( PDF ) Associação entre o polimorfismo hindiii do gene da lipoproteína lipase (LPL) e a responsividade à dieta em indivíduos dislipidêmicos do sexo masculino da cidade de Santo Ângelo-RS

UNIVERSIDADE LUTERANA DO BRASIL

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM GENÉTICA E TOXICOLOGIA

APLICADA

ASSOCIAÇÃO ENTRE O POLIMORFISMO HindIII DO GENE DA

LIPOPROTEÍNA LIPASE (LPL) E A RESPONSIVIDADE À DIETA EM

INDIVÍDUOS DISLIPIDÊMICOS DO SEXO MASCULINO DA CIDADE

DE SANTO ÂNGELO-RS

Dissertação para obtenção do

Título de Mestre em Genética e

Toxicologia Aplicada

ANA LETÍCIA VARGAS BARCELOS

Orientadora: Dra. Cláudia Maria Dornelles da Silva

CANOAS

2007

ads:

Livros Grátis

http://www.livrosgratis.com.br

Milhares de livros grátis para download.

À

D

EUS POR TUDO

.

À

MINHA

M

ÃE

,

QUE NA PUREZA DE SEU AMOR INCONDICIONAL

ME ENSINOU E INSPIROU A VISLUMBRAR CAMINHOS

...

E A SONHAR

,

SEM ESQUECER DA REALIDADE

.

AGRADECIMENTOS

A

O

M

EU

P

AI

,

O INCENTIVO E A BUSCA CONSTANTE DO CONHECIMENTO

.

A

O

P

ROGRAMA DE

P

ÓS

-G

RADUAÇÃO EM

G

ENÉTICA E

T

OXICOLOGIA

A

PLICADA

,

C

OORDENAÇÃO

,

P

ROFESSORES E PRINCIPALMENTE A

F

ERNANDA

,

O APOIO

E CARINHO

.

À

D

OUTORA

C

LAUDIA

M

ARIA

D

ORNELLES DA

S

ILVA

,

MINHA ORIENTADORA

,

POR TER ACEITADO ESTE DESAFIO

,

DE ORIENTAR E INSERIR UMA NUTRICIONISTA NA

GENÉTICA E BIOLOGIA MOLECULAR

.

A

M

INHA

E

TERNA

M

ESTRA

I

NGRID

S

CHWEIGERT

,

QUE MESMO NÃO SENDO

MINHA CO

-

ORIENTADORA DE FATO

,

É A POTENCIALIZADORA DO INICIO DESTE

TRABALHO

.

A

O

T

ENENTE

C

ORONEL

M

ÉDICO

O

SWALDO

C

AVALCANTI

D

ANTAS E

M

AJOR

M

ÉDICO

L

UCAS

V

ILHENA DE

M

ORAES

,

POR OPORTUNIZAREM ESTE TRABALHO NO

ÂMBITO MILITAR DO

H

OSPITAL DE

G

UARNIÇÃO DE

S

ANTO

Â

NGELO

-

RS.

À

C

ARDIOLOGISTA

B

ÁCILA

B

ADWAN

M

USA

M

USTAFÁ

,

AMIGA E INCANSÁVEL

COLABORADORA

,

PELA REALIZAÇÃO DESTE ESTUDO

.

À

E

QUIPE DO

L

ABORATÓRIO DE

A

NÁLISES

C

LÍNICAS DO

H

OSPITAL DE

G

UARNIÇÃO DE

S

ANTO

Â

NGELO

,

C

APITÃO

H

AMMES

,

T

ENENTE

J

ULIANA

,

S

ARGENTO

D

ILL

,

S

OLDADO

R

ÔMULO E

S

ENHORA

M

ARGARIDA

,

A PACIÊNCIA COMIGO

,

COM MEUS

PACIENTES

,

E OS ESFORÇOS

,

DESMEDIDOS

,

A ME AUXILIAR

.

À

M

INHA

E

QUIPE DE TRABALHO DO

A

PROVISIONAMENTO DO

H

OSPITAL DE

G

UARNIÇÃO DE

S

ANTO

Â

NGELO

,

O CARINHO E APOIO

,

DESDE O MOMENTO EM QUE

DECIDI INICIAR ESTE TRABALHO

,

ATÉ A MINHA DESPEDIDA

.

A

OS COLEGAS DE LABORATÓRIO

C

ÍNTIA

R

EICHERT

,

T

IAGO

D

ALPIAZ

,

C

ARLOS

E

DUARDO

P

ITROSKI

,

P

AULO

P

ERIZZOLO E

S

UELEN

A

NGELI

,

O CONSTANTE AMPARO

.

À

S

“M

ENINAS

”

DO

A

POIO

T

ÉCNICO

,

R

OBERTA E

C

ARLA

,

A PACIÊNCIA

.

A

COLEGA

M

ILLENE

B

ORGES

C

OELHO

,

A FORÇA

,

O CARINHO E PACIÊNCIA NA

MINHA INICIAÇÃO EM UM LABORATÓRIO

,

DE BIOLOGIA MOLECULAR

.

A

OS MEUS ANJOS SEM ASAS

,

G

ABRIEL

B

AMPI E

C

RISTIANE

H

ELFER

,

NÃO

EXISTE PALAVRAS QUE POSSAM EXPRESSAR A MINHA ETERNA GRATIDÃO

,

POR TUDO O

QUE FIZERAM

.

A

O COLEGA

,

AMIGO E

“P

ROFESSOR

”,

J

ULIANO

C

OELHO DA

S

ILVEIRA

,

AS

AULAS

,

O CONHECIMENTO E A DISPOSIÇÃO

,

DIANTE DE MINHAS LIMITAÇÕES

.

A

OS AMIGOS

,

G

UILHERME E

P

EDRO

,

A AMIZADE E PELAS BOAS RISADAS

.

A

P

ROFESSORA

S

ILVANIA

B

OTTARO

,

POR OPORTUNIZAR A MINHA INICIAÇÃO

NA DOCÊNCIA

.

A

D

OUTORANDA

C

RISTINE

N

ASCENTE

,

O APOIO

,

INCANSÁVEL

,

A ATENÇÃO

,

BEM COMO POR ME APRESENTAR E TORNAR A ESTATÍSTICA MAIS AGRADÁVEL

.

A

OS AMIGOS

,

L

ETÍCIA E

R

ODRIGO

,

POR ME ACOLHEREM EM

P

ORTO

A

LEGRE

.

A

O MEU

E

DUARDO

,

O APOIO

,

COMPANHEIRISMO E

,

PRINCIPALMENTE

,

O AMOR

.

A

MINHA PRIMA

(“M

ANA

”)

V

ERA

,

PELO ETERNO CARINHO E AMIZADE

.

A

TODOS MEUS

F

AMILIARES

,

A

MIGOS E

A

MIGAS

,

O CARINHO

,

O INCENTIVO E

,

PRINCIPALMENTE

,

A COMPREENSÃO NA MINHA AUSÊNCIA

.

A

OS PACIENTES QUE ACEITARAM PARTICIPAR DESTE PROJETO

.

“S

E NÃO HOUVER VENTO

,

REME

...

”

(A

NÔNIMO

)

SUMÁRIO

LISTA DE ABREVIATURAS ...................................................................................... 8

RELAÇÃO DE TABELAS ............................................................................................ 9

RELAÇÃO DE FIGURAS E GRÁFICOS ................................................................... 10

RESUMO ................................................................................................................... 11

ABSTRACT ................................................................................................................13

1. INTRODUÇÃO .......................................................................................................15

1.1 LIPÍDIOS .................................................................................................. 15

1.1.1 COLESTEROL ..................................................................................17

1.1.2 TRIGLICERÍDEOS .........................................................................17

1.1.3 LIPOPROTEÍNAS ..........................................................................18

1.2 DOENÇAS CARDIOVASCULARES E DISLIPIDEMIAS ..........................19

1.2.1 CLASSIFICAÇÀO DAS DISLIPIDEMIAS ..................................... 22

1.2.2 BASES FISIOPATOLÓGICAS DAS DISLIPIDEMIAS PRIMÁRIAS

........................................................................................................................ 23

1.3 Circunferência da Cintura, Índice de Massa Corporal e

Relação Cintura/Quadril .................................................................................. 23

1.4 Suscetibilidade genética ......................................................................... 25

1.5 LIPOPROTEÍNA LIPASE (LPL) ............................................................. 27

1.5.1 POLIMORFISMO LPL HindIII ......................................................... 29

1.6 Nutrigenética ............................................................................................ 30

1.7 Guias Nutricionais .................................................................................... 32

2. Justificativa e Objetivos ......................................................................................... 35

3. Materiais e Métodos .............................................................................................. 37

3.1 Delineamento do Estudo ......................................................................... 37

3.2 Amostra ................................................................................................... 37

3.3 Dados Antropométricos ........................................................................... 38

3.4 Dosagens Bioquímicas ............................................................................ 39

3.5 Intervenção Dietética ............................................................................... 39

3.6 Avaliação Final ........................................................................................ 39

3.7 Extração de DNA ......................................................................................39

3.8 Técnica de PCR-RFLP ............................................................................ 40

3.9 Análises Estatísticas ................................................................................ 41

3.10 Considerações Éticas ............................................................................ 42

4. RESULTADOS E DISCUSSÕES ......................................................................... 43

4. 1 Análise dos Dados Antropométricos ....................................................... 43

4. 2 Guia Alimentar ........................................................................................ 44

4. 3 Análise do Polimorfismo HindIII ............................................................. 47

4.4 Associação entre o Polimorfismo e a dieta ............................................ 50

4.5 Perspectivas Futuras ............................................................................... 56

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ...................................................................... 57

ANEXOS .................................................................................................................... 63

ANEXO 1- PROTOCOLO DE COLETA DE DADOS CARDIOLÓGICOS ........ 64

ANEXO 2 - CONSENTIMENTO PARA PARTICIPAÇÃO DO PROJETO DE

PESQUISA ................................................................................................................ 66

ANEXO 3 - AVALIAÇÀO NUTRICIONAL ......................................................... 68

ANEXO 4 - GUIA ALIMENTAR PARA DISLIPIDEMIAS .................................. 72

LISTA DE ABREVIATURAS

apo Apo-lipoproteína

CT Colesterol Total

AVC Acidente Vascular Cerebral

DAC Doença Arterial Coronariana

DCV Doenças Cardiovasculares

DNA Ácido Desoxirribonucléico

HDL Lipoproteína de Alta Densidade

HL Lipase Hepática

IDL Lipoproteína de Densidade Intermediária

IMC Índice de Massa Corporal

LDL Lipoproteína de Baixa Densidade

LDL-C LDL-Colesterol

LPL Lipoproteína Lipase

OMS Organização Mundial de Saúde

pb Pares de bases

PCR Reação em Cadeia da Polimerase

Qm Quilomícrons

R – LDL Remanescente de Lipoproteína de Alta Densidade

R- Qm Remanescentes de Quilomícrons

R – VLDL Remanescentes de Lipoproteína de Muito Baixa

Densidade

RCQ Relação Cintura/Quadril

RFLP Polimorfismo de Tamanho de Fragmentos de

Restrição

SNP Polimorfismo de Nucleotídeo Único

TG Triglicerídeos

VLDL Lipoproteína de Muito Baixa Densidade

VLDL-C: VLDL-Colesterol

LISTA DE TABELAS

Tabela 1.

Classificação das Lipoproteínas ..................................................

19

Tabela 2.

Diagnóstico das dislipidemias em adultos > 20 anos.....................

21

Tabela 3. Classificação Internacional de adultos com baixo peso, peso

normal, sobrepeso e obesidade..................................................

24

Tabela 4. Genes relacionados com níveis lipídicos..................................... 25

Tabela 5. Composição dos nutrientes.........................................................

32

Tabela 6. Condições de clivagem dos produtos de PCR para análise dos

polimorfismos presentes no gene LPL ........................................

41

Tabela 7. Associação das Variáveis da Amostra e Genótipo ......................

44

Tabela 8. Estudos comparativos de freqüências genotípicas do

polimorfismo HindIII em diferente populações com dislipidemia .

49

Tabela 9. Associação dos resultados da interação gene-dieta ...................

54

16

LISTA DE FIGURAS

Figura 1. Localização do gene LPL no cromossomo ......................................... 27

Figura 2. Perfil eletroforético dos fragmentos de DNA clivados – polimorfismo

HindIII ................................................................................................. 48

LISTA DE GRÁFICOS

Gráfico 1. Mensuração dos resultados finais da dieta pelos níveis de CT......... 45

Gráfico 2. Mensuração dos resultados finais da dieta pelos níveis de HDL ..... 45

Gráfico 3. Mensuração dos resultados finais da dieta pelos níveis de LDL ..... 46

Gráfico 4. Mensuração dos resultados finais da dieta pelos níveis de TG ........ 46

Gráfico 5. Associação dos resultados dos níveis de HDL após dieta com o

genótipo............................................................................................. 50

Gráfico 6. Associação dos resultados dos níveis de CT após dieta com o

genótipo ............................................................................................ 51

Gráfico 7. Associação dos resultados dos níveis de LDL após dieta com o

genótipo ............................................................................................. 52

Gráfico 8. Associação dos resultados dos níveis de TG após dieta com o

genótipo ........................................................................................... 53

17

RESUMO

Doenças Cardiovasculares são responsáveis, mundialmente, pelas

altas taxas de morbidade e mortalidade. No Brasil, representam a primeira

causa de morte dentre as doenças não transmissíveis. A etiologia das

doenças cardiovasculares é multifatorial, tendo como contribuição fatores

genéticos, bem como ambientais. Os níveis plasmáticos de lipídios e

lipoproteínas podem ser resultados do comportamento alimentar e/ou serem

devidos às variações genéticas observadas nos indivíduos. Concentrações

aumentadas de triglicerídios, colesterol e de Lipoproteína de Baixa

Densidade (LDL), associadas à diminuição nos valores de Lipoproteína de

Alta Densidade (HDL) contribuem na probabilidade de desenvolvimento

dessas enfermidades. A presente dissertação é um estudo do tipo transversal

observacional, que avalia a interação gene-dieta no polimorfismo HindIII do

gene LPL em pacientes do sexo masculino, dislipidêmicos, da cidade de

Santo Ângelo-RS/Brasil. O objetivo foi investigar a freqüência desse

polimorfismo nesta população e correlacionar os achados genotípicos com

parâmetros antropométricos, bioquímicos e nutricionais. Foram arrolados 83

indivíduos que seguiram uma orientação nutricional para dislipidemias por, no

mínimo, 40 dias, e máximo, 90 dias. Utilizou-se a técnica de PCR-RFLP para

realização das análises de biologia molecular. Em resposta à dieta na

população estudada, os seguintes dados bioquímicos foram obtidos: 71,0%

reduziram os níveis de colesterol total, enquanto que 27,7% aumentaram e

1,2% mantiveram níveis iguais; 42,2% tiveram aumento dos níveis de HDL,

enquanto que 55,4% reduziram e 2,4% mantiveram-se iguais; 67,5%

reduziram os níveis de LDL, enquanto que 27,7% aumentaram e 1,2%

mantiveram os níveis iguais; por fim, em 65,6% dos pacientes, os níveis de

TG obtiveram uma redução, enquanto que 34,4% aumentaram. O alelo mais

freqüente encontrado foi o HindIII (+) em 52,0% dos indivíduos. O genótipo

heterozigoto HindIII (+/-) foi encontrado em 89,2% dos indivíduo, seguido pelo

genótipo homozigoto mutante HindIII (+/+) com 7,2% e o genótipo

homozigoto normal HindIII (-/-) com 3,6%. Nas análises feitas entre o

polimorfismo e a dieta, pôde ser verificado que em 50% dos indivíduos que

18

apresentaram genótipo HindIII (+/+), os níveis de HDL reduziram. Em 43,3%

dos indivíduos com o genótipo HindIII (+/-) os níveis de HDL aumentaram, em

54,0%, diminuíram e em 2,7%, permaneceram iguais. Em 100% dos

indivíduos que apresentaram o genótipo HindIII (-/-), os níveis de HDL

diminuíram. Para o CT, os pacientes com o genótipo HindIII (+/+) tiveram um

aumento e uma redução de 50,0%, para o HindIII (+/-) 27,0% aumentaram,

diminuíram 71,6% e permaneceram iguais 1,4% e para o genótipo HindIII (-/-)

em 100% diminuíram os níveis. Índices bioquímicos de LDL, em indivíduos

com o genótipo HindIII (+/+) obteve-se um aumento em 50,0% e redução em

50,0%. Para os indivíduos com o genótipo HindIII (+/-), 71,6% obtiveram

redução, 27,1% aumentaram e 1,3% permaneceram iguais. Para o genótipo

HindIII (-/-) em 66,7% dos casos houve um aumento e em 33,3%

permaneceram em níveis iguais, mesmo após a dieta. Quanto aos níveis de

TG, homens com o genótipo HindIII (+/+) e HindIII (-/-) obtiveram uma

redução de 100,0% e para o HindIII (+/-) 60,8% dos casos reduziram e em

39,2% aumentaram. A freqüência da interação dos genótipos em relação aos

resultados da dieta apresentaram significância para os níveis de LDL, tendo p

= 0,002 e para os níveis de TG, o resultado ficou em associação limítrofe de

(p = 0,06).

19

ABSTRACT

Cardiovascular disease are responsible, worldwide, for the high rate of

morbidity and mortality. In Brazil, they represent the first cause of death in the

not transmissible diseases. The etiology of the cardiovascular disease is

multifactorial, having as contribution genetic factors, as well as environment.

The plasma lipid and lipoprotein concentrations can be resulted of the dietary

behavior and/or to be due to the observed genetic variations in the individuals.

Increased concentrations of TG, CT and of LDL, associates to the reduction in

the values of HDL contribute in the probability of the development from these

diseases. The present work is an observacional transversal study that

evaluates the interaction gene-diet in the HindIII polymorphism of gene LPL in

male patients with dyslipidemia from the city of Santo Ângelo-RS/Brasil. The

mean was to investigate the frequency of this polymorphism in this population

and to correlate the genotype findings with data about height, weight, waist

and hip perimeter, biochemical parameters and dietary. All the 83 subjects

studied had followed a guide nutricional for dyslipidemia for 40 days to 90

days. PCR-RFLP method was used for molecular biology analysis. In

response to the diet in the studied population, the following biochemical data

was obtained: 71,0% reduced the total cholesterol levels, while 27.7%

increased and 1.2% kept equal levels; 42.2% increased the HDL levels, while

55.4% reduced and 2.4% remained equal; 67,5% reduced the LDL levels,

while 27.7% increased and 1.2% kept the equal levels; finally, in 65.6% of the

patients, the TG levels had reduction, while 34.4% increased. The most

frequently allele found in the population studied found was HindIII (+) with

52.0% of the individuals. The heterozigote genotype HindIII (+/-) was found in

89.2% of the individual, followed by the homozigote genotype HindIII (+/+)

with 7.2% and the genotype homozigoto normal HindIII (-/-) with 3.6%. In the

analyses made between the polimorfism and diet, it could be verified that in

50.0% of the individuals with HindIII genotype (+/+), HDL levels reduced. In

43.3% of the individuals with the HindIII genotype (+/-), the HDL levels

increased, in 54.0%, reduced in 2.7% kept the equal levels. In 100.0% of the

individuals with HindIII genotype (-/-), the HDL levels diminished. Regarding

20

the CT levels, the patients with genotype HindIII (+/+), 50.0% had an increase

and 50.0% had a reduction. For HindIII (+/-), 27.0% had increased, 71.6% had

reduction and 1.4% remained equal. For HindIII (-/-) genotype, 100% had the

levels diminuished. Regarding the LDL levels, individuals with HindIII (+/+)

genotype had an increase and 50,0% had a reduction. For the HindIII (+/-)

genotype, 71,6% of the patients had reduction, 27.1% had increased and

1.3% remained equal. For genotype HindIII (-/-), 66.7% of the cases had an

increased and 33.3% remained equal levels, after the diet. Regarding the TG

levels, 100.0%of the men with HindIII (+/+) genotype and HindIII (-/-) had

reduction and for HindIII (+/-) genotype, 60.8% reduced and 39.2% increased.

The frequency of the interaction of the genotypes in relation to the diet results

for the LDL levels had p = 0,002. For the levels of TG, the result was in

borderline of p = 0,06.

21

1. INTRODUÇÃO

1.1 Lipídios

Os lipídios constituem um grupo de substâncias que, genericamente,

chamamos de óleos ou gorduras, tanto os de origem animal, quanto os de

origem vegetal (RIEGEL, 1998). São substâncias que, ao contrário das outras

classes de compostos orgânicos, são caracterizadas pela sua alta

solubilidade em solventes orgânicos apolares e baixa solubilidade em água.

Segundo Motta (2005), os lipídios são componentes das membranas

biológicas, precursores de compostos essenciais, agentes emulsificantes,

isolantes, que participam do transporte de substância do metabolismo e da

sinalização intra e intercelular. Além dessas funções, servem também como

fonte de energia, proteção de órgãos vitais, constituição de algumas

vitaminas (A, D, E, K) e estão envolvidos no impulso da transmissão nervosa.

Os lipídios no organismo são obtidos a partir de fontes exógenas e

endógenas. Na fonte exógena, os lipídios provenientes da alimentação são

primeiramente incorporados na forma de quilomícrons (Qm) dentro do lúmen

intestinal. Os Qm se caracterizam por transportar o colesterol da dieta e

serem ricos em triglicerídios (TG). Entram na circulação linfática e ganham a

corrente sanguínea pelo ducto torácico, podendo receber diferentes

Apoproteínas (A, C e E). Nos capilares, os Qm entram em contato com a

enzima lipase lipoprotéica (LPL) que quando ativada pela proteína apo C-II,

hidrolisa os TG, retira os ácidos graxos, tornando as partículas de menor

tamanho, conhecidas como, remanescentes de quilomícrons: R-Qm. Os R-

Qm são removidos da circulação pelos receptores localizados nas células

hepáticas, sendo então metabolizados (CONSENSO BRASILEIRO SOBRE

DISLIPIDEMIAS, 1996).

22

A fonte endógena inicia com a síntese hepática das VLDL (do inglês,

Very Low Density Lipoproteins ou lipoproteínas de muito baixa densidade), as

quais contêm principalmente triglicerídios e as Apoproteínas B-100, E e C.

Na circulação capilar, as VLDL entram em contato com a LPL, dando

origem aos remanescentes de VLDL (R-VLDL) ou IDL (do inglês,

Intermediate Density Lipoproteins ou lipoproteínas de densidade

intermediária). Essas partículas seguem dois caminhos, sendo que cerca de

dois terços das IDL podem ser captadas no fígado pelos receptores de Apo B

e E, e degradados em seus componentes e, o terço restante sofre ação da

lipase hepática (HL), principalmente no fígado, formando as LDL (do inglês,

Low Density Lipoprotein ou lipoproteína de baixa densidade). Tanto as LDL,

como as IDL, são retiradas da circulação pelos receptores celulares B e E,

existentes principalmente no fígado. Vale salientar que as LDL são as

principais carreadoras de colesterol para os tecidos periféricos. Uma vez no

interior das células, essas lipoproteínas são fragmentadas, liberando

colesterol e aminoácidos. A síntese de colesterol e dos receptores B/E pela

célula varia na razão inversa da concentração de colesterol livre intracelular

(CONSENSO BRASILEIRO SOBRE DISLIPIDEMIAS, 1996).

Parte do material liberado pela ação da LPL sobre os Qm e as VLDL é

utilizada na fabricação de outra lipoproteína a HDL (do inglês, High Density

Lipoproteins ou Lipoproteína de Alta Densidade). A HDL tem grande

importância no transporte de colesterol dos tecidos periféricos para o fígado

(MOTTA, 2005).

Os lipídios se classificam em ácidos graxos e seus derivados,

triacilgliceróis, ceras, fosfolipídios (glicerofosfolipídeos e esfingosinas),

esfingolipídeos e isoprenóides (MOTTA, 2005). Mas, segundo Sposito et al.

(2007), sob o ponto de vista fisiológico e clínico, os lipídios biologicamente

mais relevantes são os fosfolipídios, o colesterol, os triglicerídeos e os ácidos

graxos.

23

1.1.1 Colesterol

É uma substância semelhante à gordura e pertence a uma classe de

compostos conhecidos como esteróis, que estão presentes em todas as

células animais. Os esteróis não são precisamente gorduras, pois não

contém ácidos graxos, mas apresentam algumas características físicas e

químicas semelhantes. O colesterol pode provir tanto de origem exógena,

como endógena (KATCH& MARCDLE, 1996).

Segundo Motta (2005), o colesterol é o esterol mais abundante dos

tecidos humanos. Compõem as LDL e membranas celulares sendo também

substâncias precursoras da síntese dos hormônios esteróides e ácidos

biliares. O colesterol é derivado do ciclopentano-peridro-fenantreno com

ligação dupla entre C-5 e C-6, hidroxila no carbono 3 (colesterol livre) e

cadeia alifática de 8 carbonos no C-17.

Somente 25,0% do colesterol plasmático é proveniente da dieta, o

restante é sintetizado (1g/dL), fundamentalmente, pelo fígado, a partir do

acetil-CoA. Parte do colesterol hepático é transformado em ácidos biliares

que, por sua vez, são excretados através da bile. Por outro lado, os sais de

ácidos biliares formam complexos com o colesterol, promovendo maior

excreção deste composto. O colesterol plasmático ocorre tanto na forma livre

(30,0% do total), como esterificado (70,0% do total). Os níveis de colesterol

plasmático são afetados tanto por fatores genéticos, como ambientais, sendo

assim multifatorial. As medidas da colesterolemia são influenciadas por dieta,

exercícios físicos, idade e sexo (SACKHEIM & LEHMAN, 2001; MOTTA,

2005).

1.1.2 Triglicerídios

Os TG constituem, em média, mais de 95% de toda a gordura que

existe no corpo (RIEGEL, 1998). Também conhecidos como triacilgliceróis,

os TG são ésteres de ácidos graxos com glicerol. A classe dos acilgliceróis

depende do número de ácidos graxos presentes na molécula, como os

24

monoglicerídios (um ácido graxo esterificado), diglicerídios (dois ácidos

graxos esterificados) e triglicerídios (três ácidos graxos esterificados).

Motta (2005) relata que os TG são sintetizados no fígado e no intestino

e são as formas mais importantes de armazenamento e transporte de ácidos

graxos. Constituem as principais frações dos quilomícrons, das VLDL e

pequena parte (<10,0%) das LDL presentes no plasma sangüíneo. A quase

totalidade das gorduras ingeridas na dieta são TG formados por ácidos

graxos saturados e insaturados.

Os TG da dieta são hidrolizados pela ação das lipases pancreáticas e

sais biliares para formar 2-monoglicerídios e ácidos graxos livres. Por

difusão, os 2-monoglicerídios e os ácidos graxos entram no retículo

endoplasmático das células da mucosa e são re-esterificados a triglicerídios.

Após re-esterificação, os triglicerídios são associados a outros lipídios e

proteínas específicas (apoproteínas) para formar macromoléculas. E assim,

provavelmente por pinocitose reversa, estes aparecem nos vasos linfáticos

da região abdominal e, posteriormente, na circulação sistêmica (MOTTA,

2005).

1.1.3 Lipoproteínas

Os lipídios são moléculas apolares, insolúveis em água, que precisam

ser transportados ativamente pela corrente sangüínea até os tecidos alvo, o

que é realizado na forma de lipoproteínas, sendo classificadas segundo a sua

densidade e constituição (WILLIAMS, 1994; RIEGEL, 1996).

A estrutura e a composição destas lipoproteínas são enzimaticamente

reguladas e, de forma geral, são formadas por uma parte central de lipídios

hidrofóbicos circundada por uma capa de lipídios polares e proteínas,

denominadas apolipoproteínas (apos). Várias apos já foram caracterizadas,

sendo que cada das lipoproteínas contêm uma ou mais destas proteínas que

tem como função proporcionar estabilidade estrutural, solubilizar os lipídios

altamente hidrofóbicos, servir como ligantes para receptores celulares ou agir

25

como co-fatores para enzimas envolvidas no metabolismo de lipoproteínas

(WEISS, 1993).

Existem quatro grandes classes de lipoproteínas separadas em dois

grupos, as ricas em TG, maiores e menos densas, representadas pelos

quilomícrons, de origem intestinal; e pelas lipoproteínas VLDL, de origem

hepática, LDL e HDL (SPOSITO et al., 2007).

Liacouras (1997) apresentam a classificação das lipoproteínas que

estão relacionadas ao risco de desenvolvimento de doenças cardiovasculares

representada na tabela 1.

Tabela 1 – Classificação das lipoproteínas.

Lipoproteínas

Densidade

(g/ml)

Diâmetro

(nm)

Origem Concentração de lipídios (%)

Colesterol

Total

TG

Fosfolipídeo

e proteínas

Quilomícron 0,95 75-1200 Intestino 5 90 5

Lipoproteína

de muito baixa

densidade

(VLDL)

0,95-1,006 30-80 Fígado 13 65 22

Lipoproteína

de baixa

densidade

(LDL)

1,019-1,063

18-25

Fígado,

VLDL

43 10 47

Lipoproteína

de alta

densidade

(HDL)

1,063-1,21 5-12

Fígado,

instestino

18 2 80

1.2 Doenças Cardiovasculares e Dislipidemias

Doenças cardiovasculares (DCV) são responsáveis, mundialmente,

por altas taxas de morbidade e mortalidade. Segundo Brandão (2000), os

relatórios da Organização Mundial da Saúde (OMS) do ano de 1997 revelam

que as DCV foram responsáveis por cerca de 30,0% de todas as mortes que

ocorreram no mundo, correspondendo a quase 15 milhões de óbitos por ano.

26

A mortalidade por doença arterial coronária (DAC) e acidente vascular

cerebral (AVC) correspondem a 80,0% dos óbitos por DCV.

No Brasil, as DCV representam a primeira causa de morte dentre as

doenças não transmissíveis. Como fatores de risco estão o tabagismo e o

sedentarismo, além de dieta rica em gorduras saturadas, com o conseqüente

aumento dos níveis de colesterol e surgimento de hipertensão (ISHITANI et

al., 2006).

A partir da década de 50, no Brasil, ocorreu uma modificação dos

perfis de saúde. Em 1950, 40,0% dos óbitos no país eram decorrentes de

doenças infecto-contagiosas e apenas 12,0% decorrentes de doenças

cardiovasculares. Porém, a partir da década de 90, os índices para doenças

infecciosas tornaram-se menores que 10,0%, enquanto que a freqüência de

doenças cardiovasculares elevou-se para 34,5% (LOTUFO, 1996; OLIVEIRA

et al., 2006).

Sabe-se ainda que, desde a década de 60, as DCV vêm apresentando

aumento progressivo em todo mundo. No Brasil, destacam-se as cidades das

Regiões Sul e Sudeste, com alta incidência de doenças isquêmicas (CHOR

et al.,1995). Isto pode ser confirmado pelas pesquisas realizadas em um

projeto conhecido como: “Atlas Corações do Brasil - 2005”, que teve como

um dos objetivos principais, avaliar fatores de risco cardiovascular na

população brasileira. Os resultados desse projeto mostram que a Região Sul

está em primeiro lugar, com níveis alterados de colesterol, acometendo mais

os homens, seguido dos maiores índices de hipertrigliceridemia, também com

maior representatividade na população masculina (NETO, 2005).

Designam-se dislipidemias as alterações metabólicas lipídicas

decorrentes de distúrbios em qualquer fase do metabolismo lipídico, que

ocasionem repercussão nos níveis séricos das lipoproteínas (RIDKER et al.,

2001; HEGELE, 2001).

As dislipidemias são consideradas um dos principais fatores

determinantes para o desenvolvimento de DCV. Elevadas concentrações de

TG, CT e sua fração de LDL, associadas à diminuição nos valores de HDL,

aumentam a probabilidade do desenvolvimento dessas enfermidades,

principalmente a DAC (GOLDSTEIN et al., 1995; SANTOS, 2001).

27

Os valores de referência para o diagnóstico das dislipidemias em

adultos > 20 anos são observadas na Tabela 2 (SANTOS, 2004).

Tabela 2 – Diagnóstico das dislipidemias em adultos > 20 anos.

Lipídios Valores Categoria

CT

< 200

200-239

> 240

Ótimo

Limítrofe

Alto

LDL

< 100

100-129

130-159

160-189

> 190

Ótimo

Desejável

Limítrofe

Alto

Muito alto

HDL

< 40

> 60

Baixo

Alto

TG

< 150

150-200

200-499

> 500

Ótimo

Limítrofe

Alto

Muito alto

A DAC é uma DCV, e apresenta-se como uma desordem multifatorial,

resultado da interação entre fatores genéticos e ambientais, tais como: dieta,

tabagismo e atividade física. Essa condição é usualmente associada a fatores

de risco convencionais como, hipertensão, diabetes mellitus e

hipercolesterolemia. Entretanto, em alguns indivíduos, a DAC parece não

estar relacionada muito fortemente a fatores ambientais, sugerindo que a

constituição genética do indivíduo esteja contribuindo para a predisposição

(SANTOS, 2001; SANTOS, 2004; FREITAS, 2004).

O papel dos lipídios como importante fator da patogênese da DAC está

solidamente estabelecido pois em sua maioria, os exames de avaliação de

perfil lipídico inclui análises do CT, LDL, HDL e TG (MACINTYRE & HARRY,

1991; FREITAS, 2004).

Segundo o Consenso Brasileiro sobre Dislipidemias (1996), o risco de

DAC aumenta significativa e progressivamente acima dos valores desejáveis

de CT e LDL. Para o HDL, a relação de risco é inversa, pois quanto mais

28

elevado seu valor, menor o risco de DAC. Níveis de HDL acima de 60 mg/dL

é considerado um “fator protetor” para o desenvolvimento de DAC.

Considera-se que a hipertrigliceridemia (>200mg/dL) também aumenta o

risco de DAC, quando associada a níveis diminuídos de HDL e/ou

aumentados de LDL.

A hipertrigliceridemia é uma desordem comum, e os níveis de

triglicerídeos elevados são atribuídos a diferentes causas, entre as quais

incluem-se as síndromes familiares e genéticas, doenças metabólicas,

fármacos, sexo, idade e mais especificamente, tipo de dieta.

1.2.1 Classificação das Dislipidemias

De acordo com Sposito et al. (2007), as dislipidemias podem ser

classificadas em primárias e secundárias.

As dislipidemias primárias podem ser classificadas genotípica ou

fenotipicamente. Na classificação genotípica, as dislipidemias se dividem em

alterações causadas por mutações em um só gene, e as causadas pela

associação de múltiplas mutações e/ou polimorfismos que isoladamente não

seriam de grande repercussão. E ainda, algumas só se manifestando quando

há influência ambiental. Já a classificação fenotípica ou bioquímica considera

os valores do CT, LDL, TG e HDL.

Já as dislipidemias secundárias são causadas pela presença de outras

doenças ou uso de medicamentos.

1.2.2 Bases Fisiopatológicas das Dislipidemias Primárias

O acúmulo de Qm e/ou de VLDL no compartimento plasmático resulta

em hipertrigliceridemia e decorre da diminuição da hidrólise dos triglicérideos

dessas lipoproteínas pela LPL ou do aumento da síntese de VLDL (SPOSITO

et al., 2007). Variantes genéticas das apos ou enzimas relacionadas a estas

29

lipoproteínas podem causar alterações metabólicas, aumento de síntese ou

redução da hidrólise.

O acúmulo de lipoproteínas ricas em colesterol, como a LDL no

compartimento plasmático, resulta em hipercolesterolemia. Diversas

mutações no receptor de LDL foram detectadas em portadores de

hipercolesterolemia familiar, algumas causando redução de sua expressão na

membrana, outras, deformações na sua estrutura e função. Nesses casos, a

interação entre fatores genéticos e ambientais determina o fenótipo do perfil

lipídico (CANNON, 2004).

1.3 Circunferência da Cintura, Índice de Massa Corporal e Relação

Cintura/Quadril

A maioria de estudos atuais concorda que existe relação entre

circunferência da cintura, como melhor indicador de gordura abdominal, e

doenças cardiovasculares (DOBBELSTEYN et al., 2001).

A OMS (2004) preconiza o uso da circunferência da cintura (ponto de

corte de 94 cm para homens e 80 cm para mulheres) como medidas de risco

metabólico aumentado.

A obesidade e, particularmente, a localização abdominal de gordura

tem grande impacto sobre a DCV por associar-se com grande freqüência a

condições tais como: dislipidemias, hipertensão arterial, resistência à insulina

e diabetes que favorecem a ocorrência de eventos cardiovasculares,

particularmente os coronarianos.

Apesar da circunferência da cintura ser o indicador mais associado e

relatado à DCV, já existem estudos em que relacionam também o Índice de

Massa Corporal (IMC) e Relação Cintura/Quadril (RCQ).

Um estudo realizado no Canadá, por Dobbelsteyn et al. (2001), com

9913 indivíduos demonstrou que pode ser relevante a relação entre IMC,

RCQ e a CC.

30

O IMC é reconhecido como padrão internacional para avaliar o grau de

obesidade. O IMC é calculado dividindo o peso (em kg) pela altura ao

quadrado (em m) e classificado de acordo com o descrito na tabela 3.

Tabela 3 – Classificação Internacional de adultos com baixo peso, peso

normal, sobrepeso e obesidade.

Classificação Índice de Massa Corporal

Magreza < 18,50

Peso Saudável 18,50 – 24,99

Sobrepeso > 25,0

Obesidade Grau I 30 – 34,99

Obesidade Grau II 35 – 39,99

Obesidade Grau III ≥40.00

Referência: OMS, 2004.

Para avaliar a distribuição de gordura corpórea, estudos

epidemiológicos utilizam, desde a década de 70, a relação cintura-quadril

(RCQ), obtida pela divisão dos perímetros da cintura (cm) e do quadril (cm).

Dentre os pontos de cortes estabelecidos para discriminar valores adequados

dos inadequados de RCQ, o mais utilizado tem sido 0,8 para o sexo feminino

e 1,0 para o masculino (MACHADO & SICHIERI, 2002).

1.4 Suscetibilidade genética

Nos últimos anos, muitos estudos e avanços sem precedentes têm

sido alcançados no campo da genética das doenças multifatoriais, tais como

cardiopatias, diabetes, obesidade e câncer.

A variação dos níveis lipídicos é uma característica de etiologia

multifatorial, pois é determinada por uma ampla gama de fatores, tanto

31

ambientais, quanto genéticos. Variações em um grande número de genes

envolvidos na síntese de proteínas estruturais e enzimas relacionadas no

metabolismo de lipídeos poderiam responder, a princípio, por variações do

perfil lipídico de cada indivíduo.

Desta maneira, qualquer gene que seja responsável pela produção de

uma proteína envolvida nesta rota metabólica poderia ser um “gene

candidato” na investigação de determinantes genéticos dos níveis lipídicos.

Assim, o somatório de variações com pequeno efeito em cada um destes

genes poderia levar à modificação do perfil lipídico de um indivíduo,

predispondo à cardiopatia. Como estas variantes genéticas são bastante

freqüentes na população em geral (de 1,0% a 80,0%), seu impacto é muito

maior na saúde pública quando comparadas com mutações de grande efeito,

mas que são muito mais raras (Tabela 4) (ANDRADE & HUTZ, 2001).

Tabela 4 – Genes relacionados com níveis lipídicos

Gene –

Polimorfismo

Cromossomo

Alelo (s)

relacionado(s)¹

Freqüência²

Porção lipídica

modificada

APOE – E

2 ,

E

3

e

E

4

19

E2

↓

E4

↑

~ 8%

~ 15%

CT e LDL

LDLR – PvuII

APOB – XbaI

APOB – ins/del

3

19

2

P-

↑

X+

↑

del

↑

~ 20%

~ 40%

~ 35%

Triglicerídeos

LPL – HindIII

LPL – PvuII

LPL– D9N

LPL– S291N

LPL– S447X

APOCIII – SacI

APOE – E

2,

E

3

e

E

4

8

11

19

H+

↑

P+

↑

N9

↑

S291

↑

X447

↓

S+

↑

E2

↓

(?)

E4

↑

(?)

~ 65%

~ 50%

~ 3%

~ 4%

~ 20%

12%

~ 8%

~ 15%

APOAI -

11

- 75 a

↑

M -

↑

~ 20%

~ 4%

(continua)

HDL

CETP – Taq1B

HL - (-514)

16

15

T+

↓

- 514 C

↓

~ 40%

~ 80%

¹ ↑ relação com aumento dos níveis; ↓ relação com diminuição dos níveis; + denota presença

do sítio de restrição, enquanto – denota ausência do sítio ² Médias aproximadas das

freqüências alélicas dentre várias populações ³ ins denota alelo de inserção e del alelo de

deleção. ? denota resultados não esclarecidos

32

Santos (2001) cita que, todo o espectro das doenças cardiovasculares

envolve fatores genéticos, que podem contribuir de forma causal ou na sua

patogênese. Diferenças nas seqüências de nucleotídeos são sempre devidas

a mutações, sendo algumas vantajosas e outras prejudiciais. Estas variações

na seqüência de nucleotídeos são bastante comuns, sendo denominadas de

polimorfismos.

Variantes alélicas é uma área da genética, que busca investigar as

variações no DNA entre os indivíduos. Estes polimorfismos, quando são

freqüentes, apresentam mais de 1,0% de freqüência do alelo mais raro. A

base genética para esta variação pode ser uma troca de bases no DNA, uma

duplicação ou deleção de um ou vários pares de bases. Estimativas atuais

sugerem que variações de uma única base entre indivíduos (single nucleotide

polymorphisms, ou SNPs) ocorrem na freqüência de 1 a cada 1.300pb, ou

seja, existem mais de 1,4 milhão de polimorfismos de substituição de uma

única base em nosso genoma (ANDRADE & HUTZ, 2001).

1.5 Lipoproteína Lipase (LPL)

A LPL é uma enzima da família das lipases, tendo muitas funções, e a

mais importante é a de estar inserida intrinsecamente no metabolismo das

lipoproteínas. A hidrólise dos TG, pela LPL, fornece ácidos graxos aos

tecidos para oxidação no músculo esquelético, realiza o armazenamento em

células adiposas e posterior secreção, e também influenciam na maturação

da circulação das lipoproteínas. A atividade desta enzima é também regulada

pelos nutrientes e hormônios, por exemplo, glicose e insulina (TALMUD &

STEPHENS, 2004; VIEIRA, 2005).

A LPL é sintetizada pelos adipócitos, miócitos (no músculo cardíaco e

esquelético) e macrófagos; depois da síntese, é transferida para os seus

locais de ancoragem no endotélio vascular (e em alguns outros tecidos) onde

33

se fixa através de glicosaminoglicanos (sulfato de heparano) (TEMAS

CARDIOLÓGICOS, 2007).

A LPL é ativada pela APOCII. Os ácidos graxos liberados do TG pela

ação da LPL são capturados pelas células periféricas (tecido adiposo e

músculo) e a apoCII volta para a HDL. A exportação de triglicerídeos

produzidos endogenamente é feita pela VLDL. Da mesma forma que o Qm, a

VLDL sofre a ação da enzima lipoproteína lipase e libera os ácidos graxos

para os tecidos periféricos, originando a IDL. Esta partícula também pode ser

metabolizada no plasma à LDL (TALMUD & STEPHENS, 2004; MILLÉO,

2005).

A HDL, conhecida como fator protetor do excesso de colesterol, capta

o colesterol livre periférico, esterificando-o por atuação da enzima lecitina

colesterol aciltransferase (LCAT). A transferência do colesterol esterificado da

partícula HDL para a IDL e novamente para o fígado. Assim, o colesterol

excedente retorna ao fígado para ser metabolizado. Alteração de uma das

inter-relações descritas pode levar ao quadro clínico de hiperlipidemias e/ou

hipercolesterolemias (MILLÉO, 2005).

O gene da LPL está localizado no cromossomo 8p22, abrangendo

aproximadamente 35 kb de comprimento e contendo 10 exons com

funcionalidade diferenciada (AHN et al., 1993; JEMMA, et al. 1995;

LARSON, et al., 1999; UKKOLA et al., 2001; SHIMO-NAKANISHI, et al.,

2001; DUMAN, et al., 2004) (Figura 1).

Figura 1: Localização do gene LPL no cromossomo.

34

Alguns polimorfismos deste gene têm sido investigados e analisados

por indicar mudanças nos níveis de lipídios plasmáticos, podendo ser um

fator de risco para a doença arterial coronária (TALMUD & STEPHENS,

2004). Muitos autores referem que as associações entre polimorfismos no

gene da LPL com os níveis plasmáticos alterados de TG, HDL, podem

influenciar no desenvolvimento de dislipidemias, obesidade, DVC e

principalmente aterosclerose (JEMAA, et al. 1995; LARSON et al., 1999;

UKKOLA et al., 2001; SHIMO-NAKANISHI et al., 2001; DUMAN et al., 2004).

1.5.1 Polimorfismo LPL HindIII

Diversas variantes no gene da LPL têm sido encontradas e associadas

a alterações nos níveis das lipoproteínas do plasma, sendo considerado um

fator de risco importante para DAC (SHIMO-NAKANISHI, et al., 2001).

O polimorfismo HindIII caracteriza-se pela troca de uma timina (T) por

uma guanina (G) no intron 8, sendo este, um dos mais comuns polimorfismos

do gene da LPL. Em diversos estudos foi encontrada associação entre o alelo

H(+), com níveis altos de TG e baixos de HDL (AHN et al., 1993; LARSON et

al., 1999; RAZZAGHI et al., 2000; UKKOLA et al., 2001; SHIMO-NAKANISHI

et al., 2001; DUMAN et al., 2004, CORELLA & ORDOVAS, 2005). Em outro,

há uma associação do alelo H(+) com o aumento do CT e LDL, e ainda a

associação desse alelo com o aumento do risco de DCV e aterosclerose (MA

et al., 2003).

Segundo Ahn et al. (1993), estudos com RFLP neste locus, informam

que este polimorfismo está associado com hipertrigliceridemia, DCV e com

níveis alterados de CT e HDL. Shimo-Nakanishi et al. (2001) complementa

referindo que há uma associação entre níveis de triglicerídeos elevados,

níveis de colesterol HDL baixos e DAC prematura.

Duman et al. (2004) refere que o alelo HindIII (+) ou o genótipo (+/+)

apresenta associação com o perfil aterogênico (elevados níveis de TG e

baixos níveis de HDL) e Long et al. (2006), em seu estudo declara que as

subclasses distribuídas de HDL e as variantes de LPL, em especial o

polimorfismo HindIII, também podem modular riscos para DCV.

35

Em um estudo realizado por Radha et al. (2006), com 1015 indivíduos,

observaram uma significante associação com altos níveis de TG e baixos de

HDL em relação ao alelo HindIII(+).

1.6 Nutrigenética

Nutrigenética e Nutrigenômica fazem parte de um conjunto

multidisciplinar, emergente e promissor que focaliza em estudos da interação

entre nutrição, genética e seus efeitos para a saúde, usando novas técnicas e

desenvolvendo conceitos derivados, em partes, do Projeto Genoma Humano.

(ORDOVAS, 2004).

Segundo Fisler & Warden (2005), a nutrigenética e a nutrigenômica

vêm se desenvolvendo para estudar a interação entra a dieta e o genótipo,

bem como suas influências na saúde e doenças.

Nos campos da Fármacogenômica e da Fármacogenética, estes

termos são muito usados em substituição um pelo outro, mas são conceitos

diferentes, mesmo com suas similaridades e objetivos.

A nutrigenômica está interessada na sistemática avaliação de como os

nutrientes modificam a expressão total nas células e tecidos de interesse. Em

contraste, a nutrigenética estuda as diversas condições de dieta em relação a

quantidade da expressão do gene e suas associações com fenótipos

específicos, não se detendo nas diferenças entre os indivíduos em relação

aos nutrientes (ORDOVAS, 2004).

Nutrigenética, por outro lado, é uma ciência baseada na observação

da resposta à dieta em indivíduos, e testa a hipótese que diferenças entre os

indivíduos podem estar associados com a presença ou não de marcadores

biológicos específicos individuais como os polimorfismos, os quais podem

permitir um prognóstico de resposta individual à dieta (ORDOVAS, 2004).

Em síntese, esta ciência personifica o estudo de diferenças entre o

indivíduo e a relação da resposta particular ao nutriente ou a um padrão de

dietas, como os guias e/ou orientações alimentares. Esta tem como objetivo

36

auxiliar os campos da saúde pública e prática clínica, encontrando a melhor

recomendação dietética para o indivíduo.

Segundo Ordovas (2004), em estudos realizados por ele e sua equipe,

e ainda em estudos de outros pesquisadores, as DCV têm sido o foco

principal para as pesquisas na interação gene-dieta.

Corella & Ordovas (2005) relatam também que a nutrigenética estuda o

efeito da variação genética (essencialmente em SNPs) e sua interação com a

dieta. Isto inclui a identificação das variantes do gene associados com

respostas diferenciadas a dietas e/ou nutrientes, tendo como objetivo difundir

recomendações dos riscos e benefícios aos indivíduos de componentes

específicos da dieta em relação a sua responsividade. Também é conhecida

como “nutrição personalizada”.

A resposta dos níveis lipídicos em relação à dieta para redução de

colesterol varia entre as pessoas, sendo que em alguns, a resposta é

considerada muito boa e em outras se tem uma pequena resposta. Há um

grande número de fatores genéticos candidatos que influenciam nesta

resposta.

A identificação destes fatores genéticos deve contribuir para o

desenvolvimento de novos testes para prognosticar qual sujeito que

apresente altos níveis lipídicos séricos será mais beneficiado pela dieta baixa

em colesterol. Isto deve contribuir para tratamentos mais eficientes com

pessoas apresentando altos níveis de lipídios séricos. Além disto,

conhecimentos de fatores genéticos que determinam a resposta de níveis

lipídicos da dieta ajudará no benefício da introspecção dentro dos

mecanismos pelos quais as dietas afetam os níveis séricos de lipídios

(FRIEDLANDER et al., 2000; WEGGEMANS et al., 2000).

Em outros estudos, a resposta lipídica sanguínea em relação à dieta foi

influenciada por polimorfismos nos genes das apolipoproteínas e suas

enzimas, como a lipoproteína lipase e lipase hepática, as quais estão

envolvidas diretamente com o metabolismo lipídico (FISLER e WARDEN,

2005).

37

Segundo Ordovas (2006), as evidências para as interações gene-dieta

entre os SNPs em um gene candidato e fatores da dieta relacionados com o

metabolismo lipídico estão aumentando.

1.7 Guias Nutricionais

Guias Nutricionais ou Orientações Nutricionais têm sempre como

objetivo a promoção de hábitos saudáveis e a prevenção de doenças

crônicas não transmissíveis.

Faz-se muito o uso destes guias como conduta terapêutica para a

prevenção e tratamento de dislipidemias. Segundo o National Institutes of

Health (2001) deve-se incentivar, nesses casos, o consumo de fibras,

reduzindo o consumo de gorduras saturadas e o excesso de carboidratos

simples.

Há muito tempo tem sido demonstrado que o aumento do consumo de

gordura saturada associa-se à elevação da concentração plasmática de

colesterol e à maior incidência de DCV. A terapia nutricional deve, portanto,

ser adotada na prevenção e no tratamento das dislipidemias, onde o plano

alimentar deverá contemplar questões culturais, regionais, sociais e

econômicas. O paciente deverá receber também orientações relacionadas à

seleção, quantidade, técnicas de preparo e substituições dos alimentos

(SPOSITO et al., 2007).

Na Tabela 5 estão apresentadas a composição dos nutrientes e

recomendações nutricionais para o tratamento das dislipidemias, segundo o

National Institutes of Health (2001).

38

Tabela 5 - Composição dos nutrientes.

Nutriente Recomendações de consumo

Gordura saturada* menos de 7,0% das calorias totais

Gordura Poliinsaturada acima de 10,0% das calorias totais

Gordura Monoinsaturada acima de 20,0% das calorias totais

Gordura Total 25-35,0% das calorias totais

Carboidratos** 50-60,0% das calorias totais

Fibras 20-30g/dia

Proteínas aproximadamente 15,0% das calorias totais

Colesterol menos que 200 mg/dia

* evitar ácidos graxos trans

** predominantemente carboidratos complexos, incluindo todos os grãos, vegetais e frutas

Segundo a III Diretriz Brasileira sobre Dislipidemias e Prevenção da

Aterosclerose (2001) e o National Institutes of Health (2001), critérios básicos

devem ser inseridos e seguidos para elaboração dos guias, orientações e/ou

terapia nutricional.

Ácidos graxos insaturados – são divididos em: polinsaturados

representados pelas séries ômega-6 (linoléico e araquidônico) e ômega-3

(alfalinolênico, eicosapentaenóico-EPA e docosahexaenóico-DHA) e

monoinsaturados representados pela série ômega-9 (oléico). A substituição

isocalórica dos ácidos graxos saturados por ácidos graxos polinsaturados

reduz o CT e o LDL-C plasmáticos; promovem redução dos triglicérides

plasmáticos pela diminuição da síntese hepática de VLDL, podendo ainda

exercer outros efeitos cardiovasculares, como redução da viscosidade do

sangue, maior relaxamento do endotélio e também efeitos anti-arrítmicos.

Os ácidos graxos monoinsaturados (oléico) exercem o mesmo efeito

sobre a colesterolemia sem, no entanto, diminuir o HDL-C e provocar

oxidação lipídica.

Fibras - são carboidratos complexos classificados de acordo com sua

solubilidade, em solúveis e insolúveis. As fibras solúveis são representadas

pela pectina (frutas) e pelas gomas (aveia, cevada e leguminosas: feijão,

grão de bico, lentilha e ervilha). Estas fibras reduzem o tempo de trânsito

gastrointestinal e a absorção enteral do colesterol.

39

Fitosteróis - são encontrados apenas nos vegetais e promovem a

redução de nível de LDL.

Soja - juntamente com seus derivados, promovem uma redução no

nível de colesterol total, LDL nos TG. A presença das fibras na soja modifica

a absorção e o metabolismo dos ácidos biliares e, também, as saponinas,

glicosídeo vegetal que atua no aumento da eliminação da bile no intestino e,

subseqüentemente, na redução dos níveis de colesterol plasmático, estariam

relacionados também na prevenção.

Antioxidantes - a utilização de substâncias antioxidantes, como

flavonóides, quercitina, campferol, miricetina e crisina, vitaminas C e E, e os

carotenóides, com o objetivo de prevenir ou reduzir o desenvolvimento da

DAC, em função de sua ação na inibição da oxidação da LDL e na redução

da agregação plaquetária.

A III Diretriz Brasileira sobre Dislipidemias e Prevenção da

Aterosclerose (2001) e o National Institutes of Health (2001), recomenda

evitar determinados alimentos e bebidas na elaboração dos guias,

orientações e/ou terapia nutricional.

Álcool - os efeitos deletérios do álcool devem ser considerados,

principalmente em indivíduos propensos à hipertrigliceridemia, onde a alta

ingestão de álcool pode causar elevação dos níveis de triglicerídeos por meio

da estimulação da produção de VLDL pelo fígado. Devido a isto se faz

necessário a restrição total do consumo de álcool.

Café - os grãos de café contêm duas substâncias denominadas

cafestol e kahweol que elevam o colesterol sérico. Portanto, a recomendação

é de que sempre que possível seja usado filtro de papel, pois este tem a

propriedade de reter as substâncias citadas.

Ácidos graxos trans - os ácidos graxos trans são sintetizados

durante o processo de hidrogenação dos óleos vegetais. Os ácidos graxos

trans aumentam o LDL e reduzem o HDL, e da mesma forma que outros

ácidos graxos, aumentam os TG.

A principal fonte de ácidos graxos trans na dieta é a gordura vegetal

hidrogenada, utilizada no preparo de sorvetes cremosos, chocolates, pães

recheados, molhos para salada, sobremesas cremosas, biscoitos recheados,

alimentos com consistência crocante (nuggets, croissants, tortas), bolos

40

industrializados, margarinas duras e alguns alimentos produzidos em redes

de “fast-foods”.

41

2. JUSTIFICATIVA E OBJETIVOS

A etiologia das DCV é heterogênea, mas a contribuição da genética,

bem como dos fatores ambientais têm sido aceita entre os estudiosos

(SHIMO-NAKANISHI et al., 2001).

O polimorfismo HindIII da LPL é muito discutido, e atualmente tem sido

de grande interesse a muitos pesquisadores, por ter sua estreita associação

no metabolismo das lipoproteínas, dos lipídios e uma ligação com as

dislipidemias e DCV, como pode ser notado em várias literaturas (AHN et

al.,1993; JEMAA et al. 1995; LARSON et al., 1999; SHIMO-NAKANISHI et al.,

2001; UKKOLA et al., 2001; DUMAN et al., 2004, CORELLA & ORDOVAS

2005 )

Em estudos anteriores, como o de Ma et al. (2003), foram encontradas

associações entre o polimorfismo HindIII do gene da LPL com parâmetros

antropométricos e bioquímicos em pacientes com dislipidemias, hipertensão

e diabetes.

Ainda em outro estudo, Larson et al (1999) relata que o conhecimento

de fatores ambientais tais como, dieta, pode ter significante influência sobre

as concentrações de lipídios e lipoproteínas. Além disso, a relação entre o

polimorfismo HindIII, dieta e variações nos traços lipídicos foram observadas.

Quanto à relação gênero-gene também se especula a possibilidade das inter-

relações da LPL com os hormônios.

Os níveis plasmáticos de lipídios e lipoproteínas podem ser resultados

do comportamento alimentar e/ou serem devidos às variações genéticas

observadas nos indivíduos. Na literatura, já está bem estabelecido que

fatores genéticos contribuem com os níveis basais de lipídios e lipoproteínas

no plasma. Estudos de associações entre polimorfismos genéticos,

especialmente em genes envolvidos com o metabolismo de lipídios, e a

suscetibilidade ao desenvolvimento da DAC têm auxiliado no entendimento

da doença (FRIELANDER et al., 2000).

Estudos, ainda limitados, sugerem a necessidade de pesquisas com

um tamanho amostral maior, baseado nas necessidades nutricionais

42

calculadas ou com um controle nas interações dietéticas e o efeito dos

polimorfismos em diversos genes ou em um único gene.

Os estudos das interações gene-dieta aumentarão nossos

conhecimentos quanto aos mecanismos envolvidos no metabolismo dos

lipídios e aperfeiçoarão nosso entendimento sobre o papel da dieta na

redução dos riscos de doenças cardiovasculares (MASSON et al., 2003).

No Brasil, as publicações referentes a estudos nutrigenéticos,

principalmente os relacionados a dislipidemias, ainda são poucos.

Dentro desse contexto, o presente trabalho tem por objetivos:

investigar a interação gene e dieta, estudando o polimorfismo HindIII (gene

LPL) em homens com dislipidemia da cidade de Santo Ângelo-RS/Brasil. Os

objetivos específicos, por sua vez, foram:

1) Orientar os pacientes dislipidêmicos do sexo masculino para que

seguissem uma orientação nutricional planejada

2) Investigar a freqüência do polimorfismo HindIII na população

estudada.

3) Correlacionar os achados genotípicos com parâmetros

antropométricos, bioquímicos, nutricionais e clínicos.

43

3. MATERIAIS E MÉTODOS

3.1. Delineamento do Estudo

Estudo do tipo transversal observacional, que avalia a interação gene-

dieta no polimorfismo HindIII do gene LPL, em pacientes do sexo masculino,

dislipidêmicos, que procuraram o serviço do Hospital de Guarnição de Santo

Ângelo – RS/Brasil.

3.2. Amostra

Participaram da amostra desse trabalho 83 indivíduos do sexo

masculino, da cidade de Santo Ângelo, Estado do Rio Grande do Sul, os

quais procuraram atendimento nos consultórios de Cardiologia e Nutrição do

Hospital de Guarnição de Santo Ângelo, devido ao seu quadro clínico de

dislipidemia.

Inicialmente os pacientes foram examinados e avaliados através de

interpretação de exames bioquímicos, respondendo a um questionário prévio

(anexo 1), a fim de verificar os critérios de inclusão e exclusão no estudo pela

cardiologista Bácila Badwan Musa Mustafá.

Foram excluídos da amostra indivíduos menores de 18 anos, de sexo

feminino, indivíduos HIV positivo e pacientes que utilizavam medicamentos

que poderiam alterar os níveis lipídicos, tais como: hipolipemiantes, β-

bloqueadores, corticosteróides, e/ou pacientes que apresentaram doenças

que também afetam estes parâmetros (insuficiência renal, diabetes,

alcoolismo, hipotireoidismo).

Posteriormente a consulta com a cardiologista, os pacientes

selecionados foram encaminhados à Nutricionista, a qual realizou o presente

estudo. Ao concordarem em participar do trabalho, um Termo de

44

Consentimento Informado (anexo 2) foi assinado e os pacientes

encaminhados a uma avaliação Antropométrica e Nutricional (anexo 3 ),

seguida da prescrição de uma Orientação Nutricional (anexo 4) que foi

realizada, por no mínimo, 40 dias, e máximo, 90 dias. Após esse período, os

pacientes realizaram novos exames bioquímicos, retornando ao Serviço de

Cardiologia e Nutrição para avaliação final.

Os exames laboratoriais bioquímicos e a coleta das amostras de

sangue para análise molecular foram realizados no Laboratório de Análises

Clínicas do Hospital supracitado.

As análises de Biologia Molecular foram realizadas no Laboratório de

Biologia Molecular da ULBRA.

3.3. Dados Antropométricos

As medidas antropométricas foram aferidas por meio de técnicas

padronizadas e incluiram 1) medida da massa corporal, aferida por meio de

balança antropométrica e 2) medida da estatura realizada por meio de

estadiômetro fixo, em ambos os casos os indivíduos utilizaram avental e

estavam descalços. O IMC foi então calculado como massa (kg)/estatura (m

2

)

e classificado segundo as normas descritas pela OMS (2004).

A aferição da circunferência da cintura e quadril foi realizada segundo

Machado & Sichieri (2002), estando o indivíduo em pé, em posição ereta,

utilizando-se uma fita métrica flexível e inextensível de 200 cm de

comprimento, com precisão de uma casa decimal. Para garantir a validade e

fidedignidade das medidas, observou-se rigorosamente a posição da fita no

momento da medição, mantendo-a no plano horizontal. Para obtenção dos

valores das circunferências, circundava-se com a fita o local do corpo que se

desejava medir, sendo a mesma colocada com firmeza, sem esticar

excessivamente, evitando-se assim a compressão do tecido subcutâneo. A

leitura foi feita no centímetro mais próximo, no ponto de cruzamento da fita.

45

Foi solicitado que o paciente ficasse em posição ortostática, abdômen

relaxado, braço ao lado do corpo e os pés juntos. Sinteticamente, a aferição da

medida da cintura será realizada a uma distância entre a borda inferior da

última costela e a crista ilíaca e em um plano horizontal. O perímetro dos

quadris foi aferido considerando a extensão máxima ao redor das nádegas

(MACHADO & SICHIERI, 2002).

3.4 Dosagens bioquímicas

A dosagem dos lipídios foi realizada no Laboratório de Análises

Clínicas do Hospital de Guarnição de Santo Ângelo. De cada indivíduo, após

12 horas em jejum, foram retirados 5ml de sangue através de punção

venosa. O CT, HDL e TG foram determinados por método enzimático. Após a

coleta, o material foi deixado em repouso até retração do coágulo, após

centrifugado por 10min a 3.000rpm. A determinação do CT, TG e HDL foram

feitas utilizando-se o equipamento Lab Max 240.

3.5 Intervenção Dietética

A Orientação Nutricional foi elaborada e realizada, segundo o NCEP III

(National Cholesterol Education Program III) e Santos (2001) (Anexo 04).

3.6 Avaliação final

Após o término do período de Orientação Nutricional, o paciente

retornou ao consultório para nova avaliação, incluindo nova coleta de sangue

para as análises bioquímicas dos níveis lipídicos.

46

3.7. Extração de DNA

O sangue foi obtido a partir de punção venosa, retirando-se 10ml que

foram transferidos para tubos com EDTA (anti-coagulante), transportado e

refrigerado à 4º C para o Laboratório de Biologia Molecular da ULBRA. O

DNA de cada amostra foi submetido à extração de sangue total segundo o

protocolo descrito por Lahiri & Nurnberger (1991).

3.8 Técnica de PCR-RFLP

A técnica de PCR (do inglês, Polymerase Chain Reaction) consiste

em uma reação de síntese de regiões específicas de DNA em ciclos

repetidos, e a cada ciclo, o número de fragmentos amplificados é duplicado,

e, conseqüentemente, após 30 ciclos, uma molécula é amplificada em mais

de um bilhão de vezes (ROSSETTI et al, 2006). A técnica de RFLP (do

inglês, Restriction Fragment Length Polymorphism) se baseia na análise do

perfil de restrição (tamanho dos fragmentos gerados após a clivagem) de

determinado fragmento de DNA.

Atualmente, a técnica de RFLP tem sido associada à técnica de PCR

(PCR-RFLP). Primeiramente, foi realizada uma reação de PCR.

Posteriormente, o amplicon foi clivado com uma enzima de restrição. O perfil

de restrição foi analisado em um gel de agarose. A reação de PCR foi

preparas em um volume final de 50µl, contendo tampão 10X (10mM Tris, ph

8,3, 50mM KCl, 1,5mM MgCl2), 200µM de dNTPs, 20 pmol de cada primer,

0,5µl de DNA e 5U de enzima Taq Platinum DNA Polymerase.

Foram utilizadas as seguintes condições para a amplificação de 1,3

kb do gene LPL: 94ºC por 5 min, para ativação da enzima, seguidos por 33

ciclos, sendo 94ºC por 1min para desnaturação, 57ºC por 1 min, para

anelamento dos primers e 72º por 1 min para extensão.

Os fragmentos de DNA amplificados foram visualizados em gel de de

agarose a 1,5% sob luz ultravioleta.

47

As seguintes seqüências de primers foram utilizadas, segundo Ahn

et al (1993):

5’ TTT AGGCCT GAA GTT TCC AC 3’

3’ CTC CCT AGA ACA GAA GAT C 5’

Os produtos de PCR amplificados da região polimórfica do gene LPL

(HindIII – intron 8) foram genotipados, após clivagem com a enzima HindIII,

podendo gerar dois fragmentos com os seguintes tamanhos: 700 e 600 pb.

Os produtos de clivagem foram submetidos à eletroforese e analisados em

gel de agarose a 1,5% sob luz ultravioleta. As condições de clivagem dos

produtos amplificados estão descritas na tabela 6.

Tabela 6 – Condições de clivagem dos produtos de PCR para análise dos

polimorfismos presentes no gene LPL.

Gene

Enzima de

restrição

Quantidade de

enzima

Temperatura

(°C)

Tempo de

incubação

LPL

HindIII

5 U 37°C 18 hs

Em todas as reações de clivagem foram utilizadas como controles

positivos duas amostras de DNA que continham o sítio de restrição HindIII

em homozigose (genótipo +/+).

3.9. Análises Estatísticas

Os dados coletados foram armazenados em um banco de dados e

analisados em um software de análises estatísticas SPSS 15.0, com base em

um intervalo de confiança (IC) de 95,0%.

As variáveis controladas para as análises foram: idade, CC, RCQ,

IMC, níveis lipídicos observados antes e depois da implementação da dieta.

O Teste Qui-Quadrado ou Exato de Fisher foi utilizado para comparar

as variáveis categóricas com a presença ou não do desfecho (p<0,05).

48

3.10. Considerações Éticas

O presente estudo foi projetado de acordo com as Diretrizes e

Normas Regulamentadas de Pesquisa envolvendo Seres Humanos

(resolução 196/1996 do Conselho Nacional de Saúde) e foi aprovado pelo

Comitê de Ética da ULBRA. Os pacientes foram informados do presente

estudo e ao concordarem em participar, assinaram um termo de

consentimento livre e esclarecido conforme (Anexo 2). Os participantes

receberam informações detalhadas sobre os objetivos do estudo, bem como

dos procedimentos realizados.

49

4. RESULTADOS E DISCUSSÃO

Neste estudo foram avaliados 83 pacientes que concluíram todos os

critérios pré-estabelecidos para este trabalho. Esta amostra é composta por

pacientes do sexo masculino, dislipidêmicos, da cidade de Santo Ângelo (RS

– Brasil), tendo 88,0%, idade superior a 35 anos e 12,0% abaixo de 35. A

população total estimada deste município é de 77.796 habitantes, sendo

37.396 do sexo masculino (FEE/RS, 2007).

Este estudo se restringe quanto ao sexo, idade e dieta, buscando

maior consistência no que diz respeito aos efeitos da dieta sobre os

genótipos da LPL e vice-versa.

4.1 Análise dos Dados Antropométricos

Neste estudo pode-se observar que mais de 70% da amostra

apresentam IMC em Sobrepeso e Obesidade. Em relação a CC, na grande

maioria dos homens, também acima de 70%, apresentam medidas

superiores a 94 cm, este sendo um indicador associado a DCV.

A tabela 7 demonstra a freqüência do grupo etário, medidas

antropométricas e sua relação com o genótipo.

50

Tabela 7 – Associação dos Dados antropométricos e Genótipo HindIII.

Embora a Organização Mundial da Saúde (OMS), preconize o uso da

CC no ponto de corte de 94cm para homens e 80cm para mulheres, como

medida de risco metabólico aumentado, poucos estudos no Brasil avaliaram

a adequação do uso desse indicador, bem como os pontos de corte mais

adequados para a população brasileira (FERREIRA et al., 2006).

Nesta população, as associações entre o genótipo e variáveis

antropométricas não apresentaram significância. Um dos raros estudos que

buscou realizar estas associações foi o de Vohl et al. (1995), que encontram

apenas correlação significante entre o genótipo H (+/+) e o IMC.

4.2 Guia Alimentar

A mensuração dos resultados finais, através de marcadores

bioquímicos, após o seguimento do Guia Alimentar e Orientações

Nutricionais, pode ser observada nos gráficos a seguir.

Variáveis

Amostra

(n=83)

Genótipo

(%)

P*

Grupos Etários (em anos)

+ / + + / - - / -

≤ 34

10 (12,0%) 10,0 80,0 10,0 0,4

≥ 35

73 (88,0%) 6,8 90,4 2,8

Índice de Massa Corporal (IMC)

Magreza (<18,50) 0 (0,0%) 0,0 0,0 0,0

Peso Saudável (18,50 – 24,99) 22 (26,5%) 13,6 81,8 4,6

Sobrepeso (≥ 25,0)

43 (51,8%) 7,0 88,3 4,7

Obesidade Grau I (30,0 - 34,99) 16 (19,3%) 0,0 100,0 0,0 0,8

Obesidade Grau II (35,0 - 39,99) 1 (1,2%) 0,0 100,0 0,0

Obesidade Grau III (≥ 40,0)

1 (1,2%) 0,0 100,0 0,0

Circunferência-Cintura (CC)

< 94 cm 19 (22,9%) 5,0 90,0 5,0

> 94 cm 64 (77,1%) 7,8 89,0 3,2

0,8

Razão Cintura-Quadril (RCQ)

< 1,0 54 (65,1%) 9,2 88,8 2,0

> 1,0 29 (34,9%) 3,4 89,7 6,9

0,3

- valores de p para teste Qui-Quadrado e Exato de Fischer.

51

diminuiu

aumentou

igual

DIF_COLT1_COLT2

Mensuração dos resultados finais da dieta pelos Marcadores Bioquímicos

Relação COL inicial / COL final

71,08%

27,71%

1,20%

diminuiu

aumentou

igual

DIF_HDL1_HDL2

Mensuração dos resultados finais da dieta pelos Marcadores Bioquímicos

Relação HDL inicial / HDL final

55,42%

42,17%

2,41%

No gráfico 1 está representada a relação entre a CT inicial (COLT1) e

final (COLT2), após a implementação da dieta. Observa-se que 71,1% dos

pacientes apresentaram redução nos níveis de colesterol total.

O gráfico 2 apresenta a relação entre os níveis de HDL, antes (HDL1)

e depois da dieta (HDL2) e observa-se que houve uma redução em 55,4%

ndos pacientes nos níveis de HDL.

Os resultados dos níveis de LDL e TG dos pacientes apresentaram

valores semelhantes, com redução em 67,5% e 65,6% dos pacientes

respectivamente, ao final das orientações nutricionais (Gráfico 3 e 4).

Gráfico 1 -

Gráfico 2 -

Mensuração dos resultados finais da dieta pelos níveis de CT

Mensuração dos resultados finais da dieta pelos níveis de HDL

52

diminuiu

aumentou

igual

DIF_LDL1_LDL2

Mensuração dos resultados finais da dieta pelos Marcadores Bioquímicos

Relação LDL inicial / LDL final

67,47%

30,12%

2,41%

diminuiu

aumentou

DIF_TG1_TG2

Mensuração dos resultados finais da dieta pelos Marcadores Bioquímicos

Relação TG inicial / TG final

65,06%

34,94%

Gráfico 3 -

Gráfico 4 -

A dieta habitual tem sido apontada como elemento fundamental de

análise dos determinantes da susceptibilidade para o aparecimento de

doenças crônicas não transmissíveis, sendo que elevadas concentrações de

TG, CT e sua fração de LDL, associadas à diminuição nos valores de HDL,

aumentam a probabilidade do desenvolvimento de DCV. Portanto, sabe-se

que o potencial hiperlipidêmico e aterogênico dos alimentos está relacionado

ao seu conteúdo de colesterol e gorduras saturadas.

Mensuração dos resultados finais da dieta pelos níveis de LDL

Mensuração dos resultados finais da dieta pelos níveis de TG

53

Um guia alimentar busca promover e manter a saúde global do

indivíduo com orientações direcionadas para prevenção ou tratamento de

qualquer doença. Neste estudo buscou-se realizar a avaliação de um guia

alimentar para dislipidemias, a partir de seus resultados pelos marcadores

bioquímicos. Foi observado significante redução dos níveis de LDL, CT e TG

e a equilibrada variação entre aumento e redução do HDL após a dieta.

Níveis anormais de lipídios séricos e apolipoproteinas caracterizam os

pacientes com CAD precoce, os quais tem um tipo de dislipidemia com um

aumento nas lipoproteinas aterogênicas e apolipoproteína B e baixos níveis

de HDL (IZAR et al., 2003).

4.3 Análise do Polimorfismo HindIII

Neste trabalho, foi possível identificar, confirmando dados segundo

AHN et al (1993), que o alelo HindIII (+) resulta em dois fragmentos de 600 e

700 pb, apresentando a presença do sítio de restrição. Já o alelo HindIII (-),

correspondente à ausência de sítio de restrição.

A classificação por PCR dos genótipos está mostrada na eletroforese

em gel de agarose 1,5%, corado com brometo de etídeo e visualizados em

transiluminador UV. A primeira coluna mostra o marcador de massa

molecular (100 bp); a coluna 2 o controle Negativo; a coluna 3 produto de

amplificação de PCR (1300pb). A coluna 4, 5 e 6 mostra os genótipos

consecutivamente, homozigoto normal HindIII (-/-), heterozigoto HindIII (+/-) e

homozigoto mutante H (+/+). Os tamanhos esperados dos fragmentos do

HindIII estão identificados à direita do gel. (Figura 2)

54

Figura 2 - Perfil eletroforético dos fragmentos de DNA clivados –

polimorfismo HindIII

Neste estudo, se observa que, quanto à diversidade genética, o alelo

mais freqüente foi o HindIII (+), com freqüência de 52,0% em relação ao alelo

HindIII (-) com freqüência de 48,0%. O genótipo heterozigoto HindIII (+/-),

ficou em 89,2%, seguido pelo genótipo HindIII, homozigoto mutante (+/+) com

7,2% e o genótipo HindIII homozigoto normal (-/-) com 3,6%. Os resultados

encontrados estão de acordo com o relatado por Anderson et al. (1999) os

quais relatam a freqüência do alelo HindIII (+), como sendo comumente alta,

aproximadamente maior que 50% e que indivíduos HindIII(+/-) e HindIII(+/+)

possuem triglicerídeos séricos altos e HDL baixo. O estudo ainda relata que

pacientes com DCV apresentaram o alelo HindIII (+), em 93,8% dos casos.

Outros autores também observaram maior freqüência do alelo

HindIII(+). As freqüências dos alelos encontradas por Abu-Amero et al. (2003)

para o alelo HindIII (+) foram de 73,3% e 26,7% para o alelo HindIII (-),

Larson et al. (1999) com 65,7% HindIII (+) e 34,3% HindIII (-), Shimo-

Nakanishi et al. (2001) demonstrando 76,6% HindIII (+) e 23,4 HindIII (-),

Anderson et al. (1999) 73,7% HindIII (+) e 26,3% HindIII (-) e Stancakova et

700 pb

600 pb

1300 pb

55

al. (2006) que também comprova a prevalência do alelo HindIII (+) em

pacientes dislipidêmicos com 60,4% e apenas 39,6% H(-).

Na tabela 08, a freqüência genotípica deste trabalho é comparada com

outros estudos.

Tabela 8 – Estudos comparativos de freqüências genotípicas do

polimorfismo HindIII em diferente populações com dislipidemia.

Estudo

N

FREQUENCIA GENOTÍPICA

LPL – HindIII (%)

+ / + + / - - / -

Neste estudo

(1)

83 7,2 89,2 3,6

LARSON, et al. (1999)

(2)

341 44,0 43,4 12,6

ANDERSON, et al.(1999)

(2)

483 53,6 40,2 6,2

SHIMO-NAKANISHI, et al.(2001)

(3)

177 60,5 32,2 7,3

ABU-AMERO, et al. (2003)

(4)

352 53,7 39,2 7,1

STANČÁKOVÁ, et al. (2006)

(5)

125 34,4 52,0 8,0

(1) Brasil (2) EUA (3) Japão (4) Arábia Saudita (5) República Eslovena

Com esta tabela comparativa, buscou-se uma melhor visualização das

freqüências genotípicas observadas em diversos trabalhos publicados, em

relação aos resultados obtidos no presente estudo. O elevado número de

heterozigotos encontrado demonstrou que o grupo estudado não está em

equilíbrio de Hardy-Weinberg. O fato das freqüências esperadas para os

genótipos estudados não terem sido observadas, pode ser, devido a

diferenças nas freqüências em diferentes etnias do grupo estudado. Mas,

uma explicação para esta maior freqüência necessita de maiores

investigações.

Andrade & Hutz (2001) refere que o efeito de alguns polimorfismos, só

se manifestará em um contexto dependente de variáveis ambientais que

também predisponham a dislipidemias.

Câmara (2007) refere que a produção da descendência com variação

é a base da evolução. Estas variações podem ser fenotípicas e genotípicas.

As fenotípicas decorrem de adaptações a variações ambientais, sem que a

56

Resultados dos níveis de HDL após a dieta

igual

aumentoudiminuiu

Percentual

100,0%

80,0%

60,0%

40,0%

20,0%

0,0%

Homozigoto Mutante

Heterozigoto Normal

Homozigoto Normal

LPL

-

Hind

III

descendência seja afetada. As variações genotípicas são as mais

importantes, uma vez que se transmitem as gerações e, além disso, a

maioria das variações fenotípicas encontradas na natureza não se deve a

adaptações, mas a variações genotípicas.

4.4 Associação entre o polimorfismo e a dieta

Analisando os dados resultantes da associação entre o polimorfismo e

a dieta, pôde ser verificado (Gráfico 5) que em relação aos níveis de HDL, o

indivíduo com o genótipo H (+/+) aumentou 50,0% dos casos e reduziu

também 50,0%. Para o H (+/-) os níveis de HDL aumentaram em 43,3%,

54,0% e permaneceram iguais 2,7% e no H (-/-) em 100,0% diminuíram os

níveis.

Gráfico 5 – Associação dos resultados dos níveis de HDL após dieta com o

genótipo.

57

igualaumentoudiminuiu

Percentual

100,0%

80,0%

60,0%

40,0%

20,0%

0,0%

Homozigoto Mutante

Heterozigoto Normal

Homozigoto Normal

Resultados dos níveis de CT após a dieta

LPL

-

Hind

III

Os valores detectados para os níveis de CT (Gráfico 6) apresentaram

em indivíduos com o genótipo HindIII (+/+) um aumento e redução de 50,0%,

para o HindIII (+/-) 27,0% dos pacientes aumentaram, diminuíram 71,6% e

permaneceram iguais 1,4% e para o genótipo HindIII (-/-) em 100%

diminuíram os níveis após a dieta.

Gráfico 6 – Associação dos resultados dos níveis de CT após dieta com o

genótipo.

O Gráfico 7 apresenta resultados de associação em resposta à dieta,

através dos índices bioquímicos do LDL, em relação aos pacientes com

genótipo HindIII (+/+) obteve-se um aumento e redução de 50,0%, para o

HindIII (+/-) 71,6% dos pacientes reduziram, 27,1% aumentaram e 1,3%

58

igual

aumentoudiminuiu

Percentual

80,0%

60,0%

40,0%

20,0%

0,0%

Homozigoto Mutante

Heterozigoto Normal

Homozigoto Normal

LPL

-

Hind

III

Resultados dos níveis de LDL após a dieta

permaneceram iguais. Para o genótipo HindIII (-/-) em 66,7% dos casos

houve um aumento e em 33,3% permaneceram em níveis iguais, mesmo

após a dieta.

Gráfico 7 – Associação dos resultados dos níveis de LDL após dieta com o

genótipo.

O Gráfico 8 demonstra em relação aos níveis de TG que 100% dos

homens com os genótipos HindIII (+/+) e HindIII (-/-) tiveram uma redução de

níveis, enquanto que para o genótipo HindIII (+/-), 60,8% dos casos

reduziram e 39,2% aumentaram.

59

Resultados dos níveis de TG após a dieta

aumentoudiminuiu

100,0%

80,0%

60,0%

40,0%

20,0%

0,0%

Homozigoto Mutante

Heterozigoto Normal

Homozigoto Normal

Percent

ual

LPL

-

Hind

III

Gráfico 8 – Associação dos resultados dos níveis de TG após dieta com o

genótipo.

A freqüência da interação dos genótipos em relação aos resultados da

dieta (tabela 9), apresentaram significância para os níveis de LDL, tendo p <

0,002 e para os níveis de TG, o resultado ficou em associação limítrofe de

(p <0,06).

60

Tabela 9 – Associação dos resultados da interação gene-dieta.

FREQÜÊNCIA DA INTERAÇÃO DOS GENÓTIPOS X DIETA

N = 83

P

HindIII

- / - + / - + / +

DIFERENÇA CT

Aumentou 0 20 3 23

Diminuiu 3 53 3 59

Sem alteração 0 1 0 1

NS

DIFERENÇA HDL

Aumentou 0 32 3 35

Diminuiu 3 40 3 46

Sem alteração 0 2 0 2

NS

DIFERENÇA LDL

Aumentou 2 20 3 25

Diminuiu 0 53 3 56

Sem alteração 1 1 0 2

0,002*

DIFERENÇA TG

Aumentou 0 29 0 29

Diminuiu 3 45 6 54

Sem alteração 0 0 0 0

0,06**

* NS - sem significância

** Valor de p com significância limítrofe

A interação gene-ambiente refere-se aos diferentes fenótipos e os

efeitos de diferentes ambientes nos indivíduos com mesmo genótipo ou aos

diferentes efeitos em relação a um mesmo ambiente em indivíduos com

diferentes genótipos. É bem conhecido que os efeitos da dieta mudam as

concentrações plasmáticas dos lipídios e diferem significantemente entre

indivíduos. Mas alguns pacientes são mais responsivos que outros

(CORELLA & ORDOVAS, 2005). Em uma avaliação do impacto destas

diferentes respostas entre indivíduos e sua relação à dieta, como exemplo,

Schaefer et al. (1997) relatam que os efeitos do National Cholesterol

Education Program (NCEP), Passo-2 (dieta) em relação aos perfis das

lipoproteínas plasmática em 72 homens e 48 mulheres, tendo como

resultados significantes redução no LDL e HDL em homens e mulheres.

61

Contudo uma grande variabilidade em resposta aos lipídios para a dieta foi

observada, com mudanças no LDL, havendo uma redução maior em homens,

em torno de 55,0% e de 39,0 % em mulheres.

Como podemos verificar no presente estudo houve um aumento de TG

somente nos indivíduos com o genótipo HindIII (+/-), e uma redução dos

níveis de HDL nos genótipos. Katan et al. (1997) relatam que dietas com

baixo teor de gordura podem também resultar em redução de HDL e aumento

de TG. Em outro estudo realizado por Jacobs et al. (2004), observou-se que

respostas individuais aos TG para dietas com alto teor de gordura ou para

dietas com baixo teor de gordura foram vastamente diferentes. A partir destes

dados pode-se notar que em bons níveis da população há uma

responsividade positiva a dietas padronizadas, mas não necessariamente

positiva a níveis individuais.

Atualmente se discute qual seria a melhor dieta para a prevenção das

doenças cardíacas. Deve-se levar em consideração a individualidade, pois

com o polimorfismo HindIII, o alelo HindIII (+), está muito relacionado a altos

níveis de TG e baixos de HDL e seus resultados quanto à alimentação foram

positivas, não se tendo a pretensão de sugerir que a alimentação é mais

importante que o perfil genético do ser humano, mas é importante salientar e

aqui se deixa registrado a importância da alimentação como efeito preventivo

e protetor.

A razão de estudos para a variação em resposta à dieta nos permite

identificar indivíduos que possam melhor se beneficiar de intervenções

dietéticas. Atualmente, buscam-se suportes que possam identificar a

variabilidade individual em resposta a interação gene-dieta, especialmente

em relação aos lipídios e lipoproteínas (LOKTIONOV, 2003).

Os níveis de lipídeos e lipoproteínas são determinados pela ação de

vários genes e pela influencia de fatores ambientais, resultados em

condições de origem multifatorial. Um indivíduo pode ter uma combinação de

alelos que esteja relacionada com a deterioração de seu perfil lipídico, mas

se ele mantiver hábitos de vida saudáveis, a chance de ter seus níveis

alterados diminui (ANDRADE & HUTZ, 2001).

62

Segundo Corella & Ordovas (2005), na área da Saúde Pública, a

nutrição é considerada um dos mais importantes fatores ambientais, tendo

implicações diretas sobre o aumento ou a redução das desordens lipídicas.

A complexidade do metabolismo lipídico é um dos principais

obstáculos na elucidação das interações gene-dieta (CORELLA &

ORDOVAS, 2005).

63

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

ABU-AMERO, K. K., WYNGAARD, C. A., AL-BOUDARI, O. M., KAMBOURIS,

M., DZIMIRI, N. Lack of Association of Lipoprotein Lipase Gene

Polymorphisms with Coronary Artery Disease in the Saudi Arab Population.

Arch Pathol Lab Med, vol 127: 597-600, 2003. Arch Pathol Lab Med, v. 127,

p. 597-600, 2003.

ANDERSON, J. L., KING, G. J, BAIR, T. L, ELMER, S. P, MUHLESTEIN, J.

B., HABASHI, J., MIXSON,L., CARLQUIST, J. F. Association of Lipoprotein

Lipase Gene Polymorphisms with Coronary Artery Disease. Journal of the

American College of Cardiology, v. 33, n. 4, p. 1013-1020, 1999.

AHN, Y. I, KAMBOH, M. I, HAMMAN, R. F, COLE, S. A, FERRELL, R.E. Two

DNA polymorphisms in the lipoprotein lipase gene and their associations with

factors related to cardiovascular disease. Journal of Lipid Research, v. 34, p.

421-428, 1993.

ANDRADE, F. M.; HUTZ, M. O componente genético da determinação dos

lipídeos séricos. Ciência & Saúde Coletiva, 7 (1), p.175-182, 2002.

BRANDÃO, A. P. Tratando a hipertensão arterial, reduzindo o risco de doenças

cardiovasculares. Adalat Insight Study. Bras. Cardiol., v. 2, n. 5, p. 181-183, 2000.

CÂMARA, F. P. Disponível em:

www.microbiologia.ufrj.br/gen%E9tica%20e%20evolu%E7%E3o%20de%

20popul%E7%. Acesso em: 04/05/2007.

CANNON, C.P., BRAUNWALD, E., McCABE, C.H. Intensive versus moderate

lipid lowering with statins after acute coronary syndromes. N Engl J Med; n.

350, p. 1495-504, 2004.

CAMPBELL, M.K. Bioquímica. 3 ed. Porto Alegre: Artmed, 2000. p. 548-580.

CONSENSO BRASILEIRO DE DISLIPIDEMIAS. Arquivo Brasileiro de

Cardiologia, 1996. v. 67.

CORELLA, D., ORDOVAS, J. M. Single Nucleotide polymorphisms that

influence lipid metabolism: Interaction with Dietary Factors. Annu. Rev. Nutr.

n. 25, p. 341-90, 2005.

CHOR D., FONSECA M. J. M., ANDRADE C.R. Doenças cardiovasculares:

comentários sobre a mortalidade precoce no Brasil. Arq Bras Cardiol, v. 64,

p.15-19, 1995.

64

DOBBELSTEYN, C. J., JOFFRES, M. R., MACLEAN, D. R., FLOWERDEW,

G. and The Canadian Heart Health Surveys Research Group. A comparative

evaluation of waist circumference, waist-to-hip ratio and body mass index as

indicators of cardiovascular risk factors. International Journal of Obesity, v.

25, p. 652-661, 2001.

DUMAN, B. S., TÜRKOGLU, Ç., AKPINAR, B., GÜDEN, M., VERTII, A., DAK,

E., ÇAGATAI, P., GÜNAY, D. , BÜYÜKDEVRIM, A. S. Lipoprotein Lipase

Gene Polymorphism and Lipid Profile in Coronary Artery Disease.

Arch Pathol

Lab Med, v.128, 2004.

FEE/RS – Fundação de Economia e Estatística do Rio Grande do Sul.

Disponível em :

www.fee.tche.br/sitefee/pt/content/estatisticas/pg_populacao.php.

Acesso em 04/05/2007.

FERREIRA, M. G., VALENTE, J. G., GONÇALVES-SILVA, R. M. V.,

SICHIERI, R. Acurácia da circunferência da cintura e da relação

cintura/quadril como preditores de dislipidemias em estudo transversal de

doadores de sangue de Cuiabá, Mato Grosso, Brasil. Cad. Saúde Pública. 22

ed. Rio de Janeiro, 2006. p. 307-314.

FISLER, J. S., WARDEN, C. H. Dietary fat and genotype: toward

individualized prescriptions for lifestyle changes. Am. J. Clin. Nutr. n. 81,

p.1255-6, 2005.

FREITAS, E. V. Triglicerídios e Doença Arterial Coronariana. Revista da

SOCERJ. Jan/Fev/Mar, 2004. v. 17. n. 1. p. 45- 49.

FRIEDLANDER, Y, LEITERSDORF, E, VECSLER, R. The contribution of

candidate genes to the response of plasma lipids and lipoproteins to dietary

challenge. Atherosclerosis, 152, p. 239-248, 2000.

GOLDSTEIN J. L.; HOBBS H. H.; BROWN M. S. Familial

hypercholesterolemia. The metabolic and molecular basis of Inherited

Disease. New York: MacGraw Hill, p. 1981-2030, 1995.

HEGELE, R. A. Monogenic dislipidemias: Windows on Determinants of

Plasma Lipoprotein Metabolism. Am. J. Hum. Genet., n. 69, p. 1161-1177,

2001.

INSTITUTO BRASILEIRO DE GEOGRAFIA E ESTATÍSTICA – IBGE.

Disponível em:

www.ibge.gov.br/home/estatistica/populacao/estimativa2005/default.shtm.

Acesso:03/04/2007.

65

ISHITANI, L. H., FRANCO, G. C., PERPÉTUO, I. H. O., FRANÇA, E.

Desigualdade social e mortalidade precoce por doenças cardiovasculares no

Brasil. Rev Saúde Pública, n.40, p.684-91, 2006.

IZAR, M.C, FONSECA F. A. H., IHARA, S. S. M., HAN, KASINSKI, N., HAN,

S. W., LOPES, I. E. L., PINTO, L. E. S. A., RELVAS, W. G. M., LOURENÇO,

D., TUFIK, S., PAOLA, A. A. V. de, CARVALHO, A. C. C. Risk Factors,

Biochemical Markers, and Genetic Polymorphisms in Early Coronary Artery

Disease. Arq Bras Cardiol, v. 80, n. 4, p. 388-395, 2003.

JACOBS, B., DE ANGELIS-SCHIERBAUM, G., EGERT S., ASSMANN,

G.,KRATZ, M.Individual serum triglyceride responses to high-fat and low-fat

diets differ in men with modest and severe hypertriglyceridemia. J. Nutr.,

p.1400–5, 2004.

JEMAA, R., FUMERON, F., POIRER, O., LECERF, L., EVANS, L.,

ARVEILER, D., Luc, G., CAMBOU, J., BARDTT, J., FRUCHART, J,

APFELBAUM, M., CAMBIENT, F., TIRET, L. Lipoprotein lipase gene

polymorphisms: associations with myocardial infarction and lipoprotein levels,

the ECTIM study. Journal of Lipid Research, v. 36, p. 2141-2146, 1995.

KATAN, M. B., GRUNDY, S. M., WILLETT, W.C. Should a low-fat, high-

carbohydrate diet be recommended for everyone? Beyond low-fat diets. N.

Engl. J. Med. p. 563–66, 1997.

KATCH, F. I., MARCDLE, W. D. Nutrição, Exercícios e Saúde. 4. ed. São

Paulo: Editora Medsi, 1996. p. 81-111.

LAHIRI, D. K. & NURBERGER, J. I. A rapid non-enzymatic method for the

preparation of HMW DNA from blood for RFLP studies. Nucleic Acids

Research, n. 9, p. 5444, 1991.

LARSON, I., HOFFMANN, M.M, ORDOVAS, J.M, SCHAEFER, E. J, MÄRZ,

W. KREUZER, J. The Lipoprotein Lipase HindIII Polymorphism: Association

with Total Cholesterol and LDLCholesterol, but not with HDL and Triglycerides

in 342 Females. Clinical Chemistry, n. 45, v.7, p. 963–968, 1999.

LIACOURAS, C.A. Hyperlipidemia. In: Nutrition in pediatrics. 2ª ed. BC

Decker: London, 1997, p. 619-26.

LONG, S.,TIAN, Y., ZHANG, R., YANG, L., XU, Y., JIA, L., FU, M.

Relationship between plasma HDL subclasses distribution and lipoprotein

lipase gene HindIII polymorphism in hyperlipidemia. Clinica Chimica Acta,

p.316 – 321, 2006.

LOKTIONOV, A. Common gene polymorphisms and nutrition: emerginglinks

with pathogenesis of multifactorial chronic diseases. J. Nutr. Biochem. n. 14,

p. 426–51, 2003.

66

LOTUFO P. A. Epidemiologia da Hipertensão Arterial Sistêmica no Brasil.

SOCESP II. Cardiologia: Atualização e Reciclagem. São Paulo: Atheneu,

1996. p. 327-331.

MACHADO, P. A. N. & SICHIERI, R. Relação cintura-quadril e fatores de

dieta em adultos. Rev Saúde Pública, n. 36, p. 198-20, 2002.

MACINTYRE N., HARRY D. S. Clinical disorders of plasma lipid and

lipoprotein metabolism. London: Wolfe Publishing, 1991. p. 93-139.

MASSON, L. F., MaCNEILL, G., AVENELL, A. Genetic variation and the lipid

response to dietary intervention: a systematic review. Am J Clin Nutr, n. 77, p.

1098-1111, 2003.

MAY. Q., THOMAS, G. N, MAGGIE, C.Y. N., CRITCHLEY, A.J.H, CHAN,

J.C.N, TOMLINSON, B. The Lipoprotein Lipase Gene HindIII olymorphism Is

Associated With Lipid Levels in Early-Onset Type 2 Diabetic Patients.

Metabolism, v. 52, n.3, p. 338-343, 2003.

MILLÉO, F. Q. Estudos comparativos do efeito de técnicas cirúrgicas para o

tratamento da obesidade, Capella e Santoro II, sobre a trigliceridemia

periférica. Curitiba: UFPR, 2005. f. 83. Dissertação (Mestrado) – Setor de

Ciências da Saúde, Universidade Federal do Paraná, Curitiba, 2005.

MOTTA, V. T. Bioquímica. 1. ed. Caxias do Sul: Editora da Universidade de

Caxias do Sul, 2005. v. 1.

NATIONAL INSTITUTES OF HEALTH - NATIONAL HEART, LUNG, AND

BLOOD INSTITUTE. National Cholesterol Education Program III. NIH

Publication. n. 1, p. 3670, 2001.

NETO, R. M. N. (Org.) Atlas Corações do Brasil. Rio de Janeiro, São Paulo,

2005.

OLIVEIRA, G.M.M, KLEIN, C.H., SOUZA e SILVA, N. A. Mortalidade por

doenças cardiovasculares em três estados do Brasil de 1980 a 2002. Rev

Panam Salud Publica. n.19, p. 85–93, 2006.

ORGANIZAÇÃO MUNDIAL DA SAÚDE – OMS. Disponível em:

http://www.who.int/bmi/index.jsp?introPage=intro_3.html. Acesso em

23/03/2007.

ORDOVAS, J. M. Nutrigenetics, Plasma lipids and Cardiovascular Risk.

Journal of the American Dietetic Association, n. 7, v. 106. p.1074–108, 2006.

ORDOVAS, J. M. The quest for cardiovascular health in the genomic era:

nutrigenetics and plasma lipoproteins. Nutrition Society, n. 63, p.145–152,

2004.

67

ORDOVAS, J. M., CUPPLES, L. A., CORELLA, D. Association of cholesteryl

ester transfer protein – TaqB polymorphism with variations in lipoprotein

subclasses and coronary heart disease risk. Framingham study.

Artheriosclerosis Thrombosis Vascular Biology, p.1323-1329, 2000.

RADHA, V., MOHAN, V., VIDYA, R., PHIL, M., ASHOK, A. K., DEEPA, R.,

MATHIAS, R. A. Association of Lipoprotein Lipase Hind III and Ser 447 Ter

Polymorphisms With Dyslipidemia in Asian Indians. Am J Cardiol, p.1337–

1342, 2006.

RAZZAGHI, H. ASTON C. E, HAMMAN, R. F, KAMBOH M. I. Genetic

screening of the lipoprotein lipase gene for mutations assoiated with high

trglyceride/low HDL-cholesterol levels. Human Genetics, n.107, p. 257-267,

2000.

RIDKER, P. M., GENEST, J., LIBBY, P. Heart Disease - A Textbook of

Cardiovascular Medicine, 6th Ed. Sauders , 201, p.1011-1018.

RIEGEL, R. E. Bioquímica. 2. ed. São Leopoldo: Editora Unisinos, 1996.

p.178-238.

ROSSETTI, M. L., SILVA, C. M. D., RODRIGUES, J. J. S. (organizadoras)

Doenças Infecciosas – Diagnóstico Molecular. Guanabara Koogan. Rio de

Janeiro – RJ, 2006.

SACKHEIM, G & LEHMAN, D. Química e bioquímica para Ciências

Biomédicas. 8. ed. São Paulo: Manole, 2001.

SANTOS, R. D. (Org.) III Diretrizes brasileiras sobre dislipidemias e diretrizes

de Prevenção da Aterosclerose da Sociedade Brasileira de Cardiologia. Arq

Bras Cardiol. n. 77, Supl. 3, p. 1-48, 2001.

SANTOS, R. D. (Org.) Projeto Diretrizes – Prevenção da Aterosclerose –

Dislipidemia. Porto Alegre: Revista AMRIGS, p. 43-65, 2004.

SCHAEFER, E. J., LAMON-FAVA, S., AUSMAN, L. M, CLEVIDENCE, B. A.

Individual variability in lipoprotein cholesterol response to National Cholesterol

Education Program Step 2 diets. Am J Clin Nutr. n. 65, p. 823–30, 1997.

SHIMO-NAKANISHI, Y., URABE, T., HATTORI, N., WATANABE, Y.,

NAGAO, T. YOKOCHI, M., HAMAMOTO, M., MIZUNO, Y. Polymorphism of

the Lipoprotein Lipase Gene and Risk of Atherothrombotic Cerebral Infarction

in the Japanese. Stroke – Journal of the Americam Hearth Association, p.

1481-1486, 2001.

68

SPOSITO, A. C., CARAMELLI, B., FONSECA, F. A. H., BERTOLAMI, M. C.

IV Diretriz Brasileira Sobre Dislipidemias e Prevenção da Aterosclerose

Departamento de Aterosclerose da Sociedade Brasileira de Cardiologia.

Arquivos Brasileitos de Cardiologia, v. 88, Supl. I, 2007.

STANČÁKOVÁ, A., BALDAUFOVÁ, L., JAVORSKÝ M., KOZÁROVÁ, M.,

ŠALAGOVIČ, J., TKÁČ, I. Effect of Gene Polymorphisms on Lipoprotein

Levels in Patients with Dyslipidemia of Metabolic Syndrome. Physiol. Res.

n.55, p.483-490, 2006.

TALMUD, P. J., STEPHENS, J. W. Lipoprotein lipase gene variants and the

effect of environmental factors on cardiovascular disease risk. Diabetes,

Obesity and Metabolism, v. 6, p. 1–7, 2004.

TEMAS CARDIOLÓGICOS. Disponível em: www.saude-

cardio.net/pdf/ca_dislip_caderno1.pdf. Acesso em: 04/06/2007.

UKKOLA, O., GARENC, C., PÉRUSSE, L., BERGERON, J., DESPRÉS, J.,

RAO, D.C., BOUCHARD, C. Genetic variation at the lipoprotein lipase locus

and plasma lipoprotein and insulin levels in the Que´bec Family Study.

Atherosclerosis, p. 199–206, 2001.

VIEIRA, J. R. S. Hipercolesterolemia e Risco Genético para Doença Arterial

Coronária. News Lab. 72. ed., p. 116-130, 2005.

Marie-Claude Vohl; Benoît Lamarche; Sital Moorjani; Denis Prud'homme; André Nadeau;

Claude Bouchard; Paul-J. Lupien; Jean-Pierre Després

VOHL, M. C., LAMARCHE, B., MOORJANI, S. PRU’HOMME, D., NADEAU,

A., BOUCHARD, C., LUPIEN, P-J., DESPRÉS, J-P. The Lipoprotein Lipase

HindIII Polymorphism Modulates Plasma Triglyceride Levels in Visceral

Obesity. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology, n.15, p. 714-

720, 1995.

WEGGEMANS, R. M., ZOCK, P. L.,MEYBOOM, S., FUNKE, H. KATAN, M. B.

Apolipoprotein A4-1/2 polymorphism and response of serum lipids to dietary

cholesterol in humans. Journal of Lipidi Research, v. 41, p.1623-1628, 2000.

WEISS, K. M. Genetic variation and Human Disease – principles and

evolutionary approaches. Cambridge University Press, 1993.

WILLIAMS, S. R. Fundamentos de Nutrição e Dietoterapia. 6. ed. ArtMed,

1994. p. 63-75.

69

ANEXOS

70

ANEXO 1

PROJETO:

“Associação entre o polimorfismo HindIII do gene da Lipoproteína Lipase (LPL) e a

responsividade à dieta em indivíduos dislipidêmicos do sexo masculino da cidade de

Santo Ângelo-RS”

Investigador responsável: Ana Letícia Vargas Barcelos

Cardiologista responsável: Bácila Badwan Musa Mustafá

PROTOCOLO DE COLETA DE DADOS CARDIOLÓGICOS

NOTA:

Toda informação será mantida sob estrita confidencialidade. Este

questionário será armazenado em arquivos fechados. Seu número de identificação

será a única conexão à informação coletada.

Número de controle: _____________________________

Número do prontuário no HGuSA: __________________________________

1. Nome: ________________________________________

____________

2. Data de nascimento: ___ / ___ /_____ (dd/mm/aaaa) DN: ___/____/___

3. Idade: ______ (em anos) IDADE:

4. Você é diabético? (1) Sim (2) Não DIAB:

5. Você é hipertenso? (1) Sim (2) Não HPT:

6. Você possui outras doenças? (1) Sim (2) Não OUT:

Quais:

7. Você utiliza ou utilizou algum medicamento para redução de colesterol e

71

triglicerídeos? (1) Sim (2) Não

Qual/is:

8. Quanto tempo parou a utilização?

DIAGNÓSTICO CLÍNICO:

OBSERVAÇÕES:

72

ANEXO 2

CONSENTIMENTO PARA PARTICIPAÇAO DO PROJETO DE PESQUISA:

“Associação entre o polimorfismo HindIII do gene da Lipoproteína Lipase (LPL) e a

responsividade à dieta em indivíduos dislipidêmicos do sexo masculino da cidade de

Santo Ângelo-RS”

Investigador responsável: Ana Letícia Vargas Barcelos

Objetivos do Estudo

As doenças do coração são consideradas um problema de saúde pública no mundo.

Existem diversos fatores de risco responsáveis pelo aparecimento dessas doenças, os quais

podem ser divididos em imutáveis e mutáveis. Fatores imutáveis são aqueles que não

podemos mudar e, por isso, não podemos tratá-los, são eles: hereditariedade (herança

genética herdada de nossos pais), idade e sexo (homens têm maiores chances de ter um

ataque cardíaco). Os fatores mutáveis são aqueles sobre os quais podemos influir, mudando,

prevenindo ou tratando, são eles: fumo, colesterol elevado (HDL é o bom colesterol e o LDL

é o mau colesterol), pressão arterial elevada, dieta (alimentação inadequada), vida

sedentária (falta de exercícios físicos), obesidade (excesso de peso) e estresse (tensão

emocional). O colesterol elevado é um dos fatores de risco mais importantes para o

surgimento das doenças do coração e sua diminuição está comprovadamente ligada a uma

diminuição desse risco. O presente estudo tem como objetivo conhecer uma região do seu

material genético (DNA) que pode estar influenciando o aparecimento de colesterol alto e,

conseqüentemente, as doenças do coração, assim como os efeitos de uma dieta para

controle de dislipidemia (triglicerídios e colesterol alterados).

Procedimentos

Será realizada uma avaliação do seu perfil lipídico pela Cardiologista com posterior

encaminhamento ao nutricionista. Durante a visita, algumas perguntas como idade,

escolaridade e dieta serão realizadas. Serão obtidas também medidas como peso (massa

corporal), estatura e circunferência da cintura e quadril. Uma orientação nutricional será

fornecida e deverá ser seguida por um período de 40 dias. Após, será realizada uma coleta

de sangue para dosagem dos níveis de lipídios e análises genéticas. Duas reconsultas

deverão ser devidamente marcadas, a primeira para a avaliação do tratamento (orientação)

nutricional e a segunda para avaliar os resultados do exame bioquímico final.

Essas coletas serão feitas apenas para este estudo e em nada influenciarão o

tratamento.

Riscos e Desconfortos:

Os riscos e desconfortos aos pacientes deste estudo são aqueles associados aos

procedimentos da coleta de sangue. Essa quantidade é pequena (15mL) e, por isso,

dificilmente causará algum mal-estar geral (1 em cada 1000 pessoas), no entanto, poderá

haver pequeno incômodo de dor no momento da introdução da agulha para a retirada do

sangue e dor no local da coleta e, eventualmente, um pequeno hematoma.

Você terá temporariamente, por 40 dias, algumas restrições alimentares.

Benefícios:

Os benefícios da participação nesse estudo estão relacionados aos exames

oferecidos e ao acompanhado recebido. Você também estará contribuindo com informações

fundamentais que ampliarão o conhecimento da relação entre a hereditariedade e as

73

dislipidemias. Além disso, as orientações alimentares poderão eventualmente melhorar o seu

perfil lipídico e provocar um emagrecimento correto e saudável. O participante, ao final do

estudo, poderá ter acesso aos resultados desta pesquisa.

Custos:

Nenhuma forma de pagamento será efetuada e/ou exigida pela participação do

projeto

Confidencialidade:

Todas as informações e os resultados advindos dos procedimentos realizados serão

considerados confidenciais e serão conhecidos somente da equipe envolvida. Todos os

questionários e materiais coletados serão identificados através de um código criado na

entrada do estudo. Este código será a única identificação no banco de dados, sendo utilizado

para análise dos dados e divulgação dos mesmos no meio científico.

Dúvidas:

Alguma dúvida referente ao estudo poderá ser esclarecida pela nutricionista Ana

Letícia Vargas Barcelos no telefone: 3313-2929 (Hospital de Guarnição de Santo Ângelo).

Participação voluntária:

Uma cópia desse documento será fornecida, caso desejar. Se houver desistência em

algum momento do estudo, nenhuma diferença quanto ao acompanhamento e tratamento

será observado.

Significado de sua assinatura:

A sua assinatura abaixo significa que você entendeu a informação que lhe foi

fornecida sobre o estudo e sobre o termo de consentimento. Se você assinar este documento

significa que você concorda em participar do mesmo.

, de de .

Nome completo:

Endereço completo:

Número do telefone:

Assinatura do Paciente:

Data:

74

ANEXO 3

Avaliação Nutricional

Nome:

Data de Nascimento: Idade:

Escolaridade:

Atividade profissional:

Dados Antropométricos

Estatura (m):

Peso Atual (kg):

Cintura (cm):

Quadril (cm):

Relação C/Q:

Realiza alguma atividade física: ( ) Sim ( ) Não

Que tipo?

Freqüência semanal: Tempo:

Hábitos Alimentares

Açúcar: ( ) Sim ( ) Não Qual?

Utilização (em quais alimentos):

Consumo por porção:

Adoçante dietético: ( ) Sim ( ) Não Qual?

Utilização (em quais alimentos):

Consumo ( em gotas) por porção:

Lanches (de padaria, folhados,...): ( ) Sim ( ) Não

Consumo (diário/semanal/mensal):

IMC

< 18,5 – Magreza

18 – 24,9 – Peso Saudável

25 – 29,9 – Pré – Obesidade

30 – 34,9 – Obesidade Grau I

35 – 39,9 – Obesidade Grau II

40 ou + – Obesidade Grau III

75

Salgados (pastel, coxinha, risólis,...): ( ) Sim ( ) Não

Consumo (diário/semanal/mensal):

Batata Frita Industrializada: ( ) Sim ( ) Não

Consumo (diário/semanal/mensal):

Chips: ( ) Sim ( ) Não

Consumo (diário/semanal/mensal):

Bolachas: ( ) Sim ( ) Não Quais as preferidas?

Consumo (diário/semanal/mensal):

Massas em geral (macarrão, lasanhas, canelones, ...): ( ) Sim ( ) Não

Consumo (diário/semanal/mensal):

Batata Doce/Batata Inglesa/Mandioca: ( ) Sim ( ) Não

Consumo (diário/semanal/mensal):

Pães (branco, centeio, francês,..): ( ) Sim ( ) Não

Consumo (diário/semanal/mensal):

Líquidos: ( ) Sim ( ) Não Quais?

Refrigerantes: ( ) Sim ( ) Não

( ) Normal ( ) Diet: ( ) Light

Consumo (diário/semanal/mensal):

Quantidades:

Água: ( ) Sim ( ) Não Q

uantidade: /dia

Bebidas Alcóolicas: ( )Sim ( ) Não

Quais?

Consumo (diário/semanal/mensal):

Quantidades:

Sobremesas: ( )Sim ( ) Não

Quais?

Consumo (diário/semanal/mensal):

Quantidades:

Chocolates/Balas/Tortas/Bolos: ( )Sim ( ) Não

76

Quais?

Consumo (diário/semanal/mensal):

Quantidades:

Fast Food: ( )Sim ( ) Não Quais?

Consumo (diário/semanal/mensal):

Frutas: ( ) Sim ( ) Não

Consumo (diário/semanal/mensal):

Quais?

Saladas: ( ) Sim ( ) Não

Consumo (diário/semanal/mensal):

Quais?

Utiliza mais: Assados ( ) Cozidos ( ) Frituras ( )

Consumo de latas de óleo/mês:

Que tipo de óleo utiliza para confeccionar suas refeições?

Quantas pessoas realizam as refeições?

Quem cozinha a comida?

Freqüência de refeições fora de casa:

Alimentos Preferidos:

77

Observações:

Anamnese Alimentar

Refeição: Horário:

Alimentos:

Refeição: Horário:

Alimentos:

Refeição: Horário:

Alimentos:

Refeição: Horário:

Alimentos:

Refeição: Horário:

Alimentos:

Refeição: Horário:

Alimentos:

78

ANEXO 4 -

Guia Alimentar para Dislipidemias

As dislipidemias são caracterizadas por: elevadas

concentrações de triglicerídios plasmático (TG) e colesterol total

(CT), por isso são consideradas um dos principais fatores

determinantes para o desenvolvimento de doenças

cardiovasculares.

Para haver uma redução destas alterações sanguíneas faz-se

necessário cumprir as seguintes orientações nutricionais:

Alimentos Não Recomendados

Ovos – gema

Miúdos e vísceras: fígado, rim, moela, língua, coração e miolos.

Peixes: bacalhau, lagosta, mariscos e camarão.

Carnes: ovelha, pato

Gado e porco: com gorduras visíveis

Pele de frango, asa, sambiquira

Leite: “in natura” ou integral

Derivados de leite: creme de leite, iogurtes, iogurte integral, nata,

queijos coloniais, queijos (amarelos), requeijão, sorvetes, manteiga.

Gorduras como: banha, bacon, toucinho, gordura de côco, torresmo,

maionese.

Frios: salame, salsicha, lingüiça, presunto, mortadela, patê.

Produtos de padaria gordurosos: sonho, pastéis, empadas, bolos,

bolos confeitados, tortas doces.

Farinhas refinadas e polvilho

Massas em geral: macarrão, lasanhas, panquecas,...

Pães Brancos – principalmente pão francês, pão de queijo

Bolachas e biscoitos: tipo cream cracker, waffer, salgadas,

recheadas, de polvilho, caseiras, com nata, coloniais, amanteigadas.

Batata-frita industrializada

Chips

Frituras: batata-frita, peixe frito, polenta frita,...

Sobremesas e doces: pó para sobremesa, leite condensado, tortas e

doces industrializados, balas, chicletes (exceto trident), rapaduras, pé-

de-moleque, torrones, puxa-puxa, doces em calda, pudins, flans, doces

com nata, docinhos (quindim, brigadeiro, branquito, caramelados,...),

merengues, pirulitos, mel, geléia, schimier.

Achocolatados: Nescau, Toddy, Chocomilk, Quick e similares

Chocolates

Açúcar: refinado, cristal, mascavo

Bebidas Alcoólicas

Refrigerantes

79

Alimentos Permitidos

Clara de ovo – preparações mais indicadas: pochê, cozido em água ou

no microondas. Retirar e desprezar a gema.

Carnes: - gado (somente magras) – 2 vezes na semana;

- aves (sem a pele) – preferencialmente o peito;

- porco (de 10 em 10 dias) – preferencialmente o lombo

- peixes, como:

atum, corvina, merluza, pescada, pintado,

sardinha, ...

Leite Desnatado

Derivados de leite: queijo minas, ricota ou quark, queijo mussarela,

requeijão light, iogurtes light, iogurte desnatado (preferencialmente os

naturais).

Soja, Leite de soja, Tofu e derivados de soja

Fibras solúveis: feijões (preto, marrom, branco,...), lentilha, grão de

bico, ervilha, aveia, farinha de aveia, maçã (com a casca).

Adoçantes dietéticos

Arroz Branco

Polenta, Milho em espiga, farinha de milho, ...

Alimentos integrais: arroz integral, cevada integral, farelo de trigo,

canjiquinha, trigo integral, germe de trigo, macarrão integral.

Pães: integral, de centeio, rico em fibras.

Biscoito e bolachas integrais

Gergelim, linhaça, semente de girassol (pães e bolachas)

Verduras cruas e folhosas.

Margarinas: de consistência macia, com baixo teor de gordura e de

ácidos graxos trans (em pequenas quantidades).

Azeite de Oliva

Óleos: soja, girassol, milho, arroz e canola (em pequenas

quantidades).

Amêndoas, nozes, castanhas, azeitona, amendoim (em pequena

quantidade)

Bebidas: café (filtrado em filtro de papel), chá, água, suco de fruta

natural, chimarrão.

Vinho – recomendações de 1 a 2 cálices por dia.

Frutas: todas, principalmente: laranja (com bagaço) e outras frutas

cítricas, uva (com casca), goiaba, melancia, abacate (em pequena

quantidade).

Sobremesas: salada de frutas, frutas, gelatinas diet

Geléias diet

Temperos: sal (evitar excessos), picles, ervas aromáticas, vinagre,

alho, cebola, salsa, canela, noz moscada, limão.

Batata Doce, Batata Inglesa, Mandioca - somente 2 vezes na

semana

Use preparações: assadas, cozidas, grelhadas ou refogadas ao invés

de frituras.

80

Recomendações Finais

1. Procure realizar de quatro a seis refeições por dia.

2. Mastigue bem os alimentos em ambiente calmo e tranqüilo, pois

a mastigação facilita a digestão e aciona o mecanismo de

saciedade.

3. Aumente o seu consumo de líquidos, preferencialmente água (6 a

8 copos/dia), pois é necessário com o aumento de fibras.

4. Sucos de frutas devem substituir os refrigerantes (que não

devem ser consumidos), pois são mais saudáveis, hidratam e

fornecem vitaminas ao organismo.

5. Evitar alimentos que contenham: gordura vegetal

hidrogenada ou gordura trans.

Observações:

Livros Grátis
( http://www.livrosgratis.com.br )
 
Milhares de Livros para Download:
 
Baixar livros de Administração
Baixar livros de Agronomia
Baixar livros de Arquitetura
Baixar livros de Artes
Baixar livros de Astronomia
Baixar livros de Biologia Geral
Baixar livros de Ciência da Computação
Baixar livros de Ciência da Informação
Baixar livros de Ciência Política
Baixar livros de Ciências da Saúde
Baixar livros de Comunicação
Baixar livros do Conselho Nacional de Educação - CNE
Baixar livros de Defesa civil
Baixar livros de Direito
Baixar livros de Direitos humanos
Baixar livros de Economia
Baixar livros de Economia Doméstica
Baixar livros de Educação
Baixar livros de Educação - Trânsito
Baixar livros de Educação Física
Baixar livros de Engenharia Aeroespacial
Baixar livros de Farmácia
Baixar livros de Filosofia
Baixar livros de Física
Baixar livros de Geociências
Baixar livros de Geografia
Baixar livros de História
Baixar livros de Línguas

Baixar livros de Literatura
Baixar livros de Literatura de Cordel
Baixar livros de Literatura Infantil
Baixar livros de Matemática
Baixar livros de Medicina
Baixar livros de Medicina Veterinária
Baixar livros de Meio Ambiente
Baixar livros de Meteorologia
Baixar Monografias e TCC
Baixar livros Multidisciplinar
Baixar livros de Música
Baixar livros de Psicologia
Baixar livros de Química
Baixar livros de Saúde Coletiva
Baixar livros de Serviço Social
Baixar livros de Sociologia
Baixar livros de Teologia
Baixar livros de Trabalho
Baixar livros de Turismo
 
 