos fisiológicos (Connell et al., 1969; Govindarajan, 1982; Newall

et al., 1996; Yoshikawa et al., 1993).

Já é bem conhecido que vários compostos presentes no

gengibre possuem efeitos inibitórios sobre a síntese de

prostaglandinas e leucotrienos através da inibição direta da

prostaglandina sintetase e 5-lipoxigenase. Gingeróis, shogaóis e várias

gingerodionas são particularmente ativos (Kiuchi et al., 1992). Os

níveis de tromboxano que contribuem para a agregação plaquetária

são também reduzidos pelo consumo do gengibre (Srivastava, 1986).

De acordo com (Backon, 1986; Srivastava, 1984; Srivastava, 1986)

extratos obtidos do gengibre inibem a produção da ciclooxigenase

plaquetária, a geração de tromboxano e a agregação plaquetária, de

maneira dose-dependente. O gingerol também é capaz de inibir a

agregação plaquetária mediada por tromboxano (Guh et al., 1995). O

tromboxano A2, um composto com atividade pró-agregante, é

fortemente inibido com um pequeno volume do extrato aquoso do

gengibre. Este fenômeno é acompanhado pela redução da síntese de

endoperóxidos e prostaglandinas, de maneira dose-dependente

(Srivastava, 1984).

O uso do gengibre tem sido sugerido para o tratamento da

doença de Kawasaki. Esta doença é uma síndrome mucocutânea dos

nódulos linfáticos com alta incidência em crianças. Postula-se que,

1. INTRODUÇÃO

uma vez que o tromboxano está envolvido no desenvolvimento da

doença de Kawasaki e o gengibre inibe potencialmente a biossíntese

do composto, o uso deste rizoma, portanto, parece ser uma escolha

interessante para o tratamento desta patologia (Backon, 1991).

O gengibre também apresenta efeitos sobre a pressão

sanguínea e ritmo cardíaco. Em um estudo realizado para investigar

esses efeitos farmacológicos, observou-se que extratos do gengibre

diminuem a pressão sanguínea quando injetados na veia femoral de

ratos. Este efeito é produzido de maneira dose-dependente com a

administração de [6]-shogaol (1-100µg/Kg) e [6]-gingerol (0,1-100

µg/Kg). Em doses mais elevadas, [6]-shogaol e [6]-gingerol causam

uma diminuição imediata da pressão sanguínea, seguida por um

aumento significativo dos valores pressóricos e subsequente queda da

pressão (Suekawa et al., 1984).

Há dez anos atrás, descobriu-se que o gengibre estimula a

atividade da bomba de Ca2+ de retículo sarcoplasmático (RS)

fragmentado, preparado a partir de musculos cardíacos de coelhos e

cães. O gingerol (3-30 µM) aumenta a atividade da bomba de Ca2+ do

RS do músculo esquelético e cardíaco de forma dose-dependente

(Kobayashi et al., 1987). Dados in vitro mostram que o gingerol

aumenta a contratilidade do músculo atrial de cobaia em preparações

isoladas e em animais, apresenta efeitos inotrópicos e cronotrópicos.

Neste estudo [8]-gingerol apresentou efeitos inotrópicos e

cronotrópicos positivos dose-dependentes, em concentrações que

variaram de 1 x 10-6 a 3 x 10-5 (Kobayashi et al., 1988; Shoji et al.,

1982).

1. INTRODUÇÃO

Estudos que utilizaram veias e artérias mesentéricas isoladas de

camundongos mostraram que [6]- e [8]-gingerol aumentam a

contração causada por várias prostaglandinas (PGF2, PGE2 e PG12).

Por outro lado, o efeito constrictor causado pelo tromboxano A2 e

leucotriennos é inibido (Kimura et al., 1989). Além disso, observou-se

que tanto o [6]-gingerol quanto o [6]-shogaol inibem a contração

induzida pela norepinefrina e estimulam a contração induzida pela

PGF2-α (Pancho et al., 1989).

Estudos sobre os efeitos hipolipemiantes do gengibre têm

apresentado resultados ainda controversos (Bhrandari et al., 1998).

Alguns desses estudos confirmam que a administração oral ou

intragástrica dos extratos obtidos do gengibre reduz os níveis de

colesterol sérico e hepático, aumentando, consequentemente, a

concentração de colesterol nas fezes. Estes resultados sugerem que o

gengibre pode reduzir a absorção intestinal do colesterol (Tanabe et

al., 1993).

Em ratos com hipercolesterolemia, alguns dados sobre os

efeitos do gengibre são conflitantes; alguns estudos mostram efeitos

positivos e outros, entretanto, não mostram efeito algum (Sambaiah et

al., 1991; Srinivasan et al., 1991). Mais recentemente, um estudo

analisou os efeitos do gengibre e do alho, associados, sobre os níveis

séricos de glicose e colesterol. Neste estudo, o qual utilizou ratos

Wistar machos, descobriu-se que todos os animais apresentaram

aumento de peso corpóreo, exceto aqueles que receberam uma

combinação de gengibre e alho. Além deste resultado, ocorreu

também uma redução significativa da glicose e do colesterol

sanguíneos e fosfatase alcalina sérica. As lipoproteínas de alta

densidade (HDL) apresentaram-se aumentadas (Ahmed et al., 1997).

1. INTRODUÇÃO

Em homogenatos de fígado de camundongos e ratos, extratos

de gengibre interferem metabolismo do colesterol (Tanabe et al.,

1993). Para tanto, o gengibre teve seus efeitos testados sobre o

sistema hepático de oxigenase de função mista. Este complexo de

enzimas está envolvido na hidroxilação dos esteróides e no

metabolismo de diversos fármacos no organismo. Experimentos in vivo

realizados em ratos albinos adultos (fêmeas) mostraram que o

gengibre (10 e 40 mg%) aumenta os níveis microssomais hepáticos do

citocromo P450 e citocromo b5. A atividade da glicuronil transferase e

NADPH-citocromo c redutase não foi alterada (Sambaiah et al., 1989).

A atividade da enzima colesterol-7-hidroxilase (uma enzima hepática

limitante para o processo da biossíntese do colesterol e ácidos

biliares), entretanto, apresentou-se significativamente elevada nos

ratos alimentados com gengibre (Kimura et al., 1989). O gengibre,

portanto, não afeta diretamente as concentrações séricas do

colesterol, e sim, as enzimas envolvidas na conversão do colesterol a

ácidos biliares no fígado, o que leva a uma diminuição dos níveis

plasmáticos de colesterol (Afzal, et al., 2001).

O gengibre exibe seus efeitos mais proeminentes no sistema

gastrointestinal, onde parece estimular a motilidade gastrointestinal.

Doses orais do extrato orgânico do gengibre, administrado em

camundongos (75 mg/Kg; 2,5 mg/Kg de [6]-shogaol ou 5mg/Kg de [6]-,

[8]- ou [10]-gingerol) parecem estimular o transporte intestinal de

alimentos. Alguns estudos sugerem que a via de administração dos

extratos pode alterar o efeito resultante. Desta forma, a administração

intravenosa de 3,5 mg/Kg de [6]-gingerol e [6]-shogaol em ratos inibe a

motilidade intestinal. Entretanto, quando administrado via oral, o

shogaol aumenta a motilidade intestinal com a dose de 35 mg/Kg

(Suekawa et al., 1984; Suekawa et al., 1986) Em camundongos, os

1. INTRODUÇÃO

efeitos do gengibre em aumentar a motilidade intestinal são similares

aos efeitos da metoclopramida (Yamahara et al., 1990). Por outro lado,

um composto diterpenóide presente em extratos do gengibre,

conhecido como galanolactona, apresenta efeitos antagonistas sobre o

receptor da serotonina (5-hidroxitriptamina ou 5-HT). A galanolactona

inibe as respostas contráteis do íleo de cobaia, frente a ação da 5-HT,

especificamente sobre os receptores 5-HT3. Desta forma, o efeito do

gengibre sobre a motilidade gastrointestinal parece ocorrer devido à

ação antagonista da planta sobre os receptores 5-HT3 (Huang et al.,

1991).

A emese é um sintoma comum tanto à cinetose, quanto à

náusea pós-operatória. Em função disto, muitas investigações foram

realizadas para estudar as ações antieméticas do gengibre (Grontved

et al., 1988). Em cães e ratos, extratos do rizoma reduzem

efetivamente o vômito associado à quimioterapia (Yamahara et al.,

1989; Sharma et al., 1997). De acordo com (Frisch et al., 1995), uma

combinação de ervas incluindo gengibre e ginkgo é tão eficaz quanto a

metoclopramida em modelos de náusea induzida experimentalmente.

Estudos em ratos e camundongos sugerem que o gengibre exerce

seus efeitos antieméticos estimulando receptores colinérgicos e

histaminérgicos e/ou antagonizando os receptores para 5-

hidroxitriptamina (serotonina) no intestino (Huang et al., 1991; Qian et

al., 1992). Micklefield et al., 1999, afirmam que em seres humanos,

durante o jejum ou após uma refeição padrão, extratos do gengibre

aumentam significativamente a motilidade gastroduodenal.

Outros estudos têm avaliado a efetividade do gengibre na

prevenção da cinetose, bem como os mecanismos potenciais para

esta ação farmacológica (Anônimo, 1997). Em um estudo aberto,

1. INTRODUÇÃO

composto por 1741 turistas que viajavam em um navio, uma

suplementação à base de gengibre (250 mg a cada duas horas) foi tão

efetiva em prevenir a cinetose, quanto os medicamentos

frequentemente prescritos para este fim (Schmid et al., 1994).

Historicamente, o gengibre tem sido usado como um composto

carminativo, que aumenta a motilidade gastrointestinal e diminui a

flatulência. Em camundongos, o zingibereno e o gingerol reduzem

significativamente a ulceração gástrica induzida experimentalmente

por etanol e ácido clorídrico (Yamahara et al, 1985). Estes resultados

foram confirmados em vários estudos subsequentes, nos quais, alguns

constituintes do gengibre, incluindo beta-sesquifelandreno, beta-

bisaboleno, ácido gingerosulfônico, curcumeno e 6-shogaol

demonstraram efeitos antiúlcera, protegendo a mucosa gástrica contra

a ação do álcool, de drogas antiinflamatórias não esteroidais e do

ácido clorídrico (Al-Yahya et al., 1989; Yamahara et al, 1992). Lesões

gástricas induzidas por esses compostos em ratos são inibidas pela

administração oral do extrato acetônico do gengibre (1 g/Kg),

zingibereno e [6]-gingerol (100 mg/Kg) em 97,5%, 53,6% 3 54,5%,

respectivamente (Yamahara et al., 1988). Extratos de gengibre

administrados em ratos promoveram um aumento da secreção biliar

(Yamahara et al., 1985).

Os eicosanóides (prostaglandinas, prostaciclinas, tromboxanos,

leucotrienos e lipoxinas) são formados a partir do ácido araquidônico

(AA), em resposta a um dano tecidual qualquer. Em tecidos

inflamados, as quantidades de prostaglandinas e leucotrienos

encontram-se aumentadas pela atividade elevada das enzimas

ciclooxigenase e 5-lipoxigenase, respectivamente (Mustafa et al.,

1993).

1. INTRODUÇÃO

Sabe-se que vários compostos presentes no gengibre possuem

atividades inibitórias sobre a síntese de prostaglandinas e leucotrienos

pela inibição direta da enzima prostaglandina sintetase e 5-

lipoxigenase. Os gingeróis, shogaóis e algumas gingerodionas são

particularmente ativos (Kiuchi et al., 1992). Dados in vitro mostram que

extratos do gengibre bloqueiam a formação de compostos

inflamatórios como tromboxanos, leucotrienos e prostaglandias (Flynn

et al., 1986; Kiuchi et al., 1982).

Na medicina Ayurvedica, o gengibre é usado como um remédio

antiinflamatório para artrite e dor de cabeça (Mustafa et al., 1990).

Muitos estudos têm mostrado o efeito antiinflamatório do gengibre na

artrite e doenças relacionadas. A artrite é uma condição inflamatória

crônica, cujo processo é mediado por eicosanóides: prostaglandina E2

e leucotrieno B4. A ingestão diária de gengibre (5g do rizoma fresco ou

0,5-1 g do rizoma pulverizado) alivia a dor, melhora os movimentos e

reduz o edema em pacientes com artrite reumatóide (Srivastava et al.,

1989). Em um estudo com sete pacientes que apresentava artrite

reumatóide, Srivastava et al., (1989) demonstraram que uma

suplementação à base de gengibre produziu uma melhora dos

sintomas apresentados pelos pacientes. Em outro estudo contendo 56

voluntários (28 com artrite reumatóide, 18 com osteoartrite e 10 com

desconforto muscular), os quais receberam gengibre pulverizado como

suplementação, mais de 3/4 dos pacientes que apresentavam artrite

relataram alívio da dor e inflamação em graus variáveis; todos os

pacientes com desconforto muscular relataram também alívio do

sintoma. Nenhum dos pacientes relatou a ocorrência de qualquer

efeito adverso durante o consumo do gengibre, o qual teve uma

duração que variou de três mêses a dois anos e meio (Srivastava et

al., 1992). Sharma et al., (1994) demostraram em modelos animais de

1. INTRODUÇÃO

artrite crônica que o óleo essencial do gengibre (33 mg/Kg)

administrado em ratos, reduz efetivamente a inflamação e o edema da

artrite induzida nos joelhos e patas.

O gengibre possui, também uma efetiva atividade antipirética.

Mais especificamente, o [6]-shogaol apresenta este efeito quando

administrado endovenosamente na dose de 1,75-3,5 mg/Kg

(Srivastava et al., 1992).

Em vários países tropicais, alguns condimentos como o

gengibre, são utilizados para conservar alimentos que se deterioram

muito facilmente, como as frutas, por exemplo, (Chen et al., 1985;

Ejechi et al., 1998). Denyer et al., (1994) afirmam que alguns

sesquiterpenos presentes no gengibre possuem atividade in vitro

antirhinoviral. Extratos do gengibre também apresentam atividade

antibacteriana contra microorganismos gram-positivos e gram-

negativos, tais como Clostridium, Listeria, Enterococcus e

Staphylococcus; entretanto, este efeito é perdido com o calor

(cozimento) (Chen et al., 1985; Janes et al., 1999; Mascolo et al.,

1989). Alguns constituintes químicos do gengibre, como as

gingerenonas A, B e C e isogingerenona B mostraram alguma

atividade antifúngica in vitro (Vimala et al., 1999).

Dados in vitro (Murakami et al., 1998; Vimala et al., 1999)

mostraram o gengibre inibe a ativação do vírus Epstein-Barr, e que

alguns de seus constituintes químicos (6-gingerol e 6-paradol)

apresentaram efeitos sobre a viabilidade e síntese de DNA em células

promielocíticas leucêmicas humanas (Lee et al., 1998; Surh et al.,

1998). Camundongos tratados com o extrato alcoólico do gengibre

1. INTRODUÇÃO

apresentaram uma proteção significativa contra tumores de pele

induzidos experimentalmente (Lee et al., 1998; Matthes et al., 1980).

A peroxidação lipídica é um processo que ocorre quando

espécies reativas de oxigênio atacam lipídeos (particularmente os

ácidos graxos poliinsaturados), resultando na formação de

lipoperóxidos, os quais são agentes potencialmente lesivos às células

e ao DNA. As lipoproteínas de baixa densidade (LDL), se oxidadas,

podem tornar-se um fator chave para a formação de placas

ateroscleróticas, o que constitui um alto fator de risco para as

chamadas doenças cardíacas. Recentemente, alguns estudos têm

mostrado que a peroxidação lipídica em organismos vivos está

intimamente relacionada ao início de algumas doenças humanas como

o câncer, doença coronariana e mal de Alzheimer (Masuda et al.,

1998).

Muitas pesquisas são realizadas com o intuito de descobrir

substâncias inibidoras da peroxidação lipídica. Alguns extratos do

gengibre têm demonstrado possuir alguma atividade antioxidante. De

fato, a zingerona atua como sequestrados de ânions superóxido,

atividade esta medida através da redução do nitrobluetetrazolium em

meio contendo o sistema xantina/xantina-oxidase (Krishnakantha et

al., 1993). Em células endoteliais de aorta humana, a zingerona

também demonstrou ter efeitos antioxidantes significativos sobre as

lipoporteínas de baixa densidade (LDL) (Pearson et al, 1997; Zhou et

al., 1992). Sujatha et al., (1995) relatam que o gengibre exibe

propriedades antioxidantes em membranas de eritrócitos humanos

submetidos à peroxidação lipídica induzida pelo sistema FeSO4-

ascorbato. Nestas condições, o gengibre inibiu a peroxidação lipídica

em 72%, inibindo, também, a formação de dienos, trienos e tetraenos

1. INTRODUÇÃO

conjugados nas membranas de eritrócitos humanos. Em condrócitos

humanos, o óleo essencial do gengibre reduziu efetivamente a

produção de peróxido de hidrogênio induzida pelo ácido fúlvico (Guo et

al, 1997).

Ratos alimentados com uma dieta rica em colesterol, ao

receberem uma suplementação com gengibre, apresentaram efeitos

antioxidantes significativos, ocorrendo um aumento das concentrações

teciduais das enzimas superóxido dismutase (SOD) e catalase, e

consequente redução dos níveis de glutathiona (Jeyakumar et al.,

1999).

• Aspectos toxicológicos:

Reações alérgicas ao gengibre têm sido relatadas apenas como

dermatites de contato em indivíduos com exposição ocupacional ao

condimento (Kanerva et al., 1996). Com exceção à leve indisposição

estomacal em pessoas não acostumadas a comidas apimentadas, o

gengibre não possui toxicidade aguda conhecida, nas doses usuais

para consumo com propósitos alimentares ou medicinais. Doses de 6g

ou maiores podem levar à irritação e perda da proteção da mucosa

gástrica (Desai et al., 1990). Em doses normais (até 2g diárias), o

gengibre não interfere com a coagulação sanguínea ou qualquer outro

parâmetro individual do processo de coagulação (Bordia et al., 1997;

Janssen et al., 1996; Lumb, 1994). Por outro lado, uma vez que o

gengibre inibe a agregação plaquetária e a biossíntese de

prostaglandinas, tromboxanos e leucotrienos, seu uso como profilático

para a náusea pós-operatória e vômito pode resultar em complicações

(Backon, 1991).

1. INTRODUÇÃO

A DL50 aguda do gengibre em ratos é maior que 5 g do óleo por

quilograma de peso corpóreo (Mascolo et al., 1989). Não se tem

relatos de qualquer atividade carcinogênica ou mutagênica do

gengibre (Nagabhushan et al, 1987; Nakamura et al., 1982). Alguns

especialistas desaconselham o consumo do gengibre em pacientes

com algumas condições cardíacas, cálculos e outras doenças do

sistema biliar ou pacientes com diabetes ou hipoglicemia (Newall et al.,

1996; Brinker, 1997; McGuffin et al., 1997). O uso durante a gravidez é

presumidamente seguro, baseado na sua longa história de uso como

alimento, entretanto, devido à atividade uterotônica de uma espécie

relacionada (Zingiber cassumunar), alguns especialistas recomendam

evitar o consumo do gengibre durante a gravidez (Newall et al., 1996;

Brinker, 1997; Kanjanapothi, 1987).

2. OBJETIVOS

2.1. OBJETIVO GERAL:

Em função do reduzido número de artigos existentes na

literatura que abordam os efeitos do óleo essencial do gengibre sobre

o SNC, o presente trabalho teve como objetivo estudar os efeitos

comportamentais, neuroquímicos e tóxicos do óleo essencial de

gengibre (OEG).

2.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

• Estudar os efeitos comportamentais da administração diária do

OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, i.p. e v.o.) em camundongos

submetidos aos testes do Labirinto em Cruz Elevado (LCE),

Campo Aberto (CA), Rota Rod (RR) e Esquiva Passiva (EP);

• Avaliar o efeito do OEG (100 mg/kg, i.p.) sobre os tremores

induzidos por oxotremorina (0,5 mg/Kg, i.p.) em camundongos;

• Verificar a ocorrência de possíveis alterações no conteúdo das

monoaminas e seus metabólitos em hipocampo e corpo estriado

de camundongos tratados diariamente com OEG (100 mg/Kg,

i.p.);

• Verificar a ocorrência de possíveis efeitos tóxicos do OEG

quando administrado em dose única (200, 400 e 800 mg/Kg, i.p.)

ou diária (25, 50 e 100 mg/Kg, i.p. e v.o.) em camundongos;

• Avaliar o efeito do OEG (50, 100 e 200 mg/Kg, i.p.) sobre a

função hepática de ratos tratados com tetracloreto de carbono

(CCl4), através da análise dos marcadores de função hepática:

2. OBJETIVOS

alanina transaminase (ALT), aspartato transaminase (AST),

fosfatase alcalina (FA) e bilirrubina.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

3.1. ANIMAIS:

Para a realização do presente estudo, foram utilizados

camundongos Swiss machos, com peso médio de 25 g e ratos Wistar

machos, com peso médio de 150 g. Os animais utilizados foram

provenientes do Biotério Central do Departamento de fisiologia e

Farmacologia, da Faculdade de Medicina da Universidade Federal do

Ceará e mantidos em ambiente com temperatura constante e ciclo

claro/escuro de 12 horas cada. Todos os experimentos foram

realizados de acordo com “National Institutes of Health Guide for Care

and Use of Laboratory Animals”.

3.2. DROGAS:

• Atropina:

Atropina (Sigma Chemical, Co, USA) foi dissolvida em água

destilada e administrada na dose de 10 mg/Kg, i.p., como droga

padrão de efeito anticolinérgico no teste dos tremores induzidos por

oxotremorina.

• Diazepam:

Ampolas de diazepam (União Química, Brasil) 20 mg/2mL foram

utilizadas. O diazepam foi diluído em água destilada e administrado na

dose de 1,0 mg/Kg, via intraperitoneal, como droga padrão no modelo

do Labirinto em Cruz Elevado.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

• Escopolamina:

O cloridrato de escopolamina (Sigma Chemical, Co, USA) foi

dissolvido em água destilada e administrado na dose de 0,5 mg/Kg, via

intraperitoneal, como droga padrão no modelo da esquiva-passiva.

• Oxotremorina:

Oxotremorina (Sigma Chemical, Co, USA) foi dissolvida em

água destilada e administrado na dose de 0,5 mg/Kg, via

intraperitoneal, no teste da indução de tremores.

• Óleo essencial de Zingiber officinale Roscoe:

O material vegetal (rizomas) utilizado para a extração do óleo

essencial foi proveniente do município de Baturité-Ce. Um exemplar

deste material encontra-se devidamente acondicionado e registrado no

Herbário Prisco Bezerra da UFC (exsicata n. 32.420).

Para a extração do óleo essencial, os rizomas do gengibre foram

lavados em água corrente para retirar algumas impurezas e em

seguida triturados. O material vegetal foi então transferido para um

balão, ao qual foi adicionada água destilada em quantidade suficiente

para imergir todo o material. A mistura foi submetida à ebulição por

aproximadamente três horas. A fase orgânica (OEG) foi separada da

fase aquosa (hidrolato) por separação simples em camada de sulfato

de sódio anidro, para retirar traços de água ainda presentes no óleo

essencial.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

Em seguida, o óleo essencial foi emulsificado em água destilada

com Tween 80 a 0,5% com auxílio de um aparelho sonicador. Três

soluções de concentrações diferentes do OEG foram preparadas, nas

doses de 25 mg/Kg (G25), 50 mg/Kg (G50) e 100 mg/Kg (G100).

• Tetracloreto de carbono (CCl4):

Tetracloreto de carbono (Proquímicos) foi diluído em óleo de

oliva à uma concentração final de 50%. A mistrura foi administrada via

intraperitoneal em um volume de 0,5 mL/Kg.

3.3. ESTUDO DOS EFEITOS COMPORTAMENTAIS DO OEG:

• Procedimento experimental:

Os animais (camundongos) foram divididos em nove grupos

diferentes, com oito animais cada: grupo controle (C), diazepam (D),

escopolamina (E), gengibre 25 (G25), gengibre 50 (G50), gengibre 100

(G100), gengibre 25 + escopolamina (G25/E), gengibre 50 +

escopolamina (G50/E) e gengibre 100 + escopolamina (G100/E).

O protocolo experimental consistiu em tratar os animais durante

oito dias consecutivos, obedecendo sempre o mesmo horário e padrão

de administração (Tabela 3.3.1). No sétimo dia de tratamento, os

camundongos dos grupos C, D, G25, G50 e G100 foram submetidos

ao teste do Labirinto em Cruz Elevado (LCE), seguido pelos testes do

Campo Aberto (CA) e Rota Rod (RR). No oitavo dia de tratamento, os

animais dos grupos C, E, G25, G50, G100, G25/E, G50/E e G100/E

foram submetidos ao teste da Esquiva-Passiva (EP), o qual foi

repetido no dia seguinte, desta vez, na ausência das drogas. Para

3. MATERIAIS E MÉTODOS

efeito de comparação, o protocolo experimental foi realizado

administrando-se as drogas (veículo e OEG) via intraperitoneal (i.p.) e

oral (v.o.). Todos os testes comportamentais foram realizados sempre

no horário de 12:30 às 17:30 horas, em uma sala fechada de

temperatura constante (23 ± 1° C) e iluminação de pouca intensidade

(lâmpada vermelha de 15V).

3. MATERIAIS E MÉTODOS

Tabela 3.3.1. Padrão de administração das drogas ao longo dos oito

dias de tratamento.

GRUPOS D1 D2 D3 D4 D5 D6 D7

Veíc.

Veíc. Veíc. Veíc. Veíc. Veíc. Veíc. Dzp

Veíc. Veíc. Veíc. Veíc. Veíc. Veíc. Veíc.

G25

OEG OEG OEG OEG OEG OEG OEG

G50

OEG OEG OEG OEG OEG OEG OEG

G100

OEG OEG OEG OEG OEG OEG OEG

G25/E

OEG OEG OEG OEG OEG OEG OEG

G50/E

OEG OEG OEG OEG OEG OEG OEG

G100/E

OEG OEG OEG OEG OEG OEG OEG

Legenda: Veíc. (veículo – Tween 80, 0,5%, i.p. ou v.o.), Dzp.

(diazepam 1,0 mg/Kg, i.p.), OEG (óleo essencial de Zingiber officinalis,

i.p. ou v.o.), Esc. (escopolamina 0,5 mg/Kg i.p.; quando associada ao

OEG, sua administração foi realizada 30min após a do óleo essencial).

3. MATERIAIS E MÉTODOS

• Teste do labirinto em cruz elevado (avaliação da atividade

ansiolítica):

O labirinto em cruz elevado (LCE) para camundongos (Lister,

1987) é um aparelho constituído por dois braços abertos (30 x 5 cm) e

dois braços fechados (30 x 5 x 25 cm), unidos entre si por uma

plataforma central (5 x 5cm), formando uma cruz, a qual encontrava-se

elevada a 45cm do solo. As paredes do labirinto foram confeccionadas

em acrílico transparente, e o piso, confeccionado em acrílico preto

(Figura 3.3.1.).

Decorrido o tempo de administração das drogas (30 min para a

administração i.p. ou 1 h para a administração v.o.), cada animal foi

colocado na plataforma central do labirinto com o focinho voltado para

um dos braços fechados, e seu comportamento observado por 5

minutos. Neste teste foram observados os seguintes parâmetros de

comportamento: o número de entradas do animal nos braços abertos

(NEBA) e o tempo de permanência nos braços abertos (TPBA). O

modelo utilizou o diazepam (1,0 mg/Kg, i.p.) como droga padrão para a

ação ansiolítica.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

Figura 3.3.1. Labirinto em Cruz Elevado (LCE).

Aparelho utilizado para avaliar a atividade ansiolítica de drogas. O

modelo do LCE é bastante utilizado para o estudo de fármacos com

ação do tipo benzodiazepínica.

Fonte: http://www.colinst.com

3. MATERIAIS E MÉTODOS

• Teste do campo aberto (avaliação da atividade locomotora):

O aparelho do campo aberto (CA) (Figura 3.3.2.) consistiu em

uma arena de formato quadrado, com as paredes confeccionadas em

acrílico transparente (30 x 30 x 15 cm) e piso em acrílico preto,

dividido em nove quadrantes iguais (Archer, 1973).

Após o teste o LCE, cada camundongo foi colocado com as

quatro patas no centro da arena do campo aberto, e o seu

comportamento foi observado por cinco minutos. Os parâmetros

comportamentais observados neste teste foram: o número de

cruzamentos (NC); o número de rearing (NR), postura na qual o animal

ficava na posição vertical, apoiado somente pelas patas traseiras, e o

número de grooming (NG), ato de auto-limpeza do animal. Para o

registro do NC, foram contados todos os quadrantes cruzados pelo

animal, quando este se encontrava com as quatro patas dentro do

mesmo quadrante.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

Figura 3.3.2. Campo Aberto (CA).

Aparelho utilizado para o estudo da ação de drogas sobre a atividade

locomotora espontânea (ALE). A avaliação é feita mediante a

observação de três parâmetros: o número de cruzamentos (NC), o

número de rearing (NR) e o número de grooming (NG), durante 5 min.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

• Teste do Rota rod (avaliação da coordenação motora):

No teste do Rota rod, cada camundongo foi colocado com as

quatro patas sobre uma barra giratória de 2,5 cm de diâmetro, elevada

a 25 cm do piso (Figura 3.3.3.), a uma rotação de 12rpm, durante 1

minuto. Para cada animal, foram registrados os seguintes parâmetros

comportamentais: o número de quedas (NQ) sofridas (sendo o limite

máximo de 3 quedas para cada animal) e o tempo de permanência

(TP) na barra giratória (Dunham & Myia, 1957). O teste do RR foi

realizado em sequência ao teste do CA.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

Figura 3.3.3. Rota rod (RR).

Aparelho utilizado para o estudo da ação de drogas sobre a

coordenação motora. A avaliação desta ação é feita mediante a

observação de dois parâmetros: o tempo de permanência (TP) do

animal sobre a barra giratória e o número de quedas (NQ) sofridas,

durante 1min.

Fonte: http://www.ugobasile.com

3. MATERIAIS E MÉTODOS

• Teste da esquiva-passiva (avaliação da memória recente e

tardia):

O aparelho da esquiva-passiva consistiu em uma caixa de

acrílico (48 x 22 x 22 cm), dividida em dois compartimentos (um claro,

iluminado por uma lâmpada e um compartimento escuro, com piso

eletrificado), separados por uma porta (Figura 3.3.4.).

O protocolo foi realizado de acordo com Imanishi et al (1996).

Após o tratamento com as drogas (Tabela 3.3.1.), cada animal foi

colocado no equipamento (desligado) durante 1 min para habituação.

Decorrido este tempo, o animal era retirado e após 30 segundos,

recolocado no compartimento claro do aparelho (desta vez, ligado)

para iniciar a fase de treino. Ao passar do compartimento claro para o

escuro, o animal recebia um choque de 1,0 mA de intensidade,

durante 1 segundo, e era retirado do aparelho logo em seguida. Após

15 minutos, o procedimento era repetido para registrar o tempo que o

animal levava para entrar no compartimento escuro do aparelho

(latência) e receber o choque novamente. Esta fase avaliava o

aprendizado do camundongo (esquiva 15 min). Decorridas 24 h, o

procedimento era realizado mais uma vez para avaliar a memória do

animal (esquiva 24 h). O tempo limite de permanência do camundongo

no compartimento claro era de 300 seg. O modelo utilizou

escopolamina (0,5 mg/Kg, i.p.) como padrão para indução de amnésia.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

Figura 3.3.4. Esquiva-passiva (EP).

Aparelho utilizado para o estudo de drogas com possíveis ações sobre

o aprendizado e a memória. O equipamento possui um compartimento

claro, iluminado por uma lâmpada, e outro compartimento escuro, com

piso eletrificado, separado por uma porta. O modelo fundamenta-se no

uso de um estímulo aversivo (choque elétrico) para que o processo de

formação e retenção da memória ocorra.

Fonte: http://www.ugobasile.com

3. MATERIAIS E MÉTODOS

• Teste dos tremores induzidos por oxotremorina (avaliação

dos efeitos colinérgicos):

O experimento foi realizado segundo a técnica descrita por

Fukuzaki et al. (2000): camundongos Swiss foram divididos em quatro

grupos, tratados com veículo (grupo C), atropina 10 mg/Kg (grupo

A/O), OEG 50 mg/Kg (G50/O) e OEG 100 mg/Kg (G100/O). Todas as

drogas foram administradas via i.p. Decorridos 30 min da

administração das drogas, cada animal recebeu uma injeção de

oxotremorina (0,5 mg/Kg, i.p.) e teve seu comportamento avaliado 10,

20 e 30 min após a administração da oxotremorina. A intensidade dos

tremores apresentados pelos animais foi avaliada de acordo com uma

escala descrita por Coward et al. (1977):

0- Ausência de tremores;

1- Tremores fracos e isolados;

2- Tremores moderados e pouco persistentes;

3- Tremores intensos e persistentes.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

3.4. ESTUDO DOS EFEITOS NEUROQUÍMICOS DO OEG:

• Método da cromatografia líquida de alta performance

(CLAE):

Para a determinação dos níveis de monoaminas e seus

metabólitos, foi utilizado o aparelho de cromatografia líquida de alta

eficiência - CLAE (Figura 3.4.1.). Na cromatografia líquida clássica, um

adsorvente (alumina ou sílica) é empacotado em uma coluna, e eluído

por um líquido ideal (fase móvel). Uma determinada mistura a ser

separada é então introduzida na coluna, a qual é carregada através da

mesma por um líquido eluente. Caso um composto presente na

mistura (soluto) seja adsorvido fracamente pela superfície da fase

sólida estacionária, este atravessará a coluna mais rapidamente que

um outro soluto que seja mais fortemente adsorvido. A separação dos

solutos, então, trona-se possível caso existam diferenças na adsorção

pelo sólido.

Os detectores eletroquímicos medem a condutância do eluente,

ou a corrente associada com a oxidação ou redução dos solutos. Para

que a detecção ocorra, faz-se necessário que, no primeiro caso, os

solutos sejam iônicos, e, no segundo caso, os solutos devem ter a

característica de serem relativamente fáceis de sofrerem oxidação ou

redução. Os detectores eletroquímicos são também chamados de

detectores amperimétricos ou coulométricos, uma vez que medem a

corrente associada com a oxidação ou redução de solutos. No

presente estudo, foi utilizado o tipo amperométrico , o qual reage com

uma quantidade muito menor de soluto (em torno de 1%). Todas as

técnicas eletroquímicas envolvem a aplicação de um potencial para

um eletrodo (geralmente de carbono vítreo), oxidação da substância

3. MATERIAIS E MÉTODOS

que está sendo estudada, próxima à superfície do eletrodo, seguindo a

amplificação e medida da corrente produzida. As catecolaminas

(monoaminas e metabólitos) sofrem oxidação nos grupos de anel

hidroxil, com consequente produção de um derivado ortoquinônico,

com liberação de dois elétrons.

• Procedimento experimental:

Após a realização do último experimento (esquiva 24h), os

animais dos grupos C e G100, tratados via i.p., foram sacrificados por

deslocamento cervical e decaptados com uma tesoura cirúrgica. Seus

cérebros foram removidos e dissecados rapidamente sob gelo para

retirada do hipocampo (H) e corpo estriado (CE), os quais foram

armazenados em papel-alumínio e mantidos a uma temperatura de

70° C abaixo de zero para posterior análise do conteúdo de

monoaminas (noradrenalina, dopamina e serotonina) e seus

metabólitos (HVA, DOPAC e 5-HIAA).

O H e CE foram utilizados para preparar homogenatos a 20% e

10% respectivamente. Os tecidos cerebrais foram sonicados em ácido

perclórico (HClO4) por 30 seg e centrifugados em seguida por 15min

em uma centrícuga refrigerada (4° C) a 15.000 rpm. Uma alíquota de

20 µL do sobrenadante foi, então, injetada no equipamento de HPLC

para análise química.

Para a análise das monoaminas, uma coluna CLC-ODS(M) com

comprimento de 25 cm, calibre 4,6 mm e diâmetro de partícula de 3µm

(Shimadzu, Japão) foi utilizada. A fase móvel foi composta por tampão

de ácido cítrico 0,163M, pH 3,0, contendo ácido octanosulfônico

3. MATERIAIS E MÉTODOS

sódico, 0,69M (SOS), como reagente formador do par iônico;

acetonitrila 4% v/v e tetrahidrofurano 1,7% v/v.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

Figura 3.4.1. Aparelho de cromatografia líquida de alta eficiência -

CLAE.

Aparelho utilizado na análise do conteúdo das monoaminas e seus

metabólitos em hipocampo e corpo estriado de camundongos tratados

diariamente com OEG (100 mg/Kg, i.p).

Fonte: http://www.shimadzu.com

3. MATERIAIS E MÉTODOS

• Soluções reagentes:

FASE MÓVEL: A fase móvel foi preparada pesando-se 17,75 g

de ácido cítrico (Grupo Química, Rio de Janeiro, Brasil), o qual foi

dissolvido com água milli-Q para um volume de 400 mL. A solução

preparada teve seu pH ajustado para um valor igual a 3,0 com

hidróxido de sódio 12,5 M (Reagen, Rio de Janeiro, Brasil). A esta

solução foram adicionados 75mg de SOS (ácido octanosulfônico

sódico - Sigma Chemical, Co, USA) e o volume acrescido para 471,5

mL com água milli-Q. A solução preparada foi então filtrada e

degaseificada e acrescidos 20mL de acetonitrila (Carlo Erba Reagenti,

MI, Itália) e 10 mL de tetrahidrofurano (Sigma Chemical, Co, USA),

completando um volume final de 500 mL.

ÁCIDO PERCLÓRICO 0,1M: A 1,8 mL de ácido perclórico

(Sigma Chemical, Co, USA) foi adicionada água destilada em

quantidade suficiente para 300 mL. O procedimento de diluição foi

realizado com auxílio de um balão volumétrico.

PADRÕES: Os padrões foram preparados em uma

concentração final de 4ng de DA, NA, 5-HT, DOPAC, HVA e 5-HIAA

(Sigma Chemical, Co, USA). A partir da altura ou área dos picos

destes padrões, as amostras foram calculadas no programa Microsoft

Excel em um computador PC, e os resultados expressos em ng/g de

tecido.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

3.5. ESTUDO DOS EFEITOS TÓXICOS DO OEG:

• Avaliação dos efeitos gerais (teste hipocrático) e da

toxicidade do OEG:

Para a avaliação da toxicidade do OEG foram utilizados

camundongos Swiss machos, com peso médio de 25 g. Os animais

foram divididos em quatro grupos de seis animais cada. Cada grupo

recebeu o óleo essencial nas doses de 200, 400 e 800 mg/Kg, i.p., em

um volume de 10 mL/Kg. O grupo controle recebeu igual volume de

veículo (Tween 80 à 0,5 %). Neste experimento (Teste Hipocrático)

foram avaliados os seguintes parâmetros: motilidade, respiração,

contorção, ataxia, tremor, convulsão, postura, ereção da cauda,

catalepsia, estereotipia, ptose palpebral, piloereção, cianose,

salivação, lacrimejamento, diarréia, analgesia, anestesia, sudorese,

sedação, coma e morte. Os animais foram observados 5, 10, 15, 30,

60, 120 minutos e em intervalos de 24, 48 e 72 horas após a

administração do OEG.

A avaliação da toxicidade do OEG também foi realizada ao

longo do tratamento diário (8 dias) dos animais com o óleo essencial,

nas doses de 25, 50 e 100 mg/Kg, v.o. e i.p.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

• Avaliação do efeito do OEG sobre a função hepática de

ratos tratados com tetracloreto de carbono (CCl4):

A realização do experimento foi feita segundo modificações da

metodologia empregada por Janakat et al. (2003): ratos Wistar machos

(150 g) foram divididos em cinco grupos contendo seis animais cada:

grupo controle (C), tetracloreto de carbono (T), OEG 50 mg/Kg (G50),

OEG 100 mg/Kg (G100). E OEG 200 mg/Kg (G20). Os animais do

grupo controle receberam veículo (Tween 80 à 0,5% em água

destilada, i.p.) e, passados 30min, receberam óleo de oliva via i.p. na

proporção de 0,5mL/Kg. Os animais dos grupos T, G50, G100 e G200

receberam, respectivamente, veículo (Tween 80 à 0,5% em água

destilada, i.p.) e OEG (50, 100 e 200 mg/Kg, i.p.). Meia hora após a

administração das drogas, cada animal recebeu uma injeção

intraperitoneal de CCL4 (50% em óleo de oliva), na dose de 0,5mL/Kg.

Todos os animais foram mantidos em jejum e submetidos à

coleta de sangue através do plexo orbital 24 h após a administração

das drogas. As amostras de sangue foram submetidas à centrifugação

(3000 r.p.m. durante 10 min) para separação do soro e posterior

análise bioquímica (atividade das enzimas AST, ALT, FA e

concentração plasmática de bilirrubina). Imediatamente após a coleta

de sangue, os animais foram sacrificados, seus fígados removidos e

conservados em solução de formaldeído à 10% para posterior análise

histopatológica.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

• Determinação da concentração de bilirrubina:

O método empregado neste trabalho encontra-se descrito em

http://www.labtest.com.br

. A bilirrubina é dosada por diazotização e

formação de azobilirrubina vermelha com absorção máxima em 525

nm. A bilirrubina direta (diglicuronídeo) é dosada em meio aquoso,

enquanto que a total (direta e indireta) é dosada por ação de potente

solubilizador de ação catalisadora.

Adicionou-se uma gota do nitrito de sódio a 1,5 ml do Ácido

Sulfanílico. A mistura preparada deve ser ustilizada no dia da

preparação. Em seguida, foram tomados 3 tubos de ensaio e o

procedimento foi realizado como mostrado a seguir:

Branco Direta Total

Água destilada

1,8 mL 1,8 mL _

Acelerador

_ _ 1,8 mL

Ácido sulfanílico

0,15 mL _ _

Diazo reagente

_ 0,15 mL 0,15 mL

Soro ou plasma

0,05 mL 0,05 mL 0,05 mL

Após a devida agitação das misturas, as mesmas foram

deixadas em repouso durante 5 minutos. Em seguida, foram

determinadas as absorbâncias das bilirrubinas direta e total em 525

nm ou filtro verde (500 a 540 nm), zerando o aparelho com o branco. A

cor é estável por 30 minutos. Os valores foram expressos em mg/dL

para as bilirrubinas direta e total utilizando o fator de calibração obtido

3. MATERIAIS E MÉTODOS

com o Padrão de Bilirrubina. A bilirrubina indireta é obtida pela

diferença das bilirrubinas total e direta.

Na técnica descrita, a reação é linear até 45 mg/dL. Para valores

maiores, a amostra deve ser diluída com NaCl 150 mmol/l, (0,85%) e

repetir a determinação. O resultado obtido deverá ser multiplicado pelo

fator de diluição. A amostra deverá ser diluída de tal modo que o valor

encontrado se situe 10 e 30 mg/dL. Soros fortemente hemolisados

podem fornecer valores falsamente diminuídos.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

• Determinação da atividade das enzimas alanina

transaminase (ALT/TGP) e aspartato transaminase

(AST/TGO):

O método empregado encontra-se descrito em

http://www.labtest.com.br

. A determinação da alanina transaminase ou

transaminase glutâmico pirúvica (ALT/TGP) em amostras de sangue é

útil na avaliação da função hepática, sendo mais sensível na detecção

de lesão hepatocelular que de obstrução biliar. A ALT catalisa a

transferência de grupos amina da alanina para o cetoglutarato, com

formação de glutamato e piruvato. Este é reduzido a lactato por ação

da lactato desidrogenase (LDH), enquanto que a coenzima NADH é

oxidada a NAD+. A conseqüente redução da absorbância em 340 ou

365 nm, monitorizada espectrofotometricamente, é diretamente

proporcional à atividade da enzima na amostra.

ALT

L-Alanina + Cetoglutarato Piruvato + L-Glutamato

LDH

Piruvato + NADH L-Lactato + NAD

Comprimento de onda de 340 ou 365 nm; cubeta termostatizada

a 30º C com 10 mm de espessura de solução; banda de passagem de

8 nm ou menos e luz espúria menor que 0,1%. A 1,0 ml do reagente

de trabalho, adicionou-se 0,1 ml de amostra. A mistura foi

homogeneizada, transferida para uma cubeta termostatizada a 30º C e

deixada em repouso durante 1min. Em seguida foi feita uma leitura

inicial, a qual foi repetida após 1, 2 e 3 minutos. A média das

3. MATERIAIS E MÉTODOS

diferenças de absorbância por minuto (∆ A/minuto) foi determinada, e

utilizada para calcular o resultado:

ALT/TGP (U/L) 340 nm = ∆ A/minuto x 1746

ALT/TGP (U/L) 365 nm = ∆ A/minuto x 3333

Quando o ∆ A/minuto for maior que 0,220 em 340 nm ou maior

que 0,100 em 365 nm, amostra deve ser diluída com NaCl 150 mmol/l

e repetida a determinação. Multiplicar o resultado obtido pelo fator de

diluição. Amostras fortemente lipêmicas e ictéricas aumentam

acentuadamente a absorbância em 340 nm. Quando a atividade

enzimática destas amostras estiver muito aumentada, ocorre consumo

bastante rápido do substrato sem haver diminuição significativa na

absorbância. Nestes casos, quando a diferença de absorbância por

minuto for muito pequena, deve-se repetir a determinação utilizando a

amostra diluída 1:2 com NaCl 0,85%, multiplicando o resultado por 2.

A hemólise prejudica o teste devido a elevada concentração de ALT

nas hemácias, fornecendo valores falsamente elevados.

A determinação da aspartato transaminase ou transaminase

glutâmico oxalacética (AST/GOT) em amostras de sangue é útil na

avaliação da função hepática. A AST catalisa a transferência de

grupos amina da alanina para o cetoglutarato, com formação de

glutamato e oxalacetato. Este é reduzido a malato por ação da malato

desidrogenase (MDH), enquanto que a coenzima NADH é oxidada a

NAD+. A conseqüente redução da absorbância em 340 ou 365 nm,

monitorizada espectrofotometricamente, é diretamente proporcional à

atividade da enzima na amostra.

AST

L-Aspartato + Cetoglutarato Oxalacetato + L-Glutamato

3. MATERIAIS E MÉTODOS

LDH

Oxalacetato + NADH L-Malato + NAD

Foi adicionado 0,1 ml de amostra a 1,0 ml do reagente de

trabalho, homogeneizando-se adequadamente. A mistura foi

transferida para uma cubeta termostatizada a 30º C e deixada em

repouso durante 1 min. Em seguida foi feita uma leitura inicial, a qual

foi repetida após 1, 2 e 3 minutos. A média das diferenças de

absorbância por minuto (∆A/minuto) foi determinada, e utilizada para

calcular o resultado

AST/TGO (U/L) 340 nm = ∆ A/minuto x 1746

AST/TGO (U/L) 365 nm = ∆ A/minuto x 3333

Quando o ∆ A/minuto for maior que 0,220 em 340 nm ou maior

que 0,1000 em 365 nm, a amostra deve ser diluída com NaCl 150

mmol/l e repetida a determinação. Multiplicar o resultado obtido pelo

fator de diluição.

Amostras fortemente lipêmicas e ictéricas aumentam

acentuadamente a absorbância em 340 nm. Quando a atividade

enzimática destas amostras estiver muito aumentada, ocorre consumo

bastante rápido do substrato sem haver diminuição significativa na

absorbância. Nestes casos, quando a diferença de absorbância por

minuto for muito pequena, deve-se repetir a determinação utilizando a

amostra diluída 1:2 com NaCl 0,85%, multiplicando o resultado por 2.

A hemólise prejudica o teste devido a elevada concentração de AST

nas hemácias, fornecendo valores falsamente elevados.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

• Determinação da atividade da enzima fosfatase alcalina

(FA):

Método descrito em http://www.labtest.com.br

. A determinação

da fosfatase alcalina em amostras de sangue é útil na avaliação de

doenças hepáticas e ósseas. A fosfatase alcalina do soro hidrolisa a

timolftaleína monofosfato liberando timolftaleína, que tem cor azul em

meio alcalino. A cor formada, diretamente proporcional a atividade

enzimática, é medida em 590 nm. O produto final da reação se

constitui de uma mistura de cor azul e a cor própria do substrato.

Branco Teste Padrão

Substrato

0,05 ml 0,05 ml 0,05 ml

Tampão

0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml

Padrão

_ _ 0,05 ml

Os tubos contendo as misturas foram colocados em banho-

maria a 37º C 2 minutos. Em seguida foram adicionados 0,05 ml de

amostra nos tubos teste. As misturas foram incubadas em banho-

maria a 37º C por 10 minutos. Ao final dos 10min, foram adicionados

2,0 mL do reagente de cor nº 3 a todos os tubos, os quais foram

devidamente homogeneizados. As absorbâncias do controle, teste e

padrão foram determinadas em espectrofotômetro a 590 nm ou filtro

laranja (580 a 590 nm), acertando o zero com água destilada.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

Abs do teste

Fosfatase alcalina(U/l) = x 45

Abs do padrão

Devido a grande reprodutibilidade que pode ser obtida com a

metodologia, o método do fator pode ser empregado.

Fator de calibração =

Abs do padrão

Unidade de medida U/I: Uma unidade é igual a quantidade de

enzima que libera por hidrólise 1 micromol de timolftaleína por minuto,

por litro de soro nas condições do teste.

A reação é linear, com cinética de ordem zero, até 500 U/I.

Quando a absorbância do teste for maior que 0,8, diluir o produto

corado e o branco com o Reagente de Cor, fazer nova leitura e

multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluição. Se após a diluição

for obtido um valor igual ou maior que 500 U/I, diluir a amostra com

NaCl 150 mmol/l, realizar nova dosagem e multiplicar o resultado

obtido pelo fator de diluição. Diluir a amostra de tal modo que o valor

encontrado se situe entre 40 e 150 U/I.

Interferentes: Citrato, fluoreto, oxalato e EDTA são inibidores da

atividade da fosfatase alcalina porque formam complexos com o

magnésio. Elevações nos níveis de fosfatase alcalina podem ocorrer 2

a 4 horas após refeições gordurosas. Valores de bilirrubina até 32

mg/dl não interferem na reação. Valores de triglicérides maiores que

1800 mg/dl produzem resultados falsamente elevados. Estrógenos em

3. MATERIAIS E MÉTODOS

altas doses, contraceptivos orais, agentes hipoglicemiantes,

fenotiazina, eritromicina encontram-se entre as drogas que podem

provocar aumento dos níveis de fosfatase alcalina.

3.6. ANÁLISE ESTATÍSTICA:

Os resultados foram expressos em média ± EPM e analisados

através da ANOVA, seguido do teste Student-Newman-Keuls (post

hoc). Foram considerados estatisticamente significativos todos os

valores que obtiveram p < 0,05.

4. RESULTADOS

4.1. ESTUDO DOS EFEITOS COMPORTAMENTAIS DO OEG:

• Teste do labirinto em cruz elevado (avaliação da atividade

ansiolítica):

O tempo de permanência nos braços abertos (TPBA) e o

número de entradas nos braços abertos (NEBA) foram os parâmetros

avaliados para o estudo da atividade ansiolítica do OEG, no modelo

do LCE. O diazepam (1 mg/Kg, i.p.) foi utilizado como droga padrão, e

como tal, foi capaz de reduzir a ansiedade dos animais, aumentando

os valores de TPBA e NEBA (Tabelas 4.1.1. e 4.1.2.), de forma que os

animais não só entravam mais vezes nos braços abertos do labirinto,

como também ficavam lá por mais tempo.

O óleo essencial de Zingiber officinale Roscoe(OEG), nas doses

(25, 50 e 100 mg/Kg) e vias (oral e intraperitoneal) utilizadas, não

apresentou efeito algum sobre os parâmetros estudados, quando

comparado aos grupos C e D. Observou-se, entretanto, um pequeno

aumento no TPBA no grupo G100, tratado com o OEG via i.p (Tabela

4.1.1.). O NEBA, no entanto, não sofreu alteração alguma neste grupo.

Este comportamento reflete apenas uma tendência para uma possível

atividade ansiolítica do OEG quando administrado i.p., na dose de 100

mg/Kg. Entretanto, os resultados obtidos não se equivalem aqueles

apresentados pelo diazepam. Os demais grupos não apresentaram

qualquer alteração comportamental (Tabelas 4.1.1. e 4.1.2.) para os

parâmetros estudados.

4. RESULTADOS

Tabela 4.1.1. Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, i.p.) em

camundongos submetidos ao teste do labirinto em cruz elevado - LCE.

LABIRINTO EM CRUZ ELEVADO

GRUPOS

TPBA (seg) NEBA

121,00 ± 9,18 (26) 6,48 ± 0,43 (25)

163,31 ± 10,91 a (28) 11,08 ± 0,80 a (26)

G25

94,53 ± 6,34 b (15) 6,50 ± 0,29 b (16)

G50

84,38 ± 7,58 b (13) 6,08 ± 0,38 b (13)

G100

129,81 ± 11,45 b,c (16) 5,86 ± 0,44 b (16)

O tempo de permanência nos braços abertos (TPBA) e o número de

entradas nos braços abertos (NEBA) foram os parâmetros estudados

no modelo do LCE. Os resultados foram expressos em média ± EPM;

o número de animais utilizados encontra-se entre parentesis. Para

análise estatística foram utilizados ANOVA e teste de Student-

Newman-Keuls como teste post hoc. Os resultados foram

considerados estatisticamente significativos (a, b, c; quando

comparado ao controle (C), diazepam (D) e OEG 50 mg/Kg (G50),

respectivamente) para valores de p < 0,05.

4. RESULTADOS

Tabela 4.1.2. Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, v.o.) em

camundongos submetidos ao teste do labirinto em cruz elevado - LCE.

LABIRINTO EM CRUZ ELEVADO

GRUPOS

TPBA (seg) NEBA

129,31 ± 8,28 (13) 7,4 ± 0,46 (15)

184,21 ± 11,75 a (14) 11,9 ± 0,98 a (10)

G25

135,75 ± 10,62 b (12) 6,33 ± 0,47 b (12)

G50

119,42 ± 9,83 b (12) 6,67 ± 0,41 b (15)

G100

118,00 ± 10,50 b (11) 6,08 ± 0,37 b (13)

O tempo de permanência nos braços abertos (TPBA) e o número de

entradas nos braços abertos (NEBA) foram os parâmetros estudados

no modelo do LCE. Os resultados foram expressos em média ± EPM;

o número de animais utilizados encontra-se entre parentesis. Para

análise estatística foram utilizados ANOVA e teste de Student-

Newman-Keuls como teste post hoc. Os resultados foram

considerados estatisticamente significativos (a, b; quando comparado

ao controle (C) e diazepam (D), respectivamente) para valores de p <

0,05.

4. RESULTADOS

• Teste do campo aberto (avaliação da atividade locomotora):

A administração do OEG durante sete dias provocou alterações

significativas nos animais, quando estes foram submetidos ao teste do

campo aberto (CA). Em relação ao parâmetro número de cruzamentos

(NC), os grupos apresentaram os seguintes valores: C [49,61 ± 2,78

(26)], G25 [44,26 ± 2,38 (15)], G50 [35,40 ± 2,16 (15)] e G100 [30,77 ±

2,87 (18)], para a administração i.p., e C [61,00 ± 4,99 (14)], G25

[52,57 ± 3,37 (14)], G50 [49,84 ± 2,54 (13)] e G100 [41,91 ± 3,18 (12)],

para a administração v.o. As figuras 4.1.1. e 4.1.4. mostram o efeito do

OEG sobre o NC exibido pelos animais. De acordo com a figura 4.1.1.,

a administração i.p. do OEG diminuiu, de maneira dose-dependente, o

NC dos animais em aproximadamente 37% no grupo G100, em

relação ao grupo C. A administração oral do OEG não foi capaz de

promover as mesmas alterações observadas nos grupos que

receberam as drogas via i.p. O grupo que recebeu o OEG na dose de

100 mg/Kg, v.o., apresentou redução do NC (31%) em relação ao

grupo C (Figura 4.1.4.), não sendo observado efeito dose-resposta

entre os outros grupos tratados com o óleo essencial via oral.

O número de grooming (NG) foi outro parâmetro que apresentou

alterações frente a administração do OEG, via intraperitoneal e oral,

respectivamente: C [4,10 ± 0,29 (28)], G25 [3,07 ± 0,45 (14)], G50

[1,78 ± 0,26 (14)], G100 [1,50 ± 0,27 (18)] e C [2,78 ± 0,47 (14)], G25

[3,92 ± 0,50 (14)], G50 [3,30 ± 0,62 (13)], G100 [2,00 ± 0,22 (13)].

Através da figura 4.1.2. observa-se que o OEG, nas doses de 50 e

100mg/Kg, i.p., foi capaz de reduzir significativamente o NG , e tal

redução parece ser obtida em seu efeito máximo com a dose de 100

mg/Kg (redução de aproximadamente 63%). A administração oral do

4. RESULTADOS

OEG na dose de 100 mg/Kg provocou uma redução do NG de

aproximadamente 28%, em relação ao grupo C.

O número de rearing (NR) apresentou também alterações

significativas nos grupos que receberam OEG via intraperitoneal e

oral: C [13,33 ± 2,44 (27)], G25 [18,21 ± 2,03 (14)], G50 [5,53 ± 1,81

(13)], G100 (3,22 ± 0,86 (18)], para a administração i.p e C [8,92 ± 1,27

(13)], G25 [12,58 ± 2,96 (12)], G50 [4,33 ± 0,99 (12)], G100 [5,33 ±

1,22 (12)]. A figura 4.1.3. mostra que a administração i.p. do OEG

promove uma redução no NR, da ordem de 75% para G100 e 58%

para o grupo G50, ambos comparados ao grupo C. Não se observa,

entretanto, diferença de efeito do ponto de vista estatístico entre as

doses de 50 e 100 mg/Kg de OEG. Tal fato sugere que o efeito

máximo (diminuição do NR) seja alcançado com a dose de 100 mg/Kg,

quando administrado via i.p. A administração oral, por sua vez,

apresenta efeitos farmacológicos semelhantes aqueles apresentados

pelo OEG, quando administrado via intraperitoneal: as doses de 50 e

100 mg/Kg reduzem o NR em torno de 51% e 40%, respectivamente,

quando comparado ao grupo C, não apresentando diferenças

significativas entre si.

Os dados apresentados para os parâmetros movimento aleatório

espontâneo, número de grooming e rearing corroboram para o fato de

que a ação do OEG sobre a atividade locomotora de camundongos

ocorre de maneira dose-dependente, sendo seu efeito máximo obtido

com a dose de 100 mg/Kg, seja a administração i.p. ou v.o.

4. RESULTADOS

Figura 4.1.1. Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, i.p.) sobre o número

de cruzamentos de camundongos submetidos ao teste do campo

aberto.

A atividade locomotora (número de cruzamentos) foi o parâmetro

estudado. Os resultados foram expressos em média ± EPM. Para

análise estatística foram utilizados ANOVA e teste de Student-

Newman-Keuls como teste post hoc. Os resultados foram

considerados estatisticamente significativos (a, b; quando comparado

ao controle (C) e OEG 25 mg/kg (G25), respectivamente) para valores

de p < 0,05.

C G25 G50 G100

Movimento Aleatório

Espontâneo / 5min

a,b

4. RESULTADOS

Figura 4.1.2. Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, i.p.) sobre o número

de grooming de camundongos submetidos ao teste do campo aberto.

O número de grooming foi o parâmetro estudado. Os resultados foram

expressos em média ± EPM. Para análise estatística foram utilizados

ANOVA e teste de Student-Newman-Keuls como teste post hoc. Os

resultados foram considerados estatisticamente significativos (a, b;

quando comparado ao controle (C) e OEG 25 mg/kg (G25),

respectivamente) para valores de p < 0,05.

CG25G50G100

Número de Grooming / 5min

a,b

4. RESULTADOS

Figura 4.1.3. Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, i.p.) sobre o número

de rearing de camundongos submetidos ao teste do campo aberto.

O número de rearing foi o parâmetro estudado. Os resultados foram

expressos em média ± EPM. Para análise estatística foram utilizados

ANOVA e teste de Student-Newman-Keuls como teste post hoc. Os

resultados foram considerados estatisticamente significativos (a, b;

quando comparado ao controle (C) e OEG 25 mg/kg (G25),

respectivamente) para valores de p < 0,05.

C G25 G50 G100

Número de Rearing / 5min

a,b

4. RESULTADOS

Figura 4.1.4. Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, v.o.) sobre o

número de cruzamentos de camundongos submetidos ao teste do

campo aberto.

A atividade locomotora (número de cruzamentos) foi o parâmetro

estudado. Os resultados foram expressos em média ± EPM. Para

análise estatística foram utilizados ANOVA e teste de Student-

Newman-Keuls como teste post hoc. Os resultados foram

considerados estatisticamente significativos (a; quando comparado ao

controle (C)) para valores de p < 0,05.

C G25 G50 G100

Movimento Aleatório

Espontâneo / 5min

4. RESULTADOS

Figura 4.1.5. Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, v.o.) sobre o

número de grooming de camundongos submetidos ao teste do campo

aberto.

O número de grooming foi o parâmetro estudado. Os resultados foram

expressos em média ± EPM. Para análise estatística foram utilizados

ANOVA e teste de Student-Newman-Keuls como teste post hoc. Os

resultados foram considerados estatisticamente significativos (a;

quando comparado a OEG 25 mg/kg (G25), respectivamente) para

valores de p < 0,05.

C G25 G50 G100

Número de Grooming / 5min

4. RESULTADOS

Figura 4.1.6. Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, v.o.) sobre o

número de rearing de camundongos submetidos ao teste do campo

aberto.

O número de rearing foi o parâmetro estudado. Os resultados foram

expressos em média ± EPM. Para análise estatística foram utilizados

ANOVA e teste de Student-Newman-Keuls como teste post hoc. Os

resultados foram considerados estatisticamente significativos (a;

quando comparado a OEG 25 mg/kg (G25), respectivamente) para

valores de p < 0,05.

C G25 G50 G100

Número de

Rearing

/ 5min

4. RESULTADOS

• Teste do rota rod (avaliação da coordenação motora):

Os animais tratados por sete dias com o OEG, nas doses de 25,

50 e 100 mg/Kg, via intraperitoneal ou oral, não apresentaram

alteração alguma na coordenação motora (número de quedas - NQ e

tempo de permanência - TP na barra giratória), quando comparados

aos animais do grupo C (ver Tabelas 4.1.3. e 4.1.4.).

4. RESULTADOS

Tabela 4.1.3. Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, i.p.) em

camundongos submetidos ao teste do rota rod.

“ROTA ROD”

GRUPOS

TP (seg) NQ

44,12 ± 2,98 (25) 2,37 ± 0,17 (27)

G25

52,42 ± 2,97 (14) 2,20 ± 0,26 (15)

G50

52,15 ± 2,72 (13) 2,07 ± 0,30 (14)

G100

44,94 ± 3,93 (17) 2,11 ± 0,26 (17)

O tempo de permanência (TP) e o número de quedas (NQ) foram os

parâmetros estudados. Os resultados foram expressos em média ±

EPM. O número de animais utilizados encontra-se entre parentesis.

Para análise estatística foram utilizados ANOVA e teste de Student-

Newman-Keuls como teste post hoc.

4. RESULTADOS

Tabela 4.1.4. Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, v.o.) em

camundongos submetidos ao teste do rota rod.

“ROTA ROD”

GRUPOS

TP (seg) NQ

37,50 ± 4,06 (14) 2,56 ± 0,18 (16)

G25

41,84 ± 3,75 (13) 2,69 ± 0,17 (13)

G50

44,53 ± 3,24 (13) 2,26 ± 0,22 (15)

G100

34,75 ± 4,76 (12) 2,61 ± 0,21 (13)

O tempo de permanência (TP) e o número de quedas (NQ) foram os

parâmetros estudados. Os resultados foram expressos em média ±

EPM. O número de animais utilizados encontra-se entre parentesis.

Para análise estatística foram utilizados ANOVA e teste de Student-

Newman-Keuls como teste post hoc.

4. RESULTADOS

• Teste da esquiva-passiva (avaliação do aprendizado e da

memória):

A avaliação dos efeitos do OEG sobre o aprendizado e memória

foi realizada através do teste da esquiva-passiva (EP). Neste modelo,

foi utilizado cloridrato de escopolamina (0,5 mg/Kg, i.p.) como droga

padrão para efeito amnésico. O aprendizado (esquiva 15 min) e a

memória (esquiva 24 h) foram os parâmetros avaliados neste teste.

Para a esquiva 15 min, os resultados da administração i.p. foram os

seguintes: C [257,65 ± 13,71 (31)], E [44,52 ± 5,21 (26)], G25 (270,88

± 22,48 (9)], G25/E (52,98 ± 9,81 (14)], G50 (253,49 ± 23,22 (7)],

G50/E (51,48 ± 6,40 (12)], G100 (167,20 ± 43,29 (9)] e G100/E [72,18

± 21,18 (14)]. Através da figura 4.1.7. pode-se observar que a

administração da escopolamina, sozinha ou associada ao OEG,

causou dano ao aprendizado dos camundongos, o qual foi refletido no

curto período de tempo que o animal levou para entrar no

compartimento escuro do aparelho e receber o choque elétrico

(latência). A escopolamina reduziu o tempo de latência do grupo E em

aproximadamente 82%, comparado ao grupo C. Os valores de latência

dos grupos E, G25/E, G50/E e G100/E não apresentam diferenças

significativas entre si, de forma que o OEG, uma vez associado à

escopolamina, não é capaz de reverter os efeitos amnésicos desta

droga. Por outro lado, quando administrado sozinho, o OEG não

produz alterações cognitivas nos animais, nas doses de 25 e 50

mg/Kg. A dose de 100 mg/Kg, entretanto, promoveu uma redução da

latência, da ordem de 35% em relação ao grupo C, indicando que a

administração diária (8dias) do OEG, na dose de 100 mg/Kg, via i.p.,

causou dano no aprendizado dos camundongos.

4. RESULTADOS

Os valores da esquiva 24 h, por sua vez, diferem bastante

daqueles apresentados pelos mesmos grupos de animais tratados

com OEG via i.p.: C [295,42 ± 3,71 (34)], E [102,44 ± 15,96 (24)], G25

[293,06 ± 6,94 (10)], G25/E [177,75 ± 30,89 (13)], G50 [300 ± 0,00 (7)],

G50/E [187,39 ± 34,84 (12)], G100 [256,05 ± 37,91 (6)] e G100/E

[65,18 ± 17,00 (14)]. Os valores mostram que, após 24 h, os animais

tratados com escopolamina sozinha ou associada ao OEG apresentam

melhora das funções cognitivas, o que pode ser observado pelo

aumento nos valores das latências dos grupos (Figura 4.1.7.), quando

comparados aos valores da esquiva 15 min. O grupo G100, 24 h após

a administração da droga, ainda apresenta um certo dano cognitivo, o

qual é mais acentuado quando o OEG é associado à escopolamina

(grupo G100/E). A associação parece potencializar o efeito amnésico

da escopolamina. Isto pode ser observado na figura 4.1.7. onde o valor

da latência para o grupo G100/E ainda permanece bastante diminuído,

mesmo após um período de 24 h da administração das drogas.

Os efeitos cognitivos observados com a administração oral do

OEG assumem um perfil semelhante àquele visto com a administração

i.p. do óleo: C [205,08 ± 26,59 (17)], E [38,81 ± 8,73 (10)], G25 [149,53

± 33,76 (10), G25/E [35,83 ± 8,77 (9)], G50 [164,5 ± 39,78 (10)], G50/E

[36,91 ± 4,87 (9)], G100 [ 126,43 ± 33,51 (10)], G100/E [26,56 ± 5,62

(8)], para esquiva 15 min e C [297,48 ± 1,77 (16)], E [156,41 ± 42,41

(10)], G25 [277,31 ± 18,11 (9)], G25/E [266,34 ± 37,21 (10)], G50

[300,00 ± 0,00 (10)], G50/E [108,8 ± 33,94 (10)], G100 [300,00 ± 0,00

(9)], G100/E [54,58 ± 9,71 (9)], para esquiva 24 h.

Seja para a esquiva 15 min ou 24 h, a administração oral do

OEG não é capaz de reverter os efeitos amnésicos da escopolamina,

4. RESULTADOS

como pode ser visto nas figuras 4.1.8. e 4.1.9. No primeiro gráfico, os

grupos tratados com OEG associado à escopolamina apresentam

valores de latência semelhantes aos do grupo E. Neste mesmo

gráfico, a administração do OEG sozinho não provoca alterações

cognitivas nas doses de 25 e 50 mg/Kg. Ocorreu, entretanto, uma

tendência para a redução da latência no grupo G100. Este fenômeno

ocorreu, provavelmente, devido à via de administração utilizada (v.o.)

não favorecer a completa absorção da droga. Ao se observar a figura

4.1.9. percebe-se que, 24 h após a administração das drogas, os

grupos tratados com escopolamina (sozinha ou associada)

apresentam uma melhor preformance no teste da EP, indicando

recuperação dos efeitos amnésicos da escopolamina. Estes grupos,

entretando, ainda apresentam diferenças significativas em relação aos

grupos que receberam apenas veículo ou OEG. Observa-se também

que o OEG, nas doses de 50 e 100 mg/Kg, quando associado à

escopolamina, potencializa os efeitos desta última droga.

4. RESULTADOS

Figura 4.1.7. Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, i.p.) em

camundongos submetidos ao teste da esquiva-passiva ( esquiva 15

min).

A latência para entrar no compartimento escuro, 15 min após o treino,

foi o parâmetro estudado. Os resultados foram expressos em média ±

EPM. Para análise estatística foram utilizados ANOVA e teste de

Student-Newman-Keuls como teste post hoc. Os resultados foram

considerados estatisticamente significativos (a, b, c, d, e; quando

comparado ao controle (C), escopolamina (E), OEG 25mg/kg (G25),

OEG 50 mg/Kg (G50) e OEG 100 mg/Kg (G100), respectivamente)

para valores de p < 0,05.

100

150

200

250

300

350

G10

G100/E

Latência / 300seg

a,c

a,e

a,b,c,d

a,b,c,d,e

4. RESULTADOS

Figura 4.1.8. Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, i.p.) em

camundongos submetidos ao teste da esquiva-passiva (esquiva 24 h).

A latência para entrar no compartimento escuro, 24 h após o treino, foi

o parâmetro estudado. Os resultados foram expressos em média ±

EPM. Para análise estatística foram utilizados ANOVA e teste de

Student-Newman-Keuls como teste post hoc. Os resultados foram

considerados estatisticamente significativos (a, b, c, d, e, f, g; quando

comparado ao controle (C), escopolamina (E), OEG 25 mg/kg (G25),

OEG 25 mg/kg + escopolamina (G25/E), OEG 50 mg/Kg (G50), OEG

50 mg/Kg + escopolamina (G50/E), OEG 100 mg/Kg (G100),

respectivamente) para valores de p < 0,05.

100

150

200

250

300

350

G25/E

G50

G100/E

Latência / 300seg

a,b,c

a,b,e

a,d,f,g

4. RESULTADOS

Figura 4.1.9. Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, v.o.) em

camundongos submetidos ao teste da esquiva-passiva (esquiva 15

min).

A latência para entrar no compartimento escuro, 15 min após o treino,

foi o parâmetro estudado. Os resultados foram expressos em média ±

EPM. Para análise estatística foram utilizados ANOVA e teste de

Student-Newman-Keuls como teste post hoc. Os resultados foram

considerados estatisticamente significativos (a, b, c, d; quando

comparado ao controle (C), escopolamina (E), OEG 25 mg/kg (G25), e

OEG 50 mg/Kg (G50), respectivamente) para valores de p < 0,05.

100

150

200

250

G25

G25/E

G50

G100

Latência / 300seg

a,c

a,d

4. RESULTADOS

Figura 4.1.10. Efeito do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg, v.o.) em

camundongos submetidos ao teste da esquiva-passiva (esquiva 24 h).

A latência para entrar no compartimento escuro, 24 h após o treino, foi

o parâmetro estudado. Os resultados foram expressos em média ±

EPM. Para análise estatística foram utilizados ANOVA e teste de

Student-Newman-Keuls como teste post hoc. Os resultados foram

considerados estatisticamente significativos (a, b, c, d, e; quando

comparado ao controle (C), escopolamina (E), OEG 25 mg/kg +

escopolamina (G25/E), OEG 50 mg/Kg (G50) e OEG 100 mg/Kg

(G100), respectivamente) para valores de p < 0,05.

100

150

200

250

300

350

G25

G50

G50/E

G100

00/E

Latência / 300seg

a,c,d

a,b,c,e

4. RESULTADOS

• Teste dos tremores induzidos por oxotremorina:

A administração do OEG (100 mg/Kg, i.p.) reduziu,

significativamente, a intensidade dos tremores induzidos por

oxotremorina em aproximadamente 27%, quando comparado ao grupo

C. O mesmo efeito, entretanto, não foi observado com a dose menor

do óleo essencial (50 mg/Kg, i.p.): C [2,56 ± 0,19 (10)], O/A [0,00 ±

0,00 (10)], G50 [2,16 ± 0,17 (10)] e G100 [1,86 ± 0,19 (10)].

4. RESULTADOS

Figura 4.1.11. Efeito do OEG (50 e 100 mg/Kg, i.p.) sobre os tremores

induzidos por oxotremorina em camundongos.

A intensidade dos tremores induzidos por oxotremorina foi o parâmetro

estudado. Os resultados foram expressos em média ± EPM. Para

análise estatística foram utilizados ANOVA e teste de Student-

Newman-Keuls como teste post hoc. Os resultados foram

considerados estatisticamente significativos (a, b; quando comparado

ao controle (C) e oxotremorina + atropina (O/A), respectivamente) para

valores de p < 0,05.

0,5

1,5

2,5

C O/A O/G50 O/G100

Intensidade dos Tremores

a,b

4. RESULTADOS

4.2. ESTUDO DOS EFEITOS NEUROQUÍMICOS DO OEG:

•

Determinação da concentração das monoaminas e seus

metabólitos em hipocampo e corpo estriado de

camundongos:

A análise química realizada pelo método da cromatografia

líquida de alta eficiência (CLAE) em amostras de tecido cerebral

(hipocampo e corpo estriado) de camundongos, mostrou que o

tratamento diário com OEG (100 mg/Kg, i.p.) promoveu alterações na

concentração de alguns neurotransmissores e metabólitos no

hipocampo e corpo estriado daqueles animais. Os resultados estão

devidamente representados na tabela 4.2.1.

A análise dos resultados obtidos em hipocampo mostram que o

OEG promoveu uma diminuição da concentração de DA e seu

metabólito DOPAC em aproximadamente 75% e 64%, em relação aos

seus respectivos controles; o tratamento, entretanto, não alterou a

concentração de HVA, um outro metabólito da DA. Observa-se

também que houve um aumento da concentração de 5HT de

aproximadamente 80% em relação ao grupo controle; o seu metabólito

(5HIAA), entretanto, não apresentou alteração significativa.

A análise dos resultados obtidos em corpo estriado forneceu

alguns valores, cujo perfil difere daquele descrito no parágrafo anterior:

a concentração de DA mostrou-se diminuída aproximadamente 40%

em relação ao grupo controle e o seu metabólito (DOPAC) apresentou

um aumento de concentração de aproximadamente 15% em relação

ao seu respectivo grupo controle. A concentração de HVA não sofreu

modificação significativa. Os níveis de 5HT aumentaram (81%) com a

4. RESULTADOS

administração diária do OEG, porém, o seu metabólito 5HIAA não

sofreu alterações. A análise do conteúdo de NE no corpo estriado

mostrou um aumento significativo (aproximadamente 22%) da

concentração do neurotransmissor, em relação ao grupo controle.

4. RESULTADOS

Tabela 4.2.1. Efeito do OEG (100 mg/Kg, i.p.) sobre a concentração

das monoaminas e seus metabólitos em hipocampo e corpo estriado

de camundongos.

CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA EFICIÊNCIA (CLAE)

CONCENTRAÇÃO (ng/g Tecido) MONOAMINAS

METABÓLITOS

GRUPO

HIPOCAMPO C. ESTRIADO

C _

189,21 ± 15,20 (8)

G100 _

243,86 ± 26,11*(13)

50,41 ± 15,74 (5) 1.846,63 ± 186,52 (9)

G100

12,58 ± 3,61*(7) 1.104,00 ± 80,65*(12)

DOPAC

54,53 ± 15,71 (5) 1.442,67 ± 174,49 (9)

G100

19,15 ± 3,96*(6) 1.700,51 ± 282,10*(13)

5HT

32,36 ± 7,00 (6) 51,05 ± 12,12 (7)

G100

166,14 ± 38,41*(6) 273,39 ± 52,38* (13)

5HIAA

247,06 ± 41,95 (7) 64,25 ± 16,91 (7)

G100

321,71 ± 64,67 (7) 94,16 ± 14,47 (12)

HVA

70,37 ± 9,18 (6) 708,07 ± 76,07 (8)

G100

88,87 ± 20,51 (9) 336,96 ± 60,01 (13)

A concentração das monoaminas e metabólitos em hipocampo e corpo

estriado de camundongos foram os parâmetros estudados. Os

resultados foram expressos em média ± EPM. O número de animais

utilizados encontra-se entre parentesis. Para análise estatística foram

utilizados ANOVA e teste t de Student; os resultados foram

considerados estatisticamente significativos (*) para valores de p <

0,05.

4. RESULTADOS

4.3. ESTUDO DOS EFEITOS TÓXICOS DO OEG:

•

Avaliação dos efeitos farmacológicos gerais (teste

hipocrático) e da toxicidade do OEG:

A administração aguda do OEG (200, 400 e 800 mg/Kg, i.p.)

promoveu sedação em todos os animais tratados. Este efeito ocorreu

de maneira dose-dependente e a ação da droga teve início por volta

de 10-15 minutos após a administração do óleo. Durante a ação da

droga os animais mostravam-se bastante passivos, apresentando

diminuição da motilidade e do comportamento exploratório.

As doses de 200 e 400 mg/Kg não apresentaram nenhum outro

efeito farmacológico; a dose de 800 mg/Kg, entretanto produziu uma

leve diminuição da frequência respiratória, sem que houvesse prejuízo

às condições vitais dos animais. Durante todo o período de

observação (08 dias) não foi observada a ocorrência de morte dos

animais tratados.

A administração diária (8 dias) do OEG (25, 50 e 100 mg/Kg,

v.o. e i.p.) não produziu outro efeito farmacológico diferente daqueles

já observados. Alguns animais tratados com OEG (50 e 100 mg/Kg,

v.o. e i.p.) apresentaram diarréia.

4. RESULTADOS

• Avaliação do efeito do OEG sobre a função hepática de

ratos tratados com tetracloreto de carbono (CCl4):

Os resultados referentes à ação do OEG sobre a função

hepática de ratos tratados com CCl4 estão representados na tabela

4.3.1. e figuras 4.3.1., 4.3.2. e 4.3.3. Como se pode observar, os

valores da atividade da enzima fosfatase alcalina não sofreram

alteração alguma de acordo com o protocolo experimental utilizado

(Tabela 4.3.1.). Os valores de bilirrubina também não apresentaram

alterações significativas, com exceção do grupo G200, que mostrou

um aumento da concentração plasmática do pigmento em torno de

40% em relação ao grupo controle e 35% em relação ao grupo T. Os

resultados sugerem, portanto, que o OEG na dose de 200 mg/Kg, i.p.

parece potencializar os efeitos hepatotóxicos do tetracloreto de

carbono.

A análise da atividade da enzima ALT/TGP apresentou os

seguintes valores (U/L): C [14,68 ± 1,02 (11)], T [92,34 ± 11,87 (15)],

G50 [120,40 ± 13,83 (10)], G100 [87,50 ± 4,45 (12)] e G200 [43,50 ±

6,48 (6)]. Pode-se observar que a administração do OEG reduziu em

53%a lesão hepática induzida por tetracloreto de carbono. Observa-se

ainda que tal redução ocorreu de maneira dose-dependente (Figura

4.3.2.).

A atividade da enzima AST/TGO, por sua vez, apresentou os

seguintes valores (U/L): C [55,25 ± 3,16 (12)], T [145,4 ± 9,20 (15)],

G50 [139,11 ± 6,23 (9)], G100 [125,00 ± 6,36 (10)] e G200 [111,00 ±

7,18 (6)]. Estes resultados reforçam a hipótese de que a dose de 200

mg/Kg de OEG protegeu o tecido hepático contra os efeitos tóxicos do

4. RESULTADOS

tetracloreto de carbono, mostrando uma redução da lesão hepática de

aproximadamente 23% em relação ao grupo T. Observa-se, também,

a ocorrência de um efeito dose-dependente muito sutil, de acordo com

a figura 4.3.3.

4. RESULTADOS

Tabela 4.3.1. Efeito do OEG (50, 100 e 200 mg/Kg, i.p.) sobre a

atividade da enzima fosfatase alcalina em soro de ratos tratados com

tetracloreto de carbono (CCl4).

GRUPOS ATIVIDADE DA ENZIMA FOSFATASE

ALCALINA

3,14 ± 0,30 (7)

3,98 ± 0,35 (6)

G50

4,15 ± 0,66 (6)

G100

4,91 ± 0,67 (6)

G200

3,80 ± 0,15 (6)

A atividade da enzima fosfatase alcalina foi o parâmetro estudado. Os

resultados foram expressos em média ± EPM. O número de animais

utilizados encontra-se entre parentesis. Para análise estatística foram

utilizados ANOVA e teste de Student-Newman-Keuls como teste post

hoc.

4. RESULTADOS

Figura 4.3.1. Efeito do OEG (50, 100 e 200 mg/Kg, i.p.) sobre a

concentração plasmática de bilirrubina em ratos tratados com

tetracloreto de carbono (CCl4).

A concentração plasmática de bilirrubina foi o parâmetro estudado. Os

resultados foram expressos em média ± EPM. Para análise estatística

foram utilizados ANOVA e teste de Student-Newman-Keuls como teste

post hoc. Os resultados foram considerados estatisticamente

significativos (a,b,c,d; quando comparado a C, T, OEG 50 mg/Kg

(G50) e OEG 100 mg/kg (G100), respectivamente) para valores de p <

0,05.

C T G50 G100 G200

Bilirrubina (mg/dL)

a,b,c,d

4. RESULTADOS

Figura 4.3.2. Efeito do OEG (50, 100 e 200 mg/Kg, i.p.) sobre a

atividade da enzima ALT/TGP em soro de ratos tratados com

tetracloreto de carbono (CCl4).

A atividade da enzima ALT/TGP foi o parâmetro estudado. Os

resultados foram expressos em média ± EPM. Para análise estatística

foram utilizados ANOVA e teste de Student-Newman-Keuls como teste

post hoc. Os resultados foram considerados estatisticamente

significativos (a,b,c,d; quando comparado a C, T, OEG 50 mg/Kg

(G50) e OEG 100 mg/kg (G100), respectivamente) para valores de p <

0,05.

100

150

C T G50 G100 G200

ALT/TGP (U/L)

b,c,d

4. RESULTADOS

Figura 4.3.3. Efeito do OEG (50, 100 e 200 mg/Kg, i.p.) sobre a

atividade da enzima AST/TGO em soro de ratos tratados com

tetracloreto de carbono (CCl4).

A atividade da enzima AST/TGO foi o parâmetro estudado. Os

resultados foram expressos em média ± EPM. Para análise estatística

foram utilizados ANOVA e teste de Student-Newman-Keuls como teste

post hoc. Os resultados foram considerados estatisticamente

significativos (a,b; quando comparado a C e T, respectivamente) para

valores de p < 0,05.

100

150

200

C T G50 G100 G200

AST/TGO (U/L)

a,b

5. DISCUSSÃO

5.1. ESTUDO DOS EFEITOS COMPORTAMNTAIS E

NEUROQUÍMICOS DO OEG:

Zingiber officinale Roscoe, membro da família Zingiberaceae,

conhecido popularmente como gengibre, é amplamente utilizado como

condimento em muitas partes do mundo. Durante séculos, os rizomas

desta planta têm sido utilizados como remédio natural na tradicional

medicina chinesa e indiana para o tratamento de uma série de

doenças, tais como reumatismo, asma, constipação, diabetes e etc. O

gengibre contém um grande número de ingredientes ativos presentes

em seus rizomas. Estas estruturas, ao sofrerem o processo de

destilação, produzem um óleo essencial que contém uma grande

quantidade de hidrocarbonetos sesquiterpenos, sendo o zingibereno o

principal constituinte do óleo essencial (Govindarajan, 1982). Outro

constituinte químico abundante no óleo essencial do gengibre é o

citral, composto bastante conhecido por sua atividade depressora

central (Vale et al., 1999).

A literatura disponível ainda não oferece informações suficientes

a respeito das ações centrais do óleo essencial de gengibre e de seus

principais constituintes químicos. Com o intuito de contribuir para um

maior conhecimento dos efeitos do óleo essencial de gengibre sobre o

sistema nervoso central, o presente trabalho estudou a possível

utilidade do óleo essencial como uma droga adjuvante no tratamento

de alguns transtornos comportamentais. Desta forma, o óleo essencial

do gengibre apresentou efeitos farmacológicos interessantes, cuja

importância será discutida a seguir.

A ansiedade é um termo utilizado para descrever um estado

emocional normal associado ao stress ou dificuldade psicológica

5. DISCUSSÃO

associada a uma condição patológica. Quando a ansiedade é crônica

e não está claramente associada a um evento bem definido, ela é

geralmente considerada anormal e própria para uma intervenção

psicológica ou psiquiátrica. Embora muitas formas de tratamento

sejam aplicadas, a ansiedade é atualmente tratada com drogas

ansiolíticas (Sanger, 1991).

Atualmente, o Labirinto em cruz elevado (LCE) é um dos

métodos mais populares, através do qual a ansiedade pode ser

medida em roedores (Montgomery, 1958; Pellow et al., 1985). Neste

modelo um rato (ou camundongo) é colocado no centro do labirinto

para livre exploração daquele ambiente (Rodgers et al., 1993; Rodgers

et al., 1997; Andersen et al., 2000).

Sabe-se que a relutância dos roedores em explorar os braços

abertos do labirinto é causada mais pelo medo que esses animais têm

de espaços abertos, do que pela própria altura do aparelho (Pellow et

al., 1985; Falter et al., 1992; Fernandes et al., 1996). Treit et al. (1993)

forneceram evidências de que a ausência da proteção lateral nos

braços abertos seria mais importante do que a altura, no

desencadeamento do medo no LCE, ou seja, o labirinto é um modelo

de ansiedade animal baseado no medo inato de que os roedores

possuem de ficar em espaços abertos e elevados.

Várias drogas ansiolíticas usadas rotineiramente

(benzodiazepínicos e alguns anticonvulsivantes) estão entre as

classes de drogas que modulam alostericamente os receptores GABA

(Olson, 2002). O ácido gama-amino butírico (GABA) é o

neurotransmissor inibitório predominante no sistema nervoso central e

5. DISCUSSÃO

o seu receptor (GABAA) é o principal alvo farmacológico de drogas

usadas em psiquiatria para induzir ansiólise e sedação.

Nos testes realizados no presente trabalho, o composto

ansiolítico diazepam (1,0 mg/Kg) comprovou sua atividade ansiolítica

no teste do LCE ao aumentar os parâmetros estudados (TPBA- tempo

de permanência nos braços abertos e NEBA- número de entradas nos

braços abertos) em relação ao grupo controle. A administração diária

do OEG, entretanto não alterou o comportamento dos animais tratados

no modelo do LCE, quando comparado ao diazepam e ao grupo

controle; isto ocorreu possivelmente pelo fato do constituinte químico

majoritário do óleo essencial (zingibereno) ser destituído de atividade

farmacológica do tipo benzodiazepínica (ansiolítica). Hansenorhl et al.

(1996) afirmam que o extrato padronizado hidrossolúvel (Zingicomb)

preparado a partir dos rizomas de Zingiber officinale Roscoe e das

folhas de Gingko biloba apresenta potente ação ansiolítica no modelo

do LCE. Os resultados obtidos no presente trabalho discordam, em

parte, daqueles apresentados por Hasenorhl. A disparidade de

resultados pode ser justificada pelo fato do material utilizado nos

trabalhos (óleo essencial e extrato padronizado - Zingicomb)

apresentar composição química diferente e, consequentemente, ação

farmacológica distinta.

O efeito ansiolítico do fitofármaco Zingicomb, portanto, parece

ocorrer em função da associação entre os rizomas de Zingiber

officinale Roscoe e as folhas de Gingko biloba, visto que os autores

ora citados (Hasenorhl et al., 1996) afirmam que os componentes

isolados do fitofármaco não apresentam efeito farmacológico no teste

do labirinto em cruz elevado. Esta última observação reforça o fato de

que o rizoma de Zingiber officinale Roscoe, per si, parece ser

5. DISCUSSÃO

destituído de constituintes químicos com efeito ansiolítico comprovado

no teste do LCE.

Hasenohrl et al. (1998) afirmam ainda que algumas drogas de

origem vegetal, como os rizomas pulverizados de gengibre, possuem a

propriedade de antagonizar os receptores para o neurotransmissor

serotonina (5HT). Na busca de drogas alternativas ao uso de

compostos benzodiazepínicos, antagonistas do receptor serotonérgico

(5HT3) têm sido estudados por causa de seus potenciais usos no

tratamento de desordens relacionadas ao medo e ansiedade (Costall

et al., 1992). Alguns constituintes químicos dos rizomas de Zingiber

officinale Roscoe, tais como os gingeróis e galactonas diterpenóides

são potentes antagonistas dos receptores serotonérgicos (Huang et al,

1990; Huang et al, 1991), os quais se encontram localizados no

hipocampo e amígdala, regiões do sistema límbico envolvidas na

gênese do medo e ansiedade (Kilpatrick et al., 1987). A administração

diária do OEG promoveu um aumento significativo da concentração de

serotonina no hipocampo dos animais tratados. Isto explicaria o fato de

o OEG ser destituído da atividade ansiolítica, relatada por alguns

autores.

O LCE é uma excelente ferramenta para detectar compostos

que tenham ação com o complexo receptor GABAA/Benzodiazepínico.

Este teste mostra-se muito sensível para determinar a influência do

receptor GABAA/Benzodiazepínico no processo de ansiedade, visto

que, outras drogas como a buspirona, que envolvem receptores

serotonérgicos, apresentam resultados muito variáveis em relação ao

modelo citado (Rodgers et al., 1997). Esta afirmação reforça os

resultados obtidos com o OEG no labirinto em cruz elevado,

5. DISCUSSÃO

mostrando a ausência de efeito ansiolítico do óleo essencial nas doses

e vias de administração utilizadas.

Pellow et al. (1985) afirmam que compostos que aumentam o

número de entradas nos braços abertos do LCE, como os

benzodiazepínicos, diminuem o comportamento exploratório e a

atividade motora de animais tratados; entretanto, compostos que não

apresentam efeito sobre a ansiedade, como o haloperidol e

antidepressivos tricíclicos, também diminuem o comportamento

exploratório e a atividade locomotora. Esta afirmação reforça os

resultados obtidos com o OEG no modelo do campo aberto, pois a

administração diária (i.p. ou v.o.) do óleo essencial diminuiu a

atividade exploratória (MAE, grooming e rearing) dos animais sem, no

entanto, apresentar efeito algum no modelo do LCE.

Testes de atividade locomotora e exploração em roedores são

largamente utilizados na avaliação de agentes psicotrópicos. Para

tanto, uma grande variedade de aparatos são utilizados como, por

exemplo, o campo aberto (Archer, 1973).

Atualmente, o campo aberto é um dos modelos animais mais

populares no campo da psicologia (Belzung, 1999). Neste modelo, um

animal (usualmente um roedor) é inserido em um ambiente

desconhecido, cuja escapatória seja impossibilitada pela presença de

paredes laterais que cercam este ambiente (Walsh et al., 1976).

Os efeitos de diferentes tipos de drogas têm sido investigados

no modelo do campo aberto, incluindo compostos com efeitos

ansiolíticos (benzodiazepínicos, neuropeptídeos e drogas

serotonérgicas), estimulantes (anfetaminas, cocaína), sedativos

5. DISCUSSÃO

(neurolépticos) ou indutores de prostração (drogas epileptogênicas)

(Prut et al., 2003). O modelo do campo aberto, portanto, possibilita

discutir a especificidade do efeito de uma droga, caso ela seja

estimulante, sedativa, ansiolítica ou ansiogênica (Lister, 1987).

O aumento da atividade locomotora pode ser considerado um

efeito estimulante, enquanto que a diminuição da atividade vertical

(NR) e horizontal (NC) são relacionados à sedação (Prut et al., 2003).

A administração diária do OEG promoveu diminuição da atividade

exploratória horizontal (NC), vertical (NR) e do comportamento de

auto-limpeza (NG) nos animais tratados com o óleo essencial nas

doses de 50 e 100mg/Kg.

A diminuição da atividade motora espontânea fornece uma

indicação do nível de excitabilidade do sistema nervoso central

(Mansur et al., 1971). Desta forma, os resultados revelam um

interessante efeito depressor (sedativo) do óleo essencial, o qual

ocorre de forma dose-dependente e cujo efeito máximo é obtido com a

dose de 100 mg/Kg, quando administrada via intraperitoneal. O

mesmo não pode ser observado com a administração oral da droga,

devido possivelmente à via de administração utilizada, a qual favorece

uma menor biodisponibilidade e o efeito farmacológico esperado não

ocorre em toda a sua plenitude.

Algumas plantas aromáticas do Nordeste do Brasil, como, por

exemplo, Lippia alba, apresentam efeito depressor no sistema nervoso

central, o qual parece ocorrer devido à presença de citral, um

componente químico presente em grande quantidade no óleo

essencial extraído das folhas da planta. O efeito deste constituinte

assemelha-se aquele observado com o composto diazepam (Matos et

5. DISCUSSÃO

al., 1999). Estudos das ações farmacológicas do citral sobre o sistema

nervoso central revelam que esta substância diminui a atividade

locomotora no campo aberto, reduz o tempo total de imobilidade e

potencializa a ação da imipramina do teste do nado forçado (Komori et

al., 1995). Desta forma, a presença de citral como um dos constituintes

químicos majoritários do OEG reforça o fato de que o óleo essencial

apresenta importante efeito sedativo no modelo do campo aberto.

Quase todas as espécies de animais passam uma grande parte

do tempo em comportamento de grooming (MacFarland et al., 1974).

Embora vários neurotransmissores possam modular a expressão

desse comportamento (Moody et al., 1988; Traber et al., 1988), a

dopamina está particularmente envolvida no processo (Cools et al.,

1988; Drago et al., 1999). O comportamento de grooming em roedores

ocorre pela estimulação e bloqueio dos sub-tipos de receptores

dopaminérgicos (Starr et al., 1986; Cromwell et al, 1996). Os

receptores dopaminérgicos dividem-se em duas famílias: a família D1-

símile, a qual inclui os subtipos D1 e D5 e a família D2-símile, que

inclui os subtipos D2, D3 e D4. Esses receptores realizam suas ações

por se acoplarem e ativarem diferentes complexos de proteínas G. Os

receptores D1-símile interagem com o complexo de proteínas Gs,

resultando em ativação da adenilil ciclase e aumento nos níveis de

AMPc intracelular. Os receptores D2-símile interagem com um

complexo de proteínas Gi com consequente inibição da produção de

AMPc (Cooper et al., 1991; Civelli et al., 1993; De Keyser, 1993).

A administração diária do OEG provocou uma diminuição do

número de “grooming” apresentado pelos animais no teste do CA. O

efeito apresentado pelo OEG sobre o número de grooming corrobora

com o fato de que o óleo essencial parece exercer um importante

5. DISCUSSÃO

efeito farmacológico sobre o sistema dopaminérgico, o qual é o

principal alvo farmacológico da terapia antipsicótica. A diminuição da

atividade locomotora e do comportamento exploratório nos grupos

tratados com OEG revela a ocorrência de efeitos farmacológicos

comuns àqueles observados com o uso de drogas antipsicóticas

(Bruhwyler et al., 1991). A análise da concentração das monoaminas e

seus respectivos metabólitos em corpo estriado dos animais tratados

com OEG revelou que o óleo essencial de gengibre diminuiu os níveis

de DA e aumentou a concentração do metabólito DOPAC. A

diminuição do neurotransmissor naquela área cerebral justifica a

ocorrência do efeito sedativo da droga em estudo. O mecanismo

envolvido neste processo parece ocorrer em função de um possível

aumento do metabolismo da DA, o que leva a uma diminuição do

neurotransmissor e consequente aumento da concentração do seu

respectivo metabólito (DOPAC).

A coordenação motora é um comportamento complexo e pode

refletir equilíbrio, força muscular e alterações na deambulação.

Dificuldades na performance motora pode prejudicar a realização de

testes comportamentias, tais como aprendizado e memória,

exploração e motivação. Um dos testes mais utilizados para o estudo

da coordenação motora é o teste do rota rod (Bogo et al., 1981). Este

teste foi popularizado por Dunham e Miya com a finalidade de avaliar

déficits neurológicos em ratos e camundongos (Rustay et al., 2003).

O tratamento diário com o OEG não produziu qualquer alteração

da coordenação motora nos animais submetidos ao teste do rota rod.

Este fato reflete a segurança quanto ao uso da droga, que, nas doses

e vias de administração utilizadas mostrou-se desprovida de qualquer

efeito tóxico central que comprometa a coordenação motora. De

5. DISCUSSÃO

acordo com Massaquoi et al. (1998), a perda da coordenação motora é

uma característica comum de muitas desordens neurológicas e um

dos efeitos farmacológicos mais facilmente observáveis em casos de

intoxicação. Sob este ponto de vista, o óleo essencial do gengibre

parece ser desprovido de qualquer potencial neurotóxico, de acordo

com o protocolo utilizado neste trabalho.

Rustay et al. (2003) recomendam que sejam utilizadas múltiplas

doses de drogas a serem testadas no modelo do rota rod, porque

muitos agentes depressores, como o etanol (Pohorecky 1977; Dudek

et al., 1994), barbitúricos (Dudek et al., 1994), benzodiazepínicos

(Crabbe et al., 1998) e alguns antagonistas glutamatérgicos (Diana et

al., 1994; Starr et al., 1994) podem apresentar efeito locomotor

bifásico, isto é, produzir estimulação em baixas doses e sedação em

doses maiores. O efeito bifásico mencionado anteriormente não foi

observado com a administração do OEG nas doses de 25, 50 e 100

mg/Kg, via oral ou intraperitoneal. A ocorrência de sedação com a

dose de 100 mg/Kg, entretanto, não foi capaz de produzir qualquer

déficit motor no teste do “rota rod”.

Drogas com ação depressora central alteram a coordenação

motora e habilidades manuais (Dale et al., 2001), prejudicando a

execução de atividades que exigem reflexo e um bom controle motor.

Este efeito de relaxamento muscular é observado com drogas do

grupo dos hipnóticos-sedativos, particularmente os benzodiazepínicos.

Estas drogas inibem os reflexos polissinápticos e a transmissão

internuncial e, em altas doses, podem deprimir a transmissão na

junção neuromuscular esquelética (Katsung, 2003). Os resultados

obtidos com o OEG no teste do rota rod são de fato importantes, pois

revelam que o óleo essencial, no protocolo utilizado, é desprovido de

5. DISCUSSÃO

100

efeitos prejudiciais ao desempenho motor e esta característica é de

grande valia quando se deseja uma droga com ação sedativa que não

cause comprometimento da coordenação motora.

Em poucas áreas das neurociências houve tantos avanços nos

últimos 10 anos como no referente aos mecanismos fisiológicos e

moleculares da formação ou consolidação da memória. Memória é a

aquisição, a formação, a conservação e a evocação de informações. A

aquisição é também chamada de aprendizagem: só se “grava” aquilo

que foi aprendido. A evocação é também chamada de recordação,

lembrança, recuperação (Izquierdo, 2002).

Evidências clínicas e experimentais têm dado suporte para a

hipótese de que o sistema colinérgico no cérebro está envolvido em

processos mnemônicos (Decker et al., 1991; Fibiger, 1991; Gallagher

et al, 1995). Hasselmo e colaboradores (Hasselmo et al., 1993;

Hasselmo, 1995) estudaram a influência neuromodulatória colinérgica

sobre o aprendizado e memória no hipocampo e córtex.

A acetilcolina é o neurotransmissor responsável pela

transferência de impulsos dos neurônios colinérgicos de células

nervosas colinoceptivas para células de tecidos inervados (Tucek et

al., 1993). Estudos fisiológicos sobre a acetilcolina indicam que o seu

efeito neuromodulador em nível celular é diverso, causando facilitação

sináptica e supressão, bem como hiperpolarização direta e

despolarização, tudo isto na mesma área cortical (Kimura et al., 1999).

Há mais de 86 anos atrás, Dale em 1914, dividiu as ações da

acetilcolina em muscarínicas e nicotínicas. Estes efeitos são mediados

por duas classes distintas de receptores que possuem pouca coisa em

5. DISCUSSÃO

101

comum, a não ser a habilidade de se ligar à acetilcolina (Ehlert et al.,

1995).

Experimentos comportamentais indicam que a acetilcolina está

envolvida em uma grande variedade de funções cognitivas, tais como

percepção, atenção seletiva, aprendizado associativo e memória

(Hasselmo, 1995; Everit et al., 1997; Holland, 1997). O papel do

sistema colinérgico sobre o aprendizado e memória tem sido

exaustivamente estudado (Watts et al., 1981; Bartus et al., 1982;

Murray et al., 1986).

Os receptores muscarínicos são amplamente distribuídos em

todo o corpo e exercem inúmeras funções vitais no cérebro e no

sistema nervoso autonômico. No cérebro, os receptores muscarínicos

são importantes na memória (Drachman et al., 1974; Safer et al.,

1971) e na fisiopatofisiologia de doenças afetivas (Janowsky et al.,

1972; Sitaram et al., 1980) e esquizofrenia (Tandon et al., 1991;

Tandon et al., 1992). Devido ao seu possível papel na função cognitiva

os receptores muscarínicos são alvo de pesquisa no caso da doença

de Alzheimer.

A doença de Alzheimer é caracterizada por uma disfunção

colinérgica no neocórtex e hipocampo, a qual é diretamente

proporcional à severidade do déficit cognitivo em pacientes que

apresentam a doença (Perry et al., 1978; Wilcock et al., 1982). Esses

achados levaram à busca de agentes que aumentem o nível de

acetilcolina no cérebro (Isoame et al., 2003). Com este propósito,

foram estudadas as ações do OEG sobre as funções cognitivas

(aprendizado e memória) de camundongos submetidos ao teste da

esquiva-passiva. Este teste mimetiza um déficit colinérgico, como

5. DISCUSSÃO

102

aquele observado na doença de Alzheimer, o qual se reflete nas

funções cognitivas do animal. Tal efeito é obtido com a administração

intraperitoneal de um antagonista colinérgico (escopolamina), o qual

altera a performance cognitiva de animais experimentais em uma

grande variedade de testes de aprendizado e memória, como no caso

da esquiva-passiva (Isoame et al., 2003).

O OEG apresentou um efeito inesperado, porém bastante

interessante: a administração do óleo essencial promoveu um déficit

no aprendizado e na memória dos camundongos, quando submetidos

à esquiva de 15 min e 24 horas, respectivamente. Este efeito foi mais

evidenciado com a dose de 100mg/Kg, i.p. e v.o. Quando associado à

escopolamina, o OEG parece potencializar os efeitos cognitivos da

droga. No modelo da esquiva-passiva, o OEG aparenta possuir um

efeito anticolinérgico. Tal evidência é apoiada por Prado-Alcalá et al.

(1993), ao afirmar que em muitos casos, a administração central ou

sistêmica de drogas anticolinérgicas ou lesões do sistema colinérgico

causam déficit na memória, enquanto que drogas que aumentam a

atividade colinérgica exercem o efeito contrário. Este resultado, um

tanto desapontador, descarta a possibilidade do OEG ser uma droga

adjuvante no tratamento da doença de Alzheimer, visto que o uso do

óleo essencial poderia piorar o déficit cognitivo causado pela patologia.

Hasenohrl et al. (1998) ao estudar o efeito do fitofármaco

Zingicomb sobre a memória de ratos submetidos aos testes da

esquiva-passiva e do labirinto aquático de Morris, concluiram que o

fitofármaco é desprovido de qualquer efeito negativo sobre as funções

cognitivas (aprendizado e memória). Estes resultados contrastam com

aqueles obtidos no presente trabalho, uma vez que o OEG, no teste da

esquiva-passiva, parece potencializar o efeito amnésico da

5. DISCUSSÃO

103

escopolamina. Em adição, o efeito positivo do Zingicomb sobre a

memória pode ser o resultado da ação farmacológica do Gingko

biloba, componente do fitofármaco com comprovada atividade

neuroprotetora (Oberpichler et al., 1988; Droy-Lefaix et al., 1995).

Sabe-se ainda que extratos de Gingko biloba causam melhora do

aprendizado (Stoll et al., 1996) e da memória em ratos velhos (Petkov

et al., 1993) e atenuam a amnésia induzida pela escopolamina no

teste da esquiva-passiva (Chopin et al., 1992). É bem possível,

portanto, que o efeito do Zingicomb sobre as funções cognitivas dos

animais seja exercido pelo Gingko biloba, e não pela associação com

Zingiber officinale Roscoe.

A oxotremorina é uma droga agonista dos receptores

muscarínicos e sua atividade tremorogênica parece ser mediada

principalmente através da estimulação central do sistema colinérgico

(Bebbington et al., 1966). Ao reverter os tremores induzidos por

oxotremorina, o OEG (100 mg/Kg, i.p.) comprovou exercer um efeito

antagonista sobre o sistema colinérgico, confirmando a hipótese de

que o óleo essencial produz déficit cognitivo sozinho ou quando

associado à escopolamina, potencializando os efeitos anticolinérgicos

desta droga no modelo da esquiva-pasiva.

A análise do conteúdo das monoaminas e seus metabólitos em

hipocampo de camundongos tratados com OEG mostrou que o óleo

essencial diminuiu significativamente os níveis de DA, DOPAC. A

diminuição dessas substâncias parece ter participação no déficit

cognitivo induzido pelo OEG. Denemberg et al. (2004) afirmam que o

sistema dopaminérgico está implicado em processos cognitivos em

uma grande variedade de áreas cerebrais, incluindo o sistema

mesolímbico, e que a dopamina endógena parece ser um fator

5. DISCUSSÃO

104

regulador importante em alterações sinápticas observadas durante

certos estágios dos processos de aprendizado, memória e plasticidade

sináptica (Weiss et al., 2003). Em adição, Jay (2003) afirma que a

administração de serotonina (5HT) produz um déficit significante no

teste da esquiva-passiva; isto ocorre porque os receptores 5HT estão

envolvidos nos efeitos amnésicos da serotonina. O aumento da

concentração de 5HT e a diminuição de DA e DOPAC no hipocampo

dos animais tratados com OEG parece exercer um efeito adicional

sobre o déficit cognitivo observado nos animais tratados com OEG.

5. DISCUSSÃO

105

5.2. ESTUDO DOS EFEITOS TÓXICOS DO OEG:

A administração aguda do OEG, nas doses de 200, 400 e 800

mg/Kg não provocou qualquer efeito tóxico nos animais tratados.

Mascolo et al., (1989) afirmam que a DL50 aguda do gengibre em

ratos é maior que 5 g do óleo por quilograma de peso corpóreo,

mostrando que o composto em questão apresenta uma baixa

toxicidade. Os efeitos farmacológicos obtidos com a administração

aguda do óleo essencial diferem muito pouco daqueles observados

quando o OEG é administrado durante oito dias consecutivos, nas

doses de 25, 50 e 100 mg/Kg, v.o. e i.p. A administração diária do

OEG, entretanto, provocou diarréia em alguns animais que receberam

a droga nas doses de 50 e 100 mg/Kg, v.o. e i.p. O gengibre exibe

seus efeitos mais proeminentes no sistema gastrointestinal, onde

parece estimular a motilidade gastrointestinal (Suekawa et al., 1984;

Suekawa et al., 1986). De fato, os efeitos do gengibre em aumentar a

motilidade intestinal são similares aos efeitos da metoclopramida

(Yamahara et al., 1990), o que justifica a ocorrência de diarréia em

alguns animais tratados com o óleo essencial.

Existe um grande número de drogas de origem natural,

utilizadas como hepatoprotetores na tradicional medicina chinesa e

indiana. Os mecanismos de ação envolvidos no processo diferem

bastante; muitas dessas drogas agem como sequestradores de

radicais livres, outras como inibidoras enzimáticas ou até mesmo como

mitógenos. Os antioxidantes e sequestradores de radicais livres têm

sido usados particularmente no estudo do mecanismo de toxicidade

induzido pelo tetracloreto de carbono (CCl4), protegendo as células

hepáticas contra o dano induzido pelo CCl4, ao quebrar a reação em

cadeia da peroxidação lipídica (Weber et al., 2003).

5. DISCUSSÃO

106

De Groot et al., (1986) afirmam que a ação tóxica de alguns

compostos químicos parece ser originada da destruição dos ácidos

graxos poliinsaturados ligados à membrana durante o processo de

peroxidação lipídica. De fato, a toxicidade de compostos químicos ou

de seus metabólitos pode ser o resultado de interações covalentes

(primárias) com alvos moleculares críticos, tais como o DNA, lipídeos,

proteínas e carboidratos, ou de alterações de processos bioquímicos

(peroxidação lipídica e geração de espécies reativas de oxigênio)

(Weber et al., 2003).

O fígado é o principal sítio para que os efeitos tóxicos do

tetracloreto de carbono se manifestem. Mudanças patológicas que

seguem o envenenamento por CCl4 têm sido identificadas a nível

bioquímico e ultraestrutural (Reynolds, 1963). O tetracloreto de

carbono CCl4, uma hepatotoxina, tem sido usado durante décadas

para induzir dano hepático em vários modelos experimentais para

elucidar os mecanismos envolvidos no processo de hepatotoxicidade

(Hardin, 1954). Após a administração oral, o CCl4 é concentrado no

fígado e atinge um nível máximo de cerca de 1 mg por grama de

tecido hepático em um intervalo de tempo de 1 a 2 horas (Reynolds,

1963). Os primeiros achados histológicos de dano hepático podem ser

observados de 5 a 6 horas após a administração do composto, tempo

no qual o processo de necrose tem início (Lockard et al., 1983). Após

12 horas, uma zona central de necrose torna-se evidente, que evolui

para uma necrose maciça no intervalo de 24 a 48 horas (Zimmermann,

1976).

O dano hepático induzido por CCl4 é caracterizado pela

alteração de um grande número de funções celulares e as alterações

bioquímicas ocorrem antes que o dano histológico seja evidente.

5. DISCUSSÃO

107

Nesse período ocorre um aumento nos lipídeos microssomais, que

pode ser observado 3 horas após a administração de CCl4, porém o

dano mitocondrial ainda não é evidente (Recknagel et al., 1959).

O CCl4 pertence ao grupo de hepatotoxinas que necessitam de

ativação metabólica para desencadear suas ações tóxicas (Monks et

al., 1988; Nelson et al., 1990). O metabolismo da droga tem início com

a formação do radical livre triclorometil CCl3* (McCay et al., 1984)

através da ação do sistema de oxigenases de função mista do

citocromo P450 do retículo endoplasmático (Slater, 1984; Nelson et al.,

1987). Este processo envolve a clivagem redutora da ligação carbono-

cloro. O radical CCl3* formado reage com várias substâncias de

importância biológica, tais como os aminoácidos, nucleotídeos, ácidos

graxos, proteínas, ácidos nucléicos e lipídeos (Castro, 1984), retirando

delas um átomo de hidrogênio, especialmente dos ácidos graxos

insaturados, com consequente formação de moléculas de clorofórmio.

Na presença do hidrogênio, o radical CCl3* é convertido a outro radical

livre, o preoxil-triclorometil (CCl3OO*).

O radical CCl3OO* reage prontamente com os ácidos graxos

poliinsaturados, retirando átomos de hidrogênio destes compostos,

dando início ao processo de peroxidação lipídica. A retirada de átomos

de hidrogênio dos ácidos graxos inicia uma série complexa de reações

que culminam com a desintegração completa das moléculas de ácidos

graxos poliinsaturados e a formação aldeídos, grupamentos carbonil e

alcanos (Cheeseman et al., 1985; Comporti, 1985; Tribble et al., 1987).

Na China e Japão, o gengibre é um ingrediente bastante

utilizado para o tratamento de desordens gastrointestinais e hepáticas

(Iwu, 1993). Tal fato tem sido comprovado com os resultados do

5. DISCUSSÃO

108

presente estudo, os quais mostraram que o OEG realmente apresenta

ação hepatoprotetora, ao diminuir a lesão hepática induzida por

tetracloreto de carbono em ratos, como foi evidenciado através da

análise da atividade das enzimas ALT/TGP e AST/TGO.

O aumento plasmático das enzimas aminotransferases ocorre

como consequência da peroxidação lipídica induzida pelo CCl4. Este

processo destrói a membrana plasmática dos hepatócitos,

promovendo a liberação daquelas enzimas para a corrente sanguínea.

A determinação de ALT e AST em amostras de sangue fornece,

portanto, um perfil da função hepática, sendo a ALT mais sensível na

detecção de lesão hepatocelular. Valores de ALT são iguais ou

superiores aos de AST na maioria dos casos de hepatite viral, icterícia

pós-hepática ou colestase intra-hepática. Nos casos de cirrose

hepática, hepatite alcóolica ou carcinoma metastático, os valores de

ALT são inferiores aos de AST (http://www.labtest.com.br

). O processo

de cirrose induzido em ratos através do CCl4 parece ser similar ao que

ocorre em seres humanos (Tamayo, 1983). A administração do OEG

(200 mg/Kg, i.p.) ao reduzir os valores das aminotransferases mostrou-

se eficaz no tratamento da cirrose hepática quimicamente induzida.

Dhuley et al. (1997); Goleet al. (1997) e Mitra et al. (1999)

afirmam que 2 mL de CCl4 corresponde à melhor dose para induzir o

dano hepático, uma vez que ocorre um aumento significativo da

atividade das enzimas ALT, AST e FA e dos níveis séricos de

bilirrubina, sem que ocorra a morte dos animais. Doses menores de

tetracloreto de carbono causam um aumento da atividade das enzimas

ALT e AST e pouca alteração da atividade da FA e dos níveis de

bilirrubina (Janakat et al., 2002). Um perfil semelhante a este foi

reproduzido no presente trabalho: a administração de 0,5 mL/Kg de

5. DISCUSSÃO

109

CCl4 (50% em óleo de oliva, i.p.) aumentou a atividade das enzimas

ALT e AST e o tratamento com o OEG diminuiu, de maneira dose-

dependente, a atividade das aminotransferases. A enzima FA não

sofreu alteração alguma. Os valores de bilirrubina, entretanto,

apresentaram-se surpreendentemente elevados no grupo G200. Tal

fato, entretanto, não contradiz os resultados obtidos através da

atividade das enzimas ALT e AST, visto que estas enzimas são

marcadores mais sensíveis da lesão aguda dos hepatócitos. A

bilirrubina, entretanto, pode apresentar-se elevada no plasma como

uma consequência de vários fatores, a saber: hemólise; incapacidade

do mecanismo de conjugação no interior do hepatócito e obstrução do

sistema biliar (Gaw et al., 2001).

O mecanismo bioquímico envolvido no desenvolvimento da

hepatotoxicidade induzida por CCl4 já é bastante conhecido, de forma

que a geração do radical livre triclorometil a partir do metabolismo do

CCl4 é o fator crucial na patogênese da lesão hepática quimicamente

induzida (Clawson, 1989). Ahmed et al. (1999) comprovaram a ação

anti-oxidante do gengibre em animais experimentais. Este fato reforça

a hipótese de que o OEG parece exercer uma ação hepatoprotetora

ao combater a peroxidação lipídica gerada pelo metabolismo hepático

do CCl4 com a formação subsequente de radicais livres, altamente

lesivos.

Alguns achados mostram que a toxicidade induzida por CCl4

pode ser revertida por meio de um pré-tratamento com inibidores do

metabolismo do CCl4 (Brady et al., 1991) e compostos com ação

antioxidante (Min et al., 1992; Paduraru et al., 1996). Ahmed et al.

(2000) mostraram que o gengibre inibe a peroxidação lipídica ao

modular a atividade das enzimas anti-oxidantes (SOD, Catalase,

5. DISCUSSÃO

110

Glutathiona peroxidase), o que protegeria o tecido hepático contra o

stress oxidativo. Este, portanto, parece ser o mecanismo responsável

pelo efeito hepatoprotetor do OEG, em ratos.

6. CONCLUSÕES

111

6. CONCLUSÕES:

• O OEG, nas doses e vias de administração utilizadas, não

apresentou efeito ansiolítico no modelo do LCE;

• O OEG diminuiu o número de cruzamentos, de grooming e de

rearing dos animais tratados diariamente com o óleo essencial

nas doses de 50 e 100 mg/Kg, i.p.;

• O efeito sedativo do OEG ocorre de forma dose-dependente e o

efeito máximo da droga parece ocorrer com a dose de 100

mg/Kg, i.p.;

• A administração oral do OEG diminuiu o movimento aleatório

espontâneo, o número de grooming e rearing dos animais

tratados diariamente com o óleo essencial na dose de 100

mg/Kg, i.p.;

• O OEG, nas doses e vias de administração utilizadas, não

alterou a coordenação motora dos animais no teste do RR;

• No teste dos tremores induzidos por oxotremorina o OEG (100

mg/Gg, i.p.) apresentou efeito anticolinérgico ao reduzir a

intensidade dos tremores;

• A administraçãpo diária do OEG diminuiu os níveis de DA e

aumentou a concentração de DOPAC e 5HT em hipocampo de

camundongos tratados com OEG (100 mg/Kg, i.p.);

6. CONCLUSÕES

112

• A administraçãpo diária do OEG diminuiu os níveis de DA,

DOPAC e aumentou a concentração de 5HT em corpo estriado

de camundongos tratados com OEG (100 mg/Kg, i.p.);

• O efeito sedativo do OEG parece ocorrer como o resultado da

diminuição de DA e conseqüente aumento do seu metabólito

(DOPAC) no corpo estriado dos animais tratados com o óleo

essencial;

• A administração do OEG (50 e 100 mg/Kg, i.p. e v.o.), sozinho

ou associado à escopolamina, promoveu uma perda de memória

nos animais no teste da EP. Este efeito ainda era evidente

mesmo após o tempo de 24 horas da administração do óleo

essencial;

• O efeito amnésico do OEG ocorre como o resultado da ação do

óleo essencial sobre o sistema colinérgico (ação anti-

colinérgica);

• A diminuição da concentração de DA e o aumento de 5HT no

hipocampo de camundongos tratados com OEG parece

influenciar no dano cognitivo observado nos animais tratados

com OEG;

• O OEG administrado diariamente (25, 50 e 100 mg/Kg, i.p. e

v.o.) mostrou ser uma droga relativamente segura, visto que não

apresentou outros efeitos tóxicos além de diarréia apresentada

por alguns animais tratados com OEG nas doses de 50 e 100

mg/Kg, i.p e v.o.;

6. CONCLUSÕES

113

• A administração de doses maiores do OEG (200, 400 e 800

mg/Kg, i.p.) não apresentou outro efeito, além da sedação já

observada com doses menores da droga;

• O OEG (200 mg/Kg, i.p.) apresentou efeito hepatoprotetor,

reverter a lesão hepática induzida por CCl4. Este efeito foi

observado através da diminuição da atividade das enzimas AST

e ALT no soro dos animais;

• O efeito hepatoprotetor do OEG parece ocorrer como o

resultado da ação anti-oxidante do óleo essencial sobre os

radicais livres formados a partir do metabolismo hepático do

CCl4.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

114

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

ADAMS RP, Identification of essential oils by ion trap mass

spectroscopy. San Diego. Academic Press Inc 1989, San Diego.

AFZAL M, AL-HADIDI D, MENON M, PESEK J, DHAMI MSI. Ginger:

na ethnomedical chemical and pharmacological review. Drug

Metabolism and Drug Interactions 2001; 18: 160-190.

AHMED RS, SHARMA SB. Biochemical studies on combined effects of

garlic (Allium sativum Linn.) and ginger (Zingiber officinale Rosc.) in

albino rats. Indian J Exp Biol 1997; 35: 841-843.

AHMED RS, SETH V, BANERJEE BD. Influence if dietary ginger

(Zingiber officinale Rosc) on the antioxidant defensesystem in rat:

comparision with ascorbic acid. Indian Journal of Experimental Biology

1999.

AHMED RS, SETH V, PASHA ST, BANERJEE BD. Influence if dietary

ginger (Zingiber officinale Rosc) on oxidative stress induced by

malathion in rats. Food and Chemical Toxicology 2000; 38:433-50.

AL-YAHYA MA, RAFATULLAH S, MOSSA JS, AGEEL AM, PARMAR

NS, TARIQ M. Gastroprotective activity of ginger Zingiber officinale

Rosc., in albino rats. Am J Chin Med 1989; 17:51-6.

ALENCAR JW, CRAVEIRO AA, MATOS FJA. Kovats indices

simulation essential analysis. Quimica Nova 1990; 13 (4): 282-284.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

115

ANDERSEN IL, BOE KE, FOEREVIK G, JANCZAK AM, BAKKEN M.

Behavioural evaluation of methods for assessing fear responses in

weaned pigs. Appl. Anim. Behav. Sci. 2000; 69; 227–240.

ANDREWS LS, CADWALADER KR, GRONDER RM, CHUNG HY.

Chemical and microbial quality of irradiated ground ginger. J Food Sci

1995; 60: 829-832.

ANONYMOUS. Monographs on the medicinal uses of plants. Exeter:

European Scientific Cooperative on Phytotherapy, 1997.

ÁVILA JR, FETROW CW. Manual de Medicina Alternativa para o

Profissional. Rio de Janeiro, Guanabara Koogan, 2000.

BACKON J. Ginger as antiemetic: possible side effects due to its

thromboxane syntetase activity. Anaesthesia 1991; 46: 705-706.

BACKON J. Ginger: inhibition of thromboxane synthetase and

stimulation of prostacyclin: relevance for medicine and psychiatry. Med

Hypotheses 1986; 20:271-8.

BACKON J. Implication of thromboxane in the pathogenesis of

Kawasaki disease and suggestion for using novel thromboxane

syntetase inhibitors in its treatment. Med Hypotheses 1991; 34: 230-

231.

BARTUS RT, DEAN RL, BEER B, LIPPA AS. The cholinergic

hypothesis of geriatric memory dysfunction critical review. Science

1982; 217: 408– 414.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

116

BEBBINGTON A, BRIMBELCOMBE R W, SHAKESHAFT D. The

central and peripheral activity of acetylenic amines related to

oxotremorine. Br. J. Pharmacol. 1966; 26:56–67.

BELZUNG C. Measuring exploratory behavior. In: Crusio, W.E., Gerlai,

R.T. (Eds.), Handbook of Molecular Genetic Techniques for Brain and

Behavior Research (Techniques in the Behavioral and Neural

Sciences). Elsevier, Amsterdam 1999; pp. 739– 749.

BORDIA A, VERMA SK, SRIVASTAVA KC. Effect of ginger (Zingiber

officinale Rosc.) and fenugreek (Trigonella foenumgraecum L.) on

blood lipids, blood sugar and platelet aggregation in patients with

coronary artery disease. Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids

1997; 56:379-84.

BHANDARI U, SHARMA JN, ZAFAR R. The protective action of

ethanolic ginger (Zingiber officinale) extract in cholesterol fed rabbits. J

Ethnopharmacol 1998; 61:167-71.

BLUMENTTHAL M. Herb industry sees mergers, acquisitions and entry

by pharmaceutical giants in 1998. Herbal Gram 1999; 45: 67-68.

BLUMENTAL M, BRUSSE WR, GOLDBERG A, GRUENWALD J,

HALL T, RIGGINS CW, RISTER RS. The complete german

commission E monographs. Therapeutic guide to herbal medicines.

The American Botanical Council, Austin, TX, USA 1998.

BOGO V, HILL TA, YOUNG RW. Comparison of accelerod and rotarod

sensitivity in detecting ethanol- and acrylamide-induced performance

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

117

decrement in rats: review of experimental considerations of rotating rod

systems. Neurotoxicology 1981; 2:765–87.

BRADY JF, XIAO F, WANG MH, LI Y, NING SM, GAPAC JM, YANG

CS. Effects of disulfiram on hepatic P-450 2E1, other microsomal

enzymes, and hepatotoxicity in rats. Toxicol Appl Pharmacol 1991;

108: 366-73.

BRINKER FJ. Herb contraindications and drug interactions : with

appendices addressing specific conditions and medicines. Sandy, Or.:

Eclectic Institute, 1997:146.

BRUHWYLER J, CHLEIDE E, LIEGEOIS JF, DELARGE J, MERCIER

M. Effects of specific dopaminergic agonists and antagonists in the

open-field test. Pharmacol. Biochem. Behav. 1991; 39: 367-371.

CASTRO JA. Mechanistic studies and prevention of free radical cell

injury. In: Paton W., Mitchell J., and Turner P. (Eds.), Proceedings of

IUPHAR 9th Int. Congress Pharmacol., MacMillan, London, 1984; pp.

243–250.

CHEESEMAN KH, ALBANO EF, TOMASI A, SLATER TF. Biochemical

studies on the metabolic activity of halogenated alkanes. Environ.

Health Perspect. 1985; 64:85–101.

CHEN HC, CHANG MD, CHANG TJ. Antibacterial properties of some

spice plants before and after heat treatment. Chung Hua Min Kuo Wei

Sheng Wu Chi Mien I Hsueh Tsa Chih 1985; 18:190-5.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

118

CHOPIN P, BRILLEY M. Effects of o]four non-cholinergic cognitive

enhancers in comparation with tacrine and galanthamine on

scopolamine-induced amnesia in rats. Psycopharmacol 1992; 106:26-

30.

CIVELLI O, BUNZOW JR, GRANDY DK. Molecular diversity of the

dopamine receptors. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1993; 32: 281-307.

CLAWSON GA. Mechanism of carbon tetrachloride hepatotoxicity.

Pathol Immunopathol Res 1989; 8: 104-12.

COMPORTI M. Lipid peroxidation and cellular damage in toxic liver

injury. Lab. Invest. 1985; 53:599–623.

COLE BJ, HILLMANN M, SEIDELMANN D, KLEWER M, JONES GH.

Effects of benzodiazepine receptor partial inverse agonists in the

elevated plus maze test of anxiety in the rat. Psychopharmacology

(Berl.) 1995; 121: 118-126.

CONNELL D, SUTHERLAND M. A re-examination of gingerol, shogaol

and zingerone, the pungent principles of Ginger (Zingiber officinale

Roscoe). Aust J Chem 1969; 22: 1033-43.

COOLS AR, SPRUIJT BM, ELENBROEK BA. Role of central

dopamine in ACTH-induced grooming behaviour in rats. In: ColbernDL

& Gispen WH (Editors). Neural mechanisms and biological significance

of grooming behaviour. Annals of the New York Academy of Sciences

1988; 252: 338-350.

CORRÊA MP, Dicionário das plantas úteis no Brasil e das exóticas

cultivadas por M. Pio Corrêa. Imprensa Nacional- Ministério da

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

119

Agricultura, Serviço de Informação Agrícola 1926; Volume III: 380-

384.

COOPER JR, BLOOM FE, ROTH RH. The Biochemical basis of

neuropharmacology 6th ed. New York: Oxford University 1991.

COSTALL B, NAYLOR RJ. Anxiolytic potential of 5-HT3 receptor

antagonists. Pharmacol. Toxicol. 1992; 70: 157–162.

COWARD D M, DOGGETT N S, SAYERS A C. The pharmacology of

N-carbamoyl-2-(2,6-dichlorophenyl)acetamidine hydrochloride (LON-

954) a new tremorogenic agent. Drug Res. 1977; 27:2326–2332;

CRABBE JC, GALLAHER EJ, CROSS SJ, BELKNAP JK. Genetic

determinants of sensitivity to diazepam in inbred mice. Behav Neurosci

1998; 112: 668–77.

CRAGG GM, NEWMAN DJ, SNADER KM, natural products in drug

discovery and development. Journal of Natural Products 1997; 60: 52-

60.

CROMWELL HC, BERRIDGE KC. Implementation of action sequences

by a neostriatal site: a lesion mapping study of grooming syntax.

Journal of Neuroscience 1996; 16: 3444-3458.

DECKER MW, MCGAUGH JL. The role of interactions between the

cholinergic system and other neuromodulatory systems in learning and

memory. Synapse 1991; 7:151–168.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

120

DE GROOT H, NOLL T. The crucial role of low steady state oxygen

partial pressure in haloalkane free radical induced lipid peroxidation.

Possible implications in haloalkane liver injury. Biochem. Pharmacol

1986; 35:15-19.

DE KEYSER J. Subtypes and localization of dopamine receptors in

human brain. Neurochem. Int. 1993; 22: 83-93.

DENYER CV, JACKSON P, LOAKES DM, ELLIS MR, YOUNG DA.

Isolation of antirhinoviral sesquiterpenes from ginger (Zingiber

officinale). J Nat Prod 1994; 57:658-62.

DESAI HG, KALRO RH, CHOKSI AP. Effect of ginger & garlic on DNA

content of gastric aspirate. Indian J Med Res 1990; 92:139-41.

DE SMET PAGM. The role of plant-derived drugs and herbal

medicines in health care. Drugs 1997; 54: 801-840.

DIANA G, SAGRATELLA S. Different capability of N-methyl-D-

aspartate antagonists to affect locomotor/exploratory activity of mice in

a computerized on-line open field test. Pharmacol Biochem Behav

1994; 48: 291–5.

DHULEY JN, NAIK SR. Protective effect of Rhinax, a herbal

formulation, against CCl4-induced liver injury and survival in rats.

Journal of Ethnopharmacology 1997; 56:59–164.

DRACHMAN DA, LEAVITT J. Human memory and the cholinergic

system. A relationship to aging? Arch Neurol. 1974; 30(2):113-21.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

121

DRAGO F, CONTARINO A, BUSA L. the expression of neuropeptide-

induced excessive grooming behaviour in dopamine D1 and D2

receptor-deficient mice. European Journal of Pharmacology 1999; 365:

125-131.

DROY-LEFAIX MT, MENERATH JM, SZABO-TOSAKI E,

GUILLAUMIN D, DOLY M. Pprotective effect of Egb 761 on ischemia-

reperfusion damage in the rat retina. Transolant Proc. 1995; 27:2861-

62.

DUDEK BC, TRITTO T, UNDERWOOD KA. Genetic influences on

locomotor activating effects of ethanol and sodium pentobarbital.

Pharmacol Biochem Behav 1994; 48: 593–600.

DUNHAM MW, MIYA TS. A note of a simple apparatus detecting

neurological deficit in rats and mice. Journal of American

Pharmaceutical Science. 1957; 46: 208-209.

EHLERT FJ, THOMAS EA. Functional role of M2 muscarinic receptors

in the guinea pig ileum. Life Sci. 1995; 56(11-12):965-71.

EJECHI BO, SOUZEY JA, AKPOMEDAYE DE. Microbial stability of

mango (Mangifera indica L.) juice preserved by combined application

of mild heat and extracts of two tropical spices. J Food Prot 1998;

61:725-7.

ENDO K, KANNO E, OSHIMA Y. Structures of antifungal

diarylheptenones, gingerenones A, B, C and isogingerenone B,

isolated from the rhizomes of Zingiber officinale. Phytochemistry 1990;

29:797-9.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

122

FALTER U, GOWER AJ, GOBERT J. Resistance of baseline activity in

the elevated plus-maze to exogenous influences. Behav. Pharmacol.

1992; 3: 123-128.

FERNANDES C, FILE SE. The influence of open arm ledges and maze

experience in the elevated plus-maze. Pharmacol. Biochem. Behav.

1996; 54: 31–40.

FIBIGER HC. Cholinergic mechanisms in learning, memory and

dementia: a review of recent evidence. Trends Neurosci. 1991;

14:220–223.

FLYNN D, RAFFERTY M, BOCTOR A. Inhibition of human neutrophil

5-liopxygenase activity by gingerdione, shogaol, capsaicin and related

pungent compounds. Prostaglandins Leukotrienes Med 1986; 24:195-

FRISCH C, HASENOHRL RU, MATTERN CM, HACKER R, HUSTON

JP. Blockade of lithium chloride-induced conditioned place aversion as

a test for antiemetic agents: comparison of metoclopramide with

combined extracts of Zingiber officinale and Ginkgo biloba. Pharmacol

Biochem Behav 1995; 52:321-7.

FUKUZAKI K, KAMENOSONO T, NAGATA R.. Effects of ropinirole on

various parkinsonian models in mice, rats, and cynomolgus monkeys.

Pharmacol Biochem Behav 2000; 65 (3): 503–508.

GALLAGHER M, COLOMBO PJ. Aging and the cholinergic hypothesis

of cognitive decline. Curr. Opin. Neurobiol. 1995; 5:161–168.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

123

GAW A, COWAN RA, O’REILLY DSJ, STEWART MJ, SHEPHERD J.

Bioquímica Clínica. Ed. Guanabara Koogan, 2 ed., 2001, Rio de

Janeiro.

GHAZANFAR AS. Handbook of arabian medicinal plants. Boca raton,

FL; CRC press, 1994; 214-215.

GOLE MK, DASGUPTA S, SUR RK, GHOSAL J. Hepatoprotective

effect of Amoora rohituka. International Journal of Pharmacology 1997;

35(5):318–322.

GOVINDARAJAN VS. Ginger chemistry, technology and quality

evaluation: part 1. CRC Crit Rev Sci Nutr 1982; 17: 1–96.

GRONTVED A, BRASK T, KAMBSKARD J, HENTZER E. Ginger root

against seasickness. A controlled trial on the open sea. Acta Oto-

Laryngol 1988; 105: 45-49.

GRUNWALD J. The european phytomedicines market: figures, trends,

analysis. HerbalGram 1995; 34: 60-65.

GUH JH, KO F-N, JONG T-T, TING C-M. Antiplatelet effect of gingerol

isolated from Zingiber officinale. J Pharmacy Pharmacology 1995;

47:329-32.

GUO P, XU J, XU S, WANG K. Inhibition of hydrogen peroxide

production in chondrocytes induced by fulvic acid by ginger volatile oil.

China J Chinese Materia Medica 1997; 22:559-61.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

124

HALL CS. Emotional behavior in the rat: I. Defecation and urination as

measures of individual differences in emotionality. J. Comp. Psychol.

1934; 18: 385– 403.

HASENÖHRL RU, NICHAU CH, FRISCH CH, DE SOUZA SILVA MA,

HUSTON JP, MATTERN CM, HÄCKER R. Anxiolytic-like effect of

combined extracts of Zingiber officinale and ginkgo biloba in the

elevated plus-maze. Pharmacol. Biochem. Behav. 1996; 53: 271–275.

HASENÖHRL RU, TOPIC B, FRISCH CH, HÄCKER R, MATTERN

CM, HUSTON JP. Dissociation between anxiolytic ans amnestic effects

of combined extracts of Zingiber officinale and Gingko biloba as

opposed to diazepam. Pharmacol. Biochem. Behav. 1998; 59: 527-

535.

HARDIN BL. Carbon tetrachloride poisoning:/a review. Ind. Med. Surg.

1954; 23, 93_/105.

HASSELMO ME, BOWER JM. Acetylcholine and memory. Trends in

Neuroscience 1993: 16(6): 218–222.

HASSELMO ME. Neuromodulation and cortical function: Modeling the

physiological basis of behavior. Behavioural Brain Research 1995;

67(1):1-26.

HASSELMO ME, CEKIC M. Suppression of synaptic transmission may

allow combination of associative feedback and self-organizing

feedforward connections in the neocortex. Behavioural Brain Research

1996; 79: 153–161.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

125

http://www.agriculture-industry-india.com

http://www.colinst.com

http://www.dominioherbal.com

http://www.healathsma.com

http://www.labtest.com.br

http://www.ugobasile.com

http://www.shimadzu.com

HUANG Q, MATSUDA H, SAKAI K, YAMAHARA J, TAMAI Y. The

effect of ginger on serotonin induced hypothermia and diarrhea.

Yakugaku Zasshi 1990; 110: 936–942.

HUANG Q, IWAMOTO M, AOKI S, TANAKA N, TAJIMA K,

YAMAHARA J. Anti-5-hydroxytryptamine effect of galanolactone,

diterpenoid isolated from ginger. Chem Pharm Bull 1991; 39:397-9.

HUANG Q, IWAMOTO M, AOKI S, TANAKA N, TAJIMA K,

YAMAHARA J, TAKAISHI Y, YISHIDA M, TOMIMATSU T, TAMAI Y.

Anti 5-hidroxitryptamine 3 effect of galanolactone, a diterpenoid

isolated from ginger. Chem Pharm Bull (Tokyo) 1991; 3: 397-399.

IMANISHI T, SAWA A, ICHIMARU Y, MIYASHIRO M, KATO S,

YAMAMOTO T, UEKI S. Ameliorating effects of rolipram on

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

126

experimentally induced impairments of learning and memory in

rodents. European Journal of Pharmacology 1996; 321: 273-278.

ISOMAE K, MORIMOTO S HASEGAWA H, MORIT K, KAMEI J.

Effects of T-82, a novel acetylcholinesterase inhibitor, on impaired

learning and memory in passive avoidance task in rats. European

Journal of Pharmacology 2003; 465: 97– 103.

IZQUIERDO I. Memória. Ed. Artmed 2002, Porto Alegre- RS.

IWU MM. Handbook of african medicinal plants. Boca raton, FL; CRC

press, 1993; 263-265.

JANAKAT S, MERIE H. Hepatoprotective effect of Pistacia lentiscus,

Phillyrea latifolia and Nicotiana glauca against carbon tetrachoride

hepatotoxicity. Journal of Ethnopharmacology 2002; 83:135– 138.

JANAKAT S, AL-MERIE H. optimization of the dose and the route of

injection, and characterisationof the time course of carboun

tetrachloride-induced hepatotoxicity in the rat. Journal of

Pharmacological and Toxicological Methods 2003; 48: 41-44.

JANES ME, NANNAPANENI R, JOHNSON MG. Identification and

characterization of two bacteriocin-producing bacteria isolated from

garlic and ginger root. J Food Prot 1999; 62:899-904.

JANOWSKY DS, EL-YOUSEF MK, DAVIS JM, HUBBARD B,

SEKERKE HJ. Cholinergic reversal of manic symptoms. Lancet. 1972

Jun3;1(7762):1236-7.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

127

JANOWSKY DS, EL-YOUSEF K, DAVIS JM, SEKERKE HJ.

Parasympathetic suppression of manic symptoms by physostigmine.

Arch Gen Psychiatry. 1973 Apr;28(4):542-7.

JANSSEN PL, MEYBOOM S, VAN STAVEREN WA, DE VEGT F,

KATAN MB. Consumption of ginger (Zingiber officinale roscoe) does

not affect ex vivo platelet thromboxane production in humans. Eur J

Clin Nutr 1996; 50:772-4.

JAY TM. Dopamine: a potential substrate for synaptic plasticity and

memory mechanisms. Prog. Neurobiol. 2003; 69:375-90.

JEYAKUMAR S, NALINI N, VENUGOPAL M. Antioxidant activity of

ginger in rats fed a high fat diet. Med Sci Res 1999; 27:341-44.

KANERVA L, ESTLANDER T, JOLANKI R. Occupational allergic

contact dermatitis from spices. Contact Derm 1996; 35:157-62.

KANJANAPOTHI D. A uterine relaxant compound from Zingiber

cassumunar. Planta Med 1987; 53:329-32.

KATZUNG BG. Farmacologia básica e clínica. Ed. Guanabara Koogan,

8 ed. 2003, Rio de Janeiro.

KAPIL U, SOOD AK, GAUR DR. Maternal beliefs regarding diet during

common childhood illnesses. Indian Pediatr 1990; 27:595-9.

KILPATRICK GJ, JONES BJ, TYERS MB. Identification and

distribution of 5-HT3 receptors in rat brain using radioligand binding.

Nature 1987; 330: 746–748.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

128

KIMURA F, FUKUDA M, TSUMOTO T. Acetylcholine suppresses the

spread of excitation in the visual cortex revealed by optical recording:

Possible differential effect depending on the source of input. European

Journal of Neuroscience 1999; 11(10): 3597–3609.

KIMURA I, KIMURA M, PANCHO LR. Modulation of eicosanoid-

induced contraction of mouse and rat blood vessels by gingerols. Jpn J

Pharmacol 1989; 30: 253-261.

KIUCHI F, SHIBUYA M, SANKAWA U. Inhibitors of prostaglandin

biosynthesis from ginger. Chem Pharm Bull (Tokyo) 1982; 30:754-7.

KIUKHI F, IWAKAMI S, SHIBUIA M, HANAOKA F, SANKAWA U.

Inhibition of prostaglandin and leukotriene biosyntesis by gingerols and

diary heptanoids. Chem Pharm Bull (Tokyo) 1992; 40: 387-391.

KOBAYASHI M, ISHIDA Y, SHOJI N, OHIZUMI Y. Cardiotonic action

of [8]-gingerol, an activator of the Ca++-pumping adenosine

triphosphatase of sarcoplasmic reticulum, in guinea pig atrial muscle. J

Pharmacol Exp Ther 1988; 246:667-73.

KOBAYASHI M, SHOJI N, OHIZUMI Y. Gingerol, a novel cardiotonic

agent, activates the Ca2+-pumping ATPase in skeletal cardiac

sarcoplasmic reticulum. Biochim Biophys Acta 1987; 903: 96-102.

KRISHNAKANTHA T, LOKESH B, scavering for superoxide anions by

spice principles. Indian J Biochem Biophys 1993; 30: 133-134.

LAWLESS J, Illustred encyclopedia of essential oils. Dorset: element

books, 1995; 14, 236.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

129

LEE E, PARK KK, LEE JM, Suppression of mouse skin tumor

promotion and induction of apoptosis in HL-60 cells by Alpinia

oxyphylla Miquel (Zingiberaceae). Carcinogenesis 1998; 19:1377-81.

LEE E, SURH Y. Induction of apoptosis in HL-60 cells by pungent

vanilloids, 6-gingerol and 6-paradol. Cancer Letters 1998; 134:163-8.

LISTER RG. The use of a plus-maze to mesure anxiety in the mouse.

Psycopharmacology 1987; 29: 180-185.

LOCKARD VG, MEHENDALE HM, O’NEAL RM. Chlordecone-induced

potentiation of carbon tetrachloride hepatotoxicity: a light and electron

microscopy study. Exp. Mol. Pathol. 1983; 39:230–245.

LUMB AB. Effect of dried ginger on human platelet function. Thromb

Haemost 1994; 71:110-1.

MACFARLAND CG, REEDER WC. Cleaning symbiosis involving

Galapagos tortoises and two species of Darwin’s finches. Zeitschrift fur

Tierpsychologie 1974; 34: 464-483.

MASCOLO N, JAIN R, JAIN SC, CAPASSO F. Ethnopharmacologic

investigation of ginger (Zingiber officinale). J Ethnopharmacol 1989;

27:129-40.

MASSAQUOI SG, HALLETT M. Ataxia and other cerebellar

syndromes. In: Jankovic J, Tolosa E, editors. Parkinson’s disease and

movement disorders. Baltimore: Williams & Wilkins; 1998.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

130

MASUR J, MARTZ RMW, CARLINI EA. Effects of acute and chronic

administration of Cannabis sativa and (-) ∆9-trans-

tetrahydrocannabinol on the behaviour of rats in an open-field arena.

Psycopharmacology 1971; 19: 338-397.

MATOS FJA, VIANA GSB. Aromatic medicinal plants from northeast

brazil. Pharmaceutical News 1999; 6: 29-33.

MATSUDA T, MATSUMURA H, OYAMA Y, TAKEDA Y. Synthesis of ±-

cassumunins A and B, new curcuminoid antioxidants having protective

activity in the living cell agonist oxdidative damage. J Nat Prod 1998;

61: 609-613.

MATTHES H, LUU B, OURISSON G. Cytotoxic components of

Zingiber zerumbet, curcuma deoaria and C. domestica. Phytochemistry

1980; 19:2643-50.

MCCAY PB, LAI EK, POYER JL, DUBOSE CM, JANZEN EG. Oxygen

and carbon-centered free radical formation during carbon tetrachloride

metabolism. J. Biol. Chem. 1984; 259:2135–2143.

MCGUFFIN M, HOBBS C, UPTON R, GOLDBERG A. American

Herbal Products Association's Botanical Safety Handbook. Boca

Raton. New York: CRC Press, 1997:231.

MICKLEFIELD GH, REDEKER Y, MEISTER V, JUNG O, GREVING I,

MAY B. Effects of ginger on gastroduodenal motility. Int J Clin

Pharmacol Ther 1999; 37:341-6.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

131

MIN KS, TERANO Y, ONOSAKA S, TANAKA K. Induction of

metallothionein synthesis by menadione or carbon tetrachloride is

independent of free radical production. Toxicol Appl Pharmacol 1992;

113: 74-9.

MISHRA S, KUMAR H, SHARMA D, How do mothers recognize and

treat pneumonia at home? Indian Pediatr 1994; 31: 15-18.

MITRA S, VENKATARANGANNA M, SUNDARAM R,

GOPUMADHAVAN S. Antioxidant activity of AO-8, a herbal formulation

in vitro and in vivo experimental models. Phytotherapy Research 1999;

13:300–303.

MONKS TJ, LAU SS. Reactive intermediates and their toxicological

significance. Toxicology 1988; 52:1–53.

MONTGOMERY KC. The relation between fear induced by novel

stimulation and exploratory behaviour. J Comp Physiol Psychol 1958;

48: 254–60.

MOODY TW, MERALI Z, CRAWLEY JN. The effects of anxiolytics and

other agents on rat grooming behaviour. In: ColbernDL & Gispen WH

(Editors). Neural mechanisms and biological significance of grooming

behaviour. Annals of the New York Academy of Sciences 1988; 525:

281-290.

MURAKAMI A, MORITA H, SAFITRI R, RAMLAN A, KOSHIMIZU K,

OHIGASHI H. Screening for in vitro anti-tumorpromoting activities of

edible plants from Indonesia. Cancer Detect Prev 1998; 22:516-25.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

132

MURRAY CL, FIBRIGER HC. Pilocarpine and physostigmine attenuate

spatial memory impairments produced by lesions of the nucleus basalis

magnocellularis. Behav. Neurosci. 1986; 100: 23– 32.

MUSTAFA T, SRIVASTAVA KC. Ginger (Zingiber officinale) in

migraine headache. J Ethnopharmacol 1990; 29:267-73.

MUSTAFA T, SRIVASTAVA KC, JENSEN KB. Drug development

report (9): Pharmacology of ginger, Zingiber officinale. J Drug Dev

1993; 6: 25-39.

NAGABHUSHAN M, AMONKAR AJ, BHIDE SV. Mutagenicity of

gingerol and shogaol and antimutagenicity of zingerone in

Salmonella/microsome assay. Cancer Lett 1987; 36:221-33.

NAKAMURA H, YAMAMOTO T. Mutagen and anti-mutagen in ginger,

Zingiber officinale. Mutat Res 1982; 103:119-26.

NELSON SD. HARRISON PJ. Roles of cytochrome P450 in chemically

induced cytotoxicity. In: Guengrich F.P. (Ed.), Mammalian

Cytochromes P450. CRC Press, Boca Raton 1987; pp. 19–80.

NELSON SD, PEARSON PG. Covalent and non-covalent interaction in

acute lethal cell injury caused by chemicals. Annu. Rev. Pharmacol.

Toxicol. 1990; 30:169–195.

NEWALL CA, ANDERSON LA, PHILLIPSON JD. Herbal medicines: a

guide for health-care professionals. London: Pharmaceutical Press,

1996:ix, 296.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

133

OBERPRICHLER H, BECK T, ABDEL-RAHMAN MM, BIELENBERG

GW, KRIEGELSTEIN J. Effects of Gingko biloba constituents related

protection against brain damage caused by hypoxia. Pharmacol. Res.

Commum. 1988; 20:349-68.

OLIVEIRA F, AKISUE G. Fundamentos de Farmacobotânica. 2. ed.

São Paulo, Atheneu, 1997.

OLSON R. GABA. In: Davis K, Charney D, Coyle J, Nemeroff C,

editors. Neuropsychopharmacology: The fifth generation of progress.

Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins 2002.

PADURARU I, SARAMET A, DANILA GH, NICHIFOR M, JERCA L,

IACOBOVICI A, UNGUREANU D, FILIP M. Antioxidant action of a new

flavonic derivative in acute carbon tetrachloride intoxication. Eur J Drug

Metab Pharmacokinet 1996; 21: 1-6.

PANCHO L, KIMURA I, UNNO R, KURONO M, KIMURA M. Reversal

effects between crude and processed ginger extracts on PGF 2 alpha-

induced contraction in mouse mesenteric veins. Jpn J Pharmacol 1989;

50: 243-246.

PEARSON D, FRANKEL E, AESCHBACH R. Inhibition of endothelial

cell-mediated oxidation of low-density lipoprotein by rosemary and

plant phenolics. J Agric Food Chem 1997; 45:578-82.

PELLOW S, CHOPIN P, FILE SE, BRILEY M. Validation of open,

closed arm entries in an elevated plus-maze as a measure of anxiety in

the rat. J. Neurosci. Methods 1985; 14: 149-167.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

134

PERRY EK, TOMLINSON BE, BLESSED G, BERGMAN K, GIBSON

PH, PERRY RH. Correlation of cholinergic abnormalities with senile

plaques and mental test scores in senile dementia. Br. Med. J. 1978; 2:

1457– 1459.

POHORECKY LA. Biphasic action of ethanol. Biobehav Rev 1977; 1:

231–40.

PETKOV VD, KEHAYOV R, BELCHEVA S, KONSTANTINOVA E,

PETKOV VV, GETOVA D, MARKOVSKA V. Memory effects of

standardized extracts of Panax ginseng (G115), Gingko biloba

(GK501) and their combination Ginkosan (PHL-00701). Planta Medica

1993; 59:106-14.

PRADO-ALCALA RA, FERNANDEZ-RUIZ J, QUIRART GL.Cholinergic

neurons and memory, in: T.W. Stone (Ed.), Synaptic Transmission 2,

Taylor and Francis Ltd, London, 1993, pp. 57–69.

PRADO-ALCALA RA, SOLANA-FIGUEIROA R, GALINDO LE,

MEDINA AC, QUIRARTE GL. Blockade of striatal 5-HT2 receptors

produces retrograde amnésia in rats. Life Sci. 2003; 74(4):481-8.

PRUT L, BELZUNG C. The open field as a paradigm to mesure the

effects of drugs on anxiety-like behaviours: a review. European Journal

of Pharmacology 2003; 463: 3-33.

PURSEGLOVE, LW. Tropical crops- monocotyledons 2. Longman,

London (1972).

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

135

QIAN DS, LIU ZS. Pharmacologic studies of antimotion sickness

actions of ginger. Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih 1992;

12:95-8, 70.

RANG HP, RITTER JM, DALE MM. Farmacologia. Ed. Guanabara

Koogan, 4 ed. 2001, Rio de Janeiro.

RECKNAGEL RO, ANTHONY DD. Biochemical changes in the carbon

tetrachloride fatty liver: separation of fatty changes from mitochondrial

degeneration. J. Biol. Chem. 1959; 234:1052–1059.

REES KR, SINHA KP. Blood enzymes in liver injury. Journal of

Pathology and Bacteriology 1960; 80:297–307.

REYNOLDS ES. Liver parenchymal cell injury. I. Initial alterations of

the cell following poisoning with carbon tetrachloride. J. Cell Biol. 1963;

19:139–157.

ROBERTS JE, TYLER VE. Tyler’s herbs of choice. The therapeutic

use of phytomedicinals. The Haworth Press, Inc., New York 1998.

RODGERS RJ,COLE JC. Anxiety enhancement in the murine elevated

plus maze by immediate prior exposure to social stressors. Physiol.

Behav. 1993; 53:383-388.

RODGERS RJ, DALVI A. Anxiety, defence and the elevated plusmaze.

Neurosci. Biobehav. Rev. 1997; 21:801-810.

SAFER DJ, ALLEN RP. The central effects of scopolamine in man. Biol

Psychiatry 1971;3(4):347-55.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

136

SANGER DJ. Animal models of anxiety and the screening and

development of novel anxyolitic drugs in Boulton A, Barker G and

Martin-Iverson M (eds.) Neuromethods, v. 19, Animal Models in

Psychiatry, II, 1991.

SAMBAIAH K, SRINIVASAN K. Effect of cumin, cinnamon, ginger,

mustard and tamarind in induced hypercholesterolemic rats. Nahrung

1991; 35:47-51.

SAMBAIAH K, SRINIVASAN K. Influence of spice principles on hepatic

mixed function oxygenase system in rats. Indian J Biochem Biophys

1989; 26: 254-258.

SCHMID R, SCHICK T, STEFFEN R, TSCHOPP A, WILK T.

Comparison of Seven Commonly Used Agents for Prophylaxis of

Seasickness. J Travel Med 1994; 1:203-206.

SHARMA JN, SRIVASTAVA KC, GAN EK. Suppressive effects of

eugenol and ginger oil on arthritic rats. Pharmacology 1994; 49:314-8.

SHARMA SS, KOCHUPILLAI V, GUPTA SK, SETH SD, GUPTA YK.

Antiemetic efficacy of ginger (Zingiber officinale) against cisplatin-

induced emesis in dogs. J Ethnopharmacol 1997; 57:93-6.

SHOJI N, IWASA A, TAKEMOTO T, ISHIDA Y, OHIZUMI Y.

Cardiotonic principles of ginger (Zingiber officinale Roscoe). J Pharm

Sci 1982; 71:11745.

SHU YZ. Recent natural products based drug development. A

pharmaceutical industry perspective. 1998; 61: 1053-1071.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

137

SITARAM N, GILLIN JC. Development and use of pharmacological

probes of the CNS in man: evidence of cholinergic abnormality in

primary affective illness. Biol. Psychiatry. 1980; 15(6): 925-55.

SLATER TF, DELANEY VB. Liver adenosine triphosphate content and

bile flow rate in the rat. Biochem. J. 1970; 116:303–308.

SMEJKALOVA J, SIMEK J, ROUCHAL J, DVORACKOVA I.

Biochemical and histological changes following carbon tetrachloride

induced liver damage in rats of both sexes. Physiologia

Bohemoslovaca 1985; 34 (6):494–501.

SRIVASTAVA KC. Aqueous extracts of onion, garlic and ginger inhibit

platelet aggregation and alter arachidonic acid metabolism. Biomed

Biochim Acta 1984; 43:S335-46.

SRIVASTAVA KC. Isolation and effects of some ginger components of

platelet aggregation and eicosanoid biosynthesis. Prostaglandins

Leukot Med 1986; 25:187-98.

SRIVASTAVA KC, MUSTAFA T. Ginger (Zingiber officinale) and

rheumatic disorders. Med Hypotheses 1989; 29:25-8.

SRIVASTAVA KC, MUSTAFA T. Ginger (Zingiber officinale) in

rheumatism and musculoskeletal disorders. Med Hypotheses 1992;

39:342-8.

SRINIVASAN K, SAMBAIAH K. The effect of spices on cholesterol 7

alpha hydroxylase activity and on serum and hepatic cholesterol levels

in the rat. Internat J Vit Nutr Res 1991; 61:364-69.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

138

STARR BS, STARR MS. Differential effects of dopamine D1 and D2

agonists and antagonists on velocity of movement, rearing and

grooming in the mouse. Implications for the roles of D1 and D2

receptors. Neuropharmacology 1986; 25: 613-619.

STARR MS, STARR BS. Comparison of the effects of NMDA and

AMPA antagonists on the locomotor activity induced by selective D1

and D2 dopamine agonists in reserpine-treated mice.

Psychopharmacology 1994; 114: 469–76.

STOLL S, SCHEUER K, POHL O, MULLER WE. Gingko biloba extract

(Egb 761) independently improves changes in passive avoidance

learning and brain membrane fluidity in the ageing mouse.

Pharmacopsychiat. 1996; 24:144-49.

SUEKAWA M, ISHIGE A, YUASA K, SUDO K, ABURADA M, HOSOYA

E. Pharmacological studies on ginger. I. Pharmacological actions of

pungent constitutents, (6)-gingerol and (6)-shogaol. J Pharmacobio-

Dynamics 1984; 7:836-48.

SUEKAWA M, YUASA K, ISONO M, SONE H, IKEYA Y, SAKAKIBARA

I, ABURADA M, HOSOYA E. Pharmacological studies on ginger. I.

Pharmacological actions of pungent constituints (6)-gingerol nad (6)-

shogaol. J Pharmacobio-Dynamics 1984; 7: 836-848.

SUEKAWA M, YUASA K, ISONO M, SONE H, IKEYA Y, SAKAKIBARA

I, ABURADA M, HOSOYA E. Pharmacological studies on ginger. IV.

Effect of (6)-shogaol on the arachidonic cascade. [Nippon Yakurigaku

Zasshi] Folia Pharmacolog Jpn 1986; 88: 263-269.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

139

SUJATHA R, SRINIVAS L. Modulation of lipid peroxidation by dietary

componenets. Toxicology in vitro 1995; 9:231-36.

SURH YJ, LEE E, LEE JM. Chemoprotective properties of some

pungent ingredients present in red pepper and ginger. Mutat Res 1998;

402:259-67.

TAMAYO RP. Is cirrhosis of the liver experimentally produced by CCl4

na adequate model of human cirrhosis? Hepatology 1983; 3:112-120.

TANABE M, CHEN YD, SAITO K, KANO Y. Cholesterol biosynthesis

inhibitory component from Zingiber officinale Roscoe. Chem Pharm

Bull (Tokyo) 1993; 41:710-3.

TANDON R, GREDEN JF. Negative symptoms of schizophrenia: the

need for conceptual clarity. Biol Psychiatry. 1991 15;30 (4):321-5.

TANDON R, SHIPLEY JE, TAYLOR S, GREDEN JF, EISER A,

DEQUARDO J, GOODSON J. Electroencephalographic sleep

abnormalities in schizophrenia. Relationship to positive/negative

symptoms and prior neuroleptic treatment. Arch Gen Psychiatry. 1992;

49(3):185-94.

TRABER J, SPENCER DG, GLASTER T, GISPEN WH. Actions of

psychoactive drugs on ACTH-and novelty-induced behaviour in the rat.

In: ColbernDL & Gispen WH (Editors). Neural mechanisms and

biological significance of grooming behaviour. Annals of the New York

Academy of Sciences 1988; 525: 270-280.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

140

TREIT D, MENARD J, ROYAN C. Anxiogenic stimuli in the elevated

plus-maze. Pharmacol. Biochem. Behav. 1993; 44: 463-469.

TRIBBLE DL, AW TY, JONES DP. The pathophysiological significance

of lipid peroxidation in oxidative cell injury. Hepatology 1987; 7:377–

386.

TUCEK S, DOLEZAL V. The non-quantal release of acetylcholine from

motor nerve terminals: comment on its likely size. Prog Brain Res.

1993; 98:209-12

VAN BEEK TA, POSTHUMUS MA, LELYVED GP, PHIET HV, YENT

BT. Investigation of the essential oil of vietnamese ginger.

Phytochemistry 1987; 11: 3005-3010.

VALE TG, MATOS FJA, LIMA TCM, VIANA GSB. Behavoioral effects

of essential oils from Lippia alba (Mill) N.E. Brown chemotypes. Journal

of Ethnopharmacology 1999; 167: 127-133.

VIMALA S, NORHANOM AW, YADAVM. Anti-tumour promoter activity

in Malaysian ginger rhizobia used in traditional medicine. Br J Cancer

1999; 80:110-6.

WATTS J, STEVENS R, ROBINSON C. Effects of scopolamine on

radial maze performance in rats. Physiol. Behav. 1981; 26, 845–851.

WEBER LWD, BOLL M, STAMPFL A. Hepatotoxicity and mechanism

of action of haloalkanes: carbon tetrachloride as a toxicological model.

Critical Reviews in Toxicology 2003; 33(2):105–136.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

141

WEISS T, VEH RW, HEINEMANN U. Dopamine depresses cholinergic

oscillatory network activity in rat hippocamous. Eur. J. Neurosci. 2003;

18(9):2573-80.

WILCOCK GK, ESIRI MM, BOWEN DM, SMITH CCT. Alzheimer’s

disease: correlation of cortical choline acetyltransferase activity with

the severity of dementia and histological abnormalities. J. Neurol. Sci.

1982; 57: 407–417.

YAMAHARA J, MOCHIZUKI M, RONG HQ, MATSUDA H, FUJIMARA

H. The anti-ulcer effect in rats of ginger constituints. J Ethnopharmacol

1988, 23: 299-304.

YAMAHARA J, RONG HQ, NAITOH Y, KITANI T, FUJIMURA H.

Inhibition of cytotoxic drug-induced vomiting in suncus by a ginger

constituent. J Ethnopharmacol 1989; 27:353-5.

YAMAHARA J, HUANG QR, LI YH, XU L, FUJIMURA H.

Gastrointestinal motility enhancing effect of ginger and its active

constituents. Chem Pharm Bull (Tokyo) 1990; 38:430-1.

YAMAHARA J, HATAKEYAMA S, TANIGUCHI K, KAWAMURA M,

YOSHIKAWA M. Stomachic principles in ginger. II. Pungent and anti-

ulcer effects of low polar constituents isolated from ginger, the dried

rhizoma of Zingiber officinale Roscoe cultivated in Taiwan. The

absolute stereostructure of a new diarylheptanoid. Yakugaku Zasshi

1992; 112:645-55.

YAMAHARA J, MIKI K, CHISAKA T. Cholagogic effect of ginger and its

active constituents. J Ethnopharmacol 1985; 13:217-25.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

142

YOSHIKAWA M, HATAKEYAMA S, CHATANI N, NISHINO Y,

YAMAHARA J. Qualitative and quantitative analysis of bioactive

principles in Zingiberis Rhizoma by means of high performance liquid

chromatography and gas-liquid chromatography. On the evaluation of

Zingiberis Rhizoma and chemical change of constituents during

Zingiberis Rhizoma processing. Yakugaku Zasshi 1993; 113:307-15.

ZHOU Y, XU R. Antioxidative effect of Chinese drugs. Chung Kuo

Chung Yao Tsa Chih 1992; 17:368-9.

ZIMMERMANN HJ. Experimental hepatotoxicity. In: Eichler O. (Ed.),

Handbook of Experimental Pharmacology, 1976; Vol. 16, part 5,

Springer, New York, pp. 1–120.

Livros Grátis
( http://www.livrosgratis.com.br )
 
Milhares de Livros para Download:
 
Baixar livros de Administração
Baixar livros de Agronomia
Baixar livros de Arquitetura
Baixar livros de Artes
Baixar livros de Astronomia
Baixar livros de Biologia Geral
Baixar livros de Ciência da Computação
Baixar livros de Ciência da Informação
Baixar livros de Ciência Política
Baixar livros de Ciências da Saúde
Baixar livros de Comunicação
Baixar livros do Conselho Nacional de Educação - CNE
Baixar livros de Defesa civil
Baixar livros de Direito
Baixar livros de Direitos humanos
Baixar livros de Economia
Baixar livros de Economia Doméstica
Baixar livros de Educação
Baixar livros de Educação - Trânsito
Baixar livros de Educação Física
Baixar livros de Engenharia Aeroespacial
Baixar livros de Farmácia
Baixar livros de Filosofia
Baixar livros de Física
Baixar livros de Geociências
Baixar livros de Geografia
Baixar livros de História
Baixar livros de Línguas

Baixar livros de Literatura
Baixar livros de Literatura de Cordel
Baixar livros de Literatura Infantil
Baixar livros de Matemática
Baixar livros de Medicina
Baixar livros de Medicina Veterinária
Baixar livros de Meio Ambiente
Baixar livros de Meteorologia
Baixar Monografias e TCC
Baixar livros Multidisciplinar
Baixar livros de Música
Baixar livros de Psicologia
Baixar livros de Química
Baixar livros de Saúde Coletiva
Baixar livros de Serviço Social
Baixar livros de Sociologia
Baixar livros de Teologia
Baixar livros de Trabalho
Baixar livros de Turismo
 
 