( PDF ) Determinação dos valores referenciais para as subpopulações de Linfócitos T em indivíduos doadores de sangue em Salvador e Belém

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO

UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS MORFOLÓGICAS (PCM)

MESTRADO FORA DE SEDE - UFBA

ALEX JOSÉ LEITE TORRES

DETERMINAÇÃO DOS VALORES REFERENCIAIS

PARA AS SUBPOPULAÇÕES DE LINFÓCITOS T EM

INDIVÍDUOS DOADORES DE SANGUE EM SALVADOR

E BELÉM

SALVADOR – BAHIA

2007

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FICHA CATALOGRÁFICA

T689

Torres, Alex José Leite,

Determinação dos valores referenciais para as subpopulações de Linfócitos T

em indivíduos doadores de sangue em Salvador e Belém/ Alex José Leite Torres. –

Salvador: [s.n.], 2007.

xxi, 78f. : il.

Orientador: Prof. Dr. Carlos Roberto Brites Alves.

Dissertação ( Mestrado em Ciências Morfológicas) Universidade Federal do Rio

de Janeiro-Instituto de Ciências Biomédicas. Universidade Federal da Bahia-

Instituto de Ciências da Saúde.

1.Linfócitos T. 2.Valores de referências. 3.Doadores de sangue. I.Universidade

Federal do Rio de Janeiro. II. Universidade Federal da Bahia. III. Titulo.

CDU: 616.155.3

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ALEX JOSÉ LEITE TORRES

DETERMINAÇÃO DOS VALORES REFERENCIAIS PARA AS SUBPOPULAÇÕES DE

LINFÓCITOS T EM INDIVÍDUOS DOADORES DE SANGUE EM SALVADOR E BELÉM

Dissertação de Mestrado apresentada ao

Programa de Pós-Graduação em Ciências

Morfológicas do Instituto de Ciências

Biomédicas da Universidade Federal do Rio

de Janeiro em acordo com o Instituto de

Ciências da Saúde da Universidade Federal

da Bahia no Programa Mestrado fora de

sede.

Orientador: Prof. Dr. Carlos Roberto Brites Alves

Salvador – Bahia

2007

iii

Este trabalho foi desenvolvido no Laboratório de Pesquisa em Infectologia – Unidade

de Virologia do Complexo Hospitalar Universitário Professor Edgard Santos sob a

orientação do Prof. Dr. Carlos Roberto Brites Alves, com auxílios financeiros

concedidos pelo Programa Nacional de DST e AIDS do Ministério da Saúde.

iii

ALEX JOSÉ LEITE TORRES

DETERMINAÇÃO DOS VALORES REFERENCIAIS PARA AS SUBPOPULAÇÕES DE

LINFÓCITOS T EM INDIVÍDUOS DOADORES DE SANGUE EM SALVADOR E BELÉM

Salvador, 10 de Agosto de 2007

____________________________________________________________________

Orientador: Prof. Dr. Carlos Roberto Brites Alves / Universidade Federal da Bahia

_____________________________________________________________________

Avaliador: Prof. Dr. Eduardo Martins Netto / Universidade Federal da Bahia

_____________________________________________________________________

Avaliadora: Profa. Dra. Songelí Menezes Freire / Universidade Federal da Bahia

_____________________________________________________________________

Avaliador: Prof. Dr. Vivaldo Moura Neto / Universidade Federal do Rio de Janeiro

_____________________________________________________________________

Revisora e Suplente: Prof. Dra. Flávia Carvalho Alcantara Gomes / Universidade Federal do Rio de

Janeiro

Aos meus queridos e amados pais, por toda a

dedicação e carinho concedidos em todos os

momentos da minha vida.

Aos meus filhos Alex Júnior e Marcos Adriano por

toda a alegria que me trazem e pela compreensão

dos momentos ausentes na construção deste

trabalho.

À minha namorada Ana Luiza Dias Angelo, por todo

o amor, companheirismo, atenção e paciência que

dispôs a mim nos últimos dois anos.

E a Yemanjá por toda a serenidade e guia

concedidas em minhas orações.

AGRADECIMENTOS

- Gostaria de expressar minha profunda gratidão ao Dr. Carlos Brites por toda orientação

científica neste trabalho, pelo grande incentivo ao fascinante mundo da pesquisa e pela

oportunidade de fazer parte da família do Laboratório de Pesquisa em Infectologia e ao

competentíssimo Dr. Eduardo Netto pela sua infinita disposição em ensinar e “aturar” os

mestrandos em suas análises e orientações, muitas vezes entrando pelas noites de

sextas-feiras;

- Ao amigo e colega André Ramos por todo o aprendizado e amizade e aos colegas

Márcia Paz, Natanael Dantas, Marcos Abrahão, Herbert Henrique, Célia Pedroso,

Maurina Alcântara, Sheila Silva, Nádja Pacheco, Rodrigo Abreu, Rosa Lima, Rosa Castro

e Jamile Pita, todos pertencentes à Família LAPI;

- Às colegas Maria Nakatani, Angélica Bastos, Sueide Neves, Ana Rute, Telma Felipe e

Goreth Barberino das Unidades LAPI-TROP e LAPI-BAC e às enfermeiras de pesquisa

Milena Bastos, Estela Luz, à farmacêutica Solange Carneiro, aos técnicos Vanusa

Estrela e Valdélio Marques por todo o apoio;

- Ao estagiário Geraldo Pedral Sampaio e à mestranda Patrícia Cisneiros pela grande

colaboração neste trabalho;

- Ao Prof. Dr. Roberto Badaró pelas orientações nas referências bibliográficas e citações;

- Aos Professores Doutores Roberto Meyer e Songeli Menezes Freire pela parceria e

amizade;

- Ao Dr. Alexandre Lemos do Hemocentro do Pará e a Dra. Virgínia Figueiredo do

Hemocentro da Bahia pela inestimável e competente colaboração;

- A Lílian Inocêncio e a Denise Souza do Programa Nacional DST e AIDS do Ministério

da Saúde por toda a amizade e confiança concedidos a mim nestes 06 anos de

participação na Rede de Laboratórios de CD4+;

- Ao Programa Nacional DST e AIDS pelo apoio financeiro neste trabalho;

- Aos Professores Doutores Vivaldo Moura Neto e Fabiana Paim Rosa do Programa de

Pós-Graduação em Ciências Morfológicas da Universidade Federal do Rio de Janeiro

pela iniciativa e direcionamento dado a este Mestrado fora de sede.

vii

"É melhor tentar e falhar, que preocupar-se e ver a

vida passar; é melhor tentar, ainda que em vão, que

sentar-se fazendo nada até o final. Eu prefiro na

chuva caminhar, que em dias tristes em casa me

esconder. Prefiro ser feliz, embora louco,

que em conformidade viver ..."

Martin Luther King

viii

RESUMO

As imunodeficiências de linfócitos T são diagnosticadas pela diminuição ou aumento do

número destas células no sangue periférico. A importância desta medida foi evidenciada

pelo aparecimento da Síndrome da Imunodeficiência Humana (Aids) causada pelo HIV,

diminuindo a quantidade de linfócitos T CD4+ e aumentando linfócitos T CD8+. Estas

alterações são identificadas pela avaliação das contagens dos linfócitos dos pacientes

comparadas a um valor de referência. Não existem dados de valores referenciais para as

subpopulações de linfócitos T no Brasil e a grande diversidade étnica e demográfica

neste país são variáveis que possibilitam novos resultados destas contagens

diferentemente das encontradas em outros países. Os resultados das contagens de

subpopulações de linfócitos T em pacientes contaminados pelo Vírus da

Imunodeficiência Humana (VIH) no Brasil são referenciados por estudos em população

Caucasiana norte americana e européia. Atualmente, a determinação destas contagens

é realizada por imunofenotipagem através da citometria de fluxo. Neste estudo 526

amostras de doadores de sangue oriundas da Bahia e do Pará foram quantificadas e

avaliadas utilizando anticorpos monoclonais específicos para a identificação das

subpopulações de linfócitos T. Na Bahia, os intervalos absolutos de referência

encontrados para os linfócitos T CD3+ foi estabelecido entre 718 – 2721 células/µl de

sangue, para T CD4+ este intervalo foi de 422-1711 células/µl de sangue e para T CD8+

entre 214 -1056 células/µl de sangue. Esta mesma análise realizada com os doadores do

Pará apresentou intervalos absolutos de referências para linfócitos T CD3+ entre 648 -

2259 células/µl de sangue, em T CD4+ o intervalo encontrado foi de 342 - 1508

células/µl de sangue e para T CD8+ entre 203 - 917 células/µl de sangue. Na correlação

dos resultados de cada subpopulação de linfócitos T entre os estados, foram

encontradas diferenças significantes para os linfócitos T CD3+ (p<0,01), T CD4+

(p<0,01) e T CD8+ (p<0,01). As células T CD4+ também sofreram alterações

significativas na análise do gênero e em algumas variáveis demográficas como

freqüência de tabagismo e tempo de descanso que se comportaram diferentemente entre

esses estados. Portanto, as características da população de cada região podem ser

fatores determinantes para as alterações nos valores referenciais de subpopulações de

linfócitos T e principalmente, os valores de referência para os linfócitos T no Brasil

devem ser discutidos e reavaliados devido a significância encontrada neste trabalho.

ABSTRACT

The most frequent presentation of T lymphocyte immunodeficiency is the decrease or

increase of certain types of cells in peripheric blood. The most important example of T

lymphocyte immunodeficiency is the Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS)

caused by the HIV that raised the awareness in the world. The immunodeficiency is

identified through a comparison of a patient cell count to a reference range given by the

producer. These references are frequently sampled in healthy individuals from developed

countries, mainly Caucasians from US and Europe. There are no reference ranges for

Brazilian population and there are a number of reasons as ethnic influence and

demographs dates to believe that this references are different from given references. In

this study, 526 samples of the voluntary healthy blood donors were quantified from Bahia

and Para, using monoclonal antibodies through immunophenotyping by flow cytometry. In

Bahia, the reference range for normality was values between 718 – 2721 cells/µl for

CD3+ T lymphocyte, 422-1711 cells/µl for CD4+ T lymphocytes and 214 -1056 cells/µl for

T CD8+. Differently, in Pará the ranges for normality was values between 648 - 2259

cells/µl for CD3+ T lymphocyte, 342 - 1508 cells/µl for CD4+ T lymphocytes and 203 -

917 cells/µl for T CD8+. We found significant difference between Bahia and Pará for the

median values for CD3+ T lymphocytes (p<0.01), CD4+ T (p<0.01) and CD8+ T cells

(p<0.01). These results are also significantly different from the reference range of

normality given by the producer. Therefore, the population characteristics of each region

can have determinant factors for differences in the reference values for the lymphocyte

subpopulation and more importantly, national values should be urgently discussed and

reevaluated because the significant results found in this research.

ÍNDICE DE FIGURAS

Figura 1 – Sistema Linfático..........................................................................................2

Figura 2 – Processamento de antígeno........................................................................5

Figura 3. Distribuição de normalidade em uma população representada pela curva de

Gauss...........................................................................................................................26

Figura 4. Distribuição da amostra segundo o hábito do fumo em 526 indivíduos

hígidos da Bahia e do Pará..........................................................................................27

Figura 5. Análise das contagens absolutas das subpopulações de linfócitos T por

citometria de fluxo........................................................................................................28

Figura 6. Análise das contagens relativas das subpopulações de linfócitos T por

citometria de fluxo........................................................................................................29

Figura 7. Distribuição dos valores absolutos de linfócitos T e suas subpopulações nas

amostras de sangue de doadores hígidos dos Hemocentros de Salvador e Belém...31

Figura 8. Distribuição dos valores percentuais de linfócitos T e suas subpopulações

nas amostras de sangue de doadores hígidos dos Hemocentros de Salvador e

Belém...........................................................................................................................32

xii

Figura 9. Histograma da distribuição das subpopulações de linfócitos T CD3+, T

CD4+ e T CD8+ na população na Bahia......................................................................35

Figura 10. Distribuição de valores absolutos de linfócitos T e suas subpopulações em

amostras de sangue de doadores hígidos de acordo com o sexo em Salvador.........36

Figura 11. Distribuição entre os valores absolutos de linfócitos T e suas

subpopulações nas amostras de sangue de doadores hígidos associados ao

tabagismo em Salvador...............................................................................................37

Figura 12. Distribuição dos valores absolutos de linfócitos T e suas subpopulações

em amostras de sangue de doadores hígidos associados ao tempo de descanso em

Salvador.......................................................................................................................38

Figura 13. Distribuição dos valores absolutos de linfócitos T e suas subpopulações

em amostras de sangue de doadores hígidos associados ao consumo de álcool em

Salvador.......................................................................................................................39

Figura 14. Histograma da distribuição das subpopulações de linfócitos T CD3+, T

CD4+ e T CD8+ na população no Pará.......................................................................42

Figura 15. Distribuição dos valores absolutos de linfócitos T e suas subpopulações

em amostras de sangue de doadores hígidos associados ao sexo em

Belém...........................................................................................................................43

xiii

Figura 16. Distribuição dos valores absolutos de linfócitos T e suas subpopulações

em amostras de sangue de doadores hígidos associados ao tabagismo em

Belém...........................................................................................................................44

Figura 17. Distribuição dos valores absolutos de linfócitos T e suas subpopulações

em amostras de sangue de doadores hígidos associados ao tempo de descanso em

Belém...........................................................................................................................45

Figura 18. Distribuição dos valores absolutos de linfócitos T e suas subpopulações

em amostras de sangue de doadores hígidos associados ao consumo de álcool em

Belém...........................................................................................................................46

xiv

ÍNDICE DE TABELAS

Tabela 1 - Relação entre os valores absolutos de tendência central e dispersão das

amostras de sangue em doadores hígidos dos Hemocentros de Salvador e

Belém...........................................................................................................................30

Tabela 2 - Valores absolutos e relativos de tendência central e dispersão das

amostras de sangue em doadores hígidos do Hemocentro de Salvador....................34

Tabela 3 - Valores absolutos e relativos de tendência central e dispersão das

amostras de sangue em doadores hígidos do Hemocentro de Belém........................41

Tabela 4 - Contagens médias das subpopulações de células T de acordo com o

gênero entre os estados..............................................................................................48

Tabela 5 - Contagens médias das subpopulações de células T de acordo com o

hábito do tabagismo entre os estados.........................................................................49

Tabela 6 - Contagens médias das subpopulações de células T de acordo com o

tempo de descanso entre os estados..........................................................................50

Tabela 7 - Contagens médias das subpopulações de células T de acordo com o

consumo de álcool entre os estados............................................................................51

ÍNDICE DE SIGLAS

Abs – Referente a contagens absolutas

APC´s – Células Apresentadoras de Antígenos ( do inglês, Antigen Presentation Cells)

CD – Conjunto de diferenciação(do inglês, Cluster of Differentiation”) na determinação de

populações ou subpopulações celulares

DST – Doenças Sexualmente Transmissíveis

DP – Desvio Padrão

ELISA – Ensaio de Imunoabsorbância Enzimática (do inglês Enzyme Linked

Imunoabsorbant Assay)

FITC – Isotiocianato de Fluoresceína ( do inglês, Fluorescein Isothiocyanate)

FSC – Dispersão Frontal (do inglês Forward Scatter)

HEMOBA - Hemocentro do Estado da Bahia

HEMOPA – Hemocentro do Estado do Pará

HTLV – Vírus Linfotrópico das Células T Humanas (do inglês, Human T-Cell Limphotropic

Vírus)

IBGE – Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística

IFNα - Interferon alfa

IgA – Imunoglobulina A

IL-2 – Interleucina tipo 2

IL-4 – Interleucina tipo 4

IL-5 – Interleucina tipo 5

IL-10 – Interleucina tipo 10

IL-13 – Interleucina tipo 13

IMC- Índice de Massa Corporal

xvi

MHC – Complexo de Histocompatibilidade Principal (do inglês, Major Histocompability

Complex)

NK – Células assassinas naturais (do inglês, Natural Killers)

P – Poder da Amostra

PBS – Tampão Fosfato Salina ( do inglês, Phosphate Buffer Saline)

PE – Ficoeritrina (do inglês, Phicoeritrin)

PerCP – Complexo Ativado de Proteína Clorofil-Peridina (do inglês, Activated Peridinin-

chlorophyll-protein Complex )

SIDA – Síndrome da Imunodeficiência Adquirida

SPSS – Pacote Estatístico para as Ciências Sociais (do inglês Statistical Package for the

Social Sciences)

SSC - Dispersão Lateral (do inglês Side Scatter)

Th1 – Do inglês T-helper 1

Th2 – Do inglês T-helper 2

TNF-α - Fator de Necrose Tumoral alfa (do inglês, Tumor Necrosis Factor)

VIH – Vírus da Imunodeficiência Humana

VR – Valores de Referência

xvii

SUMÁRIO

RESUMO.......................................................................................................................................viii

ABSTRACT.......................................................................................................................................x

ÍNDICE DE FIGURAS......................................................................................................................xi

ÍNDICE DE TABELAS....................................................................................................................xiv

ÍNDICE DE SIGLAS........................................................................................................................xv

1. INTRODUÇÃO.............................................................................................................................1

1.1 Sistema Imunológico.......................................................................................................1

1.2 Linfócitos.........................................................................................................................5

1.3 Imunodeficiências de linfócitos T....................................................................................7

1.4 Valores de referência......................................................................................................9

1.4.1 Influência étnica...........................................................................................10

1.4.2 Nutrição.......................................................................................................12

1.4.3 Comportamento...........................................................................................13

1.4.4 Modelos de estudo no mundo.....................................................................15

1.5. Justificativa..................................................................................................................17

2. OBJETIVOS

2.1. Geral............................................................................................................................20

2.2. Específicos...................................................................................................................20

3.METODOLOGIA..........................................................................................................................21

3.1. Seleção das amostras.................................................................................................21

3.2. Estratificação das amostras........................................................................................22

xviii

3.3. Coleta e sorologia das amostras.................................................................................22

3.4. Citometria de fluxo. .................................................................................................... 23

3.5. Análise estatística........................................................................................................25

4. RESULTADOS...........................................................................................................................27

4.1.Características gerais dos entrevistados na Bahia e no Pará......................................27

4.1.2. Identificação das populações celulares na citometria de fluxo.....................28

4.1.3.. Avaliação da contagem de células nas populações linfocíticas de acordo

com o estado de origem..........................................................................................30

4.2.Detalhamento das características das amostras coletadas na Bahia..........................33

4.2.1.Características gerais dos entrevistados na Bahia........................................33

4.2.2. Quantificação das diferentes subpopulações linfocitárias.............................33

4.2.3. Avaliação das contagens médias para as diferentes subpopulações de

acordo com o gênero e as características demográficas........................................36

4.2.3.1. Sexo................................................................................................36

4.2.3.2. Tabagismo......................................................................................37

4.2.3.3. Tempo de descanso.......................................................................38

4.2.3.4. Álcool..............................................................................................39

4.3.Detalhamento das características das amostras coletadas no Pará............................40

4.3.1.Características gerais dos entrevistados no Pará..........................................40

4.3.2. Quantificação das diferentes subpopulações linfocitárias.............................40

4.3.3. Avaliação das contagens médias para as diferentes subpopulações de

acordo com o gênero e as características demográficas........................................43

4.3.3.1. Sexo................................................................................................43

4.3.3.2. Tabagismo......................................................................................44

xix

4.3.3.3. Tempo de descanso.......................................................................45

4.3.3.4. Álcool..............................................................................................46

4.4.Detalhamento das características das amostras associadas ao sexo e dados

demográficos numa comparação entre os estados............................................................47

4.4.1. Correlação dos resultados avaliados pelo sexo de acordo com o estado....47

4.4.2. Correlação dos resultados avaliados de acordo com o tabagismo entre os

estados....................................................................................................................47

4.4.3. Correlação dos resultados avaliados de acordo com o tempo de descanso

entre os estados......................................................................................................49

4.4.4. Correlação dos resultados avaliados pelo consumo de álcool entre os

estados....................................................................................................................50

5. DISCUSSÃO..............................................................................................................................52

6. CONCLUSÃO.............................................................................................................................62

7. REFERÊNCIAS..........................................................................................................................63

APÊNDICE.....................................................................................................................................77

1. INTRODUÇÃO

1.1. SISTEMA IMUNOLÓGÍCO

O sistema imune é composto por células e moléculas solúveis. As principais

células do sistema imune são os leucócitos compostos por macrófagos, neutrófilos

linfócitos.

As substâncias solúveis são moléculas que não estão contidas em células,

mas dissolvidas em um líquido, como plasma, por exemplo, tendo como principais

substâncias solúveis os anticorpos, as proteínas do complemento e as citocinas.

Algumas substâncias solúveis funcionam como sinalizadores para atrair e ativar outras

células (JANNEWAY et al.,2004)

As citocinas atuam como sinalizadores do sistema imune. Essas substâncias são

secretadas por células do sistema em resposta à uma estimulação, amplificando alguns

aspectos do sistema imune e suprimindo outros. Algumas citocinas podem ser injetadas

como tratamento de certas doenças. Por exemplo, o interferon-alfa é eficaz no

tratamento de certos cânceres, como a leucemia. O interferon-beta, pode ser útil no

tratamento da esclerose múltipla. Uma terceira citocina, a interleucina-2, pode ser

benéfica no tratamento do melanoma maligno e do câncer de rim, embora seu uso

produza efeitos adversos. Uma outra citocina, o fator estimulador de colônias de

granulócitos, o qual estimula a produção de neutrófilos, pode ser administrada em

pacientes de câncer com contagens baixas de neutrófilos causadas pela quimioterapia

(STEIN et al.,2005).

O sistema linfático é uma rede de linfonodos, conectados por vasos linfáticos. Os

linfonodos contêm uma malha de tecido em que linfócitos estão intimamente unidos.

Esta malha de linfócitos filtra, ataca e destrói organismos nocivos que causam

infecções. Os linfonodos freqüentemente estão aglomerados em áreas onde os vasos

linfáticos se ramificam, como o pescoço, as axilas e virilhas. A linfa, um fluido rico em

leucócitos, circula através dos vasos linfáticos (ESSNER et al.,2006).

A linfa ajuda a retornar a água, proteínas e outras substâncias dos tecidos do

organismo para a corrente sangüínea. Todas as substâncias carreadas pela linfa

passam através de pelo menos um linfonodo e da sua malha filtrante de linfócitos

(CUPEDO et al.,2005).

Fonte : www.msd-brazil.com

Figura 1. Sistema linfático. Esquematização

da rede do sistema linfático com identificação

de vasos linfáticos e todos os órgãos

linfóides.

Diferentes órgãos e tecidos do corpo - timo, fígado, baço, apêndice, medula óssea e

pequenos aglomerados de tecido linfático, como as tonsilas e as placas de Peyer no

intestino delgado fazem parte do sistema linfático ajudando o corpo no combate às

infecções (ROITT et al.,2002).

O sistema imune desenvolveu uma rede complexa de controles e equilíbrios que

pode ser classificada em duas categorias: imunidade natural (inata) e adquirida

(aprendida).Todos os indivíduos nascem com imunidade inata, onde os componentes

do sistema imune que participam desta imunidade (macrófagos, neutrófilos e proteínas

do complemento, além de barreiras físicas como pele e pêlos) reagem de forma similar

frente a todas as substâncias estranhas, e a identificação dos antígenos não varia entre

os indivíduos (BUCKNER et al.,2004).

A imunidade adquirida é aperfeiçoada, ou seja, ao nascer, o sistema imune de

um indivíduo ainda não entrou em contato com nenhum agente estranho não próprio e

por isso não modulou células de memória. O sistema imune aprende a responder a

cada novo antígeno exposto. Portanto, a imunidade adquirida é específica contra os

antígenos encontrados por um indivíduo durante a vida (YI et al.,2006).

O sistema imune possui um registro ou memória de cada antígeno que o

indivíduo entra em contato, seja através dos pulmões (respiração), do intestino

(alimentação) ou da pele. Isto é possível porque os linfócitos vivem muito tempo.

Quando os linfócitos encontram um antígeno eles produzem uma resposta rápida,

enérgica e específica contra o mesmo (JUN-HUA et al.,2006).

A imunidade inata e a imunidade adquirida não são independentes uma da outra.

Cada sistema atua em relação ao outro e o influencia, seja diretamente ou através da

indução de citocinas. Raramente um estímulo desencadeia uma resposta isolada. Ao

contrário, ocorrem várias respostas, algumas das quais podem atuar em conjunto ou,

ocasionamente, podem conflitar entre si. De todos os modos, todas as respostas

dependem dos três princípios básicos: reconhecimento, mobilização e ataque

(JANNEWAY et al.,2004).

Antes do sistema imune conseguir responder a um antígeno, ele deve ser capaz

de reconhecê-lo. Ele é capaz de fazer isto por meio de um processo denominado

apresentação dos antígenos. As células dendríticas são as principais células

apresentadoras de antígenos, mas outras células como macrófagos, linfócitos B

também podem processá-los (JONULEIT et al.,2003).

As células apresentadoras de antígenos fagocitam o antígeno e o degradam em

pequenos fragmentos. A seguir, pequenos fragmentos ou epítopos são dispostos dentro

das moléculas do complexo de histocompatibilidade principal (MHC), que é um grupo

de moléculas presentes na superfície destas células, e enviados para a superfície da

membrana celular (CHOO.,2007). A área do complexo de histocompatibilidade principal

que possui o fragmento do antígeno liga-se então a uma molécula especial situada na

superfície do linfócito T, denominada receptor de células T. O receptor de células T foi

projetado para reconhecer a parte do complexo de histocompatibilidade principal que

contém o fragmento do antígeno (ABBAS et al.,2000).

Fonte : Fonte: DNA Vaccines .[Molecular Medicine].McDonnell, W. Michael; Askari, Frederick K. NEJM 334:42.1996

Figura 2. Processamento e reconhecimento de antígeno.Um antígeno circulante no

corpo possui uma estrutura que o linfócito T não consegue reconhecer. Uma célula

processadora de antígenos (p.ex.,um macrófago) fagocita este antígeno. As enzimas da

célula processadora de antígenos destroem o antígeno, fragmentando-o. Alguns

fragmentos do antígeno ligam-se a moléculas do complexo de histocompatibilidade

principal e, a seguir, são enviados à superfície da membrana celular. Um receptor de

célula T, localizado sobre a superfície de um linfócito T, reconhece o fragmento de

antígeno ligado à molécula do complexo de histocompatibilidade principal e liga-se ao

fragmento.

1.2. LINFÓCITOS

Os linfócitos, as principais células do sistema linfático, são relativamente

pequenos em comparação com os macrófagos e os neutrófilos. Ao contrário dos

neutrófilos, os quais vivem de 7 a 10 dias, os linfócitos podem viver durante anos ou

mesmo décadas. A maioria dos linfócitos é enquadrada em três categorias principais:

Os linfócitos B são derivados de uma célula tronco (célula-mãe) da medula óssea e

amadurecem até transformarem-se em plasmócitos, os quais secretam anticorpos. Os

linfócitos T são formados quando as células-tronco já comprometidas com a linhagem

T, migram da medula óssea até a glândula timo, onde eles dividem-se e amadurecem.

Os linfócitos T aprendem como diferenciar o que é próprio do organismo do que não o

é, no timo. Os linfócitos T maduros deixam o timo e entram no sistema linfático

(GOLDRATH et al.,1999; BUCKNER et al.,2004). As células assassinas naturais ou do

inglês, Natural Killers (NK) são assim denominadas por eliminarem determinados

microorganismos intracelulares e células cancerosas. O “natural” de seu nome indica

que elas estão prontas para destruir uma variedade de células-alvo assim que são

formadas, em vez de exigirem a maturação e o processo educativo que os linfócitos B e

T necessitam (VAN BECK EM et al.,2005).

Os linfócitos T possuem dois subgrupos principais que diferem em sua

capacidade de ligar-se a uma das duas classes de moléculas do complexo de

histocompatibilidade principal. O subgrupo de linfócitos T citotóxicos com uma molécula

CD8 sobre a sua superfície pode ligar-se a moléculas da classe I do complexo de

histocompatibilidade principal. O subgrupo de linfócitos T auxiliares com uma molécula

CD4 sobre a sua superfície pode ligar-se a moléculas da classe II do complexo de

histocompatibilidade principal (HUSTON.,2006)

As principais funções dos linfócitos T são: modular todas as respostas imunes

aos antígenos protéicos e servir como células efetoras para a eliminação dos micróbios

intracelulares (ABBAS et al.,2000).

Os linfócitos T CD4

também denominados auxiliares (do inglês “helper”) ainda

podem ser subdivididos em duas populações efetoras funcionalmente distintas

denominadas linfócitos T helper 1 (Th1) e linfócitos T helper 2 (Th2). Linfócitos T helper

0 (Th0) pode ser uma população distinta e efetora ou um estágio intermediário da

diferenciação das células T CD4

em Th1 e Th2. Linfócitos Th1 são tipicamente,

produtores de algumas citocinas como Interferon-gamma (INF-γ), Interleucina-2 (IL-2),

Fator de Necrose Tumoral - beta (TNF-β) e Fator de Necrose Tumoral - alfa (TNF-α),

sendo essenciais para o estabelecimento de respostas imunes celulares. Os linfócitos

Th2 produzem, caracteristicamente, Interleucina-4 (IL-4), Interleucina-5 (IL-5),

Interleucina-10 (IL-10), Interleucina-13 (IL-13) que são citocinas importantes na indução

da síntese de imunoglobulina E (IgE) por células B, participando principalmente, das

alergias e infecções por helmintos. (FAHEY et al.,1998).

1.3. IMUNODEFICIÊNCIAS DE LINFÓCITOS T

As imunodeficiências de células T são diagnosticadas pela diminuição ou

aumento do número destas células no sangue periférico (LEE et al.,1996). Indivíduos

que possuem diminuição nas contagens de células brancas (leucopenia) têm maior

susceptibilidade às infecções. Os linfócitos T são particularmente específicos no

combate às infecções virais (BOWER et al.,1998).

Algumas imunodeficiências vêm sendo descritas. Na manutenção da

homeostase, que é a propriedade de regulação das células do sistema, os linfócitos T

do sangue periférico são regulados através de sinalizações (JOHNSON et al.,2007). Em

geral, a expansão clonal das células específicas são balanceadas pela morte celular

programada (apoptose) mantendo relativamente números constantes totais de linfócitos

T de sangue periférico (KUSS et al.,2004).

Pacientes com carcinoma escamoso celular, que é uma neoplasia conjuntiva

maligna, de cabeça e pescoço bem como melanoma e câncer de mama têm reportados

aumentos em linfócitos T circulantes (SAITO et al.,1999; DWORACKI et al.,2001;

HOFFMANN et al.,2002; REICHERT et al.,2002).

Uma significante diminuição no percentual de linfócitos T ativados com

manutenção dos números absolutos de linfócitos T totais, linfócitos T auxiliares,

linfócitos T citotóxicos e células assassinas naturais (NK) têm sido reportadas em

trabalhadores expostos ao etileno-bis-dithiocarbamato de manganês e zinco

(Mancozeb) que é um fungicida utilizado na plantação de batata, maçã, tomate, uva e

frutas cítricas (NAKATA et al.,2006).

Na hepatite causada pelo Vírus da Hepatite B (VHB) ocorrem possíveis

alterações nos valores de linfócitos T sugerindo uma diminuição mais intensa que a

ativação destas células e que a patogênese da hepatite viral está relacionada com a

função imune humoral (linfócitos B e seus produtos) e celular (linfócitos T) (WANG et

al.,2003).

A infecção pelo Vírus da Imunodeficiência Humana (VIH) está associada com

uma perda da função imune caracterizada pela diminuição no número de linfócitos T

auxiliares (CD4+) que são as células-alvo do vírus e do conseqüente aumento de

linfócitos T citotóxicos (CD8+) (PHILLIPS et al.,2002). Desde a descoberta desta

síndrome em 1981, duas grandes hipóteses foram levantadas na identificação do

mecanismo pelo qual o VIH-1 causa a Síndrome da Imunodeficiência Humana (SIDA).

A primeira hipótese é que o VIH-1 causa a perda de linfócitos T CD4+ pela infecção

direta e conseqüente morte destas células. A segunda é baseada em observações que

células infectadas e não infectadas são afetadas e que a infecção pelo VIH-1

indiretamente danifica a função imune, talvez por causa de uma reação aberrante ante

a infecção do sistema imunológico (STEVENSON.,2003). O acompanhamento da

evolução da doença é monitorada pelas dosagens de valores absolutos e relativos de

subpopulações de linfócitos T e pelos níveis da carga viral plasmática (SMITH et

al.,2003)

As observações de todas estas imunodeficiências sugerem que os números

absolutos de linfócitos e suas subpopulações são importantes para a redistribuição

destas células e para o melhoramento clínico dos pacientes.

1.4. VALORES DE REFERÊNCIA

No acompanhamento de indivíduos acometidos por doenças que comprometam

o sistema imunológico, é realizada uma avaliação entre as contagens das células do

paciente e os valores de referência (VR) para cada célula, que são as contagens

médias do número de determinadas células dentro de um grupo populacional (DE

SIQUEIRA et al.,1997)

Tais valores devem ser determinados em cada país e/ou região, pois algumas

variáveis possuem características singulares dentro de uma população em estudo

(BERTAZZI.,1988) Devido a não disponibilidade de valores de referências específicos

na população brasileira, a maioria das análises dos pacientes no Brasil são

referendadas de estudos compilados da literatura internacional, direcionando

erroneamente à generalização dos dados de populações com características muito

diversas. No estabelecimento da validade de valores de referência é necessário

conhecer as características relevantes da população estudada, estabelecer a técnica de

amostragem, a técnica de análise do material biológico e o desempenho da

aparelhagem usada (DE SIQUEIRA et al.,1997).

Estudos publicados na literatura e que são relatados ao longo deste trabalho,

demonstraram que a diversidade étnica e dados demográficos podem ser relevantes

para as diferenças encontradas nos resultados em diversos países.

1.4.1. INFLUÊNCIA ÉTNICA

A população brasileira é uma das mais heterogêneas do mundo, resultando da

mistura entre povos ameríndios, europeus, africanos e mais recentemente, indivíduos

de origens asiáticas (ABE-SANDES et al.,2004). Os primeiros habitantes foram os

ameríndios, que devem ter sido oriundos das Américas em uma simples onda

migratória há mais ou menos 21.000 anos atrás (PARRA et al.,2003; ABE-SANDES et

al.,2004).

Quando os portugueses chegaram em 1500, encontraram aproximadamente 2,5

milhões de índios vivendo nas terras onde hoje é o Brasil (PARRA et al.,2003). Na

metade do século XVI, africanos foram trazidos ao Brasil para trabalhar em fazendas de

cana-de-açúcar e depois na exploração de minas de ouro e diamantes e plantações de

café. Historicamente é sugerido que entre 1551 e 1850 foram trazidos em torno de 4

milhões de africanos (ALVES et al.,2005)

Com a imigração européia é estimado que em torno de 500 mil portugueses

chegaram no país entre 1500 e 1808 (ALVES et al.,2005). Após os portos brasileiros

serem legalmente abertos para todas as nações, o Brasil recebeu aproximadamente 4

milhões de outros imigrantes de todas as partes do mundo (PIMENTA et al.,2006).

O tráfico de escravos iniciou-se na metade do século XVI, e até 1855

aproximadamente 4 milhões de africanos chegaram ao Brasil (IBGE.,2000). Estes

vieram de diferentes regiões da África, predominantemente de Angola, Congo e

Moçambique (DA SILVA et al.,1999), gerando um processo de miscigenação que

predominou até a metade do século XIX, tendo a característica proeminente de uma

mistura de homens europeus (maioria português) com mulheres ameríndias ou

africanas (ARPINI-SAMPAIO et al.,1999).

A terceira onda migratória no Brasil foi composta de europeus e um baixo

número de pessoas do meio oeste, iniciada na metade do século XIX, e seguida pela

mais recente imigração oriunda do Japão, Coréia e China. Cerca de 5 milhões de

imigrantes chegaram entre 1820 e 1975, dos quais 70% eram portugueses e italianos

ou ainda espanhóis, alemães, sírios, libaneses e japoneses (IBGE.,2000). Dos

imigrantes que chegaram ao Brasil entre 1500 e 1972, 58% eram europeus, 40% eram

africanos e 2% eram asiáticos (CALLEGARI-JACQUES et al.,1999).

A variedade ou riqueza étnica da população brasileira permitiu originar grupos

isolados representados por algumas vilas de ameríndios e africanos derivados de

comunidades provenientes dos quilombos, conservando muitas características das

populações ancestrais. Em análise de freqüências em haplogrupos do cromossomo Y,

foram encontradas distribuições variadas entre os estados e regiões brasileiras. Em

Salvador, 50% apresentaram haplogrupo relacionado à origem africana, 12% de origem

branca, 8% de origem européia, africana e asiática e 14% tinha haplogrupo típico dos

continentes australianos e africanos. Dos brancos estudados, 54% apresentaram

haplótipos da raça branca, 24% apresentam origem africana, européia e asiática e 14%

apresentam haplótipos típicos da região australiana e asiática (AZEVEDO et al.,1986).

1.4.2. NUTRIÇÃO

A dieta de um indivíduo é de fundamental importância para o sistema imunológico.

Recentes estudos têm demonstrado que a suplementação de alguns compostos

adicionados na dieta pode influenciar o processo inflamatório e a resposta imunológica

às doenças (SAKURAI et al.,2006). Atrelados a esta nutrição, imunonutrientes como

arginina, glutamina, ômega-3 e ácidos nucléicos são comercialmente produzidos para

reduzir a incidência de complicações infecciosas (BARBUL.,1986; LACEY et al.,1990;

PASTORES et al.,1994; ALMALLAH et al.,2000)

A adição destes compostos à dieta resulta em resultados muito favoráveis para a

modulação na resposta imune (BRAGA et al.,1996). A excessiva deficiência em alguns

micronutrientes como vitamina E, ferro e zinco enfraquece o sistema imunológico

(CHANDRA.,1984; SHERMAN.,1992; ALMALLAH et al.,2000; BODGEN et al.,2004).

Está estabelecido que o “status” da nutrição de um indivíduo modula a função

imune em ambos os sexos (SAMARTIN et al.,2001). Porém, o excesso nutricional pode

resultar em obesidade, enquanto baixa nutrição interfere nas funções da imunidade

inata e resulta em baixa imunidade (CHANDRA.,1991; SCRIMSHAW et al.,1997). A

obesidade, considerada com Índice de Massa Corporal (IMC) maior que 30kg/m² pode

estar associada com inflamação crônica, resultando num aumento da concentração de

proteína C reativa, que é uma das proteínas plasmáticas indicadoras de fase aguda em

algumas doenças; interleucina-6

que é uma citocina com efeito pró-inflamatório em

respostas agudas agindo ainda no metabolismo de carboidratos e lipídios e Fator de

Necrose Tumoral alfa (TNF-α) que é uma glicoproteína sérica que possui atividade

necrotizante contra linhagens de células tumorais e aumenta a habilidade de rejeitar

transplantes (DANDONA et al.,2004).

Aspectos particulares da dieta habitual incluindo gorduras e proteínas,

multivitaminas, suplementos minerais e consumo excessivo de álcool tem uma

influência significante na função imune. Para muitos compostos nutricionais existem

valores limite, os quais determinam os índices que resultam em desequilíbrio da função

imune e/ou outros problemas de saúde. A deficiência de nutrientes está associada a

uma resposta imune debilitada e ao conseqüente aumento da susceptibilidade a

doenças, como gripe. O correto balanceamento dietético beneficia a função imune. A

adição de micronutrientes à dieta deficiente restabelece a função imune e a resistência

contra infecções (CALDER et al.,2002).

1.4.3. COMPORTAMENTO

Alguns estudos mostraram que a demografia em uma determinada população

pode interferir na função imune. Foram encontradas variações significativas na

contagem de linfócitos T e suas subpopulações em amostra de sangue de homens e

mulheres fumantes e não fumantes, revelando que a contagem de linfócitos T CD4+ foi

maior em fumantes de ambos os sexos do que indivíduos não-fumantes (TOULOUMI et

al.,1998; PARRA et al.,2003). Uma freqüência elevada do consumo de bebidas

alcoólicas também podem interferir nas funções imunológicas dos linfócitos T e suas

subpopulações, ocorrendo uma descompensação das contagens absolutas destas

células, principalmente em células assassinas naturais (NK) (WATZL et al.,1992;

CALDER et al.,2002; ZEIDEL et al.,2002; GILLS et al.,2002)

O estresse psicológico também pode influenciar na contagem absoluta de

linfócitos no sistema imune, pois a baixa autonomia dos nervos que atingem os tecidos

linfóides associados aos hormônios mediadores estimulados pelo estresse interfere nas

funções celulares (COHEN et al.,1991). Hormônios do estresse, como as catecolaminas

e glicocorticóides são potentes moduladores da resposta imune. Estresse psicológico

crônico diminui os níveis da imunoglobulina A (IgA) na saliva, responsáveis pela

proteção da mucosa contra agressões, conforme ficou evidenciado num trabalho com

estudantes sob estas condições (MCEWEN.,2002).

Algumas variáveis como grau de instrução, formas de moradia e diferenças de

personalidade foram avaliadas para os níveis de estresse, onde indivíduos foram

expostos a viroses respiratórias e os resultados indicaram que o estresse psicológico

está associado com o aumento do risco para contrair a infecção, independente da

possibilidade de transmissão e da virulência (COHEN et al.,1994).

Indivíduos submetidos a estresse prolongado e freqüente podem resultar em

alterações neuroendócrinas e imunológicas na Doença do Estresse Pós-Traumáutico

Crônico (DEPC) acarretando sérios danos mentais e físicos à saúde (MCEWEN.,2002;

SABIOCELLO et al.,2004) O sistema imune interage com o eixo adrenal-pituitário-

hipotalâmico na manutenção da homeostase. Sendo o principal responsável efetor do

estresse, o cortisol modifica o trabalho do complexo de citocinas e conseqüentemente a

função e recirculação linfocitária (CHOUROS.,1995).

A exposição de indivíduos a eventos que podem desenvolver DEPC acarreta

num comprometimento do sistema imune e ainda que a duração desta doença está

associada com o eixo adrenal-pituitário-hipotalâmico (VIDOVIC et al.,2007)

1.4.4. MODELOS DE ESTUDO NO MUNDO

Valores de referência para os linfócitos T e suas subpopulações oriundos de

estudos americanos e europeus são adotados nas diferentes áreas de saúde (MAINI et

al.,1996). As características de uma população podem determinar variáveis oriundas da

realidade sócio-econômica de uma determinada região (PARRA et al.,2003).

Idade e sexo são variáveis importantes para a determinação dos valores de

referência nas contagens de células. Os linfócitos T CD4+ e as células assassinas

naturais (NK) apresentam alterações significativas de acordo com a idade e sexo,

enquanto que os linfócitos T CD8+ mantêm-se alterados apenas entre os sexos (DE

PAOLI et al.,1988; UTSUYAMA et al.,1993)

A maioria dos estudos dos valores de referências em células ou em outros

compostos é realizada em populações caucasianas, mas este contexto pode apresentar

diferença significativa na sua utilização em outras populações, podendo ainda levar a

um erro na interpretação dos diagnósticos bem como na interpretação clínica (PRINCE

et al.,1985; REICHERT et al.,1991; UTSUYAMA et al.,1993; CHOONG et al.,1995;

SHAHABUDDIN et al.,1998).

Na Índia, foi realizado um estudo investigativo dos valores de referências em

algumas subpopulações de linfócitos em indivíduos saudáveis, porque era utilizado

padrão de países de população caucasiana. Foram encontrados valores relativos de

referência das contagens de linfócitos associando a possíveis fatores que pudessem

influenciar nestes resultados, como estado de origem do voluntário, sexo, idade, altura,

peso, ocupação, tabagismo e consumo de álcool (SAXENA et al.,2004).

Na Itália, um estudo multicêntrico com cinqüenta e três laboratórios de citometria

de fluxo e 1311 doadores de sangue com faixa etária entre 18 e 70 anos determinou os

valores de referência de linfócitos para este país. Foram encontrados significantes e

singulares resultados no padrão de normalidade da população estudada e ainda

importantes alterações referentes a sexo e tabagismo (SANTAGOSTINO et al.,1999)

Um estudo realizado com pequeno número de doadores de sangue chineses,

originários dos Estados Unidos, avaliou contagens de linfócitos T CD3+, CD4+ e CD8+

e outros marcadores de leucócitos. Este trabalho demonstrou diferenças significantes

em comparação com o grupo caucasiano (PRINCE et al.,1985). A necessidade deste

estudo deu-se pelo crescente aumento do número de casos de indivíduos infectados

pelo Vírus da Imunodeficiência Humana (VIH) na China, sendo estes dados de

fundamental importância para o monitoramento destes pacientes (KAM et al.,1996).

Setenta doadores de sangue participaram da pesquisa de avaliação das

contagens de referências de linfócitos na Suíça, onde foram encontrados valores

singulares de acordo com a população estudada (BISSET et al.,2004).

Em Camarões, 868 indivíduos foram avaliados na contagem de células T e suas

subpopulações, sendo testados e excluídos indivíduos com sorologia positiva para o

Vírus da Imunodeficiência Humana, assim como aqueles que apresentavam alguma

infecção aguda para malária, febre tifóide, ou ainda, que sofreram hospitalização nos 12

meses anteriores ao início do estudo. Também foram avaliadas a idade e sexo. Foram

encontrados resultados significantemente diferentes comparados aos publicados na

literatura (ZEKENG et al.,1997).

Valores de referências em crianças foram pesquisados na Turquia, num estudo

que abrangeu 190 crianças. Este grupo foi estratificado de acordo com a idade

(crianças de 1 ano, entre 1 e 2 anos, entre 2 a 6 anos, entre 6 e 10 anos e 10 a 18

anos). Os resultados variaram de acordo com a faixa etária e os marcadores estudados,

corroborando a importância da faixa etária na normalidade de subpopulações celulares

(IKINCIOGULLAN et al.,2004).

Em crianças de uma determinada região da África os níveis de linfócitos T CD4+

variaram com a idade do paciente. Crianças até 03 meses de idade tiveram uma

contagem destas células superior às encontradas em crianças de 4 a 12 meses. As

contagens de linfócitos T CD4+ nas crianças de 2 anos de idade foram superiores as

das crianças de 3 anos, 4 anos e 5 anos. Variações consideráveis também foram

relatadas em crianças na faixa etária compreendida entre 6 e 10 anos, principalmente

quando comparadas aos adultos (EMBREE et al.,2001). Utilizando a técnica de

citometria de fluxo, foram avaliados resultados diferenciados em adolescentes e adultos

em Londres (BOFFIL.,1992)

Um estudo desenvolvido na Bélgica analisou as distribuições de populações de

linfócitos avaliando faixas etárias entre 18 e 70 anos e de acordo com o sexo. Foram

encontradas variações em células T CD3+ na ordem de 61 a 85%, em T CD4+, 28 a

58% e em T CD8+, 19 a 48% (REICHERT et al.,1991).

1.5. JUSTIFICATIVA

As imunodeficiências de células T são diagnosticadas pela diminuição ou

aumento do número destas células no sangue periférico, baseado no conhecimento da

contagem absoluta considerada normal em indivíduos saudáveis de uma população,

tomando como parâmetro para análise de pacientes que apresentam imunodeficiências

(LEE et al.,1996).

O padrão de referência da contagem absoluta das subpopulações de linfócitos T,

utilizado nos laboratórios que compõem a rede de DST/AIDS do Ministério da Saúde no

Brasil, resultou de valores de estudos realizados em centros de pesquisa nos Estados

Unidos e na Europa e que são adotados pelas empresas responsáveis pela tecnologia

da citometria de fluxo para avaliar os padrões dos testes fornecidos, bem como por toda

a rede de saúde, mas que sofrem variações relevantes dependendo das características

do grupo de pacientes estudados.

A infecção pelo VIH, por exemplo, resulta, em última análise em

comprometimento funcional do sistema imune. A maioria das manifestações de

imunodeficiência, incluindo infecções e tumores, é devida principalmente a uma

carência de linfócitos T CD4+. O marco da progressão da doença induzida pelo VIH é a

diminuição destas células no sangue periférico em até dez vezes os valores

considerados normais, de acordo com padrão norte-americano, na Síndrome da

Imunodeficiência Adquirida (SIDA) completamente desenvolvida (ABBAS et al.,2000).

Para o acompanhamento terapêutico na SIDA, a contagem de linfócitos T CD4+

é comumente usada como indicador para introdução de profilaxia primária para

infecções oportunistas e/ou terapia antiretroviral. As determinações dos valores de

linfócitos T CD4+ são realizadas, atualmente, pela técnica de citometria de fluxo ou

imunofluorescência indireta - IFA (STEIN et al.,1992).

As características singulares da população brasileira com sua forte influência na

diversidade étnica e dos índices sociais diferentes entre a região nordeste, aqui

representado pelo estado da Bahia e da região norte, representado pelo estado do

Pará, reforçam a necessidade da determinação dos valores de referência nas

subpopulações de linfócitos T em indivíduos saudáveis. Estes resultados deverão ser

tomados como parâmetros na população brasileira para análise das variações

quantitativas nestas subpopulações.

Nos Estados Unidos, a classificação étnica é definida com brancos, afro-

descendentes e afro-americanos ou europeus hispânicos. A origem dos indivíduos

provenientes da África é geograficamente diferente dos que deram origem à

miscigenação na América do Sul. A nossa classificação fenotípica atual tem sido

variada e refere-se a mulato, mulato médio, mulato escuro, negro, branco, índio e

oriental. Essas características são descritas pelo IBGE, e utilizadas em estudos na

genética humana (PARRA et al.,2003).

Estes indicadores devem representar, em nosso país, novas interpretações

clínicas e terapêuticas para o tratamento de doenças que são acometidas pela

anormalidade quantitativa das subpopulações de linfócitos T.

Assim, dados regionais, tornam-se necessários aos diagnósticos de

enfermidades e investigação científica sobre saúde de uma dada população. Não

existem registros de estudos em amostras da população brasileira comparadas aos

dados encontrados e registrados em outros países.

2. OBJETIVOS

2.1. GERAL

Determinar os padrões de distribuição das subpopulações de linfócitos T CD3+,

T CD4+ e T CD8+ e leucócitos totais em adultos hígidos, nos estados da Bahia e Pará.

2.2. ESPECÍFICOS

2.2.1. Determinar os valores absolutos e percentuais de referências para

linfócitos T CD4+, T CD8+ e T CD3+ e linfócitos totais em população adulta na Bahia e

no Pará;

2.2.2. Avaliar a variação dos valores das subpopulações dos linfócitos T de

acordo com gênero e idade;

2.2.3. Analisar a influência de hábitos comportamentais, como consumo de

bebidas alcoólicas, tabagismo, tempo de descanso e predominância das influências

étnicas na distribuição de linfócitos T nestes indivíduos;

2.2.4. Comparar resultados encontrados na população estudada com outros

estudos semelhantes em diferentes países.

3. METODOLOGIA

3.1. SELEÇÃO DAS AMOSTRAS

A amostragem total foi oriunda de dois estados do Brasil, sendo coletada em

Hemocentros. Na Bahia, todas as coletas foram realizadas no Hemocentro da Bahia

(HEMOBA) e no Pará, as amostras foram coletadas pelo Hemocentro do Pará

(HEMOPA).

O protocolo foi submetido e aprovado pelo comitê de ética em pesquisa da

Maternidade Climério de Oliveira da Universidade Federal da Bahia.

Todos os voluntários, após aprovação na triagem para doação, foram

encaminhados para assinar o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido e a

responderem ao questionário epidemiológico para caracterizar grupos na população

estudada de acordo com dados demográficos e com possíveis características

fenotípicas determinantes para cada estado da região estudada.

Como critério de inclusão foram selecionados indivíduos saudáveis acima de 18

anos, doadores de sangue ou medula óssea. Como critério de exclusão, indivíduos

reprovados na triagem sorológica para Vírus da Imunodeficiência Humana, Vírus

Linfotrópico das Subpopulações de Linfócitos T em Humanos (HTLV), Virus da Hepatite

B, Vírus da Hepatite C, Doença de Chagas e Sífilis dos hemocentros.

Um total de 526 doadores foram incluídos no estudo, sendo 450 amostras

coletadas no HEMOBA e 76 coletadas no HEMOPA.

3.2. ESTRATIFICAÇÃO DAS AMOSTRAS

Para fins de avaliação, as amostras foram analisadas pelo gênero e variáveis

demográficas como tabagismo, freqüência no consumo de bebidas alcoólicas e tempo

de descanso (sono) diário. Os pacientes foram estratificados de acordo com a região de

origem da amostra.

Foi questionado aos voluntários sobre o hábito de consumir bebida alcoólica,

sendo classificado como consumidor habitual, os que ingerem este tipo de bebida pelo

menos duas vezes na semana. Avaliou-se também o tempo de descanso nestes

indivíduos, tomando-se como parâmetro aceitável o equivalente a 8 horas de sono

diárias, além disso foi avaliada a freqüência de tabagismo neste grupo determinada por

fumante, não fumante e ex-fumante.

3.3. COLETA E SOROLOGIA DAS AMOSTRAS

As amostras de sangue foram coletadas em tubo de 4.5 ml contendo 8,1 mg de

anticoagulante K³EDTA e acondicionadas em temperatura ambiente, sendo

transportadas imediatamente após o término da coleta diária. Os ensaios com as

amostras foram iniciados em um período máximo de 08 horas após a coleta na Bahia.

Os ensaios de sorologia foram realizados através da metodologia de ELISA onde

todos os doadores do estudo apresentaram resultados negativos para as sorologias de

VIH 1 e 2, HTLV I e II, Hepatites virais B e C, Sífilis e Doença de Chagas.

No Pará as amostras foram coletadas no período da manhã e foram enviadas a

Salvador chegando ao laboratório executor em no máximo 24 horas, onde foram

preparadas e testadas em até 8 horas após sua chegada. Estes indivíduos também

responderam ao mesmo inquérito investigativo que os doadores da Bahia.

3.4. CITOMETRIA DE FLUXO

Todas as amostras foram avaliadas pela técnica de citometria de fluxo que

consiste numa caracterização imunofenotípica de compostos protéicos provenientes de

células, sejam eles proteínas de membrana celular, intracitoplasmática, ácido

desoxirribonucléico ou ainda produtos de sínteses celulares como citocinas, proteínas

do complemento, dentre outras.

Esta caracterização consiste pela ligação de anticorpos monoclonais associados

a compostos fluorescentes que emitem um comprimento de onda capaz de ser

detectado pelo citômetro de fluxo, esses compostos são denominados fluorocromos.

A imunofenotipagem dos linfócitos foi caracterizada pela ligação de anticorpos

monoclonais anti-CD3+ que é um marcador específico de linfócitos T, anti- CD4+ que

associado ao CD3+ caracteriza linfócitos T auxiliares e o anti-CD8+ que em associação

com o CD3+, determinam linfócitos T citotóxicos e supressores. Foram caracterizados

também os leucócitos e linfócitos totais através da marcação com anticorpo monoclonal

anti-CD45+ que está presente na superfície de todas estas células. Estas marcações

são imprescindíveis na determinação dos valores de contagem absolutas e relativas

dos linfócitos T.

Na avaliação de valores absolutos das subpopulações linfocíticas, foram

utilizados tubos Trucount da Becton Dickinson. Neste protocolo foram utilizados 50 µl

da amostras de sangue total contendo 1x10

células para cada tubo. Foram

adicionados a estes tubos 20 µl de anticorpo (BD Tritest – Cat. N° 340298) contendo

anti-CD3 associado ao fluorocromo Complexo Ativado de Proteína CLorofil-Peridina

(PerCP), anti-CD4 associado ao Isotiocianato de Fluoresceína (FITC) e anti-CD8

associado a Ficoeritrina (PE). As amostras foram incubadas por 15 minutos na ausência

de luz, devido à fotossensibilidade dos fluorocromos presentes nos anticorpos

monoclonais numa temperatura entre 20° a 25° C. Posteriormente foi adicionado 450µl

de solução tampão de lise, contendo 50% de dietilenoglicol e 10% de formaldeído (BD

FACS Lysing Solution – Cat. N° 349202) utilizado para lisar as hemácias presentes nas

amostras. Estas foram mais uma vez incubadas por 15 minutos na mesma temperatura

entre 20° a 25° C. Após o este período de incubação, as amostras foram adquiridas no

citômetro de fluxo FACSCalibur da Becton Dickinson e analisadas através do software

Multiset componente do citômetro.

Para a determinação percentual dos linfócitos foram utilizadas para cada teste,

1x10

células, correspondendo a uma média de 100 µl de amostra do sangue total.

Para cada amostra foram utilizados três tubos de poliestireno com dimensões

12x75mm. Um dos tubos foi preparado apenas com a amostra de sangue sem

marcação com anticorpos para caracterizar o controle do teste. Um segundo tubo foi

marcado com 20 µl de anticorpo anti-CD3 associado ao fluorocromo PerCP, anti-CD4

associado ao FITC e anti-CD8 associado ao PE (BD Tritest – Cat. N° 340298). A

amostra no terceiro tubo foi marcada com 10µl de anticorpo anti-CD45 associado ao

PerCP (BD Pharmingen – Cat. N° 555484). Após a marcação, as amostras foram

homogeneizadas por agitador de tubos por um tempo médio de 20 segundos e

incubadas na ausência de luz por 20 minutos numa temperatura entre 20° a 25°C.

Posteriormente foram adicionados 1ml de solução tampão de lise de hemácias

contendo 50% de dietilenoglicol e 10% de formaldeído (BD FACS Lysing Solution – Cat.

N° 349202) e submetidas a nova incubação no escuro por 20 minutos na mesma

temperatura anterior. Após a incubação foram realizados três ciclos de lavagem das

células adicionando a cada tubo 1ml de tampão salina fosfato (PBS - Phosphate Buffer

Saline), contendo 10 % de albumina bovina para evitar marcações inespecíficas de

proteínas nas células, levados a centrifugação por 5 minutos em cada ciclo na

velocidade de 2500 rotações por minuto (RPM) em temperatura entre 20° a 25°C. Após

o terceiro ciclo de lavagem, as amostras foram ressuspensas com 500 µl de PBS,

adquiridas e analisadas no citômetro FACSCalibur pelo software Cellquest.

Nos programas de análise, a população de linfócitos foi identificada através do

gráfico “dot plot” com eixos para tamanho (FSC- Forward Scatter), por complexidade

interna (SSC- Side Scatter), da população leucocitária total. Posteriormente pôde-se

determinar a fração percentual que cada população ou subpopulação representa

inserida nos linfócitos totais.

3.5. ANÁLISE ESTATÍSTICA

Dos resultados encontrados, foram determinados estatisticamente, os valores da

média (soma de todos os valores da população dividida pelo número de indivíduos

desta população), mediana (valor do indivíduo que divide a população de trabalho em

duas metades, a metade inferior da metade superior). A distribuição sendo normal tem

uma forma de um sino denominada curva de Gauss. Esta curva é simétrica

concentrando aproximadamente 66% dos seus indivíduos na região central em torno da

média mais ou menos o desvio padrão vide figura abaixo. A curva se aproxima da

normalidade quando os parâmetros de “simetria” são próximos ou menor que um, assim

como o achatamento. A amplitude (diferença entre o valor máximo e o mínimo de uma

população em estudo). Todos estes parâmetros são importantes para a fidedignidade

nos resultados quando se têm um estudo de distribuição populacional, avaliando as

características das amostras. Todos os dados foram analisados através do programa

SPSS versão 11.0.

Figura 3. Distribuição de normalidade em uma população representada pela Curva de Gauss.

Fonte: www.laeditorialvirtual.com.ar/Pages/Eldesafio/Graficos/Gauss.gif

4. RESULTADOS

4.1. CARACTERÍSTICAS GERAIS DOS ENTREVISTADOS NA BAHIA E NO PARÁ

A maioria dos doadores (59,5%) era do sexo masculino, quase 2/3 dos

indivíduos (59,2%) referia ingestão de álcool pelo menos duas vezes na semana.

A avaliação da influência do tabagismo revelou que apenas 10,9% dos doadores

eram fumantes e que 1,9% abandonaram o hábito há mais de um ano (Figura 4). Não

avaliamos os resultados entre os doadores ex-fumantes, devido a baixa significância

dentro da população.

10,90%

87,20%

1,90%

FUMANTES NÃO FUMANTES EX-FUMANTES

Figura 4. Distribuição da amostra segundo o hábito do

fumo em 526 indivíduos hígidos da Bahia e do Pará.

Gráfico em formato “pizza” avaliando a distribuição

percentual da população em estudo de acordo com o hábito

de fumar cigarros.Todos os ex-fumantes tinham mais de um

ano em abstinência.

A avaliação do tempo de descanso de cada indivíduo mostrou que a grande

maioria (77,9%) dormia por um período mínimo de 8 horas diárias, dentro do limite

considerável aceitável em nosso estudo.

4.1.2. Identificação das populações celulares na citometria de fluxo

Na análise das contagens absolutas das subpopulações de linfócitos T é

realizada inicialmente a identificação das células pelas propriedades da presença do

anticorpo anti CD3 e pela complexidade interna das mesmas. Após a identificação faz-

se uma seleção da população de interesse, esta seleção é denominada “estratégia de

gate”, associando aos outros parâmetros que são a identificação dos linfócitos T CD3+,

linfócitos T CD4+ e T CD8+, pela presença do anticorpo específico para cada célula.

Após todas as células serem identificadas, o programa realiza as contagens das células

que foram selecionadas, conforme Figuras 5 e 6.

Figura 5. Análise das contagens absolutas das subpopulações de linfócitos T por

citometria de fluxo Análise das contagens absolutas das subpopulações de linfócitos T. No

primeiro gráfico identifica-se a população total de linfócitos T CD3+ através da positividade

do anticorpo por complexidade interna das células e realizada a seleção desta população.

Os gráficos subseqüentes analisam as contagens destas células pela positividade do

anticorpo monoclonal específico para CD3, CD4 e CD8. Os resultados finais são expressos

na tabela à esquerda.

Figura 6. Análise das contagens relativas das subpopulações de linfócitos T por

citometria de fluxo. No gráfico A identifica-se a população total de linfócitos através do

tamanho e complexidade interna da célula. No gráfico B a identificação dá-se pela

positividade do anticorpo CD45 marcador de leucócitos por complexidade interna das

células, onde se realiza a seleção da população linfocitária. Os gráficos C, D e E analisam

as contagens destas células pela positividade do anticorpo monoclonal específico para CD3,

CD4 e CD8. Os resultados finais são expressos nas tabelas à direita.

4.1.3. Avaliação da contagem de células nas populações linfocíticas de acordo

com o estado de origem

A Tabela 1 apresenta a contagem da média e mediana nos linfócitos T CD3+, T

CD4+ e T CD8+ de acordo com sua procedência. Observa-se uma contagem média

significantemente maior nos linfócitos T CD3+/µl de sangue em doadores na Bahia

(1581 ± 525) quando comparada aos valores encontrados em doadores do Pará (1298

± 448, p<0,01). O mesmo acontecendo em relação aos linfócitos T CD4+/µl de sangue

(943 ± 326 vs 792 ± 277, p<0,01) e T CD8+ (549 ± 245 vs 417 ± 173, p<0,01) ambos na

Bahia e Pará, respectivamente, como demonstrados também na Figura 7.

Tabela 1. Relação entre os valores absolutos de tendência central e dispersão das amostras de sangue em

doadores hígidos dos Hemocentros de Salvador e Belém, 2006.

PARÂMETROS

(células/µl de sangue)

CD3+

N=526

(P<0,01)

CD4+

N=526

(P<0,01)

CD8+

N=526

(P<0,01)

Bahia Pará Bahia Pará Bahia Pará

Média

1581 1298 943 792 549 417

Mediana

1485 1191 881 766 495 355

Desvio Padrão

525 448 326 277 245 173

Relação CD4/CD8

1.78 2.15

ParaBahia

Estado

5.000

4.000

3.000

2.000

1.000

CD8

CD4

CD3

p<0,01

<0,01

Contagens absolutas de células

Figura 7. Distribuição dos valores absolutos de linfócitos T e suas subpopulações nas

amostras de sangue de doadores hígidos dos Hemocentros de Salvador e Belém. Box plots

demonstrando a distribuição em valores absolutos das subpopulações de linfócitos T nos estados

da Bahia e do Pará. Para todas as populações, as diferenças entre os estados foram significativas

com valor de p<0,01. As barras determinam valores de medianas e o box indica a escala de

interquartil (25-75%).

Os resultados relativos encontrados entre as subpopulações de linfócitos T e os

linfócitos totais confirmaram as diferenças significativas entre Salvador e Belém,

conforme demonstrado na figura 8.

ParaBahia

Estado

100

CD8p

CD4p

CD3p

Valores percentuais das células

( *

p<0,01 para todas as comparações)

Figura 8. Distribuição dos valores percentuais de linfócitos T e suas subpopulações nas

amostras de sangue de doadores hígidos dos Hemocentros de Salvador e Belém.

Box plots

demonstrando a distribuição relativa nas subpopulações de linfócitos T nos estados da Bahia e do

Pará. Os resultados relativos na Bahia para os linfócitos T CD3+ foi de 77,9%, em linfócitos T CD4+

foi de 43,2% e em T CD8+ foi de 25,4%. No Pará estes resultados foram de 62,4% para os

linfócitos T CD3+, 37,7% para linfócitosT CD4+e 18,6% para linfócito T CD8+. Para todas as

populações, as diferenças entre os estados foram significativas com valor de p<0,01.As barras

determinam valores de medianas e o box indica a escala de interquartil (25-75%).

4.2. DETALHAMENTO DAS CARACTERÍSTICAS DAS AMOSTRAS COLETADAS NA

BAHIA

4.2.1. Características gerais dos entrevistados na Bahia

Dentre os voluntários avaliados, 66,3% eram do sexo masculino. Foi analisada

também a freqüência do tabagismo entre estes doadores, sendo constatado que 11,7%

eram fumantes. Avaliando o consumo de álcool, 62,8% dos doadores consumiam pelo

menos duas vezes na semana. Foi avaliada também a freqüência de descanso em

sono diário, sendo observado que 81,6 % dormiam pelo menos 08 horas diárias.

4.2.2. Quantificação das diferentes subpopulações linfocitárias

A mediana das contagens absolutas de linfócitos T CD3+ encontrada nesta

população foi de 1485 células/µl de sangue com intervalo de referência entre 718 e

2721 células/µl de sangue, para as células T CD3+CD4+ foi de 881 células/µl de

sangue com intervalo de referência entre 422 e 1711 células/µl de sangue e para

CD3+CD8+, 495 células/µl de sangue com intervalo de referência entre 214 e 1056

células/µl de sangue. Os indivíduos não foram avaliados por faixa etária porque as

diferenças entre as contagens das subpopulações de linfócitos T não apresentaram

significância.

Para os resultados relativos entre as subpopulações de linfócitos T e os linfócitos

totais os resultados de mediana foram 77,9% para os linfócitos T CD3+, 43,2% para os

linfócitos T CD3+CD4+ e 25,4% nos linfócitos T CD3+CD8+, conforme demonstrado na

Tabela 2, onde estão presentes os valores de média, mediana e desvios padrão dos

resultados encontrados na população da Bahia os valores de mediana percentual que

são as contagens das subpopulações dos linfócitos T dentro dos linfócitos totais. Os

valores de simetria indicam que a distribuição é levemente desviada para a direita dos

valores normais da curva (simétrico ≤ 1) e apresenta um achatamento pequeno

(achatamento normal ≤ 1) indicando uma não normalidade na distribuição para as três

variáveis. A Figura 9 apresenta a curva de distribuição normal das subpopulações de

linfócitos T.

Tabela 2. Valores absolutos e relativos de tendência central e dispersão das amostras de sangue em

doadores hígidos do Hemocentro de Salvador, 2006.

PARÂMETROS CD3+

N=450

CD4+

N=450

CD8+

N=450

Média (células/

µl de sangue)

1581 943 549

Mediana (células/µl de sangue)

1485 881 495

Desvio Padrão (células/µl de sangue)

522 323 238

Moda

1067

924 415

Simetria

1,54 1,773 1,616

Achatamento

4,912 6,940 4,818

Amplitude

4318 2922 1748

Percentil (-2,5%)

718 422 214

Percentil (+2,5%)

2721 1711 1056

Mediana percentual

77, 9% 43, 2% 25, 4%

a. Existência de múltiplas modas

3500300025002000150010005000

CD3

Freqüência

300025002000150010005000

CD4

100

Freqüencia

2000150010005000

CD8

Freqüência

Figura 9. Histograma da distribuição das subpopulações de linfócitos T CD3, T CD4 e T CD8

na população na Bahia. A distribuição apresenta levemente desviada para os valores normais da

curva (simétrico ≤ 1) e apresenta um achatamento pequeno (achatamento normal ≤ 1) indicando

uma não normalidade na distribuição para as três variáveis.

4.2.3. Avaliação das contagens médias para as diferentes subpopulações de

acordo com o gênero e características demográficas

4.2.3.1. Sexo

Os valores de mediana para doadores masculinos nos linfócitos T CD3+ foi igual

a 1521 (± 488) células/µl de sangue. A contagem mediana das células T CD3+CD4+

nesta mesma população foi de 898 (± 289) células/µl de sangue e dos linfócitos T

CD3+CD8+, 537 (± 252) células/µl de sangue. Para o gênero feminino, a média para os

linfócitos T CD3+ foi igual a 1698 (± 577) células/µl de sangue, para células T

CD3+CD4+, 1032 (± 375) células/µl de sangue e para as células T CD3+CD8+, 570 (±

229) células/µl de sangue. Para todos os parâmetros, os valores de mediana foi

numericamente maior para as mulheres que para os homens (Figura 10).

FemininoMasculino

Sexo

5.000

4.000

3.000

2.000

1.000

CD8

CD4

CD3

p<0,05

Contagens absolutas de células

Figura 10. Distribuição de valores absolutos de linfócitos T e suas subpopulações em

amostras de sangue de doadores hígidos de acordo com o sexo em Salvador. Foram

encontradas diferenças significantes nos linfócitos T CD4+ entre os sexos (p<0,05). Os resultados

nas contagens dos linfócitos T CD3+ e CD8+ entre os gêneros não demonstraram diferenças

significantes. As barras determinam valores de medianas e o box indica a escala de interquartil

(25-75%).

4.2.3.2. Tabagismo

Entre os voluntários que se declaram fumantes, os valores das mediana

encontradas para os linfócitos T CD3+, T CD3+CD4+ e T CD3+CD8+ foi de 1622 (±

533) células/µl de sangue, 1013 (± 363) células/µl de sangue e 456 (± 230) células/µl de

sangue, respectivamente, enquanto que entre os não fumantes a média nos linfócitos T

CD3+ foi de 1470 (± 523) células/µl de sangue, nos linfócitos T CD3+CD4+, 864 (± 317)

células/µl de sangue e nos T CD3+CD8+, 499 (± 247) células/µl de sangue (Figura 11).

NãoSim

Fumantes

5.000

4.000

3.000

2.000

1.000

CD8

CD4

CD3

Figura 11. Distribuição entre os valores absolutos de linfócitos T e suas

subpopulações nas amostras de sangue de doadores hígidos associados

com o tabagismo em Salvador. Foram encontradas diferenças significantes nos

linfócitos T CD4+ entre estas variáveis (p<0,05). Os resultados nas contagens dos

linfócitos T CD3+ e CD8+ não apresentaram diferenças significantes. As barras

determinam valores de medianas e o box indica a escala de interquartil (25-75%)

Contagens absolutas de células

Fumantes Não fumantes

p<0,05

4.2.3.3. Tempo de descanso

Indivíduos que declararam possuir tempo satisfatório de descanso apresentaram

valores de linfócitos T CD3+ de 1483 (± 535) células/µl de sangue. Nas células T

CD3+CD4+, o resultado encontrado foi de 891 (± 332) células/µl de sangue e nas

células T CD3+CD8+ os valores foram de 495 (± 250) células/µl de sangue.

Nos voluntários que declararam tempo inadequado de descanso, ou seja, inferior

a 8 horas de sono diárias, os valores da mediana para os linfócitos T CD3+ foram de

1537 (± 478) células/µl de sangue, nas células T CD3+CD4+ estes valores atingiram

809 (± 293) células/µl de sangue e nas células T CD3+CD8+, 513 (± 219) células/µl de

sangue (Figura 12).

NãoSim

Descanso

5.000

4.000

3.000

2.000

1.000

CD8

CD4

CD3

Contagens absolutas de células

Figura 12. Distribuição dos valores absolutos de linfócitos T e suas subpopulações

em amostras de sangue de doadores hígidos associados ao tempo de descanso em

Salvador.Entre os indivíduos que declararam tempo de descanso maior ou igual a 8 horas

diárias e menor que 8 horas diárias, não Foram encontradas diferenças que fossem

significativas entre as células para esta variável na Bahia. As barras determinam valores de

medianas e o box indica a escala de interquartil (25-75%)

< 8 horas

sono/dia

≥ 8 horas

sono/dia

4.2.3.4. Álcool

Os voluntários que declaram ingerir bebidas alcoólicas em pelo menos duas

vezes na semana, apresentaram resultados de mediana para valores absolutos de

linfócitos T CD3+ iguais a 1505 (± 531) células/µl de sangue. Para as células T

CD3+CD4+, estes valores foram de 881 (± 337) e para T CD3+CD8+, 500 (± 240)

células/µl de sangue.

Dentre os indivíduos que não ingerem bebidas alcoólicas, as células T CD3+

apresentaram mediana de 1466 (± 517) células/µl de sangue, as T CD3+CD4+, 864 (±

309) células/µl de sangue e nos linfócitos T CD3+CD8+ estes valores foram de 486 (±

240) células/µl de sangue, conforme distribuição na Figura 13.

NãoSim

Álcool

5.000

4.000

3.000

2.000

1.000

CD8

CD4

CD3

Figura 13. Distribuição dos valores absolutos de linfócitos T e suas subpopulações em

amostras de sangue de doadores hígidos associados ao consumo de álcool em Salvador.

Entre os indivíduos que declararam ou não ingerirem bebidas alcoólicas, não foram encontradas

diferenças que fossem significativas entre as células para esta variável na Bahia. As barras

determinam valores de medianas e o box indica a escala de interquartil (25-75%)

Contagens absolutas de células

4.3. DETALHAMENTO DAS CARACTERÍSTICAS DAS AMOSTRAS COLETADAS NA

PARÁ

4.3.1. Características gerais dos entrevistados no Pará

Dos voluntários que participaram do estudo no estado do Pará, apenas 31,6%

eram do sexo masculino. Ainda acerca destes indivíduos, 7,9% declararam ser

fumantes, enquanto que 92,1% declararam ser não fumantes. Avaliando o grau de

descanso da população estudada, 63,2% declararam período de sono igual ou superior

a 8 horas por dia.

Para o consumo de bebidas alcoólicas, 44,7% declararam fazer uso pelo menos

duas vezes na semana.

4.3.2. Quantificação das diferentes subpopulações linfocitárias

Nesta população, os valores de mediana da contagem absoluta para linfócitos T

CD3+ foram de 1191 células/µl de sangue com intervalo de referência entre 648 e 2259

células/µl de sangue, 766 células/µl de sangue para os linfócitos T CD4+ e intervalo de

referência entre 342 e 1508 células/µl de sangue, e 355 células/µl de sangue para T

CD8+ com intervalo de referência entre 203 e 917 células/µl de sangue. Os indivíduos

não foram avaliados por faixa etária porque as diferenças entre as contagens das

subpopulações de linfócitos T também não apresentaram significância.

Observamos ainda valores de mediana percentual iguais a 62,4% para os

linfócitos T CD3+, 37,7% para as células T CD3+CD4+ e 18,6% para T CD3+CD8+.

A Tabela 3 detalha parâmetros dos valores de média, mediana e desvios padrão dos

resultados encontrados na população do Pará. Os valores de mediana percentual são

contagens das subpopulações dos linfócitos T dentro dos linfócitos totais.Os valores

indicados na simetria informam o nível de distribuição de igualdade entre os resultados,

sendo relevantes valores próximos a 1, os valores de achatamento indicam medidas de

assimetria na distribuição do valor real de uma variável e amplitude indicam medida

máxima na distribuição de um valor real de uma variável. Os percentis –2,5% e +2,5%

indicam valores máximos e mínimos significantes para as referências nas contagens de

cada subpopulação de linfócitos T. A Figura 14 avalia a distribuição normal das

subpopulações de linfócitos T nas amostras do Pará.

Tabela 3. Valores absolutos e relativos de tendência central e dispersão das amostras de sangue em

doadores hígidos do Hemocentro de Belém, 2006.

PARÂMETROS CD3+

N=76

CD4+

N=76

CD8+

N=76

Média

1298 792 417

Mediana

1191 766 355

Desvio Padrão

447,88 277,17 173,06

Moda

1067

924 415

Simetria

,811 ,801 1,107

Achatamento

,581 1,103 ,776

Amplitude

2164 1415 742

Percentil (-2,5%)

648 342 203

Percentil (+2,5%)

2259 1508 917

Mediana percentual

62,4 % 37,7 % 18,6 %

a. Existência de múltiplas modas

Figura 14. Histograma da distribuição das subpopulações de linfócitos T CD3, T CD4 e T CD8 na população no

Pará

. A distribuição apresenta levemente desviada para os valores normais da curva (simétrico ≤ 1)

e apresenta um achatamento grande (achatamento normal ≤ 1) indicando uma não normalidade na

distribuição para as três variáveis.

Freqüência

3500300025002000150010005000

CD3

300025002000150010005000

CD4

Freqüência

2000150010005000

CD8

Freqüência

4.3.3. Avaliação das contagens médias para as diferentes subpopulações de

acordo com gênero e características demográficas

4.3.3.1. Sexo

A média nas células T CD3+ entre os homens em valores absolutos foi de 1243

(± 504) células/µl de sangue. As células T CD3+CD4+ nesta mesma população

atingiram 768 (± 317) células/µl de sangue e os linfócitos T CD3+CD8+, 394 (± 182)

células/µl de sangue. Para o gênero feminino, os linfócitos T CD3+ obtiveram valor de

média 1323 (± 422) células/µl de sangue, as células T CD3+CD4+, 802 (± 260)

células/µl de sangue e as células T CD3+CD8+, 428 (± 170) células/µl de sangue. Não

foram encontradas diferenças significativas de acordo com o sexo (Figura 15).

FemininoMasculino

Sexo

3.000

2.500

2.000

1.500

1.000

500

CD8

CD4

CD3

Contagens absolutas de células

Figura 15. Distribuição dos valores absolutos e percentuais de linfócitos T e

suas subpopulações em amostras de sangue de doadores hígidos

associados ao sexo em de Belém. Os resultados nas contagens dos linfócitos

T CD3+, T CD4+ e T CD8+ entre os gêneros não demonstraram diferenças

significantes. As barras determinam valores de medianas e o box indica a escala

de inter

uartil

(

25-75%

)

4.3.3.2. Tabagismo

Os indivíduos que se declararam fumantes, obtiveram média para os valores

absolutos de linfócitos T CD3+ de 1523 (± 386) células/µl de sangue, as células T CD4+

960 (± 153) células/µl de sangue e T CD8+ 508 (± 252) células/µl de sangue.

Nos doadores que não fumam, os valores médios das células T CD3+ foram de

1276 (± 459) células/µl de sangue, as células T CD4+, 773 (± 286) células/µl de sangue

e os linfócitos T CD8+, 412 (± 169) células/µl de sangue. Foram encontrados valores

significativamente maiores (Figura 16) para a contagem das células T CD4+ entre os

indivíduos que fumam comparando aos que não fumam (p<0,05).

NãoSim

Fumantes

3.000

2.500

2.000

1.500

1.000

500

CD8

CD4

CD3

P<0,05

Não fumantes Fumantes

Contagens absolutas de células

Figura 16. Distribuição dos valores absolutos de linfócitos T e suas subpopulações

em amostras de sangue de doadores hígidos associados ao tabagismo em Belém.

Entre fumantes e não fumantes foram encontradas diferenças significantes nos linfócitos T

CD4+ entre estas variáveis (p<0,05). Os resultados nas contagens dos linfócitos T CD3+ e

CD8+ não apresentaram diferenças significantes. As barras determinam valores de

medianas e o box indica a escala de interquartil (25-75%)

4.3.3.3. Tempo de Descanso

Quando comparamos os valores médios para a contagem de células (Figura 17)

observamos diminuição nos linfócitos T CD3+ entre os doadores que declararam

descanso inadequado que apresentaram 1171 ± 376 células/µl de sangue do que os

que declararam tempo de descanso maior ou igual a 8 horas diárias que apresentaram

1372 ± 473 células/µl de sangue (p<0,05). Esta diminuição esteve presente também

para os linfócitos T CD4+, onde os que declararam tempo inadequado apresentaram

706 ± 218 células/µl de sangue e os que declararam tempo de sono inferior a 8 horas

apresentaram 842 ± 297 células/µl de sangue (p<0,05), o mesmo não ocorrendo nos

linfócitos T CD8+. Os voluntários que declaram tempo adequado apresentaram 387 ±

169 células/µl de sangue enquanto os declararam tempo inadequado apresentaram 435

± 176 células/µl de sangue.

NãoSim

Descanso

3.000

2.500

2.000

1.500

1.000

500

CD8

CD4

CD3

Figura 17. Distribuição dos

valores absolutos de linfócitos

T e suas subpopulações em

amostras de sangue de

doadores hígidos associados

ao descanso em Belém. Os

indivíduos declararam tempo de

descanso maior ou igual a 8

horas diárias e menor que 8

horas diárias. Foram encontradas

para esta variável no Pará,

diferenças significativas entre os

linfócitos T CD3+ (p<0,05) e T

CD4+(p<0,05), mas não em T

CD8+. As barras determinam

valores de medianas e o box

indica a escala de interquartil (25-

75%)

p<0,05

< 8 ho de ras

sono/dia

≥ 8 horas de

sono/dia

p<0,05

Contagens absolutas de células

4.3.3.4. Álcool

Nos doadores que declararam consumir bebidas alcoólicas com a freqüência

mínima de duas vezes na semana, os valores absolutos das médias dos linfócitos T

CD3+ foram de 1357 (± 519) células/µl de sangue, em T CD4+ foram de 826 (± 330)

células/µl de sangue e nos linfócitos T CD8+ estes valores foram de 436 (± 179)

células/µl de sangue.

Nos indivíduos que declararam não ingerir bebida alcoólica, estes mesmos

valores para os linfócitos T CD3+ foram de 1250 (± 380) células/µl de sangue, nos

linfócitos T CD4+, estas contagens foram de 762 (± 225) células/µl de sangue e nos

linfócitos T CD8+, 402 (± 170) células/µl de sangue. Não houve diferença significante

entre os indivíduos para esta variável, conforme descrito na Figura 18.

NãoSim

Álcool

3.000

2.500

2.000

1.500

1.000

500

CD8

CD4

CD3

Figura 18. Distribuição dos valores

absolutos de linfócitos T e suas

subpopulações em amostras de

sangue de doadores hígidos

associados ao consumo de álcool

em Belém. Não foram encontradas

diferenças nas contagens das células,

que fossem significativas entre os

indivíduos que declararam ingerirem

ou não bebidas alcoólicas no Pará. As

barras determinam valores de

medianas e o box indica a escala de

interquartil (25-75%)

Contagens absolutas de células

4.4. DETALHAMENTO DAS CARACTERÍSTICAS DAS AMOSTRAS ASSOCIADAS AO

SEXO E DADOS DEMOGRÁFICOS NUMA COMPARAÇÃO ENTRE OS ESTADOS

Os resultados encontrados para os linfócitos T e suas subpopulações foram

estratificados pelo estado de origem das amostras associado-os às variáveis propostas

como sexo e dados demográficos.

As contagens dos linfócitos T e suas subpopulações no estado da Bahia foram

sempre superiores as do Pará para estas variáveis apresentadas.

4.4.1. Correlação dos resultados avaliados pelo sexo de acordo com o estado

Nesta avaliação os linfócitos T CD3+, T CD4+ e T CD8+ apresentaram

diferenças significativas entre os homens avaliados nos estados da Bahia e do Pará. A

variação entre as células T CD3+ foi igual a 18% (p<0,01) com uma diferença absoluta

de 278 células/µl de sangue na comparação entre as médias por estado. Em T CD4+

esta variação foi de 14% (p<0,05) e a diferença foi de 129 células/µl de sangue e em T

CD8+ foi de a 26% ( p<0,01) diferindo em 143 células/µl de sangue.

No sexo feminino os valores encontrados para estas mesmas células entre os

estados também foram significantemente diferentes. Nos linfócitos T CD3+ a variação

entre as mulheres na Bahia e no Pará foi de 22% (p<0,01) com uma diferença absoluta

de 375 células/µl de sangue, o mesmo percentual de variação acontecendo com os

linfócitos T CD4+ e com uma diferença de 230 células/µl de sangue. Nos linfócitos T

CD8+ a variação foi de 25% (p<0,01) e a diferença foi de 143 células/µl de sangue.

Estes dados são evidenciados na tabela abaixo:

Tabela 4. Contagens médias das subpopulações de linfócitos T de acordo com o gênero entre os

estados.

BAHIA PARÁ

VARIÁVEIS CD3+

células/µl de sangue

CD4+

células/µl de sangue

CD8+

células/µl de sangue

CD3+

células/µl de sangue

CD4+

células/µl de sangue

CD8+

células/µl de sangue

SEXO (M* / F**) 1521 / 1698 897 / 1032 537 / 571 1243 / 1323 768 / 802 393 / 428

* p<0,05 **p<0,01

Tabela 4. Na variável Sexo ( M= masculino; F=Feminino). As contagens nos homens entre os

estados apresentaram diferenças significativas (p<0,05) e nas mulheres também apresentaram

diferenças significantes (p<0,01).

4.4.2. Correlação dos resultados avaliados de acordo com tabagismo entre os

estados

Entre os estados da Bahia e do Pará, não foram encontradas diferenças

significativas entre os homens que fumam. Nos linfócitos T e suas subpopulações,

todas as variações foram inferiores a 8%. Entretanto, entre os indivíduos que não

fumam as diferenças dos resultados das células T CD3+, CD4+ e CD8+ entre os

estados mostraram-se altamente significantes (p<0,01). Nestes indivíduos a variação

das células T CD3+ foi de 18,5%, em T CD4+ esta variação foi de 16,2% e em T CD8+

foi de 25,4%, conforme Tabela 5.

Tabela 5. Contagens médias das subpopulações de linfócitos T de acordo com o hábito do

tabagismo entre os estados.

BAHIA PARÁ

VARIÁVEIS CD3+

células/µl de sangue

CD4+

células/µl de sangue

CD8+

células/µl de sangue

CD3+

células/µl de sangue

CD4+

células/µl de sangue

CD8+

células/µl de sangue

TABAGISMO (S / N**) 1694 / 1568 1094 / 924 534 / 552 1543 / 1276 960 / 773 509 / 412

**p<0,01

Tabela 5. Na variável Tabagismo ( S= Fumantes; N= Não-fumantes). As contagens entre os

fumantes não apresentaram diferenças significativas. Nos não fumantes entre os estados as

diferenças apresentaram significância (p<0,01).

4.4.3. Correlação dos resultados avaliados de acordo com tempo de descanso

entre os estados

Nos doadores que foram enquadrados no tempo de descanso inaceitável, ou

seja, inferior a 8 horas diárias, os valores absolutos médios encontrados nos linfócitos T

e suas subpopulações apresentaram diferenças significativas (p<0,01). A variação nos

linfócitos T CD3+ nesses indivíduos foi igual a 22%, em T CD4+ foi igual a 19% e em T

CD8+ esta variação foi igual a 29%.

Em indivíduos que declararam tempo de descanso maior ou igual a 8 horas

diárias, as diferenças médias nos linfócitos T CD3+, T CD4+ e T CD8+ também foram

significantes, variando em 14% para T CD3+, 12% em T CD4+ e 21% em T CD8+. As

diferenças em valores absolutos para estas células foram de 224 células/µl de sangue

(p<0,05), 117 células/µl de sangue (p<0,05) e 115 células/µl de sangue (p<0,05),

respectivamente (Tabela 6).

Tabela 6. Contagens médias das subpopulações de linfócitos T de acordo com o tempo de descanso

entre os estados.

BAHIA PARÁ

VARIÁVEIS CD3+

células/µl de sangue

CD4+

células/µl de sangue

CD8+

células/µl de sangue

CD3+

células/µl de sangue

CD4+

células/µl de sangue

CD8+

células/µl de sangue

DESCANSO (S* / N**) 1595 / 1517 958 / 877 550 / 546 1372 / 1171 842 / 706 435 / 387

* p<0,05 **p<0,01

Tabela 6. Na variável Descanso (S= Tempo de descanso < 8 horas/dia; N= Tempo de

descanso ≥ 8 horas/dia). As contagens nos indivíduos que declararam tempo inadequado entre

os estados apresentaram diferenças significativas (p<0,05), bem como os que declararam

tempo adequado (p<0,01).

4.4.4. Correlação dos resultados avaliados pelo consumo de álcool entre os

estados

Entre os estados da Bahia e do Pará foram observadas diferenças significantes

nos resultados entre os linfócitos T CD3+ e T CD8+ nos doadores que declararam

ingerirem bebidas alcoólicas em pelo menos duas vezes na semana. A variação nos

linfócitos T CD3+ nestes indivíduos foi igual a 14% (p<0,05) e em T CD8+ igual a 20%

(p<0,05). Entre os doadores que não ingerem bebidas alcoólicas ou fazem uso apenas

uma vez na semana, as três subpopulações celulares estudas apresentaram variações

significantes. Em T CD3+ a variação entre os estados foi igual a 21% (p<0,05), em T

CD4+ foi igual a 19% (p<0,05) e em T CD8+ esta variação foi igual a 26% (p<0,05)

(Tabela 7).

Tabela 7. Contagens médias das subpopulações de células T de acordo com o consumo de álcool

entre os estados.

BAHIA PARÁ

VARIÁVEIS CD3+

células/µl de sangue

CD4+

células/µl de sangue

CD8+

células/µl de sangue

CD3+

células/µl de sangue

CD4+

células/µl de sangue

CD8+

células/µl de sangue

ÁLCOOL (S* / N**) 1579 / 1583 941 / 946 549 / 549 1357 / 1250 828 / 762 436 / 402

* p<0,05 **p<0,01

Tabela 7. Na variável Álcool ( S= Consomem bebidas alcoólicas duas vezes /semana;

N=Não consomem bebida alcoólica). As contagens nos indivíduos que declararam ingerirem

álcool em pelo menos duas vezes na semana entre os estados apresentaram diferenças

significativas (p<0,05), bem como nos que declararam não ingerirem bebidas alcoólicas

(p<0,01).

5. DISCUSSÃO

No presente trabalho foram constatadas diferenças significativas nos valores

referenciais de subpopulações de linfócitos T entre doadores de sangue no estado da

Bahia e do Pará.

Entre os dois estados, houve uma diferença entre o número de indivíduos

testados, porém na amostragem do Pará onde houve a colaboração de 76 doadores,

todos os resultados apresentaram-se satisfatórios, apresentando uma boa relação

quantitativa entre os linfócitos T CD3+, T CD4+ e T CD8+. Esta relação entre os

linfócitos T CD4+ e CD8+ foram todas maiores que 1, o que é esperado dentro de uma

população saudável.

A existência de valores de referências para subpopulações de linfócitos T

diferentes nos diversos estudos apresentados ao longo deste trabalho pode estar

associada a algumas variáveis presentes em cada população.

O Brasil tem em sua população uma diversidade étnica muito grande, onde cada

região no país possui características próprias da população inserida além dos costumes

inerentes em cada uma. Foram avaliadas duas localidades no Brasil: o Pará,

pertencente à região norte e a Bahia que está inserida na região nordeste do país.

A região norte possui uma influência muito grande dos primeiros habitantes

encontrados, que são os índios. Estes, apresentam costumes e dietas nutricionais

próprias que também foram preservadas. Sua alimentação pode representar uma

variável relevante associada a estes achados. A maioria dos estudos em humanos tem

pesquisado sobre alterações no sistema imunológico, mas apenas poucos têm

associado estes efeitos à dieta (ALBERS et al.,2005).

Existem evidências sugerindo que a nutrição auxilia no desempenho do sistema

imunológico e modula resistência a infecções (CHANDRA.,1991; SCRIMSHAW et

al.,1997). Alimentos ricos em ômega 3, arginina, glutamina e ainda algumas fórmulas de

suplementação alimentar contendo proteínas e ácidos nucléicos podem auxiliar na

modulação de uma resposta imune aumentando a produção de citocinas e outras

funções das células (ROLLER et al.,2004).Todas as funções imunes podem estar

associadas a uma adequação nutricional. A suplementação alimentar promove ganhos

qualitativos em alguns macronutrientes, relacionando funções imunes específicas a

indivíduos bem nutridos (ANTOINE et al.,2005).

Na Bahia é grande o consumo de alimentos preparados, por exemplo, com

azeite de dendê. Este contém proporções iguais de ácidos graxos saturados (palmítico

44% e esteárico 4%) e não saturados (oléico 405 e linoléico 105), que são essenciais

para o funcionamento normal das nossas células, onde a membrana celular permite a

passagem dos sais minerais e das moléculas necessárias para dentro e fora destas.

Esta membrana saudável dificulta a entrada na célula de substâncias químicas danosas

e de organismos como bactérias, vírus, fungos e parasitas. É ainda uma fonte natural

de vitamina E, tecoferóis e tecotrienóis, que atuam como antioxidantes protegendo dos

radicais livres. É rico também em betacaroteno, fonte importante de vitamina A

essencial para um funcionamento adequado do

sistema imunológico, além de

manterem saudáveis as mucosas (LIMA et al.,2004).

No Pará existe um alto consumo de peixes e mariscos que possuem escassos

carboidratos (açúcares), sendo ricos em vitamina A, B1,

importante para o bom

funcionamento do

sistema nervoso, dos músculos e do coração, vitamina B2 que

favorece o metabolismo das gorduras, açúcares e proteínas e é importante para a

saúde dos

olhos, pele, boca e cabelos e a vitamina D que promove a absorção de

cálcio essencial para o desenvolvimento normal dos ossos e dentes. Além desses

compostos, estão presentes nos peixes sais minerais, tais como o fósforo onde tem

relevante papel na formação molecular do

ADN (Ácido desoxirribonuléico) e do ARN

(Ácido ribonucléico), bem como do ATP (

adenosina tri-fosfato) e cálcio atuando como

mediador intracelular e na composição óssea (LIMA et al.,2004)

Apresentamos ao longo deste trabalho publicações que evidenciam diferentes

resultados para os valores de referência nas contagens absolutas e percentuais de

linfócitos T associados à região estudada conforme demonstrados nas tabelas 8 e 9.

Tabela 8. Valores de referências absolutos publicados na literatura em diferentes países e valores de

referências encontrados neste estudo na Bahia e no Pará.

ENCONT

VALORES DE REFERÊNCIA EM CONTAGENS ABSOLUTAS DE CÉLULAS T

RESULTADOS

RADOS NA

LITERATURA

T CD3+

Células/µl de sangue

TCD4+

Células/µl de sangue

T CD8+

Células/µl de sangue

ESTADOS UNIDOS

1410

880

490

CAMARÕES

1615

980

619

ETIÓPIA

1471

761

637

ITÁLIA

1533

940

551

CHINA

1370

725

589

BAHIA

1581

943

549

PARÁ

1298

792

417

Tabela 9. Valores de referências percentuais publicados na literatura em diferentes países e valores

de referências encontrados neste estudo na Bahia e no Pará.

VALORES DE REFERÊNCIA EM CONTAGENS PERCENTUAIS DE CÉLULAS T

RESULTADOS

ENCONTRADOS NA

LITERATURA

T CD3+

Células/µl de sangue

TCD4+

Células/µl de sangue

T CD8+

Células/µl de sangue

CHINA

69%

36,4%

29,7%

TURQUIA

70%

39%

24%

ÍNDIA

68,6%

37,1%

34%

ITÁLIA

73,7%

45%

26,4%

IRÃ

70,6%

42,1%

28,4%

BAHIA

76,7%

45,2%

26%

PARÁ

59,1%

36,2%

19,5%

Baseando-se pelos valores de referências absolutos publicados na literatura,

percebe-se uma similaridade entre os dados encontrados na China e no Pará para as

três subpopulações de linfócitos T, podendo corroborar com a aproximação de

ancestralidade entre estas duas regiões, sendo o Pará a segunda maior área indígena

do Brasil, segundo o IBGE e que os índios são ancestralmente asiáticos, assim como

os chineses. Percebe-se também uma similaridade entre os resultados encontrados na

Bahia e na Itália, o que pode ser explicado historicamente pela grande influência

européia no período da colonização do Brasil.

Em estudos com populações pertencentes ao mesmo continente, as variações

na contagem referencial de linfócitos T tendem a ser menores. A variação nos

resultados dos valores de referência encontrados em Camarões (ZEKENG et al.,1997)

e na África Central (MENARD et al.,2003) para linfócitos T CD4+ foi apenas 5% maior

em Camarões. Na Etiópia, esta variação aumenta para 22% em relação aos resultados

de linfócitos T CD4+ em Camarões e para 19% na África Central (TSEGAYE et

al.,1999). Nos linfócitos T CD8+ a variação nos resultados publicados em Camarões e

na Etiópia são de apenas 3%.

Existe uma diferença sócio-econômica muito grande entre estes países. A

Etiópia é um país que enfrenta difíceis condições econômicas produzida pelas terríveis

secas. A população total da Etiópia é de 58.733.000 habitantes, segundo estatísticas de

1997. Além disso, a esperança de vida dos etíopes é de 48 anos. A mortalidade infantil

é muito alta. Baixos valores para leucócitos e plaquetas têm sido reportados em

diversos estudos (GILL et al.,1979; AZIKIWE.,1984; SAHR et al.,1995).

Valores de referências encontrados para os linfócitos T e suas subpopulações na

Itália, Turquia e Suíça também apresentaram baixa variação entre os resultados

(Tabela 8 e 9). Na Itália as contagens dos linfócitos T CD3+ foi apenas 3,7% maior que

na Turquia e 1% maior que na Suíça. Nos linfócitos T CD4+, a Itália foi superior em 6%

comparado a Turquia e 2,9% comparado a Suíça e nas T CD8+ foi superior em 2,6%

comparado a Turquia e 3,2% comparado a Suíça (SANTAGOSTINO et al.,1999;

BISSET et al.,2004; IKINCIOGULLAN et al.,2004).

As contagens das referências dos linfócitos T tiveram pequenas variações

também entre populações na China e da Índia. Nos linfócitos T CD3+ a China

apresentou resultados superiores em 0,4% comparados ao da Índia. Em T CD4+ esta

variação foi superior na China em 0,7% e em T CD8+ foi superior em 4,3% (KAM et

al.,1996; SAXENA et al.,2004).

A influência africana na Bahia é muito grande. Hábitos e costumes deste

continente foram preservados. A população baiana é composta de 77,5% de afro-

descendentes e em Salvador os 2.277.591 negros/pardos, representam 79,8% da

população da região metropolitana (IBGE.,2000). Estes dados evidenciam que muito

provavelmente existam fortes semelhanças também entre a população baiana com

regiões do continente africano.

As regiões sul e norte mostram valores menores de ancestralidade africana e

diferem significativamente nas proporções de origem ameríndia e européia

(TELLES.,2003). Os antepassados indígenas contribuíram com muitos aspectos de

suas diversificadas culturas para a formação da população brasileira formada por

descendentes de europeus, negros, índios e, mais recentemente, de imigrantes vindos

de países asiáticos que mesclaram suas diferentes línguas, religiões e tradições

culturais em geral, propiciando a formação de uma nova cultura, fortemente marcada

por contrastes (IBGE.,2000).

Mais da metade da população indígena está localizada nas regiões Norte e

Centro-Oeste do Brasil, principalmente na área da Amazônia Legal. No entanto, há

índios vivendo em todas as regiões brasileiras. No Pará, esta população é de 20.185

índios, segundo o último censo em 2000, provenientes de 34 tribos diferentes

(IBGE.,2000).

Não foi encontrada na literatura, nenhum trabalho que pudesse demonstrar os

padrões de normalidade de células para os povos indígenas, impossibilitando uma

análise comparativa com a população da região norte, aqui representados pelo estado

do Pará.

Diferentes países adotam padrões de referências próprios para os parâmetros

imunológicos, conforme evidenciado na tabela 10. Atualmente, o Brasil preconiza

referências para os linfócitos T CD3+, CD4+ e CD8+, baseadas em um estudo com

populações de três centros norte-americanos e um centro europeu encomendado pela

empresa Becton Dickinson. Neste estudo, foram encontrados em ambos os sexos,

1.410 células/µl de sangue em linfócitos T CD3+, com intervalo de referência entre 690

e 2540 células, nas células T CD4+, 880 células/µl de sangue, com intervalo de

referência variando de 410 a 1590 células e em T CD8+, 490 células/µl de sangue, com

intervalo de referência variando entre 190 e 1140 células, obedecendo a regra de dois

desvios padrões acima e abaixo para o intervalo de referência (BD.,2006).

Tabela 10. Intervalos de referências absolutos publicados na literatura em diferentes países e

intervalos de referências encontrados neste estudo na Bahia e no Pará.

INTERVALOS DE REFERÊNCIA EM CONTAGENS ABSOLUTAS DE

CÉLULAS T

RESULTADOS

ENCONTRADOS NA

LITERATURA

T CD3+

Células/µl de sangue

TCD4+

Células/µl de sangue

T CD8+

Células/µl de sangue

ESTADOS UNIDOS

690 - 2540

410 - 1590

190 – 1140

ITÁLIA

605 - 2460

493 - 1666

224 - 1112

CAMARÕES

589 - 2781

350 - 1610

125- 1113

CHINA

672 - 2368

292 - 1366

240 – 1028

BAHIA

718 - 2721

421 - 1711

214 – 1056

PARÁ

648 - 2259

342 - 1508

203 - 917

Os resultados das contagens de referências para subpopulações de linfócitos T

parecem ter menor variação quando analisadas em valores percentuais de linfócitos

totais. Resultados relativos de linfócitos T são principalmente indicados no

acompanhamento em crianças com até 6 anos de idade, portadoras de doenças que

causam comprometimento imunológico, porque o quantitativo absoluto destas células

nestes pacientes costumam apresentar altas variações, dificultando um consenso para

o correto acompanhamento (CDC.,2006).

O sistema imunológico pode ainda variar entre os indivíduos, pelo menos nos

linfócitos T, devido à presença de outras variáveis demográficas. Nosso estudo avaliou

que no gênero feminino existe um aumento no número médio absoluto de células T

CD3+, T CD4+ e T CD8+ comparados ao masculino nos dois estados, porém apenas

nos linfócitos T CD4+ em Salvador foram constatadas diferenças significantes.

Resultados semelhantes entre os gêneros foram publicados anteriormente em

outras localidades. É possível que os hormônios sexuais influenciem as subpopulações

de linfócitos T e sejam os responsáveis por esta diferença relacionada ao sexo

(SIEGEL et al.,2004).

Algumas questões voltadas para o comportamento como fumo, tempo de

descanso e consumo de álcool que segundo a literatura podem influenciar o sistema

imune, também foram analisadas. Os linfócitos T e suas subpopulações apresentaram-

se aumentados entre os fumantes quando comparados aos não fumantes. Em

Salvador, houve diferença significativa entre os linfócitos T CD4+. A literatura descreve

que o hábito de fumar cigarro em excesso, compromete as funções imunológicas,

incluindo resposta imune inata e adaptativa (SOPORI.,2002). O fumo do tabaco é um

complexo que mistura mais de 4500 substâncias químicas muitas das quais tóxicas

e/ou com atividade carcinogênica. Muitos constituintes do cigarro têm sido

experimentados para modulação da função de células do sistema imune após

administração in vitro e in vivo (WITSCHI et al.,1997). O aumento detectado nos

linfócitos T CD4+ pode estar associado à tentativa de resgate do sistema imunológico

no comprometimento de células devido a danos causados pelo cigarro. No entanto

novos estudos podem vir a elucidar estas questões.

Pequenos aumentos nos valores absolutos das células T nos dois estados, Bahia

e Pará, foram observados também na avaliação do tempo de descanso nos grupos

estudados. Em Belém, as células T CD3+ e T CD4+ apresentaram diferenças

estatísticas entre os indivíduos (p<0,05) que foram considerados com tempo de

descanso adequado (≥ 8 horas de sono diárias) e os que consideramos tempo

inadequado (< 8 horas de sono por dia). Vale ressaltar que no Pará 36,8% dos

doadores declararam dormir por tempo inadequado enquanto que em Salvador este

número cai para 19,4% dos entrevistados.

O consumo de álcool entre os indivíduos tanto em Salvador quanto em Belém,

não demonstrou alteração significativa nos linfócitos T e suas subpopulações de acordo

com o critério utilizado neste trabalho, onde a variação foi inferior a 8%. Em Salvador,

estes números permaneceram praticamente inalterados. Talvez uma freqüência

superior a duas vezes na semana em uso de bebidas alcoólicas possa revelar outros

resultados que comprometam o número de células no sistema imune. A literatura relata

correlação no aumento de células positivas para CD16+ em indivíduos que consomem

álcool moderadamente, com elevada atividade de células assassinas naturais (NK) em

sangue periférico (SAXENA et al.,1981). Este mesmo estudo não encontra resultados

significantes na correlação do álcool com células T CD3+, TCD4+ e T CD8+. Em estudo

experimental com camundongos, o álcool foi associado ao aumento significante dos

níveis de células NK em comparação a um grupo que foi administrado com a ingestão

de água (SAXENA et al.,1980).

Portanto, a diferença significativa encontrada nos resultados para os valores de

referência das subpopulações de linfócitos T entre a Bahia e o Pará, reflete a real

necessidade da ampliação deste tipo de estudo a outras regiões do Brasil. As

características demográficas das regiões do país podem apresentar novas

interpretações nas contagens de referência destas células, possibilitando assim, um

conhecimento mais amplo acerca do comportamento quantitativo destas células em

nossa população.

6. CONCLUSÃO

O Brasil com sua diversidade étnica e comportamental associado aos resultados

encontrados neste trabalho deve adotar valores de referência para os linfócitos T CD3+,

T CD4+ e T CD8+ diferenciados por região para que se obtenha maior fidedignidade no

diagnóstico e acompanhamento em pacientes imunocomprometidos.

Algumas variáveis como fumo e estresse psicológico comprometem o sistema

imune alterando a quantidade de linfócitos T produzidos pelo organismo nestas

condições.

Homens e mulheres portadores de imunodeficiências nas subpopulações de

linfócitos T, devem ser avaliados com valores de referências próprios para estas células

devido as diferenças significativas encontradas entre os gêneros neste trabalho.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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APÊNDICE

Apêndice 1

INQUÉRITO NACIONAL DAS CARACTERÍSTICAS DOS DOARES DE SANGUE

IDENTIFICAÇÃO DA AMOSTRA ( INICIAIS E/OU NÚMERO DE REGISTRO)

IDADE:_______

SEXO: M ou F

ESTADO DE NASCIMENTO : _______________________________

PAÍS DE NASCIMENTO : BRASIL____ OUTROS:____

ESTADO DA COLETA : BAHIA_____ PARÁ_____

FUMANTE : SIM _____ NÃO______ EX-FUMANTE HÁ QUANTO TEMPO:______________________

COSTUMA PERDER NOITE: SIM______ NÃO______

USA

BEBIDA : SIM______ NÃO_____

ALCOÓLICA

ÀS VEZES______

CARACTERÍSTICAS FENOTÍPICAS:

COR DA PELE: BRANCA______ NEGRA______ INTERMEDIÁRIO______

COR DOS OLHOS: PRETOS______ CASTANHOS______ VERDES______ AZUIS______ OUTROS:______

ESPESSURA DOS LÁBIOS : GROSSOS_______ FINOS_______ INTERMEDIÁRIOS:______

COR DO CABELO: PRETO______ CASTANHO______ LOURO______ MODIFICADO APARENTE______

TIPO DO FIO CABELO: GROSSO______ FINO_______ INTERMEDIÁRIO______

TIPO DO CABELO: LISO______ ENCARACOLADO______ CRESPO______

APRESENTA QUELÓIDE: SIM_______ NÃO______

JÁ TEVE ALGUMA DOENÇA SEXUALMENTE TRANSMISSÍVEL: SIM______ NÃO______

SE SIM: GONORREÍA______ SÍFILIS______ HERPES SIMPLES ______ OUTRAS______

JÁ RECEBEU TRANSFUSÃO DE SANGUE: SIM______ NÃO______

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