( PDF ) Papel da atividade simpática renal na hipertensão arterial provocada pela hiperuricemia

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PAPEL DA ATIVIDADE SIMPÁTICA RENAL NA

HIPERTENSÃO ARTERIAL PROVOCADA PELA

HIPERURICEMIA

QUÉZIA PIRES DE MOURA

DISSERTAÇÃO DE MESTRADO EM CIÊNCIAS FISIOLÓGICAS

Programa de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas

Universidade Federal do Espírito Santo

Vitória, setembro 2008

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Moura , Quézia Pires, 1981

Papel da Atividade Simpática Renal na Hipertensão Arterial

Provocada pela Hiperuricemia. [Vitória] 2008

71 p., 29,7 cm (UFES, M. Sc.; Ciências Fisiológicas, 2008)

Dissertação, Universidade Federal do Espírito Santo, PPGCF.

1. Hiperuricemia 2. Hipertensão Arterial 3. Atividade Simpática Renal 4.

Desnervação Renal 5. Ratos

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PAPEL DA ATIVIDADE SIMPÁTICA RENAL NA

HIPERTENSÃO ARTERIAL PROVOCADA PELA

HIPERURICEMIA

QUÉZIA PIRES DE MOURA

Dissertação submetida ao Programa de Pós-Graduação em Ciências

Fisiológicas da Universidade Federal do Espírito Santo como requisito parcial

para obtenção do grau de Mestre em Ciências Fisiológicas.

Aprovada em 24/09/2008 por:

______________________________________________

Prof. Dr. Antônio de Melo Cabral – Orientador, UFES

______________________________________________

Prof. Dr. Roberto de Sá Cunha – Co-Orientador; UFES

_______________________________________________

Prof. Dr. Fausto Edmundo Lima Pereira

________________________________________________

Coordenador do PPGCF: Prof. Dr. Luiz Carlos Schenberg

UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESPÍRITO SANTO

Vitória, setembro de 2008.

“Isto é o que é aprender: você repentinamente

compreende algo que soube durante toda a sua

vida, mas de um modo novo.”

(Doris Lessing )

Ao Professor Cabral, pelas lições de vida aprendidas

com ele ao longo do desenvolvimento deste

trabalho.

Agradecimentos

À Deus, meu amigo fiel, a quem devo tudo.

À minha mãe, Zilda, pelas orações constantes por mim.

A meus irmãos: Sunamita, Gilmara, Jódavi, e Junior pelo apoio.

Ao meu irmão Gamaliel pela preocupação e cuidado em todos os

momentos.

A minha irmã Débora pela paciência, contribuição nos experimentos e

por sua amizade.

Ao amor da minha vida, Pablo, pelo carinho, bom humor constante e

pela companhia no tratamento dos ratos nos fins de semana.

Ao Prof. Dr. Antônio de Melo Cabral pela paciência ao ensinar-me,

dedicação e pelas lições de solidariedade.

Ao Prof. Dr. Roberto de Sá Cunha pela idéia inicial deste projeto e

contribuição no seu desenvolvimento.

Aos professores doutores Ivanita Stefanon e Dalton Vassallo e aos

demais alunos do laboratório de Eletromecânica Cardíaca pela contribuição na

centrifugação do sangue dos ratos.

Ao Prof. Dr. José Geraldo Mill e a Enildo pela contribuição nas dosagens

de ácido úrico e creatinina plasmática.

Ao prof. Dr. Fausto pela contribuição nas análises histológicas renais.

À prof.ª Nazaré Bissoli pelos bons momentos de convívio no laboratório.

Aos professores da Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas, por todos

os conhecimentos transmitidos, que foram de particular importância para

realização deste trabalho.

A Edson Dias pela grande amizade e auxílio nos experimentos sempre

solucionando os problemas.

A Fonseca pelo auxílio na secretaria da Pós-Graduação.

A amiga e cunhada Viviane pela contribuição na produção dos gráficos e

realização das análises estatísticas.

Aos alunos Lidiane, Diego e Patrick pela contribuição no tratamento dos

ratos e dosagens de sódio.

As amigas: Luciana, Aline, Daniele, Gabriela e Cristina pelo bom

convívio no laboratório.

À Prof.ª Vera Botan pela confiança em mim depositada.

Ao corpo docente, discente, diretoria e demais funcionários da

UNILINHARES pelo crescimento profissional.

À FAPES (Fundação de Amparo a Pesquisa do Espírito Santo) pela

bolsa de Mestrado concedida durante um ano de realização deste trabalho.

SUMÁRIO

LISTA

DE ABREVIATURAS, SÍMBOLOS E UNIDADES

RESUMO

ABSTRACT

1 INTRODUÇÃO

1.1 Hiperuricemia 15

1.2 Hiperuricemia e Hipertensão Arterial 18

1.3 Hiperuricemia e Doença Renal 19

1.4 Papel dos Nervos Simpáticos Renais na Retenção de Sódio 21

2 OBJETIVOS

2.1 Objetivo Geral 24

2.2 Objetivos Específicos 24

3 MATERIAIS E MÉTODOS

3.1 Animais Experimentais 25

3.2 Grupos Experimentais 25

3.3 Procedimentos Cirúrgicos

3.3.1 Desnervação Renal

3.3.2 Implantação de Cateteres na Artéria e Veia Femorais

3.3.3 Implantação de Cateter na Bexiga

3.4 Protocolo Experimental 27

3.5 Técnicas Analíticas 29

3.6 Análise Histológica 30

4 ANÁLISE DE DADOS

5 RESULTADOS

5.1 Peso Corporal 31

5.2 Concentração Plasmática de Ácido Úrico 32

5.3 Pressão Arterial Média Basal e Freqüência Cardíaca Basal 33

5.4 Excreção Diária de Sódio 37

5.5 Respostas Cardiovasculares e Renais à Sobrecarga de Volume 38

5.6 Concentração Plasmática de Creatinina 52

5.7 Histologia Renal 54

6 DISCUSSÃO

7 CONCLUSÃO

8 REFERÊNCIAS

LISTA DE ABREVIATURAS, SÍMBOLOS E UNIDADES:

ANP Peptídeo Natriurético Atrial

ASR Atividade Simpática Renal

AU Ácido Úrico

BPM Batimentos Por Minuto

β1, α1 Subtipos de Receptores Adrenérgicos

dL Decilitro

ECA Enzima Conversora de Angiotensina

EPM Erro Padrão da Média

ExNa Excreção de Sódio

FC Freqüência Cardíaca

FPR Fluxo Plasmático Renal

FU Fluxo Urinário

g Gramas

ICC Insuficiência Cardíaca Congestiva

i.p. Via Intraperitoneal de Administração de Fármacos

mmHg Milímetros de Mercúrio

mEq Miliequivalente

mg Miligrama

mL Mililitro

min. Minutos

µEq Microequivalente

µL Microlitro

n Número de Animais

NOS Óxido Nítrico Sintase

OA Ácido Oxônico

PAM Pressão Arterial Média

SRA Sistema Renina Angiotensina

TFG Taxa de Filtração Glomerular

RESUMO

Os mecanismos fisiopatológicos que envolvem a relação entre

hiperuricemia e hipertensão arterial (HA) são ainda pouco conhecidos. Com o

intuito de contribuir para explicar o mecanismo fisiopatológico que envolve

hiperuricemia e HA é que este estudo teve como objetivo avaliar o papel da

Atividade Simpática Renal (ASR) no desenvolvimento da HA induzida por

hiperuricemia em ratos. Foram utilizados ratos Wistar (250g) divididos em

grupos controle e experimental. Cada um destes grupos foi dividido nos

seguintes subgrupos (n=6): CTRL não receberam OA 2%; CTRL DESN não

receberam OA 2% e foram submetidos à desnervação renal bilateral; AOX

receberam OA 2% e AOX DESN receberam OA 2% e foram submetidos à

desnervação renal bilateral. Os animais foram colocados em gaiolas

metabólicas por 3 e 7 semanas onde foram ou não tratados com OA 2% e

tiveram suas urinas coletadas diariamente. Os valores basais de pressão

arterial média (PAM) e freqüência cardíaca (FC) foram medidos ao final do

tratamento. A estimativa da ASR foi realizada através de manobra aguda de

expansão volumétrica que sabidamente produz retirada simpática. Para isso,

os animais foram submetidos á infusão contínua (55 µL/min) de salina por 2

horas. Após esse período de estabilização, amostras de urina foram coletadas

por um período controle (C1e C2), período de expansão, no qual a velocidade

de infusão foi aumentada ao equivalente em volume a 5% do peso corporal do

animal, (E1, E2, E3) e período de recuperação, onde houve o retorno à

velocidade de infusão inicial, (R1, R2 e R3). Terminada essa fase foi retirada

uma amostra de sangue dos animais e as concentrações plasmáticas de ácido

úrico (AU) e creatinina foram determinadas. A seguir os animais foram

sacrificados e ambos os rins removidos, pesados e fixados em formol para

posterior análise histológica. Os resultados foram apresentados como média ±

erro padrão da média (EPM) e analisados utilizando-se da análise de variância

para medidas repetidas seguida do teste de Tukey. Os resultados mostraram

que os ratos do grupo experimental apresentaram aumento na concentração

plasmática de AU (mg/dL) quando comparados com os ratos do grupo controle

(AOX 1±0,06 mg/dL; AOX DESN 1±0,1 mg/dL; CTRL 0,8±0,08; CTRL DESN

0,7±0.08; p<0.05). Os valores acumulados por 3 semanas da excreção diária

de sódio mostraram que os ratos do grupo AOX e AOX DESN excretaram

menor quantidade de sódio na urina quando comparados com os ratos do

grupo CTRL (15 ± 2,6 vs 44 ± 5,0 mEq; p<0.01 e 27±4,8 vs 44 ± 5,0 mEq;

p<0.05 ). Após 7 semanas de tratamento, foi observado que os valores basais

de PAM foram maiores nos animais do grupo AOX quando comparado ao

grupo CTRL (120 ± 3 vs 102 ± 2 mmHg; p<0.01) e grupo AOX DESN (120 ± 3

mmHg vs 101 ± 0,7; p<0.01). O grupo AOX apresentou aumento maior no

fluxo urinário (FU) e excreção de sódio (ExNa) induzidos pela sobrecarga

hidrossalina quando comparados ao grupo CTRL (141±18,3 vs 62±27,1

µL/min/g; p<0.01 e 16± 0,8 vs 10±1,8 µEq/min/g; p<0.05) e, sobretudo, quando

comparados ao grupo AOX DESN (141±18,3 vs 27±2,6 µL/min/g; p<0.01 e 14±

3,1 vs 3±0,2 µEq/min/g; p<0.01). O grupo AOX apresentou aumento na

concentração da creatinina plasmática quando comparados com o grupo CTRL

(0,82±0,05 vs 0,66±0,04 mg/dL; p<0.05). Os grupos AOX e AOX DESN

mostraram uma aparente hipertrofia das arteríolas aferentes, focos de aumento

de matriz extracelular intertubular e hipertrofia glomerular. O principal resultado

deste estudo foi o aumento da ASR em ratos com hiperuricemia e HA. Tal

aumento pôde ser observado pela retenção crônica de sódio e aumento maior

FU e ExNa após a retirada simpática produzida pela expansão volêmica. Tal

interpretação foi ainda sustentada pelo fato de que a desnervação renal

bilateral ter sido capaz de prevenir o acúmulo de sódio, a elevação na pressão

arterial e o aumento do FU e ExNa em resposta a expansão volêmica.

ABSTRACT

The pathophysiology mechanisms involving hyperuricemia and arterial

hypertension are still unknown. With the aim of contributing to the knowledge of

pathophysiology mechanism that involves the relationship between

hiperuricemia and arterial hypertension this study was carried out to observe if

renal sympathetic activity (RSA) is involved. Wistar male rats (250g) were

divided in control and experimental groups. Each one of these groups was

divided in the following subgrups (n=6): control (CTRL); treated with oxonic acid

(OA) 2% (AOX); CTRL submitted to bilateral renal denervation (CTRL DENS);

and AOX submitted to bilateral renal denervation (AOX DENS). The animals

were placed in metabolic cages by 3 and 7 weeks to collect daily urine samples

and the OA treatment was implemented. The basal values of mean arterial

pressure (MAP) and heart rate (HR) were measured at the end of the OA

treatment period. The estimate role of RSA was accessed through acute

extracellular volume expansion (5% of body weigh) that produces a sympathetic

withdraw. For that, the animals were submitted i.v. saline infusion (55 L/min) for

2 hours. After that period of stabilization, urine samples were collected over two

10 min of control (C1e C2), 3 expansion (E1, E2, E3), and 3 recovery periods.

On the recovery periods (R1, R2, R3), the i.v. saline infusio was returned to the

control rate (55 L/min). Subsequetly, samples of blood were collected to

measure the plamatic concentrations of uric acid (UA) and creatinin. Under

general anestesia, the animals were sacrificed and both kidneys removed to

normalize the urine flow and sodium excretion, and subsequent histology. The

results showed that the rats treated with OA presented increase in the plamatic

concentration of UA (mg/dL) when compared with control animals (AOX 1 ±

0.06 mg/dL; AOX DESN 1 ± 0.1 mg/dL; CTRL 0.8 ± 0.08; CTRL DENS 0.7 ±

0.08; p <0.05). The accumulated values (3 weeks) of the daily excretion of

sodium showed that the AOX and AOX DESN rats excreted smaller amount of

urinary sodium when compared with CTRL animals (15 ± 2.6 vs 44 ± 5.0 mEq;

p <0.01 and 27 ± 4.8 vs 44 ± 5.0 mEq; p <0.05). After 7 weeks of treatment, the

basal values of MAP were higher in the AOX when compared to the CTRL

group (120 ± 3 vs 102 ± 2 mmHg; p <0.01). The renal denervation prevented

this elevation in MAP (AOX DESN: 101 ± 0.7; p <0.01). Compared to the CTRL

(141 ± 18.3 µL/min/g of kidney), the AOX group presented increase (27 ± 2.6

µL/min/g; p <0.01) in the urinary flow rate and in sodium excretion (NaEx) (16±

0,8 vs 10±1,8 µEq/min/g; p<0.05), and especially if compared to the AOX DESN

group (141±18,3 vs 27±2,6 µL/min/g; p<0.01 e 14± 3,1 vs 3±0,2 µEq/min/g;

p<0.01). When compared with the CTRL, the AOX group presented increase in

the plasma concentration of creatinin (0.82 ± 0.05 vs 0.66 ± 0.04 mg/dL; p

<0.05). The AOX and AOX DESN showed an apparent hypertrophy of the

afferent artery, increase of intertubullar extracelullar matrix and glomerullar

hypertrophy. The principal result of this study was the increase of SRA in rats

that deveped arterial hypertension due to hyperuricemia. The SRA and sodium

retention could be a major responsible for the hypertension once the bilateral

renal denervation prevented the sodium retension and the augment of arterial

hypertension.

1 INTRODUÇÃO:

1.1 Hiperuricemia

O ácido úrico é produto do metabolismo das purinas (adenosina 5’-

monofosfato→ AMP e guanosina 5’-monofosfato→ GMP). Os grupos fosfatos

destes nucleotídeos são perdidos pela ação da nucleotidase. O adenilato libera

a adenosina, que é então desaminada para inosina. A inosina é hidrolisada

para liberar a hipoxantina que é oxidada sucessivamente para xantina e para

ácido úrico pela xantina oxidase. O guanilato é primeiro hidrolisado para liberar

a guanosina, a qual é clivada para liberar guanina. A guanina sofre remoção

hidrolítica do seu grupo amino para liberar xantina, que é convertida em ácido

úrico pela xantina oxidase. Na maioria dos mamíferos esta degradação

continua e sob ação da uricase o ácido úrico é convertido em alantoína

(Alderman e Aiyer, 2004).

Em alguns primatas e em humanos uma mutação não-funcional ocorrida no

período miocênico (8 a 20 milhões de anos) inativou a uricase, tornando os

níveis séricos de ácido úrico cerca de três a quatro vezes superiores no

homem, quando comparados com aves, por exemplo. Tal mutação sofreu uma

pressão seletiva positiva considerável, sendo postulado que em algum

momento de privação hidrossalina severa esse genótipo foi perpetuado. Assim,

esses indivíduos convivem com níveis séricos de ácido úrico elevado em razão

da ausência da enzima hepática uricase (watanabe e cols., 2002). Além disso,

outros fatores podem interferir no aumento da concentração plasmática de

ácido úrico, como por exemplo, produção excessiva e/ou deficiência na

eliminação do ácido úrico pelo rim, e provocar hiperuricemia média. A

hiperuricemia média usualmente é definida como nível de ácido úrico maior do

que 6 ou 6,5 mg/dL em mulheres e maior do que 6,5 ou 7 mg/dL em homens

sem a presença de gota ou nefrolitíase. Ela está presente em 5% dos

indivíduos normais, em 25% dos hipertensos não-tratados, em 40% a 50%

daqueles tratados com diuréticos e ao redor de 75% naqueles com hipertensão

arterial maligna ou disfunção renal (Baker e cols., 2005).

Sabe-se que mesmo podendo ser causado por dieta e possíveis defeitos

metabólicos, aumentos nos níveis séricos de ácido úrico são, comumente,

causados por defeitos na excreção renal de ácido úrico (Johnson e cols.,

2003), isso porque os níveis séricos de ácido úrico são fortemente

influenciados pela secreção e reabsorção renal de urato. A excreção fracional

de urato (porcentagem de urato filtrado em glomérulos que é excretada em

urina - %E/F urato) é normalmente menor que 10% (MaesaKa e Fishbane,

1998) e desse modo, 90% do urato filtrado é reabsorvido. O urato é livremente

filtrado no glomérulo, sofre reabsorção no túbulo proximal através de um

sistema de troca aniônica, e ainda secreção e reabsorção pós-secretória no

túbulo distal (Gutman e Yu, 1961; Diamond e Paolino, 1973). Dessa forma,

podem-se citar as diminuições da função renal e do estrogênio (agente

uricosúrico) com a idade como fatores que podem aumentar a concentração

plasmática de ácido úrico em homens e mulheres na meia-idade e a redução

do volume circulante produzido por diuréticos que provocam intensa

reabsorção de urato pelo rim (Zhou e cols., 2006).

O papel do ácido úrico como marcador ou causador de doença

cardiovascular tem sido discutido desde o início da história da hipertensão

arterial. Em 1879 Frederick Akbar Mahomed observou que muitos indivíduos

hipertensos pertenciam a famílias de gotosos, levando ele a sugerir o ácido

úrico como um fator causal na resposta da pressão sangüínea. Dez anos mais

tarde, Haig propôs dietas pobres em purinas como um meio de prevenir

hipertensão arterial e doença cardiovascular. Em alguns outros estudos,

inclusive nos recentes estudos de “Framingham”, o ácido úrico é considerado

simplesmente um marcador que se relaciona ao risco cardiovascular e renal.

Nessa análise, os níveis séricos de ácido úrico foram significantemente

correlacionados com o risco de doença cardiovascular em mulheres, mas a

significância deste dado não permaneceu após correção por 11 variáveis,

incluindo hipertensão arterial, índice de massa corpórea e uso de diuréticos.

Somente quando as investigações de “Framingham” avaliaram o risco de

doenças cardiovasculares em pacientes que sofriam de gota, os níveis de

ácido úrico passaram a ser um fator de risco significante e independente de

doenças cardiovasculares (Culleton e cols., 1999). Muitas pesquisas,

atualmente, de forma diferente, têm encontrado que o nível elevado de ácido

úrico é um fator de risco independente para doenças cardiovasculares, e

evidenciado o papel etiológico da hiperuricemia no aumento da pressão arterial

(Feig e cols., 2006, Mazzali e cols., 2001, Jossa e cols., 1994, Verdecchia e

cols., 2000).

Dessa forma, pode se dizer que o papel do ácido úrico como preditor de

eventos cardiovasculares na população tem sido objeto de grandes debates.

Muitos autores têm descrito a relação da hiperuricemia com diversas doenças e

condições incluindo hipertensão arterial, gota, doença cardiovascular, infarto do

miocárdio e doença renal (Jossa e cols., 1994; Freedman e cols., 1995; Kang e

cols.,2002; Choi e cols.,2005). No entanto, existem dificuldades ao se associar

doença cardiovascular e hipertensão arterial a uma variável que é influenciada

por idade, raça, sexo, consumo de álcool, obesidade, sedentarismo, padrões

específicos de dieta, função renal e uso de diuréticos (Cunha e Magalhães,

2006). Ainda parece incerto se o aumento no nível de ácido úrico é causa ou

conseqüência de algumas destas condições, tornando-se um desafio científico

elucidar um possível papel do ácido úrico como agente etiológico de doenças

cardiovasculares e hipertensão arterial (Kutzing e Firestein, 2008). Entretanto,

mesmo diante da dificuldade de compreensão da relação entre doença

cardiovascular e ácido úrico, surgiram nos últimos anos tentativas terapêuticas

de interferir nos fenômenos ligados a hiperuricemia. O uso do Alopurinol

(inibidor da xantina oxidase) em cirurgia cardíaca tem mostrado bons

resultados por reduzir o estresse oxidativo (Tabayashi e cols., 1991). Também

tem sido descrito que o Losartan é capaz de reduzir em 20 a 25% os níveis

séricos de ácido úrico por provocar redução na reabsorção de ácido úrico no

túbulo proximal renal. Parece que o Losartan inibe o canal lactato/urato e

cloreto/urato no túbulo contorcido proximal (Sica e cols., 2002). A estimativa no

“LIFE Study” é que 29% da redução do risco nas doenças cardiovasculares,

obtida pelo Losartam foi atribuída à redução dos níveis séricos de ácido úrico

(Alderman e Aiyer, 2004).

1.2 Hiperuricemia e Hipertensão Arterial

Ácido úrico comumente está associado com a hipertensão arterial como

marcador que se relaciona ao risco cardiovascular e renal ou marcador

independente que exerce um efeito causal na elevação da pressão arterial

(Johnson e cols., 2003).

O aumento na prevalência da hiperuricemia em hipertensos pode ser

relacionado, por alguns pesquisadores, a um distúrbio circulatório sistêmico em

que defeitos renais inerentes à hipertensão arterial explicam a maior retenção

de urato (Messerli e cols, 1980) ou, ainda, pelo surgimento de uma doença

microvascular que leva a isquemia tecidual (Puig e Ruilope, 1999). Sabe-se

que a isquemia tecidual provoca aumento na produção de lactato, o qual

bloqueia a secreção de urato no túbulo proximal, e também aumento na síntese

de ácido úrico. Na isquemia há degradação de ATP em adenina e xantina e

ativação da xantina oxidase. O aumento do substrato (xantina) e da enzima

(xantina oxidase) resulta em aumento da produção de ácido úrico bem como de

radicais superóxido (O2

) (Friedl e cols., 1991).

Há, porém, evidências de um papel etiológico da hiperuricemia no aumento

da pressão arterial em vários outros estudos. Um desses estudos, realizados

com a colaboração de Johnson (Mazzali e cols., 2001), demonstrou esse papel

etiológico direto do ácido úrico na hipertensão arterial. A inibição da uricase,

em ratos, com uso de ácido oxônico (2%), foi capaz de produzir uma forma de

hipertensão arterial experimental sem a deposição de cristais de urato nos rins

no decorrer de 7 semanas de hiperuricemia. Nestes mesmos estudos foi

sugerido que o mecanismo da hipertensão, neste modelo, envolveria o

aumento de renina e redução na expressão óxido nítrico sintase (NOS1) no

sitema justaglomerular. A hipertensão arterial foi prevenida pela administração

de inibidores da enzima conversora de angiotensina (ECA) e em menor

extensão pela L-arginina (substrato para óxido nítrico sintase), confirmando o

papel chave do sistema renina-angiotensina e óxido nítrico sintase na elevação

da pressão arterial. A hipertensão arterial e alterações na renina e óxido nítrico

sintase também foram prevenidas por manutenção do ácido úrico em níveis

normais com o uso de alopurinol (inibidor da xantina oxidase) e benziodarona

(agente uricosúrico).

1.3 Hiperuricemia e Doença Renal

Resultados adicionais, deste mesmo estudo de Mazzali (2001), sugeriram

que o ácido úrico também está associado com o desenvolvimento de lesão

tubulointersticial, mesmo na ausência da deposição de cristais de urato nos

rins. Técnicas imuno-histoquímicas revelaram que há aumento na deposição

de colágeno intersticial e infiltração de macrófagos nos rins de ratos com

hiperuricemia. Sugeriu-se, então, que a angiotensina II e o óxido nítrico estão

envolvidos na patogênese da lesão renal, pois o bloqueio da formação de

angiotensina II com enalapril e o estímulo da síntese de óxido nítrico com L-

arginina foram capazes de prevenir a progressão da fibrose intersticial.

Um ano depois Mazzali demonstrou que a hiperuricemia também está

relacionada à arteriopatia da arteríola aferente de ratos, observado pelo

espessamento da camada média, sugerindo, dessa forma, que há um

remodelamento vascular hipertrófico causado pelo ácido úrico. Aponta-se para

a possibilidade de que o ácido úrico possa induzir nefropatia por ativar o

sistema renina-angiotensina independente do aumento da pressão arterial e

sugere-se que a classe de drogas inibidoras desse sistema diminui a

proliferação do músculo liso e síntese de colágeno. O mecanismo pelo qual

isso acontece foi demonstrado pelo tratamento de ratos com hiperuricemia com

inibidor da enzima conversora de angiotensina (ECA), o enalapril, e

comparação destes com outros tratados com o diurético hidroclorotiazida.

Desta forma, se observou que mesmo que ambos sejam capazes de diminuir a

pressão arterial somente o enalapril provocou redução significativa na

arteriopatia. Como conseqüência desse espessamento da parede da arteríola

aferente tem se alterações na hemodinâmica glomerular de ratos que

promovem hipertensão glomerular. Ocorre limitação do mecanismo auto-

regulatório de contração arteriolar aferente que visa aumentar a resistência

aferente, quando há um aumento na pressão arterial, e prevenir esse aumento

de pressão arterial para a circulação glomerular (Sanchez-Lozada e cols.,

2002).

Nesse mesmo sentido, estudos posteriores mostraram que a hiperuricemia

em ratos resulta em hipertrofia glomerular, evidenciado através da analise de

imagens da área glomerular. Foi suscitado que a hipertrofia glomerular não é

devida à hipertensão arterial, pois o tratamento dos ratos com hiperuricemia

com a hidroclorotiazida preveniu o aumento na pressão arterial, mas não foi

capaz de prevenir a hipertrofia glomerular. Em contrapartida, a inibição da

enzima conversora de angiotensina além de diminuir os níveis da pressão

arterial também preveniu parcialmente a hipertrofia glomerular, sugerindo que a

hipertrofia glomerular acontece por um mecanismo que é parcialmente

mediado pelo sistema renina angiotensina. Apesar da hipertrofia glomerular ser

comumente associada com o desenvolvimento de glomeruloesclerose, ela não

foi observada no glomérulo de ratos com 7 semanas de hiperuricemia.

Entretanto, na avaliação da hiperuricemia por 6 meses em ratos houve o

desenvolvimento de albuminuria e glomeruloesclerose (Nakagawa e

cols.,2003).

Ratos com hiperuricemia mostraram ter sensibilidade ao sal, isto é grande

aumento na pressão sanguínea para mesma carga de sódio de ratos normais.

Uma explicação para esse mecanismo é que a sensibilidade ao sal pode

resultar de doença vascular pré-glomerular, a qual está associada à isquemia

renal, infiltração de leucócitos com produção de agentes oxidantes locais,

alteração no balanço local vasorregulatório que favorecem a vasoconstrição

renal e como resultado a diminuição na excreção de sódio que, por sua vez,

eleva a pressão arterial (Watanabe e cols., 2002).

1.4 Papel dos Nervos Simpáticos Renais na Retenção de Sódio

Os estudos anatômicos de Mitchell (1950) revelaram que os nervos

renais têm origem difusa, estendendo-se do nervo esplânico torácico superior

passando pelo simpático lombar ao plexo hipogástrico que envolve a

bifurcação aórtica na região pré-sacral. Os nervos renais são nervos mistos

que contêm fibras aferentes e eferentes. São descritas duas classes de

aferentes renais: os mecanorreceptores que monitorizam as mudanças de

pressão hidrostática no rim e os quimiorreceptores que são afetados por

isquemia (Recordati e cols., 1980). A inervação eferente renal é composta por

fibras simpáticas pós-ganglionares que tipicamente exercem seus efeitos

através da liberação de noradrenalina em receptores adrenérgicos nas

membranas celulares pós-sinápticas. A inervação simpática é dirigida para as

ateríolas glomerulares aferentes e eferentes, para os túbulos renais (proximal e

distal), para o ramo ascendente da alça de Henle e para o sistema

justaglomerular (DiBona, 1989). Alterações na atividade do nervo simpático

renal eferente produzem mudanças significativas no fluxo sangüíneo renal, na

taxa de filtração glomerular, na liberação de renina e na reabsorção de sódio e

água. Estudos experimentais mostraram que as alterações em tais parâmetros

são proporcionais à freqüência de estimulação do nervo simpático renal,

observando-se que, dependendo da magnitude do estímulo, pode ocorrer

aumento da reabsorção de sódio e água ao longo do néfron sem alteração da

hemodinâmica renal (DiBona e Sawin, 1983; DiBona, 1985; DiBona, 1986).

Estímulos com freqüências mais altas (maiores que 2,0 Hz) mostraram causar

aumento na resistência renal e redução no fluxo sanguíneo renal, efeito esse

mediado predominantemente por receptores adrenérgicos α-1 (DiBona, 1985).

A participação dos nervos simpáticos renais na regulação do balanço de

sódio foi evidenciada por alguns autores em animais acordados durante

alterações agudas e crônicas no sódio corporal total (Rogenes e cols., 1982;

Szalay e cols., 1986). Estudos experimentais de DiBona e Sawin (1983)

demonstraram o quão importante é o papel da inervação simpática renal em

situações de baixa ingestão de sódio, nas quais faz-se necessária a ativação

de diversos mecanismos para manter a homeostase do sódio. Outros estudos

também experimentais mostraram que a redução na atividade simpática renal

eferente, mediada pela expansão de volume, é fundamental na resposta

excretora renal à sobrecarga de volume e que a desnervação renal prévia

atenua tais respostas, diurética e natriurética (DiBona e Sawin, 1985; Morita e

Vatner, 1985; Peterson e cols., 1988).

Quando a atividade do sistema nervoso simpático é agudamente

aumentada, algumas estruturas recebem suprimento simpático maior do que

outras. Isso tem sido observado em várias situações experimentais nas quais

aumentos súbitos da atividade simpática produzem vasoconstrição

desproporcionalmente maior no leito vascular renal do que em outros leitos

vasculares (Vatner e cols., 1971; Katholi e cols., 1979). Esses dados favorecem

a possibilidade de que nos estados em que a atividade simpática é

cronicamente aumentada também haveria um tono simpático

desproporcionalmente maior para os rins do que para outros órgãos facilitando

a retenção de sódio devido à vasoconstrição renal, o aumento na liberação de

renina pelas células justaglomerulares, com aumento na formação de

angiotensina II, e aumento do efeito direto dos nervos simpáticos nos túbulos

renais (DiBona, 1989). Esse é um importante mecanismo pelo qual o sistema

nervoso simpático pode iniciar a hipertensão arterial ou permitir que ela seja

sustentada ao prevenir à ocorrência do mecanismo de natriurese por pressão.

Fortes evidências da participação dos nervos renais na hipertensão

arterial derivam de estudos de desnervação renal. Winternitz e colaboradores

(1982) demonstraram que a desnervação renal retarda o desenvolvimento da

hipertensão arterial em ratos espontaneamente hipertensos por haver um

aumento na excreção urinária do sódio ingerido (natriurese por desnervação).

Além disso, observaram que o subseqüente desenvolvimento da hipertensão

arterial coincidiu com o retorno do conteúdo renal de noradrenalina ao valor

normal e com a diminuição da fração de excreção do sódio ingerido,

evidenciando reinervação renal. Sabe-se que ocorre reinervação funcional nos

rins, provavelmente secundária à regeneração de novas fibras e do aumento

da sensibilidade à noradrenalina que se torna completa em cerca de oito

semanas (Kline e Mercer, 1983).

Sendo assim, pode-se dizer que apesar de já estarem bem

estabelecidas as evidências de que os nervos renais contribuem para o

controle da função renal e da homeostasia em condições normais e

patológicas, as pesquisas que relacionam a atividade simpática renal e a

hipertensão arterial provocada pela hiperuricemia são ainda insuficientes. E

finalmente, buscando de alguma forma contribuir para responder a significante

questão é que nos propomos a realizar a pesquisa em questão.

2 OBJETIVOS:

2.1 Objetivo Geral:

Avaliar o papel dos mecanismos simpáticos renais no desenvolvimento

da hipertensão arterial induzida por hiperuricemia em ratos.

2.2 Objetivos Específicos:

Avaliar nos animais com hiperuricemia a participação dos nervos renais:

 no desenvolvimento da hipertensão arterial;

 na retenção hidrossalina;

 e na diurese e natriurese induzida pela sobrecarga de volume.

3 MATERIAIS E MÉTODOS:

3.1 Animais Experimentais

Os experimentos foram realizados em ratos Wistar (Rattus novergicus

albinus) machos com cerca de 250g fornecidos pelo biotério do Programa de

Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas da Universidade Federal do Espírito

Santo. Os ratos foram mantidos em ambiente com luz, temperatura e umidade

controladas.

3.2 Grupos Experimentais

Os animais foram divididos em grupo controle (CON), cujos animais

receberam ração sem o ácido oxônico e o grupo experimental (AOX), em que

os animais receberam o ácido oxônico (OA) (Sigma) a 2% adicionado à ração

em pó. Cada um destes grupos foi dividido em subgrupos (n=6), conforme o

tratamento recebido por cada animal, e como abaixo esquematizado:

1. Animais Controle (CTRL)

(a) não receberam OA 2%, denominado CTRL.

(b) não receberam OA 2% e submetidos à desnervação dos nervos

simpáticos renais, denominado CTRL DESN.

2. Animais Experimentais (AOX):

(a) receberam OA 2%, denominados AOX.

(b) receberam OA 2% e submetidos à desnervação dos nervos

simpáticos renais, denominados AOX DESN.

3.3 Procedimentos Cirúrgicos

3.3.1 Desnervação Renal

Com a finalidade de remover a influência dos nervos simpáticos renais

sobre a função excretora, os ratos foram submetidos à desnervação renal 3

dias antes de serem colocados em gaiolas metabólicas. Sob anestesia pelo

hidrato de cloral (40mg/100g, i.p.) realizou-se incisão bilateral nos flancos e,

com auxílio de uma lupa (World Precision Instruments 13301, FI, USA),

procedeu-se a separação das fibras nervosas dos vasos renais. Os nervos e

seus ramos foram cortados e as artéria e veia renais foram banhadas com

solução de fenol a 10% em álcool absoluto a fim de se destruir qualquer fibra

nervosa remanescente, como descrito anteriormente por Dibona e Sawin

(1983). A desnervação renal previne a resposta vasoconstritora renal, previne a

antinatriurese induzida, por exemplo, pelo estresse ambiental e reduz as

catecolaminas renais a valores não detectáveis na análise por

histofluorescência (Dibona e Sawin 1983). Depois de completada a

desnervação renal, a incisão no flanco foi fechada através de suturas nas

camadas musculares e na pele e terminado o ato cirúrgico, os animais

receberam injeção intramuscular de penicilina G benzatina (30.000 UI).

3.3.2 Implantação de Cateteres na Artéria e Veia Femorais

Os registros de pressão arterial média (PAM) e freqüência cardíaca (FC)

foram obtidos por meio de cateter implantado na aorta abdominal via artéria

femoral esquerda. A veia femoral esquerda também foi cateterizada para que

fosse possível a infusão de solução isotônica de salina. Os cateteres foram

confeccionados utilizando-se um tubo de polietileno PE-50 (Clay Aams,

parsippany, EUA) de 15 cm de comprimento, unidos a um PE-10 de 5cm de

comprimento por meio de aquecimento sob mandril. Sob influência anestésica

do hidrato de cloral os cateteres foram implantados através de manobras

cirúrgicas que consistiam de uma incisão na região inguinal em direção ao feixe

vásculo-nervoso. Após o isolamento da artéria, foi introduzida a extremidade do

PE-10, previamente heparinizado (40UI/ml). A outra extremidade do cateter foi

dirigida, por meio de um trocáter, sob a pele do dorso do animal até a região

mediocervical posterior e fixado à pele por um fio de sutura, sendo o mesmo

procedimento adotado para a cateterização venosa.

3.3.3 Implantação de Cateter na Bexiga

A seguir (após cerca de 24 horas), sob efeito anestésico do hidrato de

cloral, os animais tiveram a bexiga cateterizada, segundo a técnica modificada

por Gellai e Valtin (1979), que consiste de uma pequena incisão longitudinal

supra-púbica de 1 cm para exposição da bexiga e implantação do cateter (PE-

240, 4 cm de comprimento) o qual foi posteriormente fixado às camadas

musculares e apele do animal. A observação da passagem livre de urina

através do cateter foi o método utilizado para verificar se o cateter estava

corretamente posicionado.

3.4 Protocolo Experimental

Para realização do protocolo experimental, todos os ratos foram

colocados em gaiolas metabólicas onde receberam água, ração em pó, com ou

sem OA 2%, e tiveram suas urinas coletadas diariamente. O tratamento

aconteceu durante dois períodos, 3 ou 7 semanas.

Ao final do tratamento, os animais foram retirados das gaiolas

metabólicas, anestesiados e cateteres foram implantados na aorta abdominal

via artéria femoral esquerda e na veia femoral. Os registros basais de pressão

arterial média (PAM) e freqüência cardíaca (FC) foram obtidos no dia seguinte

por meio do cateter arterial conectado a um transdutor de pressão (Spctramed-

statham, P23XL, USA) acoplado a um sistema de aquisição de dados

biológicos (Biopac system, MP100, Santa Bárbara, CA, EUA). Após essa

etapa, sob influencia anestésica do hidrato de cloral, os animais tiveram suas

bexigas cateterizadas e foram, a seguir, colocados em gaiolas de contenção

que limitavam seus movimentos e permitiam registros hemodinâmicos e coleta

de urina.

Para avaliar o papel dos nervos simpáticos renais na diurese e

natriurese induzida por um estímulo fisiológico, como a sobrecarga de volume,

os animais foram submetidos á infusão contínua de solução isotônica por meio

de uma bomba de infusão Havard modelo 795 ao fluxo de 55 µL/min, por um

período de estabilização de 2 horas. Seguindo-se às duas horas do período de

estabilização, iniciou-se a coleta de amostras de urina para determinação do

volume e concentração de sódio urinário por um período controle de 20

minutos. Esta fase controle teve suas respectivas amostras denominadas de

Controle 1 (C1) e Controle 2 (C2), coletadas pelo tempo de 10 minutos cada. A

seguir a velocidade de infusão da bomba foi aumentada ao equivalente em

volume a 5% do peso corporal do animal, por um período de 30 minutos e

novas amostras de urina também com tempo de 10 minutos cada, foram

colhidas. Tal fase foi denominada de expansão e suas respectivas amostras de

Expansão 1 (E1), Expansão 2 (E2) e Expansão 3 (E3). Na próxima fase,

retornou-se à velocidade de infusão inicial de salina isotônica (55 µL/min),

procedendo-se à coleta de mais três amostras de urina também com intervalo

de 10 minutos cada. Tal fase foi denominada de Recuperação e suas

respectivas amostras de Recuperação 1 (R1), Recuperação 2 (R2) e

Recuperação 3 (R3). Registros contínuos de pressão arterial média (PAM) e

freqüência cardíaca (FC) foram realizados durante todo o período experimental,

armazenados em disco rígido do computador e analisados posteriormente.

Terminada essa fase do protocolo experimental, sob influência

anestésica do éter foi retirado uma amostra de cerca de 2 mL de sangue direto

do coração dos animais. O sangue foi centrifugado (Centrifuge 5804 R) por 10

minutos, a uma temperatura de 20º C e com uma velocidade de 3500 rpm. O

soro obtido foi armazenado congelado para posterior determinação da

concentração plasmática de ácido úrico e creatinina. A seguir os animais foram

sacrificados e ambos os rins removidos, pesados, para normalização do

volume urinário e excreção de sódio em relação à massa renal, seccionados

transversalmente em fragmentos com espessura de 2 a 3 mm e fixados em

formol a 4% para posterior análise histológica.

3.5 Técnicas Analíticas

Fluxo Urinário (FU). As amostras de urina foram coletadas a cada 10 minutos

em tubos plásticos previamente pesados e o volume urinário foi determinado

gravimetricamente. Os valores foram normalizados pelo peso renal (grama de

peso renal). O volume urinário (µL/min/g) = (volume urinário) / (tempo de coleta

[10min] / (g).

Excreção Urinária de Sódio (ExUNa). A concentração de sódio das amostras

de urina foram medidas utilizando-se de um fotômetro de chama (Micronal,

modelo B 262, São Paulo, Brasil) e a excreção urinária de sódio calculada. A

excreção de sódio (µEq/min/g) = (volume urinário) x (concentração urinária de

sódio).

Concentração Plasmática de Ácido Úrico. A concentração plasmática de

ácido úrico (AU) (mg/dL) foi obtida pelo método Enzimático Colorimétrico

(UOD-PAP). A concentração plasmática foi determinada através da leitura da

absorbância das amostras (espectrofotômetro Bioespectro SP220).

Concentração Plasmática de Creatinina. A concentração plasmática de

creatinina (mg/dL) foi obtida pelo método modificado de Jaffé. A concentração

plasmática foi determinada através da leitura da absorbância das amostras

(espectrofotômetro Bioespectro SP220).

3.6 Análise Histológica

Um dos fragmentos medianos que estava fixado em formol a 4% foi

incluído em parafina, com utilização de aparelho automático de inclusão.

Cortes de 6 micrômetros de espessura foram corados pela Hematoxilina e

Eosina e pelo Tricrômioco de Mallory. O tamanho dos glomérulos foi avaliado

pela medida dos maiores e menores diâmetros de cada glomérulo, as quais

foram feitas sobre fotomicrografias tomadas em microscópio Zeiss, utilizando

objetiva de 20X.

4. ANÁLISE DE DADOS

Os resultados são apresentados como média ± erro padrão da média

(EPM). Os dados foram analisados utilizando-se da análise de variância para

medidas repetidas seguida do teste de Tukey para comparação entre médias.

Os valores de p<0,01 e p<0,05 foram considerados como significativos. Para

análise dos dados foi utilizado o programa estatístico GB-STAT (Dynamic

Microsystem Inc., Silver Spring, MD, USA) 6.5 for Windows e para a plotagem

dos gráficos foi utilizado o GraphPad Prism 2.0 (San Diego, CA, USA)

5. RESULTADOS

5.1 Peso Corporal

Ao final do tratamento de 3 e 7 semanas os animais apresentaram

visivelmente bom estado clínico sem variação significativa de peso corporal

entre os grupos.

Tabela 1. Valores de peso corporal (g) após tratamento por 3 e 7 semanas.

Os valores representam as médias ± EPM em ratos dos grupos CTRL,

CTRL DESN, AOX e AOX DESN.

3 semanas 7 semanas

CTRL 280 ± 19,7 350±11,6

CTRL DESN 288 ± 19,9 345±9,5

AOX 282 ± 8.8 336±8,6

AOX DESN 285 ± 10.5 341±7,7

5.2 Concentração Plasmática de Ácido Úrico

Os valores da concentração plasmática de ácido úrico após 3 semanas de

tratamento com OA 2% são mostrados na figura 1. Os dados mostram que os

ratos tratados com OA 2% (AOX) e desnervados (AOX DESN) apresentam

aumento (p<0.05) na concentração plasmática de ácido úrico (mg/dL) quando

comparados com os ratos controle (AOX 1±0,06 mg/dL; AOX DESN 1±0,1

mg/dL; CTRL 0,8±0,08; CTRL DESN 0,7±0.08; p<0.05).

Figura 1. Concentração plasmática de AU após inibição da uricase com OA 2%

por 3 semanas. Os valores representam as médias ± EPM dos grupos controle

(CTRL) e desnervados (CTRL DESN) e dos grupos tratados com OA 2% (AOX)

e desnervados (AOX DESN). * p<0.05 vs ratos controle.

CTRL CTRL DESN AOX AOX DESN

0.0

0.5

1.0

1.5

Conc. Plasm. AU (mg/dL)

5.3 Pressão Arterial Média Basal e Freqüência Cardíaca Basal

Os valores basais de pressão arterial média (PAM) e freqüência

cardíaca (FC) obtidos após 3 semanas de tratamento são mostrados na

figura 2 e os obtidos após 7 semanas de tratamento são mostrados na

figura 3. Em relação aos valores basais de PAM, nos grupos estudados

após 3 semanas de tratamento, o grupo que recebeu OA 2% e foi

desnervado (AOX DESN) mostrou menores valores basais de PAM quando

comparado aos grupos controle (CTRL) e desnervado (CTRL DESN) e ao

grupo tratado com OA 2% (AOX) (AOX DESN 80 ± 4 CTRL 102± 2 mmHg

CTRL DESN 103± 3 mmHg AOX 100 ± 2 mmHg; p<0.01). As diferenças

nos valores basais de FC basal não foram significativas nos grupos

estudados. Para 7 semanas de tratamento com OA 2%, foi observado que

os valores basais de PAM são maiores nos animais que receberam OA 2%

(AOX) quando comparado ao grupo controle que não recebeu OA 2%

(CTRL) (120 ± 3 vs 102 ± 2 mmHg; p<0.01). Esses valores basais de PAM

diminuem quando os animais que receberam OA 2% são desnervados

(AOX DESN), ou seja, os valores basais de PAM são menores no grupo

AOX DESN quando comparados ao grupo AOX (101 ± 0,7 vs 120 ± 3

mmHg; p<0.01). Diferenças nos valores de FC, assim como o tratamento

de 3 semanas, também não foram significativas.

Tabela 2. Valores basais de PAM (mmHg) e FC (bpm) após tratamento por

3 e 7 semanas. Os valores representam as médias ± EPM em ratos dos

grupos CTRL, CTRL DESN, AOX e AOX DESN. ** p< 0.01 vs ratos do

grupo CTRL e

# #

p<0.01 vs ratos do grupo AOX.

3 semanas 7 semanas

PAM e FC PAM e FC

CTRL 102± 2 102 ± 2

357±14 363±8

CTRLDESN 103±3 111±3

376±17 392±9

AOX 100 ± 2 120 ± 3

∗∗

379±15 347±14

AOX DESN 80 ± 4

∗∗ # #

101 ± 0,7

# #

327±13 356±6

Figura 2. Valores basais de PAM e FC após 3 semanas de tratamento com OA

2%. Os valores representam as médias ± EPM dos grupos controle (CTRL) e

desnervados (CTRL DESN), e dos grupos tratados com OA 2% (AOX) e

desnervados (AOX DESN). ** p< 0.01 vs ratos do grupo CTRL

# #

p<0.01 vs

ratos do grupo AOX.

100

125

PAM (mmHg)

# #

CTRL CTRL DESN AOX AOX DESN

150

300

450

FC (bpm)

Figura 3. Valores basais de PAM e FC após 7 semanas de tratamento com OA

2%. Os valores representam as médias ± EPM dos grupos controle (CTRL) e

desnervados (CTRL DESN), e dos grupos tratados com OA 2% (AOX) e

desnervados (AOX DESN). ** p< 0.01 vs ratos do grupo CTRL,

# #

p<0.01 vs

ratos do grupo AOX.

100

125

PAM (mmHg)

# #

CTRL CTRL DESN AOX AOX DESN

150

300

450

FC (bpm)

5.4 Excreção Diária de Sódio

Os valores acumulados por 3 semanas da concentração de sódio na urina

excretado diariamente são mostrados na figura 4. Os dados mostram que os

ratos do grupo tratado com OA 2% (AOX) e desnervados (AOX DESN)

excretam menor quantidade de sódio na urina quando comparados com os

ratos do grupo controle que não receberam OA 2% (CTRL) (CTRL 44 ± 5,0

mEq; AOX 15 ± 2,6 mEq; AOX DESN 27±4,8 mEq p<0.01 e p<0.05). Além

disso, observa-se que os animais do grupo AOX DESN mantêm valores de

excreção de sódio semelhantes ao grupo que não recebeu OA 2% e foram

desnervados (CTRL DESN) (CTRL DESN 31±3,8 mEq; AOX DESN 27±4,8

mEq ) .

Figura 4. Valores acumulados da concentração de sódio coletado

diariamente na urina por 3 semanas. Os valores representam as médias ±

EPM dos grupos controle (CTRL) e desnervados (CTRL DESN), e dos grupos

tratados com OA 2% (AOX) e desnervados (AOX DESN). ** p<0.01 e *

p<0.05 vs ratos do grupo CTRL.

CTRL CTRL DES AOX AOX DESN

Excreção Na acumul. (mEq)

5.5 Respostas Cardiovasculares e Renais à Sobrecarga de Volume

A Figura 5 ilustra as respostas diurética e natriurética à infusão de

solução salina isotônica em ratos do grupo controle que não recebeu OA

2% (CTRL) e em ratos do grupo que recebeu OA 2% na ração (AOX)

durante 3 semanas e a Figura 6 também mostra os mesmos parâmetros, só

que estudados nos grupos tratados com OA 2% durante 7 semanas. Em

relação aos resultados observados nos grupos estudados após 3 semanas

de tratamento, os valores de fluxo urinário (FU) e excreção de sódio (ExNa)

na fase controle (C1, C2) são similares nos dois grupos (Tabela 3). A

expansão hidrossalina (E1, E2, E3) promoveu aumento progressivo

(p<0.01) de tais parâmetros em ambos os grupos, entretanto não houve

diferenças significativas para esses parâmetros entre os grupos (Tabela 3).

Durante a fase de recuperação (R1, R2, R3) também não houve diferença

significativa na diurese e natriurese entre os grupos, havendo redução

progressiva (p<0.01) das mesmas, com tendência para retorno aos valores

basais (Tabela 3). Nos grupos tratados com OA 2% durante 7 semanas os

valores de fluxo urinário e excreção de sódio na fase controle (C1, C2) são

similares nos dois grupos (Tabela 4). A expansão hidrossalina (E1, E2, E3)

promoveu aumento progressivo (p<0.01) de tais parâmetros em ambos os

grupos, observando-se que o fluxo urinário mostrou-se maior (p<0.01) no

grupo tratado com ácido oxônico (Tabela 4). Na fase final da expansão a

excreção de sódio foi também maior (p<0.01 e p<0.05) se comparado com

o grupo controle (Tabela 4). Durante a fase de recuperação (R1, R2, R3)

não houve diferença significativa na diurese e natriurese entre os grupos,

havendo redução progressiva (p<0.01 e p<0.05) das mesmas, com

tendência para retorno aos valores basais (Tabela 4).

Em relação aos parâmetros hemodinâmicos, não ocorreram alterações

significativas de PAM e FC nas diferentes fases estudadas dos grupos

tratados com OA 2% por 3 semanas (Tabela 3 e Figura 7). No entanto, a

PAM mostrou-se maior (p<0.01 e p<0.05) nas diferentes fases estudadas

(Tabela 4 e Figura 8) nos grupos tratados com OA 2% por 7 semanas

quando comparados aos ratos do grupo controle.

Tabela 3. Valores de fluxo urinário (FU), excreção de sódio (ExNa),

pressão arterial média (PAM) e freqüência cardíaca (FC) em ratos do grupo

controle (CTRL) e ratos do grupo tratado com OA 2% durante 3 semanas

(AOX) obtidos na fase controle (C2), expansão (E3) e recuperação (R3).

CTRL - 3 semanas (n=6)

C2 E3 R3

FU (µL/min/g) 13,5±6,3 114,6±35,0

36,7±6,6

ExNa (µEq/min/g) 1,8±0,8 15,7±5,2** 6,0±1,2

PAM (mmHg) 107±2,6 105±2,1 109±2,5

FC (bpm) 382±20,5 394±21,1 399±18,4

AOX - 3 semanas (n=6)

C2 E3 R3

FU (µL/min/g) 22,3±10,2 155,9±43,9** 71,7±20,6

ExNa (µEq/min/g) 2,1±0,9 16,0±4,0** 9,6±1,3**

PAM (mmHg) 106±3,8 105±6,4 110±5,9

FC (bpm) 395±22,5 402±19,7 381±23,7

Os dados são apresentados como média ± EPM. ** p<0.01 em relação à

fase controle.

Tabela 4. Valores de fluxo urinário (FU), excreção de sódio (ExNa),

pressão arterial média (PAM) e freqüência cardíaca (FC) em ratos do grupo

controle (CTRL) e ratos do grupo tratado com OA 2% durante 7 semanas

(AOX) obtidos na fase controle (C2), expansão (E3) e recuperação (R3).

CTRL - 7 semanas (n=6)

C2 E3 R3

FU (µL/min/g) 8,3±1,4 62,4 ±27,1** 18,3±4,9

ExNa (µEq/min/g) 2,2±0,8 10,4±1,8** 4,7±1,7

PAM (mmHg) 97±8,5 99±7,3 95±8,1

FC (bpm) 376±21,5 386±13,8 389±24,1

AOX - 7 semanas (n=6)

C2 E3 R3

FU (µL/min/g) 32,8±11,2 141,4±18,2

**##

56,4±4,7

ExNa (µEq/min/g) 3,3±1,1 16,5±0,8

**#

9,1±1,1

PAM (mmHg) 128±3,5

140±4,7

133±7,5

FC (bpm) 346±16,7 385±27,5 389±25,3

Os dados são apresentados como média ± EPM.

p<0.01 em relação à

fase controle;

p<0.01 e

p<0.05 em relação aos respectivos ratos do

grupo CTRL.

Figura 5. Efeito da expansão de volume (infusão de salina isotônica no volume

equivalente a 5 % do peso corporal) em ratos do grupo controle (CTRL) e ratos

do grupo tratado com OA 2% (AOX) durante 3 semanas. Os valores

representam as médias ± EPM, ilustrando o fluxo urinário (FU) e a excreção de

sódio (ExNa) corrigidos por grama de rim nas fases controle (C1, C2),

expansão (E1, E2, E3) e recuperação (R1, R2, R3). Nas fases controle e

recuperação, os animais receberam infusão contínua de salina isotônica ao

fluxo de 55 µl/min. ** p<0.01 vs fase controle.

100

200

FU (

L/min/g)

AOX (n=6)

CTRL (n=6)

C1 C2 E1 E2 E3 R1 R2 R3

ExNa (

Eq/min/g)

** **

Figura 6. Efeito da expansão de volume (infusão de salina isotônica no volume

equivalente a 5 % do peso corporal) em ratos do grupo controle (CTRL) e ratos

do grupo tratado com OA 2% (AOX) durante 7 semanas. Os valores

representam as médias ± EPM, ilustrando o fluxo urinário (FU) e a excreção de

sódio (ExNa) corrigidos por grama de rim nas fases controle (C1, C2),

expansão (E1, E2, E3) e recuperação (R1, R2, R3). Nas fases controle e

recuperação, os animais receberam infusão contínua de salina isotônica ao

fluxo de 55 µl/min. ** p<0.01 vs fase controle;

p<0.01 e

p<0.05 vs grupo

CTRL.

100

200

CTRL (n=6)

AOX (n=6)

FU (

L/min/g)

C1 C2 E1 E2 E3 R1 R2 R3

ExNa (

Eq/min/g)

Figura 7. Efeito da expansão de volume (infusão de salina isotônica no volume

equivalente a 5 % do peso corporal) na pressão arterial média (PAM) e

freqüência cardíaca (FC) em ratos do grupo controle (CTRL) e ratos do grupo

tratado com OA 2% (AOX) durante 3 semanas. Os valores representam as

médias ± EPM nas fases controle (C1, C2), expansão (E1, E2, E3) e

recuperação (R1, R2, R3). Nas fases controle e recuperação, os animais

receberam infusão contínua de salina isotônica ao fluxo de 55 µl/min..

100

120

CTRL (n=6)

AOX (n=6)

PAM (mmHg)

C1 C2 E1 E2 E3 R1 R2 R3

300

400

500

FC (bpm)

Figura 8. Efeito da expansão de volume (infusão de salina isotônica no volume

equivalente a 5 % do peso corporal) na pressão arterial média (PAM) e

freqüência cardíaca (FC) em ratos do grupo controle (CTRL) e ratos do grupo

tratado com OA 2% (AOX) durante 7 semanas. Os valores representam as

médias ± EPM nas fases controle (C1, C2), expansão (E1, E2, E3) e

recuperação (R1, R2, R3). Nas fases controle e recuperação, os animais

receberam infusão contínua de salina isotônica ao fluxo de 55 µl/min..

p <0.05;

p<0.01 vs grupo CTRL.

120

160

CT RL (n=6) AO X (n=6)

PAM (mmHg)

C1 C2 E1 E2 E3 R1 R2 R3

300

400

500

FC (bpm)

A Figura 9 ilustra as respostas diurética e natriurética à infusão de

solução salina isotônica em ratos do grupo que recebeu OA 2% durante 3

semanas (AOX) e em ratos do grupo que além de receber o OA 2% também

foram desnervados (AOX DESN). A Figura 10 também mostra essas respostas

nos mesmos parâmetros estudados, porém para o tratamento com OA 2%

durante 7 semanas. Após o período de estabilização de duas horas, observa-

se que os valores de fluxo urinário e excreção de sódio na fase controle (C1,

C2) nos ratos tratados com OA 2% durante 3 semanas são similares aos ratos

que além de OA 2%, durante o mesmo período, também foram desnervados

(Tabela 5). A expansão hidrossalina (E1, E2, E3) promoveu aumento

progressivo (p<0.01) de tais parâmetros em ambos os grupos, porém não

houve diferenças significativas para esses parâmetros entre eles (Tabela 5).

Durante a fase de recuperação (R1, R2, R3) também não houve diferença

significativa na diurese e natriurese entre os grupos, havendo redução

progressiva (p<0.01) das mesmas, com tendência para retorno aos valores

basais (fase controle) (Tabela 5). Nos grupos tratados com OA 2% durante 7

semanas, observa-se que os valores de fluxo urinário e excreção de sódio na

fase controle (C1, C2) são similares nos dois grupos (Tabela 6). A expansão

hidrossalina (E1, E2, E3) promoveu aumento progressivo (p<0.01) de tais

parâmetros no grupo tratado com OA 2% (Tabela 6), os quais se mostraram

maiores (p<0.01) que nos ratos além de receber OA 2% também foram

desnervados. Durante a fase de recuperação (R1, R2, R3), não houve

diferença significativa na diurese e natriurese entre os grupos, havendo

redução progressiva das mesmas, com tendência para retorno aos valores

basais (fase controle) (Tabela 6).

Em relação aos parâmetros hemodinâmicos, não ocorreram alterações

significativas de PAM e FC nas diferentes fases estudadas dos grupos tratados

com OA 2% por 3 semanas (Tabela 5 e Figura 11). No entanto, a PAM

mostrou-se significativamente maior nas diferentes fases estudadas (Tabela 6

e figura 12) nos grupos tratados por 7 semanas com OA 2% quando

comparados aos ratos que além de serem tratados com OA 2% também foram

desnervados.

Tabela 5. Valores de fluxo urinário (FU), excreção de sódio (ExNa), pressão

arterial média (PAM) e freqüência cardíaca (FC) em ratos tratados por 3

semanas com OA 2% (AOX) e desnervados (AOX DESN) obtidos na fase

controle (C2), expansão (E3) e recuperação (R3).

AOX - 3 semanas (n=6)

C2 E3 R3

FU (µL/min/g) 22,3±10,2 155,9±43,9

71,7±20,6**

ExNa (µEq/min/g) 2,1±0,9 16,0±4,0**

9,6±1,3**

PAM (mmHg) 106±3,8 105±6,4 110±5,9

FC (bpm) 395±22,5 402±19,7 381±23,7

AOX DESN - 3 semanas (n=6)

C2 E3 R3

FU (µL/min/g) 28,4±6,2 141,2±9,7** 63,6±9,9**

ExNa (µEq/min/g) 4,1±1,5 25,5±5,7**

14,0±3,8**

PAM (mmHg) 104±6,1 102±6,4 99±6,2

FC (bpm) 413±19,5 412±23,1 434±20,3

Os dados são fornecidos como média ± EPM. ** p<0.01 em relação à fase

controle.

Tabela 6. Valores de fluxo urinário (FU), excreção de sódio (ExNa), pressão

arterial média (PAM) e freqüência cardíaca (FC) em ratos tratados por 7

semanas com OA 2% (AOX) e desnervados (AOX DESN) obtidos na fase

controle (C2), expansão (E2) e recuperação (R3).

AOX - 7 semanas (n=6)

C2 E2 R3

FU (µL/min/g) 32,8±11,2 125,3±0,8** 56,4±4,7

ExNa (µEq/min/g) 3,3±1,1 14,0±3,1

9,1±1,1

PAM (mmHg) 129±6,4 141±4,7 133±7,5

FC (bpm) 346±16,7 392±29,8 389±25,3

AOX DESN – 7 semanas (n=6)

C2 E2 R3

FU (µL/min/g) 16,8±2,5 27,0±2,6

28,5±2,2

ExNa (µEq/min/g) 0,6±0,1 2,6±0,2

4,2±0,3

PAM (mmHg) 102±3,6 110±3,1

97±2,8

FC (bpm) 385±5,2 404±3,3 400±4,6

Os dados são fornecidos como média ± EPM.

p<0.01 em relação à fase

controle;

p<0.05 e

p<0.01 em relação aos ratos do grupo AOX.

Figura 9. Efeito da expansão de volume (infusão de salina isotônica no volume

equivalente a 5 % do peso corporal) em ratos do grupo tratado com OA 2%

(AOX) por 3 semans e desnervados (AOX DESN). Os valores representam as

médias ± EPM, ilustrando o fluxo urinário (FU) e a excreção de sódio (ExNa)

corrigidos por grama de rim nas fases controle (C1, C2), expansão (E1, E2, E3)

e recuperação (R1, R2, R3). Nas fases controle e recuperação, os animais

receberam infusão contínua de salina isotônica ao fluxo de 55 µl/min. ** p<0.01

vs fase controle.

100

200

FU (

/min/g)

AOX (n=6)

AOX DESN (n=6)

C1 C2 E1 E2 E3 R1 R2 R3

ExNa (

Eq/min/g)

Figura 10. Efeito da expansão de volume (infusão de salina isotônica no

volume equivalente a 5 % do peso corporal) em ratos do grupo tratado com OA

2% (AOX) por 7 semans e desnervados (AOX DESN). Os valores representam

as médias ± EPM, ilustrando o fluxo urinário (FU) e a excreção de sódio (ExNa)

corrigidos por grama de rim nas fases controle (C1, C2), expansão (E1, E2, E3)

e recuperação (R1, R2, R3). Nas fases controle e recuperação, os animais

receberam infusão contínua de salina isotônica ao fluxo de 55 µl/min. ** p<0.01

e * p<0.05 vs fase controle;

p<0.01 vs grupo AOX DESN.

100

200

F U (

/min/g)

AOX (n=6)

AOX DESN (n=6)

C1 C2 E1 E2 E3 R1 R2 R3

ExNa (

Eq/min/g)

Figura 11.

Efeito da expansão de volume (infusão de salina isotônica no

volume equivalente a 5 % do peso corporal) na pressão arterial média (PAM) e

freqüência cardíaca (FC) em ratos do grupo tratado com OA 2% (AOX) por 3

semanas e desnervados (AOX DESN). Os valores representam as médias ±

EPM nas fases controle (C1, C2), expansão (E1, E2, E3) e recuperação (R1,

R2, R3). Nas fases controle e recuperação, os animais receberam infusão

contínua de salina isotônica ao fluxo de 55 µl/min..

C1 C2 E1 E2 E3 R1 R2 R3

300

400

500

FC (bpm)

100

120

AOX (n=6)

PAM (mmHg)

AOX DESN (n=6)

Figura 12

. Efeito da expansão de volume (infusão de salina isotônica no

volume equivalente a 5 % do peso corporal) na pressão arterial média (PAM) e

freqüência cardíaca (FC) em ratos do grupo tratado com OA 2% (AOX) por 7

semanas e desnervados (AOX DESN). Os valores representam as médias ±

EPM nas fases controle (C1, C2), expansão (E1, E2, E3) e recuperação (R1,

R2, R3). Nas fases controle e recuperação, os animais receberam infusão

contínua de salina isotônica ao fluxo de 55 µl/min.

p <0.05;

p<0.01 vs grupo

AOX DESN.

120

160

AOX (n=6)

AOX DESN (n=6)

PAM (mmHg)

C1 C2 E1 E2 E3 R1 R2 R3

300

400

500

FC (bpm)

Em princípio, podemos notar que estes resultados demonstram que os

animais do grupo tratado com OA 2% (AOX) durante 7 semanas apresentaram

um ganho nas respostas diurética e natriurética induzidas pela expansão

volêmica quando comparados aos ratos do grupo controle que não receberam

OA 2% (CTRL) e sobretudo quando comparados aos ratos que além de

receber OA 2% também foram desnervados (AOX DESN).

5.6 Concentração Plasmática de Creatinina

Os valores da concentração plasmática de creatinina são mostrados na

figura 13. Os dados mostram que os ratos tratados com OA 2% durante 7

semanas (AOX) apresentam aumento (p<0.05) na concentração plasmática de

creatinina (mg/dL) quando comparados com os ratos controles (AOX

0,82±0,05; CTRL 0,66±0,04; CTRL DESN 0,64 ± 0,05 mg/dL; p<0.05). A

desnervação simpática renal não reduziu significativamente a elevação

plasmática de creatinina induzida pela hiperuricemia de 7 semanas, muito

embora este valor permaneça mais alto que aquele observado nos animais

controle. Entretanto, essa diferença não foi significativa quando comparada

com os valores da concentração plasmática de creatinina dos ratos controles e

dos ratos tratados com OA 2% por 7 semanas (AOX DESN 0,80±0,04; CTRL

0,66 ±0,04; CTRL DESN 0,64 ± 0,05; AOX 0,82±0,05 mg/dL).

Figura 13.

Concentração plasmática de creatinina após inibição da uricase por

7 semanas com OA 2%. Os valores representam as médias ± EPM dos grupos

controle (CTRL) e desnervados (CTRL DESN) e dos grupos tratados com OA

2% (AOX) e desnervados (AOX DESN). * p<0.05 vs ratos controle.

CTRL CTRL DESN AOX AOX DESN

0.0

0.5

1.0

Conc. Plasm. Creatinina (mg/dL)

5.7 Histologia Renal

A análise histológica dos cortes dos rins dos animais tratados com OA

2% durante 7 semanas (AOX) e dos que além de terem sido tratados também

foram desnervados (AOX DESN) mostrou uma aparente hipertrofia das

arteríolas aferentes (figura 15) e focos de aumento de matriz extracelular

intertubular com ausência de exsudato inflamatório (figura 14). Em relação ao

tamanho dos glomérulos, nos ratos dos grupos AOX e AOX DESN os

glomérulos apresentaram-se maiores do que nos ratos do grupo CTRL (CTRL

89,5±1,3; AOX 101±0,9; AOX DESN 102±1,5 micrômetros; p<0.01). Além

disso, não foram observadas alterações quanto à celularidade ou depósitos

anormais nos glomérulos (figura 15).

Figura 14.

Campo microscópico da medular de rato do grupo controle que não

recebeu OA 2% (CTRL) (B) de rato tratado com OA 2% (AOX) (A) e de rato

tratado com AO 2% e desnervado (AOX DESN) (C). As setas indicam áreas de

fibrose na medular (coloração: tricrômioco de Mallory).

Figura 15.

Campo microscópico da cortical de rato controle que não recebeu

OA 2% (CTRL) (A) e de rato tratado com OA 2% (AOX) (B). A seta indica

arteríola aferente, com parede mais espessada no animal do grupo AOX. A

diferença de tamanho dos glomérulos, embora demonstrada pela tomada da

medida, não foi percebida na fotomicrografia (coloração: tricrômioco de

Mallory).

6. DISCUSSÃO

Estudos anteriores ao nosso demonstraram que ratos com hiperuricemia

média desenvolvem hipertensão arterial acompanhada de doença renal

(Mazzali e cols., 2001). Em nossos resultados também foi encontrado

hipertensão arterial em ratos, mas somente após 7 semanas de hiperuricemia.

A inibição da uricase com OA 2% foi capaz de produzir hiperuricemia média e

conseqüente aumento na pressão arterial. Esses resultados nos levam a

concordar com as conclusões prévias de diversas pesquisas de que o ácido

úrico é um marcador independente que exerce efeito causal na hipertensão

arterial (Feig e cols., 2006, Mazzali e cols., 2001, Jossa e cols., 1994,

Verdecchia e cols., 2000).

Quando promovemos a prévia desnervação simpática renal bilateral foi

observado diminuição da pressão arterial tanto na terceira semana de

hiperuricemia, quando os animais ainda não apresentavam hipertensão arterial,

como na sétima semana de hiperuricemia, quando os animais já se

encontravam hipertensos. Em relação à excreção diária de sódio foi observado

retenção de sódio em ratos com hiperuricemia que foi abolida pela

desnervação renal bilateral prévia destes animais. Esses resultados nos levam

a acreditar que o nervo simpático renal tem um papel fundamental no

mecanismo de retenção de sódio e da hipertensão arterial produzida pela

hiperuricemia. A atividade simpática renal começa a se elevar já na terceira

semana de hiperuricemia, mesmo que ainda não seja capaz de produzir

hipertensão arterial, pois a desnervação renal bilateral prévia foi capaz de

diminuir a pressão arterial e impedir a retenção de sódio. Os resultados se

mostraram mais evidentes na sétima semana de hiperuricemia quando os

animais apresentaram hipertensão arterial.

Existem evidências da literatura que admitem esses resultados, dentre elas

podemos destacar a potente vasoconstrição renal associada com significante

decréscimo na taxa de filtração glomerular observada em ratos com

hiperuricemia (Sanchez-Lozada e cols.,2008) que foi explicada pela redução

endotelial de óxido nítrico e aumento na liberação de renina pelas células justa-

glomerulares (Mazzali e cols., 2001). A ativação do sistema renina angiotensina

promove aumento nas concentrações de angiotensina II a qual regula a

resistência vascular, estimula a secreção de aldosterona e a reabsorção de

sódio diretamente nos túbulos renais e, além disso, aumenta a liberação do

neurotransmissor simpático renal (Stegbauer e cols., 2005). A inervação

simpática renal pode regular a excreção de sódio e água através de: variações

na resistência vascular renal com conseqüente constrição da arteríola aferente

e redução da taxa de filtração glomerular; reabsorção de sódio e água

diretamente nos túbulos via receptores adrenérgicos - α1; e estimulação da

liberação de renina pelas células do sistema justaglomerular via receptores

adrenérgicos - β1 com aumento da formação de anigiotensina II e de

aldosterona que aumentam ainda mais a reabsorção tubular de sódio (Dibona e

Koepke, 1982; DiBona, 1989). No entanto, quando se retira a influência do

sistema nervoso simpático renal através da desnervação renal bilateral, ocorre

aumento do fluxo plasmático glomerular e redução da reabsorção tubular de

sódio associado com aumento na excreção urinária de sódio e água (Bencsáth

e cols., 1982).

Dessa forma, podemos inferir que tais mudanças atuando em conjunto,

podem contribuir para a significativa retenção renal de sódio, sendo esse um

fator crítico para o desenvolvimento da hipertensão arterial que acompanha a

hiperuricemia (Watanabe e cols.,2002), uma vez que o balanço de sódio e

água pelos rins influencia o controle da pressão arterial a longo prazo (Guyton

e Coleman, 1980).

No sentido de se avaliar o papel dos nervos simpáticos renais nos

mecanismos hipertensores da hiperuricemia foram estudadas as respostas

cardiovasculares e renais induzidas pela sobrecarga de volume em ratos com

hiperuricemia. Assim, foi observado que a excreção renal de sódio e água

aumenta de forma similar com a sobrecarga de volume tanto nos animais

controle quanto nos animais tratados com OA 2% por 3 semanas. Para os

animais tratados com OA 2% por 7 semanas, essas respostas também

aumentam, só que se mostram mais elevadas nos animais tratados com OA

2% quando comparadas aos animais que não receberam OA 2%. Em relação

aos parâmetros hemodinâmicos, a PAM e a FC não foram alteradas nas

diferentes fases da expansão volêmica em nenhum dos dois grupos tanto para

3 quanto para 7 semanas de hiperuricemia, no entanto os animais tratados com

AO 2% por 7 semanas apresentaram maiores valores de PAM durante toda

manobra quando comparados aos controle.

Sabemos que em condições fisiológicas, as expansões volêmicas agudas

promovem aumento na excreção hidrossalina, a qual acredita-se ser de origem

multifatorial, já que a dilatação das câmaras atriais e ventriculares que decorre

da expansão volêmica culminam em supressão de mecanismos sistêmicos

vasoconstritores e retentores de sódio e água , como o sistema nervoso

simpático, o sistema renina-angiotensina e a vasopressina e na ativação de

mecanismos vasodilatadores como os do peptídeo natriurético e das

prostaglandinas (Brennan e cols., 1971; Goetz e cols., 1975; Thames e cols.,

1982). Dessa forma, para o nosso estudo, sugerimos que a elevação no

aumento da excreção hidrossalina dos animais hiperuricêmicos submetidos à

expansão volêmica, foi devido a uma maior supressão dos mecanismos

vasoconstritores e/ou maior ativação dos vasodilatadores ou ainda alteração na

resposta renal frente a estes mecanismos que só se tornaram evidentes na

sétima semana de hiperuricemia.

Dentre os mecanismos propostos, o sistema nervoso simpático renal foi

objeto de nosso estudo. Acreditamos que o mesmo tem participação decisiva

no aumento da excreção hidrossalina em resposta a sobrecarga de volume que

acompanha a hiperuricemia, sugerindo, assim, que a retenção crônica de sódio

neste modelo envolve ativação simpática renal, a qual culmina com maior

retirada simpática renal quando há expansão volêmica. Neste sentido, uma das

fases do nosso estudo foi idealizada justamente com o propósito de avaliar o

papel da atividade simpática renal nas respostas diurética e natriurética à

expansão volêmica observadas na hiperuricemia. Para tal, foi realizada

desnervação renal bilateral previamente ao tratamento com OA 2% e sendo

testada a seguir a resposta à sobrecarga hidrossalina.

Nossos resultados demonstraram que a desnervação renal bilateral prévia

foi capaz de prevenir o aumento causado pela hiperuricemia na diurese e

natriurese, em resposta a sobrecarga hidrossalina, nos animais que se

encontravam na sétima semana de hiperuricemia, sendo os valores

comparados aos vistos nos ratos controle. A partir destes resultados, podemos

inferir que a atividade simpática renal eferente contribui para as alterações na

homeostase hidrossalina e conseqüentemente para o aumento na pressão

arterial que é observado na hiperuricemia. Corroborando essa idéia, é bem

conhecido que a atividade do nervo simpático renal eferente desempenha um

papel fundamental no controle da circulação e função renal não só em

condições fisiológicas, mas também em diversas condições fisiopatógicas

(DiBona, 1982). Tal controle pode ocorrer em diferentes níveis no rim, tais

como na regulação da circulação renal, na filtração glomerular, nas funções de

reabsorção e secreção tubular envolvidas no controle renal da homeostase

hidrossalina, bem como na liberação de substâncias vasoativas pelo próprio

rim (DiBona, 1982; DiBona e cols., 1988).

O aumento da atividade simpática renal em condições fisiopatológicas já foi

descrito para várias condições, como por exemplo, a hipertensão arterial

primária, cirrose hepática e insuficiência cardíaca congestiva (Hollenberg,

1975; DiBona e Sawin 1991). Inclusive no nosso laboratório já foi demonstrado

que os nervos simpáticos renais desempenham um importante papel na

retenção de sódio que caracteriza a insuficiência cardíaca congestiva (Buloto e

Cabral, 1999), para qual há vários mecanismos implicados na hiperatividade

simpática, dentre eles o aumento dos níveis plasmáticos de angiotensina II e a

redução na síntese central de óxido nítrico (Li e cols., 1992; DiBona e cols.,

1995; Tagawa e cols.,1994; Patel et cols., 1996;).

Para hiperuricemia, ainda precisa ser claramente estabelecida qual é a

origem da hiperatividade simpática, talvez a angiotensina II possa ter um papel

relevante nesse mecanismo, pois se sabe que além de mediar um importante

aumento na vasoconstrição e na retenção de sódio e água, a angotensina II

também aumenta a liberação da noradrenalina por ativação dos receptores

AT1 pré-sinápticos (Stegbauer e cols., 2005). A importância da angiotensina II

na hiperuricemia já foi sugerida em diversas pesquisas. Estudos que utilizaram

inibidores da ECA como o enalapril, mostraram que o mesmo é capaz de

diminuir a pressão arterial e as lesões renais ocasionadas pelo aumento dos

níveis plasmáticos de ácido úrico em ratos (Mazzali e cols., 2001). Além

destes, outros que utilizaram o losartan em humanos, bloqueador dos

receptores AT1, propuseram que o mesmo foi capaz de provocar as mesmas

respostas, não só por interferir nas ações da angiotensina II, mas também por

aumentar a excreção urinária de urato (Alderman e Aiyer, 2004).

Nossos resultados, referentes à taxa de filtração glomerular (TGF), através

da medida da concentração plasmática de creatinina, mostraram um aumento

no nível plasmático de creatinina nos animais que foram submetidos à

hiperuricemia por 7 semanas. Este resultado pode ser corroborado por estudo

anterior ao nosso que foi realizado em humanos. No mesmo o tratamento de

pacientes com função renal normal com alopurinol, inibidor da síntese de ácido

úrico, por três meses foi capaz de diminuir a concentração plasmática de

creatinina e aumentar a TGF. Sugerindo-se, dessa forma, que o ácido úrico

provoca diminuição na TGF (Kanbay e cols., 2007).

Esses resultados apontam para o fato de a elevação da atividade simpática

renal, produzida pelo aumento do ácido úrico, ter sido de magnitude tal que

pôde promover vasoconstrição acentuada da arteríola aferente e com isso

reduzir a TGF. Como está bem demonstrado, o estímulo elétrico do nervo renal

produz de uma maneira dependente da freqüência de descarga dos nervos,

mudanças no fluxo plasmático renal (FPR) e TGF, na reabsorção de sódio e

água e na secreção de renina, observando-se aumento na resistência vascular

renal e redução no FPR com estímulos com freqüências maiores que 2,0 Hz

(DiBona, 1985). Com base nesses dados e em nossos resultados, acreditamos

que a desnervação renal tenha promovido aumento na excreção diária de sódio

dos animais com hiperuricemia, pelo menos em parte, através da inibição do

efeito direto que a atividade simpática exerce sobre a reabsorção tubular de

sódio, uma vez que a mesma não alterou significantemente a redução da TGF

e/ou FPR induzida pela hiperuricemia.

No que se refere às alterações morfológicas renais, apesar da

metodologia utilizada ter sido uma metodologia de coloração de rotina, a qual

não é possível observar com muita evidência as alterações renais, os

resultados da análise histológica demonstraram que a desnervação renal não

modificou as alterações renais provocadas pela hiperuricemia. Nos dois

grupos as alterações renais observadas - áreas de fibrose na região medular e

aumento de tamanho dos glomérulos - foram semelhantes. Esses dados

sugerem que as alterações renais observadas não dependem do aumento da

pressão arterial e sim do aumento das concentrações plasmáticas de ácido

úrico.

De fato dados da literatura referem que à lesão tubular, a arteriopatia

da arteríola aferente e a hipertrofia glomerular induzidas pela hiperuricemia

não estão relacionadas com o aumento da pressão arterial. Estudos de

Mazzali (2002) e Nakagawa (2003) mostraram que o tratamento de ratos

hipertensos e hiperuricêmicos com hidroclorotiazida foi capaz de provocar

diminuição dos níveis tensionais sem alterar as lesões renais observadas. Por

outro lado o tratamento dos ratos hiperuricêmicos com inibidor da enzima

conversora de angiotensina (ECA), o enalapril, além de levar a diminuição da

pressão arterial, também provocou redução significativa da lesão tubular, da

arteriopatia e da hipertrofia glomerular. Como a hidroclorotiazida não interfere

no sistema renina angiotensina como o enalapril, os autores admitiram que as

alterações morfológicas dos rins nos animais tratados com acido oxônico

seriam conseqüência de um mecanismo mediado pelo sistema renina

angiotensina hiperativado pelo aumento nas concentrações plasmáticas de

ácido úrico.

7. CONCLUSÃO

Considerando os resultados obtidos, o principal resultado deste estudo é

que existe um aumento da atividade simpática renal em ratos com

hiperuricemia e hipertensão arterial. Tal aumento pode ser observado pela

retenção crônica de sódio e maior resposta diurética e natriurética, após a

retirada simpática produzida pela expansão volêmica. Tal interpretação é ainda

sustentada pelo fato de que a desnervação renal bilateral, realizada

previamente ao desenvolvimento da hiperuricemia com OA 2%, ter sido capaz

de prevenir o acúmulo de sódio, a elevação da pressão arterial e o aumento da

resposta diurética e natriurética à expansão volêmica.

9. REFERÊNCIAS

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