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UNIVERSIDADE FEDERAL DE CAMPINA GRANDE
PRÓ-REITORIA DE PÓS-GRADUAÇÃO E PESQUISA
CENTRO DE SAÚDE E TECNOLOGIA RURAL
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM MEDICINA VETERINÁRIA
ATIVIDADE in vitro DO EXTRATO ETANÓLICO DA SEMENTE DE
JERIMUM (Cucurbita pepo L.) E DO SUCO DE ALHO (Allium sativum L.)
EM NEMATÓIDES GASTRINTESTINAIS DE CAPRINOS.
ANA RAELMA MENDES DE SOUSA
PATOS – PB
2008
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UNIVERSIDADE FEDERAL DE CAMPINA GRANDE
PRÓ-REITORIA DE PÓS-GRADUAÇÃO E PESQUISA
CENTRO DE SAÚDE E TECNOLOGIA RURAL
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM MEDICINA VETERINÁRIA
Autora: Ana Raelma Mendes de Sousa
Orientadora: Prof(a) Dra. Ana Célia Rodrigues Athayde
ATIVIDADE in vitro DO EXTRATO ETANÓLICO DA SEMENTE DE
JERIMUM (Cucurbita pepo L.) E DO SUCO DE ALHO (Allium sativum L.)
EM NEMATÓIDES GASTRINTESTINAIS DE CAPRINOS.
PATOS – PB
2008
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ANA RAELMA MENDES DE SOUSA
Efeito in vitro do extrato etanólico da semente de jerimum (Cucurbita
pepo l.) e do suco de alho (Allium sativum l.) sobre ovos e larvas de
nematóides gastrintestinais de caprinos.
Autora: Ana Raelma Mendes de Sousa
Orientadora: Prof(a) Dra. Ana Célia Rodrigues Athayde
PATOS – PB
2008
Dissertação apresentada à
Universidade Federal de Campina
Grande, como parte das exigências
do Programa de Pós-Graduação em
Medicina Veterinária de Pequenos
Ruminantes e Eqüídeos.
UNIVERSIDADE FEDERAL DE CAMPINA GRANDE
PRÓ-REITORIA DE PÓS-GRADUAÇÃO E PESQUISA
CENTRO DE SAÚDE E TECNOLOGIA RURAL
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM MEDICINA VETERINÁRIA
CERTIFICADO DE APROVAÇÃO
TÍTULO: ATIVIDADE in vitro DO EXTRATO ETANÓLICO DA
SEMENTE DE JERIMUM (Cucurbita pepo L.) E DO SUCO DE ALHO
(Allium sativum L.) EM NEMATÓIDES GASTRINTESTINAIS DE
CAPRINOS.
AUTOR: Ana Raelma Mendes de Sousa
ORIENTADOR (a): Prof(a) Dra. Ana Célia Rodrigues Athayde
APROVADA em ______/______/_______
Prof (a) Dra. Ana Célia Rodrigues Athayde
UFCG – Orientador (a)
Prof. Dr. Luís da Silva Vieira
EMBRAPA - 1º Examinador
Prof (a) Dr. Wilson Wouflan Silva
UFCG - 2º Examinador
PATOS – PB
2008
DEDICO
Ao Pai, ao Filho e ao Espírito
Santo por me amar primeiro e me dar o
dom da vida na sua doce presença.
AGRADECIMENTOS ESPECIAIS
Quando a última cena passou diante de nós, olhei para trás, para as pegadas na areia
e notei que muitas vezes, no caminho da minha vida, havia apenas um par de pegadas na
areia.
Notei também que isso aconteceu nos momentos mais difíceis e angustiosos do meu
viver. Isso me aborreceu deveras e perguntei então ao Senhor:
- Senhor, Tu me disseste que, uma vez que resolvi te seguir, Tu andarias sempre
comigo, em todo o caminho. Contudo, notei que durante as maiores atribulações do meu
viver, havia apenas um par de pegadas na areia. Não compreendo porque nas horas em que
eu mais necessitava de Ti, Tu me deixaste sozinho.
O Senhor me respondeu:
- Meu querido filho. Jamais eu te deixaria nas horas de provas e de sofrimento.
Quando viste, na areia, apenas um par de pegadas, eram as minhas. Foi exatamente aí que
eu te carreguei nos braços.
AGRADECIMENTOS
Ao meu amado (Jesus) por ter morrido por mim naquela cruz e ter-se feito maldito
para me dar a vida eterna ao seu lado.
A minha mãe e irmã Fátima por me amar incondicionalmente.
A minha mãe Dona Ana por me criar e me ensinar a andar no caminho da retidão.
A Gercino Costa por cuidar do nosso filho para que eu pudesse estudar e muitas
vezes tendo que faltar ao trabalho para me dar a mão.
Aos meus filhos sapecas João Pedro e Bianca Maria por me darem trabalho e
também muitas alegrias.
A imensa compreensão da minha orientadora Profª. Ana Célia Rodrigues Athayde,
por me mostrar que sou capaz e me dar forças para prosseguir, apesar das inúmeras pedras
no caminho.
Aos colegas de experimento Werlaneide e Vinícius pela ajuda, paciência e
momentos alegres na realização do experimento.
A todos os funcionários e professores do Campus que participaram direta ou
indiretamente dessa conquista.
As amigas Wanda, Claudinha e Talícia pelas boas risadas no decorrer do curso.
Ao Profº Aderbal e irmão em Cristo Jesus por se dispor a me socorrer nas horas de
grande aflição e pela infinita paciência em querer me ensinar.
As irmãs na fé Zebina, Morgana, Mônica e Damiana por intercederem por mim
junto ao nosso Pai que está nos céus e pelo ombro amigo, que tantas vezes ficou
encharcado com minhas lágrimas.
SUMÁRIO
Pág.
LISTA DE TABELAS
LISTA DE FIGURAS
RESUMO
ABSTRACT
1.
INTRODUÇÃO
01
2.
REVISÃO DE LITERATURA
0
3
2.1.
2.1. A c
aprinocultura
e principais parasitoses gastrintestinais
16
2.2.
Resistência Anti
-
H
elmíntica
07
2.
3
Plantas Medicinais
09
2.
3.1
P
lantas medicinais com ação anti
-
helmíntica
11
2.
3.
2
Alho
11
2.3.3
Jerimum
14
3.
REFERÊNCIA BIBLIOGRÁFICA
16
4.
CAPÍTULOS
22
4.1.
CAPÍTULO
1
:
Atividade
in vitro
do
suco
de
alho
(
Allium sativum
L.) sobre
larvas de nematóides gastrintestinais de caprinos.
23
4.2.
CAPÍTULO
2
:
Atividade
in vitro
do extrato
etanólico
da
semente de
jerimum (Cucurbita pepo L.) sobre ovos e larvas de nematóides gastrintestinais
de caprinos.
39
ANEXOS
58
A
–
Norma das Revistas
82
LISTA DE TABELAS
Capítulo
1
Tabela 01
Percentual de atividade larvicida
in vitro
do suco de alho, aos
diversos tratamentos utilizados sobre a viabilidade das larvas de
nematóides gastrintestinais de caprinos, Patos – PB, 2008.
31
Tabela 0
2
Percentual de atividade larvicida
in vitro
do suco de alho, de
acordo com o tempo de exposição sobre a viabilidade das larvas
de nematóides gastrintestinais de caprinos, Patos – PB, 2008.
33
Tabela 03
Percentual de larvas mortas de nematóides gastrintestinais de
caprinos, submetidas ao tratamento como o suco de alho de
acordo com o tempo de exposição, Patos – PB, 2008.
34
Capítulo 2
Tabela 01
Percent
ual de atividade ovicida
in vitro
do extrato etanólico da
semente de jerimum, sobre a viabilidade dos ovos de nematóides
gastrintestinais de caprinos, Patos – PB, 2008.
50
Tabela 02
Percentual de atividade ovicida
in vitro
do extrato etanólico da
semente de jerimum, de acordo com o tempo de exposição sobre a
viabilidade dos ovos de nematóides gastrintestinais de caprinos,
Patos – PB, 2008.
50
Tabela 03
Percentual de o
vos
inviáveis de nematóides gastrintestinais de
caprinos, submetidos ao tratamento com extrato etanólico da
semente de jerimum de acordo com o tempo de exposição, Patos –
PB, 2008.
51
Tabela 04
Percentual de atividade larvicida
in vitro
do extrato etanólico da
semente de jerimum, aos tratamentos utilizados sobre a viabilidade
das larvas de nematóides gastrintestinais de caprinos, Patos – PB,
52
2008.
Tabela 05
Percentual de atividade larvicida
in vitro
do extrato etanólico da
semente de jerimum, de acordo com o tempo de exposição sobre a
viabilidade das larvas de nematóides gastrintestinais de caprinos,
Patos – PB, 2008.
52
Tabela 06
Percentual de larvas mortas de nematóides gastrintestinais de
caprinos, quando submetidas ao tratamento com extrato etanólico
da semente de jerimum de acordo com o tempo de exposição,
Patos – PB, 2008
53
LISTA DE FIGURAS
Introdução
Figura 01
Alho
(
Allium sativum L.
)
11
Figura 02
Semente de jerimum (
Cucurbita pepo L.
)
14
Capítulo
1
Figura 01
Larva
morta (L
3
)
, vista
ao microscópio óptico submetida ao
tratamento com suco de alho (Allium sativum).
32
Capítulo
2
Figura 01
Larva
morta (L
3
)
, vista
ao microscópio óptico submetida ao
tratamento com o extrato etanólico da semente de jerimum
(Cucurbita pepo L.).
48
SOUSA, Ana Raelma Mendes. Atividade in vitro do extrato etanólico da semente de
jerimum (Cucurbita pepo L.) e do suco de alho (Allium sativum L.) em nematóides
gastrintestinais de caprinos. Patos, PB: UFCG, 2008. 80 p. (Dissertação – Mestrado em
Medicina Veterinária).
Resumo
O controle tradicional dos nematóides gastrintestinais, através de anti-helmínticos gera
problemas como resistência, resíduos nos alimentos e custos com mão-de-obra, despertando
a necessidade no desenvolvimento de novas alternativas para o controle da verminose
caprina, através do controle biológico e uso de plantas medicinais com comprovada eficácia
anti-helmíntica. Assim, o objetivo deste estudo é avaliar in vitro a atividade de extratos
etanólicos da semente de jerimum (Cucurbita pepo L.) e do suco de alho (Allium sativum
L.) em nematóides gastrintestinais de caprinos. As larvas foram obtidas de coproculturas e a
recuperação de ovos foi feita em tamises, a partir de fezes de caprinos naturalmente
infectados. O extrato foi utilizado nas concentrações de 50; 25; 12,5; 6,25 e 3,12 mg.mL
-1
para ambos os testes e como controle positivo 0,2 mg.kg
1
de moxidectina e para
testemunha, utilizou-se água destilada estéril. As placas foram examinadas ao microscópio
óptico para contagem dos ovos em desenvolvimento e larvas móveis e imóveis, após 24 h,
48 h e 72 h de incubação. O extrato da semente de jerimum na concentração de 25 e 50%
foi capaz de interromper o desenvolvimento de 40,37 e 62,60% dos ovos, respectivamente.
A ação larvicida foi melhorada com o aumento das concentrações do extrato, chegando a
inviabilizar 92,91% das larvas na concentração de 50%. O Allium sativum eliminou 97,18 e
97,06% das larvas nas concentrações de 50 e 25%, respectivamente. Nas condições testadas
a Cucurbita pepo, e o Allium sativum mostraram ser boas alternativas no controle da
verminose caprina.
Palavras-chave: atividade anti-helmíntica, nematóides gastrintestinais, teste in vitro,
caprinos, Cucurbita pepo, Allium sativum
SOUSA, Ana Raelma Mendes. Atividade in vitro do extrato etanólico da semente de
jerimum (Cucurbita pepo L.) e do suco de alho (Allium sativum L.) em nematóides
gastrintestinais de caprinos. Patos, PB: UFCG, 2008. 80 p. (Dissertation - Magister
Science in Veterinary Medicine).
Abstract
The traditional control of the nematodes gastrointestinal, through antihelminthic
generates problems as resistance, residues in the victuals and costs with labor, waking
up the need in the development of new alternatives for the control of the goats
verminose, through the biological control and I use of medicinal plants with proven
antihelminthic effectiveness. Like this, the objective of this study is to evaluate in vitro
the activity of extracts etanólicos of the pumpkin seed (Cucurbita pepo L.) and of the
juice of garlic (Allium sativum L.) in nematodes gastrointestinal of goats. The larvae
were obtained of coproculturas and the recovery of eggs was made in sieves, starting
from feces of bovid naturally infected. The extract was used in the concentrations of 50;
25; 12,5; 6,25 and 3,12 mg.mL-1 for both tests and I eat positive control 0,2 mg.kg of
moxidectina and for witness, water was used distilled sterile. The plates were examined
to the optical microscope for count of the eggs in development and movable and
immobile larvae, after 24 h, 48 h and 72 h of incubation. The extract of the pumpkin
seed in the concentration of 25 and 50% was capable to interrupt the development of
40,37 and 62,60% of the eggs, respectively. The action larvicida was improved with the
increase of the concentrations of the extract, getting to make unfeasible 92,91% of the
larvae in the concentration of 50%. THE Allium sativum eliminated 97,18 and 97,06%
of the larvae in the concentrations of 50 and 25%, respectively. In the tested conditions
the Cucurbita pepo, and the Allium sativum showed to be good alternatives in the
control of the goat verminose.
Word-key: antihelminthic activity, nematodes gastrointestinal, test in vitro, goat,
Cucurbita pepo, Allium sativum.
1. INTRODUÇÃO
De acordo com os dados do IBGE (1991), o rebanho mundial de caprinos e ovinos
é de aproximadamente 898.132 mil cabeças. O Brasil com 12,8 milhões de cabeças possui
o nono maior rebanho caprino do globo, na sua grande maioria explorado para carne, e
contribuindo com apenas 1,3% da produção mundial de leite. O Nordeste brasileiro
destaca-se pelo desenvolvimento da produção de caprinos, apresentando o maior rebanho
nacional, com cerca de 9.581.653 cabeças. Quase a totalidade do efetivo, cerca de 93%,
encontra-se nesta região, sobretudo nos Estados da Bahia, Pernambuco e Piauí. Os
principais municípios são Casa Nova, Remanso e Juazeiro (Bahia). O estado da Paraíba
conta com 673.426 animais. A ovinocultura se apresenta mais importante nas microrregiões
do Médio Jaquaribe (CE) e Serrinha (BA).
Cerca de 50% do rebanho de caprinos e ovinos do Nordeste estão localizados em
propriedades com menos de 30 hectares e 57% estão inseridos na zona semi - árida
(VASCONCELOS & VIEIRA, 2006).
Os caprinos são utilizados para a produção de alimentos de alto valor biológico
como carne e leite, e a renda familiar das propriedades é incrementada pela venda de
animais vivos, peles e esterco (VIEIRA, 1991).
O desenvolvimento da caprinocultura no Nordeste é severamente afetado por
inúmeros fatores, entre eles, a alta incidência de problemas sanitários. A criação de
caprinos nas regiões semi-áridas brasileiras é caracterizada por práticas de manejo
inadequadas, com relação principalmente aos aspectos sanitários, o que interfere
sobremaneira na produtividade do rebanho (SIMPLÍCIO et al., 1981). A maioria dos
sistemas produtivos da caprinocultura no Brasil é rudimentar e precário, com o uso de
regimes extensivo e semi – extensivo, o que favorece a um baixo rendimento produtivo,
principalmente devido às altas taxas de mortalidade (PINHEIRO et al., 2000).
As helmintoses gastrintestinais de caprinos no semi – árido da Paraíba são causadas
por parasitos das classes Nematoda, Cestoda e Trematoda, e tem como principais gêneros
parasitas: Haemonchus spp., Trichostrongylus spp., Strongyloides spp., Moniezia spp.,
Cooperia spp., Oesophagostomum spp., Skrjabinema spp., Trichuris spp., e Cysticercus
(SANTOS et al., 1994).
O controle efetivo de parasitas, pelo uso de fármacos convencionais provoca
resistência ao princípio ativo e a presença dos resíduos nos produtos de origem animal e no
meio ambiente. O parasita encontra meios de evitar a ação do fármaco para sobreviver e se
reproduzir. O uso inadequado e exagerado de vermífugos faz emergir o problema da
ecotoxicidade e liberação de resíduos em produtos de origem animal e estes problemas têm
determinado efetivamente o rumo atual das pesquisas científicas na área da parasitologia
(CHAGAS, 2004).
Algumas limitações atuais do uso de medicamentos, tais como, altos custos de
alguns produtos disponíveis no mercado, não disponibilidade de produtos em algumas áreas
rurais pobres ou distantes de centros comerciais (Hammond et al., 1997), resíduos nos
alimentos (Camurça et al., 2005), risco de poluição ambiental (Hammond et al., 1997),
desenvolvimento de resistência aos anti-helmínticos pelos nematódeos gastrintestinais
(Echevarria et al., 1995) e redução da eficácia produtiva em animais de produção (Fox,
1997) favoreceram o retorno ao estudo e uso de plantas com propriedades medicinais para o
controle de diversas doenças, em especial as parasitoses gastrintestinais.
O presente trabalho teve por objetivo avaliar a ação in vitro do extrato etanólico da
semente de jerimum (Cucurbita pepo L.) e do suco de alho (Allium sativum L.) sobre ovos e
larvas de nematóides gastrintestinais de caprinos.
2. REVISÃO DE LITERATURA
2.1. A caprinocultura e principais parasitoses gastrintestinais
O Brasil possui cerca de 12,6 milhões de cabeças de caprinos, o que corresponde ao
11º maior rebanho do mundo. Atualmente o nordeste é a região mais representativa do
Brasil com relação ao número de pequenos ruminantes, possuindo um rebanho de 8,9
milhões caprinos e 8,2 milhões de ovinos, compreendendo aproximadamente a 93% e 53%
dos rebanhos nacionais, respectivamente (ANUALPEC, 2002).
A caprinocultura no Nordeste brasileiro assume um papel relevante na economia do
país por apresentar o maior rebanho e pelo aproveitamento dos seus produtos e
subprodutos. Atualmente o caprino vem demonstrando grande interesse na política
econômica do país, por serem animais de grande rusticidade e sobrevivem em áreas secas e
desprovidas de agricultura estável, além de serem explorados como fonte de subsistência
familiar (SILVA, 1998).
O efetivo caprino no Brasil concentra-se principalmente na região Nordeste, onde
anteriormente predominava a exploração extensiva, voltada para a produção de carne e
leite, com a introdução de raças especializadas, criadas em regime semi-intensivo e
intensivo. A caprinocultura é uma atividade de grande importância sócio-econômica para o
Nordeste e, em particular para o semi-árido. Entretanto, existem vários fatores que limitam
a produção desses animais, dentre eles, problemas nutricionais, sanitários e de manejo,
particularmente as doenças parasitárias. A espécie caprina, apesar de suas potencialidades,
não tem alcançado seu valor real mesmo possuindo uma inegável utilidade para o homem e
as helmintoses gastrintestinais representam diretamente a maior parcela de prejuízo para os
produtores (SANTOS et al., 1994).
A cabra foi o primeiro animal domesticado pelo homem, há cerca de dez mil anos,
capaz de produzir alimentos De lá para cá, sempre acompanhou a história da humanidade,
conforme atestam os diversos relatos históricos, mitológicos e ate mesmo bíblicos, que
mencionam os caprinos. Existe uma grande variedade de produtos de origem caprina: leite,
carne, couro, pêlo e esterco, além de ter utilidade como animal de tração. Ainda hoje a
cabra tem um papel muito importante como fornecedora de alimentos, particularmente em
países ou regiões em desenvolvimento. Cerca de 94,2% dos caprinos do mundo encontram-
se em regiões subdesenvolvidas, evidenciando a capacidade do caprino de se adaptar a
condições adversas, justificando sua reputação de animal rústico (RIBEIRO, 1997).
Os caprinos são utilizados para a produção de alimentos de alto valor biológico como
carne e leite, e a renda familiar das propriedades é incrementada pela venda de animais
vivos, peles e esterco (VIEIRA, 1991). O parasitismo compromete a rentabilidade dos
sistemas pecuários produtivos produzindo importantes perdas clínicas e subclínicas. Além
de forçar o seu controle com drogas químicas que tem a capacidade de permanecer por um
período prolongado no organismo animal, e conseqüentemente requerem períodos
semelhantes de eliminação, contribuindo para a presença de resíduos no leite e derivados
que se destinam ao consumo humano. O resíduo do composto químico eliminado com as
excreções dos animais provoca sérios efeitos ao meio ambiente. Em algumas situações, os
resíduos poderão entrar na cadeia alimentar humana, podendo ocasionar problemas de
saúde pública.
As infecções causadas pela verminose gastrintestinal constituem-se importantes fatores
de perdas econômicas na produção de caprinos e ovinos. Os efeitos do parasitismo no
desempenho produtivo do rebanho se manifestam de várias formas, conforme as espécies
presentes, a intensidade da infecção e a categoria e/ou estado fisiológico e nutricional dos
animais. O impacto sobre a produção é conseqüência do atraso no crescimento, redução dos
parâmetros produtivos e morte das categorias mais susceptíveis (VIEIRA, 1991).
Os trichostrongilídeos são vermes pequenos e freqüentemente capilariformes. Os ciclos
evolutivos desses gêneros são bastante semelhantes entre si, podendo ser divididos em fase
pré-parasitária e parasitária. A fase pré-parasitária inicia-se com a postura de ovos
blastomerados pelas fêmeas, presentes no trato gastrintestinal. Estes ovos chegam ao meio
externo juntamente com as fezes, e, com temperatura, umidade e oxigênio adequados,
evoluem para um ovo larvado em primeiro estágio de desenvolvimento (L
1
). Após algumas
horas, os ovos eclodem e liberam as larvas rabditóides (FREITAS, 1977). Livres, essas
larvas prosseguem o desenvolvimento, passando pela fase de segundo estágio (L
2
) e
culminando com uma larva de terceiro estágio (L
3
) que corresponde à fase infectante. O
período aproximado para que os parasitos trichostrongilídeos atinjam a fase infectante é de
duas semanas (FREITAS, 1977).
A fase parasitária inicia-se com a infecção do animal a partir da ingestão da larva de
terceiro estágio (L
3
). Uma vez ingerida, a larva sofre digestão em porções anteriores do
trato digestório, migrando então para o local de preferência, onde completa o
desenvolvimento larval, tornando-se adulta em um tempo médio de três semanas. O ciclo,
de modo geral, é do tipo direto e não migratório.
As helmintoses de caprinos e ovinos são causadas por parasitos pertencentes às classes
Nematoda, Cestoda e Trematoda, tendo como os principais gêneros de parasitas:
Haemonchus, Trichostrongylus, Strongyloides, Moniezia, Cooperia, Oesophagostomum,
Skrjabinema, Trichuris e Cysticercus. Surtos epizoóticos de Haemoncose e Strongiloidose
caprina no semi-árido paraibano aumentam a morbidade e a mortalidade do rebanho
caprino (ATHAYDE, 1996).
Santos et al (1994) através da determinação da freqüência mensal da fauna de helmintos
relacionada com fatores climáticos na região semi-árida da Paraíba, concluíram que o
Haemonchus contortus foi o parasita encontrado em maior número e os maiores índices
foram observados nos meses de fevereiro, junho e dezembro; Strongulus papillosus e
Cooperia curticei prevaleceram no intestino delgado em fevereiro, maio e junho;
Oesophagostomum e Trichuris globulosa no intestino grosso em março, maio e julho; estas
espécies estão parasitando os animais todos os meses do ano, apesar das variações
climáticas.
Mensalmente, durante 24 meses no semi-árido paraibano, dois caprinos traçadores,
foram necropsiados para a recuperação de nematóides gastrintestinais e determinação da
sazonalidade e carga parasitária dos animais. As espécies identificadas foram: Haemonchus
contortus, Trichostrongylus axei, T. colubriformis, Cooperia pectinata, Strongyloides
papillosus, Trichuris globulosa, Oesophagostomum columbianum e Skrjabinema ovis. As
espécies predominantes na estação chuvosa foram Haemonchus contortus, Strongyloides
papillosus e Oesophagostomum columbianum e na estação seca Strongyloides papillosus e
Oesophagostomum columbianum (SILVA et al., 1998).
Dentre os vermes que acometem os caprinos e os ovinos, destaca-se o Haemonchus
contortus um parasita que se localiza no abomaso e se alimenta de sangue. Devido ao seu
hábito hematófago, os animais com altos níveis parasitários desenvolvem um quadro de
anemia grave, em um curto período de tempo (VIEIRA, 1999). Na haemoncose aguda, a
anemia torna-se evidente cerca de duas semanas após a infecção e se caracteriza por
diminuição dramática e progressiva do volume globular. Durante as semanas subseqüentes,
o hematócrito em geral se estabiliza. À necropsia, podem estar presentes entre 2.000 e
20.000 parasitas na mucosa do abomaso, que exibe numerosas pequenas lesões
hemorrágicas. O conteúdo abomasal é líquido e castanho-escuro por causa da presença de
sangue. A carcaça é pálida e edematosa (RADOSTITS et al.,1994).
As respostas imunológicas contra a re-infecção se desenvolvem de maneira lenta e
incompleta, deixando os rebanhos sujeitos à reincidência das formas clínicas e subclínicas
dessa parasitose (PADILHA, 1996).
O desencadeamento da sintomatologia clínica é o resultado da interação parasito-
hospedeiro. Além das condições climáticas, outros fatores, como áreas de pastejo com
vegetação abundante e com boa cobertura de solo, proporcionam sombreamento, evitando a
dessecação de ovos e larvas, por impedir a penetração direta de raios solares nas fezes. Isso
favorece a criação de um microclima favorável ao desenvolvimento dos estágios infectantes
no ambiente (COSTA, 1982).
As espécies parasitas se desenvolvem e sobrevivem durante todo o ano nas regiões
tropicais, em decorrência do clima favorável, fazendo com que os animais estejam sujeitos
a infecção e re-infecção (CHARLES et al., 1995).
Os principais fatores que interferem na epidemiologia dos nematódeos
gastrintestinais são: fatores ambientais e fatores do hospedeiro
Nas regiões áridas e semi-áridas do Nordeste brasileiro, onde as estações chuvosas e
secas são bem definidas, a precipitação é o fator climático mais importante no aparecimento
das infecções por nematódeos gastrintestinais nos rebanhos caprinos e ovinos. Estudos
epidemiológicos desenvolvidos no Nordeste têm mostrado que os caprinos em pastejo
permanente, sem tratamento anti-helmíntico, encontram-se parasitados por nematódeos
gastrintestinais durante todo o ano. Entretanto, a introdução de caprinos traçadores (animais
livres de infecção por nematódeos gastrintestinais) em pastagem contaminada mostrou que
os animais se infectam em meados do período chuvoso ao início do período seco, uma vez
que nesse período, as pastagens encontram-se altamente contaminadas por larvas
infectantes (COSTA & VIEIRA, 1984).
Para prevenir ou minimizar as perdas de produção, ocasionadas pela verminose
gastrintestinal, utilizam-se os tratamentos anti-helmínticos, os quais por sua vez, também,
geram despesas com a aquisição de drogas e o aumento de mão-de-obra.
Com base nos conhecimentos epidemiológicos e na dinâmica populacional dos vermes
no rebanho e na pastagem, têm sido desenvolvidas estratégias de controle que visam
eliminar o parasitismo dos animais e, principalmente, prevenir a contaminação no meio
ambiente.
Em condições naturais, com disponibilidade de pastagem, os caprinos se alimentam
de vegetação alta, o que de certa forma, os protegem em parte das larvas infectantes dos
nematóides gastrintestinais, visto que estas migram no máximo até 12,5 cm da superfície do
solo (LE JAMBRE, 1993).
Entretanto, visando o melhor aproveitamento das áreas de pastejo, através do
emprego de técnicas, como o raleamento da caatinga, tem proporcionado maior produção
de extrato herbáceo e, conseqüentemente, aumento da taxa de lotação. Dessa forma, os
animais são forçados ao pastejo mais próximo ao solo, favorecendo, portanto, a infecção
com as larvas infectantes (COSTA, 1982).
2.2. Resistência Anti-Helmíntica
O controle dos helmintos tem sido realizado principalmente com produtos químicos.
Estes produtos são largamente utilizados na pecuária de corte e, muitas vezes,
administrados sem critérios (RANGEL et al., 2005). O uso intensivo de anti–helmínticos
para o controle de infecções por parasitas resultou no desenvolvimento de resistência e se
tornou o maior problema prático da criação de animais (TAYLOR et al., 2002).
A resistência parasitária é um fenômeno pelos quais alguns organismos de uma
população são capazes de sobreviver após constante utilização de um composto químico.
Quando são envolvidas duas drogas de grupos distintos este fenômeno é chamado de
resistência cruzada. A resistência múltipla ou resistência anti-helmíntica múltipla (RAM)
ocorre quando um organismo é resistente a mais de duas bases farmacológicas. Sabe-se que
o mecanismo de resistência está ligado ao mecanismo de ação das drogas e
conseqüentemente ao processo de seleção (MOLENTO et al., 2004).
A resistência adquirida às drogas é o fenômeno que se dá quando populações
inicialmente susceptíveis à ação de um fármaco o deixam de ser devido à ocorrência de
modificações genéticas (MOTTIER & LANUSSE, 2001). A resistência é um aumento no
número de indivíduos capazes de suportar doses de um composto químico que tenha
provado ser letal à maioria da população normal sensível (ECHEVARRIA, 1995).
A resistência dos nematódeos gastrintestinais de caprinos aos anti-helmínticos foi
descrita inicialmente no Estado do Texas, Estados Unidos da América (THEODORIDES et
al., 1970). No Brasil a primeira suspeita de nematódeos gastrintestinais de caprinos
resistentes aos anti-helmínticos foi descrita por Vieira (1986) no Estado do Ceará.
Soccol et al. (1996) analisando propriedades nas diferentes regiões do Estado do
Paraná, detectaram resistência na maioria das regiões e, mais importante ainda,
demonstraram existir resistência dos parasitas aos vários grupos de anti-helmínticos, até
mesmo àqueles de última geração. Segundo os autores citados, esta resistência chega ao
ponto alarmante de, em algumas propriedades, não existir vermífugo capaz de combater os
parasitos.
O diagnóstico é positivo para “resistência” quando uma determinada droga que
apresentava redução da carga parasitária acima de 95% decresce a nível inferior a este valor
contra o mesmo organismo depois de determinado período. O aparecimento da resistência é
praticamente inevitável e esta característica é transferida para as próximas gerações. No
entanto, a sua manifestação é condicionada à presença de indivíduos que apresentem o gene
que confere para a resistência (CONDER & CAMPBELL, 2005).
Diferentes métodos podem ser utilizados no controle de nematódeos gastrintestinais
como, controle químico, seleção de animais geneticamente resistentes, desenvolvimento de
vacinas, melhoria na nutrição, controle biológico (fungos nematófagos) e plantas com
atividade anti-helmíntica. Destes, o mais utilizado no mundo, é o controle químico. O
aparecimento global da resistência anti-helmíntica múltipla em nematódeos gastrintestinais
de pequenos ruminantes mudou o rumo das pesquisas das indústrias farmacêuticas a fim de
produzir novas moléculas, já que a quimioprofilaxia não é uma opção sustentável para o
controle de nematódeos gastrintestinais. A profilaxia consiste em limitar o contato do
parasita com o hospedeiro a níveis que não comprometam o desempenho do hospedeiro,
reduzindo a população de parasitas no pasto (JACKSON et al., 1992).
Vários isolados de Haemonchus contortus resistentes a ivermectina foram
identificados na Austrália (LE JAMBRE et al., 1993).
2.3. Plantas medicinais
A vulnerabilidade dos produtos químicos diante da capacidade de sobrevivência dos
parasitas faz com que eles tenham tempo de uso pré – determinado. No entanto, acredita-se
que a aplicação de extratos vegetais possa causar um desenvolvimento mais lento da
resistência, além de normalmente atingir somente espécie alvo, serem biodegradáveis, não
causarem a poluição ambiental e diminuírem drasticamente o problema dos resíduos
(CHAGAS, 2004). O uso de fitoterápicos destaca-se também devido à grande variabilidade
de espécies de plantas existentes, o baixo custo e a fácil disponibilidade em determinadas
regiões (HEIMERDINGER et al., 2006).
O uso de produtos naturais é tão antigo quanto à civilização humana e, por um
longo tempo, produtos minerais, de plantas e animais foram às principais fontes de drogas
(RATES, 2001).
Após a segunda guerra mundial, com o surgimento dos primeiros antibióticos e a
revolução industrial, a descoberta de muitas drogas e componentes ativos contra os agentes
causadores de doenças, contribuiu para um grande avanço, no controle de diversas
enfermidades. Durante anos, a pesquisa científica esteve envolvida com a procura de novas
moléculas capazes de controlar ou combater parasitos ou agentes causadores de doenças e,
por conseguinte, a utilização de drogas cada vez mais potentes foi tornando-se uma prática
comum na medicina humana e veterinária (CAMURÇA et al., 2005).
Planta medicinal é aquela que contém um ou mais princípios ativos que conferem
atividade terapêutica (ASSIS, 2000). Extratos são preparações concentradas obtidas de
drogas vegetais ou plantas frescas por meio de um solvente apropriado seguido de sua
evaporação total ou parcial e ajuste do concentrado a padrões previamente estabelecidos
(Oliveira & Akisue, 1997). Droga vegetal é a planta ou suas partes que, após sofrerem
processo de coleta, preparo e conservação (secagem, estabilização), justifique seu emprego
na preparação de medicamentos, utilizando então o(s) princípio(s) ativo(s). Já a fitoterapia é
o método de tratamento de enfermidades que emprega vegetais frescos, drogas vegetais ou
extratos vegetais (Oliveira & Akisue, 1997).
Diversas doenças têm sido alvo de pesquisas que envolvem plantas medicinais,
dentre as quais estão as nematodioses gastrintestinais que têm sido associadas a perdas
econômicas na produção de ruminantes em todo o mundo (FOX, 1997).
O rápido aparecimento de nematóides gastrintestinais resistentes aos anti-
helmínticos associado ao alto custo do tratamento, seus resíduos em alimentos e a
ecotoxicidade causada por sua utilização, incentivaram a pesquisa de novas alternativas
para o seu controle a exemplo da utilização dos fitoterápicos (WALLER et al., 1995).
Muitas plantas têm sido descritas como possuidora de atividade anti–helmíntica
(HAMMOND et al., 1997; VIEIRA, 1991).
O uso de plantas medicinais pela população mundial tem sido significativo nos
últimos tempos. Dados da Organização Mundial de Saúde (OMS) mostram que cerca de
80% da população mundial fez o uso de algum tipo de erva na busca de alívio de alguma
sintomatologia dolorosa ou desagradável. Desse total, pelo menos 30% deu – se por
indicação médica (FERREIRA, 1998).
Os metabólitos secundários são freqüentemente armazenados pelas plantas em
pequenas quantidades, além de tenderem a ser sintetizado em células especializadas e em
estágios de desenvolvimento distinto, o que muitas vezes dificulta sua extração e
purificação. Assim muitos metabólitos secundários podem ser considerados como materiais
especiais ou químicos refinados e são mais valorizados no mercado. Eles são usados
comercialmente como compostos ativos biologicamente: farmacêuticos, conferindo sabor
ou aroma, e pesticidas (CHAGAS, 2004).
A "sabedoria popular" muitas vezes tem indicado que determinadas plantas podem
ser utilizadas na fitoterapia. Muitas pesquisas têm realmente atestado a ação destas plantas,
mas ao mesmo tempo demonstram reações tóxicas no organismo hospedeiro. A relação
entre ação da planta, dosificação com ação significativa e efeito tóxico, deve ser muito bem
investigada, para que os conhecimentos adquiridos possam ser passados de maneira clara
no momento da utilização prática do fitoterápico. A realização de teste laboratorial é
essencial no início da investigação, no sentido de estimar a possibilidade de uso de
determinado fitoterápico (CHAGAS, 2004).
2.3.1. Plantas medicinais com ação anti-helmíntica
2.3.2. Alho
O Allium sativum (Figura 1) é um vegetal da ordem Liliiflorae, família Liliacerae,
encontra-se na forma de raiz. Seu bulbo, vulgarmente conhecido como cabeça, é
constituído por vários dentes. Antigamente, no Egito, o alho era usado para remediar a
diarréia e, na Grécia antiga, ele era empregado como medicamento no tratamento de
patologias pulmonares e intestinais (QUINTAES, 2007).
Esta erva bulbosa é pequena perene e com odor forte e característico de alimentos
ricos em compostos sulfurados. Suas folhas são lineares e longas e suas flores são brancas
ou avermelhadas. A maior concentração de fitoquímicos terapêuticos encontra-se nos
bulbos. Seu cultivo é adaptado às regiões mais frias com período de dormência de dois
meses. Quanto mais fria é a temperatura maior é a concentração de fitoquímicos, pois sua
concentração depende do quanto a planta responde às agressões ambientais (MARCHIORI,
2005).
Bulbo comestível, largamente utilizado em diferentes culturas culinárias, tem sido
usado como medicamento desde antes do nascimento de Cristo (MARCHIORI, 2005).
Figura 1. Allium sativum L.
Fonte: http://www.unifenas.br/neol/fotos.htm
Até o presente momento foram identificados cerca de 30 ingredientes do alho com
efeito terapêutico para a saúde. O tipo e a concentração dos compostos extraídos do alho
dependem do seu grau de maturação, práticas de produção de cultivo, localização na planta,
condições de processamento, armazenamento e manipulação. A maioria dos componentes
sulfurados não está presente nas células intactas. Quando o alho é amassado, partido,
cortado ou mastigado, vários de seus componentes sulfurados são liberados no interior da
célula vegetal (MARCHIORI, 2005).
O alho contém em todas suas partes, sobretudo no bulbo, uma substância sulfurada
inodora chamada aliina que, pela ação do fermento alinasa contido no alho, se transforma
em alicina e depois em dissulfuro de aliio, responsável pelo odor. A alicina representa
0,24% da massa do bulbo. O bulbo contém glicídeos, elementos minerais, fosfolipídeos,
derivados sulfurados a base de cisteína. A alicina é formada pela interação da enzima
alinasa e do substrato S-etil L-cisteína (CAMARGO, 2007).
A alicina é o principal componente do alho, responsável pela atividade biológica.
Estudos demonstram que ela estimula a atividade funcional dos macrófagos e é responsável
pela atividade antimicrobiana, antitumoral, antifúngica e imunomoduladora inibitória (CHO
et al., 2006). A alicina também inibe a apoptose dos macrófagos em caso de desnutrição.
Por causa da apoptose em indivíduos subnutridos, as células do sistema imunológico
podem provocar séria imunossupressão, e a inibição da apoptose nos macrófagos tratados
pela alicina, indica um possível tratamento terapêutico para as doenças imunossupressoras
causadas pela má nutrição. A propriedade imunoestimulante do alho está relacionada à
presença de substâncias encontradas em seu extrato (dialil trisulfito e dialil sulfito) que
estimulam a proliferação de células T e de citocinas produzidas pelos macrófagos. O alho
estimula tanto a imunidade celular como a humoral (CHO et al., 2006).
O alho possui altos teores de Zinco e Selênio, ambos metais antioxidantes. No
organismo humano, estes nutrientes estão envolvidos, tanto direta como indiretamente no
funcionamento do sistema imunológico (CAMARGO & SCAVONE, 2007).
Pasteur (1858) relatou a atividade antibacteriana do alho. Em laboratório, mediante
diluição em série, o extrato fresco do alho mostrou ser capaz de inibir o crescimento de 14
espécies de bactérias, entre as quais o Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae e
Escherichia coli, que são bactérias potencialmente maléficas à saúde. Isto ainda se deu,
mesmo usando o extrato de alho diluído 128 vezes (CHO et al., 2006).
Uma solução a 5%, preparada com alho fresco desidratado, mostrou atividade
bactericida contra a Salmonella typhimurium. A atividade antimicrobiana do alho é
reduzida com sua fervura, pois a alicina é desnaturada durante o processamento térmico
(CHO et al., 2006).
A alicina também é responsável pelo odor característico do alho (CAMARGO &
SCAVONE, 2007).
Com o desenvolvimento dos antibióticos durante a segunda guerra mundial, os
estudos foram abandonados até recentemente, quando se renovou o interesse devido ao
aparecimento de microorganismos resistentes aos antibióticos (MARCHIORI, 2005).
O alho tem mostrado ser capaz de combater o Helicobacter pylori, a maior causa de
dispepsia, câncer gástrico, úlceras gástricas e duodenais, já que 2g/L do extrato de alho
inibe completamente o crescimento do H. pylori (CELLINI & DORANT, 1996).
Outro efeito nutracêutico notável do alho está relacionado aos benefícios
cardiovasculares. O consumo regular do alho reduz o nível de colesterol sérico total, evita a
agregação plaquetária (alicina, alinina e S-alil sulfato) e possui atividade antioxidante,
prevenindo aterosclerose e doenças cardiovasculares. A atividade hipocolesterolêmica do
alho deve-se a inibição de diversos passos enzimáticos da síntese hepática do colesterol e a
um acréscimo na excreção de ácido biliar e de esteróis (MARCHIORI, 2005).
O alho possui propriedades hipoglicemiantes. O extrato do alho mediante seu
componente sulióxido S-alilciteína, reduz significantemente a glicose sangüínea. O
mecanismo provável desta atuação se deve, ao menos em parte, ao estímulo à secreção de
insulina pelas células β do pâncreas (MARCHIORI, 2005).
O alho tem seu emprego como vermífugo e é freqüente na medicina popular. A
planta apresenta cerca de 0.9% de óleo essencial sulfurado, que seria o responsável pelo
efeito anti-helmíntico dessa planta. O alho como anti-helmíntico pode ser empregado de
várias formas, com o sumo na dose de 20g em 200 ml de leite, tomado em jejum, combate
Ascaris lumbricoides, Oxiurus e Taenia sp. (CAMARGO & SCAVONE, 2007).
2.3.3. Jerimum
O Cucurbita pepo Linne. é uma planta rastejante de folha simples, flores solitária,
muito comum no Brasil (SALLÉ, 1996). As sementes contêm óleo essencial, albuminas,
glicosídeo (cucurbitina), resina, minerais (principalmente o zinco). A polpa é usada crua, as
sementes são vermífugas, o chá das flores em descanso noturno é antiinflamatório dos rins,
fígado, baço e antitérmico (MORGAN, 1994). Tem como princípio ativo a fitosterina,
globulina, fitina, sacarose, dextrose, protease, lecitina, vitaminas A, B, C, sais minerais,
ácidos oléico, cucurbitacina.
A abóbora (Cucurbita pepo) é um vegetal originário das Américas do Norte e
Central e atualmente é cultivada ao redor do mundo. O vegetal é pertencente à família
Cucurbitaceae que compreende, aproximadamente, 760 espécies distribuídas em todo o
mundo. A família inclui pepinos, melões, abobrinhas e melancias (MORGAN, 1994).
Apesar de não serem utilizadas com freqüência na indústria de alimentos, as
abóboras são consumidas em todo o mundo. Os frutos podem ser utilizados cozidos, tanto
na forma salgada como na forma doce e também podem ser fermentados e utilizados como
realçadores de sabor em sopas e molhos. As sementes podem ser utilizadas tostadas como
castanhas ou como óleo para saladas, muito consumido, principalmente, em países
europeus (SALLÉ, 1996).
Figura 2. Cucurbita pepo L. (semente de jerimum)
Fonte: http://img.photobucket.com/albums
No Brasil, de acordo com a Pesquisa de Orçamento Familiar - POF (IBGE, 1991), o
consumo per capita de abóbora aumentou de 1,4 kg para 4,6 kg entre os anos de 2002 e
2003.
As sementes de jerimum, comumente empregadas para combater tênias (solitárias),
são torradas e moídas até formar uma paçoca. A planta não apresenta toxicidade e a dose
empregada pode variar de uma xícara de chá a um copo (CAMARGO & SCAVONE,
2007). A semente de jerimum é oval-oblonga, achatada e mais afilada em uma de suas
extremidades. Possuem coloração branca ou amarelada com reflexos esverdeados em
ambas as faces (CAMARGO & SCAVONE, 2007).
Andrade et al (2007) também avaliaram a composição da semente de abóbora em pó
e concluíram que esta apresentou boa digestibilidade in vitro (90%), um considerável teor
de minerais como ferro (10,9 mg/100g), magnésio (10,9 mg/100g), fósforo (1090
mg/100g), potássio (982 mg/100g) e manganês (8,9 mg/100g), porém baixo teor de cobre e
zinco. O óleo da semente é pobre em iodo e selênio.
A semente de abóbora possui um componente chamado cucurbitacina que possui
ação anti-helmíntica. Em estudos clínicos com humanos foi observado que as sementes
podem ser benéficas para pessoas com infecção de vermes. Em estudos realizados com
animais infectados, as sementes de abóbora também apresentaram resultados benéficos em
relação a esses problemas (MAHMOUDO et al., 2002).
Utilizado, concomitantemente, com drogas anti-hipercolesterolêmicas, o óleo de
semente de abóbora mostrou ter um efeito potencializador de medicamentos. Os efeitos
colaterais da utilização da droga como tonturas, enjôos e dores de cabeça também foram
reduzidos. Os autores concluíram que os efeitos positivos na redução do LDL-colesterol e
aumento do HDL-colesterol ocorreram, provavelmente, devido ao conteúdo de ácidos
graxos poliinsaturados e antioxidantes presentes no óleo da semente de abóbora
(MAHMOUDO et al., 2002).
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4. CAPÍTULOS
CAPÍTULO 1 – ATIVIDADE in vitro DO SUCO DE ALHO (Allium sativum) SOBRE
LARVAS DE NEMATÓIDES GASTRINTESTINAIS DE CAPRINOS.
Manuscrito enviado para a “Revista Brasileira de Parasitologia Veterinária”
Atividade in vitro do suco de alho (Allium sativum) sobre larvas de nematóides
gastrintestinais de caprinos.
Autores: Ana Raelma Mendes de Sousa
1
; Ana Célia Rodrigues Athayde
2
; Werlaneide
Araújo da Silva
3
; Vinícius Longo Vilela
4
.
1- Aluna do curso de Pós-graduação em Medicina Veterinária da UFCG –
Campus de Patos – PB, [email protected]m;
2- Professora adjunto da Unidade Acadêmica de Ciências Biológicas da UFCG – Campus
de Patos – PB, athayde @cstr.ufcg.edu.br
2- Mestre em Zootecnia;
4- Aluno do curso de Medicina Veterinária da UFCG – Campus de Patos – PB
Atividade in vitro do suco de alho (Allium sativum) sobre larvas de nematóides
gastrintestinais de caprinos.
RESUMO
As helmintoses gastrintestinais ocupam lugar de destaque entre os fatores que limitam a
produção de caprinos e seu controle vem sendo realizado através do uso indiscriminado de
anti-helmínticos que favorece o desenvolvimento da resistência. Com o objetivo de avaliar
a atividade in vitro do suco de alho (Allium sativum) sobre o desenvolvimento de larvas de
nematóides gastrintestinais, foram utilizados dois caprinos da raça Moxotó, entre seis e 12
meses de idade. As larvas foram obtidas de coproculturas de animais naturalmente
infectados com infecção poliespecífica. Foram utilizadas as seguintes concentrações do
suco de alho: 50; 25; 12,5; 6,25 e 3,12 mg/mL
-1
para o teste e como controle positivo 0,2
mg.k
2
de moxidectina e para testemunha, utilizou-se água destilada estéril. As placas foram
examinadas ao microscópio óptico para contagem das larvas vivas e mortas (L
3
) após 24 h,
48 h e 72 h. O Allium sativum eliminou 97,18 e 97,06% das larvas nas concentrações de 50
e 25%, respectivamente. A atividade larvicida foi mais potente após 72 de exposição aos
tratamentos. Desta forma, o Allium sativum demonstrou ser uma boa alternativa no controle
de helmintos gastrintestinais de caprinos, promovendo assim, um controle ecologicamente
viável
Palavras- chave: caprinos, nematóides gastrintestinais, controle, plantas medicinais, Allium
sativum.
Activity in vitro of the juice of garlic (Allium sativum) on larvae of nematodes
gastrointestinal of goats.
ABSTRACT
The helminthiasis occupy prominence place among factors that limit goat production and
your control has been accomplished, through the indiscriminate use of anthelmintic
favoring development of anthelmintic drug resistance. With the objective of evaluating the
in vitro activity of the juice of garlic (Allium sativum) on the development of larvae of
gastrointestinal nematodes, were used two goats of the race Moxotó, between six and 12
months of age. The larvae were obtained naturally of coprocultures of animals infected with
infection polispecific. The following concentrations of the juice of garlic were used: 50; 25;
12,5; 6,25 and 3,12 mg/mL-1 for the test and for positive control 0,2 mg.kg of moxidectina
and for witness, water was used distilled sterile. The plates were examined to the optical
microscope for count of the alive and dead larvae (L
3
) after 24 h, 48 h and 72 h. The Allium
sativum eliminated 97,18 and 97,06% of the larvae in the concentrations of 50 and 25%,
respectively. The activity larvicidal was more potent after 72 h of exhibition to the
treatments. This way, the Allium sativum demonstrated to be a good alternative in the
control of gastrointestinal nematodes of goats, promoting like this, a viable ecological
control.
Key -words: goats, gastrointestinal nematodes control, medicinal plants, Allium sativum.
INTRODUÇÃO
A caprinocultura na região Nordeste é desenvolvida em um sistema de criação
extensiva, em que os animais são soltos na pastagem nativa, em grande parte constituída
por caatinga, onde os rebanhos de várias propriedades pastam em conjunto (NOGUEIRA
FILHO, 2003).
Existe uma grande variedade de produtos de origem caprina: leite, carne, couro,
pêlo e esterco. Ainda hoje, os caprinos têm um papel muito importante como fornecedores
de alimentos, particularmente em regiões em desenvolvimento (RIBEIRO, 1997).
O estado sanitário dos animais, associado à ausência ou ao uso inadequado de
tecnologias constitui importante causa de baixa produção e rentabilidade dos rebanhos
(VIEIRA, 1991).
As doenças parasitárias afetam negativamente a produção, seja pelas perdas
ocasionadas por distúrbios nas condições fisiológicas dos animais, determinando altas taxas
de morbidade, ou devido à mortalidade e abortos. Estes fatores estão diretamente
relacionados à redução do ganho de peso, queda na produção de leite e diminuição da
qualidade e do rendimento das carcaças. Ressaltam-se também os custos com mão de obra
capacitada e com medicamentos. Neste contexto, as parasitoses assumem papel importante,
face às elevadas perdas econômicas, decorrentes de mortalidade e, principalmente, pelo
baixo desempenho dos rebanhos (CHAGAS et al., 2005).
Surtos epizoóticos de haemoncose e strongiloidose caprina no semi-árido nordestino
vêm aumentando a morbimortalidade do rebanho caprino (ATHAYDE et al., 1996).
O controle das helmintoses de caprinos, ainda é essencialmente químico, através de
drogas que liberam resíduos tóxicos no animal e no meio ambiente, além de elevarem a
índices irrecuperáveis o custo de produção. Poucos produtores realizam um esquema
racional de alternância de drogas anti-helmínticas, como conseqüência, o uso inadequado
de determinado anti-helmíntico, seleciona indivíduos que possuem capacidade natural de
resistirem a esses quimioterápicos (ECHEVARRIA, 1995).
Balandrin et al (1985), muitas plantas acumulam substâncias orgânicas que podem
ser extraídas em quantidade suficiente para serem economicamente utilizadas para as mais
variadas aplicações científicas, tecnológicas e comerciais.
A fitoterapia pode contribuir para aumentar os lucros da criação, uma vez que reduz
o uso de anti-helmínticos convencionais, além de estender a vida útil dos produtos
químicos disponíveis (VIEIRA et al., 1999).
Panizza (1997) descreve algumas indicações e propriedades do bulbo do alho cru, já
que o alho cozido ou mesmo assado perde muitas das suas propriedades terapêuticas. O
alho fresco é estimulante, hipotensor, hipolipemiante, hipoglicemiante, estimulante das
defesas, antibiótico e anti-séptico geral, vermífugo potente, preventivo dos tumores
malignos, calicida e depurativo.
O objetivo do presente experimento foi o de avaliar a atividade in vitro do suco de
alho sobre larvas de nematóides gastrintestinais de caprinos.
MATERIAL E MÉTODOS
Local de realização do experimento
O experimento foi desenvolvido no Laboratório de Doenças Parasitárias dos
Animais Domésticos (LDPAD) da Unidade Acadêmica de Medicina Veterinária (UAMV)
do Centro de Saúde e Tecnologia Rural (CSTR) da Universidade Federal de Campina
Grande (UFCG) - Campus de Patos/PB.
Manejo dos animais infectados e coleta de fezes
Foram utilizados dois caprinos da raça Moxotó, entre seis e 12 meses de idade, peso
médio de 25 kg, provenientes do Núcleo de Pesquisas do Semi–Árido (NUPEÀRIDO),
pertencente à Universidade Federal de Campina Grande – UFCG, Campus de Patos – PB
naturalmente infectados por helmintos gastrintestinais (infecção poliespecífica). O nível de
infecção dos animais foi avaliado pelo método de flutuação de Willis-Molley, contagem de
ovos por grama de fezes (OPG) e cultivo de larvas pelo método de Robert’s O’Sullivan
(1950) para identificação de larvas infectantes do 3º estágio, a fim de verificar o grau de
parasitismo dos caprinos. Os animais foram colocados em piquetes, recebendo água ad
libitum, forragem verde e suplementação mineral durante 30 dias. A infecção foi mantida,
para a obtenção de material infectado – fezes, juntamente com os ovos e larvas dos
parasitos.
As amostras individuais de fezes foram obtidas diretamente da ampola retal,
identificadas e acondicionadas em sacos plásticos e levadas ao Laboratório de Doenças
Parasitárias dos Animais Domésticos para análises parasitológicas.
Coleta do material vegetal e obtenção do suco
Foi utilizado o bulbo do alho: Allium sativum L.
A coleta do alho foi feita na feira livre de Patos-PB e levada ao Laboratório de
Botânica-CSTR-UFCG, para a identificação botânica do vegetal indicado no estudo
etnofarmacológico e posterior herbarização. O bulbo do alho foi higienizado e triturado em
multiprocessador, e posteriormente passado em tamis para se obter o suco, sem a adição de
água.
Concentração Teste
Utilizaram-se as seguintes concentrações: 50; 25; 12,5; 6,25 e 3,12 mg.mL
-1
preparadas a partir da concentração matriz do suco do material vegetal (Tabela 1) e a
concentração de 0,2 mg.mL
-1
de moxidectina para o controle positivo, para o grupo
testemunha, utilizou-se água destilada estéril.
Teste Larvicida
O teste utilizado para avaliação inicial da atividade anti-helmíntica de plantas é o
teste de inibição da motilidade ou do desenvolvimento larvar que é um procedimento
modificado da técnica descrita por Hubert & Kerbouef (1984), também, inicialmente,
desenvolvido para avaliação de resistência anti-helmíntica.
Para a obtenção das larvas de helmintos, as fezes foram coletadas diretamente da
ampola retal em quantidades de aproximadamente 10 gramas, em seguida foram
acondicionadas em sacos plásticos e encaminhadas diretamente ao Laboratório de Doenças
Parasitárias dos Animais Domésticos (LDPAD) da Universidade Federal de Campina
Grande – Campus de Patos-PB, sob temperatura ambiente.
Depois de 7 dias as larvas (L
3
) foram recuperadas através da coprocultura pela
técnica de (ROBERTS & O’SULLIVAM 1950). A partir da suspensão obtida através da
coprocultura, procedeu-se a contagem das larvas. Foram utilizados 2 mL do extrato nas
concentrações 50; 25; 12; 6 e 3% mg/mL
-1
para cada 200 larvas em 2mL aproximadamente
de acordo com Hubert & Kerboeurf (1984), colocado em placas de Petri de 10cm. Para
cada concentração o ensaio foi repetido três vezes para assegurar a validação dos
resultados.
A ação do suco de alho sobre o desenvolvimento das larvas foi avaliada após o
período de encubação de 24, 48 e 72 horas, com a transferência do conteúdo das placas de
Petri para lâminas e procedendo-se a leitura em microscópio óptico em aumento de 100
vezes. Foram avaliadas todas as larvas presentes nas amostras classificando-as em vivas e
mortas.
O procedimento foi igualmente repetido com água destilada para o controle
negativo e com 0,2 mg.mL
-1
de moxidectina para o controle positivo.
As larvas encontradas correspondiam aos gêneros Haemonchus, Trichostrongylus,
Oesophagostomum, Strongyloides e Cooperia.
Análise Estatística
O teste de desenvolvimento larval foi sumarizado como média e desvio padrão e as
diferenças estatísticas foram mensuradas usando a análise de variância (ANOVA) e
confirmado pelo Teste de Tukey a 5% de significância (SAS, 1991).
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Devido à insipiência de trabalhos com o efeito in vitro do suco de alho sobre
nematóides gastrintestinais de caprinos realizou-se a discussão dos resultados obtidos com
artigos científicos que relatam o efeito in vivo do suco de alho e extrapolou-se a discussão
com resultados obtidos por diversos autores utilizando outras espécies de plantas.
Ao avaliar a ação anti-helmíntica in vitro do suco de alho sobre larvas de
nematódeos gastrintestinais de caprinos observou-se que 97,06% e 97,18% das larvas nas
concentrações de 25% e 50%, respectivamente encontravam-se mortas.
Demonstrando assim que o suco do alho nas concentrações 25 e 50% é bastante
eficaz no controle das larvas (Tabela 01).
Tabela 01. Percentual de atividade larvicida in vitro do suco de alho, aos diversos
tratamentos utilizados sobre a viabilidade das larvas de nematóides gastrintestinais de
caprinos, Patos – PB, 2008.
Motilidade das Larvas
Tratamentos
Larvas
Vivas
Larvas
Mortas
3%
86,03 B
13,97 D
6%
65,84
C
34,16 C
12%
15,71 D
84,29 B
25%
2,94
E
97,06 A
50%
2,82 E
97,1
8 A
Testemunho
99,7
6 A
0,2
4 E
Químico
98,13 A
1,8
7 E
Letras maiúsculas comparam médias nas colunas. Letras diferentes indicam valores significativamente diferentes
(P<0,05).
As concentrações 25% e 50% foram significativamente melhor quanto ao número
de larvas inviáveis, provavelmente devido à aderência dos resíduos do suco ao corpo das
larvas, dificultando a motilidade e alimentação, resultando em morte (Figura 01).
Fig. 01 – Larva morta (L
3
), vista ao microscópio óptico sub-
metida ao tratamento com suco de alho (Allium sativum).
Fonte: LDPAD/UFCG (2008).
Ao comparar com trabalhos in vivo verificou-se que o suco do alho não apresentou
eficácia tendo em vista trabalhos realizados por Vieira et al. (1999) que utilizando a dose
única de 3g/Kg de alho sob a forma de suco em caprinos infectados experimentalmente
com Haemonchus contortus obteve baixa eficácia anti-helmíntica. Redução média de
apenas 47,3% na contagem de OPG (ovos por grama de fezes) em amostras de fezes de
bovinos tratados com pó de alho no sal mineral também foi encontrada por BIANCHIN et
al. (2007).
Apesar da baixa eficácia, Camargo (1988) faz referência ao alho como vermífugo
(Ascarídeos, Oxiúros e Tênias), recomendando várias formas do seu emprego para esse
fim, como o sumo, na dose de 20g em 200 ml de leite em jejum para humanos.
Em se tratando do tempo de exposição das larvas ao suco de alho, constatou-se que
quanto maior o tempo de exposição, maior o efeito sobre a viabilidade (motilidade) das
larvas testadas, sendo este dependente do tempo de exposição (Tabela 02).
Tabela 02. Percentual de atividade larvicida do suco de alho, in vitro de acordo com o tempo
de exposição sobre a viabilidade das larvas de nematóides gastrintestinais de caprinos,
Patos – PB, 2008.
Motilidade das Larvas
Tempo
Larvas
Vivas
Larvas
M
ortas
24h
58,895 A 41,105 B
48
h
55,262 A 44,738 B
72h
44,948 B 55,052 A
Letras diferentes indicam valores significativamente diferentes (P<0,05).
Verificou-se que todas as concentrações do suco de alho tenderam a aumentar sua
eficácia com o passar do tempo, sendo, portanto o tempo de 72 horas o mais indicado no
controle de nematóides gastrintestinais.
Fernandes et al. (2004) estudaram a atividade anti-helmíntica das plantas; Allium
sativum, Punica granatum, Tynnanthus fasciculatus e Cocos nucifera. Utilizaram 70
frangos infectados naturalmente com Heterakis gallinarum, divididos em grupos de dez
animais, com um controle positivo (20) e um negativo (10). Administraram as plantas na
forma de extrato aquoso, suco e trituradas incorporadas à ração nas doses de 2, 3 e 10g kg-1
dia-1, durante três dias consecutivos. O A. sativum (suco a 10%) eliminou 6,7% dos
parasitos. O efeito do suco de alho tornou-se evidente em 48 horas, mantendo-se estável. O
percentual de eliminação dos parasitos pelo alho correspondeu a 1/4 do controle positivo
(mebendazol). Desta forma, o suco de alho na dose empregada não apresentou atividade
significativa (P<0,05) sobre o helminto H. gallinarum. Provavelmente, a localização cecal
do nematóide dificultou o acesso dos agentes anti-helmínticos, reduzindo sua ação. No
entanto, o efeito do alho em termos de percentuais médios de eliminação foi sensivelmente
superior ao do grupo controle e inferior ao mebendazol.
Ao relacionar tempo de exposição aos tratamentos aplicados, verificou-se que, após
72 horas de exposição direta ao suco de alho na concentração de 50% todas as larvas
permaneceram sem motilidade (100%) e na concentração de 25% do suco de alho 98,73%
das larvas encontravam-se mortas.
Baseado na recomendação do índice de eficácia proposto pela W.A.A.V.P (World
Association for the Advancement of Veterinary Parasitology) (Powers et al. 1982) um
produto seria altamente efetivo se apresentasse mais de 90% de ação contra o parasito
tratado, moderadamente efetivo quando atuasse entre 80 a 90%, pouco efetivo quando a
ação fosse entre 60 e 80% e não efetivo em níveis abaixo de 60%.
Quando se comparou os dados obtidos com o grupo testemunha e o grupo químico
verificou-se que os mesmos foram indiferentes ao tempo de exposição, porém
significativamente inferiores ao suco do alho nas concentrações 12, 25 e 50% (Tabela 3).
Tabela 03 - Percentual de larvas mortas de nematóides gastrintestinais de caprinos, quando
submetidas ao tratamento como o suco de alho de acordo com o tempo de exposição, Patos
– PB, 2008.
Tempo de Exposição
Tratamento
24h
48h
72h
3 9,7Bb 0 Bb 32,2BCa
6
10,0
B
c
33,47B
b
59,0B
a
12
79,63
A
a
82,57A
a
90,67
A
a
25 96,07Aa 96,36Aa 98,73Aa
50
92,33
A
a
99,20A
a
100,0A
a
Testemunho
0
B
a
0
B
a
0,73
C
a
Químico
0
B
a
0
B
a
0,73C
a
Letras maiúsculas comparam médias nas colunas. Letras diferentes indicam valores significativamente
diferentes (P<0,05).
Estudo objetivando avaliar a atividade anti-helmíntica do chá de alho sobre
nematóides de cães demonstrou, no experimento in vitro, que o A. sativum apresenta
potente ação larvicida sobre Ancylostoma caninum. Nas doses empregadas, não se observou
atividade tóxica (BERCHIERE JÚNIOR et al., 1988).
As diferenças entre os resultados de estudos in vitro e in vivo podem ser explicadas
pela toxicocinética dos constituintes da planta relacionada ao metabolismo ruminal nos
poligástricos (Vandamme & Ellis, 2004) ou no estômago nos monogástricos (FLORIO,
2002). Outra explicação está relacionada à preparação dos extratos, a concentração do
produto e duração do tratamento.
CONCLUSÃO
O suco do alho nas concentrações de 25 e 50% demonstrou ser eficaz no controle de
larvas de nematóides gastrintestinais em caprinos, constituindo assim uma boa alternativa
para o controle destes parasitos.
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CAPÍTULO 2 – ATIVIDADE in vitro DO EXTRATO ETANÓLICO DA SEMENTE
DE JERIMUM (Cucurbita pepo l.) SOBRE OVOS E LARVAS DE NEMATÓIDES
GASTRINTESTINAIS DE CAPRINOS.
Manuscrito enviado para a “Revista Brasileira de Plantas Medicinais”
Atividade in vitro do extrato etanólico da semente de jerimum (Cucurbita pepo l.)
sobre ovos e larvas de nematóides gastrintestinais de caprinos.
Autores: Ana Raelma Mendes de Sousa
1
; Ana Célia Rodrigues Athayde
2
; Werlaneide
Araújo da Silva
3
; Vinícius Longo Vilela
4
.
1- Aluna do curso de Pós-graduação em Medicina Veterinária da UFCG –
Campus de Patos – PB, [email protected]m;
2- Professora adjunto da Unidade Acadêmica de Ciências Biológicas da UFCG – Campus
de Patos – PB;
2- Mestre em Zootecnia;
4- Aluno do curso de Medicina Veterinária da UFCG – Campus de Patos – PB
Atividade in vitro do extrato etanólico da semente de jerimum (Cucurbita
pepo L.) sobre ovos e larvas de nematóides gastrintestinais de caprinos.
RESUMO
Por causa do desenvolvimento de resistência em populações de nematóides gastrintestinais,
tem sido essencial a busca por novas drogas para manter a produtividade do rebanho
caprino. O objetivo desse estudo foi o de avaliar a atividade anti-helmíntica in vitro do
extrato da semente de jerimum (Cucurbita pepo L) sobre o desenvolvimento de ovos e
larvas de nematóides gastrintestinais. As larvas foram obtidas de coprocultura e a
recuperação de ovos foi feita em tamises, a partir de fezes de caprinos naturalmente
infectados com infecção poliespecífica. Foram utilizadas as seguintes concentrações do
extrato: 50; 25; 12,5; 6,25 e 3,12 mg/mL
-1
para o teste ovicida e larvicida e como controle
positivo 0,2 mg.kg
3
de moxidectina e para testemunha, utilizou-se água destilada estéril. As
placas foram examinadas ao microscópio óptico para contagem dos ovos em
desenvolvimento (viável e inviável) e larvas vivas e mortas, após 24 h, 48 h e 72h. O
extrato na concentração de 25 e 50% foi capaz de interromper o desenvolvimento de 40,37
e 62,60% dos ovos, respectivamente. A ação larvicida foi melhorada com o aumento das
concentrações do extrato, chegando a inviabilizar 92,91% das larvas na concentração de
50%. A atividade ovicida e larvicida do extrato da semente de jerimum foi mais eficaz a
partir de 72 horas de exposição. Os resultados indicaram que o extrato, pode ser utilizado
como alternativa no controle de helmintos gastrintestinais de caprinos.
Palavras – chave: caprinos, nematóides gastrintestinais, controle, plantas medicinais,
Cucurbita pepo L
Effect in vitro of the extract etanolic of the pumpkin seed (Cucurbita pepo L.) on eggs
and larvae of nematode gastrointestinal of goats.
ABSTRACT
Because of the resistance development in populations of nematodes gastrointestinal, it has
been essential the search for new drugs to maintain the productivity of the goat flock. The
objective of that study was it of evaluating the activity anthelminthic in vitro of the extract
of the pumpkin seed (Cucurbita pepo L) on the development of eggs and larvae of
nematodes gastrointestinal. The larvae were obtained of coproculture and the recovery of
eggs was made in sieves, starting from feces of goat naturally infected with infection
polispecific. The following concentrations of the extract were used: 50; 25; 12,5; 6,25 and
3,12 mg/mL-1 for the test ovicidal and larvicidal and as positive control 0,2 mg.kg of
moxidectin and for witness, water was used distilled sterile. The plates were examined to
the optical microscope for count of the eggs in development (viable and unviable) and alive
and dead larvae, after 24 h, 48 h and 72 h of incubation. The extract in the concentration of
25 and 50% was capable to interrupt the development of 40,37 and 62,60% of the eggs,
respectively. The action larvicidal was gotten better with the increase of the concentrations
of the extract, getting to make unfeasible 92,91% of the larvae in the concentration of 50%
the activity ovicidal and larvicidal of the extract of the pumpkin seed was better observed
starting from 72 hours of exhibition. The results indicated that the extract, it can be used as
alternative in the control of gastrointestinal nematodes of goats.
Key words: goats, nematodes gastrointestinal control, medicinal plants, Cucurbita pepo.
INTRODUÇÃO
De acordo com Amarante (2004) praticamente 100% dos ruminantes são portadores
de pelo menos uma espécie de endoparasita.
A alta eficácia das drogas anti-helmínticas causou o incremento da produção, levou os
produtores a usarem intensivamente os anti-helmínticos. Entretanto, os seres vivos possuem
o que se chama de diversidade biológica. Isto pode levar os indivíduos, em uma
determinada população, a sobreviverem aos efeitos de um dado composto químico. Esta
habilidade de sobreviver a futuras exposições a uma droga desafiante pode ser transmitida
aos seus descendentes, isto é, indivíduos resistentes aos compostos químicos se
desenvolvem (ALVES, 2006).
Um dos fatores que contribuem para o agravamento da resistência é o fato de que,
em virtude do alto custo dos produtos anti-helmínticos convencionais, a maioria dos
produtores não promove o tratamento adequado dos seus rebanhos, usando subdosagens ou
periodicidade inadequada, o que conseqüentemente, leva ao desenvolvimento da resistência
por parte dos parasitas (VIERA et al., 1999).
Apesar da existência de diversos anti-helmínticos disponíveis comercialmente, o
desenvolvimento de resistência pelos nematóides e a busca do mercado consumidor por
fontes de tratamento em substituição aos produtos químicos, têm justificado diversas
pesquisas que buscam plantas medicinais para o controle de nematóides gastrintestinais.
Entretanto a total aceitação de drogas derivadas de plantas fitoterapia na medicina científica
só poderão ocorrer se estes produtos cumprirem os mesmos critérios de eficácia, segurança
e controle de qualidade que os produtos sintéticos (Rates, 2001), ou seja, os produtos
derivados de plantas devem ter eficácia avaliada e confirmada, assim como deve ser
garantida que sua administração a organismos vivos ocorra sem riscos para sua saúde
(CAMURÇA, 2005).
No passado, a fitoterapia era mais adotada pela população carente da área rural ou
urbana, devido à fácil disponibilidade e menores custos. Atualmente, o uso de plantas como
uma fonte de medicamentos é predominante em países em desenvolvimento como uma
solução alternativa para problemas de saúde (SHALE, 1999).
O uso de fitoterápicos com finalidade profilática, curativa, paliativa ou com fins de
diagnóstico passou a ser oficialmente reconhecido pela OMS (Organização Mundial de
Saúde) em 1978, quando recomendou a difusão mundial dos conhecimentos necessários
para o seu uso. Considerando-se as plantas medicinais importantes instrumentos da
Assistência Farmacêutica, vários comunicados e resoluções da OMS expressam a posição
do organismo a respeito da necessidade de valorizar o uso desses medicamentos, no âmbito
sanitário. É sabido que 80% da população mundial dependem das práticas tradicionais no
que se refere à atenção primária à saúde, e 85% dessa parcela utiliza plantas ou preparações
à base de vegetais. Ressalte-se aí que 67% das espécies vegetais medicinais do mundo são
originadas dos países em desenvolvimento (ALONSO, 2004).
Muitas plantas dos biomas brasileiros, tais como o cerrado, a floresta amazônica e a
mata atlântica têm sido utilizadas como fármacos naturais pelas populações locais no
tratamento de várias doenças tropicais, incluindo esquistossomose, leishmaniose, malária e
infecções fúngicas e bacterianas. Além disso, muitas plantas exóticas foram introduzidas no
Brasil desde a colonização e incorporadas na medicina popular (DUARTE, 2006).
O uso de partes vegetais como folhas, frutos e sementes é considerado menos
deletério do que o uso de outras partes vitais como caule, casca ou raiz (CUNNINGHAM,
2001).
O objetivo deste experimento foi o de avaliar a atividade in vitro da semente de
jerimum (Cucurbita pepo L.) sobre ovos e larvas de nematóides gastrintestinais.
MATERIAL E MÉTODOS
Local de realização do experimento
O experimento foi desenvolvido no Laboratório de Doenças Parasitárias dos
Animais Domésticos (LDPAD) da Unidade Acadêmica de Medicina Veterinária (UAMV)
do Centro de Saúde e Tecnologia Rural (CSTR) da Universidade Federal de Campina
Grande (UFCG) - Campus de Patos/PB.
Manejo dos animais infectados e coleta de fezes
Foram utilizados dois caprinos, entre seis e 12 meses de idade, peso médio de 25
kg, provenientes do Núcleo de Pesquisas do Semi–Árido (NUPEÀRIDO), pertencente à
Universidade Federal de Campina Grande – UFCG, Campus de Patos – PB naturalmente
infectados por helmintos gastrintestinais (infecção poliespecífica). Exames
coproparasitológicos foram realizados antes do início do experimento como contagem de
ovos por grama de fezes (OPG) pela técnica de Gordon & Whitlock (1939), e cultivo de
larvas pelo método de Robert’s O’Sullivan (1950) para identificação de larvas infectantes
do 3º estágio, a fim de verificar o grau de parasitismo dos caprinos. Os animais foram
colocados em piquetes, recebendo água ad libitum, forragem verde e suplementação
mineral durante 30 dias.
As amostras individuais de fezes foram obtidas diretamente da ampola retal,
identificadas e acondicionadas em sacos plásticos e levadas ao Laboratório de Doenças
Parasitárias dos Animais Domésticos para análises parasitológicas.
Coleta do material vegetal e obtenção do extrato
A planta utilizada foi a Cucurbita pepo L., obtida na feira livre de Patos-PB. O
material vegetal foi levado ao Laboratório de Botânica-CSTR-UFCG, para a identificação
botânica das partes da planta indicada no estudo etnofarmacológico e posterior
herbarização. A semente do jerimum foi colocada para secar a sombra para posterior
processamento.
O material vegetal foi, então, higienizado e picado em triturador industrial, pesado
em balança eletrônica de precisão para separação de alíquotas iguais, e por fim armazenado
em bolsas de TNT. A amostra foi colocada em recipiente de vidro esterilizado para
preparação da alcoolatura, permanecendo submersa em álcool por um período de 72 horas.
Foram utilizada 300g da semente em 4300 mL de álcool etílico PA. Este procedimento foi
realizado no Laboratório de Nutrição-CSTR-UFCG.
Após esse período foi realizada a filtragem utilizando-se papel filtro. O líquido
filtrado (volume inicial = V
1
) foi transferido em pequenas alíquotas de 300 mL para um
balão de 1000 mL para a obtenção do extrato líquido, a uma temperatura de 40 ± 50°C em
estufa. O extrato obtido (volume final = V
2
) foi transferido para um recipiente de vidro de
cor âmbar, com capacidade para 1000 mL, sob a temperatura ambiente (40ºC) por 10
minutos e em seguida foi mantido sob refrigeração (4ºC) até o momento da realização dos
testes. A concentração da planta em g/mL (m/v) do extrato obtido foi determinada por
mg/mL, o volume final (V
2
), após a extração também foi determinado por mL, a partir
dessa concentração final foram preparadas às concentrações teste.
Concentração Teste
Utilizaram-se as seguintes concentrações: 50; 25; 12,5; 6,25 e 3,12 mg.mL-1
preparadas a partir da concentração matriz do suco do material vegetal e moxidectina na
concentração de 0,2 mg/ml
-1
para controle positivo e para testemunha, utilizou-se água
destilada estéril.
Teste de eclodibilidade
Foram utilizados dois caprinos com infecção poliespecífica para obtenção dos ovos
e das larvas. As fezes foram colhidas diretamente da ampola retal para contagem de ovos
por grama de fezes (opg) de nematóides gastrintestinais empregando – se a técnica de
Gordon & Whitlock (1939).
As fezes foram maceradas em gral e diluídas em água esterilizada. Em seguida,
foram passadas através de quatro tamises, dispostos em ordem decrescente de abertura de
malha (250 µm; 200 µm; 180 µm e 100 µm). Os ovos dos nematódeos foram recuperados
do tamis com menor abertura entre malhas e diluídos em água destilada formando uma
suspensão, com ovos da Super Família Trichostrongyloidea.
O teste de eclosão de ovos foi realizado em placa de Petri. O tempo decorrido
entre a coleta de fezes do caprino portador de infecção poliespecífica e o início da
incubação dos ovos, sob a ação do extrato da planta, foi de duas horas. Foram adicionados
2 mL da suspensão de ovos, com aproximadamente 500 ovos de helmintos gastrintestinais,
2 mL da diluição do extrato da semente de jerimum, obtendo-se concentrações finais iguais
a 50; 25; 12,5; 6,25 e 3,12 mg.mL-1. Uma placa de Petri com suspensão de ovos e
moxidectina na concentração de 0,2 mg.kg
4
constituiu o controle positivo e outra placa com
água destilada serviu de testemunha. O delineamento experimental foi repetido três vezes
para assegurar a validação dos resultados. Ao todo foram analisadas 21 unidades
experimentais. As placas foram examinadas ao microscópio ótico, para contagem dos ovos
em desenvolvimento, às 24 h, 48 h e 72 h de incubação.
As variáveis quantificadas foram: ovo viável (V) e inviável (I), identificado pelo
gênero.
Teste Larvicida
O teste utilizado para avaliação inicial da atividade anti-helmíntica de plantas é o
teste de inibição da motilidade ou do desenvolvimento larvar que é um procedimento
modificado da técnica descrita por Hubert & Kerbouef (1984), também, inicialmente,
desenvolvido para avaliação de resistência anti-helmíntica.
Para a obtenção das larvas de Helmintos, as fezes foram coletadas diretamente da
ampola retal em quantidades de aproximadamente 10 gramas, em seguida foram
acondicionadas em sacos plásticos e encaminhadas diretamente ao Laboratório de Doenças
Parasitárias dos Animais Domésticos (LDPAD) da Universidade Federal de Campina
Grande – campus de Patos-PB, sob temperatura ambiente.
As larvas infectantes foram obtidas através da coprocultura pela técnica de
(ROBERTS & O’SULLIVAM, 1950). A partir da suspensão obtida através da
coprocultura, procedeu-se a contagem das larvas. Foram utilizados 2 mL do extrato nas
concentrações 50; 25; 12; 6 e 3% mg/mL
-1
para cada 200 larvas em 2mL aproximadamente
de acordo com Hubert & Kerboeurf (1984), colocado em placas de Petri de 10cm. Foram
feitas 3 repetições para cada concentração utilizada.
A ação dos extratos vegetais sobre o desenvolvimento dos ovos foi avaliada após o
período de encubação de 24, 48 e 72 horas, com a transferência do conteúdo das placas de
Petri para lâminas e procedendo-se a leitura em microscópio óptico em aumento de 100
vezes. Foram avaliadas todas as larvas presentes nas amostras classificando-as em vivas e
mortas. (Figura 1).
O procedimento foi igualmente repetido com água destilada para o controle
negativo e com moxidectina na concentração de 0,2 mg/ml
5
para o controle positivo.
As larvas encontradas correspondiam aos gêneros Haemonchus, Trichostrongylus,
Oesophagostomum, Strongyloides e Cooperia.
Fig 01. Larva morta (L
3
), vista ao microscópio óptico sub-
metida ao tratamento com o extrato da semente de jerimum
(Cucurbita pepo L.)
Fonte: LDPAD/UFCG (2008).
5
Cydectin
oral
– Fort Dodge.
ANÁLISE ESTATÍSTICA
Os testes de eclosão de ovos e de desenvolvimento larval foram sumarizados como
médias e desvios padrões e as diferenças estatísticas foram mensuradas usando a análise de
variância (ANOVA) e confirmado pelo Teste de Tukey a 5% de significância (SAS, 1997).
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Ovos:
Considerando-se que, para um tratamento ovicida ser eficiente, ele deve alterar o
desenvolvimento normal dos ovos, impedindo que os mesmos eclodam, liberando as larvas
que se tornarão infectante. O ideal é que se tenha um produto que impeça o prosseguimento
da fase de blastomeração.
Ao avaliar o extrato etanólico da semente de jerimum sobre a viabilidade dos ovos
de helmintos gastrintestinais de caprinos, verificou-se que o extrato etanólico na
concentração de 25 e 50% foi capaz de interromper o desenvolvimento de 40,37 e 62,60%
dos ovos, valor este significativo quando comparado com a testemunha (controle negativo),
demonstrando assim ser o extrato etanólico da semente de jerimum uma boa alternativa
para o controle das helmintoses gastrintestinais em caprinos (Tabela 01).
Conforme cita Batista et al., (1999) o retardamento da eclosão dos ovos e a atuação
do extrato sobre as larvas pode resultar numa inviabilização do total de ovos eliminados
pelos parasitas.
Tabela 01. Percentual de atividade ovicida in vitro do extrato etanólico da semente de
jerimum, aos diversos tratamentos utilizados sobre a viabilidade dos ovos de nematóides
gastrintestinais de caprinos, Patos – PB, 2008.
Viabilidade dos Ovos
Tratamentos
Ovos
Viávei
s
Ovos
Inviáveis
3%
98,68A
1,32D
6%
94,54A
5,46D
12%
89,20AB
10,80CD
25%
59,63C
40,37B
50%
37,31D
62,60A
Testemunho
94,78A
5,22D
Químico
74,07BC
25,93BC
Letras maiúsculas comparam médias nas colunas. Letras diferentes indicam valores significativamente diferentes
(P<0,05).
Na tabela 02 analisou-se o tempo de exposição dos ovos de helmintos
gastrintestinais aos tratamentos aplicados e observou-se que quanto maior o tempo de
exposição do ovo ao extrato, maior é o percentual de ovos inviáveis.
Tabela 02. Percentual de atividade ovicida in vitro do extrato etanólico da semente de
jerimum, de acordo com o tempo de exposição sobre a viabilidade dos ovos de nematóides
gastrintestinais de caprinos, Patos – PB, 2008.
Viabilidade dos Ovos
Tempo
Ovos
Viáve
is
Ovos
Inviáveis
24h
91,43
A
8,57C
48
h
77,59B 22,41B
7
2h
65,92C
34,04
A
Letras diferentes indicam valores significativamente diferentes (P<0,05).
Na tabela 3 verificou-se que em 24 horas de exposição dos ovos aos tratamentos
aplicados não houve diferença significativa entre eles. Após 72 horas de exposição dos
ovos ao extrato etanólico da semente de jerimum, percebeu-se claramente que 76,40 dos
ovos permaneceram inviáveis de concentração 50%, sendo este valor significativo quando
comparado ao controle positivo e negativo.
Tabela 03 – Percentual de ovos inviáveis de nematóides gastrintestinais de caprinos,
quando submetidos ao tratamento com extrato etanólico da semente de jerimum de acordo
com o tempo de exposição, Patos – PB, 2008
Tempo de Exposição
Tratamento
24h
48h
72h
3 0,63Aa 0,0Ca 3,33Ba
6
2,4Aa
0,57Ca
13,4Ba
12
0,47Aa
1,90Ca
30,03Ba
25 15,37Ab 45,43Bab 60,30Aba
50
30,40Ab
81Aa
76,40Aa
Testemunho
4,33Aa
3,67Ca
7,67Ba
Químico
6,37Ab
24,27B
c
ab
47,17Aba
Letras maiúsculas comparam médias nas colunas. Letras diferentes indicam valores significativamente
diferentes (P<0,05).
Almeida et al (2007), testando a eficácia das plantas, in natura do Melão de São
Caetano, Batata de Purga e Sementes de Jerimum sobre infecções helmínticas em caprinos
naturalmente infectados da fazenda NUPEÁRIDO no campus da UFCG- Patos durante o
ano de 2004, observaram que as plantas medicinais utilizadas sinalizaram como uma
alternativa ecologicamente viável para o controle das helmintoses gastrintestinais de
caprinos no semi-árido paraibano. Do mesmo modo, Girão & Carvalho (2004) no estado do
Piauí testando extratos de Luffa operculata (bucha-paulista), Operculina sp. (batata de
purga), Momordica charantia (melão de são Caetano) e Cróton sp. (velame) observaram
inibição no desenvolvimento dos ovos de nematóides gastrintestinais de caprinos.
Batista et al., (1999) no estado do Ceará, demonstraram que o extrato de Spigelia
anthelmia e M. charantia inibiu em 50% a eclosão dos ovos de Haemonchus contortus
provenientes de ovinos.
Larvas:
Ao avaliar a ação do extrato etanólico da semente de jerimum sobre a viabilidade
das larvas, observou-se que a ação do extrato pode ser observada mesmo em baixas
concentrações, sendo, portanto potencializada à medida que se aumenta a concentração,
chegando a inviabilizar 92,91% das larvas na concentração de 50%. O extrato etanólico da
semente de jerimum foi eficaz no controle de larvas de helmintos gastrintestinais de
caprinos (Tabela 04).
Tabela 04. Percentual de eficiência anti-helmíntica in vitro do extrato etanólico da semente
de jerimum, aos tratamentos utilizados sobre a viabilidade das larvas de nematóides
gastrintestinais de caprinos, Patos – PB, 2008.
Motilidade das Larvas
Tratamentos
Larvas
Vivas
Larvas
Mortas
3%
84,42
ª
15,58D
6%
57,20BC
42,80BC
12%
64,36B
35,64C
25%
39,88C
60,12B
50%
7,09D
92,91
ª
Testemunho
99,76
ª
0,24D
Químico
98,13
ª
1,87D
Letras maiúsculas comparam médias nas colunas. Letras diferentes indicam valores significativamente diferentes
(P<0,05).
Corroborando com estes achados, Berchiere Júnior et al (1988) pesquisando os
possíveis efeitos da Momordica charantia (melão-de-São-Caetano) e da Cucurbita máxima
(abóbora) contra helmintos parasitas de cães, demonstraram que a administração de C.
máxima durante a fase pré-tecidual em qualquer das fases evolutivas resultou em vermes de
comprimento menor em relação aos controles (p<0,05). Durante os estudos “in vitro” com
ovos de Ancylostoma caninum (parasita de cães) as duas plantas mostraram ação larvicida
potente.
Na tabela 05 analisou-se o tempo de exposição das larvas de helmintos
gastrintestinais aos tratamentos aplicados. Observou-se que quanto maior o tempo de
exposição da larva ao extrato, maior foi o percentual de larvas mortas.
Tabela 05. Percentual de eficiência anti-helmíntica do extrato da semente de jerimum, in
vitro de acordo com o tempo de exposição sobre a viabilidade das larvas de nematóides
gastrintestinais de caprinos, Patos – PB, 2008.
Motilidade das Larvas
Tempo
Larvas
Vivas
Larvas
Mortas
24h
82,26 A 17,74 C
48
h
67,75 B 32,25 B
72h
43,21 C 56,79 A
Letras diferentes indicam valores significativamente diferentes (P<0,05).
Ao analisar a Tabela 6 observou-se que as larvas foram sensíveis ao extrato da
semente de jerimum a 50% após 24 horas de exposição. O extrato na concentração de 50%
com 48 e 72 horas de exposição, inviabilizou 100 e 99,43% das larvas respectivamente.
Utilizando-se os índices propostos pela W.A.A.V.P. (Powers et al., 1982), o extrato
na concentração de 50%, que apresentou eficácia em torno de 100%, pode ser considerado
altamente efetivo contra o desenvolvimento larval, pois está acima dos 90% de ação
desejada para produtos anti-helmínticos.
Tabela 06 – Percentual de larvas mortas de nematóides gastrintestinais de caprinos,
quando submetidas ao tratamento com extrato da semente de jerimum de acordo com o
tempo de exposição, Patos – PB, 2008
Tempo de Exposição
Tratamento
24h
48h
72h
3 3,37Bb 2,57Cb 40,80Ba
6
8,67Bb
35,83BCb
83,90Aa
12
4,5Bb
27,40BCb
75,03Aa
25 28,37Bb 58,37Bab 93,63Aa
50
79,30Aa
100Aa
99,43Aa
Testemunho
0,00Ba
0,00Ca
0,73Ca
Químico
100Ba
1,57Ca
4,03Ca
Letras maiúsculas comparam médias nas colunas. Letras diferentes indicam valores significativamente
diferentes (P<0,05).
CONCLUSÃO
O extrato da semente de jerimum demonstrou ser altamente efetivo, impedindo o
desenvolvimento dos ovos e a motilidade das larvas dos nematóides gastrintestinais, tendo,
portanto potencial anti-helmíntico natural.
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anti-bacterial and anti-inflammatory activity. Journal of ethnopharmacology, n. 67, p.
347-354, 1999.
VIEIRA, L. S.; CAVALCANTE, A. C. R.; PEREIRA, M. F; DANTAS, L. B.; XIMENES,
L. J. F. Evaluation of anthelmintic efficacy of plants available in Ceará State, North–East
Brazil, for the control of goat gastrointestinal nematodes. Revue de Medecine Veterinaire,
Toulouse, v.150, n.5, p. 447-452. 1999.
ANEXOS
A – Normas das revistas
REVISTA BRASILEIRA DE PARASITOLOGIA VETERINÁRIA
Brazilian Journal of Veterinary Parasitology
POLÍTICA EDITORIAL E INSTRUÇÕES AOS AUTORES
Na elaboração do texto deverão ser observadas as seguintes normas:
Os trabalhos deverão ser apresentados em três cópias impressas em uma só face,
com páginas numeradas, não excedendo a 15 para artigos completos e 5 para notas de
pesquisa, digitados em fonte Times New Roman tamanho 12, margens superior e inferior
com 2,5 cm, esquerda e direita com 3 cm e espaço entre linhas 1,5. As tabelas e as
ilustrações deverão ser apresentadas em folhas separadas e anexadas ao final do trabalho. A
versão final dos trabalhos, aceitos para publicação, deverá ser apresentada em disquete (3 ½
polegadas) ou em CD ROM identificados, em editor de texto compatível com o Word for
Windows, sem formatação do texto, devidamente acompanhados de uma cópia impressa.
Os trabalhos podem ser redigidos em português, espanhol ou inglês, da forma mais
concisa possível, com linguagem sempre que possível no passado e impessoal, com os
sinais de chamadas de rodapé em números arábicos e lançados ao pé da página em que
estiver o respectivo número e em ordem crescente.
Siglas e abreviações dos nomes de instituições, ao aparecerem pela primeira vez no
trabalho serão colocadas entre parênteses e precedidas do nome por extenso. As citações no
texto devem ser efetuadas pelo sistema autor-data, conforme norma NBR 10520/2002 da
ABNT. Os artigos completos devem ser organizados obedecendo à seguinte seqüência:
Título, Autores, Abstract, Resumo, Introdução, Material e Métodos, Resultados,
Discussão, Conclusões (ou combinação destes três últimos),
Agradecimentos (facultativo) e Referências Bibliográficas.
As notas de pesquisa obedecem a seqüência acima sem a necessidade de se destacar
os tópicos, sendo escrito em texto corrido.
Características dos elementos de um trabalho científico:
Título/autores: Original e traduzido e logo abaixo do título deve constar o (s) nome(s) do
(s) autor (res). No rodapé, vinculação dos autores, órgão financiador e endereço completo
para correspondência, incluindo e-mail, telefone e fax.
Abstract: Deve ser sempre escrito em língua inglesa, em um único parágrafo sem
deslocamento, e inserido logo após os autores, constituindo-se em tradução fiel do resumo,
seguido por key-words.
Resumo: deve conter no máximo 200 palavras em um só parágrafo sem deslocamento,
redigido na língua de origem do trabalho. Não deve conter citações bibliográficas; siglas e
abreviações dos nomes de instituições. Deve ser informativo, apresentando o objetivo do
trabalho, metodologia sucinta, os resultados mais relevantes e a conclusão. Os trabalhos
redigidos em língua inglesa deverão apresentar o resumo em língua portuguesa, seguido das
palavras-chave.
Palavras-chave e Key-words: as palavras-chave devem expressar com precisão o
conteúdo do trabalho e seu uso limitado a cinco.
Introdução: Explanação clara e objetiva do problema, da qual devem constar a relevância e
objetivos do trabalho, restringindo as citações ao necessário.
Material e Métodos: Descrição concisa, sem omitir o essencial para a compreensão e
reprodução do trabalho. Métodos e técnicas já estabelecidos devem ser apenas citados e
referenciados. Trabalhos submetidos à avaliação em Comitê de Ética deverão incluir um
parágrafo nesta seção para notificação.
Resultados: Sempre que necessário devem ser acompanhados de tabelas, figuras ou outras
ilustrações, auto-explicativas. O conteúdo deve ser informativo e não interpretativo.
Discussão: Deve ser limitada aos resultados obtidos no trabalho e o conteúdo deve ser
interpretativo. Poderá ser apresentada como um elemento do texto ou juntamente com os
resultados, formando o tópico
Tabelas: Elaboradas apenas com linhas horizontais de separação no cabeçalho e ao final. A
legenda (título) é precedida da palavra Tabela, seguida pelo número de ordem em
algarismos arábicos, devendo ser descritivas, concisas e inseridas acima das mesmas. As
tabelas devem estar limitadas a um número mínimo necessário, lembrando que tabela muito
grande são difíceis de serem lidas. Devem ser digitadas em espaço duplo em arquivos
separados. Todos os dados das tabelas devem ser digitados em minúsculo, exceto as siglas.
Figuras: as figuras são ilustrações tais como: desenho, fotografia, prancha, gráfico,
fluxograma e esquema. Devem ser de boa qualidade e numeradas consecutivamente. As
legendas devem ser precedidas da palavra Figura, seguida da numeração em algarismo
arábico e inseridas abaixo das mesmas. Listar as legendas numeradas com os respectivos
símbolos e convenções em folha separada em espaço duplo. O número de ilustrações deve
ser restrito ao mínimo necessário. Fotografias digitais deverão ser enviadas em arquivos
separados, tal qual foram obtidas, nos casos de foto em papel enviar o(s) original (ais). A
revista não publica figuras em cores.
Conclusões: As conclusões podem estar inseridas na discussão ou em resultados e
discussão, conforme a escolha dos autores. Neste caso, este item não será necessário.
Agradecimentos: Quando necessário limitado ao indispensável.
Referências bibliográficas: A lista de referências deverá ser apresentada em ordem
alfabética pelo sobrenome do primeiro autor, sem numeração, registrando-se o nome de
todos os autores, usando as normas da ABNT (NBR 6023/2002) simplificada conforme
exemplos:
Livro:
LEVINE, J. D. Veterinary Protozoology. Ames: ISU Press, 1985. 414 p.
Artigo completo:
BUGG, R. J.; ROBERTSON, I. D.; ELLIOT, A. D.; TOMPSON, R. C. A. Gastrointestinal
parasites of urban dogs in Perth, Western Australia. Veterinary Journal, v. 157, n. 3, p.
295-301, 1999.
Resumo:
LIMA, N. D. Eimeriose dos ruminantes. In: II SEMINÁRIO BRASILEIRO DE
PARASITOLOGIA VETERINÁRIA, 20, 1980, Fortaleza. Anais ... Brasília: C B P V,
1980. p. 79-97.
Tese, dissertação:
ARAUJO, M. M. Aspectos ecológicos dos helmintos gastrintestinais de caprinos do
município de Patos, Paraíba – Brasil. 2002. 40 p. Dissertação (Mestrado) - Universidade
Federal Rural do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2002.
Documento eletrônico:
CDC. Epi Info, 2002. Disponível em: http://www.cdc.gov/epiinfo/ei2002.htm. Acesso em:
10 jan. 2003.
JESUS, V. L. T.; PEREIRA, M. J. S.; ALVES, P. A. M. Susceptibilidade de raças bovinas
a tricomonose genital. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE PARASITOLOGIA
VETERINÁRIA, 12, 2002, Rio de Janeiro. Anais...Rio de Janeiro: CBPV, 2002. 1 CD-
ROM.
Revista Brasileira de Plantas Medicinais - RBPM
A Revista Brasileira de Plantas Medicinais - RBPM é publicação trimestral e
destina-se à divulgação de trabalhos científicos originais, revisões bibliográficas e notas
prévias, que deverão ser inéditos e contemplar as grandes áreas relativas ao estudo de
plantas medicinais. Manuscritos que envolvam ensaios clínicos deverão vir acompanhados
de autorização de Comissão de Ética constituída, para realização dos experimentos. Os
artigos podem ser redigidos em português, inglês ou espanhol, sendo sempre obrigatória a
apresentação do resumo em português e em inglês, independente do idioma utilizado. Os
artigos devem ser enviados por email: rbpm@ibb.unesp.br, em espaço duplo, com margens
de 2 cm. A digitação deverá ser feita no “Word for Windows” (em letra Arial 12) e editores
gráficos compatíveis, como Excel, etc. Artigos muito extensos, fotografias e gráficos
coloridos podem ser publicados, a critério da Comissão Editorial, se o autor se
comprometer, mediante entendimentos prévios, a cobrir parte das despesas de publicação.
No e-mail, enviar telefone para contatos mais urgentes. Assinaturas podem ser feitas em
www.ibb.unesp.br/rbpm
REVISÕES BIBLIOGRÁFICAS E NOTAS PRÉVIAS
Revisões e Notas prévias deverão ser organizadas basicamente em: Título, Autores,
Resumo, Palavras-chave, Abstract, Key words, Texto, Agradecimento (se houver) e
Referência Bibliográfica.
ARTIGO CIENTÍFICO
Os artigos deverão ser organizados em:
TÍTULO:
Deverá ser claro e conciso, escrito apenas com a inicial maiúscula, centralizado, na
parte superior da página. Se houver subtítulo, deverá ser em seguida ao título, em
minúscula, podendo ser precedido de um número de ordem em algarismo romano. Os
nomes comuns das plantas medicinais devem ser seguidos pelo nome científico (binômio
latino e autor) entre parênteses.
AUTORES:
O último sobrenome dos autores deverá ser colocado por extenso (nomes
intermediários somente iniciais) em letras maiúsculas, 2 linhas abaixo do título. Após o
nome de cada autor deverá ser colocado um número sobrescrito que deverá corresponder ao
endereço: instituição, endereço da instituição (cidade, sigla do estado, CEP, e-mail). Indicar
o autor que deverá receber a correspondência. Os autores devem ser separados com ponto e
vírgula.
RESUMO:
Deverá constar da mesma página onde estão o título e os autores, duas linhas abaixo
dos autores. O resumo deverá ser escrito em um único parágrafo, contendo objetivo,
resumo do material e método, principais resultados e conclusão. Não deverá apresentar
citação bibliográfica.
Palavras-chave:
Deverá ser colocada uma linha abaixo do resumo, na margem esquerda escrita em
negrito, podendo constar até cinco palavras.
ABSTRACT:
Apresentar o título e o resumo em inglês, no mesmo formato do redigido em
português, com exceção do título, apenas com a inicial em maiúscula, que virá após a
palavra ABSTRACT.
Key words: Abaixo do Abstract deverão ser colocadas as palavras-chave em inglês.
INTRODUÇÃO:
Na introdução deverá constar breve revisão de literatura e os objetivos do trabalho.
As citações de autores no texto deverão ser feitas de acordo com os seguintes exemplos:
Silva (1996); Pereira & Antunes (1985); (Souza & Silva, 1986) ou quando houver mais de
dois autores Santos et al. (1996).
MATERIAL E MÉTODO (CASUÍSTICA):
Deverá ser feita apresentação completa das técnicas originais empregadas ou com
referências de trabalhos anteriores que as descrevam. As análises estatísticas deverão ser
igualmente referenciadas. Na metodologia deverão constar os seguintes dados da espécie
estudada: Nome popular; Nome científico com autor e indicação da família botânica; Nome
do botânico responsável pela identificação taxonômica; Nome do herbário onde a excicata
está depositada e o respectivo número (Voucher Number); época e local de coleta, bem
como, a parte da planta utilizada.
RESULTADO E DISCUSSÃO:
Poderão ser apresentados separados ou como um só capítulo, contendo no final
conclusão sumarizada.
AGRADECIMENTO:
Deverá ser colocado neste capítulo (quando houver).
Publicação Eletrônica:
AUTOR (ES). Título do artigo. Título do periódico em destaque, volume, número, página
inicial-página final, ano. Local: editora, ano. Páginas. Disponível em: <http:/
/www........>. Acesso em: dia mês (abreviado) ano.
PEREIRA, R.S. et al. Atividade antibacteriana de óleos essenciais em cepas isoladas de
infecção urinária. Revista de Saúde Pública, v.38, n.2, p.326-8, 2004. Disponível em:
http://www.scielo.br. Acesso em: 18 abr. 2005.
Não citar resumos e relatórios de pesquisa a não ser que a informação seja
muito importante e não tenha sido publicada de outra forma. Comunicações pessoais devem
ser colocadas no rodapé da página onde aparecem no texto e evitadas se possível. Devem
ser, também, evitadas citações do tipo Almeida (1994) citado por Souza (1997).
TABELAS:
Devem ser enviadas em formato TABELA, inseridas no texto, com letra do tipo
Arial 10, espaço simples. A palavra TABELA deve ser em letras maiúsculas seguidas por
algarismo arábico, quando citadas no texto devem ser em letras minúsculas (Tabela).
FIGURAS:
As ilustrações (gráficas, fotográficas, desenhos, mapas) devem ser em letras
maiúsculas seguidas por algarismo arábico, quando citadas no texto devem ser em letras
minúsculas (Figura).
ATENÇÃO: Artigos que não estiverem de acordo com essas normas serão devolvidos.
Observação: São de exclusiva responsabilidade dos autores as opiniões e conceitos
emitidos nos trabalhos. Contudo, reserva-se ao Conselho Editorial, o direito de sugerir ou
solicitar modificações que julgar necessárias.
Periódicos:
AUTOR (ES) separados por ponto e vírgula. Título do artigo. Nome da Revista, por
extenso, volume, número, página inicial-página final, ano.
KAWAGISHI, H. et al. Fractionation and antitumor activity of the water-insoluble residue
of Agaricus blazei fruiting bodies. Carbohydrate Research, v.186, n.2, p.267 73, 1989.
Livros :
AUTOR. Título do livro. Edição. Local de publicação: Editora, Ano. Total de páginas.
MURRIA, R.D.H.; MÉNDEZ, J.; BROWN, S.A. The natural coumarins: occurrence,
chemistry and biochemistry. 3.ed. Chinchester: John Wiley & Sons,
1982. 702p.
Capítulos de livros:
AUTOR (ES) DO CAPÍTULO. Título do Capítulo. In:
AUTOR (ES) do LIVRO. Título do livro: subtítulo. Edição. Local de Publicação: Editora,
ano, Página inicial, página final.
HUFFAKER, R.C. Protein metabolism. In: STEWARD, F.C. (Ed.). Plant physiology: a
treatise. Orlando: Academic Press, 1983. p. 267-33.
Tese ou Dissertação:
AUTOR. Título em destaque: subtítulo. Ano. Total de Páginas. Categoria (grau e área de
concentração) – Instituição, Universidade, Local.
OLIVEIRA, A.F.M. Caracterização de Acanthaceae medicinais conhecidas como
anador no nordeste do Brasil. 1995. 125p. Dissertação (Mestrado - Área de Concentração
em Botânica) – Departamento de Botânica, Universidade Federal de Pernambuco, Recife.
Trabalho de Evento:
AUTOR (ES). Título do trabalho. In: Nome do evento em caixa alta, número, ano,
local. Tipo de publicação em Destaque... Local: Editora, ano. Página inicial-página final.
VIEIRA, R.F.; MARTINS, M.V.M. Estudos etnobotânicos de espécies medicinais de uso
popular no Cerrado. In: INTERNATIONAL SAVANNA SYMPOSIUM, 3.1996, Brasília.
Proceedings… Brasília: Embrapa, 1996. p.169-71.
REFERÊNCIA BIBLIOGRÁFICA: As referências devem seguir as normas da ABNT
6023. Colocar até três autores, quando mais colocar o primeiro seguido de et al. Exemplos:
Livros Grátis
( http://www.livrosgratis.com.br )
Milhares de Livros para Download:
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