( PDF ) Azitromicina no tratamento da erlichiose monocítica em cães naturalmente infectados

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO DO SUL

MESTRADO EM CIÊNCIA ANIMAL

AZITROMICINA NO TRATAMENTO DA ERLICHIOSE

MONOCÍTICA EM CÃES NATURALMENTE INFECTADOS

Daniela Torres Cantadori

CAMPO GRANDE

MATO GROSSO DO SUL – BRASIL

JULHO – 2008

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO DO SUL

MESTRADO EM CIÊNCIA ANIMAL

AZITROMICINA NO TRATAMENTO DA ERLICHIOSE

MONOCÍTICA EM CÃES NATURALMENTE INFECTADOS

Daniela Torres Cantadori

Orientadora Profa. Dra. Veronica Jorge Babo-Terra

Co-orientadora Profa Dra. Ana Luiza A. R. Osório

Dissertação apresentada à Universidade Federal

de Mato Grosso do Sul, como parte dos

requisitos do Programa de Pós-Graduação em

Ciência Animal para obtenção do título de

Mestre.

CAMPO GRANDE

MATO GROSSO DO SUL – BRASIL

JULHO - 2008

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Dedico este trabalho à minha família e aos meus amigos, por estarem sempre presentes nos

grandes momentos de minha vida.

AGRADECIMENTOS

Aos meus pais, Odécio e Marisa, pelo amor, paciência e zelo.

À minhas amigas Cláudia e Larissa pela ajuda, amizade e apoio nos momentos mais difíceis

desta jornada.

Às minhas irmãs, cunhados e sobrinhos pelo amor.

À minha orientadora Profa. Dra Veronica Jorge Babo-Terra, pela oportunidade, confiança e

amizade.

À minha co-orientadora Profa. Dra Ana Luiza A. R. Osório, pela atenção, dedicação e por

mais uma vez ter contribuído para a concretização de mais um sonho.

Às médicas veterinárias Thatianna Camillo Pedroso e Perla Noé pela amizade e apoio ao

projeto.

Ao médico veterinário Thalles Ovando pela amizade e apoio à coleta dos materiais.

Ao médico veterinário Paulo Felipe e toda sua equipe da Solvet, pelo apoio técnico e amizade.

Ao Prof. Jair Soares Madureira pelo incentivo e amizade.

Ao Centro de Controle de Zoonoses e seus funcionários, em especial ao Roberval, pela

atenção dedicada e disponibilidade dos animais.

Aos funcionários da UCDB, em especial ao Juvenil e Daniel, pelo auxílio com os animais.

À UCDB pela cedência das instalações e apoio técnico.

À médica veterinária Pamela pela ajuda na execução do projeto, pela responsabilidade e

amizade.

À médica veterinária Leizinara Lopes pelo apoio e amizade.

À Marilete Otaño Peixoto Ferencz, pela simpatia, paciência e prontidão.

Aos amigos, nem sempre tangíveis, mas sempre presentes, pela compreensão e motivação.

À Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia e a Universidade Federal de Mato Grosso

do Sul, pela formação e disponibilização de oportunidades.

Aos animais Sofia, Jack, Dumba, Benji, Preto, Rebeca, Chiquinho, Pitiço, Brava e

Branquinha, por se manterem carinhosos e amáveis.

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 - Punção de baço guiada por ultra-som ................................................................ 33

Figura 2 - Mórula de E. canis em monócito apresentando vacuolizações citoplasmáticas

(monócito ativado).............................................................................................................. 35

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 - Animais que apresentaram sinais clínicos no dia zero (0), antes do

tratamento; no dia 14, pós-tratamento, nos dois grupos experimentais. n=5 em cada

grupo ................................................................................................................................... 34

Tabela 2 - Alterações hematológicas observadas no dia zero (0), antes do tratamento; no

dia 14, pós-tratamento, nos dois grupos experimentais. n=5 em cada grupo .................... 35

Tabela 3 - Resultados da pesquisa de mórula e da PCR pré e pós-tratamento ................... 36

Tabela 4 - Médias ordenadas (± erro padrão) de mórulas e positividade na PCR pré e

pós-tratamento ..................................................................................................................... 36

LISTA DE ABREVIATURAS

AAG – Alfa-1-ácido-glicoproteína

ALT – Alanina aminotransferase

CCZ – Centro de Controle de Zoonozes

CRP- Proteína C-reativas

DNA – Ácido desoxirribonucléico

E. canis – Ehrlichia canis

E. chaffeensis – Ehrlichia chaffeensis

EDTA – Ácido etilenodiaminotetracético

ELISA – Imunoensaio de ligação enzimática

FAS – Fosfatase alcalina

Grupo C – Grupo controle, sem tratamento

Grupo T – Grupo tratado com azitromicina

IFI – Imunofluorescência indireta

IM – Via intramuscular

PCR – Reação em cadeia de polimerase

R. sanguineus – Rhipicephalus sanguineus

RNA – Ácido ribonucléico

SC- Via sub-cutânea

UCDB – Universidade Católica Dom Bosco

UNESP – Universidade Estadual Paulista

UV – Ultravioleta

VO – Via oral

WI – Western Immunoblotting

RESUMO

Os objetivos deste trabalho foram avaliar a eficácia do tratamento com azitromicina

em cães naturalmente infectados por E. canis e acompanhar a evolução clínico-hematológica

dos animais. Dez cães, com diagnóstico positivo para E. canis por meio do teste de Elisa Snap

4Dx, foram distribuídos em dois grupos, sem tratamento e tratamento com azitromicina, 20

mg/kg, via oral uma vez ao dia durante sete dias. Além do exame físico diário foram

realizados exames hematológicos, esfregaços de ponta de orelha para a pesquisa de mórulas e

nested PCR antes do tratamento e pós-tratamento. Verificou-se que o tratamento não foi

eficiente, uma vez que não desapareceram os sinais clínicos, assim como não houve

recuperação hematológica dos cães e nem eliminação de E. canis

Palavras-chave: Azitromicina - Ehrlichia canis – PCR - Cães

ABSTRACT

The aims of this study were to evaluate the efficacy of treatment with azithromycin in

dogs naturally infected with E. canis and also to follow the clinical and hematological

changes of the animals during both treatment protocols. Ten dogs suspected of E. canis

infection were diagnosed through Elisa test kit Snap 4Dx. They were distributed in two

groups: without treatment and treated with azithromycin, 20mg/kg orally once a day for seven

days. The dogs were submitted to daily physical examination. Hematologic and direct

visualization of morulae in blood smears made from ear margin, and nested PCR to detect E.

canis were performed before and after treatment. We could assume that treatment with

azithromycin in the protocol used was not effective, did not promote the resolution of clinical

signs, nor the hematological recovery of the animals, and was not able to eliminate E. canis.

Key-words: azithromycin - Ehrlichia canis – PCR - Dogs.

SUMÁRIO

1 INTRODUÇÃO .........................................................................................

1.1 ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS ......................................................... 12

1.2 PATOGENIA ........................................................................................... 13

1.3 SINAIS CLÍNICOS .................................................................................. 15

1.4 ASPECTOS LABORATORIAIS ............................................................. 16

1.5 DIAGNÓSTICO ....................................................................................... 17

1.6 TRATAMENTO ....................................................................................... 18

1.7 AVALIAÇÃO DO TRATAMENTO ....................................................... 19

1.8 PREVENÇÃO .......................................................................................... 21

2 REFERÊNCIAS ........................................................................................

3 ARTIGO .....................................................................................................

Azitromicina no tratamento da erlichiose monocítica em cães

naturalmente infectados ...............................................................................

RESUMO .......................................................................................................

ABSTRACT ...................................................................................................

INTRODUÇÃO .............................................................................................

MATERIAIS E MÉTODOS ....................................................................

RESULTADOS .........................................................................................

DISCUSSÃO .............................................................................................

CONCLUSÃO ...........................................................................................

REFERÊNCIAS ........................................................................................

1 INTRODUÇÃO

Ehrlichia canis é uma bactéria gram-negativa intracelular obrigatória, pertencente à

família Anaplasmataceae e à ordem Rickettsiales, responsável pela erlichiose monocítica

canina (DUMLER et al., 2001). Sua primeira denominação foi Rickettsia canis, descrita em

um cão Pastor Alemão, na Argélia (DONATIEN e LESTOQUARD, 1935).

As pesquisas se intensificaram entre 1968 e 1970 quando uma importante epizootia da

erlichiose canina ocorreu em cães da Armada Americana, em ação na guerra do Vietnã, onde

cerca de 300 cães desenvolveram uma enfermidade hemorrágica fatal, chamada pancitopenia

tropical canina, caracterizada por debilidade, epistaxe, anemia e leucopenia (HUXSOLL et

al., 1970).

Historicamente, a erlichiose canina já recebeu vários nomes, tais como: pancitopenia

tropical canina (HUXSOLL et al., 1970), riquetsiose canina, tifo canino, síndrome

hemorrágica idiopática, febre hemorrágica canina, moléstia do cão rastreador (GREENE e

HARVEY, 1990) e atualmente é denominada erlichiose monocítica canina (HARRUS et al.,

1998a; HARRUS et al., 1998b).

No Brasil, a doença foi diagnosticada pela primeira vez em 1973 (COSTA et al.,

1973) e atualmente está presente em praticamente todo o território nacional (LABARTHE et

al., 2003). É uma doença mundialmente descrita, cuja distribuição geográfica está relacionada

à distribuição de seu vetor, o carrapato Rhipicephalus sanguineus, considerado também seu

reservatório primário (BREITSCHWERDT, 1997; ANDEREG e PASSOS, 1999).

1.1 ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS

Erlichiose monocítica canina tem sido comunicada em todo o mundo, causando alta

morbidade e mortalidade (RIKIHISA, 1991). Os casos concentram-se nas áreas tropicais e

subtropicais devido à distribuição geográfica de seu vetor (HARRUS et al., 1997; COHN,

2003).

No Brasil, o primeiro relato de erlichiose canina ocorreu em Belo Horizonte - MG, por

Costa et al., em 1973, sendo este também o primeiro caso diagnosticado na América do Sul, e

o segundo relato em Jaboticabal-SP, por Maregati, em 1978 (KAVINSKI et al., 1988). Hoje

em dia, são relatados casos por todo o território nacional. Em Mato Grosso do Sul, a

soroprevalência foi estimada em 35,7% (LABARTHE et al., 2003).

Diferentes espécies de carrapatos são capazes de realizar a transmissão horizontal da

infecção erlichial do vetor aos hospedeiros vertebrados. A E. canis é usualmente disseminada

durante o ectoparasitismo do carrapato vermelho do cão, Rhipicephalus sanguineus (COHN,

2003). Infecção concomitante com outros patógenos transmitidos por carrapatos tem sido

documentada por vários pesquisadores (ANDEREG e PASSOS, 1999; BREITSCHWERDT

et al., 1998). R. sanguineus é capaz de transmitir E. canis, E. ewingii e também Babesia canis,

B. gibsoni e Anaplasma platys (COHN, 2003).

Além do vetor, R. sanguineus é considerado reservatório primário de E. canis

(EWING, 1969; GROVES et al., 1975) por ser capaz de transmitir a bactéria por cerca de 155

dias em qualquer estágio de desenvolvimento (GREENE e HARVEY, 1990). O contágio

ocorre com a ingestão de leucócitos infectados principalmente durante a fase aguda da doença

no cão. Entre os carrapatos ocorre a transmissão transestadial, porém não ocorre a transmissão

transovariana (GROVES et al., 1975). Do carrapato para o cão, a infecção ocorre durante o

repasto sanguíneo; no entanto, os cães também podem se infectar por meio de transfusão

sanguínea (EWING, 1969; REINE, 2004).

A erlichiose recebeu uma atenção especial em 1987 quando algumas observações

sugeriram infecção também em humanos. No entanto, hoje se sabe que as infecções em

humanos são causadas por E. chaffeensis, que também tem tropismo por células

mononucleares e são geneticamente muito semelhantes à E. canis, por isso apresentam

mórulas semelhantes e reação cruzada de anticorpos (DAWSON et al., 1991). Os principais

animais acometidos por E. canis são os membros da família Canidae, que inclui cães, lobos e

chacais (RIKIHISA, 2006).

1.2 PATOGENIA

Com infecções experimentais foi possível observar que o período de incubação da

erlichiose varia de oito a vinte dias, observando-se sinais clínicos como febre, linfadenopatia,

anorexia, petéquias, equimoses em pele e mucosas e prostração. Podem ser distintas três fases

da doença: aguda, subclínica e crônica (GREENE e HARVEY, 1990; HARRUS et al., 1997;

CASTRO et al., 2004).

A fase aguda da infecção por E. canis ocorre aproximadamente de oito a vinte dias

após a infecção, e dura de duas a quatro semanas. Durante esse período, a bactéria invade as

células mononucleares teciduais, multiplica-se e produz hiperplasia linforreticular no baço,

fígado e linfonodos acarretando um aumento de volume desses órgãos. As células infectadas

são transportadas pela corrente sanguínea para pulmões, rins e meninges, aderindo ao

endotélio vascular e produzindo vasculite e infecção do tecido subendotelial (GREENE e

HARVEY, 1990; HARRUS et al., 1997). Também invade células mononucleares circulantes

formando corpúsculos iniciais, corpos elementares e então mórulas (EWING, 1969; KUEHN

e GAUNT, 1985; ELIAS, 1991).

A fase subclínica instala-se quando o cão sobreviveu à fase aguda. Geralmente surge

hiperglobulinemia, relacionada à persistência de E. canis no hospedeiro, demonstrada através

da reação em cadeia de polimerase (PCR) (GREENE e HARVEY, 1990). Testes de

imunização em cães utilizando soro antilinfócitos conseguiram desencadear uma alta

produção de anticorpos, mas não houve mudanças no curso da enfermidade. Os resultados dos

testes indicaram que a resposta humoral parece eficiente apenas na eliminação de espécies

extracelulares de Ehrlichia, enquanto a destruição das erlichias intracelulares depende da

resposta imune celular (NYINDO et al., 1980).

Assim, cães imunocompetentes podem eliminar a bactéria e não entrar na fase crônica,

enquanto aqueles sem resposta imune efetiva permanecem doentes e podem apresentar

processos imunomediados (GREENE e HARVEY, 1990). Alguns cães, em áreas enzoóticas

podem se manter infectados por longos períodos, inclusive durante anos (HARRUS et al.,

1998a).

A fase crônica instala-se devido à deficiência imunológica do hospedeiro. É

caracterizada pela pancitopenia decorrente do comprometimento de medula óssea, que pode

ser causada por mecanismos imunomediados, infecção no interior da medula óssea ou

exaustão devido à destruição contínua de plaquetas (GREENE e HARVEY, 1990).

A recente caracterização molecular de E. canis identificou uma deficiência de

componentes estruturais, tais como peptideoglicanos e lipopolissacarídeos. A falta desses

componentes resultou no desenvolvimento de uma complexa estrutura de proteínas de

membrana. Essas proteínas têm papel fundamental entre o patógeno e a célula hospedeira. Foi

identificado um set de proteínas imunorreativas que inclui glicoproteínas importantes para a

resposta imune e uma família de proteínas de membrana. Em outras espécies de Ehrlichia,

essa família de proteínas possui 22 genes parálogos que podem se expressar diferentemente

no carrapato e nos hospedeiros mamíferos, facilitando a diversidade antigênica e a

imunoproteção, contribuindo para as infecções persistentes (MAVROMATIS et al., 2006).

Anteriormente, já havia sido cogitada a possibilidade de que o baço hospedasse E. canis e que

ela se escondesse em macrófagos esplênicos escapando da resposta imune (HARRUS et al.,

1998a).

1.3 SINAIS CLÍNICOS

Os sinais clínicos que estão associados à erlichiose monocítica canina são

influenciados pela cepa infectante, imunidade individual, idade e raça do cão, re-exposição ao

agente, presença de co-infecção e provavelmente também por fatores ainda desconhecidos

(KUEHN e GAUNT, 1985; GREENE e HARVEY, 1990; BREITSCHWERDT et al., 1998;

COHN, 2003). Cães da raça Pastor Alemão são considerados mais suscetíveis (NYINDO et

al., 1980; ELIAS, 1991).

Na fase aguda, os sinais clínicos são mais aparentes, porém geralmente são

insuficientes ou pouco específicos para o diagnóstico, passando desapercebida pelo

proprietário. Os sinais clínicos nesta fase incluem febre, depressão, anorexia, perda de peso,

mucosas pálidas, secreção oculonasal, linfadenopatia e hepatoesplenomegalia (GREENE e

HARVEY, 1990; HARRUS et al., 1997; COHN, 2003; CASTRO et al., 2004).

Na fase subclínica, que se inicia entre seis e nove semanas pós-infecção, os sinais

clínicos geralmente desaparecem ainda que sem tratamento e os animais permanecem

aparentemente saudáveis. Por isso, essa fase também é chamada assintomática (HARRUS et

al., 1997; HARRUS et al., 1998a; COHN, 2003).

Na fase crônica, os sinais podem estar ausentes ou ainda exacerbados. Sinais de apatia,

caquexia, tendência a hemorragias (sufusões, petéquias, epistaxe), palidez de mucosas,

sensibilidade abdominal, uveíte anterior, hemorragia retiniana ou sinais de meningoencefalite

são sugestivos da infecção. A glomerulonefrite é um achado comum nesta fase da doença

devido à intensificação da resposta imune não protetora (HARRUS et al., 1997). Além disso,

pode haver infecções secundárias (COHN, 2003).

O prognóstico na fase aguda é geralmente favorável. A antibioticoterapia promove

melhora clínica em cerca de um a dois dias. Na fase subclínica, o prognóstico varia de

favorável a reservado de acordo com a sintomatologia apresentada pelo animal e sua

predisposição individual para evoluir para a fase crônica. Nesta última, o prognóstico é

desfavorável, principalmente se tiver se instalado um quadro de hipoplasia arregenerativa na

medula óssea (GREENE e HARVEY, 1990; HARRUS et al., 1997).

1.4 ASPECTOS LABORATORIAIS

Durante a fase aguda da erlichiose canina, as alterações laboratoriais frequentemente

observadas são trombocitopenia associada ao aumento do número de macroplaquetas

circulantes, que persiste por todo o período da doença na maioria dos animais (SMITH et al.,

1975); observa-se anemia, regenerativa ou arregenerativa e contagens leucocitárias diversas.

Leucocitose, monocitose e presença de mórulas são consideradas características desta fase da

doença (GREENE e HARVEY, 1990; HARRUS et al., 1997), apesar de a leucopenia ser

também descrita (CASTRO et al., 2004). As mórulas são comumente observadas em

monócitos e linfócitos (EWING, 1969; KUEHN e GAUNT, 1985; ELIAS, 1991), mas

também podem ser vistas no interior de neutrófilos (EWING, 1969; HUXSOLL et al., 1970).

Na fase subclínica, os achados laboratoriais incluem trombocitopenia, anemia,

leucopenia variável, hiperglobulinemia progressiva e proteinúria (HARRUS et al., 1998a). A

pancitopenia é o achado mais característico da fase crônica (GREENE e HARVEY, 1990;

HARRUS et al., 1997). Hiperglobulinemia com gamopatia mono ou policlonal também são

características desta fase (GREENE e HARVEY, 1990; COHN, 2003).

A trombocitopenia é um achado freqüente em qualquer uma das fases da erlichiose e é

considerado um bom indicador de infecção (BULLA et al., 2004). As causas da

trombocitopenia envolvem mecanismos diversos, tais como vasculite, aumento do consumo

de plaquetas, presença de um fator inibidor da migração plaquetária, seqüestro de plaquetas

pelo baço, supressão da medula óssea e trombocitopenia imunomediada (HARRUS et al.,

1997; WANER et al., 2000). Na erlichiose também ocorre trombocitopatia, que compromete a

adesão e agregação plaquetárias (HARRUS et al., 1997).

Outras alterações laboratoriais que podem ser observadas nas três fases são

hipoalbuminemia; azotemia, elevação da atividade das enzimas séricas alanina

aminotransferase (ALT), fosfatase alcalina sérica (FAS), proteínas C-reativas (PCR) e alfa-1-

ácido-glicoproteínas (AAG); aumento da bilirrubina total devido à hemólise intensa e em

alguns casos, também icterícia (GREENE e HARVEY, 1990; COHN, 2003).

1.5 DIAGNÓSTICO

Não há um método simples de diagnóstico para a erlichiose, que pode ser realizado

com uma combinação de sinais clínicos, alterações hematológicas, sorologia e confirmação

molecular (COHN, 2003).

A observação das mórulas é o único achado laboratorial de rotina que confirma a

presença de E. canis. No entanto, isso ocorre apenas nas duas primeiras semanas pós-infecção

e em menos de 1% das células infectadas; por isso, a ausência das mórulas não exclui a

possibilidade de infecção (ELIAS, 1991; MUTANI e KAMINJOLO, 2001). Nos esfregaços

realizados com sangue da ponta de orelha pode ser mais fácil visualizar a mórula, que em

esfregaço sanguíneo convencional (EWING, 1969; ELIAS, 1991).

Além da observação da mórula em esfregaço sanguíneo, é possível diagnosticar a

erlichiose por outros métodos. Dentre os métodos indiretos inclui-se a Imunofluorescência

Indireta (IFI), um método sorológico que utiliza anticorpos fluorescentes. A IFI é bastante

sensível e específica, mas tem a desvantagem de apresentar resultados falso-negativos ou

falso-positivos e não identifica a fase da doença. Na verdade, a presença de títulos de

anticorpos apenas significa contato prévio com o agente (IQBAL e RIKIHISA, 1994b).

Outros testes sorológicos incluem o Western Immunoblotting (WI) e o teste de ELISA.

O WI mostrou-se mais sensível que a IFI e seus resultados são objetivos, isto é, não sofrem

interferência da sensibilidade visual do leitor, porém é mais demorado, dispendioso e

necessita de tecnologia mais avançada (IQBAL et al., 1994). O teste de ELISA é tão sensível

e específico quanto a IFI e dispensa equipamentos caros. No entanto, apesar da fácil leitura,

seus resultados indicam apenas positivo ou negativo (LABARTHE et al., 2003).

Os testes sorológicos não possibilitam diferenciar a resposta imune de uma re-

exposição ao agente; além disso, ocorrem reações cruzadas com outras espécies de Ehrlichia

(BARTSCH e GREENE, 1996; WEN et al., 1997; MUTANI e KAMINJOLO, 2001).

Entre os métodos de diagnóstico direto, incluem-se o cultivo do agente in vitro e a

reação em cadeia de polimerase (PCR). No cultivo tradicional, os leucócitos do animal

suspeito são isolados e mantidos em meio próprio com linhagem celular específica, onde

Ehrlichia se prolifera (IQBAL e RIKIHISA, 1994a). As técnicas recentes de cultivo celular

utilizam apenas soro estéril e dispensam as linhagens celulares específicas para o crescimento.

Em ambas técnicas é possível localizar as mórulas com maior facilidade, devido a sua maior

quantidade, em comparação ao esfregaço sanguíneo convencional (MUTANI e

KAMINJOLO, 2001).

O cultivo celular in vitro é considerado o método mais sensível para o diagnóstico da

erlichiose, pois detecta a bactéria a partir do segundo dia de infecção (IQBAL et al., 1994;

MUTANI e KAMINJOLO, 2001). Contudo, ainda se trata de um método relativamente

demorado, caro, exigente e quando usado isoladamente não revela a espécie de Ehrlichia

(WEN et al., 1997; MUTANI e KAMINJOLO, 2001).

Devido a essas desvantagens fez-se necessário a busca de um método diagnóstico

sensível, específico, mais simples e que também detectasse a bactéria de forma direta. Com

isso surgiram as primeiras PCR para detecção de E. canis (IQBAL et al., 1994; IQBAL e

RIKIHISA, 1994a).

Na PCR, realiza-se o isolamento genômico e a amplificação de porção do DNA do

patógeno que permite seu reconhecimento específico; para isso são utilizados fragmentos

seqüenciais de DNA, chamados primers. Na nested PCR ou PCR de dois ciclos, um par de

primers reconhece o gênero Ehrlichia a partir da amplificação de uma porção da seqüência

gênica do 16S RNA ribossomal e outro par diferencia a espécie, amplificando um segmento

específico localizado dentro da primeira porção amplificada anteriormente. Por isso, também

é considerado um método muito sensível e específico (IQBAL e RIKIHISA, 1994a; WEN et

al., 1997). A PCR pode ser aplicada tanto em amostras de sangue como de tecidos (IQBAL e

RIKIHISA, 1994a; HARRUS et al., 1998a).

1.6 TRATAMENTO

Existem vários medicamentos eficientes no combate à erlichiose canina, sendo que o

tratamento deve se estender por pelo menos três a quatro semanas ou por períodos maiores do

que oito semanas nos animais na fase crônica da doença (HUXSOLL et al., 1970).

Os derivados da tetraciclina, há muitos anos, são considerados de eleição para o

tratamento da erlichiose (HUXSOLL et al., 1970). Atualmente, o consenso sugere o uso da

doxiciclina na dosagem de 10 mg/kg via oral (VO) uma vez ao dia durante 28 dias (NEER et

al., 2002). A doxiciclina é uma tetraciclina lipossolúvel muito eficiente, pois os animais

geralmente apresentam melhora clínica depois de três dias de medicados (SAINZ, 1996). É

também o medicamento de eleição para tratamento de filhotes, cadelas em gestação ou

animais portadores de nefropatias (COHN, 2003).

O tratamento com dipropionato de imidocarb também se mostrou efetivo na

eliminação de E. canis (PRICE e DOLAN, 1980; MATTHEWMAN et al., 1994). No entanto,

estudos mais recentes não observaram diferenças na resposta clínica quando comparado à

doxiciclina, associado a esta droga (SAINZ, 1996; SOUSA et al., 2004; PEDROSO, 2006) ou

utilizado isoladamente (SAINZ, 1996; SOUSA et al., 2004; EDDLESTONE et al., 2006;

PEDROSO, 2006). A dose recomendada do dipropionato de imidocarb é de 5 mg/kg SC ou

IM com intervalo de 14 dias. O pré-tratamento com atropina 0,04 mg/kg, é recomendado a

fim de minimizar os efeitos adversos da droga (MATTHEWMAN et al., 1994; NEER et al.,

2002).

Outros antibióticos já foram utilizados, como enrofloxacina, cloranfenicol, penicilinas

e sulfonamidas. Eles melhoraram o quadro clínico, mas não foram capazes de eliminar

Ehrlichia (BREITSCHWERDT et al., 1998; COHN, 2003). A Azitromicina foi sugerida pelo

laboratório veterinário Labyes para tratamento contra E. canis, com indicação na bula do

medicamento

, mas a sua eficácia ainda não foi comprovada. Estudos in vitro e in vivo,

mostraram que a azitromicina está concentrada em células fagocíticas (GLAUDUE et al.,

1989) e que o acúmulo do medicamento em fagócitos está associado com sua atividade contra

microorganismos intracelulares (WILDFEWER et al., 1989). Em alguns casos, pode ser

necessário instituir terapia de apoio com fluidos, transfusão sanguínea, vitaminas, corticóides

ou esteróides anabólicos (COHN, 2003).

A atividade da azitromicina tem sido amplamente avaliada na medicina humana em

casos de infecção por riquétsias como Orientia tsutsugamushi (WATT et al., 1999; PHIMDA

et al., 2007), e até mesmo no tratamento da infecção por Leishmania major (KROLEWIECKI

et al., 2002) e da leishmaniose cutânea (TEIXEIRA et al., 2006), além de ser largamente

comparada à doxiciclina no tratamento de diversas infecções sexualmente transmissíveis, com

bons resultados (LAU e QURESHI, 2002; RUSTOMJEE et al., 2002).

1.7 AVALIAÇÃO DO TRATAMENTO

Devido à falta de imunidade protetora e à latência da E. canis, em muitos animais,

torna-se necessária e recomendável a avaliação da eliminação terapêutica do agente para

evitar agravamentos ou o estado de portador crônico (IQBAL e RIKIHISA, 1994a). Existem

Aziplus® (Azitromicina), Laboratório Labyes.

relatos de isolamento do DNA de E. canis 34 meses após a inoculação experimental e os cães

encontravam-se aparentemente sadios (HARRUS et al., 1998a).

A contagem de plaquetas é considerada um indicador seguro da recuperação do

animal, pois a plaquetometria geralmente se normaliza dentro de duas a quatro semanas de

tratamento (IQBAL e RIKIHISA, 1994b; BREITSCHWERDT et al., 1998; HARRUS et al.,

1998b). Porém, deve-se considerar a fase da doença e a interferência da droga utilizada.

Animais na fase aguda geralmente se recuperam mais rapidamente que aqueles na fase

crônica (COHN, 2003), e animais tratados com dipropionato de imidocarb parecem

normalizar o número de plaquetas mais lentamente do que os tratados apenas com doxiciclina

(SAINZ, 1996; NEER et al., 2002).

Os testes sorológicos não são considerados bons indicadores, pois não diferenciam

falha no tratamento, persistência da resposta imune ou re-infecção (BARTSCH e GREENE,

1996). Na IFI, os anticorpos são detectáveis por seis a nove meses após o tratamento (WEN et

al., 1997; HARRUS et al., 1998a; HARRUS et al., 1998b). O teste de ELISA é ainda mais

limitado por apenas indicar resultados positivos e negativos, visto que muitos cães apresentam

resultado positivo após terem sido tratados (COHN, 2003; LABARTHE et al., 2003). E

inclusive ensaios de WI que detectam antígenos têm seu uso limitado devido à variabilidade

antigênica de E. canis durante as etapas da enfermidade e podem apresentar reação cruzada

com proteínas de E. chafeensis (RIKIHISA et al., 1994).

O cultivo celular também é considerado sensível para avaliação da eficiência de

protocolos de tratamento (PRICE e DOLAN, 1980; WEN et al., 1997; HARRUS et al.,

1998b). O cultivo e a PCR são os métodos mais confiáveis para avaliação da eliminação

terapêutica de E. canis. Contudo, a última apresenta vantagens, pois é mais rápida, apresenta

custo menor (IQBAL e RIKIHISA, 1994a; NEER et al., 2002) e também é bastante sensível e

específica (BREITSCHWERDT et al., 1998; NEER et al., 2002).

A PCR pode determinar se um antibiótico é eficiente na eliminação de E. canis ao

demonstrar a presença de seu DNA antes e a ausência depois do tratamento. Os resultados

obtidos com a PCR podem ser complementados com resultados de outros testes e também

com o perfil hematológico do animal, especialmente a plaquetometria (WEN et al., 1997;

BREITSCHWERDT et al., 1998; HARRUS et al., 1998b; NEER et al., 2002).

A sensibilidade e a especificidade da PCR dependem dos primers utilizados. A nested

PCR para E. canis, que amplifica um fragmento do gene 16S rRNA, utiliza dois pares de

primers e é capaz de detectar 0,2 pg de DNA purificado de E. canis a partir do quarto dia pós-

inoculação (WEN et al., 1997). Isto significa que esta técnica é até cem vezes mais sensível

que os primeiros primers delineados para PCR de E. canis e por isso tem sido amplamente

empregada em experimentos que desejam avaliar a eficiência da antibioticoterapia (WEN et

al., 1997; HARRUS et al., 1998b).

Apesar de a validade da PCR ser questionada por ela detectar o DNA de E. canis e não

diferenciar os organismos vivos dos mortos (COHN, 2003), seus resultados, quando

comparados aos de cultivo celular a partir de amostras de sangue e tecidos pós-tratamento

com doxiciclina foram concordantes, o que demonstrou a efetividade e sensibilidade do

método para avaliação da eliminação terapêutica (IQBAL e RIKIHISA, 1994a).

1.8 PREVENÇÃO

A prevenção deve ser feita principalmente através do controle de carrapatos. Quando

animais de áreas endêmicas forem transportados para áreas livres, estes devem ser testados e

se necessário tratados preventivamente (HUXSOLL et al., 1970). Cães doadores de sangue

deverão passar por triagem com testes sorológicos ou moleculares (REINE, 2004).

Também pode ser feita a quimioprevenção com tetraciclina, na dose de 6,6 mg/kg uma

vez ao dia, durante o período de uma geração de carrapatos ou até dois anos em áreas

endêmicas (GREENE e HARVEY, 1990), ou ainda 100 mg de doxiciclina uma vez ao dia

(DAVOUST et al., 2005).

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3 ARTIGO

Azitromicina no tratamento da erlichiose monocítica em cães naturalmente infectados

Azithromycin in the treatment of monocytic ehrlichiosis in naturally infected dogs

Daniela Torres CANTADORI

, Ana Luiza A. R. OSÓRIO

, Veronica Jorge BABO-

TERRA