( PDF ) Alterações no metabolismo lipídico em pacientes HIV soropositivos

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA

CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM FARMÁCIA

ALTERAÇÕES NO METABOLISMO LIPÍDICO EM PACIENTES HIV

SOROPOSITIVOS

ELAINE NUNES DAMINELLI

FLORIANÓPOLIS

2007

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA

CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM FARMÁCIA

ALTERAÇÕES NO METABOLISMO LIPÍDICO EM PACIENTES HIV

SOROPOSITIVOS

Dissertação apresentada como requisito parcial

para obtenção do título de Mestre em Farmácia,

com ênfase em Análises Clínicas, na

Universidade Federal de Santa Catarina – UFSC.

Orientador: Prof. Dr. Celso Spada.

ELAINE NUNES DAMINELLI

FLORIANÓPOLIS

2007

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“Mestre é alguém que indica um caminho de

compreensão; discípulo é alguém que, tendo

compreendido, segue sua própria compreensão”.

AGRADECIMENTOS

A Deus.

Aos meus pais pela oportunidade de chegar até aqui.

Ao Prof. Dr. Celso Spada pela oportunidade concedida, confiança depositada, amizade,

disponibilidade e empenho em orientar-me

Ao médico Raul Cavalcante Maranhão, pela parceria indispensável para a realização deste

trabalho.

Aos funcionários do Laboratório de Análises Clínicas do Hospital Universitário, pela viabilização

das análises realizadas neste trabalho.

A equipe do Laboratório de Metabolismo de Lípides do Instituto do Coração do Hospital das

Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo, pelo apoio e amizade.

Aos pacientes que consentiram em participar deste trabalho, sem os quais o mesmo não seria

possível.

Aos amigos que comigo conviveram, pelo apoio, auxílio e amizade e a todos que de alguma

forma contribuíram durante a realização deste trabalho.

OBRIGADA.

Elaine N. Daminelli

Florianópolis, 2007.

SUMÁRIO

RESUMO.........................................................................................................................................8

ABSTRACT....................................................................................................................................9

LISTA DE FIGURAS...................................................................................................................10

LISTA DE TABELAS..................................................................................................................11

LISTA DE ABREVIATURAS.....................................................................................................12

1. INTRODUÇÃO........................................................................................................................15

1.1 CONSIDERAÇÕES GERAIS .................................................................................................15

1.2 DADOS EPIDEMIOLÓGICOS...............................................................................................16

1.3 AGENTE ETIOLÓGICO.........................................................................................................17

1.4 ESTRUTURA DO HIV-1........................................................................................................18

1.5 CICLO DE VIDA DO HIV......................................................................................................20

1.6 EVOLUÇÃO CLÍNICA DA INFECÇÃO PELO HIV-1.........................................................23

1.7 TERAPIA ANTIRRETROVIRAL...........................................................................................25

1.8 DIAGNÓSTICO E CLASSIFICAÇÃO DA INFECÇÃO PELO HIV-1.................................26

1.9 ANORMALIDADES METABÓLICAS E HIV .....................................................................28

1.10 METABOLISMO DOS LIPÍDEOS.......................................................................................30

1.10.1 TRANSPORTE DE LIPÍDEOS DE ORIGEM EXÓGENA...............................................31

1.10.2 TRANSPORTE DE LIPÍDEOS DE ORIGEM ENDÓGENA............................................32

1.10.3 TRANSPORTE REVERSO DO COLESTEROL...............................................................32

1.11 PARAOXONASE..................................................................................................................35

1.12 HIV E HIGHLY ACTIVE ANTIRETROVIRAL THERAPY (HAART)...................................36

1.13 “LIPOPROTEÍNAS ARTIFICIAIS”.....................................................................................37

2. JUSTIFICATIVA ....................................................................................................................40

3. OBJETIVOS ............................................................................................................................41

3.1 OBJETIVO GERAL.................................................................................................................41

3.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS...................................................................................................41

4. METODOLOGIA.....................................................................................................................42

4.1CASUÍSTICA............................................................................................................................42

4.2 CONTAGEM DE LINFÓCITOS T CD4 E T CD8 ...............................................................43

4.3 QUANTIFICAÇÃO DO RNA DO HIV .................................................................................44

4.4 DETERMINAÇÃO DOS NÍVEIS SÉRICOS DE GLICOSE.................................................45

4.5 DETERMINAÇÃO DOS NÍVEIS SÉRICOS DE COLESTEROL TOTAL...........................45

4.6 DETERMINAÇÃO DOS NÍVEIS SÉRICOS DE TRIGLICERÍDEOS..................................46

4.7 DETERMINAÇÃO DOS NÍVEIS SÉRICOS DE HDL-COLESTEROL...............................46

4.8 DETERMINAÇÃO DOS NÍVEIS SÉRICOS DE LDL-COLESTEROL................................46

4.9 DETERMINAÇÃO DOS NÍVEIS SÉRICOS DE VLDL-COLESTEROL.............................47

4.10 PREPARO DA LDE...............................................................................................................47

4.11 TRANSFERÊNCIA DE COLESTEROL LIVRE, COLESTEROL ÉSTER,

TRIGLICERÍDEOS E FOSFOLÍPIDES DA LDE PARA A HDL...............................................48

4.12 DETERMINAÇÃO DA ATIVIDADE DA PARAOXONASE (PON1)...............................48

4.13 ANÁLISE ESTATÍSTICA.....................................................................................................50

5 RESULTADOS.........................................................................................................................51

5.1 CONSTITUIÇÃO DOS GRUPOS ESTUDADOS..................................................................51

5.2 VERIFICAÇÃO DO PESO E ÍNDICE DE MASSA CORPORAL (IMC).............................51

5.3 CONCENTRAÇÃO SÉRICA DE GLICOSE..........................................................................51

5.4 CONCENTRAÇÃO SÉRICA DE LÍPIDES............................................................................51

5.5 ATIVIDADE SÉRICA DA ENZIMA PARAOXONASE.......................................................52

5.6 PERCENTAGEM DE TRANSFERÊNCIA LIPÍDICA...........................................................52

6. DISCUSSÃO.............................................................................................................................58

6.1 IMC...........................................................................................................................................58

6.2 COLESTEROL TOTAL, TG, LDL, HDL E VLDL................................................................59

6.3 PARAOXONASE....................................................................................................................61

6.4 TAXA DE TRANSFERÊNCIA DO COLESTEROL LIVRE, COLESTEROL ÉSTER,

TRIGLICÉRIDES E FOSFOLÍPIDES DA LDE PARA A HDL NOS GRUPOS HIV

SOROPOSITIVOS E CONTROLE...............................................................................................63

7. CONCLUSÕES.........................................................................................................................66

8. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS...................................................................................67

ANEXOS........................................................................................................................................79

ANEXO 1. PARECER DO COMITÊ DE ÉTICA EM PESQUISA COM SERES

HUMANOS....................................................................................................................................80

ANEXO 2. TERMO DE CONSENTIMENTO..............................................................................81

ANEXO 3. TABELA COM AS MÉDIAS DE CONTAGEM DE LINFÓCITOS T CD4 E T CD8

E CARGA VIRAL DOS PACIENTES HIV SOROPOSITIVOS..................................................83

RESUMO

ALTERAÇÕES NO METABOLISMO LIPÍDICO EM PACIENTES HIV

SOROPOSITIVOS.

O HIV infecta e depleta os linfócitos T CD4, resultando em imunodeficiência e progressão da

doença. Os pacientes infectados pelo HIV, geralmente, apresentam dislipidemia. Este processo

pode ser decorrente de alterações no metabolismo das lipoproteínas causado pela produção de

citocinas, as quais são mediadoras da resposta imune. Durante a infecção pelo HIV ocorrem

alterações metabólicas, incluindo diminuição dos níveis séricos de HDL e como a sobrevivência

desses indivíduos está sendo prolongada pela terapia antirretroviral, estes estão expostos a

importantes fatores de risco para doenças cardiovasculares. A HDL tem propriedades

antioxidantes que podem ser mediadas pela ação da paraoxonase 1 (PON1). Esta enzima está,

predominantemente, associada com a HDL e catalisa a degradação de fosfolípides provenientes

da LDL oxidada. Outras ações antiaterogênicas da HDL são: sua propriedade antitrombótica,

antioxidante, antiinflamatória e endotelial. O objetivo do presente estudo é determinar os níveis

plasmáticos lipídicos e a habilidade da HDL em receber lipídios, como o colesterol livre (CL), o

colesterol éster (CE), os fosfolípides (FL) e triglicérides (TG), bem como a atividade da PON1

em pacientes HIV soropositivos. Participaram do estudo 48 pacientes infectados pelo HIV. As

amostras de sangue foram coletadas após 12 horas de jejum e foram determinadas as

concentrações séricas de glicose, de colesterol total, de triglicérides, de LDL-colesterol, de HDL-

colesterol, a atividade de PON1 e a transferência de lipídios marcados radioativamente de uma

nanoemulsão (LDE) para HDL. Os resultados mostram que os pacientes HIV soropositivos

apresentaram concentrações de LDL e triglicérides menores que os grupo controle, a atividade da

PON1 e a transferência de lipídios para HDL está alterada nestes pacientes. Comparado com o

grupo controle, a transferência de fosfolípides (17,5 ± 0,9% no controle e 23,4 ± 1,6% no HIV+)

para a HDL foi maior nos pacientes HIV +. A transferência de colesterol livre (6,3 ± 1,1 e 5,0 ±

1,1%) e de triglicérides (3,5 ± 0,6 e 2,7 ± 0,7%) foi menor neste grupo. A troca de lipídios das

partículas de HDL e para estas partículas é um passo crucial no transporte reverso do colesterol e

é fundamental que neste processo as subclasses de HDL sejam coordenadas. Os resultados deste

estudo indicam que este processo está alterado e contribui para o aumento do risco de doenças

cardiovasculares.

Palavras chave: Infecção pelo HIV, paraoxonase 1, lipoproteínas de transferência, lipoproteínas

de alta densidade (HDL).

ABSTRACT

ALTERATIONS IN THE LIPIDS METABOLISM IN HIV SEROPOSITIVE

PATIENTS.

The HIV infects and depletes CD4 lymphocytes, resulting in immunodeficiency and a slowly

progressive disease. The HIV infected patients generally present dyslipidemia. This process is

thought to be the result of alterations in lipoprotein metabolism produced by cytokines that

mediate the immune response. During HIV infection metabolic alterations, including low HDL

cholesterol levels, are often found and as the survival of those subjects is being increasingly

prolonged by treatment they are exposed to the important risk factors for coronary artery disease.

The HDL has antioxidant properties that are mediated mainly by paraoxonase 1 (PON1) action.

This enzyme is predominantly associated with the HDL fraction and catalyzes the degradation of

oxidized LDL phospholipids. Other potentially antiatherogenic actions of HDL are the

antiadhesive, antioxidant, anti-inflammatory and endothelial function. The present study aimed to

determine plasma lipid levels and the ability of HDL of receiving lipids, such as free cholesterol

(FC), cholesteryl esters (CE), phospholipids (PL), and triglycerides (TG) as well as the PON1

activity in HIV seropositive patients. 48 HIV seropositive patients participated in the study.

Blood samples were collected after a 12 hour fast and the glucose, total cholesterol, triglycerides,

LDL-cholesterol, HDL-cholesterol, PON1 activity and the transfer of the nanoemulsion

radioactive lipids to HDL were determinated. The results show that in HIV serum positive

patients the LDL cholesterol and triglyceride concentrations were smaller than those of controls;

on the other hand, PON1 activity and lipid transfer to HDL were disturbed in the patients.

Compared to controls, the transfer of PL (17.5±0.9 % in controls and 23.4±1.6 % in HIV+) to

HDL was greater in the HIV+ patients. In contrast, the FC (6.3±1.1 and 5.0±1.1%) and TG

(3.5±0.6 and 2.7±0.7%) transfer to HDL was smaller. The exchange of lipids to and from HDL

particles are a crucial part of reverse cholesterol transportation and it clearly requires coordinated

metabolic regulation of HDL subclasses. The results from study indicate that this process is

alterated and contribute to increased risk of coronary artery disease.

Keywords: HIV-infection, Paraoxonase-1, transfer lipoproteins, High-density lipoproteins.

LISTA DE FIGURAS

FIGURA 1 - Estrutura da partícula viral do HIV-1 e eletromicrografia.......................................19

FIGURA 2 - Representação da estrutura do genoma das partículas virais do HIV-1...................19

FIGURA 3 - Representação esquemática do ciclo da replicação viral do HIV-1.........................21

FIGURA 4 - Perfil do número de linfócitos T CD4+ e dos níveis plasmáticos de RNA do HIV

durante a infecção pelo HIV...........................................................................................................24

FIGURA 5 - Taxa de transferência do colesterol livre, colesterol éster, triglicérides e

fosfolípides da LDE para a HDL nos grupos HIV soropositivos e Controle.................................56

LISTA DE TABELAS

TABELA I: Classificação da infecção pelo HIV, proposta pelo CDC e utilizada a partir de

1993................................................................................................................................................27

TABELA II: Distribuição dos indivíduos, nos diferentes grupos estudados, de acordo com o

sexo..

...

............................................................................................................................................54

TABELA III: Distribuição dos indivíduos de acordo com a idade, o peso, a altura e o IMC dos

grupos estudados.............................................................................................................................54

TABELA IV: Concentrações plasmáticas dos lipídios e glicose dos grupos HIV soropositivos e

Controle.

........................................................................................................................................55

TABELA V: Media da atividade da paraoxonase nos grupos HIV soropositivos e

Controle..........................................................................................................................................55

TABELA VI

Correlações entre a transferência as taxas de transferência de colesterol livre (

C-

CL), de fosfolípide (

C-PL), de colesterol éster (

H-CE) e de triglicérides (

H-TG) e as

concentrações séricas de lipídios, glicose, carga viral, contagem de células T CD4 E CD8 e

Índice De Massa Corpórea.............................................................................................................57

LISTA DE ABREVIATURAS

C-CL: Taxa de transferência do colesterol livre

C-PL: Taxa de transferência do fosfolípide

H-CE: Taxa de transferência do colesterol éster

H-TG: Taxa de transferência do triglicéride

ABCA1: Transportador de membrana (adenosine triphosphate (ATP)-binding cassette)

ACAT: Acetil-coenzima A: Colesterol acil transferase

AIDS: Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (Acquired Immunodeficiency Syndrome)

CAT: Catalase

CCR5: Receptor de quimiocinas

CD4: Grupo de diferenciação (Cluster of differentiation) de células T restritas à classe II do MHC

CD8: Grupo de diferenciação de células T restritas à classe I do MHC (linfócitos T citotóxicos)

CDC: Center for Disease Control and Prevention

CE: Colesterol éster

CETP: Proteína de transferência de colesterol éster (Cholesterol Ester Transfer Protein)

CL: Colesterol livre

CXCR4: Receptor de quimiocinas

DNA: Ácido desoxirribonucléico

EDTA: Anticoagulante – Ácido etilenodiamino tetra-acético (Ethylene Diamine Tetracetic)

EIAV: Equine Infectious Anemia Vírus

ELISA: Ensaio imunoabsorvente enzima-ligado (Enzyme-linked immunosorben assay)

EROs: Espécies Reativas de Oxigênio

G6PD: Glicose-6-fosfato desidrogenase

gp120: Glicoproteína 120

gp160: Glicoproteína 160

gp41: Glicoproteína 41

GPx: Glutationa peroxidase

GR: Glutationa redutase

HAART: Terapia antirretroviral altamente ativa (Highly Active Antiretroviral Therapy)

HDL: Lipoproteína de alta densidade (High-density Lipoprotein)

HIV: Vírus da Imunodeficiência Humana (Human Immunodeficiency Vírus)

HTLV:Vírus linfotrófico humano (Human T-Lymphotropic Vírus)

IDL: Lipoproteína de densidade intermediária (Intermediate Density Lipoprotein)

IL: Interleucina

IMC: Índice de massa corpórea

IP: Inibidor de protease

ITRN: Inibidor nucleosídeo da transcriptase reversa (Nucleoside Analogue Reverse Transcriptase

inhibitor)

ITRNN: Inibidor não-nucleosídeo da transcriptase reversa (Non- Nucleoside Reverse

Transcriptase inhibitor)

I-κB: Proteína inibitória κ-B (Inhibitor Protein κ-B)

LAV: Vírus associado a linfadenopatia (Limphadenopathy-Associated Vírus)

LCAT: Lecitina-Colesterol-Acil-Transferase (Lecithin Cholesterol Acyl Transferase)

LDE: Nanoemulsão rica em colesterol

LDL: Lipoproteína de baixa densidade (Low-density Lipoprotein)

LE: Lípase endotelial

LH: Lípase hepática

LLH: Lipoproteína-Lipase Hepática

LP: Lipoproteína

LTR: Repetições terminais longas (Long Terminal Repeats)

mRNA: RNA mensageiro

NASBA: Amplificação seqüencial de ácidos nucléicos (Nucleic Acid Sequence-based

Amplification)

NF-κB: Fator de trasncrição nuclear de células T ativadas (Nuclear Transcription Factor of

Activated T Cells)

OMS: Organização Mundial da Saúde

p17: Proteína 17

p24: Proteína 24

p50: Proteína 50

p65: Proteína 65

p7: Proteína 7

p9: Proteína 9

PCR: Reação em cadeia da polimerase (Polimerase Chain Reaction)

PL: Fosfolípide (Phospholipids)

PLTP: Proteína de transferência de fosfolipídios (Phospholipids Transfer Protein)

PON: Paraoxonase

QM: Quilomícron

rLDL: Receptor de LDL

RNA: Ácido ribonucléico

SIV: Simian Immunodeficiency Vírus

SOD: Superóxido dismutase

SR-BI: Receptores scavenger de classe B do tipo I (scavenger receptor class B type I)

TG: Triglicerídios

TNF-α: Fator de necrose tumoral α (Tumor Necrosis Factor Receptor- α)

TNF-β: Fator de necrose tumoral β (Tumor Necrosis Factor Receptor- β)

TRC: Transporte reverso do colesterol

VLDL: Lipoproteína de muito baixa densidade

1 INTRODUÇÃO

1.1 CONSIDERAÇÕES GERAIS

A Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS) foi descrita em 1981, nos Estados

Unidos, quando foram notificados ao Center for Disease Control and Prevention (CDC) os

primeiros casos de pneumonia por Pneumocystis carinii, atualmente denominado Pneumocystis

jirocecii e de Sarcoma de Kaposi em homossexuais masculinos previamente saudáveis de Nova

York e Los Angeles e que, também apresentavam infecções por outros microrganismos

oportunistas, entre eles a

Candida albicans (GOTTLIED et al., 1981; LEVY et al., 1985;

GOLDSBY, KINDT, OSBORNE, 2000).

Alguns meses depois novos casos de AIDS foram diagnosticados em usuários de drogas

injetáveis do sexo masculino e feminino, em hemofílicos e receptores de transfusões sangüíneas

contaminados pelo Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV) (WYNGAARDEN & SMITH,

1990; FAUCI et al., 1998).

Em 1983, o vírus da imunodeficiência humana, foi isolado a partir de um paciente com

AIDS e de um paciente com linfadenopatia persistente, pelos grupos de Gallo e colaboradores

(1984) e Montagnier e colaboradores (BARRÉ-SINOUSSI et al., 1983). Inicialmente, o vírus foi

denominado como Human T-Lymphotropic Vírus (HTLV) (GALLO et al., 1984) e como

Limphadenopathy-Associated Vírus (LAV) (BARRÉ-SINOUSSI et al., 1993). Em 1986, recebeu

a nomenclatura oficial Human Immunodeficiency Vírus (HIV) (COFFIN et al., 1986).

O HIV já foi isolado de quase todos os fluídos corporais como sangue, sêmen, urina,

secreção vaginal, leite materno, saliva e lágrima (PEAKMAN & VERGANI, 1999; CDC, 2006).

A transmissão do HIV pode ocorrer por intercurso sexual, compartilhamento de seringas

contaminadas, inoculação de sangue contaminado ou derivados, transplante de órgãos ou tecidos,

inseminação artificial, materno fetal, uso de objetos contaminados, procedimentos dentários,

tatuagem e acupuntura. A transmissão não ocorre por contato casual, ar, alimentos, água, contato

com objetos inanimados ou insetos (CDC, 2005).

O uso de drogas injetáveis e o contato sexual, onde há o contato com esperma e sangue

contaminados, são as principais vias de transmissão (FRIEDLAND & KLEIN, 1987). Associado

às vias de transmissão do HIV, as co-infecções virais, como sífilis e herpes genital, aumentam a

predisposição à infecção pelo HIV, bem como a progressão para a doença (CDC, 2005).

A pandemia da infecção pelo HIV vem sendo acompanhada por uma gama crescente de

informações quanto à patogenia, tratamento, profilaxia das infecções oportunistas associadas ao

HIV e pesquisa para o desenvolvimento de vacinas (FAUCI et al., 1998).

1.2 DADOS EPIDEMIOLÓGICOS

Segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS) em 2006, a epidemia da AIDS vem

ressurgindo em alguns países onde os índices haviam se estabilizado ou declinado. Segundo a

UNAIDS e a OMS (2006), o número de pessoas vivendo com HIV continua crescendo, assim

como o número de mortes atribuídos a AIDS. Estima-se que 39,5 milhões de pessoas estão

vivendo com AIDS no mundo. Destes 37,2 são adultos, 17,7 são mulheres, 17,2 são homens e 2,3

são crianças menores de 15 anos de idade. Foram registrados 4,3 milhões de novos casos, 3,8

milhões em adultos, 530000 em crianças, 2,9 milhões de mortes, 2,6 milhões em adultos e

380000 crianças (UNAIDS/WHO, 2006).

No Brasil, estima-se que cerca de 593 mil pessoas vivam com HIV ou AIDS. Segundo a

OMS, o Brasil mantém sua posição entre os países com epidemia com prevalência de 0,61%

entre a população de 15 a 49 anos de idade, sendo 0,42% mulheres e 0,80% homens. Dos casos

notificados até Junho de 2006, 62,3% se concentravam na região Sudeste, 17,9% na região Sul,

11% no Nordeste, 5,6% no Centro-Oeste e 3,2% na região Norte. Do total de casos notificados

67,2% foram do sexo masculino e 32,8% do sexo feminino (Boletim Epidemiológico, 2006).

De 1980 a 2005, ocorreram 183.074 óbitos por AIDS no Brasil, sendo 68,9% na região

Sudeste, 15,1% no Sul, 9,2% no Nordeste, 4,4% no Centro-Oeste e 2,4% na região Norte

(Boletim Epidemiológico, 2006).

Santa Catarina é o quinto colocado no ranking nacional de AIDS, com uma taxa de

incidência de 18,4 casos/100 mil habitantes. Desde 1984 a 2005 foram registrados 16960 casos,

destes 16142 eram adultos e 818 crianças. A categoria de exposição em 2005 era 73,9%

heterossexual, 7,1% homossexual e 10,2% usuário de drogas injetáveis, com faixa etária entre 20

a 49 anos de idade (SANTA CATARINA, 2007). Os municípios com maior número de casos

registrados estão no litoral. A Capital com 2864 casos, Joinvile com 1817, Itajaí com 1772,

Blumenau com 1108, São José com 1003 e Balneário Comburiu aparece na sétima posição com

651 casos (Boletim Epidemiológico, 2006).

A epidemia da AIDS completou duas décadas no ano de 2000. Caracterizada por uma

contínua transformação e segue atingindo novos segmentos populacionais, de forma crescente e

em estratos sociais menos favorecidos, além, de estar chegando a cidades onde, até então, sua

presença não havia sido registrada (CASTILHO et al., 2000).

Tem-se observado um esforço global em combater a epidemia da AIDS nos últimos anos,

incluindo maior acesso a terapia medicamentosa e programas de prevenção (UNAIDS/WHO,

2006).

1.3 AGENTE ETIOLÓGICO

O agente etiológico da imunodeficiência humana é o HIV, um retrovírus humano não-

oncogênico pertencente à família dos lentivírus (VERONESI & FOCACCIA, 1996; KUMAR;

ABBAS; FAUSTO, 2005). Outros exemplos de lentivírus incluem Simian Immunodeficiency

Vírus (SIV), Visna Vírus e Equine Infectious Anemia Vírus (EIAV) (TURNER & SUMMERS,

1999).

Os lentivírus podem infectar e se replicarem em células que não estão em divisão, incluindo

monócitos/macrófagos, células dendríticas, células de langerhans, astrócitos, células do sistema

nervoso central e, principalmente, linfócitos T CD4 que são responsáveis pela defesa

imunológica (FIGDOR; KOOYK; ADEMA; 2002; HERBEIN et al., 2002; NIELSEN;

PEDERSEN; KJEMS, 2005).

Uma vez instalada, a infecção se propaga pelo sistema linfático chegando aos tecidos que

contêm células dendríticas que podem atuar como reservatórios, permanecendo assim o vírus

latente (NIELSEN; PEDERSEN; KJEMS, 2005).

Existem geneticamente duas formas distintas do HIV, porém relacionadas, denominadas

HIV-1 e HIV-2. O HIV-1 é o tipo mais comum associado à AIDS no Continente Americano,

Europa e África Central, enquanto o HIV-2 causa doença semelhante, principalmente na África

Ocidental e na Índia, parece ser menos patogênico que o HIV-1 e a progressão parece ser mais

lenta. Embora distintos, o HIV-1 e o HIV-2 compartilham alguns antígenos. Atualmente, o

sangue coletado para transfusão é submetido à triagem rotineira para soropositividade tanto do

HIV-1 quanto para o HIV-2 (WHITTLE et al., 1994; KUMAR; ABBAS; FAUSTO, 2005).

1.4 ESTRUTURA DO HIV-1

Em 1984, três anos após os primeiros relatos da infecção pelo HIV, pesquisas

demonstraram que o agente viral causador da doença era o vírus da imunodeficiência humana

tipo 1 (HIV-1) (CDC, 1999).

Semelhante à maioria dos retrovírus, o HIV-1 é um vírus esférico de aproximadamente 120

nm e contém um cerne/núcleo eletrodenso, cilíndrico, envolto por um invólucro lipídico derivado

da membrana celular do hospedeiro (KUMAR; ABBAS; FAUSTO, 2005). Nessa camada lipídica

observam-se projeções, que são as glicoproteínas gp120 (proteína externa do envelope) e gp 41

(proteína transmembrana), responsáveis pela ligação com os receptores CD4 da célula

hospedeira. O capsídio viral é circundado por uma matriz protéica, formada pelas proteínas p17 e

p24, o núcleocapsídio é formado pela proteína p7 e p9. No interior do capsídio viral encontra-se o

genoma viral, com duas fitas simples de RNA e as principais enzimas virais (integrase,

transcriptase reversa e protease) (figura 1) (BUKRINLKY et al., 1993; SERB & YEUNG, 1994).

O genoma de RNA do HIV-1 contém os genes gag, pol e env, que codificam as proteínas

estruturais do vírus e são comuns a todos os retrovírus (STEFFY & WONG-STAAL, 1991). O

gene gag codifica as proteínas que formam o núcleo do vírus (incluindo o antígeno p24), o pol

codifica as enzimas responsáveis pela transcrição reversa e integração e o env codifica as

glicoproteínas do envoltório (gp120 e gp41) (FAUCI et al., 1998). O HIV-1, apresenta ainda,

outros genes (tat, rev, nef, vif, vpr e vpu), que codificam as proteínas envolvidas na regulação da

expressão gênica. Juntos a estes genes existem seqüências nucleotídicas denominadas repetições

terminais longas (LTR), que desempenham importante função na ativação do processo de

transcrição do genoma viral (figura 2) (TRONO, 1995; FAUCI et al., 1998).

FIGUR

: Estrutura da partícula viral do HIV-1 e eletromicrografia.

Fonte: BARRÉ-SINOUSSI, 1996.

FIGURA

: Representação da estrutura do genoma das partículas virais do HIV-1.

Fonte: Disponível em: http://www.aids.harvard.edu/research/discoveries.html. Acesso em: 11

de Jun. 2006.

Em 1986, um segundo tipo de HIV foi isolado de pacientes na África Ocidental com sinais

e sintomas semelhantes aos da AIDS. Tal vírus ao ser isolado, foi clonado molecularmente e

caracterizado, mostrando constituir-se de uma segunda classe de vírus da imunodeficiência

humana, denominado HIV-2. O HIV-2 guarda uma correlação de 40 a 50% com o HIV-1 em

termos de homologia completa da seqüência de nucleotídios. Existem duas diferenças principais

na organização genômica do HIV-1 e HIV-2. O gene vpu do HIV-1 não é encontrado no HIV-2, e

este contém um gene adicional, vpx, em uma região central que não existe no HIV-1, e pode

apresentar uma função similar relacionada ao transporte nuclear. Da mesma forma que o HIV-1,

o HIV-2 infecta seletivamente as células CD4, e as evidências sugerem que o HIV-2 seja menos

virulento que o HIV-1 e provocaria a doença mais lentamente (CDC, 1998; SANDE &

VOLBERDING, 1999; GOLDMAN & BENNETT, 2001).

1.5 CICLO DE VIDA DO HIV

O ciclo de vida do HIV (figura 3) é importante para compreender o mecanismo da infecção

e conhecer pontos estratégicos para intervenções terapêuticas contra o HIV. Uma vez o HIV no

interior do corpo humano, a glicoproteína gp160, expressa pelo vírus, permite a ligação do HIV

com receptores CD4, proteínas presentes na superfície celular de linfócitos T-helper (Th),

monócitos, macrófagos, células dendríticas e outras (DALGLEISH et al., 1984). A glicoproteína

gp160 consiste em duas subunidades, gp120 e gp41. A subunidade gp120 tem alta afinidade com

o receptor CD4, uma proteína que atua na coordenação celular e humoral da resposta imune

contra antígenos exógenos, e é responsável por iniciar a ligação do vírus com a célula CD4

(DALGLEISH et al., 1984; McCUNE, 2001).

Muitas partículas virais infectam primeiramente os linfócitos Th (linfócitos T CD4), as

partículas que não infectam monócitos ou macrófagos são chamadas T-trópicas e aquelas que

infectam monócitos ou macrófagos são chamadas M-trópicas (COCCHI et al., 1995). A região

V3 loop da gp120 parece ser a responsável por este tropismo. Uma vez iniciada a ligação, ocorre

uma associação íntima do HIV e a célula hospedeira. Somente a ligação com as células CD4 não

é suficiente, a gp120 do HIV deve também ligar-se com outras moléculas de superfície celular

(co-receptores) para ocorrer a infecção. Dois receptores de quimiocinas exercem esta função,

CCR5 e CXCR4 (FENG et al., 1996; DORANZ et al., 1996). Essa ligação provoca uma mudança

conformacional que resulta na formação de um novo sítio de reconhecimento na gp120 para os

co-receptores CCR5 ou CXCR4. Em seguida, ocorrem alterações conformacionais na gp41 que

resultam na fusão do vírus com a célula hospedeira (LA BRANCHE et al., 2001). Essa fusão

permite a entrada do núcleo viral na célula alvo contendo proteínas, enzimas e o RNA genômico

viral no citoplasma da célula (GOODENOW et al., 1989; COFFIN, 1995).

Uma vez no citoplasma, o RNA viral é transcrito para DNA através da enzima viral

transcriptase reversa (WEISS, 2001). A transcriptase reversa sintetiza uma seqüência

complementar do DNA usando o RNA viral como modelo. A porção RNA deste DNA híbrido é

parcialmente removida pela ribonuclease H, permitindo a síntese completa da dupla fita de DNA

pela transcriptase reversa. A fidelidade da transcriptase reversa durante a transcrição do RNA não

é eficiente e muitos erros são cometidos durante este processo (PRESTON et al., 1988). Esses

erros no produto final de DNA contribuem para a rápida mutação do vírus. Após a transcrição

reversa do RNA, o DNA sintetizado migra para o núcleo e integra-se aos cromossomas das

células hospedeiras através da integrase, outra enzima exclusiva do HIV (MICHIE et al., 1992).

FIGURA

: Representação esquemática do ciclo da replicação viral do HIV-1.

Fonte: Adapatado de WEISS, 2001.

A integração do pró-vírus é um processo que desencadeia alterações na célula como: o HIV

pode estabelecer uma infecção crônica e persistente, principalmente nas células de memória, os

linfócitos T (MICHIE et al., 1992). A integração é aleatória, o que dificulta estabelecer um alvo

de ataque e extrair a seqüência viral integrada. Essa integração aleatória pode causar

anormalidades celulares, levando ao desenvolvimento de câncer (CHOWERS et al., 1994).

A ativação celular por antígenos, citocinas ou outros fatores induzem a célula a produzir

fator nuclear κB (NF-κB). Normalmente, NF-κB regula a expressão de genes envolvidos no

crescimento de linfócitos T, mas também podem ativar a replicação do HIV-1 (CHOWERS et al.,

1994).

A transcrição dos genes a partir do provírus (DNA do HIV integrado) é regulada pelas

LTRs dos genes da estrutura viral e essas possuem seqüências específicas que constituem sítios

de ligação para fatores de transcrição de células do hospedeiro, um desses fatores é o complexo

NF-κB (p50/p65) que liga-se predominantemente a essas regiões (WU & MARSH, 2003)

O ciclo da replicação viral é estimulado pela ação de algumas citocinas como TNF-α, TNF-

β, IL-1, IL-2, IL-6 e espécies reativas de oxigênio (EROs) que ativam o fator de transcrição

nuclear NF-κB. O NF-κB encontra-se no citoplasma e sua ativação ocorre através da fosforilação

e proteólise do I-κB, sua porção inibitória, e subseqüente translocação para o núcleo, onde se liga

às LTRs do HIV-1(HENKEL et al., 1993; BOSSIS et al., 2002).

Inicialmente, são sintetizados transcritos de RNA viral que codificam as proteínas

regulatórias Tat, Rev e Nef (TURNER & SUMMERS, 1999). A proteína viral Tat é um potente

regulador de transcrição, atua como um fator de elongação que permite a transcrição do RNA

viral (MARCELLO; ZOPPÉ; GIACCA, 2001). A proteína viral Nef está envolvida na regulação

de fatores de transcrição celulares, promovendo a replicação do HIV de maneira indireta, sendo

que a ativação dessas células é necessária para que ocorra a replicação viral (LAHTI;

MANNINEN; SAKSELA, 2003).

No núcleo da célula hospedeira, a proteína acessória Rev se liga a uma seqüência específica

do RNA e também a uma proteína de transporte núcleo-citoplasma do hospedeiro (Crm1),

ativando a via de transporte das seqüências de RNA mensageiro (mRNA), o qual é responsável

pelo transporte da informação genética do núcleo para o citoplasma, onde ocorre a síntese das

proteínas do HIV (TURNER & SUMMERS, 1999). Nesta etapa, a enzima protease cliva as

proteínas imaturas do HIV-1 em proteínas virais funcionais e novos vírus brotam da célula

infectada (Figura 3) (McCUNE, 2001).

O HIV-1 apresenta um alto índice de replicação, com cerca de 10 bilhões de novos vírus a

cada dia, atingindo níveis suficientemente elevados para causar a morte celular (HO et al., 1995;

McCUNE, 2001). A maior parte das células infectadas podem ser destruídas por: a) lise celular

pelo brotamento de novos vírus; b) acúmulo de DNA viral não integrado; c) interferência na

síntese de proteína; d) formação sincício ou e) apoptose. (PANTALEO; GRAZIOSI; FAUCI,

1993).

A infecção pelo HIV acarreta anormalidades na função dos linfócitos T CD4, linfócitos B,

monócitos, macrófagos, secreção de imunoglobulinas, fenômenos autoimunes e outras

manifestações (LANE et al., 1983; SMITH et al., 1984; PANTALEO; GRAZIOSI; FAUCI,

1993).

1.6 EVOLUÇÃO CLÍNICA DA INFECÇÃO PELO HIV-1

Os eventos associados à infecção primária pelo HIV-1 são fundamentais para determinar a

evolução subseqüente da doença causada pelo HIV. O vírus que entra diretamente na corrente

sangüínea, pelo sangue, ou hemoderivados contaminados, é levado para o baço e outros órgãos

linfóides, onde se replica até um nível crítico e a seguir produz um surto de viremia que

dissemina o vírus para todo o organismo. Os linfócitos T CD4+ e as células da linhagem

monocítica são os principais alvos da infecção. Algumas hipótese sugerem que as células

dendríticas sejam transportadoras e apresentadoras eficientes do HIV aos linfócitos T CD4+ e

isto é compatível com sua função como apresentadoras eficientes de antígenos durante o

processamento da resposta imune normal a um antígeno (FAUCI et al., 1998).

Aproximadamente, 50% dos casos de infecção primária pelo HIV são assintomáticos e 50%

dos pacientes desenvolvem sintomas semelhantes aos da gripe durante as primeiras quatro

semanas após a infecção. Durante a infecção primária, o número de partículas virais está

extremamente elevada no sangue periférico, aproximadamente 5 milhões de cópias RNA/mL de

RNA e o número de linfócitos T CD4+ decresce significativamente (PIATAK et al., 1993,

GANDHI & WALKER, 2002). Em seguida, ocorre uma resposta imune celular específica e

subseqüente à síntese de anticorpos contra o HIV, levando ao declínio da carga viral no plasma e

cronificação da infecção. No entanto, o estágio assintomático da infecção é acompanhado por

uma replicação viral persistente nos linfonodos e rápida renovação de vírus no plasma e linfócitos

T CD4+, o que é chamado de latência clínica (PANTALEO et al., 1993; HO et al., 1995; WEI et

al., 2003). Durante o curso da latência clínica, o número de linfóctos T CD4+ decresce

progressivamente em conseqüência do comprometimento do sistema imune do paciente que não é

mais capaz de controlar os patógenos oportunistas (SIERRA; KUPFER; KAISER, 2005).

Apesar das respostas imunes celular e humoral vigorosamente desencadeadas após a

infecção primária, com poucas exceções, o vírus não é totalmente eliminado do organismo. Pelo

contrário, desenvolve-se uma fase crônica que persiste com graus variáveis de replicação virótica,

que se estende em média por 10 anos, antes que o paciente desenvolva doença grave, sendo que a

característica fundamental da doença causada pelo HIV é a infecção crônica (figura 4) (FAUCI et

al., 1998).

No estágio de AIDS, período avançado da infecção pelo HIV, geralmente, a contagem de

células T CD4 está abaixo de 200 células/mm

, e como conseqüência a replicação viral encontra-

se elevada, fato este que, causa desequilíbrio imunológico e resulta no aparecimento de

manifestações clínicas (ROSOK et al., 1996; HAASE, 1999).

FIGURA

: Perfil do número de linfócitos T CD4+ e dos níveis plasmáticos de RNA do HIV

durante a infecção pelo HIV.

Fonte:

Adaptado de GOUGEON, 2003.

1.7 TERAPIA ANTIRRETROVIRAL

Com a descoberta da relação entre altos níveis de carga viral plasmática e a progressão da

doença causada pelo HIV, tem-se desenvolvido terapias antirretrovirais para reduzir a viremia

plasmática. Praticamente todos os passos do ciclo de vida do vírus podem ser alvos para a terapia

antirretroviral (SIERRA; KUPFER; KAISER, 2005).

Os componentes fundamentais do tratamento clínico da infecção pelo HIV são os agentes

antirretrovirais. A supressão da replicação do HIV é um elemento importante para prolongar a

vida, bem como melhorar a qualidade de vida dos pacientes HIV soropositivos (FAUCI et al.,

1998).

Existem quatro classes de antirretrovirais disponíveis para o uso clínico, inibidores da

transcriptase reversa análogos de nucleosídeos (ITRN), inibidores de transcriptase reversa não

nuclosídeos (ITRNN), os quais têm o objetivo de bloquear a transcrição do RNA viral, inibidores

da protease (IP) com o objetivo de bloquear a clivagem das proteínas do HIV que garantem sua

infectividade e recentemente, uma quarta classe de medicamentos antirretrovirais que se ligam às

proteínas do envelope do HIV envolvidas na fusão do vírus às suas células alvo, tem sido

utilizada como coadjuvantes na terapia antirretroviral, os inibidores de fusão (CHAIX et al.,

2000; LALEZARI et al., 2003).

Atualmente, vem sendo utilizada uma estratégia terapêutica chamada de terapia

antirretroviral de alto impacto (Highly Active Antiretroviral Therapy – HAART), a qual envolve

o uso de agentes de no mínimo duas classes distintas de antirretrovirais (HAMMER et al., 2006).

A maioria dos indivíduos infectados pelo HIV, submetidos a HAART, demonstrou aumento na

contagem de células T CD4 e redução da viremia plasmática. Essa terapia pode ser mantida por

anos, no entanto, ela pode ser limitante, tendo em vista o desenvolvimento de resistência viral,

graves efeitos adversos, interações farmacológicas ou escolha personalizada para cada paciente

(SIERRA; KUPFER; KAISER, 2005).

Segundo o Ministério da Saúde (2006), o início da terapia é recomendado para pacientes

com manifestações clínicas associadas ao HIV independente da contagem de linfócitos T CD4 e

da carga viral plasmática, e para aqueles com contagem de linfócitos T CD4 abaixo de 200

células/mm

, independente da presença de sintomas ou da magnitude da carga viral. Além de

terapia antirretroviral, a quimioprofilaxia para as infecções oportunistas deve ser adotada sempre

que a contagem de linfócitos T CD4 estiver próxima ou inferior a 200 células/mm

ou quando

houver condição clínica sugestiva da imunodeficiência associada ao HIV (Ministério da Saúde,

2006).

A terapia antirretroviral não é capaz de eliminar a infecção, mas pode controlar a

replicação viral, restaurar a imunidade e protelar a progressão da doença, proporcionando aos

pacientes melhores condições e prolongando a vida dos mesmos (SLEASMAN & GOODENOW,

2003).

1.8 DIAGNÓSTICO E CLASSIFICAÇÃO DA INFECÇÃO PELO HIV-1

O diagnóstico laboratorial da infecção pelo HIV-1 em adultos e adolescentes obedece

alguns critérios estabelecidos pelo Centers for Disease Control (CDC) (1999), como segue:

- Resultados positivos em dois testes sorológicos tipo ELISA com princípios metodológicos

distintos seguidos de resultado positivo em teste sorológico de caráter confirmatório, tipo

imunofluorescência indireta ou Western Blot, ou;

- Resultado positivo ou qualquer quantidade detectável em um dos seguintes testes virológicos:

. Detecção de ácido nucléico do HIV-1, DNA ou RNA, por metodologias baseadas em

PCR;

. Teste para antígeno p24;

. Isolamento do HIV-1 por cultura viral (CDC, 1999).

Estes critérios para diagnóstico foram usados no Brasil até recentemente, quando o

Ministério da Saúde em 2003, estabeleceu novos critérios para o diagnóstico da infecção pelo

HIV em indivíduos acima de dois anos de idade e estão agrupados em 3 etapas:

Etapa I – Triagem Sorológica:

- Realização de um teste de imunoensaio de qualquer amostra de soro ou plasma, no entanto, este

imunoensaio não poderá ser de avaliação rápida (teste rápido) e deverá ser capaz de detectar

anticorpos anti-HIV-1 e anti-HIV-2;

- As amostras não reagentes terão seu resultado definido como “Amostra Negativa para HIV”;

- As amostras reagentes ou inconclusivas devem ser submetidas ao segundo imunoensaio em

paralelo ao teste de Imunofluorescência Indireta (IFI) para HIV-1 ou ao teste de Imunoblot para

HIV. O segundo imunoensaio deverá ter princípio metodológico e/ou antígenos distintos do

primeiro imunoensaio utilizado. O teste de Western Blot pode ser realizado diretamente

substituindo a IFI.

Etapa II – Segundo Ensaio Confirmatório:

- Confirmação sorológica pela realização de um segundo imunoensaio em paralelo ao teste de

Imunofluorescência Indireta para o HIV-1 (IFI/HIV-1) ou ao teste de Imunoblot para HIV.

Etapa III – Confirmação por Método Blot:

- Confirmação sorológica pela realização do teste de Western Blot para HIV-1 (WB/HIV-1)

(Ministério da Saúde, 2003).

O CDC revisou este sistema de classificação para adolescentes e adultos infectados pelo

HIV e estabeleceu categorias levando em consideração as condições clínicas associadas com a

infecção causada pelo HIV e a contagem de linfócitos T CD4+. O sistema é baseado em três

ordens de contagens de linfócitos T CD4+ e três categorias clínicas, representado por uma matriz

constituída de nove categorias (Tabela 1) (CDC, 1992).

Contagem de linfócito CD4

Categorias Clínicas

A B C

≥ 500 células/µL A1 B1 C1

200 – 499 células/µL A2 B2 C2

< 200 células/µL A3 B3 C3

- Categoria Clínica A: Nesta categoria são enquadrados todos os pacientes soropositivos para o

HIV-1 e que atendam uma ou mais das seguintes condições:

. infecção assintomática;

. linfoadenopatia generalizada persistente;

. infecção sintomática aguda (síndrome retroviral).

TABELA I

Classificação da infecção pelo HIV, proposta pelo CDC e utilizada a partir de

- Categoria Clínica B: Nesta categoria são enquadrados todos os pacientes sintomáticos que

apresentam uma ou mais das seguintes condições:

. candidíase orofaríngea persistente;

. sintomas constitucionais como febre (> 38.5ºC) ou diarréia, por mais de 1 mês;

. púrpura trombocitopênica idiopática;

. listeriose;

. neuropatia periférica.

- Categoria Clínica C: Os pacientes uma vez classificados nesta categoria assim se manterão. As

principais condições clínicas são:

. candidíase traqueal, bronquial ou pulmonar;

. câncer cervical invasivo;

. coccidioidomicose disseminada ou extra-pulmonar;

. criptococcose extra-pulmonar;

. criptosporidiose e/ou isosporidiose intestinal crônica;

. encefalopatia relacionada ao HIV-1;

. sarcoma de Kaposi;

. tuberculose pulmonar ou extra-pulmonar;

. septicemia recorrente por Salmonella.

O diagnóstico de AIDS é definido para todos os pacientes da Categoria Clínica C, assim

como os que são enquadrados no subtipo 3 (CD4+ < 200 células/µL) (CDC, 1992).

1.9 ANORMALIDADES METABÓLICAS E HIV

A infecção, inflamação e traumas induzem mudanças nos níveis plasmáticos de diversas

proteínas (resposta de fase aguda) e essas mudanças são mediadas por citocinas (FEINGOLD;

HARDARDOTTIR; GRUNFELD, 1998). Portanto, essa resposta de fase aguda alterada por

citocinas pode contribuir na defesa imunológica, pois ocorre aumento na proliferação de

leucócitos, na síntese de outras citocinas, imunoglobulinas, proteínas de fase aguda, destruição

dos agentes infecciosos pela modulação das funções dos linfócitos T e do sistema complemento,

reparação de tecidos danificados, proteção de tecidos saudáveis e alteração indireta do substrato

do metabolismo via indução na produção de citocinas (JAHOOR et al., 1999).

A resposta da célula hospedeira a alguma injúria, também resulta em alterações no

metabolismo lipídico e em níveis de lipoproteínas circulantes, que também são mediadas por

citocinas. As citocinas (fator de necrose tumoral, interleucinas e interferons), aumentam os níveis

séricos de triglicerídeos por aumentarem a produção de lipoproteínas de muito baixa densidade

(VLDL) pelo fígado. Além disso, elas podem diminuir a atividade da lipoproteína lipase, o que

leva a diminuição da depuração dos triglicerídeos (GRUNFELD & FEINGOLD, 1996;

FEINGOLD; HARDARDOTTIR; GRUNFELD, 1998). Essas mudanças no metabolismo lipídico

podem ser entendidas como uma forma de defesa do organismo hospedeiro, pois: as lipoproteínas

competem com o agente infeccioso pelos receptores celulares; as apolipoproteínas tentam

neutralizar estes agentes; e as lipoproteínas podem se ligar aos agentes nocivos na tentativa de

neutralizarem seus efeitos prejudiciais (FEINGOLD & GRUNFELD, 1992; FEINGOLD;

HARDARDOTTIR; GRUNFELD, 1998).

A infecção causada pelo HIV induz uma resposta de fase aguda e é marcada por mudanças

nas concentrações plasmáticas de proteínas e lipídios, pois há um decréscimo de colesterol,

aumento de triglicerídeos e redução de HDL. Essas alterações podem estar associadas à resposta

do hospedeiro e se tornam cada vez mais evidentes à medida que a contagem de linfócitos T CD4

diminuem, os quais refletem a gravidade e a progressão da doença. Alguns pacientes que fazem

uso de inibidores de protease podem desenvolver lipodistrofia com obesidade central, resistência

à insulina, intolerância à glicose e às vezes diabetes (DUCOBU & PAYEN, 2000).

Com os avanços no emprego da terapia antirretroviral, principalmente com o uso da terapia

altamente ativa para pacientes com a doença da síndrome da imunodeficiência humana, os

pacientes estão vivendo mais tempo e as doenças cardiovasculares têm se tornado mais

freqüentes nessa população. Estas alterações no metabolismo lipídico, caracterizadas pela

lipodistrofia e dislipidemia, podem contribuir para o desenvolvimento de aterosclerose

(KRISHNASWAMY et al., 2000).

1.10 METABOLISMO DOS LIPÍDEOS

As enfermidades do coração, sobretudo àquelas denominadas de enfermidades cardíacas

degenerativas, estão associadas à elevação dos níveis plasmáticos de lipídeos e, em geral, não têm

cura. São graves e incapacitantes na sua fase final, levando a diminuição da qualidade e do tempo

de vida (NEVES, 1997; NISHINO et al., 2000). O principal processo anatomopatológico que

conduz a doenças cardiovasculares é a aterosclerose, condição que evolve lesão arterial, a qual

pode provocar cardiopatia isquêmica, infarto do miocárdio e acidentes vasculares (LEESON et

al., 2000). Para entender o papel da hiperlipidemia nas doenças cardiovasculares, faz-se

necessário dar visibilidade aos pressupostos teóricos envolvidos no metabolismo do colesterol e

das lipoproteínas.

Os lipídeos formam um grupo de compostos que são muito importantes para a manutenção

da vida. O conjunto dos lipídeos é bastante heterogêneo, sendo de importância para os seres

humanos os ácidos graxos, os triglicerídeos, os fosfolipídios e o colesterol. O colesterol está

presente nas lipoproteínas plasmáticas e em todas as células de eucariontes, desempenhando

papel indispensável na regulação da permeabilidade da membrana plasmática das células

(SIMONS & IKONEN, 2000).

O colesterol pode ser sintetizado por todas as células do organismo humano a partir da

acetil-coenzima A (acetil-CoA) no retículo endoplasmático ou ser captado pelas células através

das lipoproteínas. Os níveis plasmáticos de colesterol são regulados através de um mecanismo

que evolve sua esterificação, controlando a transcrição gênica envolvida na sua síntese e na

expressão de receptores celulares para lipoproteínas. Assim, a enzima colesterol acil transferase

(ACAT) catalisa a conversão de colesterol em éster de colesterol no interior celular, processo

necessário para o armazenamento do colesterol e para proteção da própria célula, já que o

colesterol é tóxico (BUHMAN; ACCAD; FARESE Jr., 2000).

Os lipídeos são compostos insolúveis no meio aquoso e para o seu transporte pelo

organismo precisam estar complexados com moléculas hidrofílicas, como as lipoproteínas, que

são agregados moleculares constituídos de componentes altamente hidrofóbicos em seu interior,

como: ésteres de colesterol, triglicerídeos, além de vitaminas lipossolúveis; e moléculas

periféricas menos hidrofóbicas que as anteriores, como: fosfolipídeos e colesterol não

esterificado, além de proteínas (Apolipoproteínas ou Apoproteínas – Apo-LP) (SIMONS &

IKONEN, 2000; SANTOS et al., 2001).

As LP são definidas como a unidade funcional de transporte de lipídeos no plasma e têm a

função de suprir os tecidos com lipídeos provenientes da dieta ou sintetizados pelo organismo. As

Apo-LP contribuem para a regulação do metabolismo das lipoproteínas através da modulação da

atividade de enzimas, direcionando as lipoproteínas aos locais de catabolismo e interagindo com

receptores específicos e de alta afinidade (SANTOS et al., 2001).

As lipoproteínas diferem entre si, quanto à composição, ao tamanho e à mobilidade

eletroforética, porém, a densidade é a propriedade física na qual se baseia a atual classificação e o

método de ultracentrifugação preparativa é empregado para isolar seis principais classes de

lipoproteínas: quilomícrons (QM), lipoproteína de muito baixa densidade (VLDL – Very Low

Density Lipoprotein), lipoproteína de densidade intermediária (IDL – Intermediate Density

Lipoprotein), lipoproteína de baixa densidade (LDL – Low Density Lipoprotein) e lipoproteína

de alta densidade (HDL – High Density Lipoprotein) tipos 2 e 3 (SANTOS et al., 2001).

O metabolismo das lipoproteínas pode ser dividido para fins de estudo em três sistemas

principais: I – transporte de lipídeos de origem dietética (transporte exógeno); II – transporte de

lipídeos de origem hepática (transporte endógeno) e III – transporte reverso de colesterol.

1.10.1 TRANSPORTE DE LIPÍDEOS DE ORIGEM EXÓGENA

Inicia-se no intestino com a digestão de triglicerídeos (resultando na produção e absorção

de ácidos graxos e glicerol) e a absorção direta de colesterol (LU; LEE; PATEL, 2001). Os

triglicerídeos e o colesterol da dieta são incorporados aos quilomícrons nas células epiteliais

intestinais. Os quilomícrons alcançam os capilares periféricos, via vasos linfáticos intestinais,

para serem hidrolisados pela lipase lipoproteína endotelial, liberando ácidos graxos no tecido

adiposo e músculo. Os resquícios dos quilomícrons remanescentes, ricos em colesterol, são

captados pelo fígado por intermédio de receptores que atuam como mediadores da endocitose

(apo E e apo B-100), enquanto os ésteres de colesterol e os trigliceróis são metabolizados. Assim,

os quilomícrons transportam o colesterol exógeno para o fígado e os triglicerídeos para o tecido

adiposo. Após captação dos quilomícrons remanescentes, pelos hepatócitos, segue-se o

catabolismo intracelular das lipoproteínas plasmáticas com liberação de ácidos graxos, glicerol,

aminoácidos e hidrólise de éster de colesterol. O colesterol pode ser reesterificado para

armazenamento, utilizado na regulação da síntese do colesterol no hepatócito, excretado na forma

de colesterol livre ou ser metabolizado em ácidos biliares, sendo que estas duas últimas formas

podem ser reabsorvidas em porções distintas do intestino (GREEVENBROEK & BRUIN, 1998;

ST-PIERRE et al., 2001).

1.10.2 TRANSPORTE DE LIPÍDEOS DE ORIGEM ENDÓGENA

Na via endógena, a VLDL contendo triglicerídeos e três apoproteínas (E, C e B100), é

secretada pelo fígado e transportada para o tecido adiposo e músculo, onde ocorre uma seqüência

de eventos que transforma a VLDL, via formação da IDL, em LDL. O núcleo da IDL é composto

quase que exclusivamente de éster de colesterol e a camada externa de apenas uma apoproteína, a

B100 (LISCUM & MUNN, 1999). Dois terços da LDL resultantes são metabolizados pelas

células hepáticas e outras células em tecidos extra-hepáticos (células adrenais, fibroblastos,

células musculares lisas, células linfóides, células endoteliais) através de receptores da LDL. Essa

via constitui o meio pelo qual as células não-hepáticas controlam o colesterol necessário para a

síntese das membranas (GREEVENBROEK & BRUIN, 1998). Na presença de baixas

concentrações de LDL extracelulares, são elaborados mais receptores e vice-versa. O receptor da

LDL liga-se à apoproteína B e E. O terço restante da LDL é degradado por mecanismo

independente do receptor de LDL, como as células do sistema fagocitário mononuclear,

endocitose líquida e adsortiva não mediada por receptores em diversas células. O colesterol, não

esterificado, oriundo da renovação normal das membranas celulares, é transportado pela HDL

para o plasma. Através da ação da enzima plasmática lecitina-colesterol aciltransferase (LCAT),

o colesterol da HDL é transferido a IDL e, eventualmente, a LDL (LISCUM & MUNN, 1999).

1.10.3 TRANSPORTE REVERSO DE COLESTEROL

O transporte reverso do colesterol (TRC) é o processo pelo qual o colesterol é transportado

dos tecidos extra-hepáticos para o fígado e intestino para ser excretado. O TRC também regula a

formação, a conversão, a transformação e a degradação da HDL. A HDL é a principal classe de

lipoproteína envolvida no mecanismo do TRC, por essa razão ela tem um papel importante na

prevenção da formação das placas ateroscleróticas (OHASHI et al., 2005). Além de estar

envolvida no TRC e na proteção da função endotelial, a HDL também possui a capacidade

antioxidante, antiinflamatória e antitrombótica (BARTER et al., 2003).

O fígado é o principal local de formação da HDL, onde secreta apoproteína A-1 e esta

associa-se a fosfolipídios e forma a HDL nascente (pré β-HDL) no plasma. Esta forma de HDL

remove o colesterol livre e fosfolípides de tecidos periféricos (VON ECKARDSTEIN et al.,

2001), isso ocorre via transportador adenosine triphosphate (ATP)-binding cassette A1 (ABCA1)

que transfere colesterol livre e fosfolípide. Após esse efluxo, a HDL nascente transforma-se em

partículas esféricas, remodeladas por ação da enzima LCAT (lecithin-cholesterol

acyltransferase), no plasma. A LCAT é uma enzima interfacial que participa da captação e

transferência de colesterol livre da membrana celular extra-hepática, quilomícrons e VLDL para

as partículas de HDL pequenas. A formação e o acúmulo de éster de colesterol no núcleo da HDL

não somente remove colesterol de sua superfície promovendo um fluxo de colesterol para o seu

interior, como também gera mudanças morfológicas na partícula, que aumenta de tamanho e

torna-se esférica (STEIN & STEIN, 1999; SANTOS et al., 2001).

A enzima LCAT é secretada pelos hepatócitos e liberada no plasma em associação

reversível com lipoproteínas. No sangue, a LCAT encontra-se preferencialmente ligada a HDL, é

ativada por seu maior componente protéico, a Apo A-I, catalisando a reação de trans-esterificação

que converte colesterol livre em éster de colesterol (JONAS, 2000).

Como o aumento do conteúdo de éster de colesterol, a HDL recebe a denominação de HDL

que transfere éster de colesterol para outras lipoproteínas (quilomícrons, IDL, LDL e

principalmente VLDL) em troca de triglicerídeos promovendo aumento da captação dessas pelo

fígado, essa transferência é mediada pela proteína de transferência de éster de colesterol (CETP –

cholesterol ester transfer protein) (RADER, 1999). A CETP é sintetizada pelo fígado, baço,

intestino grosso, tecido adiposo, glândulas adrenais, rins, coração e musculatura esquelética,

podendo ser secretada por vários tipos celulares, incluindo macrófagos, linfócitos B, adipócitos e

hepatócitos (YAMASHITA et al., 2000).

A IDL e a LDL são catabolisadas via receptor hepático de LDL. Além disso, metade do

colesterol esterificado da HDL é levado seletivamente para o fígado via receptores específicos

denominados scavenger receptor class B type I (SR-BI). A HDL

enriquecida com triglicerídeos

é convertida em HDL

após hidrólise e remoção de triglicerídeos por ação da lípase lipoprotéica

de origem hepática (LLH) localizada no endotélio dos capilares hepáticos (YAMASHITA et al.,

2000).

A HDL liga-se aos receptores SR-BI com alta afinidade, liberando seletivamente apenas

éster de colesterol, através de um mecanismo distinto do caminho clássico dos receptores da

LDL, via endocitose (MINGPENG & ZONGLI, 1999). A HDL

originada pode retornar aos

tecidos extra-hepáticos, reiniciando o ciclo de captação do colesterol (HUI et al., 1981).

Outro mecanismo pelo qual a HDL recebe colesterol livre e fosfolípide de LDL, hidrólise

mediada pela lipoproteína lipase (LPL), um processo facilitado pela phospholipids transfer

protein (PLTP). A PLTP é uma glicoproteína plasmática parcialmente associada a HDL e tem a

função de mediar a transferência de fosfolípides da LDL para HDL. Portanto, a ligação entre

HDL e LDL é caracterizada pela troca de colesterol éster, fosfolípide e triglicérides mediada pela

CETP e PLTP (WANG & BRIGGS, 2004).

A apoA-1 resultante da degradação é recebida para nova formação de HDL e a

degradação

da HDL envolve a lipase hepática (LH) que hidrolisa os triglicérides nas partículas de HDL.

Outra lipase localizada na superfície endotelial é a lipase endotelial (LE), capaz de regular os

níveis e a função da HDL, por hidrolisar fosfolípides sobre a HDL (WANG & BRIGGS, 2004).

Uma vez no fígado, o colesterol proveniente dos tecidos pode participar de outras vias

metabólicas como re-empacotamento em lipoproteínas e posteriormente secretado para o plasma

ou ser excretado para a bile através dos ácidos biliares (principal via de eliminação) (SANTOS et

al., 2001).

As trocas lipídicas entre as lipoproteínas são importantes para remover o excesso de

colesterol da periferia para a disposição metabólica ou no processo de reciclagem para a

composição, tamanho e níveis de HDL, regenerando a função da mesma no TRC (WANG &

BRIGGS, 2004).

Além de sua importante função no transporte reverso do colesterol, as partículas de HDL

também possuem outras propriedades como: efeito antiinflamatório, antitrombótico e

antioxidante (BARTER et al., 2003; CHOI et al., 2006). Esta última se deve pela capacidade da

HDL em inibir a oxidação das partículas de LDL por conter enzimas antioxidantes, entre elas a

paraoxonase, a qual está associada à HDL (CHOI et al., 2006).

1.11 PARAOXONASE

Algumas hipóteses sugerem que infecções, inflamação e as altas concentrações de

colesterol podem ser a causa central no desenvolvimento da aterosclerose. Uma dessas hipóteses

é a modificação de lipoproteínas, principalmente a LDL, principal carreadora de colesterol para o

interior da parede das artérias. Essa modificação pode se dar através do processo de oxidação por

agentes, tais como ânions superóxido, óxido nítrico e peróxido de hidrogênio, transformando-se

em LDL oxidada (oxi-LDL) (STEINER, 2000; KÁDAR & GLASZ, 2001).

As oxi-LDLs depositam-se na camada íntima arterial, sendo capazes de provocar

citotoxicidade no endotélio vascular e se acumulam na parede do vaso. Posteriormente, os

monócitos aderem ao local, migram para a camada íntima e se transformam em macrófagos e

estes fagocitam as partículas de LDL oxidadas, originando o acúmulo de vesículas citosólicas

(contendo éster de colesterol) no seu interior formando as “foam cells” que se acumulam na

camada íntima, liberam agentes quimiotáticos capazes de aumentar o recrutamento das LDLs

plasmáticas e fatores de crescimento, que levam a migração e proliferação das células musculares

lisas, formando a placa ateromatosa (BUHMANN et al., 2000; FILHO, 2000).

Os efeitos biológicos oxidativos dos radicais livres, espécies reativas de oxigênio (EROs),

sobre os lipídeos, proteínas e DNA são controlados pela ação de alguns antioxidantes. Os

antioxidantes podem inibir a aterogênese e preservar a função vascular por diferentes

mecanismos. Existe um sistema enzimático capaz de neutralizar os produtos das EROs, como

superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx), glutationa redutase

(GR) e a glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD). Dentre estes sistemas enzimáticos

antioxidantes encontra-se também a paraoxonase (PON1) (SERDAR et al., 2006).

A PON1 é uma glicoproteína de 355 aminoácidos, a qual é sintetizada no fígado e liberada

no sangue, onde se associa com a HDL. É membro de uma família de três genes consistindo em

PON1, PON2 e PON3 localizada no cromossoma 7 humano. As paraoxonases são hidrolases com

um dos maiores substratos específicos conhecido, sendo a PON1 a primeira das proteínas a ser

identificada e tem sido amplamente estudada (DEAKIN & JAMES, 2004). A PON1 recebeu esta

denominação em decorrência do paraoxon, um metabólito tóxico do inseticida paration, que é um

dos maiores substratos estudados, pois a PON1 hidrolisa os metabólitos ativos produzidos por ele

(COSTA et al., 2005).

Uma função fisiológica da PON1 parece estar relacionada com o metabolismo tóxico de

lipídeos oxidados de partículas de LDL e HDL. A PON1 previne a formação de LDL oxidada,

inativa fosfolipídeos oxidados derivados da LDL oxidada e também protege fosfolipídeos da

HDL de oxidação. Estas ações sugerem que a PON1 pode contribuir para a prevenção de doenças

cardiovasculares, entre elas a aterosclerose. A atividade da PON1 pode ser modulada por alguns

fatores, como exposição a substâncias químicas, drogas, cigarro, álcool, hábitos alimentares,

idade, origem étnica e doenças prévias. Essas condições podem causar polimorfismo molecular

da PON1, proporcionando mutações e alterações na atividade da mesma (COSTA et al., 2005).

1.12 HIV E HIGHLY ACTIVE ANTIRETROVIRAL THERAPY (HAART)

Com o advento da highly active antiretroviral therapy (HAART), conhecida como

terapia antirretroviral altamente ativa, observou-se um profundo impacto na história natural da

infecção pelo HIV. Desta forma, o emprego de combinações terapêuticas contendo drogas da

classe dos Inibidores de Protease (IP), promoveu uma importante e sustentada supressão na

replicação viral, elevando a sobrevida e a qualidade de vida dos pacientes soropositivos. No

entanto, os benefícios do uso de IP são acompanhados por inúmeros efeitos colaterais decorrentes

destes medicamentos, principalmente alterações metabólicas. Dentre estas destacam-se

dislipidemia, resistência à insulina e distribuição anormal da gordura corporal, reconhecidos

fatores de risco para doenças cardiovasculares (YU et al., 20005; VALENTE et al., 2005; FUNK;

BRESSLER; BRISSETT, 2006).

A lipodistrofia do HIV caracteriza-se pela distribuição anormal da gordura corporal em

pacientes soropositivos, e apesar de fortemente associada ao uso de IPs, alguns inibidores de

transcriptase reversa nucleosídeos (NRTIs), também podem estar associados com sua gênese

(VALENTE et al., 2005).

A lipodistrofia pode ser classificada clinicamente em 3 categorias: (1) – lipoatrofia:

caracterizada pela redução da gordura em regiões periféricas como braços, pernas, face e

nádegas, podendo apresentar proeminência muscular e venosa relativas; (2) – lipohipertrofia:

caracterizada pelo acúmulo de gordura em regiões abdominal, presença de glibosidade dorsal,

ginecomastia e aumento das mamas em mulheres; (3) – forma mista: caracterizada pela

associação de componentes das duas formas anteriormente descritas (THIÉBAUT; DAUCOURT;

MERCIÉ, 2000; VALENTE et al., 2005).

Os distúrbios lipídicos associados à HAART aumentam os riscos para doenças

cardiovasculares, especialmente aterosclerose. O endotélio vascular é exposto constantemente a

agentes nocivos circulantes como colesterol e no caso dos pacientes soropositivos, partículas

virais. As células endoteliais geram resposta inflamatória contra esses agentes. A inflamação

causa mudanças no endotélio vascular e ocorre expressão de moléculas de adesão atraindo

leucócitos e facilitando a agregação plaquetária (SUDANO et al., 2006).

A elevação dos níveis de LDL plasmática pode aumentar a velocidade de sua adesão na

parede arterial e deposição na camada íntima arterial (KÁDAR & GLASZ, 2001). O resultado

destes eventos é a formação de uma placa ateromatosa, composta de uma cobertura fibrosa com

células musculares lisas, macrófagos, células esponjosas, linfócitos, colágeno, elastina,

proteoglicanos e de um centro necrótico composto de restos celulares, cristais de colesterol,

células esponjosas e cálcio (KUMMAR; ABBAS; FAUSTO, 2005).

À medida que as placas aumentam de tamanho, progressivamente invadem a luz do vaso,

levando ao comprometimento do fluxo sangüíneo, enfraquecimento das artérias e uma variedade

de complicações como calcificação, ulceração, formação de trombos e outros distúrbios

(KÁDAR & GLASZ, 2001).

As doenças cardiovasculares, decorrentes principalmente da aterosclerose, haja vista o

espessamento da artéria e conseqüentemente o comprometimento do lúmen vascular, estão

associadas aos níveis plasmáticos das lipoproteínas. Estudos in vivo e in vitro têm avaliado o

metabolismo das partículas lipoprotéicas marcadas radioativamente utilizando nanoemulsões

sintéticas (OLIVEIRA & QUINTÃO, 1996).

1.13 “LIPOPROTEÍNAS ARTIFICIAIS”

Em 1985, REDGRAVE & MARANHÃO, reproduziram o metabolismo dos quilomícrons

pelo desenvolvimento de um sistema de nanoemulsões artificiais ricas em triglicérides e em

1987, iniciaram estudos que visavam reproduzir o metabolismo da LDL através de uma

nanoemulsão rica em colesterol (LDE) (MARANHÃO et al., 1993). Nesse mesmo estudo

demonstraram que essa microemulsão lipídica com composição semelhante à fase lipídica da

LDL humana, constituída de aproximadamente 66% de fosfolípide, 33% de colesterol éster e 1%

de triglicérides, sem a parte protéica da lipoproteína (HIRATA, 1991), ligava-se aos receptores

de LDL (rLDL), sendo captada pelas células. O objetivo inicial deste estudo era a avaliação do

uso de LDE como ferramenta de investigação da hipercolesterolemia relacionada a aterosclerose.

Surpreendentemente, os resultados obtidos em ratos mostraram que a LDE apresentava resposta

metabólica semelhante à da LDL natural, sugerindo que estivesse sendo captada pelos mesmos

receptores que retiram a LDL da circulação.

Apesar da LDE não possuir proteína, ao ser injetada na circulação plasmática, entra em

contato com as lipoproteínas naturais, adquire a apo E, que pode ser reconhecida pelo receptor da

LDL. Assim, a apo E serve como ponte para a LDE ligar-se ao receptor, sendo captada pela

célula (MARANHÃO et al., 1993).

Foram realizados diversos experimentos com a LDE e foi demonstrado que a remoção

plasmática da LDE é maior em pacientes portadores de leucemia mielóide aguda (MARANHÃO

et al., 1994). As células leucêmicas apresentam aumento de expressão dos receptores da LDL, de

tal forma que retiram avidamente a lipoproteína da circulação. Após tratamento bem sucedido,

com a remissão da doença, ou seja, o desaparecimento das células leucêmicas, a remoção da LDE

normaliza-se, confirmando de fato que, era o maior número de receptores da LDL presentes nas

células leucêmicas, responsável pela remoção acelerada da LDE. Em trabalho subseqüente,

estudos de competição em linfócitos mostraram que a LDL natural compete com a LDE pela

captação celular e sugerem que a remoção de ambas ocorre pelo mesmo receptor específico

(MARANHÃO et al., 1997). Em outros estudos, a LDE foi injetada em indivíduos

normolipidêmicos e em portadores de hipercolesterolemia (MARANHÃO et al., 1997). Nestes

pacientes, a LDE foi removida muito lentamente da circulação, o que mostrou o potencial da

nanoemulsão como instrumento para a investigação das dislipidemias. Outro trabalho realizado

com idosos, que possuem concentrações aumentadas de LDL, a remoção da LDE foi mais lenta

neste grupo quando comparados aos jovens (PINTO et al., 2001). Na Beta-Talassemia, onde

ocorre uma diminuição da concentração de LDL, os estudos demonstram que estes pacientes

removiam a LDE da circulação mais rapidamente quando comparados com indivíduos sem a

doença (NAOUM et al., 2004). Em pacientes submetidos a transplante cardíaco, demonstraram

que a remoção da LDE da circulação ocorreu mais lentamente quando comparado com controles,

sugerindo a presença de um mecanismo deficiente de remoção da LDL, que deve ser uma das

causas da hipercolesterolemia, encontrada com freqüência nesses pacientes (PUK et al., 2004;

PUK, 2006).

Esses resultados mostram a utilidade desta nanoemulsão como um modelo de estudo para

explorar o metabolismo da LDL, utilizando a LDE como “doadora” de lipídios, com o intuito de

investigar a capacidade da HDL de receber lipídios (colesterol livre, colesterol éster, triglicérides

e fosfolípide) da LDL e, com isso, avaliar qualitativamente a HDL (PUK, 2006).

2 JUSTIFICATIVA

Os pacientes HIV soropositivos, na fase inicial da infecção podem apresentar distúrbios

metabólicos/lipídicos. Essas alterações, nos pacientes com a doença (AIDS) são freqüentes e

podem comprometer a resposta imunológica do organismo, principalmente nos pacientes que

já desenvolveram a doença.

O uso de terapia antirretroviral deve reduzir a replicação viral a níveis indetectáveis

melhorando a qualidade de vida desses pacientes, bem como propiciando, aos mesmos, uma

sobrevida maior.

Os distúrbios lipídicos decorrentes da infecção pelo HIV, associados aos efeitos

colaterais da terapia antirretroviral, aumentam os riscos para doenças cardiovasculares,

especialmente aterosclerose que, caracteriza-se pela alteração no endotélio vascular que induz

ao acúmulo de lipídeos e com a persistência dos estímulos poderá levar à obstrução vascular,

impedindo a circulação sangüínea.

Uma das hipóteses para o desenvolvimento da aterosclerose é principalmente a

oxidação de partículas de LDL, as quais poderiam sofrer ação da paraoxonase que parece

estar relacionada com o metabolismo tóxico de lipídeos oxidados, pois bloquearia o acúmulo

de peróxidos de lipídeos nas LDL prevenindo a oxidação da LDL, constituindo um dos

componentes importantes na prevenção da aterosclerose.

Neste contexto, a avaliação do nível de transferência de lipídeos da LDE para a HDL e a

atividade da paraoxonase em relação à oxidação da LDL, pode ser importante para controlar

os distúrbios lipídicos e a formação de aterosclerose nos pacientes HIV soropositivos ou com

AIDS, já que estes são os principais fatores predisponentes para doenças cardiovasculares.

3 OBJETIVOS

3.1 OBJETIVO GERAL

Avaliar o processo de transferência plasmática de lipídeos da LDE para a HDL e a

atividade da enzima paraoxonase em pacientes HIV soropositivos.

3.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

Determinar nos dois grupos, pacientes HIV soropositivos e indivíduos-controle, os

seguintes parâmetros, através de estudos “in vitro”.

- Transferência do colesterol livre da LDE para a HDL;

- Transferência do colesterol éster da LDE para a HDL;

- Transferência dos triglicérides da LDE para a HDL;

- Transferência dos fosfolípides da LDE para a HDL;

- Medida da atividade da enzima paraoxonase;

- Verificar se há correlação entre os parâmetros acima e os valores de lípides, glicose, carga

viral, contagem de linfócitos T CD4, CD8 e IMC determinados nos pacientes.

4 METODOLOGIA

4.1 CASUÍSTICA

O presente trabalho teve o projeto aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa com Seres

Humanos da Universidade Federal de Santa Catarina, conforme consta do processo Nº 210/2005,

cujo parecer encontra-se em anexo (Anexo nº 1).

Participaram deste estudo 48 voluntários comprovadamente soropositivos para o HIV,

diagnosticados por dois testes sorológicos tipo ELISA, com princípios metodológicos distintos e

confirmados por imunofluorescência indireta, com indicação para o início ou não da terapia

antirretroviral, conforme orientações do Ministério da Saúde. Dos pacientes que participaram

deste estudo 23 usavam terapia antirretroviral, sendo que, destes 12 usavam NRTI e NNRTI, 9

NRTI e IP e 25 pacientes não usavam terapia antirretroviral. A comparação estatística entre esses

grupos pelo teste t Student não apresentou diferença significativa.

Neste estudo participaram ainda 45 voluntários comprovadamente soronegativos para o

HIV, encaminhados pelo Setor de Triagem de Doenças Infecciosas do Hospital Universitário da

Universidade Federal de Santa Catarina, constituindo o grupo controle.

Após terem sido devidamente esclarecidos sobre os objetivos da pesquisa e de que os

resultados seriam tornados públicos, quaisquer fossem os mesmos, todos os voluntários

consentiram em participar da pesquisa. Nenhum dos voluntários, bem como quaisquer dos

membros da equipe de pesquisa tiveram benefícios financeiros decorrentes de sua realização.

Após triagem clínica realizada por médicos infectologistas do ambulatório do Hospital

Universitário, os pacientes devidamente esclarecidos e que aceitaram participar da pesquisa

mediante assinatura do termo de consentimento (Anexo nº 2), foram encaminhados ao

Laboratório de Análises Clínicas do Hospital Universitário da Universidade Federal de Santa

Catarina, para a coleta de material biológico para as determinações laboratoriais.

Dos 48 pacientes HIV soropositivos 26 eram mulheres e 22 homens. Dos 45 pacientes HIV

soronegativos 29 eram mulheres e 16 homens.(Tratados ou não tratados)

As amostras de sangue destes voluntários foram colhidas por venopunção anterocubital,

após jejum de 12 a 14 horas, utilizando-se o sistema de coleta a vácuo. Foram coletados,

aproximadamente 4 ml de sangue em tubos contendo EDTA (2mg/ml) para a realização dos

seguintes exames: contagem de linfócitos CD4 (Anexo nº 3), linfócitos T CD8 (Anexo nº 3) e

determinação de carga viral (Anexo nº 3). Foram coletados ainda, aproximadamente 8 ml de

sangue em tubos sem anticoagulante, para avaliação dos níveis plasmáticos de paraoxonase

sérica, glicose, colesterol total, triglicerídeos, HDL, LDL e VLDL.

As determinações de transferência lipídica e a enzima paraoxonase foram realizadas no

Laboratório de Metabolismo de Lípides do Instituto do Coração do Hospital das Clínicas da

Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo.

4.2 CONTAGEM DE LINFÓCITOS T CD4 E T CD8

A contagem de linfócitos T CD4 e T CD8 foi realizada no Laboratório de Análises Clínicas

do Hospital Universitário – Universidade Federal de Santa Catarina.

A contagem de linfócitos T CD4 e T CD8 foi realizada através de citômetro de fluxo

modelo FACSCalibur

™

(Becton Dickinson, USA), em amostras de sangue total, utilizando o

conjunto reativo com anticorpos monoclonais anti CD4/CD3 e anti CD8/CD3 (Becton Dickinson,

San Jose, C.A., USA).

Os valores de referência assumidos para a contagem de linfócitos CD4 e CD8 foram os

seguintes:

CD4: 500 a 1500 células/mm

CD8: 300 a 1000 células/mm

A relação CD4/CD8 foi obtida pela divisão do número de linfócitos CD4 pelo número de

linfócitos CD8. Para calibração do sistema foram utilizados os conjuntos FACSCalibur

™

Control

(Becton Dickinson ), que contém os controles: zero, baixo, médio e alto.

4.3 QUANTIFICAÇÃO DO RNA DO HIV

A quantificação do RNA viral (Carga Viral) foi realizado por metodologia NASBA

(Nucleic Acid Sequence-based Amplification) através do teste Nuclisens HIV-1 QT, Organon

Teknika BV (Boxtel, Netherland), onde o DNA é extraído, amplificado e quantificado por

eletroquimiluminescência.

As determinações foram realizadas a partir de sangue total coletado em tubo contendo

EDTA, este foi centrifugado a 378g por 10 minutos para obtenção do plasma.

O NucliSens HIV-1 QT compreende quatro conjuntos reativos distintos, sendo um para

cada fase de execução do teste:

1. NucliSens Lysis Buffer, utilizando para a liberação dos ácidos nucléicos;

2. NucliSens HIV QT, para isolamento dos ácidos nucléicos;

3. NucliSens HIV QT, para amplificação dos ácidos nucléicos;

4. NucliSens HIV QT, para detecção dos ácidos nucléicos.

O teste NucliSens HIV-1 QT consiste das seguintes etapas:

- Liberação dos ácidos nucléicos: 1 ml do plasma obtido foi adicionado ao tampão de lise

(Tiocianato de guanidina) para liberação dos ácidos nucléicos e posterior determinação. Esta

etapa tem por finalidade a desintegração das partículas virais e células, bem como a inativação

das RNAses e DNAses presentes na amostra.

- Isolamento dos ácidos nucléicos: aos ácidos nucléicos liberados no tampão de lise, são

adicionados três RNAs sintéticos de concentração conhecida (Qa, Qb e Qc), alta, média e baixa,

respectivamente, que servem como calibradores internos. Cada um desses RNAs difere do RNA

do HIV presente na amostra em apenas uma seqüência de pares de bases. Em meio de elevada

concentração salina os ácidos nucléicos presentes no tampão, incluindo-se os calibradores, ligam-

se às partículas de dióxido de silício que funcionam como base sólida. Em seguida os ácidos

nucléicos são eluídos da fase sólida utilizando-se tampão de eluição.

- Amplificação: o RNA do HIV-1 presente no eluído é amplificado juntamente com os

calibradores internos. Cada cópia formada entra em um novo ciclo de amplificação, sendo que

esta metodologia não requer a separação das cadeias, tornando o processo isotérmico e contínuo.

- Detecção: a detecção e quantificação do RNA do HIV-1 presente na amostra se baseia no

princípio de eletroquimiluminescência, utilizando o leitor NucliSens Reader. Alíquotas da

amostra são adicionadas a quatro soluções de hibridização específicas (WT, Qa, Qb e Qc). Os

RNAs são hibridizados com esferas-oligo (um oligo ligado a esferas revestidas com

estreptavidina) e uma sonda marcada com rutênio. As esferas paramagnéticas ligadas ao

complexo RNA/sonda são capturadas à superfície de um eletrodo por meio de um campo

magnético. A voltagem aplicada ao eletrodo desencadeia a reação de eletroquimiluminescência,

sendo que a luz emitida pelas sondas marcadas com rutênio é proporcional à quantidade de RNA

viral amplificado.

4.4 DETERMINAÇÃO DOS NÍVEIS SÉRICOS DE GLICOSE

Os níveis séricos de glicose foram determinados por espectrofotometria, utilizando

conjuntos reativos Dimension

clinical chemistry system (Dade Behring Inc., Newark, USA.), no

Laboratório de Análises Clínicas do Hospital Universitário – UFSC.

Os valores de referência para este analito são:

70 – 110 mg/dl.

4.5 DETERMINAÇÃO DOS NÍVEIS SÉRICOS DE COLESTEROL TOTAL

Os níveis séricos de colesterol total foram determinados por espectrofotometria, utilizando

conjuntos reativos Dimension

clinical chemistry system (Dade Behring Inc., Newark, USA.), no

Laboratório de Análises Clínicas do Hospital Universitário – UFSC.

Os valores de referência para este analito são:

< 200 mg/dl [5.2 mmol/l] - Desejável

200 – 240 mg/dl [5.2 – 6.2 mmol/l] - Limítrofes

> 240 mg/dl [6.2 mmol/l] - Alto risco

4.6 DETERMINAÇÃO DOS NÍVEIS SÉRICOS DE TRIGLICERÍDEOS

Os níveis séricos de colesterol total foram determinados por espectrofotometria, utilizando

conjuntos reativos Dimension

clinical chemistry system (Dade Behring Inc., Newark, USA.), no

Laboratório de Análises Clínicas do Hospital Universitário – UFSC.

Os valores de referência para este analito são:

< 150 mg/dl [1.70 mmol/l] - Normal

150 – 199 mg/dl [1.70 – 2.25 mmol/l] - Acima da média

200 – 499 mg/dl [2.26 – 5.64 mmol/l] - Alto

≥ 500 mg/dl [≥ 5.65 mmol/l] - Muito alto.

4.7 DETERMINAÇÃO DOS NÍVEIS SÉRICOS DE HDL-COLESTEROL

Os níveis séricos de HDL-colesterol

foram determinados por espectrofotometria, utilizando

conjuntos reativos Dimension

clinical chemistry system (Dade Behring Inc., Newark, USA.), no

Laboratório de Análises Clínicas do Hospital Universitário – UFSC.

Os valores de referência para este analito são:

< 40 mg/dl [1.04 mmol/l] - Baixo

≥ 60 mgl/dl [1.55 mmol/l] - Alto

4.8 DETERMINAÇÃO DOS NÍVEIS SÉRICOS DE LDL-COLESTEROL

Os níveis séricos de LDL-colesterol foram calculados pela fórmula de Friedewald: LDL =

Colesterol Total – (HDL + VLDL) (FRIEDEWALD, 1972).

Os valores de referência para este analito são:

< 100 mg/dl - ótimo

100 – 129 - próximo de ótimo

130 – 159 - levemente alto

160 – 189 - alto

> 190 - muito alto.

4.9 DETERMINAÇÃO DOS NÍVEIS SÉRICOS DE VLDL-COLESTEROL

Os níveis séricos de LDL-colesterol foram determinados através de cálculos a partir das

determinações anteriores conforme a fórmula de Friedewald: VLDL = Triglicérides/5

(FRIEDEWALD, LEVY, FREDICKSON, 1972).

O valor de referência para este analito é:

> 40 mg/dl - Desejável

4.10 PREPARO DA LDE

A LDE foi preparada segundo a técnica descrita por Ginsburg et al. (1982) e modificada por

Maranhão et al. (1993). Em um frasco, foram pipetados 40 mg de fosfatidilcolina, 20 mg de éster

de colesterol, 1,0 mg de trioleína e 0,5 mg de colesterol, diluídos em clorofórmio/metanol (2:1).

Posteriormente, foram adicionados 70 kBq de

H-colesterol éster e 70 kBq de

C-fosfatidilcolina

ou 70 kBq de

H-triglicérides e 70 kBq de

C-colesterol. Em seguida, a mistura foi secada sob

fluxo de nitrogênio, em banho-maria 37ºC e mantida em dessecador a vácuo, por 16 horas, a 4ºC,

para remoção dos solventes residuais. A mistura de lipídios ressuspendida com tampão-tris HCl

foi emulsificada por irradiação ultrasônica de 125 watts de potência durante 3 horas, sob uma

atmosfera de nitrogênio, com temperatura variando de 51 a 55ºC. Em seguida, a nanoemulsão foi

purificada por duas etapas de ultracentrifugação e esterilizada através de passagem em filtro

Millipore

0,22 µm de diâmetro.

O processo de preparo das nanoemulsões foi realizado em capela de fluxo laminar. Todo o

material utilizado foi esterilizado em autoclave, 120ºC e despirogenizado em estufa 180ºC

durante 90 minutos.

4.11 TRANSFERÊNCIA DE COLESTEROL LIVRE, COLESTEROL ÉSTER,

TRIGLICÉRIDES E FOSFOLÍPIDES DA LDE PARA A HDL.

Amostras dos pacientes foram coletadas, após jejum de 12 horas, em EDTA (1,5 g/L) e o

plasma foi obtido após 10 minutos de centrifugação, a 3.000 rpm, em centrífuga Solval RT7. Foi

incubado 50 µL da LDE marcada radiativamente com

H-colesterol éster (

H-CE) e

C-

fosfatidilcolina (

C- PL) ou

H-triglicérides (

H-TG) e

C-colesterol livre (

C-CL) com 200 µL

de plasma por 60 minutos, a 37ºC, em agitador orbital Gyromax 706R, sob agitação de 40 rpm.

Após incubação, foram adicionados à mistura 250 µL de reagente de precipitação de

lipoproteínas contendo apo B (sulfato de dextran 0,2%/MgCl

3M, v/v). A mistura foi agitada em

vortex por 30 segundos e posteriormente centrifugada por 10 minutos a 3.000 rpm. A fração HDL

foi obtida após precipitação da nanoemulsão juntamente com as lipoproteínas contendo apo B,

com 250 µL de dextran/ MgCl

(0,2% Destran e 0,3 mol/L MgCl

). Alíquotas de 250 µL do

sobrenadante, contendo a HDL foram pipetadas em frascos de cintilação. Foram acrescentados a

esses frascos, 5,0 mL de solução cintiladora Ultima Gold (PerdinElmer, Boston, USA) e,

finalmente, a radioatividade presente nas amostras foi quantificada em contador Beta (Liquid

Scintillation Analyzer, Packard 1600 TR, Palo Alto, CA) com a utilização do software Plus Vers.

5.01 da Diamond Computers, para determinação das contagens de

C e

H das amostras. O

branco para este experimento consiste da mistura de 200 µL de solução tampão TRIS-HCl e 50

µL de LDE, incubada e precipitada nas mesmas condições descritas acima. O valor de

radioatividade total presente na amostra foi determinada pela incubação de 200 µL de plasma

com 50 µL de LDE, seguida de incubação, porém sem adição de reagente de precipitação. A

quantificação dos lipídios transferidos da LDE para HDL plasmática foi expressa como

percentagem (%) em relação à radioatividade total incubada.

4.12 DETERMINAÇÃO DA ATIVIDADE DA PARAOXONASE (PON1)

Amostras dos pacientes foram coletadas, após jejum de 12 horas, em tudo seco e o soro foi

obtido após 10 minutos de centrifugação, à 3.000 rpm, em centrífuga Sorval RT7. A atividade da

PON1 foi medida pela adição de 500 µL de tampão Tris-HCl 0.1M e pH 8.05, contendo 2

mmol/L de CaCl

e 1.1 mmol/L de paraoxon (Sigma Chemical Co.) a 25 µL de soro. A amostra

foi, então, distribuída em placa de 96 poços fundo chato, 200 µL por poço (em duplicata). A

leitura foi feita em “Leitor de Microplascas” (Microplate Reader, Benchmark, Bio-RAD) com

comprimento de onda de 405 nm e temperatura de 37ºC. Para o cálculo da atividade, foram feitas

6 leituras em intervalos de um minuto cada. O resultado foi obtido multiplicando-se a média da

variação das absorbâncias pelo fator descrito abaixo:

Cálculo do Fator:

(

)

( ) ( )

cmEmLVA

mLVTR

FATOR

××

405

onde,

VTR (Volume Total da Reação) = 525 µL (500 µL solução + 25 µL soro)

405

= 18050 L M

-1

(Senti et al. J Clin Endocrinol Metab 88:5422-26, 2003;

Agachan et al. Cell Biochem Funct 22:163-8, 2004).

VTR (volume total da reação) = 500 µL solução + 25 µL da amostra = 525 µL

VA (volume da amostra) = 25 µL

E (espessura da ‘cubeta’) = 1 cm

Substituindo-se os valores e ajustando-os para as unidades internacionais temos:

Fator = 1163,43 nMol mL

-1

Cálculo da Atividade:

Atividade da Paraoxonase = Fator x ∆abs/min = 1163,43 x ∆abs nMol min

-1

onde,

∆abs = é média da variação das absorbâncias medidas a cada 1 minuto.

4.13 ANÁLISE ESTATÍSTICA

A idade, a altura, o peso e o IMC do grupo HIV soropositivo foram analisados

estatisticamente com os dados encontrados no grupo controle. O mesmo foi feito com as

concentrações de glicose, de colesterol total, de triglicérides, de HDL-colesterol, de LDL-

colesterol, de VLDL-colesterol, com a atividade da PON1 e com as transferências dos lipídeos da

LDE para a HDL. Para isso, foi utilizado o teste “t” de Student, quando os dados se apresentavam

de forma Gauseana (paramétricos).

Foi feita também análise de correlação entre as taxas de transferência dos lipídios para a

HDL com os níveis séricos dos lipídios, da glicose, com a atividade da PON1, carga viral,

contagem de linfócitos T CD4, CD8 e com o IMC no grupo HIV soropositivo através do teste de

Pearson ou de Sperman dependendo da distribuição da amostra.

Em todas as comparações efetuadas, foram consideradas significantes as diferenças que

apresentaram p < 0,05.

5 RESULTADOS

5.1 CONSTITUIÇÃO DOS GRUPOS ESTUDADOS

Os grupos estudados foram constituídos de forma semelhante em relação ao sexo, à idade e

à altura (Tabelas II e III).

5.2 VERIFICAÇÃO DO PESO E ÍNDICE DE MASSA CORPORAL (IMC)

O peso do grupo HIV soropositivo (63.6 ± 10.3) apresentou média inferior àquela

verificada no grupo controle (70,4 ± 14,8; p = 0,031) (Tabela III).

O IMC do grupo HIV soropositivo (22,7 ± 3,0) apresentou média inferior àquela verificada

no grupo controle (25,8 ± 3,7; p < 0,0001) (Tabela III).

5.3 CONCENTRAÇÃO SÉRICA DE GLICOSE

Não foram constatadas diferenças entre os níveis séricos de glicose do grupo HIV

soropositivo (88 ± 20.6 mg/dl) quando comparados ao grupo controle (92 ± 18 mg/dl; p = 0,320)

(Tabela IV).

5.4 CONCENTRAÇÃO SÉRICA DE LIPÍDEOS

As concentrações séricas de colesterol total, triglicerídeos, LDL e VLDL apresentaram

médias mais baixas no grupo de indivíduos infectados pelo HIV (164 ± 30), (99 ± 32 mg/dl),

(101 ± 21 mg/dl) e (20 ± 8 mg/dl), em relação ao grupo controle (191 ± 33 mg/dl; p < 0,001),

(116 ± 39 mg/dl; p = 0,0352), (127 ± 30 mg/dl; p < 0,0001) e (23 ± 8 mg/dl; p = 0,0352),

respectivamente. (Tabela IV).

Não foram constatadas diferenças entre os níveis séricos de HDL-colesterol do grupo HIV

soropositivo (43 ± 13 mg/dl) quando comparados ao grupo controle (41 ± 10 mg/dl; p) (Tabela

IV).

5.5 ATIVIDADE SÉRICA DA ENZIMA PARAOXONASE

A atividade sérica da paraoxonase apresentou média significativamente menor, no grupo de

indivíduos HIV soropositivos (44,3 ± 38,6 nmol.min

-1

.ml

-1

), que àquela, verificada no grupo

controle (71,8 ± 37,4 nmol.min

-1

.ml

-1

; p = 0,0003) (Tabela V).

5.6 PERCENTAGEM DE TRANSFERÊNCIA LIPÍDICA

A Figura 5 mostra os valores das taxas de transferência do colesterol livre, colesterol éster,

triglicérides e fosfolípides da LDE para a HDL dos pacientes do grupo HIV soropositivo e dos

indivíduos do grupo controle.

Na Figura 5, verifica-se que a taxa de transferência do

C-colesterol livre do grupo HIV

soropositivo foi menor que a do grupo controle (5,0 ± 1,1% e 6,3 ± 1,1% respectivamente; p <

0,0001). O mesmo ocorreu com a taxa de transferência do

H-triglicérides do grupo HIV

soropositivo quando comparados ao grupo controle (2,7 ± 0,7% e 3,5 ± 0,6% respectivamente; p

< 0,0001).

A taxa de transferência de

C-fosfolípide no grupo HIV soropositivo foi maior quando

comparado ao grupo controle (23,4 ±1,6% e 17,5 ± 0,9% respectivamente; p < 0,0001). No

entanto, a taxa de transferência de

H-colesterol éster quando comparado ao grupo controle (3,0 ±

0,7% e 2,8 ± 1,3% respectivamente; p = 0,5369) não apresentou diferença estatisticamente

significativa.

Como demonstrado na Tabela VI, a taxa de transferência do

C-colesterol livre do grupo

HIV soropositivo se correlacionou positivamente com as concentrações séricas de colesterol total

(r = 0,4995; p = 0,0003), de triglicérides (r = 0,2864; p = 0,0484), de HDL-colesterol (r = 0,5204;

p = 0,0001), de LDL-colesterol (r = 0,3072; p = 0,0337) e de glicose (r = 0,3470; p = 0,0157).

Houve correlação negativa entre a taxa de transferência do

C-colesterol livre e a carga viral (r =

0,2952; p = 0,0416) do grupo HIV soropositivo. Não houve correlação neste grupo entre a taxa

de transferência de

C-colesterol livre e a contagem de células T CD4 (p = 0,5919) e de células T

CD8 (p = 0,9125). A atividade da PON1 (p = 0,8372) e o IMC (p = 0,3228) também não se

correlacionaram com a taxa de transferência do

C-colesterol livre do grupo HIV soropositivo.

Também demonstrado na Tabela VI, a taxa de transferência de

C-fosfolípide do grupo

HIV soropositivo se correlacionou positivamente com os níveis séricos de triglicérides (r =

0,3938; p = 0,0056) deste grupo. A taxa de transferência do

C-fosfolípide não se correlacionou

com a taxa transferência com os valores de colesterol total (p = 0,0789), de HDL-colesterol (p =

0,8068), de LDL-colesterol (p = 0,1371), glicose (p = 0,1036), de carga viral (p = 0,3434), de

células T CD4 (p = 0,1347), de células T CD8 (p = 0,2937). A atividade da PON 1 (p = 0,8662) e

o IMC (p = 0,9452) também não se correlacionaram com a taxa de transferência de

C-

fosfolípide.

Ainda, na Tabela VI, a taxa de transferência de

H-colesterol éster do grupo HIV

soropositivo se correlacionou positivamente com os valores de colesterol total (r = 0,5235; p =

0,0001), de LDL-colesterol (r = 0,4273; p = 0,0025), de triglicérides (r = 0,4816; p = 0,0005).

Não foi encontrada correlação entre a taxa de transferência do

H-colesterol éster e os valores de

HDL-colesterol (p = 0,0626), de glicose (p = 0,0670), de carga viral (p = 0,1887), de células T

CD4 (p = 0,2315), de células T CD8 (p = 0,5868). A atividade da PON1 (p = 0,9561) e o IMC (p

= 0,5835) também não se correlacionaram com a taxa de transferência do

C-colesterol éster do

grupo HIV soropositivo.

Conforme Tabela VI, a taxa de transferência do

H-triglicérides do grupo HIV soropositivo

se correlacionou positivamente com os valores de colesterol total (r = 0,4997; p = 0,0003), de

triglicérides (r = 0,4304; p = 0,0023), de células T CD8 (r = 0,3594; p = 0,0121). Não houve

correlação entre a taxa de

H-triglicérides e os valores de HDL-colesterol (p = 0,1671), de LDL–

colesterol (p = 0,0014), de glicose (p = 0,1233), de carga viral (p = 0,5509) e de células T CD4 (r

= 0,3775). A atividade da PON1 (p = 0,8014) e o IMC (p = 0,5442) também não se

correlacionaram com a taxa de transferência de

H-triglicérides do grupo HIV soropositivo.

TABELA II: Distribuição dos indivíduos, nos diferentes grupos estudados, de acordo com o

sexo.

Grupo Feminino

n %

Masculino

n %

Total

Grupo Controle

HIV soropositivo

29 64,4

26 54,17

16 35,6

22 45,83

Total

55 38 93

Dados expressos em percentage, teste “t” de Student.

Abreviaturas: n = número de indivíduos estudados.

TABELA III: Distribuição dos indivíduos de acordo com a idade, o peso, a altura e o IMC dos

grupos estudados.

Parâmetros

Controle

(n=45)

HIV (+)

(n=48)

Idade

38 ± 9,2 37,5 ± 7,9 NS

Altura (m)

1,6 ± 0,1 1,7 ± 1,1 NS

Peso (Kg)

70,4 ± 14,8 63,6 ± 10,3 0,031

IMC

25,8 ± 3,7 22,7 ± 3,0 <0,0001

Dados expressos em média ± desvio padrão, teste “t” de Student.

Abreviaturas: n = número de indivíduos estudados; NS = Não Significativo.

TABELA IV: Concentrações plasmáticas dos lipídios e glicose dos grupos HIV soropositivos e

Controle.

Determinações

Bioquímicas

Controle

(n=45)

HIV (+)

(n=48)

Colesterol (mg/dl)

Total

191 ± 33 164 ± 30 0,0002

HDL-colesterol

41 ± 10 43 ± 13 NS

LDL-colesterol

127 ± 30 101 ± 21 <0,0001

VLDL-colesterol

23 ± 8 20 ± 8 0,0352

Triglicérides

116 ± 39 99 ± 32 0,0352

Glicose (mg/dl)

92 ± 18 88 ± 21 NS

Dados expressos em média ± desvio padrão, teste “t” de Student.

Abreviaturas: n = número de indivíduos estudados; NS = Não Significativo.

TABELA V: Media da atividade da paraoxonase nos grupos HIV soropositivos e Controle.

Parâmetro Controle

(n=45)

HIV (+)

(n=48)

PON1 (nmol.min

.ml

)

71,8 ± 37,4 44,3 ±38,6 0,0003

Dados expressos em média ± desvio padrão, teste “t” de Student.

Abreviaturas: n = número de indivíduos estudados; PON1 = Paraoxonase 1.

FIGURA 5

Taxa de transferência do colesterol livre, colesterol éster, triglicérides e

fosfolípides da LDE para a HDL nos grupos HIV soropositivos e Controle. Comparação

entre os grupos HIV soropositivo e controle: * p < 0,0001, teste “t” de Student.

Abreviaturas: CL = colesterol livre, PL = fosfolípide, CE = colesterol éster, TG =

triglicérides.

0,0

3,0

6,0

9,0

12,0

15,0

18,0

21,0

24,0

27,0

CL PL CE TG

Transferência (%)

Grupo Controle

HIV soropositivo

Tabela VI: Correlações estatísticas através do teste de Pearson entre a transferência as taxas

de transferência de colesterol livre (

C-CL), de fosfolípide (

C-PL), de colesterol éster (

H-

CE) e de triglicérides (

H-TG) e as concentrações séricas de lipídios, glicose, carga viral,

contagem de células T CD4 E CD8 e Índice De Massa Corpórea.

Parâmetros

C-CL

(%)

C-PL

(%)

H-CE

(%)

H-TG

(%)

Colesterol Total

0,4995

0,2561

0,5235 0,4997

0,0003

0,0789

0,0001 0,0003

HDL-colesterol 0,5204

0,0362 0,2709 0,2027

0,0001

0,8068 0,0626 0,1671

LDL-colesterol 0,3072

0,2177

0,4273

0,4484

0,0337

0,1371

0,0025

0,0014

Triglicérides 0,2864 0,3938 0,4816 0,4304

0,0484 0,0056 0,0005 0,0023

Glicose 0,3470

0,2378 0,2666 0,2255

0,0157

0,1036 0,0670 0,1233

PON1

- 0,0304 - 0,0249 0,0081 0,0372

0,8372 0,8662 0,9561 0,8014

Carga Viral - 0,2952

0,1398 - 0,1930 - 0,0882

0,0416

0,3434 0,1887 0,5509

CD4

0,0794 0,2190 0,1760 0,1303

0,5916 0,1347 0,2315 0,3775

CD8

- 0,0162 0,1547 - 0,0804

0,3594

0,9125 0,2937 0,5868

0,0121

IMC

0,1458 0,0101 0,0811 0,0897

0,3228 0,9452 0,5835 0,5442

6 DISCUSSÃO

6.1 IMC

No presente estudo observamos que os indivíduos infectados pelo HIV apresentaram peso

corporal menor que o grupo controle (Tabela 3). Estudos anteriores mostram que os indivíduos

infectados pelo HIV apresentam diminuição do peso corporal, que pode estar relacionada a

alterações metabólicas, deficiência na absorção nutricional, anorexia, uso de medicamentos ou

desordens gastrintestinais (KOTLER, 2000; MORLEY; THOMAS; WILXON, 2006), o que

possivelmente, poderia explicar a perda do peso corporal dos pacientes deste estudo.

As conseqüências clínicas da perda de peso nestes pacientes está associada ao aumento de

risco de infecções oportunistas e ao aumento da mortalidade (WHEELER, 1999).

As citocinas ativam o fator nuclear de transcrição κB (NF- κB), o que resulta na diminuição

da síntese de proteínas no músculo. Além disso, elas também estimulam a liberação de cortisol,

catecolaminas das glândulas adrenais e hormônios da tireóide, resultando no aumento do

metabolismo nestes pacientes (MELCHIOR, 1997; MORLEY; THOMAS; WILSON, 2006).

A perda de massa corporal verificada nos indivíduos infectados pelo HIV (Tabela 3), pode

ser em conseqüência do aumento do catabolismo, maior gasto energético em repouso e da

anorexia decorrente da produção aumentada de citocinas como IL-1, IL-2, IL-6, TNF e IFN-γ

(MELCHIOR, 1997).

TREITINGER et al. (2001), correlacionaram os níveis lipídicos e alterações de proteínas de

fase aguda em indivíduos infectados pelo HIV nos estágios iniciais da infecção. Neste estudo,

verificaram mudanças no metabolismo de proteínas, lipídeos e lipoproteínas, concluindo que

essas alterações podem estar associadas à resposta imune do hospedeiro durante a infecção, sendo

mediada por diversas citocinas como TNF, interleucinas e interferons, as quais influenciam nos

níveis de triglicerídeos e HDL. Sendo que, a INF-α encontra-se elevada na AIDS e em indivíduos

HIV soropositivos e é positivamente correlacionada com concentrações alteradas de

triglicerídeos.

Possivelmente, isso poderia explicar a perda da massa corporal apresentada nos

pacientes deste estudo.

6.2 COLESTEROL TOTAL, TG, LDL, HDL E VLDL

Estudos realizados anteriormente sobre o comportamento dos níveis séricos dos

triglicerídeos, em indivíduos soropositivos (Tabelas 4), respectivamente, apresentaram resultados

conflitantes. DOERRLER; FEINGOLD; GRUNFELD (1994), verificaram aumento nos níveis

séricos de triglicerídeos e VLDL em pacientes HIV soropositivos, sugerindo que essa tendência

pode ser atribuída a um aumento na síntese de ácidos graxos no fígado e conseqüentemente,

aumento na secreção de VLDL, ou a um aumento da lipólise no tecido adiposo o que levaria a

reesterificação dos ácidos graxos mobilizados e formação de triglicerídeos no fígado, ou ainda, a

uma menor atividade da lipase lipoprotéica endotelial ou a diminuição da depuração de

triglicerídeos, em resposta a ação de citocinas mediadoras da resposta imune como IL-1 e IFN-α.

MIRANDA-FERNANDEZ et al. (1998), relataram que níveis elevados de triglicerídeos são

observados em estágios iniciais da infecção, onde o sistema imunológico encontra-se menos

debilitado. No grupo de pesquisa de TREITINGER et al. (2001), verificaram alterações lipídicas

em indivíduos infectados pelo HIV nos estágios iniciais da doença, demonstrando

hipertrigliceridemia nestes pacientes com alterações na resposta imune celular e decréscimo nos

níveis de colesterol total e colesterol da fração lipoprotéica HDL. Segundo MIRANDA-

FERNANDEZ et al. (1998), esse decréscimo tem sido observado nos estágios iniciais da

infecção, sendo mais evidente quando se observa decréscimo na contagem de linfócitos T CD4.

Neste trabalho verificou-se que os níveis de triglicerídeos e a fração lipoprotéica VLDL

apresentaram valores diminuídos no grupo HIV soropositivo em relação ao grupo controle e os

níveis de colesterol apresentaram valores aumentados no grupo de indivíduos infectados pelo

HIV. Os níveis da fração lipoprotéica HDL dos indivíduos HIV soropositivos não apresentaram

diferença significativa quando comparados ao grupo controle. Estes resultados são discordantes

de CONSTANS et al.(1994) e ZANGERLE et al.(1994) que verificaram uma diminuição dos

níveis séricos da fração lipoprotéica de HDL e um aumento dos níveis séricos de triglicérides em

pacientes infectados pelo HIV. SPOSITO et al. (1997), verificaram diminuição dos níveis séricos

de HDL e um aumento dos níveis séricos de triglicérides e de LDL. Estes resultados discordantes

de estudos relatados na literatura, podem ser decorrentes das variações individuais dos

componentes do grupo, em relação ao estadiamento da infecção pelo HIV, no qual estes

indivíduos se encontravam, ou decorrente de complicações metabólicas do curso da infecção.

Os níveis séricos de colesterol total e da fração lipoprotéica LDL (Tabela 4),

respectivamente, demonstraram diminuição nos indivíduos infectados pelo HIV. Estes resultados

confirmam as observações de COODLEY & COODLEY (1991) e TREITINGER et al. (2001),

que verificaram níveis menores de colesterol total em pacientes HIV soropositivos. O

comportamento dos níveis séricos do colesterol total e da fração lipoprotéica LDL, são

concordantes com os resultados obtidos por GRUNFELD & FEINGOLD (1992), os quais

compararam indivíduos classificados como assintomáticos e como portadores do HIV com

indivíduos não infectados pelo HIV. A diminuição dos níveis séricos de colesterol total e da

fração lipoprotéica LDL pode ser atribuído como um marcador da progressão da infecção pelo

HIV para AIDS (SHOR-POSNER et al., 1993). ZANGERLE et al. (1994), concluíram que a

diminuição progressiva dos níveis séricos de colesterol total e da fração lipoprotéica LDL, com a

progressão da infecção, indica que os distúrbios do metabolismo lipídico estão associados com a

ativação imunológica decorrente da infecção pelo HIV. A redução progressiva dos níveis séricos

do colesterol total e do colesterol da fração lipoprotéica LDL, observada em pacientes infectados

pelo HIV, pode ser decorrente do aumento da síntese de receptores de LDL pelos hepatócitos, em

conseqüência da ação de citocinas como IL-1 e TNF (STOPECK et al., 1993). Portanto, os

resultados deste estudo, corroboram os achados anteriores do grupo de pesquisa de

TREITINGER et al. (2001), em que foi evidenciada correlação positiva entre níveis aumentados

de proteínas de fase aguda e alterações metabólicas dos níveis lipídicos em indivíduos infectados

pelo HIV.

Diversas anormalidades metabólicas e morfológicas estão associadas à infecção pelo HIV,

como mencionado anteriormente, e à terapia antirretroviral, as quais incluem hipertrigliceridemia,

diminuição da fração lipoprotéica de HDL-colesterol, aumento da fração lipoprotéica de LDL-

colesterol, hipercolesterolemia, resistência à insulina, perda de gordura periférica, acúmulo de

gordura central, acúmulo de gordura no dorso entre outras. Essas complicações metabólicas

representam fatores de risco para o desenvolvimento de Diabetes Mellitus tipo 2 e doenças

cardiovasculares. De 10 a 50% dos pacientes infectados pelo HIV podem desenvolver uma ou

mais destas características, dificultando a escolha de uma terapia eficaz capaz de suprimir a

replicação viral sem propiciar o desenvolvimento secundário de condições crônicas (SHERER,

2003; VALENTE et al., 2005).

Neste estudo não foram encontradas anormalidades metabólicas nos pacientes HIV

soropositivos decorrentes da terapia antirretroviral, pois os parâmetros bioquímicos avaliados não

apresentaram valores concordantes com estas características, embora, alguns destes pacientes

estivessem fazendo uso de terapia antirretroviral.

6.3 PARAOXONASE

A replicação viral e algumas manifestações clínicas da infecção pelo HIV envolvem um

desequilíbrio nas reações de redução-oxidação e produção de radicais livres, e neste estudo

verificou-se uma diminuição da atividade sérica da enzima paraoxonase em pacientes HIV

soropositivos. Segundo AVIRAM et al. (1999), isso se deve, possivelmente, à oxidação induzida

pelo HIV que poderia acarretar um aumento de radicais livres que se ligam na paraoxonase,

resultando em uma menor atividade da mesma na circulação, mecanismo semelhante ao que

ocorre na reação de lipídeos oxidados com o grupamento–SH livre que se liga a cisteína-284

(sítio de ligação) na paraoxonase, levando a inativação da enzima.

Alguns estudos têm sugerido que a paraoxonase é um fator importante, responsável pela

atividade antioxidante da HDL (YAMANE et al., 2006). SARKAR; SHIVAPRAKASH;

MADHUSUDHAM (2006),

avaliando a associação entre a atividade da paraoxonase e os níveis

lipídicos em pacientes com doença prematura na artéria coronária, verificaram um

comprometimento da função da HDL em proteger a LDL da oxidação em pacientes com doença

na artéria coronária, possivelmente pela diminuição da atividade sérica da paraoxonase, contudo,

com concentrações de HDL normais. A diminuição da atividade sérica da paraoxonase foi

verificada quando as concentrações de HDL estavam diminuídas, porém, MACKNESS et al.

(1991), concluíram que a diminuição na atividade da paraoxonase é independente das mudanças

da HDL. ABBOTT et al. (1995), avaliaram a relação entre stress oxidativo de lipoproteínas e a

atividade da paraoxonase associada a HDL em indivíduos obesos. No estudo verificaram uma

diminuição na atividade sérica da paraoxonase em pacientes diabéticos e esta atividade diminuída

foi independente das concentrações séricas de lipídeos e lipoproteínas, pois as concentrações

séricas de HDL estavam significativamente maiores nos indivíduos diabéticos e com a atividade

da paraoxonase diminuída. Portanto, concluíram que esses resultados podem decorrer da presença

de inibidores endógenos nesses pacientes ou são decorrentes de distúrbios na interação entre a

paraoxonase e a HDL (FERRETTI et al., 2006).

FERRETTI et al. (2003) verificaram em seus estudos modificações nos níveis plasmáticos

de lipoproteínas isoladas de indivíduos obesos e alterações na atividade enzimática de proteínas

envolvidas no metabolismo de lipoproteínas. Porém, nos estudos do mesmo grupo (FERRETTI et

al. 2005), foi demonstrada uma diminuição na atividade da paraoxonase em indivíduos obesos

mesmo na ausência de mudanças da HDL, sendo, portanto, observado que a diminuição da

atividade da paraoxonase é independente de modificações na HDL. Sendo assim, ABBOTT et al.

(1995) e FERRETTI et al. (2005), concluem que a diminuição na atividade da paraoxonase pode

aumentar a susceptibilidade ao desenvolvimento de doenças relacionadas à peroxidação lipídica,

como aterosclerose.

A HDL exerce efeito protetor contra a aterosclerose, que resulta de várias ações, as quais

incluem: efeito antioxidante, antiinflamatório, antitrombótico e atua, principalmente, no

transporte reverso do colesterol (BATER et al., 2003). Neste estudo foi avaliado o efeito

antioxidante da HDL pela medida da atividade da enzima paraoxonase e os resultados

demonstraram que a atividade sérica da enzima paraoxonase foi menor no grupo de indivíduos

HIV soropositivos (Tabela 5), resultados estes que confirmam as observações de PARRA et al.

(2006), que avaliaram a influência da infecção pelo HIV sobre a atividade sérica da paraoxonase

e a relação com as concentrações séricas de LDL e colesterol total. Neste estudo observaram que

os indivíduos infectados pelo HIV apresentaram diminuição significativa na atividade da

paraoxonase, dos níveis séricos de LDL e colesterol total. Contudo, concluem que a atividade da

paraoxonase pode sofrer influência da infecção pelo HIV e das alterações lipídicas decorrentes da

mesma, e estes resultados sugerem ainda que a paraoxonase pode ser importante para retificar os

transtornos relacionados à infecção. Possivelmente isso poderia explicar a diminuição sérica da

atividade da paraoxonase, das concentrações séricas de LDL e colesterol total, observados neste

trabalho.

6.4 TAXA DE TRANSFERÊNCIA DO COLESTEROL LIVRE, COLESTEROL ÉSTER,

TRIGLICÉRIDES E FOSFOLÍPIDES DA LDE PARA A HDL NOS GRUPOS HIV

SOROPOSITIVOS E CONTROLE

A infecção e a inflamação são acompanhadas por alterações nas proteínas de fase aguda, as

quais são produzidas no intuito de neutralizar o microrganismo e minimizar o dano tecidual. A

síntese dessas proteínas é mediada por citocinas em resposta a estímulos celulares, incluindo

macrófagos, monócitos, linfócitos T e células endoteliais. Dentre as citocinas responsáveis pela

resposta imune incluem-se fator de necrose tumoral (TNF-α), interleucinas (Ils) e interferons

(IFN). Durante o processo infeccioso e inflamatório, essas citocinas induzem alterações no

metabolismo dos lipídios e das lipoproteínas (KHOVIDHUNKIT et al., 2004). Estudos relatam

que essas alterações são claramente evidenciadas na infecção causada pelo vírus HIV,

caracterizada pelo aumento da proliferação de leucócitos, da síntese de citocinas, de

imunoglobulinas e de proteínas de fase aguda (JAHOOR et al., 1999).

A essas alterações está associado o “stress” oxidativo, uma das características da infecção e

inflamação, e este causa um desequilíbrio entre os fatores pró-oxidantes e antioxidantes,

causando uma disfunção endotelial, processo central na patofisiologia da aterosclerose

(KONTUSH & CHAPMAN, 2006). Esta é uma doença inflamatória crônica que aumenta a

permeabilidade endotelial levando a lesões. Essa dano endotelial provocado pela produção

excessiva de pró-oxidantes (espécies reativas de oxigênio – EROs) e a ativação celular, envolve a

penetração e a retenção de partículas de LDL oxidadas (KONTUSH & CHAPMAN, 2006;

HARLAN; CHAN; BENEDICT, 2006). Esse processo provoca o acúmulo dessas partículas que

estimulam a produção de moléculas pró-inflamatórias, incluindo moléculas de adesão e fator de

crescimento. Com isso ocorre o acúmulo subendotelial de colesterol englobado pelos macrófagos

neste local, os quais não são capazes de degradá-lo, formando as “

foam cells

” (LUSIS, 2000).

Durante a infecção causada pelo vírus HIV, ocorre um aumento na produção de EROs.

Característica observada por SPADA et al. (2002), os quais realizaram um estudo com pacientes

HIV soropositivos onde os mesmos foram suplementados com antioxidante (α-tocoferol). Neste,

concluíram que houve uma associação positiva entre a suplementação com antioxidante e a

reconstituição imune nos pacientes suplementados com α-tocoferol.

Um dos pontos principais da “hipótese lipídica” da aterogênese é a concentração da HDL

correlacionar-se negativamente com a incidência da doença cardiovascular (JOHNSEN et al.,

2005). Este efeito protetor resulta de diversas ações da HDL, que incluem: efeito antioxidante,

antiinflamatório, antitrombótico e com papel maior no transporte reverso do colesterol (BARTER

et al., 2002). Estudos têm relatado uma ligação entre HDL e aterosclerose, evidenciando que a

oxidação da LDL é o maior fator para o desenvolvimento desta patologia e a HDL é capaz de

proteger as células endoteliais contra os efeitos citotóxicos desse processo através de enzimas

antioxidantes como a paraoxonase (NAVAB et al., 2001; KONTUSH & CHAPMAN, 2006).

Esta enzima está associada a HDL e é capaz de prevenir a oxidação da LDL e inativar os

fosfolipídios oxidados provenientes da mesma (COSTA et al., 2005). Em 2005 ESTEVE;

RICART; FERNANDEZ-REAL, relataram que durante o processo infeccioso ocorre uma

diminuição na atividade da PON 1 e em 2006 PARRA et al., demonstraram que pacientes

infectados pelo HIV apresentavam diminuição na atividade desta mesma enzima, o que vai ao

encontro dos resultados obtidos neste trabalho, como mencionado anteriormente. Com isso,

podemos observar que a propriedade antioxidante da HDL está alterada.

Alguns estudos realizados por CONSTANS et al. (1994), ZANGERLE et al. (1994),

SPOSITO et al. (1997) e DUCOBU & PAYEN (2000), demonstraram que pacientes HIV

soropositivos apresentavam diminuição dos níveis séricos de HDL. Porém, os pacientes deste

estudo não apresentaram diferença nos níveis séricos de HDL quando comparados ao grupo

controle. No entanto, em associação com alterações metabólicas as partículas de HDL perdem

suas atividades biológicas normais e adquirem novas propriedades, tornando-se partículas

disfuncionais (KONTUSH & CHAPMAN, 2006) e NAVAB et al. (2001) e GOU et al. (2005),

sugerem que mesmo em pacientes com concentrações de HDL normais, mas com alterações

metabólicas, podem ter HDL com funções anormais, sendo susceptível ao desenvolvimento de

aterosclerose e doença cardiovascular.

Como mencionado anteriormente, a HDL tem um papel maior no transporte reverso do

colesterol, evitando o acúmulo de colesterol nas células, o que poderia comprometer gravemente

a homeostase e essa função envolve trocas de lipídios entre as lipoproteínas.

O colesterol na sua forma esterificada e os triglicérides localizam-se no núcleo da

lipoproteína, enquanto que o colesterol livre se posiciona na superfície, entre moléculas de

fosfolípides que constituem a monocamada que envolve a partícula (VOET &VOET, 1995).

Diferenças de polaridade molecular, sendo a forma esterificada mais apolar do que a livre,

determinam essas localizações na partícula da lipoproteína, assim como das partículas da LDE. A

forma esterificada não tende a sair espontaneamente da lipoproteína. Proteínas especializadas,

chamadas de proteínas de transferência, promovem a movimentação de lípides como éster de

colesterol, triglicérides e fosfolípides, retirando essas moléculas de uma classe de lipoproteínas e

reposicionando-as em outra classe. Entre elas, a CETP é muito ativa no sentido de transferir tanto

éster de colesterol quanto triglicérides e a PLTP é muito ativa no sentido de transferir fosfolípides

e colesterol livre de uma partícula para outra (WANG & BRIGGS, 2004).

No presente trabalho, os pacientes HIV soropositivos apresentaram uma diminuição na

transferência de colesterol livre e de triglicérides da LDE para a HDL, no mesmo grupo, houve

um aumento da transferência de fosfolípide, monitorada pela taxa de transferência do

C-

colesterol livre,

H-triglicérides, e

C-fosfolípide. Ainda neste estudo, pôde-se observar uma

correlação positiva entre a taxa de transferência do

C-colesterol livre com os níveis séricos de

colesterol total (r = 0,4995), de HDL-colesterol (r = 0,5204), de LDL-colesterol (r = 0,3072), de

triglicerídeos (r = 0,2864), de glicose (r = 0,3470) e uma correlação negativa com a carga viral (r

= -0,2952). Houve correlação positiva entre

C-fosfolípide com os níveis séricos de triglicérides

(r = 0,3938), entre

H-colesterol éster com os níveis séricos de colesterol total (r = 0,5235), LDL-

colesterol (r = 0,4273) e triglicérides (r = 0,4816) e entre

H-triglicérides com os níveis séricos de

colesterol total (r = 0,4997), de

triglicérides (r = 0,4304) e contagem de células T CD8 (r =

0,3594).

Levando em consideração que a capacidade em receber lipídios de outras lipoproteínas seja

a característica fundamental da HDL, podemos dizer que os resultados do presente estudo

mostram que os pacientes infectados pelo HIV apresentam alterações nesta habilidade e,

conseqüentemente, uma alteração no circuito do transporte reverso do colesterol. Por se tratar de

uma lipoproteína com função anti-aterogênica, essa alteração pode ser importante na gênese da

doença cardiovascular.

A fim de esclarecer os circuitos envolvidos no transporte de lipídios, neste trabalho olhamos

para a HDL sob um aspecto qualitativo. O conjunto de alterações no metabolismo lipídico deve

contribuir para o desenvolvimento da doença cardiovascular e a contribuição destas alterações

precisa ser melhor elucidada.

A etiologia da doença cardiovascular é de caráter multifatorial e todos os esforços no

sentido de controlar os fatores envolvidos na sua formação podem contribuir para um sobrevida

maior e melhor qualidade de vida desses pacientes.

7 CONCLUSÕES

Os resultados obtidos no presente estudo permitem concluir que:

- A transferência de colesterol livre e de triglicérides da LDE para HDL foram maiores no grupo

HIV soropositivo e a transferência de fosfolípides e foi menor neste grupo, medidas pela taxa de

transferência de

C-CL, de

H-TG e de

C-PL. Com isso, pode-se sugerir que os pacientes

infectados pelo HIV apresentam alterações na habilidade da HDL em receber lipídios de outras

lipoproteínas, alterando o circuito do transporte reverso do colesterol. Essa alteração pode ser

importante na gênese de doenças cardiovasculares, por se tratar de uma lipoproteína anti-

aterogênica.

- A atividade sérica da paraoxonase 1 apresentou diminuição nos pacientes HIV soropositivos,

demonstrando possivelmente,

uma alteração funcional (antioxidante) da fração lipoprotéica HDL;

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ANEXOS

ANEXO 1. Parecer do Comitê de Ética em Pesquisa com Seres Humanos

ANEXO 2. Termo de Consentimento

TERMO DE CONSENTIMENTO

Eu, __________________________________________________________________________,

após ser esclarecido verbalmente sobre a presente pesquisa “Alterações no Metabolismo Lipídico

em Pacientes HIV soropositivos”, aceitei espontaneamente participar da mesma, concordando em

fornecer amostras de meu sangue a fim de que sejam realizados os testes laboratoriais prescritos

para avaliar o metabolismo lipídico e o sistema imune na infecção pelo HIV, os quais serão

realizados no Laboratório do Hospital Universitário, sito no Campus da Universidade Federal de

Santa Catarina, na cidade de Florianópolis e no Hospital das Clínicas – INCOR, na cidade de São

Paulo. Embora os procedimentos de coleta de sangue sejam idênticos àqueles aplicados

rotineiramente e que a medicação tenha sido prescrita pelos médicos, fui detalhadamente

esclarecido a respeito dos procedimentos laboratoriais e clínicos a serem realizados. Estou ciente

que, embora a terapia antirretroviral apresente efeitos colaterais, terei toda a atenção médica

devida, desde que manifeste minha intenção de voltar a ser atendido. Sei também, que esta

pesquisa é feita sem fins lucrativos para mim e para os pesquisadores, e que ela é confidencial,

não sendo o meu nome objeto em qualquer de suas fases. Caso seja do meu interesse, poderei

desistir de participar desta pesquisa, em qualquer etapa, precisando informar apenas aos médicos

e pesquisadores a minha intenção neste sentido. Concordo com a publicação dos resultados

obtidos na pesquisa e que, caso algum resultado seja de interesse clínico, eu tenha ao meu dispor

todo o atendimento médico para a melhoria de minha saúde.

Estou consciente da importância desta pesquisa e de que receberei os resultados com explicação

detalhada dos seus significados.

Florianópolis,............/............../...............

Telefone (s) para contato:

Endereço:

_________________________________________________________

Assinatura

ANEXO 3. Tabela com as Médias de Contagem de Linfócitos T CD4 e T CD8 e Carga Viral

dos Pacientes HIV Soropositivos

Tabela com a contagem de linfócitos T CD4, linfócitos T CD8 e Carga Viral dos pacientes

HIV soropositivos.

Grupo HIV + n Média Desvio Padrão Mínimo Mediana Máximo

CD4

48 438 243 13 399 1301

CD8

48 1005 697 256 866 4753

Carga Viral

48 18312 51303 80 470 270000

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