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PRÓ-REITORIA DE PESQUISA E PÓS-GRADUAÇÃO
PROGRAMA DE MESTRADO EM CIÊNCIA ANIMAL
ESTUDO CLÍNICO E LABORATORIAL DA INTOXICAÇÃO
EXPERIMENTAL PELO VENENO DA SERPENTE Crotalus durissus
terrificus EM RATOS Wistar TRATADOS COM SORO ANTIOFÍDICO E
Mikania glomerata
RAFAEL STUANI FLORIANO
Presidente Prudente – SP
2008
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PRÓ-REITORIA DE PESQUISA E PÓS-GRADUAÇÃO
PROGRAMA DE MESTRADO EM CIÊNCIA ANIMAL
ESTUDO CLÍNICO E LABORATORIAL DA INTOXICAÇÃO
EXPERIMENTAL PELO VENENO DA SERPENTE Crotalus durissus
terrificus EM RATOS Wistar TRATADOS COM SORO ANTIOFÍDICO E
Mikania glomerata
RAFAEL STUANI FLORIANO
Dissertação apresentada a Pró-Reitoria de
Pesquisa e Pós-Graduação, Universidade
do Oeste Paulista, como parte dos
requisitos para obtenção do título de Mestre
em Ciência Animal.
Área de Concentração: Fisiopatologia
Animal
Orientador(a): Prof.ª Dr.ª Rosa Maria Barilli
Nogueira.
Presidente Prudente – SP
2008
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CATA
LOGRÁFICA
591.65 Floriano, Rafael Stuani.
F635e Estudo clínico e laboratorial da intoxicação
experimental pelo veneno da serpente Crotalus
dirissus terrificus em ratos Wistar tratados com
soro antiofídico e Mikania glomerata / Rafael
Stuani Floriano. – Presidente Prudente : [s.n.],
2008.
43 f.
Dissertação (Mestrado em Ciência Animal) –
Universidade do Oeste Paulista – UNOESTE:
Presidente Prudente – SP, 2008.
Bibliografia
1. Veneno crotálico, ação tóxica. 2.
Soroterapia. 3. Fitoterápicos. I. Título.
RAFAEL STUANI FLORIANO
Estudo clínico e laboratorial da intoxicação experimental pelo
veneno da serpente Crotalus durissus terrificus em ratos Wistar
tratados com soro antiofídico e Mikania glomerata
Dissertação apresentada a Pró-Reitoria de
Pesquisa e Pós-Graduação, Universidade
do Oeste Paulista, como parte dos
requisitos para obtenção do título de Mestre
em Ciência Animal.
Presidente Prudente, 02 de junho de 2008.
BANCA EXAMINADORA
________________________________________
Prof.ª Dr.ª Rosa Maria Barilli Nogueira
Universidade do Oeste Paulista - UNOESTE
________________________________________
Prof.ª Dr.ª Michiko Sakate
Universidade Estadual Paulista – UNESP/Botucatu
_______________________________________
Prof.ª Dr.ª Silvia Franco Andrade
Universidade do Oeste Paulista - UNOESTE
DEDICATÓRIA
Dedico este a trabalho ao meu querido Jesus por me conceder a
chance de honrá-Lo com a sua realização.
A minha querida família por terem me ensinado que os valores de um
homem é o temor ao Senhor e a perseverança na conquista de uma vida melhor
para todos.
A minha amada esposa Érica pelo amor, compreensão, carinho e apoio
constante.
Ao meu tio Agenor Stuani pelo apoio a minha família, pela confiança
depositada e exemplo de vida.
A minha orientadora Dr.ª Rosa pelo exemplo de profissionalismo e
dedicação.
AGRADECIMENTOS
A Universidade do Oeste Paulista, Pró-Reitoria de Pós-Graduação e
Pesquisa pelo apoio financeiro.
Ao Rogério Giufrida pela análise estatística.
Ao Biotério Central da Unoeste pelo fornecimento dos animais.
Ao Vitor Hugo Mion Petrillo pela realização de alguns exames
laboratoriais.
Ao Nelson Barbosa Machado Neto pela identificação da planta.
“Se alguém quiser vir após Mim, renuncie-se a si mesmo, tome sobre si
a sua cruz e siga-me.”
Jesus Cristo
RESUMO
Estudo clínico e laboratorial da intoxicação experimental pelo veneno da
serpente Crotalus durissus terrificus em ratos Wistar tratados com soro
antiofídico e Mikania glomerata
O acidente crotálico apresenta o maior índice de letalidade quando
comparado com outros acidentes ofídicos de interesse médico. As frações do
veneno crotálico apresentam três atividades com importância clínica conhecida:
neurotóxica, hemolítica e miotóxica. Este trabalho teve como objetivo avaliar os
aspectos clínicos e laboratoriais da intoxicação experimental com veneno de
Crotalus durissus terrificus em ratos Wistar tratados com soro antiofídico e extrato
aquoso de Mikania glomerata. Os animais foram divididos em três grupos com
dezoito animais cada um. Grupo GC: controle; Grupo GVS: receberam 10mg/kg de
veneno via intramuscular e 1mg de soro antiofídico via intraperitoneal para cada
50mg de veneno crotálico; Grupo GVSM: receberam o mesmo protocolo do grupo
GVS e o extrato aquoso de Mikania glomerata a 10% na dose de 1mL via oral, de
hora em hora totalizando cinco administrações. Foram observados edema
moderado, sedação moderada, diminuição da locomoção, temperatura, freqüência
respiratória e freqüência cardíaca, porém não houve evidência de alteração de
coagulação. Na comparação entre os grupos GVS e GVSM para todos os
parâmetros avaliados observamos que foi significativo pela análise estatística o
edema maior no membro inoculado nos animais do grupo GVS e o retorno do grau
de sedação mais rápido para os animais do grupo GVSM. A freqüência respiratória
não diferiu entre estes dois grupos, mas foi menor nos animais do grupo GVS
mesmo mantendo-se dentro de valores normais para a espécie. A locomoção
diminuiu, mas não diferiu entre os dois grupos e a temperatura e freqüência cardíaca
não diferiram pela análise estatística, mas a diminuição dos seus valores abaixo dos
valores normais para a espécie, mais intenso nos animais do grupo GVS, foi
clinicamente importante. Concluímos também a necessidade de maiores estudos
com a planta Mikania glomerata nos acidentes crotálicos em espécies mais
sensíveis ao veneno.
Palavras-chave: Crotalus durissus terrificus. Mikania glomerata. Soro antiofídico.
Aspectos clínicos. Aspectos laboratoriais.
ABSTRACT
Clinical and laboratorial study of the experimental intoxication with venom of
Crotalus durissus terrificus in mice Wistar treated with antiophidic serum and
aqueous extract of Mikania glomerata
The accident crotalic presents the largest lethality index when
compared with other ophidic accidents of medical interest. The fractions of the
crotalic venom characterize three activities with known clinical importance:
neurotoxic, hemolytic and myotoxic activities. The present study aims evaluate the
clinical and laboratorial aspects of the experimental intoxication with venom of
Crotalus durissus terrificus in mice Wistar treated with antiophidic serum and
aqueous extract of Mikania glomerata. The animals were divided in three groups with
eighteen animals each one. Group GC: control; Group GVS: received 10mg/kg of
venom saw intramuscular and 1mg of antiophidic serum saw intraperitoneal for each
50mg of crotalic venom; Group GVSM: received the same protocol to the group GVS
and the aqueous extract of Mikania glomerata 10% at the dose of 1mL orally each
hour totaling five administrations. They were observed moderate edema, moderate
sedation, decrease of the locomotion, temperature, breathing frequency and heart
frequency, however there was not evidence of coagulation alteration. In the
comparison among the groups GVS and GVSM for all of the appraised parameters
observed that it was significant for the statistical analysis the larger edema in the
member inoculated in the animals of the group GVS and the return of the faster
sedation degree for the animals of the group GVSM. The breathing frequency didn't
differ among these two groups, but it was smaller in the animals of the group same
GVS staying inside of normal values for the species. The locomotion decreased, but
it didn't differ between the two groups and the temperature and heart frequency didn't
differ for the statistical analysis, but the decrease of their values below the normal
values for the species, more intense in the animals of the group GVS, was clinically
important. We also concluded the need of larger studies with the plant Mikania
glomerata in the accidents crotalic in more sensitive species to the venom.
Key-words: Crotalus durissus terrificus. Mikania glomerata. Antiophidic serum.
Clinical aspects. Laboratorial aspects.
SUMÁRIO
1 INTRODUÇÃO 10
2 OBJETIVO 14
3 REVISÃO DE LITERATURA 15
3.1 Biologia e Epidemiologia do Gênero Crotalus 15
3.2 Veneno crotálico e seus Efeitos 16
3.3 Tratamento do Acidente Crotálico 22
4 MATERIAL E MÉTODOS 26
5 RESULTADOS 29
6 DISCUSSÃO 32
7 CONCLUSÃO 35
8 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 36
10
1 INTRODUÇÃO
As serpentes do gênero Crotalus estão representadas no Brasil por
apenas uma espécie, a Crotalus durissus e seis subespécie amplamente distribuída
no território nacional (Figura 1) (JORGE; RIBEIRO, 1990). Apesar de apresentar
características similares em relação a outros gêneros da família Viperidae, como
fosseta loreal e presas anteriores ao maxilar (solenóglifas), diferem-se por
possuírem, na extremidade da cauda, o guizo formado por anéis durante o número
de ecdises que a serpente realiza durante sua vida (BELLUOMINI, 1984).
FIGURA 1 – a) Serpente Crotalus durissus terrificus. b) Distribuição da espécie
Crotalus durissus no Brasil (Brasil 2001).
Fonte: Brasil (2001)
11
O veneno da serpente Crotalus durissus terrificus é composto por uma
mistura extremamente complexa de proteínas biologicamente ativas onde a
interação de cada um dos elementos causa lesões geralmente graves (DAL PAI;
NETO, 1994). O veneno é constituído de várias frações as quais apresentam como
principais toxinas a crotoxina, crotamina, giroxina e convulxina. Cerca de 50% da
fração do veneno são um complexo constituído por uma fração básica e uma ácida
na proporção 1:1 denominadas crotoxinas A e B, respectivamente, sendo que a
fração crotoxina B, com atividade fosfolipase A
2
(PLA2)
,
é responsável por exercer
atividades miotóxica, inflamatória, citotóxica e neurotóxica (VITAL BRAZIL, 1972;
OKAMOTO et al., 1983; PUIG et al., 1995; ROODT et al., 1996). A crotamina reduz o
potencial de repouso da membrana, sugerindo a ativação do canal de sódio que
agindo na membrana de células musculares de mamíferos altera a permeabilidade
dos íons Na
+
e Ca
++
aumentando o influxo desses íons, causando a despolarização
da membrana e forte contração muscular (CHEYMOL et al., 1971; CHANG; TSENG,
1978; VITAL BRAZIL, 1990). A giroxina foi isolada por Barrabin et al. (1978) e é
considerada uma neurotoxina não-letal responsável por alterações de equilíbrio e a
convulxina é responsável por convulsões, distúrbios circulatórios e respiratórios
(VITAL BRAZIL et al., 1966).
As frações do veneno crotálico exercem três atividades com
importância clínica conhecida: neurotóxica, com ações central e periférica, causando
paralisia flácida das musculaturas esquelética e facial, paralisia do globo ocular e às
vezes, paralisia dos músculos respiratórios podendo ocasionar insuficiência
respiratória (VITAL BRAZIL, 1972; AMARAL et al., 1991; JORGE; RIBEIRO, 1992);
coagulante, relacionada ao consumo de fibrinogênio e incoagulabilidade sanguínea
(AMARAL et al., 1988); miotóxica sistêmica, causando lesões de fibras musculares
esqueléticas ou rabdomiólise generalizada, podendo ocasionar como complicação
secundária insuficiência renal aguda (IRA) (AMARAL et al., 1986; AZEVEDO
MARQUES et al., 1985), além da hemolítica “in vitro” (ROSENFELD et al., 1960-62;
KELEN et al., 1960-62).
O quadro clínico causado pelo veneno crotálico, habitualmente tem
manifestações locais discretas, como dor, eritema e edema. Nishioka et al. (2000)
relataram o aparecimento de abscesso no local da picada, no entanto, esta
complicação é rara. Os efeitos de maiores importâncias clínica e gravidade são
aqueles sistêmicos que incluem neurotóxicos, miotóxicos, nefrotóxicos,
12
hepatotóxicos, além de alterações de coagulação sangüínea, hematológicas e
imunológicas (PINHO; PEREIRA, 2001).
Fatores secundários aos efeitos da peçonha no organismo contribuem
para aumentar o nível de gravidade do acidente ofídico, entre eles destacam-se
idade, peso, condições gerais do organismo do indivíduo, quantidade de veneno
inoculada, local da picada e o tempo decorrido do acidente até o tratamento
(MURTAUGH; KAPLAN, 1992).
Os efeitos tóxicos do acidente crotálico diferem dos causados por
outras serpentes de interesse médico, possibilitando a identificação do gênero com
base nas características clínicas do paciente acometido e resultados de exames
laboratoriais (PINHO; PEREIRA, 2001).
O único tratamento de eficácia comprovada experimentalmente para
neutralizar a ação da peçonha crotálica é a soroterapia heteróloga ou soroterapia
antiveneno (SAV). Podem ser usados dois tipos de soros, o soro antiofídico
botrópico-crotálico (SABC) ou o soro específico anticrotálico (SAC). A via de
administração recomendada é a intravenosa (IV). A soroterapia dever ser realizada
em conjunto com o tratamento de suporte que consiste em estabilizar as funções
dos órgãos vitais do paciente acometido (BRASIL, 2001).
A Fundação Nacional de Saúde (BRASIL, 2001) caracteriza o acidente
crotálico como leve, moderado e grave para humanos baseando-se nas
manifestações clínicas e sugerem o tratamento com soro anticrotálico ou antiofídico
botrópico-crotálico nas doses de 5, 10 e 20 ampolas respectivamente. Considerando
que o tratamento com soro se baseia na capacidade neutralizante sobre o veneno
inoculado e que a quantidade inoculada seja a mesma obtida em primeira extração
(50mg), outros autores sugerem que seja utilizada, para animais, uma quantidade de
soro suficiente para neutralizar 50mg de veneno crotálico (ROSENFELT et al., 1960-
62; BICUDO, 1994).
Apesar da soroterapia ser o tratamento preconizado no acidente
ofídico, existe um grande interesse em muitos estudos recentes na busca de
tratamentos complementares que possam ser usados com o intuito de diminuir a
intensidade e gravidade das alterações clínicas observadas, diminuindo a incidência
de complicações secundárias ao acidente, e desta forma diminuir o índice de
letalidade (FERREIRA et al., 1992; PEREIRA et al., 1994; MELO et al., 1994;
BRASIL, 2001; MAIORANO et al., 2005).
13
Algumas plantas citadas na literatura como a Curcuma longa, Eclipta
prostata, Apuleia leiocarpa dentre outras com propriedade antiofídica são indicadas
no tratamento complementar à soroterapia, pois há indício de possuirem diversidade
grande de compostos químicos com muitas atividades farmacológicas de interesse
médico-científico (FERREIRA et al., 1992; PEREIRA et al., 1994; MELO et al., 1994)
O gênero Mikania glomerata utilizada neste estudo é popularmente
conhecida como “guaco”, pertence ao reino Plantae, classe Magnoliopsida, ordem
Asterales e família Asteracea. Esta é uma planta medicinal brasileira muito utilizada
para tratar problemas respiratórios e combater a tosse (PANIZZA, 1997), mas
também tem atividade antiofídica (MAIORANO et al., 2005).
Embora o mecanismo de ação da Mikania glomerata ainda seja
desconhecido, a cumarina (1,2-benzopirano), uma das frações do seu extrato, foi
escolhida como substância marcadora por ser um dos constituintes majoritários do
vegetal e contribuir para o efeito farmacológico incluindo a atividade antiofídica
(LEITE et al., 1993).
Alguns trabalhos mostram que a planta inibe a ação de vários venenos
de serpentes inibindo a ação letal dos mesmos além de ser uma fonte rica de
inibidores potenciais de PLA2, metaloproteases e serinoproteases, enzimas
envolvidas com os sinais clínicos observados em humanos e animais (MAIORANO
et al., 2005).
14
2 OBJETIVO
Avaliar os aspectos clínicos e laboratoriais da intoxicação experimental
com veneno de Crotalus durissus terrificus em ratos Wistar tratados com soro
antiofídico e extrato aquoso de Mikania glomerata.
15
3 REVISÃO DE LITERATURA
3.1 Biologia e Epidemiologia do Gênero Crotalus
As serpentes pertencem à subordem Ophidia, e são encontradas em
quase todo o mundo, mas principalmente nas regiões tropicais e subtropicais por
não apresentarem mecanismos termorreguladores (JIM; SAKATE, 1994).
As serpentes do gênero Crotalus estão representadas no Brasil por
apenas uma espécie, a Crotalus durissus, e distribuídas em seis subespécies: C.
durissus terrificus e C. durissus trigonicus, encontradas nas zonas altas e secas da
região sul; C. durissus collilineatus, distribuída nas regiões secas da região centro-
oeste, Minas Gerais e norte de São Paulo; C. durissus cascavella, encontrada nas
áreas da caatinga do nordeste; C. durissus ruruima, encontrada na região norte do
país; C. durissus marajoensis, encontrada na Ilha de Marajó (JORGE; RIBEIRO,
1990; SAKATE, 2002).
As espécies do gênero Crotalus apresentam características
semelhantes em relação a outras espécies de serpentes peçonhentas da família
Viperidae como os gêneros Bothrops e Lachesis, possuem presas pares localizadas
na posição anterior do maxilar superior sendo classificadas como solenóglifas,
possuem maxilares curtos e móveis no plano vertical e um par de fossetas loreais
(órgão termorregulador) situado entre as narinas e os olhos. A fosseta loreal detecta
o calor de animais homeotérmicos e também vibrações do ar, por intermédio da
membrana que reveste o septo entre as duas câmaras (STORER et al., 2002;
NOBLE; SCHMID, 1937). As serpentes do gênero Micrurus são exceções, pois,
apesar de serem peçonhentas, não apresentam fosseta loreal e possuem dentes
inoculadores pouco desenvolvidos (PINHO; PEREIRA, 2001).
Apesar de tantas características similares, as serpentes do gênero
Crotalus diferem de qualquer outra espécie de serpente peçonhenta por possuírem,
na extremidade da cauda, o guizo ou chocalho formado por gomos ou anéis durante
as ecdises (mudas de pele) que a serpente realiza durante sua vida (BELLUOMINI,
1984). O guizo é usado para emitir um sinal de alerta aos predadores quando a
serpente se sente ameaçada em seu habitat natural (STORER et al., 2002).
16
A Crotalus durissus terrificus é também conhecida popularmente por
cascavel, cascavel-quatro-ventas, boicininga, maracambóia, maracá, entre outras
denominações (SAKATE, 2002).
Desde 1986, o Ministério da Saúde tornou obrigatória a notificação dos
acidentes ofídicos humanos, e com base nos índices observados desde então, a
análise estatística revela que o acidente crotálico está em segundo lugar quanto ao
número de acidentes ocorridos, mas em primeiro com relação ao índice de letalidade
(Tabela 1).
TABELA 1 – Casos, óbitos e índice de letalidade dos acidentes com os principais
gêneros de serpentes peçonhentas do Brasil em 2005 com
atualizações até julho de 2006
Acidente Casos Óbitos Índice
de letalidade
Botrópico 19.453 76 0,40%
Crotálico 1.885 19 1%
Laquético 731 2 0,30%
Elapídico 149 0 0%
Fonte: BRASIL, 2006.
3.2 Veneno Crotálico e seus Efeitos
As peçonhas são compostas quimicamente por uma mistura
extremamente complexa de proteínas biologicamente ativas onde a interação de
cada um dos elementos causa lesões geralmente graves (DAL PAI; NETO, 1994). O
veneno crotálico é constituído de várias frações e estas revelam as seguintes
toxinas: crotoxina, crotamina, giroxina e convulxina. Cerca de 50% da fração do
veneno são um complexo molar de proporção 1:1 denominado crotoxina. Este
complexo é constituído por uma fração básica (crotoxina B) com atividade
fosfolipase A
2
, responsável por exercer atividade miotóxica, inflamatória, citotóxica e
neurotóxica, e por uma fração ácida (crotoxina A) que não apresenta atividade
enzimática. O efeito tóxico deste complexo ocorre somente com a interação das
17
duas frações, podendo a crotoxina B ser tóxica em doses elevadas. (ROODT et al.,
1996; PUIG et al., 1995).
A fração crotoxina do veneno crotálico produz efeitos tanto no sistema
nervoso central quanto no sistema nervoso periférico, provocando sintomas de
paralisia motora e respiratória em todas as espécies animais estudadas. Sugere-se
que a paralisia seja decorrente do bloqueio da transmissão nervosa na junção
neuromuscular, por inibição da liberação de acetilcolina na pré-sinapse (VITAL
BRAZIL, 1972; OKAMOTO et al., 1983). A paralisia é flácida e acomete a
musculatura esquelética, músculos respiratórios, face e globo ocular.
A crotamina é uma proteína menor, composta por 42 aminoácidos,
menos tóxica que a crotoxina, e sua ação é específica sobre a musculatura
reduzindo o potencial de repouso da membrana de mamíferos, ativando o canal de
Na
+
ou Ca
++
aumentando o seu influxo (CHEYMOL et al., 1971). O influxo destes
íons causa despolarização da membrana e forte contração muscular (CHANG;
TSENG, 1978; BRASIL, 1990). Em estudos recentes, é mostrada a capacidade da
crotamina de ativar proteases e fosfolipase A
2
presentes na peçonha além de
possuir uma potente ação analgésica considerada superior à ação da morfina
(HUDELSON; HUDELSON, 1995; MANCIN et al., 1998).
Em 1966, Vital Brazil et al. isolaram uma fração neurotóxica
responsável por convulsões, distúrbios circulatórios e respiratórios denominada
convulxina.
A giroxina foi isolada por Barrabin et al. (1978) e é considerada uma
neurotoxina não-letal responsável por sintomas neurológicos relacionados à
alteração do equilíbrio.
De acordo com a importância clínica dos sinais observados na
intoxicação crotálica, podem se classificar as ações do veneno em três principais:
neurotóxica (VITAL BRAZIL, 1972; AMARAL et al., 1991; JORGE; RIBEIRO, 1992),
coagulante, relacionada ao consumo de fibrinogênio e incoagulabilidade sanguínea
(AMARAL et al., 1988), miotóxica sistêmica, causando lesões de fibras musculares
esqueléticas e rabdomiólise generalizada (AMARAL et al., 1986; AZEVEDO
MARQUES et al., 1985), além da hemolítica “in vitro” (ROSENFELD et al., 1960-62;
KELEN et al., 1960-62).
Apesar de sua letalidade, ainda não se sabe qual é a quantidade de
veneno inoculada em um acidente, pois existem vários fatores como tamanho da
18
serpente, tempo decorrido entre uma picada e outra, idade, saúde, nutrição da
serpente e o local da picada que podem interferir na quantidade de veneno
inoculada (ARAÚJO; BELLUOMINI, 1960-62; STORER et al., 2002). Segundo
Rosenfeld et al. (1960-62) a quantidade máxima de veneno extraída da espécie
Crotalus durissus terrificus foi de 50 mg em 75% das serpentes estudadas.
O quadro clínico causado por veneno crotálico, habitualmente
apresenta manifestações locais discretas como a dor, eritema e edema moderado a
inaparente. Nishioka et al. (2000) relataram o aparecimento de abscesso no local da
picada, no entanto, esta complicação é rara. Os efeitos de maior importância clínica
e gravidade são os sistêmicos relacionados aos neurotóxicos, miotóxicos,
coagulantes e hemolíticos além das alterações hematológicas, nefrotóxicas,
imunológicas e hepatotóxicas (PINHO; PEREIRA, 2001).
Os efeitos neurotóxicos se caracterizam por ataxia, fasciculações,
paralisia muscular flácida, ptose palpebral, midríase, disfagia, sialorréia, vômito e
diarréia (AZEVEDO MARQUES et al., 1987; BARRAVIERA, 1994).
Amaral et al. (1991) relataram três casos de pacientes humanos que
apresentaram comprometimento da função respiratória além de sinais neurológicos.
Segundo os autores, todos os pacientes apresentaram dispnéia, taquipnéia e
movimentos respiratórios superficiais. Dos três casos, dois apresentaram
insuficiência respiratória aguda, sendo que no primeiro houve parada respiratória e o
segundo evoluiu para coma profundo atribuído à hipóxia cerebral secundária às
crises convulsivas que apresentou durante o período de internação, vindo a óbito 10
meses após o acidente ofídico.
Em outro trabalho, foram analisados os prontuários de pacientes
picados por C. durissus e atendidos no Hospital Vital Brasil, no Instituto Butantan e
dentre os efeitos neurotóxicos, os mais freqüentes foram ptose palpebral, diplopia,
visão turva, midríase, vômitos, sonolência e insuficiência respiratória grave (JORGE;
RIBEIRO, 1992).
Lago et al. (2000), em trabalho experimental com veneno de Crotalus
durissus terrificus em fêmeas bovinas, descrevem alterações comportamentais como
inquietação e desconforto na primeira hora após a inoculação do veneno crotálico.
No final da 2ª hora, os animais apresentavam apatia com cabeça baixa, letargia e
edemaciação discreta no local da inoculação. Na 10ª hora, houve diminuição da
sensibilidade superficial, do tônus muscular com aparecimento de incoordenação
19
motora, decúbito esternal e diminuição dos reflexos patelar e gastrocnêmico. Na 14ª
hora, observaram-se movimentos de "pedalagem" e diminuição da sensibilidade
profunda. Na 16ª hora, observou-se paralisia flácida dos membros pélvicos e na 20ª
hora, dispnéia, sialorréia e ocorrência das primeiras mortes.
Nogueira et al. (2007) relatam, em cães, o aparecimento de ataxia,
sedação leve a moderada, paralisia muscular flácida generalizada, mialgia
generalizada, paralisia do globo ocular, ptose mandibular, dificuldade de deglutição e
de fonação além de sialorréia, vômito e diarréia.
O efeito miotóxico do veneno crotálico se caracteriza por rabdomiólise,
liberação de mioglobina e mialgia generalizada. É observado aumento de enzimas
marcadoras de lesão muscular como creatinoquinase (CK), lactato desidrogenase
(LDH) e aspartato aminotransferase (AST). A mioglobinemia e mioglobinúria
constituem as manifestações clínicas mais evidentes de rabdomiólise (AZEVEDO-
MARQUES et al., 1985; JORGE; RIBEIRO, 1992).
Ribeiro et al. (1998) analisaram as notificações pertencentes à
Secretaria da Saúde do Estado de São Paulo, de 13 pacientes que faleceram por
envenenamento crotálico no período de 1988 a 1993 e observaram em 84,6%
destes, a presença de mioglobinúria e necrose muscular.
Em um relato de caso sobre acidente crotálico em uma cadela
gestante, avaliaram as alterações clínicas conseqüentes, em que foi possível
determinar edema discreto no local da picada sem sinais de mialgia local. O teste
para determinação da presença de mioglobina na urina foi positivo e os valores das
enzimas CK e AST mostraram elevações significativas quatro horas após o acidente.
O animal foi tratado com soroterapia e terapia de suporte apresentando melhora total
do quadro clínico após três dias da terapia e foi acompanhado durante todo o
período gestacional. Não foi verificada nenhuma alteração nos neonatos que foram
acompanhados até os 60 dias de idade (COLLICCHIO et al., 2002).
Bucaretchi et al. (2002) relataram 31 casos de crianças vítimas de
acidente crotálico, e observaram elevação nos valores de CK, LDH e mioglobinúria
em 14 delas.
Nogueira e Sakate, (2006) observaram mioglobinúria em cães
intoxicados experimentalmente com veneno crotálico nos tempos 6, 24 e 48 horas
após inoculação do veneno. Em 2007, outro trabalho de Nogueira et al. também
relatam mioglobinúria em cães.
20
A insuficiência renal aguda (IRA) é a principal complicação do paciente
que sobrevive às ações iniciais do veneno crotálico, pois ações indiretas do veneno
sobre as células renais podem acontecer em decorrência da mioglobinúria
secundária a rabdomiólise e provocar obstrução tubular por cilindros de mioglobina e
consequentemente necrose tubular aguda (MAGALHÃES et al., 1986;
SOERENSEN, 1990).
Amaral et al. (1991) relataram dois casos de pacientes humanos
atendidos no Centro de Tratamento Intensivo do Hospital das Clínicas do UFMG,
onde diagnóstico de acidente crotálico baseou-se na ausência de alterações no local
da picada e nos sinais decorrentes das ações neurotóxicas, miotóxicas e
nefrotóxicas do veneno crotálico. Ambos desenvolveram insuficiência renal aguda e
necessitaram de diálise peritoneal.
Em analise de prontuários de pacientes picados por serpentes da
espécie C. durissus terrificus e atendidos no Hospital Vital Brasil do instituto
Butantan, Jorge e Ribeiro, (1992) relataram que nove pacientes foram submetidos à
diálise devido à instalação de insuficiência renal aguda.
Bucaretchi et al. (2002) também relatam que três crianças de um total
de seis, atendidas após seis horas do acidente crotálico, evoluíram para insuficiência
renal aguda sendo que duas delas necessitaram de hemodiálise.
Monteiro et al. (2001) e Martins et al. (2002) relatam que a crotoxina é
o componente principal do veneno responsável pela nefrotoxidade.
Além disso, sabe-se que complicações secundárias como
desidratação, hipotensão arterial, choque e acidose metabólica associados à
rabdomiólise podem contribuir para a instalação da lesão renal (MAGALHÃES et al.,
1986).
A alteração na coagulação ocorre pelo consumo do fibrinogênio e
conseqüente aumento no tempo de coagulação e incoagulabilidade sanguínea.
Geralmente não há redução do número de plaquetas, mas ocorre indução de
agregação plaquetária in vitro. As manifestações hemorrágicas, quando presentes,
são discretas (AMARAL et al., 1980; JORGE; RIBEIRO, 1988).
Jorge e Ribeiro, (1992) analisaram prontuários de 216 pacientes
humanos que foram submetidos a exames laboratoriais e dentre as manifestações
detectadas, a alteração da coagulação sanguínea ocorreu em 104 pacientes, tendo
sido observada também, incoagulabilidade em 82 deles.
21
Ribeiro et al. (1998) analisaram os prontuários de 43 pacientes
humanos que evoluíram para óbito devido ao envenenamento crotálico e
observaram que 34 destes apresentaram alterações no tempo de coagulação.
Fonseca et al. (2002) estudaram 6 pacientes que apresentaram sinais
clínicos de picada por Crotalus durissus terrificus e detectaram hemorragia no local
da picada em 4 pacientes usando imagens de ressonância magnética.
Collicchio et al. (2002) relatam incogulabilidade em cadela picada pela
serpente Crotalus durissus terrificus até 24 horas após intoxicação.
Nogueira e Sakate, (2006) intoxicaram experimentalmente cães com
veneno crotálico e observaram incoagulabilidade sanguínea em 100% dos animais
seis horas após intoxicação e retorno à normalidade do tempo de coagulação, para
a espécie, oito horas após a soroterapia antiofídica.
Nogueira et al. (2007) relataram diminuição do fibrinogênio,
incoagulabilidade sangüínea, aumento no tempo de protrombina e tromboplastina
parcial ativada em cães intoxicados experimentalmente com veneno crotálico.
As alterações hematológicas encontradas no acidente crotálico estão
relacionadas aos eritrócitos e leucócitos (SLOTTA; BORCHET, 1954; COSTA et al.,
1989).
Barraviera, (1993) relata, em pacientes humanos, aumento no número
de leucócitos e neutrófilos concordando com os achados de outros autores como
Azevedo-Marques et al. (1990), Rosenfeld, (1991), Jorge e Ribeiro, (1992).
Em 1995, Barraviera et al. demonstraram aumento de citocinas como
IL-1 (interleucina 1), IL-6 e IL-8 em acidente crotálico caracterizando a reação
inflamatória.
Nogueira e Sakate, (2006) e Nogueira et al. (2007) relatam leucocitose
com neutrofilia seis horas após intoxicação crotálica em cães.
A hepatotoxicidade foi proposta pela primeira vez por Barraviera et al.
(1989) em pacientes humanos e em 1995 o mesmo autor e seus colaboradores
relatam, em 32 pacientes, aumento dos níveis séricos de alanina aminotransferase a
aspartato aminotransferase na maioria dos doentes.
Em 1997, Perez et al. relatam, em ratas inoculadas com veneno
crotálico, comprometimento do tecido hepático com congestão e dilatação de
grandes vasos sangüíneos.
22
Nos achados anatomopatológicos, são relatados, em diferentes
espécies animais degeneração e necrose musculares no local da inoculação do
veneno e em áreas distantes deste local (DEMPSTER et al., 1980; AZEVEDO
MARQUES et al. 1985), áreas focais e multifocais bem demarcadas de coloração
esbranquiçada decorrentes de degeneração e necrose no local da picada, infiltrado
inflamatório, hialinização de fibras, edema, hemorragia, atividade miorregenarativa
discreta e linfoadenopatia reativa próxima ao local de inocualação do veneno após
uma semana (NOGUEIRA et al. 2007), lesões hemorrágicas no sistema nervosos
central, nos pulmões e glomerulonefrite (BELLUOMINI et al. 1983), além de
alterações degenerativas hepáticas (AMORIM et al. 1951; BARRAVIERA et al. 1995)
3.3 Tratamento do Acidente Crotálico
Vários fatores secundários aos efeitos da peçonha no organismo
contribuem para aumentar o nível de gravidade do acidente ofídico, entre eles
destacam-se idade, peso e condições gerais do organismo do indivíduo. A
quantidade de veneno inoculada, o local da picada e o tempo decorrido até o
tratamento também podem levar ao agravamento do quadro clínico da vítima
(MURTAUGH; KAPLAN, 1992).
Os efeitos tóxicos no acidente crotálico diferem dos efeitos causados
por outras serpentes de interesse médico, possibilitando a identificação do gênero
com base nas características clínicas do paciente acometido (PINHO; PEREIRA,
2001).
A Fundação Nacional de Saúde (BRASIL, 2001) caracteriza o acidente
crotálico como leve, moderado e grave para humanos baseando-se nas
manifestações clínicas e sugere o tratamento com soro anticrotálico ou
antibotrópico-crotálico nas doses de 5, 10 e 20 ampolas respectivamente.
Outros autores sugerem que seja utilizada, para animais, a quantidade
de soro suficiente para neutralizar 50mg de veneno crotálico, considerando que o
tratamento com soro se baseia na capacidade neutralizante sobre o veneno
inoculado e que a quantidade inoculada seja a mesma obtida em primeira extração
(ROSENFELT et al., 1960-62; BICUDO, 1994).
23
A confirmação laboratorial do acidente pode ser feita por meio de
antígenos do veneno crotálico que pode ser detectado no sangue por meio da
técnica de ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) ou por achados nos
exames laboratoriais como valores elevados de creatinaquinase (CK),
desidrogenase lática (LDH) e alanino aminotransferase (ALT), tempo de coagulação
freqüentemente prolongado, presença de mioglobina, com ausência de hematúria,
elevação dos níveis de uréia, creatinina, ácido úrico, fósforo, potássio e diminuição
da calcemia na fase oligúrica da IRA. (PINHO; PEREIRA, 2001).
O único tratamento de eficácia comprovada experimentalmente para
neutralizar a ação da peçonha crotálica é a soroterapia heteróloga ou soroterapia
antiveneno (SAV). Usam-se dois tipos de soros em vítimas de acidente crotálico: o
soro antiofídico botrópico-crotálico (SABC) ou o soro específico anticrotálico (SAC).
A dose utilizada deve ser a mesma para adultos e crianças ou para pequenos e
grandes animais, visto que o objetivo do tratamento é neutralizar a maior quantidade
de veneno circulante, independentemente do peso do paciente. A OMS recomenda
que os soros sejam apresentados na forma liofilizada, mais estável e de fácil
armazenamento. Entretanto, no Brasil, os soros são produzidos e apresentados
também na forma líquida. As ampolas devem ser conservadas em geladeira à
temperatura de 4 a 8 graus centígrados positivos, evitando-se o congelamento, por
no máximo três anos (BRASIL, 2001). Os principais laboratórios que produzem
esses imunoderivados são o Instituto Butantan – São Paulo, Fundação Ezequiel
Dias – Minas Gerais e Instituto Vital Brazil – Rio de Janeiro.
A via de administração recomendada é a intravenosa (IV). As vias
subcutânea e intramuscular podem ser consideradas quando houver restrições do
uso da via intravenosa (SAKATE, 2002).
A soroterapia dever ser realizada em conjunto com o tratamento de
suporte que consiste em estabilizar as funções vitais do paciente acometido. A
hidratação adequada é de fundamental importância na prevenção da insuficiência
renal aguda. O pH urinário deve ser mantido acima de 6,5, pois a urina ácida
potencializa a precipitação intratubular de mioglobina. Assim, a alcalinização da
urina deve ser feita pela administração parenteral de bicarbonato de sódio (BRASIL,
2001; NOGUEIRA et al., 2007).
Os efeitos neurotóxicos, causados pelo veneno crotálico, caracterizam
o quadro de anorexia, dificuldade de mastigação, paralisia dos músculos faciais e
24
depressão grave, necessitando a realização da alimentação parenteral ou enteral
com alimento líquido ou pastoso até que o animal se recupere e volte a se alimentar
normalmente. Durante o período de sedação do animal, deve-se oferecer
constantemente água em pequenas quantidades para evitar o ressecamento da
mucosa bucal. A aplicação de colírio ou solução fisiológica na córnea ajuda a evitar
o ressecamento e aparecimento de úlceras (SAKATE, 2002).
Não são recomendados o uso de torniquete ou garrote, cortar ou
perfurar o local da picada, colocar materiais contaminantes (folhas, pó de café,
argila) e oferecer bebida alcoólica ou outras substâncias, pois esses procedimentos
podem agravar o quadro clínico do paciente (AMARAL et al., 1998; BRASIL, 2001).
Como, no local da picada, as manifestações são mínimas, com sinais leves,
recomenda-se adequada assepsia e analgésicos se necessários. O uso de
antibiótico está condicionado à evidência de infecção, lembrando que os germes
patogênicos podem provir da boca da serpente, da pele do acidentado ou do uso de
contaminantes sobre o ferimento (PINHO; PEREIRA, 2001; BRASIL, 2001).
As propriedades antiofídicas de alguns fitoterápicos são citadas na
literatura como tratamento complementar à soroterapia, indicando uma diversidade
grande de compostos químicos com diversas atividades farmacológicas de interesse
médico-científico. Batina et al. (2000) relatam a capacidade do extrato de
Tabernaemontana catharinensis, popularmente conhecida como “leiteiro de vaca”,
de inibir a ação letal do veneno da serpente Crotalus durissus terrificus.
Experimentalmente os pesquisadores inocularam doses letais de veneno crotálico
em ratos Wistar e, após 30 minutos, estes foram tratados com o extrato da planta.
Em outro momento, veneno e o extrato foram administrados juntos. A
Tabernaemontana catharinensis mostrou-se eficaz na inibição da letalidade do
veneno crotálico, principalmente no segundo momento estudado.
A Mikania glomerata, popularmente conhecida como “guaco”, é uma
planta medicinal brasileira empregada em tratamentos contra tosse e problemas
respiratórios. Encontram-se comercializados, principalmente nas formas
farmacêuticas de extrato fluido, tintura e xarope (DI STASI, 1994; PANIZZA, 1997).
O estudo químico da Mikania glomerata mostra as seguintes
substâncias isoladas: cumarina (1,2-benzopirano), ácido caurenóico, ácido
cinamolglandiflóroco, estigmasterol, friedelina, e lupeol (OLIVEIRA et al., 1984;
VILEGAS et al., 1997; VENEZIANI et al., 1999). A cumarina (1,2-benzopirano) é o
25
constituinte majoritário do vegetal e principal princípio ativo que contribui para o
efeito farmacológico (LEITE et al., 1993).
Maiorano et al. (2005) estudaram in vitro a capacidade do extrato
aquoso de Mikania glomerata em inibir as atividades farmacológicas e enzimáticas
do veneno crotálico e botrópico in vitro. Segundo os autores, a atividade PLA
2
induzida pelo veneno da serpente Crotalus durissus terrificus foi totalmente inibida
pelo extrato aquoso de Mikania glomerata, enquanto, pelo veneno da serpente
Bothrops jararacussu, a inibição não foi observada. A respeito do edema, o extrato
aquoso e desidratado inibiu aproximadamente 40% dos efeitos induzidos pelo
veneno crotálico. Os resultados mostraram também, que a atividade hemorrágica do
veneno da Bothrops alternatus foi 50-80% inibida pelo extrato aquoso e desidratado
respectivamente. Ainda segundo os autores, os extratos de Mikania glomerata são
poderosos agentes inibidores da atividade coagulante causada pela degradação
considerável de fibrinogênio e de outros fatores da coagulação.
26
4 MATERIAL E MÉTODOS
Local: o experimento foi realizado no Biotério Central da Universidade
do Oeste Paulista – UNOESTE. O projeto foi protocolado e aprovado pelo Comitê de
Ética em Pesquisa da Unoeste com o número 036/06.
Animais: foram utilizados ratos Wistar de padrão sanitário
convencional controlado, fêmeas, com peso variando de 250 a 350g provenientes do
Biotério Central da Universidade do Oeste Paulista – UNOESTE, Presidente
Prudente-SP.
Os animais foram mantidos isolados em gaiolas metabólicas individuais
no Biotério Central da Universidade do Oeste Paulista – UNOESTE por um período
não inferior a uma semana antes do experimento. Água e ração foram fornecidas à
vontade.
Grupos experimentais: foram constituídos três grupos experimentais
com 18 animais em cada grupo:
• Grupo GC: animais submetidos aos mesmos procedimentos
experimentais dos grupos GVS e GVSM, administrando-se placebo
via intraperitoneal para representar o tratamento soroterápico,
intramuscular para a inoculação de veneno e oral para a
administração do extrato aquoso de Mikania glomerata.
• Grupo GVS: animais intoxicados experimentalmente com veneno
da serpente Crotalus durissus terrificus via intramuscular e tratados
com soro antiofídico botrópico-crotálico via intraperitoneal.
• Grupo GVSM: animais intoxicados experimentalmente com veneno
da serpente Crotalus durissus terrificus via intramuscular e tratados
com soro antiofídico botrópico-crotálico via intraperitoneal e com
extrato aquoso de Mikania glomerata via oral.
Momentos experimentais: a avaliação clínica e tempo de coagulação
foram realizados em três diferentes momentos:
• M1: 30 minutos após inoculação do veneno (n=6).
27
• M2: 6 horas após inoculação do veneno (n=6).
• M3: 24 horas após inoculação do veneno (n=6).
Veneno: foi fornecido pelo Centro de Estudos de Venenos e Animais
Peçonhentos – CEVAP, Universidade Estadual Paulista (UNESP) – Campus
Botucatu-SP.
O veneno estava na concentração de 2mg/mL e a dose utilizada,
encontrada após realização de experimento piloto, foi de 10mg/kg. A inoculação foi
realizada via intramuscular no terço médio da face lateral do membro posterior
esquerdo do rato.
Soroterapia: foi realizada com soro antiofídico botrópico-crotálico
da
Vencofarma
®
comercializado em ampolas de 10mL. O soro foi administrado pela via
intraperitoneal seis horas após a administração do veneno crotálico. A dose foi
calculada de acordo com a quantidade de veneno administrada e de acordo com
Bicudo (1994) onde refere que 1mg do soro antiofídico botrópico-crotálico da
Vencofarma
®
neutraliza 50mg de veneno crotálico.
Extrato aquoso de Mikania glomerata foi preparado no laboratório de
farmacologia da Faculdade Adamantinense Integrada – FAI, Adamantina-SP. Foram
colhidas as folhas do guaco (Mikania glomerata.) a qual foi cultivada em área
preparada e sob observação constante. A preparação do extrato foi de acordo com a
Farmacopéia Brasileira (SILVA, 1929). A solução aquosa foi utilizada na
concentração de 10% e administrado via oral na dose de 1mL, de hora em hora,
totalizando cinco administrações após a inoculação do veneno crotálico.
Avaliação clínica: realizada em todos os momentos, consistiu na
avaliação da freqüência cardíaca (bpm), freqüência respiratória (mpm), temperatura
(
o
C), presença de edema por meio da mensuração dos membros posteriores direito
e esquerdo com paquímetro (cm), observação da locomoção considerando os
escores: 1-presente, 2-ausente, grau de sedação, escores: 1-leve (levanta-se
quando estimulado), 2-moderada (reage a estímulos mas permanece em decúbito),
3-grave (não reage a estímulos).
28
Avaliação laboratorial: determinação da presença ou ausência de
alteração de coagulação, pelo método do tubo capilar (JAIN, 1993), após contenção
do animal em caixa de madeira e posterior incisão da extremidade da cauda e
colheita de sangue.
Análise estatística: para as variáveis paramétricas, edema do
membro direito, edema do membro esquerdo, temperatura, freqüências cardíaca e
respiratória, foi realizada a Análise de Variância com contrastes com o método
Tukey. Para as variáveis não paramétricas como grau de sedação e locomoção, foi
realizada a análise Kruskal-Wallis com contrastes com o método Dun (CURI, 1997).
29
5 RESULTADOS
Após a inoculação do veneno crotálico, os animais apresentaram sinais
de desconforto, inquietação, retração do membro acometido caracterizando dor no
membro inoculado e evitavam a locomoção. Também foi observado quadro de
anorexia e oligúria durante os momentos de experimentação.
Os animais dos grupos GVS e GVSM apresentaram edema moderado
quando comparados com o grupo controle nos dois membros posteriores sendo que
o membro posterior esquerdo, inoculado com veneno, apresentou edema mais
acentuado em relação ao membro posterior direito. Nos animais do grupo GVS, no
membro esquerdo foi observado edema acentuado estatisticamente significativo
(p<0,05) nos momentos M1, M2 e M3 quando comparado ao grupo controle. Para os
animais do grupo GVSM houve edema nos momentos M1 e M3, porém mais
acentuado no momento M1. Comparando os grupos GVS e GVSM, observou-se que
o edema foi maior nos animais do grupo GVS no momento M2. Na avaliação do
membro direito, foi observado edema moderado nos animais dos grupos GVS no
momento M2 e no grupo GVSM, no momento M1 e M3 quando comparados ao
grupo GC (Tabela 1).
Na avaliação da temperatura corpórea, houve diminuição significativa
(p<0,05) para os animais do grupo GVS no momento M2 em relação ao momento
M1 e diminuição no momento M2 para os animais dos grupos GVS e GVSM quando
comparado ao grupo controle. Apesar de não serem estatisticamente significativos,
os valores mantiveram-se abaixo do valor de referência para a espécie no momento
M3 para os animais dos dois grupos (Tabela 1).
Quanto à freqüência respiratória, observou-se que os animais
apresentaram dispnéia após inoculação do veneno, de intensidade leve. No grupo
GVS, os animais apresentaram pequena diminuição da freqüência no momento M2
em relação ao momento M1 e estatisticamente significativo (p<0,05) quando
comparado ao momento M3, mas os valores permaneceram dentro dos de
referência para a espécie. Os animais do grupo GVSM não apresentaram diminuição
da freqüência respiratória em nenhum momento não havendo diferença na
comparação entre os momentos dentro do mesmo grupo nem na comparação com o
grupo controle (Tabela 1).
30
Na avaliação da freqüência cardíaca e comparação entre os grupos
observou-se um diminuição não significativa para os animais do grupo GVS e GVSM
no momento M3 quando comparado ao grupo controle. Apesar de não ser
estatisticamente significativo, o grupo GVS apresentou maior diminuição da
freqüência cardíaca em todos os momentos quando comparado com o grupo GVSM.
Comparando os momentos dentro do mesmo grupo, observou-se que no grupo GVS
houve diminuição estatística significativa (p<0,05) no momento M3 quando
comparado ao momento M1 e para os animais do grupo GVSM diminuição
significativa (p<0,05) no momento M3 quando comparado ao momento M1 (Tabela
1).
TABELA 1 – Valores das médias e desvio padrão das variáveis, edema membro
esquerdo, edema membro direito, temperatura, freqüência respiratória (FR),
freqüência cardíaca (FC) segundo grupos e momentos dos animais dos grupos
controle (GC), grupo veneno + soro (GVS) e grupo veneno + soro + Mikania
glomerata (GVSM)
Momentos Variáveis Grupos
M1 M2 M3
Edema de membro
esquerdo*
GC
GVS
GVSM
0,77 ± 0,10 Aa
1,32 ± 0,12 Ba
1,33 ± 0,16 Ba
0,88 ± 0,16 Aa
1,53 ± 0,20 Ba
1,08 ± 0,13 Ab
0,77 ± 0,08 Aa
1,15 ± 0,29 Bab
1,28 ± 0,10 Bab
Edema de membro
direito
GC
GVS
GVSM
0,67 ± 0,08 Aa
0,77 ± 0,15 Aa
0,95 ± 0,06 Ba
0,77 ± 0,08 Aa
1,00 ± 0,13 Ba
0,78 ± 0,04 Ab
0,68 ± 0,08 Aa
0,85 ± 0,21 Aba
0,90 ± 0,10 Ba
Temperatura (
o
C)
GC
GVS
GVSM
37,1 ± 0,2 Aa
37,3 ± 0,7 Aa
36,1 ± 1,7 Aa
37,2 ± 0,3 Aa
34,6 ± 1,6 Bb
35,2 ± 1,1 Ba
36,6 ± 0,8 Aa
35,8 ± 0,9 Aab
35,8 ± 0,9 Aa
Freqüência respiratória
(mpm)
GC
GVS
GVSM
104,3 ± 17,4 Aa
112,7 ± 25 Aa
96 ± 17,2 Aa
101,7 ± 17,6 Aa
90,3 ± 16,4 Aab
119,7 ± 25,1 Aa
116,3 ± 24,6 Aa
121,0 ± 8,9 Aa
119,2 ± 18,1 Aa
Freqüência cardíaca
(bpm)
GC
GVS
GVSM
218 ± 11,2 Aa
212 ± 18,7 Aa
213 ± 17,8 Aa
218 ± 13,1 Aa
202 ± 43,1 Aab
210 ± 15,1 Aab
200 ± 14,3 Aa
126 ± 77,2 Ab
179 ± 30,8 Ab
Legenda: Letras maiúsculas: comparam grupos em cada momento. Letras minúsculas: comparam
momentos em cada grupo. Médias seguidas de letras iguais não diferem significativamente (p>0,05).
Valores normais: Temperatura (
o
C) 35,9-37,5; Freqüência respiratória (mpm) 70-120; Freqüência
cardíaca (bpm) 215-450 (Valores de referência do Biotério Central da Universidade do Oeste Paulista
- UNOESTE). M1: 30 minutos após inoculação do veneno; M2: 6 horas após inoculação do veneno;
M3: 24 horas após inoculação do veneno. * Membro que recebeu veneno.
Na avaliação do grau de sedação, os animais do grupo GVS
apresentaram grau de sedação moderada nos momentos M2 e M3 e os animais do
grupo GVSM no momento M2, sendo estatisticamente significativo (p<0,05) no
31
momento M2 dos dois grupos quando comparado com o grupo controle e não houve
diferença estatística significativa na comparação entre os dois grupos nos mesmos
momentos. Na comparação dos momentos dentro do mesmo grupo observou-se que
o grau de sedação foi mais intensa seis horas após administração do veneno
crotálico para os dois grupos (Tabela 2).
Em relação à locomoção, clinicamente, os animais apresentaram
diminuição da mesma imediatamente após inoculação do veneno. No momento M2,
nos grupos GVS e GVSM houve diminuição da locomoção significativa (p<0,05) em
relação ao grupo controle e progrediu para ataxia e decúbito lateral. Quando
comparados os grupos GVS e GVSM, não foi observada diferença estatística
significativa em nenhum dos momentos avaliados, mas clinicamente os animais do
grupo GVSM recuperaram-se melhor no M3 em relação ao mesmo momento do
grupo GVS (Tabela 2).
TABELA 2 – Valores das medianas e valores máximos e mínimos das variáveis,
grau de sedação e locomoção segundo grupos e momentos dos
animais dos grupos controle (GC), grupo veneno + soro (GVS) e grupo
veneno + soro + Mikania glomerata (GVSM)
Momentos Variáveis Grupos
M1 M2 M3
Grau de sedação* GC
GVS
GVSM
1,0 (1,0;1,0) Aa
1,0 (1,0;1,0) Aa
1,0 (1,0;1,0) Aa
1,0 (1,0;1,0) Aa
2,0 (1,0;2,0) Bab
2,0 (2,0;2,0) Bb
1,0 (1,0;1,0) Aa
1,5 (1,0;2,0) Aa
1,0 (1,0;1,0) Aa
Locomoção* GC
GVS
GVSM
1,0 (1,0;1,0) Aa
1,0 (1,0;1,0) Aa
1,0 (1,0;1,0) Aa
1,0 (1,0;1,0) Aa
2,0 (1,0;2,0) Bb
2,0 (1,0;2,0) Bb
1,0 (1,0;1,0) Aa
1,0 (1,0;2,0) Aa
1,0 (1,0;1,0) Aa
LEGENDA: Letras maiúsculas: comparam grupos em cada momento. Letras minúsculas: comparam
momentos em cada grupo. Médias seguidas de letras iguais não diferem significativamente (p>0,05).
*
Grau sedação: 1-leve (levanta-se quando estimulado), 2-moderada (reage a estímulos, mas
permanece em decúbito), 3-grave (não reage a estímulos).
*
Locomoção: 1-presente, 2-ausente. M1:
30 minutos após inoculação do veneno; M2: 6 horas após inoculação do veneno; M3: 24 horas após
inoculação do veneno.
O tempo de coagulação se alterou apenas em dois animais sendo um
animal do grupo GVS momento M1 e um animal do grupo GVSM momento M3,
desta forma não houve diferença significativa entre momentos para cada grupo nem
entre grupos para cada momento.
32
6 DISCUSSÃO
O edema moderado observado em maior intensidade nos animais do
grupo GVS no M2 em relação ao mesmo momento grupo GVSM, aparece em
decorrência da ação direta do veneno sobre a musculatura, principalmente
relacionada à ação da crotoxina e fosfolipase A
2
e ação de uma série de substâncias
liberadas na fase aguda inflamatória como interleucinas, bradicinina e histamina
(KINI; EVANS, 1989; BARRAVIERA, 1994). A ação miotóxica pode provocar
mialgias local e generalizada o que pode acarretar em mioglobinúria e urina cor de
“coca-cola” (AZEVEDO MARQUES et al., 1985). Os resultados observados neste
estudo concordam com uma série de autores que também citam o aparecimento de
edema que pode variar de intensidade leve a moderado. Hudelson e Hudelson,
(1995) citam a ação miotóxica local com presença de necrose de coagulação e
necrose miolítica em camundongos. Collicchio et al. (2002) e Nogueira et al. (2007)
também citam o aparecimento de edema discreto do membro acometido de cães.
Nos animais do grupo GVSM o edema observado foi menos intenso no M2, o que
mostra a ação da Mikania glomerata concordando com os resultados de Maiorano et
al. (2005) que relatam, em estudo “in vivo”, que o extrato de Mikania glomerata pode
inibir cerca de 40% da intensidade do edema em camundongos Swiss.
Os transtornos de locomoção, ataxia e sedação aparecem em
decorrência da ação neurotóxica do veneno principalmente das frações crotoxina e
crotamina que atuam tanto em sistema nervoso central como periférico (ARAÚJO;
BELLUOMINI, 1960-62; AZEVEDO MARQUES et al., 1985; BARRAVIERA, 1994;
VIEIRA et al., 2006). Os resultados deste estudo concordam com os achados de
Belluomini et al., (1982), que relatam, em bovinos, dificuldade de locomoção e de
ficar em estação após 2 a 6 horas da inoculação do veneno crotálico. Lago et al.
(2000) que realizaram envenenamento experimental crotálico também em bovinos
relatam dificuldades de locomoção, incoordenação motora e decúbito esternal após
10 horas da inoculação do veneno. Collicchio et al. (2002) relatam o caso de uma
cadela gestante intoxicada pela picada da serpente Crotalus durissus terrificus que
apresentou dificuldades de se manter em estação duas horas após o acidente.
Nogueira e Sakate, (2006) e Nogueira et al. (2007) também relatam ataxia e
sedação leve nos animais após quatro horas e seis horas respectivamente da
33
administração do veneno crotálico. Segundo Maiorano et al. (2005), em estudos
realizados com o extrato desidratado da raiz de Mikania glomerata, foi observada a
capacidade da planta em inibir 100% da atividade fosfolipase A
2
do veneno crotálico.
Nossos resultados diferem dos resultados de Maiorano et al. (2005) e não mostram
diferenças significativas entre os grupos GVS e GVSM, provavelmente pela
diferença da parte da planta utilizada para preparo do extrato e tratamento dos
animais.
A diminuição da temperatura observada pode estar relacionada ao
quadro de choque que pode se instalar devido à liberação de agentes vasoativos na
anafilaxia. A síndrome determina distúrbio circulatório caracterizado por hipotensão
arterial ou artério-venosa comprometendo a perfusão tecidual (RAISER, 2002). Lago
et al. (2000) relatam diminuição da temperatura 20 horas após a inoculação do
veneno em bovinos. Nogueira e Sakate, (2006) relatam diminuição significativa da
temperatura 6 a 24 horas após intoxicação experimental pelo veneno crotálico em
cães tratados com soro antiofídico botrópico-crotálico. Em outro trabalho envolvendo
cães tratados com soro antiofídico, fluidoterapia e alcalinização da urina, os autores
relatam que a avaliação da temperatura não mostrou nenhuma diferença significativa
entre momentos para cada grupo nem entre grupos para cada momento
(NOGUEIRA et al., 2007).
Dispnéia, diminuição das freqüências respiratória e cardíaca
observadas principalmente nos animais do grupo GVS no momento M2, relacionam-
se às ações miotóxica e neurotóxica do veneno crotálico e concordam com os
achados de Amaral et al. (1991) que relatam insuficiência respiratória em três
pacientes humanos que apresentaram dispnéia e taquipnéia, sendo que dois
pacientes evoluíram para insuficiência respiratória aguda, necessitando de
intubação. Jorge e Ribeiro, (1992) relatam quadro de insuficiência respiratória aguda
que necessitou intubação e ou traqueostomia em três pacientes, sendo duas delas
crianças. Em estudo realizado por Soeresen et al. (1995) com veneno crotálico em
bovinos, os animais apresentaram diminuição na freqüência cardíaca. Outro
trabalho com cães também relata a diminuição da freqüência cardíaca quatro horas
após inoculação experimental de veneno crotálico em todos os grupos estudados,
apesar dos valores estarem dentro da normalidade para a espécie (Nogueira e
Sakate, 2006). Nogueira et al. (2007), em intoxicação experimental, relatam a
diminuição das freqüências respiratória cardíaca em cães 6 horas após inoculação
34
do veneno, mantendo-se baixa até 24 horas e 48 horas respectivamente nos
animais intoxicados com veneno e também nos animais intoxicados e tratados com
soroterapia, fluidoterapia e alcalinização da urina. Os animais do grupo GVSM
mantiveram a freqüência respiratória dentro da normalidade e tiveram uma menor
diminuição da freqüência cardíaca comprovando a ação da Mikania glomerata sobre
as ações miotóxica e neurotóxica do veneno crotálico concordando com os achados
de Maiorano et al. (2005) que mostram a eficiência do extrato aquoso de Mikania
glomerata para inibir a ação da PLA
2
do veneno crotálico.
35
7 CONCLUSÃO
Os animais do grupo GVSM apresentaram sinais clínicos mais estáveis
em relação ao grupo GVS, seis horas após inoculação do veneno, em temperatura,
freqüência respiratória e cardíaca, grau de sedação e edema nos membros
posteriores direito e esquerdo, o que não foi observado nos demais momentos,
sendo necessários mais estudos com outras espécies mais sensíveis ao veneno da
serpente Crotalus durissus terrificus.
36
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