( PDF ) Estudo do comportamento nociceptivo, por meio dos reflexos auto-limpeza e retirada da cauda, em modelo de ativação periférica e sistêmica de vias trigeminais

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UNIVERSIDADEFEDERALDORIOGRANDEDOSUL

INSTITUTODECIÊNCIASBÁSICASDASAÚDE



PROGRAMADEPÓS‐GRADUAÇÃO EMCIÊNCIASBIOLÓGICAS:NEUROCIÊNCIAS



ESTUDODOCOMPORTAMENTONOCICEPTIVO,PORMEIODOSREFLEXOSDE

AUTO‐LIMPEZAERETIRADADACAUDA,EMMODELODEATIVA ÇÃOPERIFÉRICAE

SISTÊMICADEVIASTRIGEMINAIS



AlexandredaSilveiraPerla



Julhode2007

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Milhares de livros grátis para download.

UNIVERSIDADEFEDERALDORIOGRANDEDOSUL

INSTITUTODECIÊNCIASBÁSICASDASAÚDE



PROGRAMADEPÓS‐GRADUAÇÃO EMCIÊNCIASBIOLÓGICAS:NEUROCIÊNCIAS



ESTUDODOCOMPORTAMENTONOCICEPTIVO,PORMEIODOSREFLEXOSDE

AUTO‐LIMPEZAERETIRADADACAUDA,EMMODELODEATIVA ÇÃOPERIFÉRICAE

SISTÊMICADEVIASTRIGEMINAIS



ALEXANDREDASILVEIRAPERLA



Orientação:PROFA.DRA.MARIABEATRIZCARDOSOFERREIRA



Co‐orientação:PROFA.DRA.MATILDEACHAVALELENA



DissertaçãoapresentadaaoProgramadePós‐graduaçãoemCiênciasBiológicas:

NeurociênciasdaUniversidadeFederal doRioGrandedoSul,comorequisitoparcialparaa

obtençãodotítulodeMestre

nareferidaárea.



Julhode2007



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

DedicoestaDissertaçãoaminhaesposaDéboraeaosmeusamadosfilhos

GabrieleRafael.



Na vida, não existe o caminho certo, nem o

errado. Há sempre dois caminhos a seguir, o mais

simpleseomaiscomplexo.Dependedoquesequeira

aprender.Ofinalésempreomesmo!





AGRADECIMENTOS



 AoPaimaior,quemeproporcionoumaisumaopçãodeaprendizadonessaexistência.



À minha eterna companheira, Débora Fortes Meirelles, pelo amor incondicional,

companheira de todas as horas, que sempre me incentivou e participou da minha vida em

todososmomentos.

Aos meus filhos amados, Gabriel e Rafael,

 meus anjos, por existirem e serem minha

fontedeinspiração.

Aosmeuspais CarloseFrancisca,porteremmeensinadooverdadeirosignificadodas

palavrastrabalho,respeito,dignidadeeéticaequetudoépossívelquandosetemumsonho.

À minha querida amiga e orientadora Professora Maria Beatriz, pelos

ensinamentos,

pelapaciência,pelaamizade,incentivo,confiança,portermeensinadoqueumcaminhodifícil

podeserpercorridosemsofrimento.

À querida Professora Matilde Achaval, minha co‐orientadora, pela amizade e

ensinamentosdespendidos.

Aos meus queridos amigos Dr. Nelson Aspese e Cassandra Borges, pelo apoio e

amizadenashorasmaisdifíceis.



À Professora Liselotte Menke Barea, além de agradecimento, meu mais profundo

respeitoporminhaformaçãodequalidadenaáreadeestudodascefaléias.

AoscolegasdolaboratóriodeNeurobiologia da Dor,especialmente a  Joana, Luciane,

GiovanaeLauren,pelaamizade,companheirismoeauxílionosexperimentos.

Aos colegas do Laboratório de

Histofisiologia Comparada, especialmante a Jocemar,

PatríciaeRafaela,PaulaeÉricapelaamizadeeauxílionosexperimentos.

Aosmeuscolegasmédicosepacientes,pelapaciênciaecompreensãopelasvezesque

deixeideladooexercíciodamedicinaparafazerosexperimentosdessadissertação.

À Universidade Fe deral  do Rio Grande do Sul,

 pelo ensino de excelência que me foi

oferecidoduranteagraduaçãoeapós‐graduação.

AoServiçodeNeurologia doComplexoHospitalarSantaCasaeFFFCMPA,napessoado

ProfessorLuisNelsonFernandes,porminhaformaçãoemNeurologia.

AoServiçodeNeurologiadoHospitaldeClínicasdePortoAlegre,quemeacolheueme

proporcionoucoordenaroAmbulatóriodeCefaléias.

Aosamigos,colegasefuncionáriosdo

DepartamentodeFarmacologia,especialmente

àIedaeàCláudia.

AosProfessoreseFuncionáriosdoProgramadePós‐GraduaçãoemNe urociências,pela

formaçãoproporcionada.

ÍNDICE

Listadeabreviaturas

 09

Listadetabelas

 11

Listadefiguras

 12

Resumo

 16

Abstract

 17

Introdução

 18

1. Nocicepção

2. Modulaçãodador

3. Dorescefálicas

4. Processoinflamatóriovascularneurogênico

5. Fisiopatogeniadasdorescefálicas

6. Dorcefálicaeóxidonítrico

7. Tratamentodasdorescefálicas

8. Modelosexperimentaisparaoestudodascefaléias

8.1. Modelosvascularesinvivoparaestudosfarmacológicos

8.2. Modelosvascularesinvitroparaestudosfarmacológicos

8.3. Modelosneurovascularesparaestudosfarmacológicos

9. Modeloneurovasculardeativaçãotrigeminalporadministraçãode

nitroglicerina,porviasistêmica



10. Dororofacialinduzidaporformalinasubcutânea

Objetivos

 52

1. Objetivogeral

2. Objetivosespecíficos

Materialemétodos

 54

1. Animaisexperimentais



2. Avaliaçõescomportamentais

2.1. Observaçãoemcampoaberto

2.2. Avaliaçãodoreflexoderetiradadacauda(tail‐flick)

2.3. Nocicepçãoorofacialinduzidapelaadministraçãosubcutâneade

formalina



2.4. Modeloneurovasculardeativaçãotrigeminalporadministração

sistêmicadenitroglicerina



3. Tratamentosfarmacológicos

4. Análiseestatística

5. Aspectoséticos

Resultados

 63

Experimento 1: Avaliação de parâmetros comportamentais  e resposta nociceptiva em

ratossubmetidosamodelodedororofacialinduzidaporformalinasubcutânea.

Experimento 2: Avaliação do padrão temporal do reflexo de auto‐limpeza (grooming)

comomedidaindicativadenocicepçãoemratossubmetidosamodelodedororofacial

induzidaporformalina

subcutânea.

Experimento3:Perfildoreflexoderetiradadacauda(tail‐flicklatency)edoreflexode

auto‐limpeza(grooming)apósaadministraçãosistêmicadenitroglicerinacomomodelo

experimentaldecefaléia.



Experimento4:Avaliaçãodomodelodedororofacialinduzidapela formalinaassociado 

aomodeloexperimentaldecefaléia,induzidopelousosistêmicodenitroglicerina.



Discussão

 104

Conclusões

 135

Perspectivas 139

ReferênciasBibliográficas

 142

LISTADEABREVIATURAS



• AAV:anastomosesarteriovenosascranianas

• Ach:acetilcolina

• ANOVA:análisedevariância

• ATP:adenosinatrifosfato

• CGRP:peptídeorelacionadoaogenedacalcitonina

• CIOMS: Conselho para Organizações Internacionais de Ciências Médicas (Council for

InternationalOrganizationsofMedicalScienceseminglês)

• Cl

‐

:cloro

• cm:centímetro(s)

• COBEA:ColégioBrasileirodeExperimentaçãoAnimal

• CREAL:CentrodeReproduçãodeAnimaisdeLaboratório

• DPM:desviopadrãodamédia

• g:grama(s)

• GABA:ácidogama‐aminobutírico

• GMPc:guanosinamonofosfatada cíclica

• GTP:guanosinatrifosfatada

• h:hora(s)

• 5‐HT:serotonina



• IASP:AssociaçãoInternacionalparaoEstudodaDor(InternationalAssociationforthe

StudyofPaineminglês)

• IHS:InternationalHeadacheSociety

• ILAR:InstitutodePesquisasemAnimaisdeLaboratório (InstituteofLaboratoryAnimal

Resourceseminglês)

• i.p.:intraperitoneal

• kg:quilograma

• mA:miliampére(s)

• mg:miligrama(s)

• min:minuto(s)

• ml:mililitro(s)

• mm:milímetro(s)

• NA:noradrenalina

• NaCl:cloretodesódio

• NANC:nonadrenergic,nonconcholinergicneurotransmitters

• NCT:núcleocaudaldotrigêmeo

• NKA:neuroquininaA

• NMDA:N‐metil‐D‐aspartato

• NO:óxidonítrico



• NOS:óxidonítricosintase(nitricoxidesynthaseouNOS,eminglês)

• NPY:neuropeptídeoY

• NTG:nitroglicerina

• PACAP:pituitareadenylatecyclaseactivatingpeptide

• s:segundo(s)

• s.c.:subcutâneo(a)

• SP:substânciaP

• STV:sistematrigeminovascular

• TFL:latênciaderetiradadacauda(tail‐flick

latencyeminglês)

• VIP:peptídeointestinalvasoativo(vasoactiveintestinalpeptideeminglês)

• WDR:neurôniodeamplafaixadinâmica(widedynamicrangeeminglês)

• µl:microlitro(s)

LISTADETABELAS



Tabela 1. Classificação de cefaléias primárias, segundo critérios de International

HeadacheSociety.



Tabela 2. Achados clínicos observados em crises de enxaqueca e suas possíveis

correlaçõesbiológicas.



Tabela3.Modelosemanimaisparaestudodedorescefálicas.

 45

Tabela4.Medidasdosparâmetroscomportamentaisemestudo,obtidasimedi atamente

antesdaadministração subcutânea de solução deformalinaa 5%ousoluçãosalina na

vibrissadireitadosratos,emtestedetail‐flickeduranteaobservaçãoemcampoaberto.



Tabela 5. Latência de retirada da cauda e tempo gasto em auto‐limpeza em campo

aberto,imediatamenteantes(basal)daadministraçãosubcutâneadeformalinaa5%(50

µl)ousoluçãosalina(50µl)navibrissadireitaderatos.



Tabela6.Latência de retiradadacauda e tempogastoemreflexodeauto‐limpezaem

campo aberto, imediatamente antes (basal) da administração intraperitoneal de

nitroglicerina0,05%(10mg/ml)ouveículo(30%deetanol,30%depropilenoglicol,40%

deágua)emratos.



Tabela7.Tempo gastoemreflexodeauto‐limpezaelatência deretiradadacaudaem

campoaberto,imediatamenteantes (basal)daadministraçãosubcutâneadesoluçãode

formalina a 5% (50 µl) ou solução salina (50 µl) na vibrissa direita e da administração

intraperitoneal de ni troglicerina 0,05% (10 mg/ml) ou

veículo (30%  de etanol, 30% de

propilenoglicol,40%deágua),noprimeiro dia daprimeirasemanadeexperimento.



LISTADEFIGURAS



Figura 1. Principais vias  ascendentes nociceptivas de cabeça, região cervical alta (C1,

C2),troncoemembrosatécórtexsomestésico.



Figura2.Viasdosistemacentraldescendentedemodulaçãodador

Figura3.Relaçõesentreviasaferenteseeferentesdosmecanismosdesencadeadorese

neuromoduladoresdedorescefálicas.



Figura4.Viasneuronaisenvolvendoaativaçãotrigeminovasculareoprocessodador

34

Figura5.InflamaçãoNeurogênica.

 36

Figura6.SíntesedeNOendotelial.

 39

Figura7. Caixa  demadeira paraobservaçãoem campoaberto, recobertapor fórmica

(internaeexternamente),medindo50x60x40cmdeprofundidade,comfaceanterior 

devidroeassoalhodivididoem12retângulosde15,0x13,3cm,comlinhasescuras.



Figura8.Padrõescomportamentaisobservadosemcampoaberto.

 57

Figura9.Aparelhodemedidadereflexoderetiradadacauda(tail‐flick).



Figura10.Regiãoorofacialdeadministraçãodeformalina5%subcutâneanorato

Figura 11. Organização geral do experimento 1. Esquema de administração do

tratamentoproposto (agente irritanteousolução controle) etemposde medidasdos

parâmetroscomportamentaisemestudo.



Figura12.Latênciaderetiradadacaudaimediatamenteantes(basal)eapós(30minou

24h)aadministraçãosubcutâneadesoluçãodeformalinaa5%(50µl)ou salina(50µl),

navibrissadireitadosratos.



Figura 13. Número de cruzamentos em campo aberto antes (basal), imediatamente

após(0min)edepoisde15mine24hdaadministraçãosubcutâneadeforma linaa 5% 

(50µl)ousoluçãosalina(50µl)navibrissadireitadosratos.



Figura14.Númeroderespostasdeorientaçãoemcampoabertoantes(basal)eapós(0 69

min,15minou24h)aadministraçãosubcutâneadeformalinaa5%(50µl)ousolução

salina(50µl)navibrissadireitadosratos.



Figura15.Tempogastoemreflexodeauto‐limpeza(grooming)emcampoabertoantes

(basal)eapós(0min,15minou24h)aadministraçãosubcutâneadeformalinaa5%

(50µl)ousoluçãosalina(50µl)navibrissadireitadosratos.



Figura 16. Tempo gasto em reflexo de auto‐limpeza no campo aberto, durante

observação realizada nas primeiras 4 horas após a administração subcutânea de

formalinaa5%(50µl)ousoluçãosalina(50µl)navibrissadireitadosratos.



Figura17.Tempogastonocomportamentodeauto‐limpezaemcampoaberto,medido

antes (basal)  e após 24 h, 48 h, 7 dias e 14 dias da administração subcutânea de

formalinaa5%(50µl)ousoluçãosalina(50µl)navibrissadireitadosratos.



Figura 18. Latência  do reflexo de retirada da cauda (tail‐flick latency) imediatamente

antes (basal) e em diferentes momentos durante as primeiras 4 horas seguintes à

administraçãosubcutâneadeformalinaa5%(50µl)ousoluçãosalina(50µl)navibrissa

direitadosratos.



Figura19.Latênciade reflexoderetiradadacaudaimediatamenteantes(basal),24h,

48h,7e14diasapósaadministraçãosubcutâneadeformalina a5%(50µl)ousolução

salina(50µl)navibrissadireitaderatos.



Figura 20. Organização geral do experimento 3. Esquema de administração do

tratamento proposto (nitroglicerina ou veículo) e mensuração dos parâmetros

comportamentaisemestudo.

Figura 21. Tempo gasto em comportamento de auto‐limpeza (grooming) no campo

aberto, imediatamente antes (basal) e após 5  min, 30 min, 1 h, 2 h e 4 h da

administraçãointraperitonealdenitroglicerinaa0,05%(10mg/kg)ouveículo.



Figura 22. Tempo gasto em comportamento de auto‐limpeza (grooming) no campo

aberto, imediatamente antes (basal) e após período mais prolongado  de observação

(24 h e 48 h), a partir da administração intraperitoneal de nitr oglicerina a 0,05% (10

mg/kg)ouveículo.



Figura23.Latênciaderetiradadacauda(tail‐flicklatency)imediatamenteantes(basal),

depoisde30 mineapósperíodomaisprolongadodeobservação(24he48h),apartir

da administração intraperitoneal de nitroglicerina a 0,05% (10 mg/kg) ou veículo em

ratos.



Figura 24. Organização geral do experimento 4. Esquema de administração dos

tratamentospropostoseaferiçãodosparâmetroscomportamentaisemestudo.



Figura 25. Tempo gasto em comportamento de auto‐limpeza (grooming) em campo

aberto,nosperíodosbasaisdeavaliação,duranteastrêssemanasdeexperimento.



Figura 26. Tempo gasto em comportamento de auto‐limpeza (grooming) em campo

aberto, 15 minutos após a  administração dos tratamentos propostos, durante as três

semanasdeexperimento.



Figura 27. Tempo gasto em comportamento de auto‐limpeza (grooming) em campo

aberto, 30 minutos após a  administração dos tratamentos propostos, durante as três

semanasdeexperimento.



Figura 28. Tempo gasto em comportamento de auto‐limpeza (grooming) em campo

aberto,120minutosapós aadministraçãodostratamentospropostos,duranteastrês

semanasdeexperimento.



Figura 29. Tempo gasto em comportamento de auto‐limpeza (grooming) em campo

aberto,240minutosapós aadministraçãodostratamentospropostos,duranteastrês

semanasdeexperimento.



Figura 30. Tempo gasto em comportamento de auto‐limpeza (grooming) em campo

aberto, 24 horas após a administração dos tratamentos propostos, durante as três

semanasdeexperimento.



Figura 31. Tempo gasto em comportamento de auto‐limpeza (grooming) em campo 95

aberto, 48 horas após a administração dos tratamentos propostos, durante as três

semanasdeexperimento.



Figura32. Latência  deretirada dacauda (tail‐flick)noperíodo prévioàadministração

dostratamentospropostos(basal),duranteastrêssemanasdeexperimento.



Figura 33. Latências de retirada da cauda (tail‐flick) obtidas 15 minutos após a

administraçãodostratamentospropostos,duranteastrêssemanasdeexperimento.



Figura 34. Latências de retirada da cauda (tail‐flick) obtidas 30 minutos após a

administraçãodostratamentospropostos,duranteastrêssemanasdeexperimento.



Figura 35. Latências de retirada da cauda (tail‐flick) obtidas 120 minutos após a

administraçãodostratamentospropostos,duranteastrêssemanasdeexperimento.



Figura 36. Latências de retirada da cauda (tail‐flick) obtidas 240 minutos após a

administraçãodostratamentospropostos,duranteastrêssemanasdeexperimento.



100

Figura37.Latênciasderetiradadacauda(tail‐flick )obtidas24hapósaadministração

dostratamentospropostos,duranteastrêssemanasdeexperimento.



101

Figura38.Latênciasderetiradadacauda(tail‐flick )obtidas48hapósaadministração

dostratamentospropostos,duranteastrêssemanasdeexperimento.



102

Figura39.Pesocorporaldosanimaisduranteastrêssemanasdeexperimento.



Figura 40. Ativação  do Sistema Trig eminovascular durante dor de cabeça e sua

interaçãocomtálamo,hipotálamo,troncoeSistemaNervosoVegetativo



Figura41.Viasnociceptiva sdaregiãodacabeçaecervicalalta

Figura42.Viasnociceptiva sdaregiãodotroncoemembros

103

105

116

117

RESUMO



As regiões orofacial e craniana são densamente inervadas pelo nervo trigêmeo e suas

ramificações.Condiçõespatológicas,comocefaléiasedoresorofaciais,têmsuafisiopatogenia

relacionadaaofuncionamentodosistematrigeminal.Existempoucosmodelosexperimentais

deavaliaçãocomportamentalparaestudodanocicepçãomediada pelo nervo trigêmeo. Essa

dissertação teve por

 objetivo realizar estudos comportamentais sobre a modulação da

nocicepçãomediada por vias  trigeminais, em modeloanimalcorrelacionávelcomosquadros

de dores orofaciais e cefálicas em seres humanos. Para tal, foi promovida a ativação do

sistema trigeminovascular de modos periférico (dor orofacial induzida por formalina) e

sistêmico (modelo neurovascular de

ativação sistêmica por administração de nitroglicerina).

Apósessaativação,avaliaram‐secomportamentosdeauto‐limpeza,motricidadeeorientação

espacial,emcampoaberto,erespostareflexaaestímulonociceptivo,pormeiodamedidade

latência de retirada da cauda. Entre as respostas comportamentais avaliadas, o tempo

despendido em reflexo de auto‐limpeza

 foi considerado o parâmetro representativo da

respostanociceptivanomodelodedororofacialinduzidapelaformalina.Aadministraçãode

nitroglicerina,porsisó,nãofoicapazdepromoveralteraçõescomportamentaissugestivasde

atividade nociceptiva. A medida de latência de retirada da cauda não foi capaz de aferir

alteraçõesnociceptivaspotencialmente

desencadeadaspelosdoismodelosempregadosnessa

Dissertação.Naassociaçãodessesdoismodelos,observou‐sequeanitroglicerinafoicapazde

promoverredução dotempogasto noreflexode auto‐limpeza desencadeado pelaformalina

administrada por via subcutânea. É possível que a nitroglicerina participe modulando e/ou

ativandoosmecanismosenvolvidosnanocicepção

trigeminal,porémmaisestudosnecessitam

serrealizadosparadelinearmelhorsuaaçãonesseprocesso.

ABSTRACT



The orofacial and cranium regions are densely innervated by the trigeminal nerve and their

branches. Pathological states asheadache and orofacial pain have their pathogenesis related

tothetrigeminalfunctions.Therearefewexperimentalmodelsforbehavioralevaluationofthe

nociception mediated 

by the trigeminal nerve. The present work aimed to study the

behavioral parameters related to the modulation of trigeminal system, using an animal

model capable of simulating orofacial and cephalic pain in human beings. Afterwards, it

was performed the

 activation of trigeminovascular system using regional (through the

orofacial formalin test) and/or systemic models (through intraperitoneal administration of

nitroglycerine). In open field, it wasevaluated grooming,crossing,andrearingbehaviors. In

tail-flick test, it was evaluated the nociceptive response to the noxious stimulus. In the

present study

, grooming was considered the representative beh avior  of the nociceptive

response

inthe orofacial painmodel (induced by formalin).Nitroglycerinewasnotcapable

determine behavioral changes that suggest nociception reactionin the open field.The

tail‐flick latency

did not detect potential nociceptive effects occurred in the evaluated

models. In the association of the two models of regional and systemic trigeminal

activation

, nitroglycerine reversed the increase of grooming induced by the subcutaneous

administration

of formalin. The result suggests that nitroglycerine could act modulating

and/or activating mechanisms involved in the trigeminal nociception.

 However, more

studiesareneed

ed.



Introdução

Doréumadasgrandespreocupaçõesdahumanidade.Desdetemposmais remotos,o

homembuscaesclarecersua ocorrência, bemcomoestabelecer medidaseficazes destina das 

ao seu controle. É definida  como uma experiência sensorial e emocional desagradável,

relacionada com dano  tecidual real ou potencial, ou descrita em termos deste tipo de dano



(Turk e Okifuji, 2001). Existem, assim, dois componentes a serem considerados: a sensação

dolorosapropriamenteditaounocicepção

eareatividadeàdor.

Nocicepção é a resposta neural a estímulos traumáti cos ou lesivos. Refere‐se à

atividade do sistema nervoso aferente induzida por estímulos nocivos, tanto exógenos

(mecânicos, químicos,  físicos e biológicos), quanto endógenos (inflamação, aumento de

peristaltismo, isquemia tecidual). Compreende a recepção dos estímulos por estruturas

periféricasespecíficas,sua conduçãoaté o

sistema nervosocentral, atravésdevias nervosas

sensitivas,eaintegraçãodasensaçãodolorosaemníveistalâmicoecortical(ByerseBonica,

2001;ChudlereBonica,2001;TermaneBonica,2001).

A reação à dor compreende uma série de comportamentos defensivos‐desde a

retirada reflexa da área afetada, para longe

do fator agressor, até as respostas emocionais

complexas, expressas por padrões de comportamento inatos e aprendidos e sensações

subjetivasdedesconfortoesofrimento.Areatividadeemocionalcorrespondeàinterpretação

afetiva da dor, de caráter individual e influenciada por estados ou traços psicológicos,

experiênciaspréviasefatoresculturais,sociaiseambientais(Jones,

1993;Taenzeretal.,1986;

Wall e Melzack, 1994). Esses fatoressão capazes de filtrar, modular oudistorcer a sensação

dolorosa, de modoque a resposta à dor pode variar marcadamente de umindivíduo para o

outro,assimcomoemummesmoindivíduo, emmomentosdiferentes,apesardea nocicepção



serigual(ChapmaneTurner,2001;LeResche,2001).

Adoréchamadadecrônicaquandoperduraporlongoperíodo detempo,comumente

portrêsmesesoumais,emboratalpontodecortesejaarbitrário (JacobsoneMariano,2001;

Morgan e Mikhail, 1996; Turk e Okifuji, 2001). Outra definição encontrada na

literatura,

também ambígua, caracteriza a dor crônica como aquela cuja duração se estende além do

períodoesperadoderesoluçãodoinsultonociceptivo(FerreiraePerla,2007).

Dorcrônicacausadaporinjúriaoudoençaéumadasprincipaiscausasdesofrimento

humano.Postula‐sequemudançasdelongaduraçãonassinapsessensoriais,em

váriosníveis

dosistemanervosocentral,estejamenvolvidasnasuagênese(KoeZhuo,2004).

A dor crônica representa por si só uma doença, com etiologia, mecanismos,

sintomatologia,condutasdiagnósticaeterapêutica diferentes  dadoraguda(FerreiraePerla,

2007).Nos dias dehoje, écrescente suaocorrência, possivelmenterelacionada

ahábitos de

vida atuais, longevidade, prolongamento da sobrevida dos indivíduos com doenças

naturalmente fatais e modificações ambientais. Além disso, há maior reconhecimento de

novas patologias dolorosas, bem como aplicação de novos conceitos que traduzam seu

significado(MailisePapagapiou,1993).

Dorcrônica,alémderepresentarestressorfísicoeemocionalsignificativo,

tantopara

o paciente, quanto para seus familiares, determina alto custo econômico e social. Com

freqüência,está associada atranstornos psiquiátricos,como ansiedadee depressão, embora

relaçãocausalnão estejaestabelecida . Em cerca de5%dosindivíduos,hápobrerespostaao

tratamento,emquadrodegrande importânciadevidoàssuas

gravesrepercussõesindividuais

esociais(DrayeUrban,1996).



1. NOCICEPÇÃO

A percepção de estímulos nocivos acontece pela ativação de receptores sensoriais

especializados‐osnociceptores‐localizadosemquasetodooorganismo(BasbaumeJessell,

2000). Os nociceptores constituem a porção terminal periférica de fibras  que conduzem os

potenciais de ação

propagados até o corno dorsal da medula espinhal e porção caudal do

nervo trigêmeo. Tais fibras são os axônios de célula s sensoriais primárias, conhecidas como

neurôniosaferentesprimários,localizadasemgângliodorsaldamedulaespinhalenogânglio

trigeminal(GângliodeGasser).Cadaneurôniotemumúnicoaxônioquesebifurca,demodo

que uma extremidade termina em tecidos  periféricos e a outra, dentro do corno posterior

(dorsal) da medula espinhal ou na porção cervical do núcleo sensitivo do nervo trigêmeo.

Assim,o impulsodoloroso captadona periferia dirige

‐seinicialmente para ocorpo celulare,

após, vai ao corno dorsal da medula espinhal,  ou ao seu correspondente núcleo sensitivo

caudal trigeminal (Basbaum e Jessell, 2000; Byers e Bonica, 2001; Morgan e Mikhail, 1996;

Messlingeretal.,2006).

As fibras que transmitem o estímulonocivo sãode doistipos

‐Aδ e C. As primeiras,

mielinizadas e com maior velocidade de condução, contribuem para a percepção da dor de

forma rápida, enquanto as fibras C, não‐mielinizadas e com menor velocidade de condução,

relacionam‐seprincipalmentecomadordecaráterdolente(BasbaumeJessell,2000;Byerse

Bonica,2001;

MorganeMikhail,1996).

Nocornodorsaldamedulaespinhalenonúcleosensitivocaudaltrigeminal,asfibras

nervosas dos neurônios aferentes primários fazem sinapse com neurônios secundários, que

dão origem às vias ascendentes de condução da dor. Os axônios dos neurônios  secundários

cruzamalinha médiaeascendempelo

tratoespinotalâmicocontralateral.Asfibrastrigeminais

ascendem por meio do trato trigeminotalâmico (Messlinger et al, 2006). Além das sinapses

comneurôniosdesegund aordem,osneurôniosaferentesprim ários podemfazersinapsecom

interneurônios,neurôniossimpáticoseneurôniosdocornoventralmotor(MorganeMikhail,

1996;TermaneBonica,2001).

Os

neurôniossecundáriospodemserdedoistipos‐especificamentenociceptivosou

defaixaampla(widedynamicrangeouWDReminglês).Osprimeirosrelacionam‐seapenasa

estímulos nocivos, enquanto os segundos também recebem aferência não‐nociceptiva de

fibras Aβ, Aδ e C. Os neurônios especificamente nociceptivos estão arranjados

somatotopicamente

 na lâmina I do corno dorsal, são  normalmente silentes e respondem

apenas à estimulação nociva de alto limiar. Os neurônios de ampla faixa constituem o tipo

celularpredo minantenocorno dorsal,sendomaisabundantesnalâminaV.Emcondiçõesde

injúriagraveoupersistente, as fibrasCdisparamrepetidamente,e a respostadosneurônios

do corno dorsal aumenta progressivamente, de forma gradual, em um fenômeno conhecido

comowind‐up(ChudlereBonica,2001;MorganeMikhail,1996;

TermaneBonica,2001).

Háduasviasprincipaisdeconduçãodador.Contidasnotratoespinotalâmico,ambas

partemdamedulaespinhal,cruzamalinhamédia(aoníveldacomissuraanterior)echegam

ao tálamo. O trato espinotalâmico lateral (ou vianeoespinotalâmica), de aparecimento mais

recentenocursodaevoluçãobiológica, 

tempoucasestações sinápticaseseprojetanonúcleo

ventral póstero‐lateral do tálamo, cujos neurônios recebem o nome de terciários. O trato

trigeminotalâmico,demaneiraanáloga aotrato espinotalâmico,partedonúcleosensitivodo

trigêmeo, atravessa a linha média e ascende até o tálamo (núcleo ventral póstero‐medial

(Messlinger et

 al., 2006). A partir do tálamo, as projeções dirigem‐se para o córt ex

somatossensorial primário, onde ocorre a percepção da dor (Figura 1). Esses tratos 

relacionam‐se com os aspectos discriminativos da dor, como localização, intensidade e

duração. Observa‐se estreita relação topográfica entre a área estimulada na periferia e

 as

regiões talâmicas e corticais ativadas, ou seja, há somatotopia. Isto contribui para que o

indivíduo saiba precisarcomexatidão oponto deorigemda dorem um trauma (Bearet al.,

1996;ChudlereBonica,2001;MorganeMikhail,1996;Termane Bonica,2001).



Figura 1.Principais vias ascendentesnociceptivas decabeça, região cervical alta (C1,

C2),troncoemembrosatécórtexsomestésico(Pacák&Palkovits,2001;Messlinger,2006).



Otratoespinotalâmicomedial(ouviapaleoespinotalâmica)émaisantigonaescalade

evolução. Ao contrário do trato

lateral, tem várias estações sinápticas. A partir da medula

espinhal,projeta‐separaotálamomediale,daí,difusamenteparaocórtexcerebraldeambos

oshemisférioscerebrais.Perde‐se,assim,asomatotopiadosestímulospercebidos.Projeta‐se

tambémparaasubstânciacinzentaperiaquedutal,oquepoderepresentarimportanteligação

entre

 vias ascendentes  e descendentes da dor. Fibras colaterais do trato medial alcançam o

sistemareticularativadorehipotálamo,sendoresponsáveispelarespostadealertaobservada

ESTÍMULO NOCICEPTIVO

TÁLAMO

(NÚCLEO VENTRAL

PÓSTERO-MEDIAL)

TRATO

TRIGEMINOTALÂMICO

CÓRTEX SOMATOSSENSITIVO

(GIRO PÓS-CENTRAL – ÁREA 1)

ATIVAÇÃO DE FIBRAS NOCICEPTIVAS

AFERENTES TIPO Aδ e C

NEURÔNIOS

DO NÚCLEO

CAUDAL DO

TRIGÊMEO

ATIVAÇÃO

EXCITATÓRIA

NEURÔNIOS

DO CORNO

DORSAL DA

MEDULA

ESPINHAL

MEMBROS

TRONCO

CABEÇA e

REGIÃO CERVICAL

ALTA (C1-C2)

TRATO

ESPINOTALÂMICO

LATERAL

TÁLAMO

(NÚCLEO VENTRAL

PÓSTERO-LATERAL)

emassociação à  presença de dor.Suaprojeção paraestruturas dochamado sistemalímbico

explicaoaparecimentodasrespostasemocionaisdesagradáveis(Bearet al.,1996;Chudlere

Bonica,2001;MorganeMikhail,1996;TermaneBonica,2001).Devidoàsmúltiplasestações

sinápticas,aviapaleoespinotalâmicaéaquemaisse

prestaàinfluênciamoduladoradeoutros

sistemascentrais(Bearetal.,1996;ChudlereBonica,2001;TermaneBonica,2001).



2. MODULAÇÃODADOR

Atransmissãodeestímulosnocivosdesdeaperiferiaatéoscentroscerebraisnãoéum

processo linear. Circuitos emdiferentes níveis têm a capacidade de alterar

 marcadamente a

passagemdosimpulsose,portanto,a respostaàestimulaçãonociva.Obalanço da atividade

entrecircuitosexcitatórioseinibitórios determinaráquaisserãoasinformaçõesquechegarão

ao cérebro. A modulação da dor pode ocorrer perifericamente, em medula espinhal  e

estruturas supra‐espinhais. Esta modulação pode  ser inibitória ou

facilitatória (Figura

2)(ChudlereBonica,2001;Millan,2002;Morgan eMikhail,1996;TermaneBonica,2001).

A modulação periférica se expressa por meio do fenômeno de sensibilização. Após

estimulação repetida, os nociceptores podem apresentar resposta aumentada a estímulos

nocivosouadquirirresponsividademaioraquaisquerestímulos,incluindoosnão‐nocivos.

A diminuição do limiar de dor, chamada de hiperalgesia, pode ser gerada por

sensibilizaçãoperiférica,comativaçãodenocicepto r es(BasbaumeJessell,2000;Levineetal.,

1986, 1984, 1993; Markenson, 1996) ou de segundos mensageiros (Taiwo e Levine, 1989,

1991). Mediadores liberados pelo tecido lesado, como prostaglandina E2, prostaciclina,

adenosina,bradicinina,

potássioeserotonina(5‐HT),podematuardiretamentenonociceptor,

ativando‐o e produzindo hiperalgesia primária (Basbaum e Jessell, 2000; Cesare e

McNaughton,1997).

O nociceptor produz substância P e CGRP (peptídeo relaci onado ao gene da

calcitonina).Asubstância Pliberadaageemmastócitos,liberandohistamina.Esta,porsuavez,

excita diretamente o nociceptor e provoca extravasamento  de CGRP para o plasma. Há

vasodilatação, edema e liberação adicional de bradicinina,  sensibilizando ainda mais o

nociceptor. Isto caracteriza a  hiperalgesia secundária (Basbaum e Jessell, 2000; Cesare e

McNaughton,1997).



Figura2.Viasdosistemacentraldescendentede modulação dador.Oponto central

das sinapses é a  substância cinzenta periaquedutal. É ativada por aferências hipotalâmicas,

córtex frontal e sistema límbico. Também recebe aferências medulares. Neurônios

glutamatérgicos excitatórios da substância cinzenta (vermelhos) fazem com nexão com os 

neurôniosserotoninérgicosdonúcleodarafeenoradrenérgicos dolocuscoeruleus(ambosem

azul). Seus  axônios sequem pelo trato dorsolateral e terminam direta ou indiretamente nos

neurônios de projeção que conduzem a dor, bloqueando a transmissão do impulso

nociceptivo.(AdaptadodeSchünkeetal.,2007)



Apósestimula çãoprolongada,ahiperalgesia podepersistir,mesmoquandocessama

respostainflamatóriaeador.Nestecaso,diantedeumestímulo,mesmoleve,serestabelece

o estado hiperalgésico anterior, fenômeno denominado de “memória periférica da dor”.

Estadoshiperalgésicostambémpodemsercausadosporsensibilizaçãocentral,fenômenoem

que os

neurônios nociceptivos do corno dorsal da medula espinhal têm sua sensibilidade

aumentadaàestimulaçãosensorial(Chudlere Bonica,2001;TermaneBonica,2001).

No que se referem à modulação central, diversos mecanismos contribuem para o

fenômenodesensibilizaçã oemmedulaespinhal,sendo,portanto,facilitadoresdador.Estudos

têm demonstrado que dano

 tecidual pode causar expansão dos campos receptivos e

diminuiçãonolimiardeexcitabilidadedosneurôniosdocornodorsaldamedula,fazendocom

que pequenos estímulos passem a desencadear respostas exageradas (alodinia), dor com

estímulossubliminares(hiperalgesia)ouatémesmodorespontânea(ChudlereBonica,2001;

TermaneBonica,2001).Tal

mecanismocontribuiriaparadorescrônicas,comoadomembro 

fantasma, em que, mesmo após  amputação, o paciente se queixa de dor com locali zação e

intensidade similares às apresentadas antes da cirurgia (Chudler e Bonica, 2001; Marbach,

1996;TermaneBonica,2001).Osmediadoresneuroquímicosenvolvidoscomofenômenode

sensibilização central

 incluem substância  P, VIP, colecistocinina, angiotensina,  galanina,

glutamatoeaspartato.

A modulação central inibitória da dor pode se ocorrer por meio de mecanismos

existentes no próprio segmento medular que recebe os impulsos ou da atividade de vias

descendentes (com origem supra‐espinhal) (figura 2). O sistema modulador supra‐espinhal

provavelmente

mais conhecido tem origem na substância cinzenta periaquedutal (região

ventro‐lateral),ondemecanismosinibitóriosencefalinérgicoseadrenérgicoscontribuempara

a modulação central da dor. Estimulação elétrica e administração local de morfina naquela

estruturaproduzemmarcadaanalgesia,tantoemanimaisquantoemsereshumanos(Chudler

e Bonica, 2001; Pleuvry e Lauretti, 1996; Terman e Bonica, 2001). Da substância cinzenta

periaquedutal partemfibras parao bulbo,especificamentepara onúcleomagno darafe ea

formação reticular bulbar, e daí originam‐se fibras descendentes que percorrem o funículo

dorsolateraldamedula,terminandonalâminaIIdocorno

dorsaldamedula(ChudlereBonica, 

2001; Terman e Bonica, 2001). As vias inibitórias adrenérgicas partem primariamente de

substância cinzenta periaquedutal e formação reticular. Vias serotoninérgicas partem do

núcleo magno da rafe e dirigem‐se para o corno dorsal através do funículo dorsolateral. O

sistemaopióideendógenotemorigemprimariamente

emformaçãoreticularenúcleomagno 

da rafe, com liberação de encefalinas, que atuam pré‐sinapticamente, hiperpolarizando

neurônios aferentes  primários na medula espinhal e inibindo a liberação de substância  P.

Também parece haver inibição pós‐sináptica por opióides (figura 2)(Chudler e Bonica, 2001;

TermaneBonica,2001).

Ainibiçãosegmentarde

estímulosnociceptivostevecomobaseateoriadoportãode

MelzackeWall(1965).Estesautorespropuseramaexistênciadeumsistemadecontroleem

medulaespinhalquemodulariaosimpulsosvindosdapele,antesquehouvessepercepçãoe

resposta à dor. Nesse contexto, os neurônios encefalinérgicos encontrados na lâmina

II da

medula espinhal (interneurônios) seriam o equivalente neuro‐humoral do conceito

neurofisiológicodacomportaespinhaldadorpropostoporaquelesautores(ChudlereBonica,

2001;TermaneBonica,2001).

Neurônios encefalinérgicos exercem papel fisiológico inibitório, modulando a

informação em nível  de primeira sinapse central. A inibição da atividade de neurônios



medulares de segunda ordem e do trato espinotalâmico,  por meio da ativação de fibras

aferentesdemaiordiâmetrorelacionadasàsensaçãoepicrítica,segueomodelodateoriado

portãoeexplica comoaestimulação mecânicapode aliviarador.Friccionar,por exemplo, o

cotovelo imediatamente após um traumatismo leve reduz

a dor. De forma similar, a

estimulaçãonocivaemáreasnãocontíguasdoorganismoinibeneurôniosdesegundaordem

em vários níveis da medula, de modo que a presença de dor em uma região do organismo

tendeainibiroseuaparecimentoemoutrasregiões(ChudlereBonica,2001;TermaneBonica,

2001).

Os aminoácidos glicina e ácido gama‐aminobutírico (GABA), que atuam como

neurotransmissores inibitórios, parecem exercer importante papel

 na inibição segmentar da

dor.OGABAéconsideradooprincipalneurotransmissorinibitóriodosistemanervosocentral.

Em nível de medula espinhal, sua atuação se faz por meio de receptores GABA

 e GABA

B.

O

canaliônicoassociadoaoreceptorGABA

éseletivoparaíoncloreto.QuandoGABAseligaao

seu receptor, o influxo de Cl

‐

 faz com que a célula se hiperpolarize (Waxham, 1999). 

Picrotoxina,umpotenteantagonistaGABA

,pareceseligardentrodocanal,impedindoofluxo

deCl

‐

paradentro dacélula (Waxham, 1999).QuantoaosreceptoresmetabotrópicosGABA

,

sua ativação aumenta a condutância da membrana celular ao potássio, tornando a

despolarização mais difícil. A ativação de receptores de glicina, por sua vez, aumenta a

condutância da membrana ao cloro. A ação da glicina é mais complexa que a do GABA por

também ter efeito facilitatório sobre receptores glutamatérgicos

 de tipo NMDA (N‐metil‐D‐

aspartato)(Bormann,1988).

Outroimportantesistemadeneurotransmissoresenvolvidonamodulaçãoinibitória da

doréo sistema opióide.Osopióides endógenos,quecompreendemendorfinas, dinorfin ase

encefalinas,seligamcomgrandeafinidadeareceptoresespecíficos.Estespodemserdetrês

tipos: mu, delta e

 kappa. Em neurônios da medula espinhal,  seu efeito predominante é

diminuirodisparoneuronal.Aligaçãoemreceptorespré‐sinápticosfazcomquealiberaçãode

neurotransmissoresenvolvidosnasviasdador sejareduzida.Aestimulaçãodereceptorespós‐

sinápticosinibeaneurotransmissãoporproduzirhiperpolarizaçãoereduzir,assim,a

atividade

evocada. Um terceiromecanismo envolve a inibição de  determinado neurônio, que, por sua

vez, inibe um neurônio inibitório. Uma  vez que a inibição do neurônio inibitório não está

ocorrendo,estepodeserativadoeexercerseupapel nacircuitarianeuronal(ChudlereBonica,

2001;GutsteineAkil,2001;Marshetal., 1997;TermaneBonica,2001).



3. DORESCEFÁLICAS

As dores cefálicas (cefaléias ou dores de cabeça) constituem entidade clínica

conhecidahámuitoséculos.Jáeramreferidasnas

culturasmaisantigas.Egípcios,conformeos

manuscritos médicos do Papiro de Ebers (encontrado em Tebas e datado de 1550 a.C.),

Hipócrates, Galeno e manuscritos gregos já faziam referência a essa queixa extremamente

comumnapopulação(WaebereMoskowitz,2003).

O termo  cefaléia engloba dores de diferentes tipos, a maioriade caráter

 benigno. O

sistemadeclassificaçãoedefiniçãopropostoporInternationalHeadacheSociety(IHS),emsua

segunda edição (Headache Classification Subcommittee of the IHS, 2004), embora não seja

perfeito,éatualmenteomaisaceito,pelomenosparapropósitosdepesquisa(Welch,2001).

Dentreasdoresdecabeça,sãomaisfreqüentesas

dotipotensional,masenxaquecassãomais

dolorosas e mais vezes condicionam a procura por atendimento médico (Ferreira e Perla,

2007).

Aimportância doestudo das cefaléiasrelaciona‐se ao considerável impacto que traz

nosâmbitospessoal,socioculturaleeconômico(WaebereMoskowitz,2003).

Na tabela 1, são apresentados tipos e

 subtipos de cefaléias primárias (Headache

ClassificationSubcommitteeoftheIHS,2004).



Tabela 1. Classificação de cefaléias primárias, segundo critérios de International

HeadacheSociety(HeadacheClassificationSubcommitteeoftheIHS,2004).



1.Migrânea(enxaqueca)

1.1.Migrâneasemaura(comumouhemicraniasimples)

1.2.Migrâneacomaura(clássica)

 1.2.1.Auratípicacomcefaléiamigranosa

 1.2.2.Auratípicacomcefaléianão‐migranosa

 1.2.3.Auratípicasemcefaléia

 1.2.4.Migrâneahemiplégicafamiliar

 1.2.5.Migrâneahemiplégicaesporádica

 1.2.6.Migrâneadotipoba silar

1.3.

Síndromesperiódicasdainfânciaquesãoprecursorasfreqüentesdemigrânea

 1.3.1.Vômitocíclico

 1.3.2.Migrâneaabdominal

 1.3.3.Vertigemparoxísticabenignadainfância

1.4.Migrânearetiniana

1.5.Complicaçõesdamigrânea

 1.5.1.Migrâneacrônica

 1.5.2.Estadomigranosa(enxaquecoso)

 1.5.3.Aurapersistenteseminfarto

 1.5.4.Infartomigranoso(enxaquecoso)

 1.5.5.

Crisesdesencadeadaspormigrânea

1.6.Provávelmigrânea

 1.6.1.Provávelmigrâneasemaura

 1.6.2.Provávelmigrâneacomaura

 1.6.3.Provávelmigrâneacrônica

2.Cefaléiatipotensional

3.Cefaléiaemsalvaseoutrastrigeminalgiasautonômicas

4.Outrascefaléiasprimárias

___________________________________________________________________

Dentreasdoresdecabeçadeetiopatogeniavascular,amigrânea(ouenxaque ca)nãoé

apenas um dos tipos mais comuns de cefaléia, mas, também, uma síndrome neurológica.

Caracteriza‐se pela presença de dores de cabeça recorrentes, unilaterais ou bilaterais,

geralmente decaráter pulsátil, comintensidade moderada a intensa, precedi das ou não

 por

sinais neurológicos focais denominados de aura. Usualmente acompanham‐se de náuseas,

vômitos,fonofobia e fotofobia. As crises podem perdurar por 4 a 72 horas. Alguns sintomas

premonitórios podem aparecer horas  ou dias antes da cefaléia, incluindo anore xia,

hiperatividade,depressão,irritabilidade,bocejosrepetidos,dificuldadesdememória,desejos

poralimentosespecíficos

esonolência(Schoen,1997;Silbersteinetal,1997,2001).

Quando ocorrem crises em 15 ou mais dias  do mês, durante mais de 3 meses, na

ausência de abuso de medicação, a migrânea é denominada de crônica. Essa situação pode

causarincapacitaçãopeladoreafetaraexecuçãodeatividadesdiárias

eaqualidadedevida

(HeadacheClassificationCommitteeoftheInternationalHeadacheSociety,2004).



4. PROCESSOINFLAMATÓRIOVASCULARNEUROGÊNICO

Hámais deumséculo,foi observadoquea a tivação deneurôniosdo gânglio daraiz

dorsalresultaemsinais inflamatóriosevasodilatação,sugerindoqueessascélulasnãoapenas

conduzem informações

aferentes à medula, como também podem apresentar função

eferente: a  fibra sensitiva conduz nos dois sentidos (Bayliss, 1901). Hoje, sabe‐se que a

ativação sensitiva axonal reflexa leva à liberação de neurotransmissores (nonadrenergic,

noncholinergic neurotransmitters – NANC) na periferia, contribuindo para aquelas

manifestaçõesinflamatóriasevasculares(Lundberg,1996).

Neurôniosdo

cornodaraizdorsaldamedulapodemapresentaratividadeortodrômica

eantidrômica.Nãosóconduzemestímulosaferentes(atividadeortodrômica),comotambém

sãocapazesdeapresentarfunçõeseferentes(atividadeantidrômica).Aativaçãodeterminais

periféricos de nervos sensoriais, por meio de despolarização local,  é capaz de liberar

substânciasbioativas,pormeiodereflexoaxonaloureflexodaraizdorsal.Essa ssubstância s,

por sua vez, atuam na periferia, em células‐alvo como mastócitos, células imunes e células

vasculares de músculos lisos, produzindo inflamação. O processo é caracterizado por

hiperemia local (secundária à vasodilatação local), edema (secundário ao extravasamento

plasmático)

 e hipersensibilidade (secundária a alterações na excitabilidade de neurônios 

sensoriais). Esse fenômeno é denominado de “inflamação neurogênica”, que resulta  da

liberaçãode substânciasdeterminais nervosossensoriaisprimários (Bayliss,1901;Durnett e

Vasko,2002).



5. FISIOPATOGENIADASDORESCEFÁLICAS 

Omesmofenômenodeativaçãoantidrômicoobservadoemgângliodaraiz

dorsalda

medula espinhal pode ser evidenciado em meninges e seus vasos. A relação  funcional das

fibras trigeminais com os vasos deu origem à expressão “sistema trigeminovascular”

(Moskowitz,1984).Afisiopatogeniadasdorescefálicasdeetiologiavascular,comoenxaqueca

ecefaléiaemsalvas,estáassociadaàativaçãodefibrasaferentes

primáriasqueinervamva sos

sangüíneos cefálicos ou meníngeos do cérebro, relacionados ao sistema trigeminovascular

(STV)(Moskowitz,1984)(Figuras3,4).

Existemtrêstiposdefibrasnervosasnaparededosvasoscranianos,sobretudoentre

as camadas adventícia e média e na própria camada adventícia. Estas fibras apresentam, na

porção pré‐sináptica, compostos

 vasoativos, que são liberados pelo estímulo nervoso. São

fibras simpáticas (oriundas principalmente do gânglio cervical superior), parassimpáticas

(projeçõesnervosasaferentesdogânglioesfenopalatino)esensoriaisdetiposAδeC(primeiro

neurônio do sistema trigeminovascular) (Edvinsson e Uddman, 2005; Pietrobon e Striessing,

2003)(Figura4).Aquelescompostosinteragemcomsubstânciasvasorreguladoras

presentesna

corrente sangüínea e/ou no vaso, contribuindo para a regulação do tono vascular, além de

serem também responsáveis pelo  desencadeamento da chamada reação inflamatória

neurogênica, principalmente em vasos durais, que se caracteriza pelo extravasamento de

proteínas,mastócitoseplaquetas(EdvinssoneUddman,2005;UddmaneEdvinsson,1989).



Figura3.Relaçõesentreviasaferenteseeferentesdosmecanismosdesencadea dores 

e neuromoduladores de dores cefálicas (Moskowitz, 1984; Uddman,

1989; Vincent, 1998;

Pietrobon,2003;Edvinsson,2005).

CGRP(peptídeoliberadordogenedacalcitonina),GABA(ácidogama‐aminobutírico),

VIP(peptídeointestinalvasoativo),PACAP(pituitareadenylatecyclaseactivatingpeptide).







FATORES

DESENCADEANTES

E PREDISPOSIÇÃO

INDIVIDUAL

NÚCLEO

SALIVATÓRIO

SUPERIOR

TÁLAMO

(NÚCLEO MEDIAL PÓSTERO-VENTRAL)

TRATO TRIGEMINOTALÂMICO

CÓRTEX SOMATOSSENSITIVO PRIMÁRIO

“DOR”

HIPOTÁLAMO

SISTEMA LÍMBICO

SUBSTÂNCIA CINZENTA

PERIAQUEDUTAL

NÚCLEO

DORSAL DA

RAFE

LOCUS

COERULEOS

NÚCLEO

MAGNO DA

RAFE

MODULAÇÃO DESCENDENTE DA DOR

NÚCLEO

SENSITIVO

DO NERVO

TRIGÊMEO

CGRP, PACAP, SUBSTÂNCIA P

NEURO

UININA A

VIP

ÓXIDO NÍTRICO

ACETILCOLINA

NORADRENALINA SEROTONINA

GLUTAMATO

SUBSTÂNCIA P

ADRENALINA,

ENCEFALINA

GABA

GÂNGLIO

DE GASSER

SIMPÁTICO

NORADRENALINA

NEUROPEPTÍDEO Y

ATP

DOR CEFÁLICA

EXCITABILIDADE

CORTICAL

GÂNGLIO

PTERIGOPALATINO

DILATAÇÃO DOS

VASOS MENÍNGEOS

E CRANIANOS

PARASSIMPÁTICO



Figura4‐Viasneuronaisenvolvendoaativaçãotrigeminovasculareoprocessodador

(IV, quarto ventrículo; ACh, acetilcolina;  CGRP, peptídeo relacionado ao gene da calcitonina;

LC,locuscoeruleus;PAG,subtânciacinzentaperiaq uedutal;MRN,núcelomagnodarafe;NKA,

neuroquininaA;NO,óxidonítrico;SP,substânciaP;SPG,gânglioesfenopalatino; SSN,

núcelo

salivatório superior; TG, gânglio trigeminal; TNC, núcelo caudal do trigêmeo; VIP, peptídeo

vasoativointestinal)(AdaptadodePietroboeStriessnig,2003).



Tálamo

Hipotálamo

PAG

Vasos Durais

Vasos Piais



No que se refere à regulação do tono vascular pelo sistema nervoso vegetativo, as

fibrassimpáticas,originadasdogângliocervicalsuperior,contêm,alémdenoradrenalina(NA),

o neuropeptídeo Y (NPY), que apresenta atividade vasoconstritora (Uddman e Edvinsson,

1989). As fibras parassimpáticas, originadas no gânglio esfenopalatino, contêm acetilcolina

(Ach),umconvencional

vasodilatadordependentedoendotélio,eoutroscompostos,comoo

peptídeo intestinal vasoativo (VIP). Estas fibras também são capazes de liberar óxido nítrico 

(NO)(Lundberg,1996).

Fibras sensitivas também funcionam nesse caso como fibras eferentes do sistema

nervosovegetativo.Assimcomooutrosneurôniossensoriaisprimários,osnervos trigeminais

são iniciadores críticos e

 promotores de inflamação tecidual. Sua ativação libera de seus

terminais aferentes substâncias vasoativas, como CGRP (peptídeo relacionado ao gene da

calcitonina), substância P (SP) e neuroquinina A (NKA), que atuam  como potentes

vasodilatadores,pormeiodaviadeNO.Oeventofinaléodesencadeamentodeumarea ç ão

inflamatória no

tecido alvo, sendo, nesse caso, os vasos sangüíneos cerebrais (Figura 5)

(LizasoaineLeira,2003;Moskowitz,1984).

Fibras trigeminais não‐mielínicas do tipo C, além da função ortodrômica, liberam

distintos neurotransmissores na periferia por estimulação antidrômica: substância P (SP),

CGRP, dinorfina B, pituitare adenylate cyclase activating peptide (PACAP), além de outras



taquiquininas,comoneuroquininaA(NKA)(Vincent,1998;EdvinssoneUddman,2005).

Dependendo do sítio de ação, a substância P pode provocar vasodilatação menos

intensa ede mais curta duração, podendo atuar como neuromodulador do tono vascular.O

CGRP, potente vasodilatador presente em grande quantidade na divisão oftálmica do nerv o

trigêmeo,

tambémpode terefeito neuromodulador. Emboranão determineextravasamento

deproteí nas, elepode aumentá‐lopormeiodafacilitaçãodaaçãodeSP(Vincentetal.,1992;

LeGrevesetal.,1985).



Figura 5. Inflamação Neurogênica. A ativação neuronal resulta em libera ção de

substânciasvasoativas,quelevamavasodilatação,extravasamentoplasmático esensibilização

determinaisnervososnociceptivos,resultandoemdor(AdaptadodeLizasoaineLeira,2003;

Moskowitz,1984).



Experimentos de Furchgott e Zawadzki (1980) demonstraram que a vasodilataçã o

induzidaporacetilcolina

sóocorriacomainfluência defatoresendoteliais,especialmentepor

meiodaliberaçãodeNO,sintetizadoapartirdeL‐arginina,poraçãodaenzimaóxido nítrico

sintase (nitric oxide synthase ou NOS, em inglês). Além de vasodilatador, o óxido nítrico

apresenta atividade neurotransmissora, havendo evidências da presença de NOS

 em fibras 

nervosas,inclusiveperivasculares(FurchgotteZawadzki,1980;Moncadaetal.,1991;Goadsby

etal.,1996).

Estudos de Olesen e colaboradores (1995) demonstraram que os principais

neuropeptídeos relacionados à inflamação neurogênica não causam dor per se. Contud o,

cogitaramahipótesedoNOsermoléculaalgógenanaenxaqueca. Assim,

aativaçãodaviaNO

NEURÔNIO

TRIGEMINAL

VASO CEREBRAL

VASODILATAÇÃO

SUBSTÂNCIA P

NEURO

UININA CGRP

DURAMÁTE

EXTRAVAZAMENTO

PLASMÁTICO

DOR

1. ATIVAÇÃO

NEURONAL

NEURÔNIO

TRIGEMINAL

e a conseqüente estimulação de GMPc podem causar crises de cefaléias. Paralelamente,

fármacos que atuam inibindo as etapas da via NO‐GMPc ou antagonizando os efeitos de

metabólitosgeradosporestaviapodemagircomoanti‐enxaquecosos(Silbersteinetal,1997;

Schoen,1997;Zuckerman,2000).

Acredita‐se que sistemas endógenos

de analgesia também estariam alterados na

presençadeenxaqueca,peladepleçãodemonoaminaseopióidesendógenos.Possivelmente,

taisalteraçõesseriamfacilitadasporpredisposiçãohereditária(Silbersteinetal,1997;Schoen,

1997;Zuckerman,2000).

Além disso, observam‐se inúmeras variações  bioquímicas, tanto na crise, quanto no

período intercrítico, em indivíduos que apresentam

enxaqueca, como, por exemplo, as que

envolvemserotonina,glutamatoemagnésio(Zuckerman,2000).Receptoresserotoninérgicos

(5HT

1B/1D

)parecemestarenvolvidosnaregulaçãodesseprocesso,poisomesmoéinibidopelo

usodeagonistas,comoosumatriptano(clássico fármacoanti‐enxaquecoso)(LizasoaineLeira,

2003).

Oextravasamentoplasmáticoemdura‐máterpodeestarenvolvidonagênesedador

relacionadaàsdorescefálicasdotipoenxaque ca(LizasoaineLeira,

2003).Essemecanismoé

similaraodescritonoreflexoaxonal(Bayliss,1901).

Tais achados suportam a teoria de que as cefaléias vasculares seriam resultantes de

umaalteraçãoneurobiológicaquerefletiriadistúrbiosnainteraçãoentreonervotrigêmeoe o

órgãoalvo(vasossangüíneoscerebrais)(LizasoaineLeira,2003;Moskowitz,1984).

Sendo assim,  o desenvolvimento do quadro de cefaléia poderia ser resumido na

seqüência de eventos a seguir, que ocorrem posteriormente à estimulação do sistema

trigeminovascular(Figura1).Ocorreriasínteseetransportedemediadoresnocicept ivos(como

prostaglandinas, histamina, serotonina e bradicinina), por meio do sistema circulatório, até

receptoresespecíficos,localizadosemfibras

sensoriaisperivasculares.Aativaçãodestasfibras

desencadearia despolarização e liberação de substâncias neuroativas em grandes vasos

sangüíneos durais. Paralelamente, estímulos nociceptivos também seriam transmitidos ao

núcleo caudal do trigêmeo (NCT) e, dele, para estruturas nervosas superiores (Moskowitz,

1984;Uddman,1989;Vincent,1998;Pietrobon,2003;Edvinsson,2005).



6. DORCEFÁLICAEÓXIDONÍTRICO

Óxidonítrico(NO)égásendógeno,comaltataxadedifusão.Ésintetizadoa

partirdo

nitrogênio do terminal guanidino da molécula de L‐arginina, por meio de sua conversão em

citrulina,poraçãodaenzimaóxidonítricosintase(NOS)(ThomseneOlesen,1997).

A enzima óxido  nítrico sintase é descrita em várias estruturas: endotélio vascular,

neurônios de Sistema Nervoso Central(SNC) eSistema Nervoso

Periférico, fibrasmusculares 

lisas de vasos sangüíneos, fibras musculares miocárdicas, macrófagos, neutrófilos e células

gliais, como as micróglias (Thomsen e Olesen, 1997). Ela existe em três isoformas: duas

(neuronaleendotelial)sãodenominadas“constitutivas” euma,“induzi da”.

Asformas“constitutivas”deNOSsãodependentesdeCa

/CalmodulinaeliberamNO

deendotélio (eNOS) e neurônios(nNOS). Essaliberação épotencializada por  estimulação de

váriosreceptoresespecíficosligadosàmembrana celular, como aquelesligadosaglutamato,

bradicinina, serotonina, acetilcolina, histamina, substância P e CGRP (Figura 6) (Thomsen e

Olesen,1997).

O óxido nítrico endotelial é um dos maiores

 responsáveis pela dilatação vascular. A

forma neuronal pode atuar como efetor em neurô nios capazes de induzir vasodilatação, de

modo que o NO produzido age como neurotransmissor ou como parte de um sistema de

segundomensageiro(Kerinetal.,2001;OleseneThonsen,2001;Myers,1999).

A forma “induzida” (iNOS) funciona

 independentemente de cálcio. É capaz de gerar

NO,porperíodoprolongadodetempoeemgrandesquantidades,emrespostaaendotoxinas

ecitocinas.Muitas ações fisiológicassãomediadaspormeio daativaçãodessavia.Além de

estar envolvida na regulação cerebrovascular (vasodilatação neurogênica dependente do

endotélio), também participa da neurotransmissão nociceptiva (Thomsen e  Olesen, 1997;

Myers,1999;Kerinetal.,2001;OleseneThonsen,2001).

A vasodilatação dependente do endotélio é importante para a regulação das

atividades cerebrovasculares e para a vasodilatação neurogênica mediada por fibras 

perivasculares.EstasúltimasfibrassãoreguladaspeloNO,por

meiodaativaçãodeneurônios

não‐adrenérgicos e não‐colinérgicos (nonadrenergic, noncholinergic neurotransmitters –

NANC)(Lundberg,1996;ThomseneOlesen,1997).

AneurotransmissãoenvolvendoóxidonítriconoSNCéimportante parapercepçãoda

dor (hiperalgesia), podendo també m contribuir para a transmissão sensorial de nervos

periféricos (Thomsen e Olesen, 1997). NO

 pode estimular a liberação de CGRP de terminais

nervososperivasculares,atuandonareaçãoinflamatórianeurogênica(Weietal.,1994).



Figura6.SíntesedeNOendotelial.NOSendotelialéestimuladapelocálciointracelular

aproduzirNO,quesedifundeparamúsculolisoeativaaguanilatociclase(GC).Estaenzima

catalisaaproduçãodeGMPceaativaçãodeproteínasquinases.Oresultadoéaestimulaçã o

da bomba de

 cálcio, que transportará este íon para fora da fibra muscular, gerando

relaxamento muscular e vasodilatação. Compostos nitrosos agem como doadores de NO e

atuamporessamesmaviaparagerarvasodilatação(ThomseneOlesen,1997).



Nitrovasodilatadores

Histamina

Bradicinina

Substância P

Acetilcolina

NOSe

Endotélio Músculo Liso

Efluxo de Ca

- ATPase

Proteína

Quinase

NO não atua diretamente em músculo liso vascular, mas, sim, por meio de  um 

segundo mensageiro purínico, a guanosina monofosfatada cíclica ou GMPc. NO ativa a

guanilato ciclase solúvel, promovendo a transformação de guanosina trifosfatada  (GTP)em

GMPc e a redução nos níveis  de Ca

 intracelular. Esse segundo mensageiro gera alterações

bioquímicasqueculminarãonaaberturade canaisiônicos(decálcioepotássio)dependentes

de adenosina trifosfato (ATP). Assim, ocorre relaxamento da musculatura lisa vascular e

conseqüentevasodilatação(Figura6)(ThomseneOlesen,1997;Myers,1999).

Diferentemente da maioria dos neurotransmissores, NO não é desativado

por

recaptação, nempor degradação enzimática. Possui meia‐vida de cerca de 5 a 30 segundos.

Depoisdesintetizado,éprontamenteconvertidoemdióxidodenitrogênio(NO

),que,porsua

vez,érapidamenteconvertidoemsuasformasmaisestáveis:nitrito(NO

‐

)enitrato(NO

‐

),por

meio de vias oxidativas mediadas por oxigênio ou superóxidos. Vários compostos nitrosos

orgânicos (nitroglicerina) e inorgânicos (nitrato/nitrito – amil‐nitrito) podem originar NO por

catalisação enzimática (Myers, 1999). A biotransformação dos nitratos orgânicos é resultado

da hidrólise redutiva catalisada pela enzima hepática glutationa redutase. Duas moléculas

destaenzima,na

formareduzida,reagemcomumadenitroglicerina,oxidando‐seeformando

1,3ou1,2‐gliceril‐dinitrato.

A ocorrência de cefaléia como reação adversa ao uso de nitratos foi primeiramente

observada Ascânio Sobrero  na metade do século IXI. Este pesquisador, ao sintetizar

nitroglicerina, observou que tal composto era capaz de desencadear

cefaléia quando

administradoporviaoral(MarsheMarch,2000).OsclássicosestudosdeWolff(1929)também

demonstraramesseefeitoadverso.Combasenessesdados,Olesenecolaboradores (1993)e

Iversen e colaboradores (1993)propuseram que apatofisiologia da enxaqueca poderia estar

relacionadaaumahipersensibilidadeàaçãodeNO.Eles

demonstraramqueacefaléiainduzida

por nitroglicerina (NTG) é mais grave em pacientes enxaquecosos,  sendo que a mesma

melhora, de maneira consistente, após a administração de inibidores de NOS. Durante 

episódiosdecefaléiainduzidaporNTG,existeaumentonaconcentraçãoplasmáticadeCGRP,

efeitoque tambémé observadoem váriascefaléias primárias, como enxaqueca,cefaléia em

salvas e cefaléia hemicrânia paroxística (Myers, 1999). Além disso, estudo experimental em

ratosdemonstroumaiorexpressãodec‐fosnonúcleotrigeminalcaudalapósa

administração

sistêmicadenitroglicerina,emcomparaçãocomocontrole(TassorellieJoseph,1995).



7. TRATAMENTODASDORESCEFÁLICAS

O tratamento de dores crônicas é complexo, obtendo‐se mais sucesso com ações

multidisciplinares (Ferreira e Perla, 2007). A abordagem é direcionada para reabilitação e 

manejo sintomático do quadro, mais do que

 para a cura (Hans e Hansen, 1999). Deve ser

iniciadaprecocemente,jáqueestímulosnociceptivosprolongadosegeneralizadosaumentam

a excitabilidade em sistema nervoso central, e dores persistentes podem induzir danos

orgânicos eemocionais (Mailis e Papagapiou, 1993). Seu manejo farmacológico centra‐se na

interrupçãodemecanismosqueainduzem

ouexacerbam(FerreiraePerla,2007).

Ascefaléiasprimárias(enxaquecasecefaléias trigeminálgicasautonômicas),juntocom

asneuralgias(detrigêmeoepós‐herpética), sãopossivelmenteosprocessosálgicosorofaciais

commaior dificuldade demanejo. Estefato deve‐seàcomplexidade dofenômeno doloroso,

bem como à existência de conhecimentos inadequados  com

 relação a diagnóstico e

tratamento(Temenbaumetal.,2001).

O tratamento farmacológico da enxaqueca, assim como dos demais tipos de dores

cefálicas, pode ser agudo, para as crises de dor (abortivo), ou preventivo (profilático). O

tratamentoagudotemporobjetivoaboliraprogressãodascrisesdedordecabeça,enquanto



opreventivovisareduzirafreqüênciaeagravidadedasmesmas(Silbersteinetal.,2001).

No passado, o tratamento agudo da enxaqueca era feito com agentes

antiinflamatóriosouderivados ergotamínicos.Osprimeiros,namaioriadasvezes,erampouco

eficazes,eosúltimosapresentavammuitosefeitosadversos,principalmentedevidoàfalta

de

seletividade desses agonistas serotoninérgicos. Atualmente, com o advento dos triptanos‐

agonistas serotoninérgicos mais específicos, a terapêutica tornou‐se mais eficaz e segura

(Silbersteinetal.,2001;Silberstein,2000;FerreiraePerla,2007).

Com o decorrer dos anos, o tratamento preventivo também se modernizou e se

tornou mais efetivo. Vários fármacos

podem ser utilizados na profilaxia da enxaqueca‐

antidepressivostricíclicos,anticonvulsivantes,antagonistasdos canaisdecálcioeantagonistas

serotoninérgicos.Oavançodosestudosreferentes à fisiopatogenia  das  dores  de cabeçatem

levado à busca  de novos fármacos, vitaminasou minerais  que possam ser utilizados como

agentes profiláticos, como é ocaso de

riboflavina emagnésio (Morey, 2000a,2000b,2000c;

Schoen,1997;Zuckerman,2000;Silbersteinetal.,2001).



8. MODELOS EXPERIMENTAISPARAOESTUDODASCEFALÉIAS

Com o desenvolvimento neurofarmacológico das últimas décadas, surgiu a

necessidade da criação de modelos animais que contribuam de maneira significativa para o

melhor conhecimento dos mecanismos

fisiopatogênicos das cefaléias, particularme nte da

enxaqueca. Na  maioria das vezes, esses modelos constituem valiosas ferramentas para a

exploraçãodeeventosquecompõemocomplexomecanismoneuroquímicoefisiológicodesse

processo neurológico, bem como para o estudo de sua correlação com achados clínicos

(Tabela2)(GoadsbyeKaube,2000).

Geralmente, os modelos

 experimentais são construídos com base na avaliação da

respostanociceptiva,atendo‐seaoestudodotratamentoagudo dascrisesedeestratégiasde

manejopreventivo.Namaioriadasvezes,elesnegligenciamomecanismofisiopatológico eas

possíveisalteraçõescomportamentaisenvolvidasnoprocesso.



Tabela 2. Achados clínicos observados em crises  de enxaqueca e suas possíveis

correlaçõesbiológicas(AdaptadodeGoadsbyeKaube,2000).



Achadosclínicos Possíveisexplicaçõesbiológicas

(mecanismose/oulocalizações)

Distribuiçãounilateraldador Envolvimentotrigeminal



Envolvimentonervoso



Envolvimentonuclear

Característicapulsátildador Inervaçãovascular

Agravamentopelomovimento  Inflamaçãoneurogênica

Náuseas/Vômitos AtivaçãodoNúcleodoTratoSolitário

Fotofobia/Fonofobia EnvolvimentodeLocuscoeruleus



Hiper‐excitabilidadecortical

Naturezaepisódica Canalopatia(?)

Comprometimentoglobal Sistemadecontrolesensorialaminérgico



AtivaçãodeLocuscoeruleus



EnvolvimentodeNúcleoDorsaldaRafe



EnvolvimentodeSubstânciaCinzentaPeriaquedutal



Osmodelosanimaisparaoestudodascefaléiaspodemserdivididosemdoisgrupos:

simples e complexos. Os primeiros são mais bem aplicados em pesquisas farmacológicas,

destacando‐seos modelos devasosisolados, de receptoresclonados e decultivo celular.Os

modeloscomplexossãoempregadosparaaavaliaçãodos mecanismos

envolvidosnateoriada

inflamaçãoneurogênicavascular.Podemserutilizados para ainvestigaçãodoscomponentes

fisiológicos da enxaqueca, como sistemas nociceptivos, mecanismos inflamatórios e reações

vasculares(LizasoaineLeira,2003).

Nãohámodeloidealquemimetizeumacrisedeenxaqueca.Osexistentesapresentam

vantagens e desvantagens. Modelos complexos, assumindo a hipótese

 de que há integração

neurogênicaevascularnoprocessofisiopatogênicodas cefaléias,seriamaquelesquemelhor

refletiriamarealidade(Lizaso a ineLeira,2003).Nessegrupo,destacam‐seosmodelosaseguir

(Tabela3).

8.1Modelosvascularesinvivoparaestudosfarmacológicos

Os modelos em animais foram desenvolvidos com o objetivo de mimetizar a

vasodilatação extracraniana relacionada a cefaléias vasculares, como a enxaqueca. Embora

muitosdelessejamessencialmentevasculares,tambémexploramcomponentesneurogênicos,

como aqueles nos  quais é administrada, por via intravenosa, capsaicina e investigada

 a

liberaçãosubseqüentedeCGRP(Kapooretal.,2003;Bergerotetal.,2006).

Baseiam‐se na teoria de que a vasodilatação extra‐cerebral exerce papel importante

na fisiopatologia da enxaqueca. Fundamentam‐se no fato de que fármacos ergóticos e

sumatriptano,apesardeefetivosparaotratamentodascrisesde

cefaléia,nãoultrapassama

barreira hemato‐encefálica, apresentando efeito vasoconstritor periférico (Lizasoain e Leira,

2003).



Existem dois modelos fundamentais. Um deles – o  modelo de anastomose

arteriovenosa – parte da hipótese de que a vasodilatação afeta fundamen talmente

anastomoses arteriovenosas cranianas (AAV), que são comunicações pré‐capilares entre

artérias e veias

(Heyck, 1969). A vasodilatação de AAV determinaria  aumento de fluxo em

veias, sem passar pelos capilares. Es se modelo foi muito importante para o avanço do

conhecimentodafisiopatologiadaenxaqueca,pois,nele,observou‐sequeaserotoninaproduz

dilataçãoarteriolarevasoconstriçãodeAAV.Tambémsemostrourelevantepara oestudo

de

fármacos anti‐enxaquecosos, principalmente aqueles com ação em receptores específicos.

Nele, têm sido estudados fármacos capazes de contrair vasos cranianos dilatados,

independentemente do mecanis mo, como agentes ergóticos, triptanos e inibidores de NO

(LizasoaineLeira,2003;Bergerotetal.,2006).



Tabela3.Modelosemanimaisparaestudodedorescefálicas(Bergerotetal.,2006).

TipodeModelo

 Função/Estrutura Metodologia

Vascular

(vasoconstriçãoou

vasodilatação)





Invitro



Invivo

Veiaseartériasisoladas



Leitoarterialcarotídeo

Anastomoses

arteriovenosas



Artériaspiais



Efeitodefármacose

modulaçãodeestimulação

elétrica



Avaliaçãoderesistênciae

diâmetrovasculares



Neurovascular

Inflamatório

(extravasamentoplasmático‐EP)



AtivaçãodoNúcleoTrigeminal

Caudal(NTC)



DepressãoCorticalAlastrante



Efeitosdedoadoresde

óxidonítrico



SistemaTrigeminovascular



SistemaTrigeminovascular

Viasnociceptivascentrais



Vasodilataçãoeativaçãode

neurôniostrigeminaispor

depressãoalastrante



SistemaTrigeminovascular

Viasnociceptivascentrais

Interaçãonociceptiva‐

autonômica



InduçãoouinibiçãodeEP

porestimulaçãoquímicaou

elétricadenervosegânglio

trigeminaiseavaliaçãocom

traçadoresradiomarcados

oucorantesvitais



Estimulaçãomeníngeaou

estimulaçãomecânica/

elétricadeestruturas

inervadaspelotrigêmeo



Aplicaçãocorticaldecloreto

depotássio(KCl),expressão

dec‐fosnoNTC



Respostasnociceptivas,

cerebrovascularese

neuroquímicasdecorrentes

deadministraçãocentralou

sistêmicadenitroglicerina



8.2Modelosvascularesinvitroparaestudosfarmacológicos

Nesses modelos são utilizados diferentes tipos de vasos sangüíneos, incluindo os de

sereshumanos,paraoestudodefármacosempregadosnotratamentodedoresdecabeça.É

métodorazoavelmentesensívele, apresentandofácilreprodutibilidade, permiteoestudode

muitos compostos em curto

período detempo, utilizando‐se a mesmapreparação. Também

permite o estudo dos receptores e neurotransmissores envolvidos (Lizasoain e Leira, 2003,

Bergerotetal.,2006).



8.3Modelosneurovasculares paraestudosfarmacológicos

Emmodelosneurovasculares,éfeitaaativaçãodosistematrigeminovascular(STV)por

meio de estimulação elétrica, química ou imunológica

 do gânglio trigeminal, ou mesmo de

seusnervosmaisperiféricos(LizasoaineLeira,2003;Bergerotetal.,2006).

Moskowitz e colaboradores (1984) foram os primeiros  a descrever o fenômeno da

inflamação neurogênica em meninges de ratos, após esse tipo de estimulação. Estímulo

nociceptivo produz aumento da atividade neuronal, que pode

 ser evidenciado por meio da

quantificaçãodeneurôniosqueexpressamc‐fosnaslâminasIeIIdonúcleocaudaldonervo

trigêmeo. Isso desencadeia a liberação de peptídeos neuro‐inflamatórios, como CGRP, SP  e

NKA,que são potentes vasodilatadores, agindo de modo dependente do óxido nítrico. Esses

mediadores,além

degeraremextravasamentoplasmáticoemdura‐máter,estãoenvolvidosno

mecanismo de dor durante o episódio de cefaléia (Lizasoain e Leira, 2003; Bergerot et al.,

2006).

Em modelos experimentais de cefaléia, antes da estimulação do STV, pode ser

administrada,porviaintravenosa, albumina

125

IouazuldeEvans,comafinalidadedeverificar

a ocorrência de extravasamento plasmático durante o processo, que seria resultante da

inflamaçãoneurogênica.Paratal,érealizadaamedidadaquantidadedessassubstânciasfora

doespaçointravascular(LizasoaineLeira,2003;SpokeseMiddlefell,1995).

Entre os modelos neurovasculares, talvez o mais interessante sejam aqueles

relacionados à administração sistêmica de nitratos orgânicos, que são potentes

vasodilatadores.



9. MODELONEUROVASCULARDEATIVAÇÃO

TRIGEMINALPORADMINISTRAÇÃODE

NITROGLICERINA,PORVIASISTÊMICA

O modelo animal de ativação do sistema trigeminovascular pela administração  de

nitroglicerina baseia‐se na observação, em seres humanos, de que este fármaco é capaz de

desencadear cefaléia similar àquelas  apresentadas por indivíduo s enxaquecosos, após várias

horasdesuaadministraçã o,alémdereproduzir

sintomaspremonitóriosassociadosacrisesde

enxaqueca(Iversenetal.,1989).Estecompostotambémécapazdedesencadearaexpressão

de c‐fos no complexo trigeminocervical, indicando ativação deste sistema nociceptivo da

regiãocervicalaltaecrânio(TassorellieJoseph,1995).

Anitroglicerina(trinitratodeglicerina;NTG)éumnitrato

orgânico,decurtameia‐vida

plasmática–cercade1a4minutos,quepodeserprolongadaemtecidoslipofílicos,incluindo

o encéfalo. Este composto é rapidamente metabolizado intracelularmente em NO, que é

importante mensageiro neuronal, com diversas funções sinalizadoras, tanto em SNC, quanto

em Sistema Nervoso Periférico (Moncada et

al., 1991, Bergerot et al., 2006).Sua

metabolizaçãoérealizadapelaenzimamitocondrialaldeído‐D‐hidrogenase(Michel,2006).

Agindo em sistema cardiovascular, a nitroglicerina causa vasodilatação, acarretando

diminuiçãodapressãodiastólicaediscretareduçãoemresistênciavascularpulmonaredébito

cardíaco.Emaltasdoses,écapazdegerarestasevenosa,

aumentodaresistênciaarteriolare

redução da pressão arterial (sistólica e diastólica) e débito cardíaco, podendo acionar

mecanismosautonômicosregulatóriosdasfunçõescardiovasculares(Michel,2006).

Repetidaoucontínuaexposiçãoànitroglicerinapodelevaràate nuaçãodamagnitude

deseuefeitofarmacológico.Essatolerânciaérelacionadaadosagemefreqüênciadeuso.Esse

fenômeno pode ser resultante de: (a) redução da capacidade da musculatura lisa converter

aquele composto em óxido nítrico (Figura 6), o que é chamado

 de “tolerância vascular

verdadeira”,ou(b)deativaçãodemecanismosextravasculares(pesudotolerância).Algunsdos

possíveismecanismosenvolvidosna“tolerânciavascular”são:aumentodevolumeplasmático,

ativaçãoneuro‐humoral,depleção celular  de grupossulfidrilasegeraçãoderadicaislivres. O

estresseoxidativotambémpodeestarrelacionadoaessefenôm eno,poisocorre

inativaçãoda

enzima aldeído‐D‐hidrogenase mitoco ndrial nessa circunstância (Michel, 2006). Fenômeno

interessante, associado  à tolerância a nitratos, é o surgimento de cefaléia cerca de uma

semana após as primeiras manifestações da exposição prolonga da a esses compostos. É a

chamadaMondayDisease(Marsh eMarsh,2000;Michel,2006).

A maioria dos

 estudos que utilizam nitratos orgânicos para ativação sistêmica do

sistema trigeminovascular não explora o padrão comportamental que os animais possam

apresentar(Tabela3).Algunsutilizamoreflexoderetiradadacaudaaestímulotérmiconocivo

(tail‐flick latency)como medidanociceptiva,  mas  outrosparâmetros comportamentais  pouco

sãoexplorados.Na

maioriadas vezes,osestudosseatêmamedidasimunoistoquímicas,como

aexpressãodec‐fos(TassorellieJoseph,1995),oua parâmetroseletrofisiológicosedefluxo

vascular(Bergerotetal.,2006).



10. DOROROFACIALINDUZIDAPORFORMALINASUBCUTÂNEA

Aregiãoorofacialéáreadensamenteinervadapelonervotrigêmeo

e,muitasvezes,é

sítio freqüentede dores referida e crônica. Alteraçõesclínicas noterritório trigeminal, como

aumento da sensibilidade cutânea e hi peralgesia, observadas  em cefaléias primárias e dores

orofaciaisemgeral,sãomuitosugestivasdeanormalidadesnosistemanociceptivotrigeminal

(Bartchetal.,2003).

Existempoucosmodeloscomportamentaisdedicadosà avaliaçãodenocicepçãonessa

área,especialmentenoqueserefereàsuarelaçãocomcefaléias.Amaioriadelessebaseianas

medidas de limiaresnociceptivos ou la tências após estímulos nocivos na região orofacial ou

emestruturascranianasprofundas,comoseiosvenososegrandesartériasdurais

(LeBarset

al.,2001;Lizasoainetal.,2003;Mitsikostasetal.2001;RaboissoneDallel,2004).

 Entreosmodelosnocicept ivosexperimentaisdedoresorofaciaisecefálicas,otesteda

formalina é um dos mais relevantes e o mais preditivo, em termos de aplicabilidade clínica,

quandoseestudam

doresagudas.Elea valia anocicepçãotrigemi nalpormeiodaaplicaçãode

estímulo químico (administração subcutânea de formalina) na região  orofacial. Esse modelo

constituiumaadaptaçãodotestedaformalinaadministradanasuperfícieplantardea nimais

(Clavelouetal.,1989;Dubuissonetal.,1977;RaboissoneDallel,2004;Raboissonet

al.,2004).

A injeção subcutânea de formalina na pata gera injúria tecidual, com conseqüentes

alteraçõescomportamentais eresposta eletrofisiológicaqueperduram por minutos até mais

deumahora.Osachadoscaracterísticosdarespostacomportamentalàinjeçãodeformalina(1

a5%)emroedoreséumpadrãonociceptivobifásico(Pacáke

Palkovits,2001).Imediatamente

após a administração do estímulo químico, há uma fase aguda de nocicepção, expressa por

respostacomportamentalvigorosa(fase1),queperdurapor3a5minutos.Segue‐seumafase

silente (sem comportamento sugestivo de nocicepção), que se inicia 5 a 15 minutos após a

injeção e

dura de 10 a 15 minutos. Na última etapa (fase 2), ocorre reação inflamatória no

tecido periférico, caracterizada por intensa  atividade nociceptiva, que perdura por 20 a 60

minutos(Clavelouetal.,1989;DickensoneSullivan,1987;PacákePalkovits,2001).

Asprincipaisrespostascomportamentaisobservadasnessemodelosão:(1)medida

do

número de reflexos de auto‐limpeza (grooming em inglês), dirigidos ao local da injeção de

formalina, (2) vocalização espontânea, (3) tremores vigorosos do corpo (shaking em inglês),

associados ao ato de lamber as patas dianteiras e proteger vigorosamente o  focinho, e (4)

trismo.Todosestescomportamentossãopotencialmenteindicativosdedoredisestesiagrave

(Andersonetal.,2003).

SegundoDubuissonecolaboradores(1977),a dor,nomodelonociceptivotrigeminal,

seria inicialmente resultante da reação inflamatória gerada pela ligação da formalina às

proteínas teciduais, por meio da formação de pontes primárias de carbono

(propriedade

fixadora do tecido). Tal  reação inflamatória na área de injeção persiste por período

relativamentelongo.Edemadelábiosuperior,porexemplo,podeserobservadoaté24horas

após.Arespostainicial(fase1)possivelmentedecorredaestimulaçãodiretadosnociceptores,

enquantoasegundafasedeve‐seainflamaçãoesensibilização

central(Ichinoseetal.,1999).

EstudoseletrofisiológicosdemonstraramqueosnociceptoresdasfibrasperiféricasAδ

e C, bem como os neurônios nociceptivos convergentes do núcleo trigeminal espinhal, são 

excitadospelaadministraçãodeformalina nocamponociceptivocorrespondente(Andersonet

al.,2003;Raboissonetal.,2004;).

Leonge colaboradores(2000)

observaram quea injeçãosubcutânea deformalina na 

região da face inervada pelo  segundo ramo do nervo trigêmeo induz a expressão do proto‐

oncogenec‐fos(c‐fos)naslâminasIeIIdonúcleosensitivo trigeminal.Estaexpressãodec‐fos

possivelmentesejamediadaporóxidonítrico(Leonget

al.,1999).

No modelo de injeção plantar de formalina, receptores glutamatérgicos ionotrópicos 

não‐NMDA (subtipo cainato GluR5) parecem mediar a resposta nociceptiva à formalina em

neurôniosdocornodorsaldamedulaespinhal(Simmonsetal.,1998).Nãohádadosquantoao

modelodeinjeçãoorofacialdessecomposto.

Entreos

principaisparâmetroscomportamentais medidosnomodelodeadministração

de formalina na área facial, está o reflexo de auto‐limpeza (grooming) (Raboisson e Dallel,

2004). O mesmo é dirigido para a região orofacial com o uso do membro (anterior ou

posterior) ipsilateral ao do local da administração de formalina. Outras medidas



comportamentais, como o número de cruzamentos (crossings em inglês – medida de

locomoção) e o número  de respostas de orientação  (rearings em inglês – medida de

comportamentoexploratório),esuaassociaçãocommedidasnociceptivas(tail‐flicklatency –

latênciadoreflexoderetiradadacauda),sãopoucoexploradas.



Sendoassim,essaDissertaçãotevecomoobjetivorealizarestudossobreamodulação

 nocicepç ão  mediada por vias trigeminais, em modelo animal correlacionável com os

quadrosdedoresorofaciaisecefálicasemsereshumanos.Paratal,foipromovidaaativação

do sistema trigeminovascular de modos periférico (dor orofacial induzida por formalina) e

sistêmico (modelo neurovascular de ativação sistêmica por administração de nitroglicerina).

Pela facilidade

técnica e resultados prévios, foram selecionados os modelos  descritos por 

Clavelouecolaboradores(1989)eTassorelliecolaboradores(1999)paraempregonapresente

Dissertação.



Objetivos

1. OBJETIVO GERAL

Essa Dissertação teve  como objetivo geral avalia r  parâmetros comportamentais e

nociceptivos resultantes da associação de modelo de ativação periférica do sistema

trigeminovascular, baseado na administração subcutânea de formalina na região orofacial,

commodeloneurovasculardeativaçãosistêmica,baseadonaadministraçãointraperitonealde

nitroglicerina. Para tal, aqueles parâmetros foram

 previamente avaliados em cada um dos

modelos propostosisoladamente. Procurou‐se, assim, verificara ocorrência de uma possível

sensibilizaçãodeviasmedularesnociceptivas,pormeiodaavaliaçãoderespostasnociceptivas

comportamentaisgeradasporestímuloperiféricoesistêmicodosistematrigeminal.



2. OBJETIVOSESPECÍFICOS

2.1. Avaliar parâmetros comportamentais em campo

aberto – número de cruzamentos

(crossing),númeroderespostasdeorientação(rearing)etempogastoemreflexode

auto‐limpeza (grooming) – utilizando o modelo de dor orofacial induzida pela

formalina, a fim de verificar qual deles poderia melhor representar a resposta

nociceptivanessasituação.

2.2. Avaliar,

nomodeloneurovasculardeativaçãotrigeminalporadministraçãosistêmica

de nitroglicerina, o padrão de resposta da medida comportamental previamente

selecionadacomorepresentativadenocicepçãoemcampoaberto(objetivo2.1).

2.3. Avaliararespostanociceptiva,porme iodamedidadoreflexoderetiradadacaudaa

estímulo térmico nocivo (tail‐

flick latency), em experimento no qual se associam os

modelos de dor orofacial induzida pela formalina e neurovascular de ativação

trigeminalporadministraçãosistêmicadenitroglicerina.



MateriaiseMétodos



1.ANIMAISEXPERIMENTAIS

ForamutilizadosnoestudoratosWistar,machos,comidadede60diasaoiníciodos

experimentos, pesando entre 200 e 300 gramas, provenientes do Centro de Reprodução de

Animais de Laboratório (CREAL) do Instituto de Ciências Básicas da Saúde (ICBS)  da

UniversidadeFederaldoRioGrandedo

Sul(UFRGS).

Osanimaisforammantidosemcaixas‐moradiaconfeccionadasemplexiglass,medindo

41 cm de altura, 34 cm de largura  e 16 cm de profundidade, com fundo recoberto por

serragem.Foramsubmetidosacicloclaro‐escurode12horas(períododeluzdas7hàs19h),

recebendo

raçãopadronizadaeáguaadlibitum.

Os animais foram pesados e aleatoriamente distribuídos nos grupos propostos em

cadaexperimento.

Ao término dos experimentos, os animais foram eutanasiados em câmara de gás

carbônico,soboscuidadosdoCREALdoInstitutodeCiênciasBásicasdaSaúde.



2.AVALIAÇÕESCOMPORTAMENTAIS



2.1. OBSERVAÇÃO

EMCAMPOABERTO

Foi realizada em caixa de madeira recoberta por fórmica (interna e externamente),

medindo 50cm de altura,  60 cm de largura e40 cmde profundidade, comface anteriorde

vidro. O assoalho estava dividido em 12 retângulos de 15,0 x 13,3 cm, com linhas escuras

(Figura7)

(Nettoetal,1987;Spruijtetal.,1992).



Figura7.Caixademadeiraparaobservaçãoemcampoaberto,recobertaporfórmica

(interna e externamente), medindo 50 x 60 x 40 cm de profundidade, com face anterior de

vidroeassoalhodivididoem12retângulosde15,0x13,3cm,comlinhasescuras.



Cadaanimalfoigentilmentecolocado

nocantoposterioresquerdodacaixaedeixado

livrepara exploraro ambiente por 5 minutos, durante  os quais foramrealizadas as medidas

propostas. O registro do número de respostas de orientação (rearings), do número de

cruzamentos(crossings)edotempogastorealizandoreflexosdeauto‐limpeza(groomings

)foi

feitoemdiferentesperíodosdetempo,deacordocomoexperimentoemquestão(Spruijtet

al.,1992,Nahas,1999)(Figura8).Foramobtidasmedidasimediatamenteantes(basal)eapós

osanimaisseremsubmetidosaotratamentoestipulado.

Onúmerodecruzamentosfoimedidoemfunçãodonúmero totalderetângulos

queo

animalultrapassoucomasquatropatas.Namedidadonúmerodereflexosdeorientação,foi

consideradoonúmerototaldevezesqueoanimalseapoiounaspatastraseiraseassumiua

posiçãoortostática(Nahas,1999).Otempototal(emsegundos)emqueoanimalpermaneceu

realizando o reflexo de auto‐limpeza (grooming) na região das  vibrissas foi utilizado como

medidadecomportamentonociceptivo (Clavelou

etal.,1989).



A

B C



Figura 8. Padrões comportamentais observados em campo aberto. (A) Número de

cruzamentos (crossings); (B) número de respostas de orientação (rearings), (C) reflexos de

auto‐limpeza(groomings).



2.2.AVALIAÇÃODOREFLEXODERETIRADADACAUDA(TAIL‐FLICK)

Arespostanociceptivafoiavaliadapormeiodo

aparelhodetail‐flick,conformetécnica

descritaporD’AmoureSmith(1941).Cadaanimalfoicontido,empregando‐seumatoalhade

tecido de algodão, e colocado no aparelho, com a  cauda imobilizada sobre uma fenda

delimitada por duas chapas de metal. Ligado o aparelho, feixe de luz fixa incidia 2‐

3 cm

rostralmente à porção mais distal da cauda. O acionamento da fonte luminosa disparava

automaticamenteumcronômetrodigital.Adeflexãodacauda,motivadapelocalorirradiado

da fonte luminosa, interrompia sistema de fotocélula ligado ao feixe de luz, encerrando a

medida(comtravamentodocronômetro).Aintensidadedaluzfoiajustadaem0,35mA,afim

deseobteremlatênciasbasaisderetirada dacauda

(tail‐flicklatencyouTFLeminglês)de3a 5

segundosnogrupocontrole.Limitede10segundos(teto)foiimpostoàsmedidasparaevitar

danosteciduais(D’AmoureSmith,1941;Nettoetal.,1987;Siegfriedetal.,1987)(Figura9).



 



Figura9.Aparelhodemedidadereflexoderetiradadacauda( tail‐flick).Apósacauda

serimobilizadasobreumafenda,oaaparelho foi acionadoefeixedeluzfixaincidiu 2‐3cm

rostralmente à porção mais distal da cauda. O acionamento da fonte luminosa disparou

automaticamente

umcronômetrodigital.Adeflexãodacauda,motivadapelocalorirradiado

da fonte luminosa, interrompeu o sistema de fotocélula ligado ao feixe de luz e  encerrou a

medida(Basal:3‐6s/Teto:10s).

Essetestebaseia‐senoprincípiodequeocalorproduzidopelaincidênciadeluzsobre

oanimal provocauma respostanociceptiva, manifestadapor meio do reflexo de retiradada

cauda (D’Amo ur e Smith, 1941; Netto et al., 1987 ; Siegfried et al., 1987). A latência para

retiradadacauda (TFL)

representaoperíododetempo(emsegundos)queseestendeudesde

oiníciodacontagematéadeflexãodacauda.

Oprocedimento‐padrãoparaobtençãodessasmedidasconstoudasetapasaseguir.

(a) Vinte e quatro horas antes do experimento, os animais foram expostos ao

aparelho,parafamiliarizarem‐secom

omesmoecomoprocedimentoaserrealizado,umavez

queanovidadepodeinduzirantinocicepção(Nettoetal.,1987).

(b)Nodiadoexperimento,foramobtidasmedidasimediatamenteantes(latência de

base)eapóscadaanimalreceberotratamentoproposto,emtemposespecíficos,conformeo

experimentoemquestão.



2.3. NOCICEPÇÃO OROFACIAL INDUZIDA PELA ADMINISTRAÇÃO SUBCUTÂNEA DE

FORMALINA

Notestededororofacialinduzidaporformalina(Clavelouetal.,1989),foirealizadaa

administração de agente irritante – solução de formalina 5% (50 μL) – ou de solução salina

(NaCla0,9%;50μL),porviasubcutânea,no

coximdireitodasvibrissasdecadaanimal(figura

10)

Figura 10. Região orofacial do rato em que éadministradofo rmalina 5 % por via

subcutânea(AdaptadodeRaboissoneDallel,2004).

Nesseteste,foiobservadoocomportamentodeauto‐limpeza(grooming),pormeio do

ato de coçar com as patas dianteiras a região em que foi feita a injeção de formalina. Foi 

cronometrado o tempo gasto pelo animal nesse comportamento. Para tanto, antes do

experimento, o animal foi colocado no campo

 aberto por período de 5 minutos  (conforme

descritonoitem2.1),paraquefosseregistrado otempototaldereflexodeauto‐limpezana

regiãodasvibrissas,alémdonúmerototaldecruzamentosedereflexosde orientaçãoespacial

(medidasbasais).



2.4. MODELO NEUROVASCULAR DE ATIVAÇÃO TRIGEMINAL POR ADMINISTRAÇÃO

SISTÊMICA

DENITROGLICERINA

No modelo neurovascular de ativação trigeminal por nitroglicerina (Tassorelli, 1999),

foi realizada a  administração, por via intraperitoneal, de trinitrato de glicerina (TRIDIL®,

soluçãode5mg/mL;dose de10mg/kg),veículo(propilenoglicol30%,etanol30%,água40%)

ousoluçãosalina(NaCla0,9%)(Tassorellietal.,1999).

Uma vez que não há estudos na literatura avaliando padrões comportamentais

relacionadosaessemodelo,utilizou‐secomobaseodelineamentoexperimentaldomodelode

dor orofacial induzida pela formalina (Clavelou et al., 1989). Imediatamente antes (basal) e

após a administração do tratamento proposto – trinitrato de glicerina, veículo ou solução



salina,foifeitaobservaçãodoanimalporperíodode5minutos,duranteoqualseregistrouo

número desegundos gastos na realização  do reflexo deauto‐limpeza (grooming) em campo

aberto.Osregistrospós‐tratamentoforamfeitosemdiferentesperíodosdetempo,deacordo

comoexperimentoem

questão.

Também foram registradas as latências do reflexo de retirada da cauda a estímulo

térmiconocivo(tail‐flicklatency)antes(basal)eemdistintosperíodosapóso animalrecebera

administração do tratamento proposto no modelo de ativação neurovascular de ativação

trigeminal.

3.TRATAMENTOSFARMACOLÓGICOS

Foramadministradososfármacosesoluçõesdescritosaseguir.

(1) Solução  salina(NaCla0,9%), administradapor via subcutânea,emvolumede 50

μL.

(2) Solução  de formalina a 5% (Formol P.A.®; Labotatório Synth; diluído em solução

salina),administradaporviasubcutânea,emvolumede50μL.



(3) Veículo, constituído por 30% de propilenoglicol, 30% de etanol e 40% de água

destilada,administradoporviaintraperitoneal.

(4) Trinitrato de glicerina (TRITIL®, Laboratório Cristália; em solução de 5 mg/mL,

obtida a partir da diluição em veículo), na dose de 10 mg/kg, administrada por via

intraperitoneal.

Foiutilizadasolução 

salinaparadiluiçãoeobtençãodasolução desejadadeformalina.

Ambasassoluçõesforamadministradasporviasubcutânea,emvolumede50µL.

Paraadiluiçãodetrinitratodeglicerina,foiutilizadoveículo.Assoluçõesdeglicerinae

veículo foram preparadas de modo a se injetar volume de 1 ml/kg por

 animal,  por via

intraperitoneal.

Asdosesempregadas tiveram por  baseestudospréviosda literatura(Clavelouet al.,

1989;Tassorellietal.,1999).



4.ANÁLISEESTATÍSTICA

Osdadosforamexpressoscomomédia±desviopadrão damédia(DPM).

Teste t de Student para amostras independentes ou ANOVA de uma via, seguida

 de

teste de comparações múltiplas de Bonferroni quando indicado, foram utilizados  para

comparação das medidas basais das latências de retirada da cauda (TFL), do número de

respostas de orientação  e cruzamentos e do tempo gasto em comportamento de auto‐

limpeza,nosgruposexperimentaispropostos.

Para comparação dos grupos quanto às latências de retirada da cauda (TFL), ao

númeroderespostasdeorientaçãoecruzamentos eaotempogastoemcomportamentode

auto‐limpeza, nos diferentes momentos de avaliação, foi utilizada ANOVA de medidas

repetidas,seguidadetestedecomparaçõesmúltiplasdeBonferroni,quandoindicado.

 diferenças foram consideradas estatisticamente significativas com probabilidades

deerroalfaiguaisouinferioresa5%(P≤0,05).



5.ASPECTOSÉTICOS

Todososprocedimentosforamrealizadosemconformidadecomalegislaçãovigente

noBrasil,Lei6.638(DiárioOficialdaUnião‐08/05/1979),queestabelecenormasparapráticas

didático‐científicas davivissecção

deanimais,assimcomoregulamentaoregistrodosBiotérios

eCentrosdeExperimentação.

Todos os procedimentos operacionais realizados foram embasados nas publicaçõe s

Guideforthe Care and Useof Laboratory Animals‐ILAR/EUA(1996)eManualparaTécnicos

em Bioterismo (COBEA/Brasil, 1996), estando de acordo com Ethical Guideline for

Investigations of

Experimental Pain in Conscious Animals, como indicado por International

Association for the Study of Pain (IASP). Tais procedimentos são de uso habitual por

pesquisadores que trabalham e publicam na área e obedecem às normas propostas pela

DeclaraçãoUniversaldosDireitosdosAnimais(UNESCO‐27dejaneirode1978)ePrincípio s

Internacionais Orientadores para a Pesquisa Biomédica Envolvendo Animais (Council for

InternationalOrganizationsofMedicalSciences‐CIOMS)(GoldimeRaymundo,1997).

Todososprocedimentosforamplanejadosparaminimizardoredesconforto.



Resultados

EXPERIMENTO 1: AVALIAÇÃO DE PARÂ METROS COMPORTAMENTAIS E RESPOSTA

NOCICEPTIVA EM RATOS SUBMETIDOS A MODELO DE DOR OROFACIAL INDUZIDA POR

FORMALINASUBCUTÂNEA



As regiões orofacial e craniana são ricamente  inervadas pelo nervo trigêmeo.

Processos dolorosos nessas regiões são muito sugestivos de anormalidades no sistema

nociceptivotrigeminal(Bartchetal.,2003).

Entre

 os modelos experimentais para o estudo de dores orofaciais, o teste da

formalina é um dos mais relevantes (Raboisson e Dallel, 2004). O principal parâmetro

comportamental medido nessa circunstância é o reflexo de auto‐limpeza (grooming)

(RaboissoneDallel,2004).Outrasmedidascomportamentais,comoonúmerodecruzamentos

(crossings

–medidadelocomoção)eonúmeroderespostasdeorientação(rearings–medida

decomportamentoexploratório),esuaassociaçãocomoutrasmedidasnociceptivas(tail‐flick

latency–reflexoderetiradadacauda),sãopoucoexploradas.

Esse experimento teve por objetivo avaliar parâmetros comportamentais associados

aomodelodedor

orofacialdecorrentedaadministraçãosubcutâneadeforma lina.

 ForamutilizadosratosWistaradultos,com200a300gdepesocorporal,divididosem

doisgrupos:SALINAeFORMALINA.Nos diasdoexperimento,foramobtidasasmedidasbasais

dos parâmetros comportamentais em estudo. Após, foi feita a administração, por via

subcutânea,de

soluçãodeformalinaa  5%(50µL) ou solução salina(NaCl0,9%)(50 µL),por

meio de agulha 30 x 0,5 mm, no centro da vibrissa direita. A seguir, foram mensuradas as

respostaspós‐tratamento.

Para a avaliação da resposta nociceptiva a um estímulo térmico nocivo (tail‐flick), os

animais

 foram submetidos a medidas do reflexo de retirada da cauda imedia tamente antes

(basal),30minutose24horasapósaadministraçãosubcutâneadeformalinaousalina(Figura

11).

Paraaavaliação dasrespostasmotora(cruzamentos),deauto‐limpeza(grooming)ede

exploraçãodeumnovoambiente(respostasdeorientação),osanimaisforamcolocadospara

observaçãoemcampoabertoporperíodo5minutos.Aquelesparâmetrosforammensurados

imediatamenteantes(medidasbasais),imediatamenteapós(0minuto),15minutose24

horas

apósaadministração,porviasubcutânea,deformalinaousoluçãosalina(Figura8).



Figura 11. Organização geral do experimento 1. Esquema de administração do

tratamento proposto (agente irritante ou solução controle) e tempos de medidas dos

parâmetroscomportamentaisemestudo.



Nesse experimento, não

 foi observada qualquer diferença estatisticamente

significativaentreosgruposSALINAeFORMALINAquantoàsmedidasbasaisdosparâmetros

comportamentais avaliados, seja no teste de tail‐flick, seja na observação em campo  aberto

(TestetdeStudentparaamostrasindependentes,P>0,05)(Tabela4).



Vinte e quatro horas antes do experimento

• Alocação aleatória dos animais nos grupos experimentais

• Habituação ao aparelho de retirada da cauda (tail-flick)

Dia do experimento

• Medidas basais da latência de retirada da cauda

• Medidas basais dos parâmetros comportamentais em campo aberto

GRUPO 1

GRUPO 2

Salina, via s.c. (50 µL) Formalina 5%, via s.c. (50 µL)

•

Medidas da latência de retirada da cauda em 30 min e 24 h

• Medidas dos parâmetros comportamentais em campo aberto, imediatamente após (0

min) e depois de 15 min e 24 h da administração do tratamento

Tabela 4. Medidas dos parâmetros comportamentais em estudo, obtidas

imediatamente antesda administração subcutânea desolução deformalina a5% (50µL) ou

soluçãosalina(50µL)navibrissadireitadosratos,emtestedetail‐flickeduranteaobservação

emcampoaberto.Dadosexpressoscomomédia±DPM.



Grupos



Latênciade

retiradada

cauda(s)

1



Númerode

cruzamentos

1

Númerode

respostasde

orientação

1

Tempogastoem

reflexodeauto‐

limpeza(s)

1



Salina(n=10) 4,45±1,20 39,60±26,87 18,20±9,61 29,09±17,94

Formalina(n=10) 4,16±0,99 46,10±16,99 23,70±9,12 38,12±24,51

1

TestetdeStudentparaamostrasindependentes,P>0,05.

Para a análise da resposta nociceptiva ao longo do tempo, por meio da medida da

latência do reflexo de retirada da cauda, utilizou‐se ANOVA de medidas repetidas. Não se

observaramdiferenças estatisticamente significativas nacomparação entre os tempos, entre

osgrupos

ounainteraçãoentretemposegrupos(F=0,09paraostempos,P=0,77;F=0,99para

osgrupos,P=0,33;F=3,05parainteraçãoentretemposegrupos,P=0,09)(Figura12).



Figura12.Latênciaderetiradadacaudaimediatamenteantes (basal) e após (30min

ou24h)aadministraçãosubcutâneadesoluçãodeformalinaa5%(50µL)ousalina(50µL),na

vibrissadireitadosratos.Dadosexpressoscomomédia±DPM.

Ausência de diferenças significativas entre grupos, tempos

ou interação grupos x

tempos (ANOVA de medidas repetidas; F=0,99 para grupos, P=0,33; F=0,09 para tempos,

P=0,77;F=3,05parainteraçãotemposxgrupos,P=0,09).



Basal

Paraaanálisedecomportamentosemcampoabertoaolongodotempo,foiutilizada

ANOVA de medidas repetidas, seguida do teste de comparações múltiplas de Bonferroni

quando indicado. Por meio daquela, observou‐se redução significativa do número  de

cruzamentos com o decorrer do tempo, em comparação com a medida basal (ANOVA

 de

medidas repetidas; F=82,135, P=0,0001). Não se observaram diferenças significativas na

comparaçãoentreosgruposouquantoàinteraçãoentreostemposeosgrupos  (ANOVAde

medidas repetidas; F=0,09 para grupos, P=0,77; F=2,50 para interação  tempos  x grupos,

P=0,13). Verificou‐se que, em todos os tempos obtidos após

 a administração do tratamento

proposto, o número de cruzamentos mostrou‐se diferente daquele considerado  como basal

(teste de comparações múltiplas de Bonferroni, P=0,0001). As medidas desse parâmetro,

obtidasimediatamenteapósaadministraçãodostratamentos(0minuto)eem24horas,não

diferiram entre si (teste de comparações múltiplas de Bonferroni,

 P=0,48), mas ambas

mostraram‐se significativamente diferentes daquelas obtidas aos 15 minutos (teste de

comparações múltiplas de Bonferroni, P=0,001 e P=0,042 respectivamente)(Figura 13).

Observou‐se,assim,reduçãogradualdoscruzamentosemcampoaberto,apósaadministração

dequaisquerdostratamentospropostos,porpelomenos24horas,sendomaisacentuada

aos

15minutos.

Quantoaonúmerodeorientaçõesespaciaisobservadasemcampoaberto,evidenciou‐

se que essas medidas variaram unicamente em função do tempo, não havendo diferenças

significativas entre os gru pos ou na interação entre tempos  e grupos (ANOVA de medidas

repetidas; F=71,55 para os tempos, P=0,0001; F=0,99 para os

 grupos, P=0,33; F=2,16 para

interaçãotemposxgrupos,P=0,16).Observou‐sequeasrespostasdeorientaçãoespacial,em

ambos os grupos, reduziram ao longo do tempo, diferindo significativamente, em todos os

momentos avaliados, daquelas obtidas no tempo basal (teste de comparações múltiplas de

Bonferroni,P=0,0001).Observou‐se,ainda,que

amedidadesseparâmetroobtida15mi nutos

após a administração dos tratamentos propostos diferiu significativamente daquelas obtidas

nos tempos 0 minuto e 24 horas (teste de comparações múltiplas de Bonferroni, P=0,002 e

P=0,01respectivamente)(Figura14).



Figura 13. Número de cruzamentos em campo aberto antes (basal), imediatamente

após(0min)edepoisde15mine24hdaadministraçãosubcutâneadeforma linaa5%(50µL)

ousoluçãosalina(50µL)navibrissadireitadosratos.Dadosexpressoscomomédia±DPM.

Diferença significativa entre

os tempos e ausência de diferença significativa entre

gruposou interação  temposx grupos(ANOVAde medidasrepetidas; F=82,135paratempos,

P=0,0001;F=0,09paragrupos,P=0,77;F=2,50parainteraçãotemposxgrupos,P=0,13).

*Diferença significativa em relação às medidas basais e àquelas obtidas aos 15 min

(testedecomparações

múltiplasdeBonferroni,P≤0,04),independentementedotratamento 

recebido.**Diferença significativa em relação a todas as demais medidas (teste de

comparaçõesmúltiplasdeBonferroni,P≤0,04).



TambémutilizandoANOV Ademedidasrepetidas paraaavaliaçãodotempogastoem

reflexo de auto‐limpeza (grooming), observou‐se diferença significativa de

comportamento

entre os grupos salina e formalina, não se observando  o mesmo na comparação entre os

temposounainteraçãoentretemposegrupos(F=22,29paraosgrupos,P=0,0001;F=0,11para

ostempos,P=0,75;F=0,18parainteraçãotemposxgrupos,P=0,67).Logo apósaadministração

subcutâneadeformalina, o

períodogasto emauto‐limpezaaumentou demodosignificati vo,

permanecendo assim por pelo menos 15 minutos (teste de comparações múltiplas de

Bonferroni, P=0,0001). As medidas obtidas  nesses dois momentos (0 e 15 minutos)  não

Basal 0 min 15 min 24 h

diferiram entre si (teste de comparações múltiplas de Bonferroni, P>0,05). Em avaliação

realizada após 24 horas, os valores do grupo formalina retornaram aos níveis das medidas

basaisedogruposalina(testedecomparaçõesmúltiplasdeBonferroni,P>0,05).Asmedidas

dereflexodeauto‐limpezaobtidasnogrupoquerecebeu

soluçãosalinanãodiferiramentresi

aolongodotempo(Figura15).



Figura14.Númeroderespostasdeorientaçãoemcampoabertoantes(basal)eapós

(0 min, 15 min ou 24 h) a administração subcutânea de formalina a 5% (50 µL) ou solução

salina(50µL)navibrissadireitadosratos.Dadosexpressoscomomédia±DPM.

Diferença significativa entre os

tempos e ausência de diferença significativa entre

gruposouinteraçãotem posxgrupos(ANOVAdemedidasrepetidas;F=71,55paraostempos,

P=0,0001;F=0,99paraosgrupos,P=0,33;F=2,16paraainteraçãotemposxgrupos,P=0,16).

*Diferença significativa em relação às medidas basais e àquelas obtidas aos 15 min

(teste

decomparaçõesmúltiplasdeBonferroni,P≤0,01),independentementedotratamento

recebido.**Diferença significativa em relação a todas as demais medidas (teste de

comparaçõesmúltiplasdeBonferroni,P≤0,01).



Basal 0 min 15 min 24 h



Figura 15. Tempo gasto em reflexo de auto‐limpeza (grooming) em campo aberto

antes(basal)eapós(0min,15minou24h)aadministraçãosubcutâneadeformalinaa5%(50

µL)ousoluçãosalina(50µL)navibrissadireitadosratos.Dadosexpressoscomomédia±DPM.

Diferença significativa entre os grupos e ausência de diferença entre os tempos ou

interação entre grupos  e tempos (ANOVA de me didas repetidas; F=22,29 para os grupos,

P=0,0001;F=0,11paraostempos,P=0,75;F=0,18paraainteraçãotemposxgrupos,P=0,67).

*Diferença significativa em relação ao grupo salina nos tempos

assinalados (teste de

comparações múltiplas de Bonferroni,  P=0,0001) e em relação aos grupos salina e formalina

nosdemaistempos(testedecomparações múltiplasdeBonferroni,P<

0,003).

Basal 0 min 15 min 24 h

EXPERIMENTO 2: AVALIAÇÃO DO PADRÃO TEMPORAL DO REFLEXO DE AUTO‐LIMPEZA

(GROOMING) COMO MEDIDA INDICATIVA DE NOCICEPÇÃO EM RATOS SUBMETIDOS A

MODELODEDOROROFACIALINDUZIDAPORFORMALINASUBCUTÂNEA



 Noexperimento1,dentreosparâmetroscomportamentaisestudados,otempogasto

noreflexodeauto‐limpeza(grooming)foiaquele

quesemostrousensívelàadministraçãode

formalinasubcutânea. Sugere‐se,assim,que estesejaoparâmetro quemelhor representa a

atividadenociceptivatrigeminalnomodelodedororofacialinduzidaporaqueleagente.

No clássico estudo de Clavelou e colaboradores (1989), o reflexo de auto‐limpeza

desencadeadopelaadministraçãode

formalina5%naregiãodolábiosuperiorfoiavaliadopor

período de tempo de 45 minu tos,  em 15 blocos de 3 minutos cada um. A cada 6 minutos,

realizou‐se a aferição de grooming por período de tempo de 3 minutos. Aqueles autores

demonstraram que essa resposta nociceptiva comporta‐se de

 maneira bifásica. Os animais

apresentaramexacerbaçãodoreflexodeauto‐limpeza duranteos3primeiros minutos(fase1)

enotempocompreendidoentre18e42minutos(fase2)apósaadministraçãodotratamento.

No experimento 1  dessa Dissertação, as medidas foram obtidas em duas janelas de

observação:umaentre

0e15minutoseoutraem24horas.

O presente experimento foi, então, delineado com a finalida de de estabelecer o

período de tempo durante o qual o reflexo de auto‐limpeza pode permanecer alterado,

realizando avaliações em maior número de momentos, tanto logo após a administra ção,

quantoemlongoprazo,

oquepoderiarefletirsensibilizaçãodeviasnociceptivas(Yaksh,1999).

Para tal, utilizaram‐se ratos Wistar adultos, com 200 a 300 g de peso corporal,

divididosem2grupos:SALINAeFORMALINA.Ametodologiautilizadafoiamesmaadotadano

experimento 1 (Figura 11). Nos dias do experimento, foram obtidas

as medidas  basais dos

parâmetroscomportamentaisemestudo.Após,foifeitaaadministração,porviasubcutânea,

desoluçãodeformalina5%(50µL)ousoluçãosalina(50µL),nocentrodavibrissadireita.A

seguir,forammensuradasasrespostaspós‐tratamento.

No campo aberto, foi avaliado apenas o tempo gasto com reflexos de auto‐limpeza

(groomings)durante observaçãopor5minutos.Esteparâmetrofoimensuradoimediatamente



antes(basal),15minutos,30minutos,2horas,4horas,24horas,48horas,7e21diasapósa

administração,porviasubcutânea,deformalinaousoluçãosalina.

Além de grooming, também foi feita a avaliação do padrão temporal do  reflexo de

retirada da cauda, com a finalidade de

se verificar se o estímulo nociceptivo continuado,

gerado pela administração de formalina, por via subcutânea, seria capaz  de  ativar vias

medularesnociceptivasrelacionadasàinervaçãotrigeminal.

Paraaavaliaçãodarespostanociceptivaaestímulotérmiconocivo,osanimaisforam

submetidosamedidasdoreflexoderetiradada caudaimediatamenteantes,15

e30minutos,

2horas,4horas,24e48horas,7e21diasapósaadministraçãodostratamentospropostos.

Nesse experimento, não foi observada qualquer diferença estatisticamente

significativaentreosgruposSALINAeFORMALINAquantoàsmedidasbasaisdosparâmetros

comportamentais avaliados, seja na observação em campo aberto,

seja no teste de tail‐flick

(TestetdeStudentparaamostrasindependentes,P>0,05)(Tabela5).



Tabela 5. Latência de retirada  da  cauda e tempo gasto em auto‐limpeza em campo

aberto,imediatamenteantes(basal)daadministraçãosubcutâneadeformalina5%(50µL)ou

soluçãosalina(50µL)navibrissa

direitaderatos.Dadosexpressoscomomédia±DPM.



Grupos Tempogastoemreflexode

auto‐limpeza(s)

1

Latênciapararetiradada

cauda(s)

1



Salina(n=9) 14,03±10,19 5,01±1,09

Formalina(n=9) 13,67±06,06 5,11±1,23

1

TestetdeStudentparaamostrasindependentes,P>0,05.



Por meio de ANOVA de medidas repetidas, verificou‐se que, nas observações

realizadas nas primeiras 4 horas após a administração dos tratamentos em estudo, o 

comportamento de auto‐limpeza apresentou diferenças significativas, ao  se compararem os

temposeosgrupos,nãohavendo interaçãoentreambos (F=10,92 para  os tempos,P=0,004;



F=6,34paraosgrupos,P=0,02;F=0,98paraainteraçãotemposxgrupos,P=0,34).

Nacomparaçãodosgruposestudados,asmedidasdotempogastoemauto‐limpeza15

minutos após a  administração de formalina mostraram‐se estatisticamente significativas

daquelas referentes aos períodos basal, 2  horas e 4 horas, nos animais

que receberam esse

tratamento (teste de comparações múltiplas de Bonferroni; P=0,001, P=0,001 e P=0,005, 

respectivamente). As medidas obtidas aos 15 minutos no grupo que recebeu formalina

tambémdiferiramsignificativamentedaquelasaferidasnogruposalina,emtodos osperíodos

propostos–basal,15minutos,30minutos,2horas e4

horas(testedecomparaçõesmúltiplas

deBonferroni;P=0,002,P=0,006,P=0,001,P=0,001eP=0,001,respectivamente).Sendo assim,

15 minutos após a administração do agente irritante, os animais despenderam mais tempo

realizandocomportamentosdeauto‐limpeza,emcomparaçãocomoscontroles(Figura16).

Na comparação das medidas obtidas ao longo

do tempo, independente mente do

grupo estudado, constatou‐se que os valores referentes aos 15 minutos  diferiram

significativamente daqueles referentes ao momento basal, às 2 horas e às 4 horas (teste de

comparaçõesmúltiplasdeBonferroni;P=0,02,P=0,006eP=0,02,respectivamente)(Figura16).



Figura 16. Tempo gasto em reflexo de auto‐limpeza no campo aberto, duran te

observaçãorealizadanasprimeiras4horasapósaadministraçãosubcutâneadeformalina5%

(50 µL) ou solução salina (50 µL) na vibrissa direita dos ratos. Dados expressos em média ±

DPM.

Diferençasignificativaentretempose

gruposeausênciadeinteraçãotemposxgrupos

(ANOVA de medidas repetidas; F=10,92 para tempos, P=0,004; F=6,34 para grupos, P=0,02;

F=0,98paraainteraçãotemposxgrupo s,P=0,34).

*Diferença significativa em relação aos grupos salina, em todos os demais tempos

avaliados(teste decomparaçõesmúltiplas de Bonferroni,P<

0,006),eemrelaçãoaos grupos

formalina, nos tempos basal, 2 h e 4 h (teste de comparações múltiplas de Bonferroni,

0,006).



Por meio de ANOVA de medidas repetidas, verificou‐se que, nas observações

realizadasemperíodomaisprolongadodetempo,estendendo‐sede1dia(24horas)a14dias,

após a administração dos tratamentos em estudo, o comportamento de auto‐limpeza não

diferiusignificativamente, aosecompararem ostempos

eos grupos e seavaliar a interação

entre ambos (F=4,29 para os tempos, P=0,05; F=1,82 para os grupos, P=0,19; F=0,03 para a

interaçãotemposxgrupos,P=0,87)(Figura17).



Figura 17. Tempo gasto no comportamen to  de auto‐limpeza em campo aberto,

medido antes (basal) e após 24 h, 48 h, 7 dias e 14 dias da administração subcutânea de

formalinaa5%(50µL)ousoluçãosalina(50µL)navibrissadireitadosratos.Dadosexpressos

emmédia±

DPM.

Ausênciadediferençasignificativaentretempos, entregruposenainteraçãotemposx

grupos (AN OVA de medidas repetidas; F=4,29 para tempos,  P=0,05; F=1,82 para grupos,

P=0,19;F=0,03paraainteraçãotemposxgrupos,P=0,87).



Na análise das latências de retirada da cauda aferidas  nas primeiras 4 horas após

 a

administraçãodeformalinaousoluçãosalina,observaram‐sediferenças entreostempos,mas

nãoentreosgruposounainteraçãoentreambos(ANOVAdemedidasrepetidas;F=8,74para

ostempos, P=0,009;F=0,16 paraos grupos,P=0,70; F=0,07 paraa interação entre tempose

grupos,P=0,80)(Figura18).



Figura 18.Latência do reflexode retirada da cauda (tail‐flick latency) imediatamente

antes (basal) e em diferentes momentos durante as primeiras 4 horas seguintes à

administração subcutânea de formalina a 5% (50 µL) ou solução salina (50 µL) na vibrissa

direitadosratos.Dadosexpressosemmédia±

DPM.

Diferençasignificativa entretempos,mas nãoentre gruposou na interação grupos x

tempos (ANOVA de medidas repetidas; F=8,74 para os tempos, P=0,009; F=0,16 para os

grupos,P=0,70;F=0,07paraainteraçãoentretemposegrupos,P=0,80).

*Diferençasignificativaemrelaçãoaostemposde30mine2

h,independentemente

dos grupos avaliados (teste de comparações múltiplas de Bonferroni, P=0,04 e P=0,01,

respectivamente)** Diferença significativa em relação ao basal, independentemente dos

gruposavaliados(testedecomparaçõesmúltiplasdeBonferroni,P=0,004).



Na comparação das medidas obtidas ao longo do tempo, independentemente do

grupoestudado,constatou‐seque

aslatênciasderetiradadacaudaaos15minutosdiferiram

significativamente daquelas referentes aos 30 minutos e 2 horas (teste de comparações

múltiplas de Bonferroni; P=0,038 e P=0,011, respectivamente). As latências obtidas após 2

horasde tratamentomostraram‐seestatisticamente diferentesdaquelas consideradasbasais

(testedecomparaçõesmúltiplasdeBonferroni;

P=0,004)(Figura18).

Avaliando‐seasmedidasdelatênciaderetiradadacaudaemperíododetempopara

mais prolongado, estendendo‐se de 1 dia (24 horas) a 14 dias após a administração

subcutânea de formalinaa 5%ousolução salina,  nãose observaram diferençassignificativas

entreostempos,entreosgruposounainteraçãoentregruposetempos(ANOVAdemedidas

repetidas; F=0,05 para tempos, P=0,82; F=0,01 para grupos, P=0,94; F=0,33 para a interação 

temposxgrupos,P=0,58)(Figura19).



Figura19.Latênciadereflexoderetiradadacaudaimediatamenteantes(basal),24h,

48h,7e14diasapósaadministraçãosubcutâneadeformalina5%(50µL)ousoluçãosalina

(50µL)navibrissadireitaderatos.Dadosexpressoscomomédia±DPM.

Ausência de diferenças significativas entre

grupos, tempos ou interação grupos  x

tempos (ANOVA de medidas repetidas; F=0,05 para tempos, P=0,82; F=0,01 para gru pos,

P=0,94;F=0,33paraainteraçãotemposxgrupos,P=0,58).



EXPERIMENTO 3: PERFIL DO REFLEXO DE RETIRADA DA CAUDA (TAIL‐FLICK LATENCY) E DO

REFLEXO DE AUTO‐LIMPEZA (GROOMING) APÓS A ADMINISTRAÇÃO SISTÊMICA DE

NITROGLICERINACOMOMODELOEXPERIMENTALDECEFALÉIA



 Cefaléia vascular, um dos  tipos de dores cranianas, é uma das principais reações 

adversas observadas com a administração

 de nitroglicerina, fármaco vasodilatador utilizado

por pacientes no tratamento de cardi opatia isquêmica. A cefaléia induzida por esse agente

possivelmentedecorredesuametabolizaçãoaóxidonítrico(Myers,1999).

Estudos demonstram a existência de forte correlação entre os nitratos orgânicos,

comonitroglicerina,eafisiopatologiadasdoresdecabeça(Olese net

al.,1993;Iversenetal.,

1993).Paralelamente,háevidênciasdequeaquelepotentevasodilatadorpodeserativadorde

viasnociceptivastrigeminais(Kerinetal.,2001;Myersetal.,1999;TassorellieJoseph,1995).

O reflexo de auto‐limpeza é considerado como um dos melhores parâmetros

comportamentaisparaaavaliaçãode

nocicepçãoagudaorofacialapósestímuloquímicoagudo

(Anderson et al., 2003). Com base nisso e na carência de estudos dedicados à avaliação de

padrõesde comportamentoemmodelosde ativaçãosistêmicado sistematrigeminovascular

(STV),pormeiodouso denitratosorgânicos,delineou‐seesseexperimentocomafinalidade

de

avaliaraspectoscomportamentaisrelacionadosaosmesmos.

 Para tal, foram utilizados ratos Wistar adultos, com 200 a 300 g de peso corporal,

divididosemdoisgrupos:NITROGLICERINA(n=20)eVEÍCULO(n=20).Ini cialmente,osanimais

forampesadosealeatoriamentealocadosemumdosdoisgrupos.Nosdiasdoexperimento,

foram obtidas as medidas basais dos parâmetros comportamentais em estudo – reflexo de

auto‐limpeza (grooming) e latênciade retirada da cauda (tail‐ flick latency). Após, foi feita a

administração,porviaintraperitoneal(i.p.),denitroglicerinaa0,05%(5mg/ml),nadosede10

mg/kg, ou veículo (30% de etanol, 30% de propilenoglicol, 40% de água). A seguir, foram

mensuradasasrespostaspós‐tratamento(Figura20).

Paraaavaliaçãodarespostadeauto‐limpeza(grooming),osanimaisforamcolocados 

em campo aberto e aquele parâmetro foi mensurado imediatamente antes (basal) e em

distintos períodos após a administração intraperitoneal de nitroglicerina ou veículo – 5

minutos,30minutos,1hora,2horas,4horas,24horase48horas(Figura20).

Paraaavaliaçãodarespostanociceptivaaoestímulotérmiconocivo(tail‐flicklatency),

osanimaisforamsubmetidosàsmedidasdoreflexoderetiradadacauda imediatamenteantes

(basal),30minutos,24horas e48horasapósaadministração intraperitonealdenitroglicerina

ouveículo(Figura20).



Figura 20. Organização geral do experimento 3. Esquema de administração do

tratamento proposto (nitroglicerina ou veículo) e mensuração dos parâmetros

comportamentaisemestudo.



Não foi observada qualquer diferença estatisticamente significativa entre os grupos

VEÍCULO e NITROGLICERINA quanto às medidas basais dos parâmetros comportamentais

avaliados,sejanaobservaçãoemcampoaberto,sejanotestedetail‐flick(TestetdeStudent

paraamostrasindependentes,P>0,05)(Tabela6).



Vinteequatrohorasantesdoexperimento

• Alocaçãoaleatóriadosanimaisnosgruposexperimentais

• Habituaçãoaoaparelhoderetiradadacauda(tail‐flick)

Diadoexperimento

• Medidasbasaisdalatênciaderetiradadacauda

• Medidasbasaisdotempogastoemreflexodeauto‐limpeza(grooming)

Grupo2

Veículo

Grupo1

Nitroglicerina

Tempogastoemreflexodeauto‐limpeza

(5min,30min,1h,2h,4h,24he48h)

Latênciaderetiradadacauda

(30min,24he48h)

Tabela6.Latênciaderetiradadacaudaetempogastoemreflexodeauto‐limpezaem

campoaberto,imediatamenteantes(basal)daadministraçãointraperitonealdenitroglicerina

0,05%(10mg/mL)ouveículo(30%deetanol,30%depropile noglicol,40%deágua)emratos.

Dadosexpressoscomomédia±DPM.



Grupos Tempogastoemreflexodeauto‐

limpeza(s)

1

Latênciapararetiradada

cauda(s)

1



Veículo(n=20) 13,76±05,54 5,07±1,58

Nitroglicerina(n=20) 14,05±13,00 4,72±1,72

1

TestetdeStudentparaamostrasindependentes,P>0,05.



Na análise das medidas de tempo gasto em reflexo de auto‐limpeza (grooming)

duranteasprimeiras4horasapósaadministraçãodenitroglicerinaouveículo,observou‐sea

existência de diferenças significativas entre os tempos, não entre os grupos ou na interação

destescomostempos(ANOVAdemedidasrepetidas;F=6,61para ostempos,P=0,01;F=0,55

paraosgrupos,P=0,46;F=0,125paraainteraçãotemposxgrupos,P=0,73)(Figura21).

Verificou‐sequeasmedidasobtidasaos5minutosforamsignificativamentediferentes

dasbasais (testedecomparaçõesmúltiplasdeBonferroni,P=0,007)edaquelasreferentesaos

temposde1hora,2horase4horas(testedecomparaçõesmúltiplas deBonferroni,P=0,005,

P=0,0001 e P=0,013, respectivamente). O tempo gasto em reflexo  de auto‐limpeza na

avaliaçãode30minutosfoisignificativamentediferentedaquelemensuradoem2horas(teste

decomparaçõesmúltiplasdeBonferroni, P=0,014)(Figura 21).

Estudando‐se o tempo gasto no comportamento de auto‐limpeza (grooming), tendo

decorridointervalomaislongodaadministraçãodenitroglicerinaouveículo–24horasou48

horas,nãoseobservouqualqueralteraçãosignificativa(ANOVAdemedidasrepetidas;F=0,11

paraostempos,P=0,74;F=1,66paraosgrupos,P=0,21;F=0,07paraainteraçãoentretempos

egrupos,P=0,80)(Figura22).



Figura 21. Tempo gasto em comportamento de auto‐limpeza (grooming) no campo

aberto, imediatamente antes (basal) e após 5 min, 30 min, 1 h, 2 h e 4 h da administração

intraperitonealdenitroglicerinaa 0,05%(10mg/kg)ouveículo.Dadosexpressoscomomédia±

DPM.

Diferença estatisticamente significativa

na comparação entre os tempos, mas não

entreosgrupos ounainteração gruposxtem pos(ANOVAdemedidasrepetidas;F=6,61para

ostempos,P=0,01;F=0,55para osgrupos,P=0,46;F=0,12paraainteraçãotemposxgrupos,

P=0,73).

*Diferença si gnificativa em relação aos tempos basal,  1 h, 2 h

e 4 h (teste de

comparaçõesmúltiplasdeBonferroni,P<

0,013).**Diferençasignificativaemrelaçãoaotempo

de2h(testedecomparaçõesmúltiplasdeBonferroni,P=0,01).



 Figura 22. Tempo gasto em comportamento de auto‐limpeza (grooming) no campo

aberto,imediatamenteantes(basal)eapósperíodomaisprolongadodeobservação(24he48

h),apartir daadministraçãointraperitonealdenitroglicerinaa 0,05%(10mg/kg)ouveículo.

Dadosexpressoscomomédia±DPM.

Ausência de

 diferença estatisticamente significativa entre tempos, grupos ou na

interaçãogruposxtempos(ANOVAdemedidasrepetidas;F=0,11paratempos,P=0,74;F=1,66

paragrupos,P=0,21;F=0,07paraainteraçãotemposxgrupos,P=0,80).

Basal

Nesse experimento, as medidas das latências de retirada da cauda também não se

mostraram diferentes entre si (ANOVA de medidas repetidas; F=3,50 para tempos, P =0,07;

F=1,45paragrupos,P=0,24;F=0,79paraainteraçãotemposxgrupos,P=0,38)(Figura23).



Figura 23. Latência de retirada da cauda (tail‐flick latency) imediatamente antes

(basal),depoisde30mineapósperíodomaisprolongadodeobservação(24he48h),apartir

da administração intraperitoneal de nitroglicerina a 0,05% (10 mg/kg) ou veículo em ratos. 

Dadosexpressoscomomédia±

DPM.

Ausência de diferença estatisticamente significativa entre tempos, grupos ou na

interaçãogruposxtempos(ANOVAdemedidasrepetidas;F=3,50paratempos,P=0,07;F=1,45

paragrupos,P=0,24;F=0,79paraainteraçãotemposxgrupos,P=0,38).

EXPERIMENTO4:AVALIAÇÃODOMODELODEDOROROFACIALINDUZIDAPELAFORMA LINA

ASSOCIADO AO MODELO EXPERIMENTAL DE CEFALÉIA, INDUZIDO PELO USO SISTÊMICO DE

NITROGLICERINA – PROPOSIÇÃO COMO MODELO COMPORTAMENTAL DE INTEGRAÇÃO

NOCICEPTIVACENTRALEPERIFÉRICADOSISTEMATRIGEMINAL.

NosdoisprimeirosexperimentosdessaDissertação,observou‐sequeotempoemque

 animais permaneceram realizando o comportamento de grooming foi o melhor padrão

comportamental relacionado à atividade nociceptiva após estimulação dolorosa na região

inervadapelonervotrigêmeo.

Modelos experimentais com seres humanos demonstraram que compostos nitrosos,

comoanitroglicerina,quandoutilizadossistemicamente,sãocapazesdedesencadearcrisesde

cefaléia(Olesenetal.,

1993;Iversenetal.,1993).Emanimaisdelaboratório,anitroglicerinaé

capazdeinduziralteraçõesbioquímicasehisto‐fisiológicas,comoaumentodaexpressãodec‐

foseaumentodaatividadedeGMPc,porémopadrãocomportamentalnociceptivoresultante

destas alterações tem sido pouco explorado (Torfgard et al., 1989;

Torfgard e Ahnler, 1991;

TassorellieJoseph,1995a;Tassorellietal.,2004).Noexperimento3dessaDissertação,nãose

observou padrão comportamental diferenciado após a administração de nitroglicerina (na

doseestudada)ouveículo,tantonaavaliaçãodereflexodeauto‐limpeza,quantodalatência 

deretiradadacauda.

Com base nesses dados, delineou‐se um quarto experimento, com a finalidade  de

avaliar os reflexos de auto‐limpeza e de retirada da cauda (como medidas de resposta

nociceptiva)emnovomodelopropostopelosautoresdessaDissertaçãoparaestudodedores

orofaciais e cranianas. O mesmo foi constituído pela associação de um modelo de ativação

periférica do sistema trigeminal (dor orofacial induzida pela administração subcutânea de

formalina) com outro de ativação  sistêmica (pela administração intraperitoneal de

nitroglicerina).

Para tal, foram utilizados ratos Wistar adultos, com 200 a 300 g de peso corporal,

divididosemseisgrupos,conformedescritoaseguir. 

Vinte e quatro horas antes do início do experimento, os animais foram pesados e

aleatoriamentealocadosemcadaumdosgrupos.Foram,ainda,familiarizadoscomoaparelho

demedidadoreflexoderetiradadacauda,conformedescritoemmaterialemétodos.

O procedimento experimental foi dividido em três semanas. No primeiro dia da

primeira semana (Dia 1 – início do experimento), foram obtidas as medidas basais dos

parâmetros comportamentais emestudo – reflexode auto‐limpeza (grooming)e latência de

retiradadacauda(tail‐ flicklatency ).Logoapós,foifeitaaadministração,porviasubcutânea

(s.c.),desoluçãodeformalina5%(50µL)ousoluçãosalina(NaCl0,9%)(50µL),nocentrodo

coximdireitodasvibrissas.Aseguir,foirealizadaaadministração,porviaintraperitoneal(i.p.),

denitroglicerinaa0,05%(5mg/mL),nadosede10mg/kg,ouveículo(30%deetanol,30%de

propilenoglicol, 40% de água). Foram mensuradas, então, as respostas pós‐tratamento da

primeirasemana(Figura24).

Noprimeirodiadecadaumadasduassemanasseguintes,correspondendoaosdias8

e15doexperimento,osanimaisreceberam,porviaintraperitoneal,nitroglicerinaouveículo,

deigualmodoaodaprimeirasemanaerespeitandoosmesmosgruposestabelecidosnaquele 

momento(Figura21).Obtiveram‐se,assim,osgruposexperimentaisaseguir.

GRUPO 1 – SS – Os animais  receberam solução salina, por via s.c., no dia 1 do

experimento,esoluçãosalina,porviai.p.,nosdias1,8e15.

GRUPO 2 – SV– Os animais receberam solução salina, por via s.c., no dia 1 do

experimento,eveículo,porviai.p.,nosdias1,8e15.

GRUPO 3 – SN – Os animais receberam solução salina, por via s.c., no dia 1 do

experimento,enitroglicerina,porviai.p.,nosdias1,8e15.

GRUPO4–FS–Osanimaisreceberamsoluçãodeformalina5%,porvias.c.,nodia1

doexperimento,esoluçãosalina,porviai.p.,nosdias1,8e15.

GRUPO5–FV–Osanimaisrecebera msoluçãodeformalina5%,porvia s.c.,nodia1

doexperimento,eveículo,porviai.p.,nosdias1,8e15.

GRUPO6–FN–Osanimaisreceberamsoluçãodeformalinaa5%,porvia s.c.,nodia1

doexperimento,enitroglicerina,porviai.p.,nosdias1,8e15.

Emtodasastrêssemanas,antesdeiniciaroexperimento daqueleperíododetempo,

aferiu‐se o peso de cada animal, assim como  as medidas basais dos  reflexos de retirada da

caudaedeauto‐limpeza.

Para a avaliação da resposta nociceptiva a um estímulo térmico nocivo (tail‐flick), os

animais foram submetidos a medidas do reflexo de retirada da cauda imediatamente antes

(basal), 15 minutos,30 minutos, 2 horas,4 horas, 24horase 48horas após aadministração

dos

tratamentospropostos(Figura24).

Para a avaliação do comportamento de auto‐limpeza  (grooming), os animais foram

colocados para observação em campo aberto por período 5 minutos. Aquele parâmetro foi

mensuradoimediata menteantes(basal),15minutos,30minutos,2 horas,4horas,24horase

48horasapósaadministraçãodostratamentospropostos(Figura24).



Figura 24. Organização geral do experi mento  4. Esquema de administração dos tratamentos

propostoseaferiçãodosparâmetroscomportamentaisemestudo.



Não foi observada qualquer diferença estatisticamente signifi cativa  entre os seis

gruposquantoàsmedidasbasaisdocomportamentodeauto‐limpeza,naavaliaçãorealizada

no primeiro dia da primeira semana de experimento (ANOVA de uma via; F=0,40, P=0,85).

Vinte e quatro horas antes do início do experimento

• Alocação aleatória dos animais nos grupos experimentais

• Habituação ao aparelho de retirada da cauda (tail-flick)

Grupo 1 -

Tempo gasto em reflexo de auto-limpeza

Latência de retirada da cauda

15 min, 30 min, 2 h, 4 h, 24 h e 48 h

Grupo 2 -

Grupo 3 -

Grupo 4 -

Grupo 5 -

Grupo 6 -

Primeiro dia das segunda e terceira semanas de experimento (dias 8 e 15 – semanas 2 e 3)

• Medidas basais da latência de retirada da cauda (tail-flick latency)

• Medidas basais do tempo gasto em reflexo de auto-limpeza (grooming)

• Administração de nitroglicerina (10 mg/kg) (N) ou veículo (V), por via intraperitoneal

Grupo 1 -

Grupo 2 -

Grupo 3 -

Grupo 4 -

Grupo 5 -

Grupo 6 -

Tempo gasto em reflexo de auto-limpeza

Latência de retirada da cauda

15 min, 30 min, 2 h, 4 h, 24 h e 48 h

Primeiro dia da primeira semana de experimento (dia 1 – semana 1)

• Medidas basais da latência de retirada da cauda

• Medidas basais do tempo gasto em reflexo de auto-limpeza

• Administração dos tratamentos propostos: formalina 5% (F) ou solução salina (S), por via

subcutânea, e nitroglicerina (10 mg/kg) (N) ou veículo (V), por via intraperitoneal

Idêntico resultado foi observado na avaliação das medidas  basais da latência de retirada da

caudanotestederetiradadacauda(ANOVAdeumavia;F=1,38,P=0,24)(Tabela7).

Tabela7.Tempogastoemreflexodeauto‐limpezaelatênciaderetiradadacaudaem

campo aberto, imediatamente antes (basal) da administração subcutânea  de solução de

formalina 5% (50 µL) ou solução salina (50

µL) na vibrissa direita e da administração

intraperitoneal de nitroglicerina 0,05% (10 mg/mL) ou veículo (30% de etanol, 30% de

propilenoglicol, 40% de água), no primeiro dia da primeira semana de experimento. Dados

expressoscomomédia±DPM.



Grupos Tempogastoemreflexode

auto‐limpeza(s)

1

Latênciapararetirada

dacauda(s)

2



Salina/Salina(n=12) 18,37±13,79 4,86±1,18

Salina/Veículo(n=12) 19,60±11,81 4,95±1,01

Salina/Nitroglicerina(n=12) 14,30±14,39 5,80±2,06

Formalina/Salina(n=12) 17,78±09,78 5,16±1,04

Formalina/Veículo(n=16) 15,79±07,05 4,75±0,94

Formalina/Nitroglicerina(n=15) 16,91±05,33 5,59±1,43

1

ANOVAdeumavia;F=0,40,P=0,85.

2

ANOVAdeumavia;F=1,38,P=0,24.



Na análise das medidas de tempo gasto em reflexo de auto‐limpeza (grooming),

obtidas nos períodos basais de cada  uma das  três semanas de experim ento, observou‐se a

existência de diferenças significativas entre as semanas de tratamento (tempos), mas não

entreosgruposounainteraçãodestescomostempos(ANOVAdemedidas repetidas;F=9,83

para os tempos, P=0,002; F=0,73 para os grupos, P=0,60; F=0,65 para a interação tempos x

grupos,P=0,66)(Figura25).

Os tempos despendidos no comportamento de auto‐limpeza, no período basal da

segunda e da terceira semanas, mostraram‐se similares entre si (teste de comparações

múltiplas de Bonferroni; P=0,20), mas foram significativamente diferentes daqueles

observados na primeira semana de experimento (teste de comparações múltiplas de

Bonferroni;

P=0,002eP=0,007,respectivamente)(Figura25).



Figura 25. Tempo gasto em comportamento de auto‐limpeza (grooming) em campo

aberto, nos períodos basais de avaliação, durante as três semanas de experimento. Dados

expressoscomomédia±DPM.

SS:Salina,vias.c.,nodia1 doexperimento(D1),esalina,viai.p.,nosdias1,8e

15(D1,

D8eD15).SV:Salina,via s.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.SN:Salina,vias.c.,

emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.FS:Formalina5%,vias.c.,emD1,esalina,via

i.p.,emD1,D8eD15.

FV:Formalina5%,vias.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.

FN:Formalina5%,vias.c.,emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.

Diferença estatisticamente significativa na comparação entre as semanas (tempos),

masnãoentregruposounainteraçãogrupos x

tempos(ANOVAdeme didasrepetidas;F=9,83

para tempos,  P=0,002; F=0,73paragrupos, P=0,60; F=0,65 para interação tempos xgrupos,

P=0,66).

*Diferençasignificativaemrelaçãoàprimeirasemana,independe ntementedosgrupos

estudados(testedecomparaçõesmúltiplasdeBonferroni,P<

0,007).



Utilizando‐se ANOVA de medidas repetidas para a análise do tempo despendido em

comportamento de auto‐limpeza, 15 minutos após a  administração dos tratamentos

estipulados, observaram‐se diferenças significativas entre as semanas estudadas (tempos),

entreos gruposena interaçãoentre estes eos tempos (F=15,82paraos tempos,P=0,0001;

F=4,90 para os grupos,P=0,001; F=3,43 para a interação entre tempos e grupos, P=0,009)

(Figura26).

Na comparação entre as semanas, independentemente dos grupos testados, houve

redução significativa do tempo gasto emauto‐limpeza nasegun da e na terceirasemanas de

experimento,emrelaçãoàprimeira(testedecomparaçõesmúltiplasdeBonferroni;P=0,0001

eP=0,001,respectivamente).Nãoseobservoudiferençanaqueleparâmetrocomportamental

ao se compararem as medidas das segunda e terceira semanas (teste de comparações

múltiplasdeBonferroni;P=0,10)(Figura26).

Na comparação entre os grupos testados, independentemente das semanas de

experimento,osanimaisquereceberamformalina,porviasubcutânea,esoluçãosalinaporvia

intraperitoneal(Grupo4–FS),despenderammaistemporealizandocomportamentodeauto‐

limpeza,emrelaçãoàquelesquereceberamosseguintestratamentos:(a)soluçãosalina,por

via subcutânea, e veículo, por via intraperitoneal (Grupo 2 – SV) (teste de comparações

múltiplasdeBonferroni;P=0,012);(b)soluçãosalina,porviasubcutânea,enitroglicerina,por

viaintraperitoneal(Grupo3–SN)(testedecomparaçõesmúltiplasdeBonferroni;P=0,002);(c)

formalina,porviasubcutânea,enitroglicerina,porviaintraperitoneal(Grupo6–FN)(testede

comparaçõesmúltiplasdeBonferroni;P=0,03)(Figura26).

Na comparaçãono período de 15 minutos da administração, em que selevaram em

conta os grupos e as semanas de experimento (interação entre essas duas variáveis),

observou‐se que, na primeira semana, os animais que receberam formalina, por via

subcutânea, e solução salina, por via intraperitoneal (Grupo 4 – FS), despenderam

significativamente mais tempo realizando comportamento de auto‐limpeza, em rela ção

àqueles alocados em todos os demaisgrupos estudados(teste decomparações múltiplasde

Bonferroni;P<0,02),excetoosdogrupoquerecebeuformalina,porviasubcutânea,eveículo,

porviaintraperitoneal(Grupo5–FV)(testedecomparaçõesmúltiplasdeBonferroni;P=0,06).

Nassegundaeterceirasemanas,todososgruposdiferiramsignificativamenteapenasdogrupo

querecebeuformalina,porviasubcutânea,esoluçãosalina,porviaintraperitoneal(Grupo4–

FS)naprimeirasemana(testedecomparaçõesmúltiplasdeBonferroni;P=0,0001)(Figura26).



Figura 26. Tempo gasto em comportamento de auto‐limpeza (grooming) em campo

aberto,15minutosapósaadministraçãodostratamentospropostos,duranteastrêssemanas

deexperimento.Dadosexpressoscomomédia±DPM.

SS:Salina,vias.c.,nodia1 doexperimento(D1),esalina,viai.p.,nosdias

1,8e15(D1,

D8eD15).SV:Salina,via s.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.SN:Salina, vias.c.,

emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.FS:Formalina5%,vias.c.,emD1,esalina,via

i.p.,emD1,

D8eD15.FV:Formalina5%,vias.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.

FN:Formalina5%,vias.c.,emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.

Diferença estatisticament e significativa na comparação entre semanas (tempos),

gruposenainteraçãogruposxtempos

(ANOVAdemedidas repetidas;F=15,82paratempos,

P=0,0001;F=4,90paragrupos,P=0,001;F=3,43parainteraçãotemposxgrupos,P=0,009).

*Diferençasignificativadas2ªe3ª semanasemrelação à1ª,independentementedos

grupos estudados (teste de comparações múltiplas de Bonferroni, P<

0,001); diferença

significativa de todos os grupos, nas semanas assinaladas, em relação ao grupo FS da 1ª

semanadeexperimento(testedecomparaçõesmúlti plasdeBonferroni,P<

0,0001).

**Diferençasignificativadogrupoassinalado(FS)emrelaçãoaosgruposSV,SNeFN,

independentemente das  semanas avaliadas (teste de comparações múltiplas de Bonferroni,

0,03);diferençasignificativadaquelegrupo(FS)emrelação aosgruposSS,SV,SNeFN,na1ª 

semanadoexperimento(testedecomparaçõesmúltiplasdeBonferroni,P<

0,02).

***Diferençasignificativadogrupoassinalado(FS)emrelaçãoaosgruposSV,SNeFN, 

independentemente das  semanas avaliadas (teste de comparações múltiplas de Bonferroni,

P<0,03).



A análise do tempo gasto no comportamento de auto‐limpeza , no período de 30 

minutosdaadministração,monstroudiferençasignificativaentreosgrupos,masnãoentreas

semanasde experimento(tempos) ou  nainteração entre ostemposeosgrupos (ANOVAde

medidasrepetidas;F=0,34paraostempos,P=0,56;F=2,99paraosgrupos,P=0,02;F=2,01para

ainteraçãoentreostemposeosgrupos,P=0,09).Independentementedasemanaavaliada,o

grupoquerecebeusalina,porviasubcutânea,enitroglicerina,porviaintraperitoneal(Grupo3

– SN), diferiu daquele que recebeu formalina, por via subcutânea, e veículo, por via

intraperitoneal (Grupo 5 – FV) (teste de comparações múltiplas de Bonferroni, P =0,043),

emboraessadiferençanãoapresentesignificadobiológicodeinteresse(Figura27).



Figura 27. Tempo gasto em comportamento de auto‐limpeza (grooming) em campo

aberto,30minutosapósaadministraçãodostratamentospropostos,duranteastrêssemanas

deexperimento.Dadosexpressoscomomédia±DPM.

SS:Salina,vias.c.,nodia1 doexperimento(D1),esalina,viai.p.,nosdias

1,8e15(D1,

D8eD15).SV:Salina,via s.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.SN:Salina,vias.c.,

emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.FS:Formalina5%,vias.c.,emD1,esalina,via

i.p.,emD1,

D8eD15.FV:Formalina5%,vias.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.

FN:Formalina5%,vias.c.,emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.

Diferençaestatisticamentesignificativaentregrupos,mas nãoentresemanas(tempos)

ounainteraçãogruposx

tempos(ANOVAdemedidasrepetidas;F=0,34paratempos,P=0,56;

F=2,99paragrupos,P=0,02;F=2,01parainteraçãotemposxgrupos,P=0,09).

*Diferença significativa do grupo assinalado (SN) em relação ao grupo FV,

independentemente da semana de experimento (teste de comparações múltiplas de

Bonferroni,P=0,043).



Na análise do comportamento de auto‐limpeza após 120 minutos da administração 

dos tratamentos propostos, não se observaram diferenças entre os grup os, semanas de

experimento(tempos)ounainteraçãoentregruposetempos(ANOVAdemedidasrepetidas;

F=0,62paraostempos,P=0,44;F=0,75paraosgrupos,P=0,59;F=1,13paraainteraçãoentre

ostemposeosgrupos,P=0,35)(Figura28).



Figura 28. Tempo gasto em comportamento de auto‐limpeza (grooming) em campo

aberto, 120 minutos após a administração dos tratamentos propostos, durante as três

semanasdeexperimento.Dadosexpressoscomomédia±DPM.

SS:Salina,vias.c.,nodia1 doexperimento(D1),esalina,viai.p.,nosdias

1,8e15(D1,

D8eD15).SV:Salina,via s.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.SN:Salina, vias.c.,

emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.FS:Formalina5%,vias.c.,emD1,esalina,via

i.p.,emD1,

D8eD15.FV:Formalina5%,vias.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.

FN:Formalina5%,vias.c.,emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.

Ausência de diferenças significativas entre grupos, semanas (tempos) e na interação

gruposxtempos(ANOVA

demedidasrepetidas;F=0,62paraostempos,P=0,44;F=0,75para

osgrupos,P=0,59;F=1,13paraainteraçãoentreostemposeosgrupos,P=0,35).



Na observação realizada 240 minutos após a administração dos tratamentos

propostos,nãoseverificamdiferençassignificativasnocomportamentodeauto‐limpezaaose

avaliaremosgrupos,assemanasdeexperimento(tempos)eainteraçãoentreostemposeos

grupos(ANOVAdemedidasrepetidas;F=0,68paraostempos,P=0,41;F=1,33paraosgrupos,

P=0,26;F=0,92paraainteraçãoentreostemposeosgrupos,P=0,48)(Figura29).

Por meio de ANOVA de medidas repetidas, observaram‐se diferenças significativas

entreassemanasdeexperimento(tempos),masnãoentreosgrupos ounainteraçãoentreos

grupos e os tempos, na avaliação do comportamento de grooming após 24 horas da

administração dos  tratamentos propostos (F=5,91 para os tempos, P=0,02; F=0,87 para  os

grupos, P=0,51; F=0,68 para a interação entre os tempos e os grupos, P=0,64).

Independentemente dos grupos estudados, os animais despenderam tempos

significativamentediferentesrealizandoreflexodeauto‐limpezaaosecompararemassegunda

eterceirasemanasdeexperimento(teste decomparaçõesmúltiplasdeBonferroni,P=0,001).

Aquele parâmetro apresentou padrão similar ao se comparar a primeira semana com cada

uma dassemanas seguintes (teste de comparações múltiplas de Bonferroni,P=0,05 e P =1,0,

respectivamente)(Figura30).



Figura 29. Tempo gasto em comportamento de auto‐limpeza (grooming) em campo

aberto, 240 minutos após a administração dos tratamentos propostos, durante as três

semanasdeexperimento.Dadosexpressoscomomédia±DPM.

SS:Salina,vias.c.,nodia1doexperime nto(D1),esalina,viai.p.,nosdias

1,8e15(D1,

D8eD15).SV:Salina,vias.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.SN:Salina,vias.c.,

emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.FS:Formalina5%,vias.c.,emD1,esalina,via

i.p.,em

D1,D8eD15.FV:Formalina5%,vias.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.

FN:Formalina5%,vias.c.,emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.

Ausênciadediferençassignificativasentregrupos,semanas(tempos)enainteração

gruposxtempos(ANOVA

demedidasrepetidas;F=0, 68paratempos,P=0,41;F=1,33para

grupos,P=0,26;F=0,92parainteraçãotemposxgrupos,P=0,48).



Figura 30. Tempo gasto em comportamento de auto‐limpeza (grooming) em campo

aberto,24horasapósaadministraçãodostratamentospropostos,duranteastrêssemanasde

experimento.Dadosexpressoscomomédia±DPM.

SS:Salina,vias.c.,nodia1 doexperimento(D1),esalina,viai.p.,nosdias

1,8e15(D1,

D8eD15).SV:Salina,via s.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.SN:Salina,vias.c.,

emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.FS:Formalina5%,vias.c.,emD1,esalina,via

i.p.,emD1,

D8eD15.FV:Formalina5%,vias.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.

FN:Formalina5%,vias.c.,emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.

Diferençaestatisticamente significativa nacomparação entresemanas(tempos),mas

nãoentregruposounainteração

gruposxtempos(ANOVAdemedidasrepetidas;F=5,91para

tempos, P=0,02; F=0,87 para  grupos, P=0,51; F=0,68 para interação entre tempos x grupos,

P=0,64).

*Diferença significativa em relação à segunda semana de experimento,

independentemente dos grupos estudados (teste de comparações múltiplas de Bonferroni,

P=0,001).



Por meio de ANOVA de

medidas repetidas, observaram‐se diferenças significativas

entreassemanasdeexperimento(tempos),masnãoentreosgrupos ounainteraçãoentreos

grupos e os tempos, na avaliação  do comportamento de auto‐limpeza após 48 horas da

administração dos tratamentos propostos (F=7,13 para os tempos, P=0,009; F=1,48 para os

grupos,

P=0,21; F=0,89 para a interação entre os tempos e os grupos, P=0,50).

Independentemente dos grupos estudados, os animais despenderam tempos

significativamente diferentes realizando reflexo de auto‐limpeza ao se compararem as

primeirae terceira semanasde experimento (testede comparaçõesmúltiplas deBonferroni,

P=0,028).Aqueleparâmetroapresentoupadrãosimilar

aosecompararasegundasemanacom

cada uma das outras duas semanas (teste de comparações múltiplas de Bonferroni; P=0,55

paraaprimeirasemana;P=0,82paraaterceirasemana)(Figura31).

Foi realizada a análise das latências do reflexo de retirada da cauda em resposta a

estímulotérmiconocivo(tail‐flick)demodosimilaraoquefoifeitoparaocomportamentode

auto‐limpeza(Figura24).



Figura 31. Tempo gasto em comportamento de auto‐limpeza (grooming) em campo

aberto,48horasapósaadministraçãodostratamentospropostos,duranteastrêssemanasde

experimento.Dadosexpressoscomomédia±DPM.

SS:Salina,vias.c.,nodia1 doexperimento(D1),esalina,viai.p.,nosdias

1,8e15(D1,

D8eD15).SV:Salina,via s.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.SN:Salina,vias.c.,

emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.FS:Formalina5%,vias.c.,emD1,esalina,via

i.p.,emD1,

D8eD15.FV:Formalina5%,vias.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.

FN:Formalina5%,vias.c.,emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.

Diferençaestatisticamente significativa nacomparação entresemanas(tempos),mas

nãoentregruposounainteração

gruposxtempos(ANOVAdemedidasrepetidas;F=7,13para

tempos, P=0,009; F=1,48para grupos,P=0,21; F=0,89para interação entretempos x grupos,

P=0,50).

*Diferença significativa em relação à primeira semana de experimento,

independentemente dos grupos estudados (teste de comparações múltiplas de Bonferroni,

P=0,03).



Na avaliação do reflexo de retirada  da cauda, não se observaram diferenças

significativas entre as semanas de tratamento (tempos), entre os grupos ou na interação

dessas duas variáveis, para as medidas obtidas nos períodos basal (ANOVA de medidas

repetidas; F=2,59 para os tempos, P=0,11; F=0,74 para os gru pos, P=0,59; F=0,43 para a

interação entre os tempos e os grupos, P=0,83), 15 minutos (ANOVA de medidas repetidas; 

F=1,12paraostempos,P=0,30;F=1,16paraosgrupos,P=0,34;F=1,67paraainteraçãoentre

ostempos e osgrupos, P=0,16)e30 minu tos(ANOVA demedidas repetidas;F=1,46 paraos

tempos,P=0,23;F=0,88paraosgrupos,P=0,50;F=1,38paraainteraçãoentreostemposeos

grupos,P=0,24)apósaadministraçãodostratamentospropostos(Figuras32a34).



Figura32.Latênciaderetiradadacauda(tail‐flick)noperíodoprévioàadministração

dostratamentospropostos(basal),duranteastrês semanasdeexperimento.Dadosexpressos

comomédia±DPM.

SS:Salina,vias.c.,nodia1 doexperimento(D1),esalina,viai.p.,nosdias1,8e

15(D1,

D8eD15).SV:Salina,via s.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.SN:Salina,vias.c.,

emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.FS:Formalina5%,vias.c.,emD1,esalina,via

i.p.,emD1,D8e

D15.FV:Formalina5%,vias.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.

FN:Formalina5%,vias.c.,emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.

Ausência de diferença significativa entre semanas (tempos), grupos e na interação

grupos x tempos (ANOVA de medidas repetidas;

 F=2,59 para tempos, P=0,11; F=0,74 para

grupos,P=0,59;F=0,43parainteraçãoentretemposxgrupos,P=0,83).

100



Figura 33. Latências de retirada da cauda (tail‐flick) obtidas 15 minutos após a

administração dos tratamentos  propostos, durante as três semanas de experimento. Dados

expressoscomomédia±DPM.

SS:Salina,vias.c.,nodia1 doexperimento(D1),esalina,viai.p.,nosdias1,8e15(D1,

D8eD15).SV:Salina,via s.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.SN:Salina,vias.c.,

emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.FS:Formalina5%,vias.c.,emD1,esalina,via

i.p.,emD1,D8eD15.FV:Formalina5%,vias.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.

FN:Formalina5%,vias.c.,emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.

Ausência de diferença significativa entre semanas (tempos), grupos e na interação

grupos x tempos (ANOVA de medidas repetidas; F=1,12 para tempos, P=0,30; F=1,16 para

grupos,P=0,34;F=1,67parainteraçãoentretemposxgrupos,P=0,16).



Na avaliação das latências de retirada da cauda obtidas após 120 minutos da

administração dos tratamentos propostos, constataram‐se diferenças significativas entre as

semanasdoexperimento(tempos),masnãoentreosgrupos ounainteraçãoentreostempos

eosgrupos(ANOVAdemedidasrepetidas;F=12,16paraostemp os,P=0,001;F=1,31paraos

grupos, P=0,08; F=0,77 para a interação entre os tempos e os grupos, P=0,57). Observou‐se

aumentosignificativodas latênciasdetail‐flicknassegundaeterceirasemanas,emrelaçãoàs

obtidasnaprimeirasemana(testedecomparaçõesmúltiplasdeBonferroni,P=0,04eP<0,01,

respectivamente)(Figura35).

101



Figura 34. Latências de retirada da cauda (tail‐flick) obtidas 30 minutos após a

administração dos tratamentos  propostos, durante as três semanas de experimento. Dados

expressoscomomédia±DPM.

SS:Salina,vias.c.,nodia1 doexperimento(D1),esalina,viai.p.,nosdias1,8e

15(D1,

D8eD15).SV:Salina,via s.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.SN:Salina,vias.c.,

emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.FS:Formalina5%,vias.c.,emD1,esalina,via

i.p.,emD1,D8e

D15.FV:Formalina5%,vias.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.

FN:Formalina5%,vias.c.,emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.

Ausência de diferença significativa entre semanas (tempos), grupos e na interação

grupos x tempos (ANOVA de medidas repetidas;

 F=1,46 para tempos, P=0,23; F=0,88 para

grupos,P=0,50;F=1,38parainteraçãoentretemposxgrupos,P=0,24).



Na avaliação das medidas do reflexo de retirada da cauda, não  se observaram

diferenças significativas entre as semanas de tratamento (tempos), entre os grupos ou na

interação dessas duas variáveis, para as medidas obtidas 240 minutos (ANOVA de medidas

repetidas; F=1,87 para os tempos, P=0,18; F=0,60 para os gru pos, P=0,70; F=1,02 para a

interação entre os temp os e os grupos, P=0,41), 24 horas (ANOVA de medidas repetidas;

F=0,29paraostempos,P=0,59;F=0,22paraosgrupos,P=0,95;F=0,48paraainteraçãoentre

os tempos e os grupos, P=0,79) e 48 horas  (ANOVA de medidas repetidas;  F=3,67 para os

tempos,P=0,06;F=0,86paraosgrupos,P=0,51;F=0,60paraainteraçãoentreostemposeos

grupos,P=0,70)apósaadministraçãodostratamentospropostos(Figuras36a38).

102

Aanálisedopesocorporaldosanimais nesseexperimentodemonstrouaexistênciade

diferençassignificativasentreostemposenainteraçãoentreostemposeosgrupos.Nãose

observaram diferenças significativas entre os grupos (ANOVA demedidas repetidas; F=31,80

para os tempos, P=0,001; F=7,08 para os grupos, P=0,001; F=1,17

 para a interação entre os

tempos e os grupos, P=0,33). No decorrer do experimento, constatou‐se que os animais

aumentaram gradualmente de peso corporal, de maneira independente do tratamento

instituído.Naterceirasemana,osanimaisapresentaram‐semaispesadosdoquenaprimeira

semanaenasegundasemanadeexperimento

(testedecomparaçõesmúltiplas deBonferro ni;

P=0,01eP=0,01,respectivamente)(Figura39).



Figura 35. Latências de retirada da cauda (tail‐flick) obtidas 120 minutos após a

administração dos tratamentos  propostos, durante as três semanas de experimento. Dados

expressoscomomédia±DPM.

SS:Salina,vias.c.,nodia1 doexperimento(D1),esalina,viai.p.,nosdias1,8e

15(D1,

D8eD15).SV:Salina,via s.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.SN:Salina,vias.c.,

emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.FS:Formalina5%,vias.c.,emD1,esalina,via

i.p.,emD1,D8eD15.

FV:Formalina5%,vias.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.

FN:Formalina5%,vias.c.,emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.

Diferençasignificativaentresemanas(tempos),masnãoentregruposounainteração

grupos x tempos (ANOVA de medidas

repetidas; F=12,16 para tempos, P=0,001;F=1,31 para

grupos,P=0,08;F=0,77parainteraçãoentretemposxgrupos,P=0,57).

*Diferença significativa em relação à primeira semana de experimento,

independentemente dos grupos estudados (teste de comparações múltiplas de Bonferroni,

0,04).

103



Figura 36. Latências de retirada da cauda (tail‐flick) obtidas 240 minutos após a

administração dos tratamentos  propostos, durante as três semanas de experimento. Dados

expressoscomomédia±DPM.

SS:Salina,vias.c.,nodia1 doexperimento(D1),esalina,viai.p.,nosdias1,8e

15(D1,

D8eD15).SV:Salina,via s.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.SN:Salina,vias.c.,

emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.FS:Formalina5%,vias.c.,emD1,esalina,via

i.p.,emD1,D8eD15.

FV:Formalina5%,vias.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.

FN:Formalina5%,vias.c.,emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.

Ausência de diferença significativa entre semanas (tempos), grupos e na interação

gruposxtempos(ANOVAdemedidasrepetidas;

F=1,87paraostempos, P=0,18;F=0,60para

osgrupos,P=0,70;F=1,02paraainteraçãoentreostemposeosgrupos,P=0,41).







104



Figura37.Latênciasderetiradadacauda(tail‐flick)obtidas24hapósaadministração

dostratamentospropostos,duranteastrêssemanasdeexperimento.Dados expressoscomo

média±DPM.

SS:Salina,vias.c.,nodia1 doexperimento(D1),esalina,viai.p.,nosdias1,8e

15(D1,

D8eD15).SV:Salina,via s.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.SN:Salina,vias.c.,

emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.FS:Formalina5%,vias.c.,emD1,esalina,via

i.p.,emD1,D8eD15.

FV:Formalina5%,vias.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.

FN:Formalina5%,vias.c.,emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.

Ausência de diferença significativa entre semanas (tempos), grupos e na interação

grupos x tempos (ANOVA de medidas repetidas;

F=0,29 para tempos, P=0,59; F=0,22 para

grupos,P=0,95;F=0,48parainteraçãoentretemposxgrupos,P=0,79).



105



Figura38.Latênciasderetiradadacauda(tail‐flick)obtidas48hapósaadministração

dostratamentospropostos,duranteastrêssemanasdeexperimento.Dados expressoscomo

média±DPM.

SS:Salina,vias.c.,nodia1 doexperimento(D1),esalina,viai.p.,nosdias1,8e

15(D1,

D8eD15).SV:Salina,via s.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.SN:Salina,vias.c.,

emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.FS:Formalina5%,vias.c.,emD1,esalina,via

i.p.,emD1,D8e

D15.FV:Formalina5%,vias.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,D8eD15.

FN:Formalina5%,vias.c.,emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.

Ausência de diferença significativa entre semanas (tempos), grupos e na interação

grupos x tempos (ANOVA de medidas repetidas;

 F=3,67 para tempos, P=0,06; F=0,86 para

grupos,P=0,51;F=0,60parainteraçãoentretemposxgrupos,P=0,70).



106



Figura39.Pesocorporaldosanimaisduranteastrêssemanasdeexperimento.Dados

expressoscomomédia±DPM.

SS:Salina,vias.c.,nodia1 doexperimento(D1),esalina,viai.p.,nosdias1,8e15(D1,

D8eD15).SV:Salina,via s.c.,emD1,eveículo,

viai.p.,emD1,D8eD15.SN :Salina,vias.c.,

emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.FS:Formalina5%,vias.c.,emD1,esalina,via

i.p.,emD1,D8eD15.FV:Formalina5%,vias.c.,emD1,eveículo,viai.p.,emD1,

D8eD15.

FN:Formalina5%,vias.c.,emD1,enitroglicerina,viai.p.,emD1,D8eD15.

Diferençasignificativaentresemanasdetratamento(tempos)enainteraçãotemposx

grupos,masnãoentregrupos(ANOVAdemedidasrepetidas;F=31,80paratempos,P=0,001;

F=7,08paragrupos,P=0,001;F=1,17

parainteraçãoentretemposegrupos,P=0,33).

*Diferença significativa em relação a 1ª e 2ª semanas de experimento (teste de

comparaçõesmúltiplasdeBonferroni;P=0,01eP=0,01,respectivamente).



107



Discussão

108

Háváriasteoriasrelacionadasàfisiopatogeniadasdorescranianas,principalmenteem

relaçãoàscefaléias comimportanteenvolvimentovascular,comoaenxaqueca.Todavia,existe

consensodeque,nasdorescefálicas,háumenvolvimentodosvasoscerebrais,demodoquea

informação nociceptiva vinculadas a eles  é transmitida ao  Sistema Nervoso Central (SNC)



através de fibras nervosas sensoriais do nervo trigêmeo, por meio de neurotransmissores

(Moskowitz,1984).

As cefaléiascom componente vascular podemser consideradas como uma alteração

neurobiológicaquerefletedistúrbiosnainteraçãoentreonervotrigêmeoeoórgão‐alvo,que

seriaovasosangüíneocerebral(Moskowtiz,1984).Asfibrastrigeminais

fazempartedeuma

intricadarededecomunicaçãoqueseprojetaaoencéfalo.Estãosituadasnainterfaceentrea

circulação sangüíne a e o SNC, envolvendo o vaso e estando em íntimo contato com as três

camadas vasculares.Ativação neural libera  neurotransmissores vasoativos deseus processos

aferentes, que determinam alterações inflamatórias perivasculares.

 Após algum tem po,

resposta nocicept iva é transmitida ao SNC por meio de diversas vias nociceptivas e núcleos

(Figuras4,40)(Moskowitz,1984;Goadsbyetal.;2002).



Figura40.AtivaçãodoSistema Trigeminovascularduranteepisódiodedordecabeçae

seu envolvimento com núcleos Talâmicos, Hipotalâmicos, do Tronco e Sistema Nervoso

Vegetativo(Parassimpático)(ModificadodeGoadsbyetal.;2002).



Córtex

otálamo

Tálamo

NúcleoDorsal

daRafe

Locoscoeruleus

Núcleo.Salivatório

Superior

NúcleoMagno

daRafe

Gânglio

Pterigopalatino

Gânglio

Trigeminal

Dura

áte

r

109

Modelos experimentais de nocicepção são fundamentais para o conhecimento dos

mecanismos responsáveis pelo desenvolvimento, pela manutenção e, por vezes, pela

perpetuaçãodaexperiênciadolorosahumana.Emsuamaioria,estãobaseadosemrespostas

nociceptivas passíveis deseremreproduzidas, sendo queváriosaspectosdo comportamento

animalpodemserestudados.

Entreosmodelos

nociceptivosparaoestudodasdoresorofaciaisecefaléias,talvezos

mais estudados sejam aqueles que enfocam os mecanismos envolvidos na teoria da

inflamação neurogênica e vascular, principalmente os modelos de ativação do sistema

trigeminovascular. Esta ativação pode estabelecer‐se por meio de estimulação de ra mos 

periféricos do nervo trigêmeo, que,

 através do reflexo axonal, reproduz o processo

fisiopatogênico das cefaléias vasculares (Moskowitz, 1984). Outra forma de ativação seria  a

sistêmica,emqueumasubstânciavasoativa,administradasistemicamente,podedesencadear

doresdecabeça.Dentreessesfármacos,talvezomaisrelevantesejamoscompostosnitrosos.

Édedomíniocientífico, desdeoséculo

XIX,queumdosprincipais efeitos adversosdaqueles

compostoséodesencadeamentodecefaléiadepadrãovascular:dorpulsátil,demédiaaforte

intensidade,comagravamentosporatividadesdevida diáriase,àsvezes,comsintomatologia

vegetativa associada (Marsh e Marsh, 2000). Estudos prévios sugerem que administração

sistêmica de nitroglicerina ou

 histamina pode desencadear crises de cefaléia em pacientes

enxaquecosos, mais freqüentemente doque emnormais (Krabbe eOlesen, 1980;Sicuteri et

al.,1987;OleseneThomsen,1993;LarseOlesen,2001).Emestudoscomanimais,compostos 

nitrosos, como trinitrato de glicerina (nitroglicerina), também são utilizados em modelos

experimentaisdedores

cefálicas(Tassorelietal.,2003;Bergerotetal. ,2006).Nestes model o s,

quando se avaliam parâmetros nociceptivos, na maioria  das vezes, utiliza‐se a medida da

latência de retirada da cauda (Costa et al., 2005).  Porém, pouca relevância é dada a  outros

parâmetroscomportamentais,comooreflexodeauto‐limpeza.



110

 A administração subcutânea de formalina na região orofacial é um método

conveniente para a avaliação da nocicepção na região inervada pelo nervo trigêmeo e,

possivelmente, para o estudo  das cefaléias. Aquela administração determina uma primeira

faseagudadenocicepção,comduraçãode1a5minutos.Aestasesegue

umperíodo(5a15

minutos após a  injeção) em que o animal não apresenta comportamento nociceptivo. É a

chamadafasesilente.Naúltimaetapa,denominadadefasetônica,ocorrereaçãoinflamatória

no tecido periférico, caracterizada por intensa atividade  nociceptiva, que perdura por

aproximadamente20a60minutos(DickensoneSullivan,

1987;Clavelouetal.,1989;Pacáke

Palkovits,2001). Nestafase, ocorreliberaçãode diferentes substâncias mediadorasde dore

sensibilizaçãocentraldeviasnociceptivas(Tǿlsen etal.,1922).

A administração de formalina determina lesão tecidual dependente da concentração

empregada, ativação de nociceptores periféricos e ativação de fibras A

δ e C, que são as

principais fibras efetoras da via primária nociceptiva trigeminal (Raboisson e Dallel, 2003).

Ortodromicamente, a ativação de nociceptores sensibiliza o primeiro neurônio da via

(localizado no gânglio de Gasser) e, conseqüentemente, o núcleo trigeminal caudal e as

estruturas nociceptivas superiores, por meio do trato trigeminotalâmico (Pacák

e Palkovits,

2001; Messlinger, 2006) (Figuras 1, 4, 41). Esta ativação também determina a ocorrência do

reflexotrigeminovascular,que,pormeio detransmissãoantidrômica,estimulaaliberaçãode

substânciasvasodilatadorasepró‐inflamatórias.Essefenômenonãosóseriaresponsávelpelo

desencadeamento de dor, como também por sua perpetuação (Bayliss, 1901; Moskowitz,



1984;Uddman,1989;Vincent,1998;MayeGoadsby,1999;DurnetteVasko,2002;Pietrobon,

2003;Edvinsson,2005).

 Partindo‐sedopressupostodequeestímuloelétrico,químicoouimunológicoaplicado

emum nervo sensitivopossa desencadearprocesso inflamatório neurogêni co (Bayliss, 1901;

Durnett e Vasko, 2002; Lizasoain e Leira, 2003; Bergerot et

 al., 2006), o modelo de dor

orofacial induzido por formalina, administrada por via subcutânea, ao ativar aferências

111

trigeminais, teoricamente também pode funcionar como modelo neurovascular deativação

periféricadosistematrigeminovascular(figuras4e40).

 Estudosnociceptivosorofaciais,comumentebaseadosnaadministraçãodeformalina,

porviasubcutânea,raramenteavaliamoutrosparâmetroscomportamentaisquenãooreflexo

deauto‐limpeza(grooming)ipsilateralàlesãoeaobservação

emcampoabertoparaaferição

dosmesmos(Andersonetal.,2003;Cadetetal.,1995;Clavelouetal.,1995;Eisenbergetal.,

1993;Eisenbergetal.,1996;Gilbertetal.,2001;Pelissieretal., 2002;RaboissoneDallel,2004; 

Roveronietal.,2001;Vosetal.,

1998).Parâmetroscomportamentaisrelacionadosaomodelo

nociceptivoorofacialcomformalina sãopoucoexplorados.Nestemodelo,segundoAndersone

colaboradores(2003),otempogastopeloanimalnocomportamentodegroomingseriauma

dasrespostascomportamentaismaisrepresentativasdedisestesiagrave.

Assim,nosprimeiroesegundoexperimentosdessaDissertação,procuraram‐seavaliar

parâmetros

 comportamentais e nociceptivos relacionados à ativação periférica do sistema

trigeminal, por meio da utilização do modelo de  dor orofacial induzida pela administração

subcutânea de formalina. Além do comportamento de auto‐limpeza, foram analisadas

locomoção (por meio do número de cruzamentos ou crossings, em inglês) e atividade

exploratória (por meio

do número de respostas de orientação ou rearings, em inglês), em

campo aberto. Supôs‐se que a nocicepção desencadeada pela administração  de formalina

poderia repercutir sobre tais parâmetros, levando à eventual redução de cruzamentos e

respostasdeorientação.Nessecaso,osmesmos poderiam servircomomedidas indiretas de

nocicepção.

Na

avaliação dos parâmetros comportamentais explorados, observou‐se, no campo

aberto, que os animais  que receberam formalina  apresentaram número de cr uzamentos

similaraosdogrupocontrole(Figura13),ouseja, esse parâmetro não se mostrou sensível à

administração do  agenteirritante. Paralelamente, observou‐serápidaeprecoce reduçãodos

cruzamentos, independentemente do

 tratamento, em todos os tempos de observação

112

propostos,emcomparaçãocomasmedidasbasais.Talreduçãoiniciouimediatamenteapósa

administração das soluções estudadas e manteve‐se por pelo menos 24 horas, sendo mais 

acentuadaaos15minutos.Na figura13,vê‐seumacurvaemU,emqueasmedidasdaquele

parâmetroem0 minutoe24

horasnãodiferementresi,masofazemdaquelasobtidasaos15

minutos. Este último período corresponde exatamenteao momento em que os animais que

receberam formalina, por via subcutânea, despenderam mais tempo no comportamento de

auto‐limpeza.Issopoderiajustificaramaiorreduçãodecruzamentos.Noentanto,talefeito

foi

observadotambémnogrupo controleesemanteveportemposuperioraodoefeitosobreo

comportamento de grooming (pelo menos 24 horas versus 15 minutos, respectivamente).

Sugere‐sequeessesejaumefeitorelacionadoàmanipulaçãodosanimaisdurantearealização

doestudo.Comoocorreuindepend entementedogrupoexperimental,

issosugerequenãose

trata de resposta nociceptiva específica à formalina. Ambos os grupos seguem o mesmo 

padrãocomportamentalaolongodotempo.Idênticoraciocíniopodeserfeitoemrelação ao

número de respostas de orientação, que apresentou perfil similar de resultados (Figura  14). 

Assim,concluiu ‐sequea

administraçãosubcutâneadassoluçõespropostas,sejadeformalina,

seja de salina, na área das vibrissas de ratos, determinou o mesmo tipo de efeito sobre

cruzamentos e respostas de orientação em campo aberto. Sugere‐se que a redução dos

parâmetrosestudadospossaestarrelacionadaàhabituaçãoaoambiente,depoisderepetidas 

exposições

aomesmo.

Cruzamentos (crossings) e respostas de orientação (rearings) são parâmetros

comportamentais exploratórios, que refletem a resposta do animal à exposição a um novo

ambiente,representando,respectivamente,medidasdelocomoçãoeorientaçãonoespaço.

Areduçãodonúmero decruzamentos e respostasdeorientaçãoao longo dotempo

poderia

serjustificada,pelomenosemparte,pelofenômenodehabituaçãoaonovoambiente.

Acredita‐se que essa seja uma das mais elementares formas  de aprendizado,  em que se

observa redução na atividade exploratória em função de repetidas exposições ao mesmo

113

ambiente(Thielet al.,1998,1999;Vianaetal.,2001).Normalmente,éestudadaemduasou

maissessõesdeobservação,emcampoabertoouemummesmolocal(Vianaetal.,2001).No

experimento1dessaDissertação,asrepetidasexposiçõesaocampoaberto,paraaobtenção

dasmedidasao

longodotempo,podetercontribuídoparaomenornúmerodecruzamentose

respostasdeorientaçãoemrelaçãoaoperíodobasal(antesdaadministraçãodostratamentos

propostos),mesmoapós24horas.

Curiosamente,associadoàreduçãodasmedidasdessesdoisparâmetrosexploratórios,

háaumentoconcomitantedotempogastoemauto‐limpeza.

Éinteressanteseobservarque

parece haver redução compensatória das medidas exploratórias emrelação aomaior tempo

gasto em grooming. Em tempos em que se constata menor atividade exploratória –

imediatamente após (0 minuto) e depois de 15 minutos da administração dos tratamentos,

observa‐se também maio r atividade de grooming.

 No entanto, os padrões temporais  são

distintos. A atividade exploratória está reduzida em todos os momentos avaliados após a

administraçãodostratamentospropostos, sendosignificativamente menoraos15minutosem

relação aos períodos de 0 minuto e 24 horas. Já o tempo gasto em auto‐limpeza é

significativamentemaioraos

0e15minutos(nãodiferindoentresi),voltandoaosníveisbasais

em 24 horas. Também contrária à idéia do aumento de tempo gasto em auto‐limpeza estar

influenciandoaatividadeexploratória,éo fatodosanimaisquereceberamsoluçõesdesalina

ou formalina apresentarem mesmo padrão de comportamento em relação

 a cruzamentos e

respostasdeorientação.

Nocampoaberto,aoinversodoqueocorreucomaatividadeexploratória,observou‐

se aumento do tempo despendido pelos animais na realização de comportamento de auto‐

limpeza relacionado à administração de solução de formalina 5%. Este aumento iniciou

imediatamenteapósainjeçãodaquelaso lução

eperdurouporpelomenos15minutos(Figuras

15e16).Aos30minutos,esseefeitocomeçouadesaparecer(Figura16), demodoque,nesse

período, os valores do comportamento degrooming ocuparam uma posição intermediária –

114

não diferiram dos basais, nem dos  valores obtidos aos 15 minutos. Aquele comportamento

retornouaonívelobservadopreviamenteaotratamentoem2horas(Figura16),mantendo‐se

assimporpelomenos14dias(Figuras15e16).Como talrespostanãofoidetectadanogrupo

controle,quenãodiferiuaolongo

dotempo,pode‐seproporqueamesmaéespecíficaparao 

grupo que recebeu formalina e, portanto, o comportamento de auto‐limpeza mostrou‐se 

sensívelàadministraçãodoagenteirritantenessemodelo.Concluiu‐se,assim,que,dentreos

parâmetroscomportamentaisemestudo,odeauto‐limpezaéoque

melhorsecorrelaciona

comaatividadenociceptivadesencadeadapelaformalinaadministradaporviasubcu tânea,na

regiãoorofacial,emobservaçõesdecampoaberto.

Esses dados confirmam resultados de Anderson e colaboradores (2003) e Clavelou e

colaboradores (1989). Reforçam evidências encontradas na literatura científica de que essa

atividade comportamental seria uma das mais

 preditivas da atividade nociceptiva orofacial

(Anderson et a.l,  2003). Corroboram resultados de Clavelou e colaboradores (1989 e 1995),

que demonstraram padrão bifásico de resposta para a formalina, com aumento do

comportamento de auto‐limpeza nos primeiros 3 a 5 minutos e no período entre 18 e 42

minutosapósa

injeção.Osperíodos detempoaquiestudados,de0minutoa14dias,engloba

asduasfasesrelatadasporaquelesautores.

Em mamíferos, entre outras funções, como as reprodutivas e sociais, o

comportamentodeauto‐limpezaestárelacionadoàremoçãodesubstânciasaversivas,sendo

geralmenteassociadoainjúriascutâneas.Paralelamente,

situaçõesqueháaumentodoestado

de alerta dos animais, como na presença de novidade ou agentes estressores externos

(atividade nociceptiva desencadeada por estímulo irritante), podem ser ativadores desse

comportamento (Spruijt et al., 1992), como foi observado nos experimentos 1 e 2 dessa

Dissertação.

115

Em termos eletrofisiológicos,  os estudos demonstraram que nociceptores de fibras

periféricas Aδ e C, bem como neurônios nociceptivos convergentes do núcleo trigeminal

espinhal,sãoexcitadospelaadministraçãodeformalinanocamponociceptivocorrespondente

(Andersonetal.,2003;Raboissonetal.,2004).Leongecolaboradores(2000)observaramque

a injeção subcutânea

 de formalina na região da face inervada pelo segundo ramo do nervo

trigêmeo induz a expressão do proto‐oncogene c‐fos (c‐fos) nas lâminas I e II do núcleo

sensitivo trigeminal. Esta expressão de c‐fos possivelmente  seja mediada por óxido nítrico

(Leong et al., 1999).Estudos adicionais

demonstraramque estímulos nociceptivos emface e

polpa dentária, por extração dentária ou injeção subcutânea de formalina, são capazes de

desencadear essa expressão de c‐fos no núcleo caudal do trigêmeo (Strass et al., 1993;

Coimbra e Coimbra, 1994; Hou et al., 1997). Observou‐se, ainda, que, no núcleo caudal

do

trigêmeo,aexpressãodec‐fosestápresentepredominantementenalâminasuperficial(Leong

etal.,2000).

Uma vez demonstrado que o comportamento de auto‐limpeza, avaliado em campo

aberto,foiomelhorparâmetrorepresentativodeatividadenociceptivadaáreainervadapelo 

nervotrigêmeo,pormeiodotestededor

orofacialinduzidapelaformalina,administradapor

via subcutânea, procurou‐se estabelecer o seu perfil temporal por período de 2 semanas

(Experimento 2; Figuras 16 e 17). Apesar dos animais já apresentarem comportamento

nociceptivo semelhante ao basal na avaliação feita em 24 horas, a lesão tecidual provocada

pelaformalinadeveterpermanecido.

Clavelouecolaboradores(1995),analisandoaprodução

defibrina,demonstraramque,10diasapósaadministraçãodeformalina,nasconcentrações

de2,5%a10%,nãohouvecompletaci catrizaçãodalesão.Adegranulaçãomastocitária,após

aquelalesãotecidual,permaneceuporcercade4horas,eoedema,porcercade5

dias.

Outro fato interessante foi observado por Ichinose e colaboradores (1999). Estes

autoresdemonstraram,pormeiode eletrencefalogramacortical,queháumadiscrepâncianos

resultados eletrencefalográficos sugestivos de comportamento nociceptivo, durante as

116

distintasfasesdo testededorprovocadopela formalina. Duranteafasesilente,período em

que teoricamente não há atividade nocicept iva, há achados de padrão de vigília (altas

freqüênciascombaixasamplitudes,sugerindoatividadenociceptiva),e,nafasetônica(fase2),

padrãodenão‐vigília(altas amplitudes e baixas freqüências, sugerindo

ausênciadeatividade

nociceptiva).Assim,pormaisquenãohajacomportamentonociceptivocaracterísticoemcerta

fasecomportamental,podehaveratividadeeletrencefalográficanociceptivaassociada.

No segundo experimento, observou‐se que, nas primeiras  4 horas após a

administração de formalina, o período em que os animais permaneceram mais tempo

realizandoauto‐limpeza

correspondeuaodos15minutos.Nesteperíodo,ogrupoexpostoao 

agenteirritanteeo controleapresentaramdiferençassignificativasdecomportamento,tanto

nacomparaçãoentresi,quantonacomparaçãocomosvaloresbasais(Figuras16e17).

O tempo total de auto‐limpeza parece ter correlação com a atividade nociceptiva

apenas

 durante  os primeiros 15 minutos após aadministração de formalina. A partir dos 30

minutos, as medidas desse parâmetro comportamental apresentaram valores semelhantes

àqueles registrados no tempo basal. Todavia, Clavelou e colaboradores (1989) descreveram

que essas alterações podem perdurar por até cerca de 45 minutos após a administração do

agente

irritante.

Nos primeiro e segundo experimentos dessaDissertação tambémforam avaliadasas

medidas delatênciado reflexo deretira da da cauda. Esse teste de nocicepção tem algumas

vantagens.Alémdeserummétododesimplesapl icação,podeserrepetidoporváriasvezes,

apresenta pequena variabilidade para aferição da atividade nociceptiva (King

 et al., 1997;Le

Barsetal.,2001)erefleteaativaçãodeviasnociceptivascentrais(Irwinetal.,1951;LeBarset

al., 2001). Pretendia‐se, assim, verificar se a estimulação nociceptiva determinada pela

formalina poderia ativar vias medulares nociceptivas relacionadas à inervação trigeminal.

Outra possibilidade seria  a de

que a administração daquele agente irritante poderia atuar

117

como estressor, levando à ativação de sistemas antinociceptivos relacionados ao estresse

(analgesiainduzida porestresse).

Esperava‐se que a ativação periférica da via trigeminotalâmica pelo estímulo 

nociceptivo,geradopelaadministraçãosubcutâneadeformalina,desencadeasseumareposta

nociceptiva capaz de ativ ar globalmente vias modulatórias descendentes (Figuras 2 e 3).

Todavia,aanálise

dasmedidasdoreflexoderetirada  de caudafeitanosexperimentos1e2

nãocorroboraessahipótese.Nãoseobservou,nostemposdeobservação,qualquer alteração

significativa nos valores dessa medida  nociceptiva, ao  se compararemos grupos formalina e 

salina(Figuras12,18e19).Essadiscrepânciaentreresultados

esperadoseencontradospode

estarrefletindoumaincapacidadede oagenteirritante,administradonaregiãodasvibrissas

do animal, ativar indiretamente vias nociceptivas periféricas e/ou centrais, distintas das

trigeminais. Outra hipótese seria a de que, embora atuando como um estressor para o

organismo, a intensidade do estímulo não seja suficiente para

 desencadear resposta

antinociceptiva mediada por vias modulatórias descendentes da dor (como observado na

analgesiainduzidaporestresse).

Doseeconcentraçãodaformalinapoderiamserfatoresaventadoscomotendorelação

com a incapacidade de ativação das vias nociceptivas. Todavia, a solução  de formalina

empregada – concentração de 5% e dose de

50 μL – é a mesma encontrada na descrição

original do modelo de dor orofacial com formalina, no clássico estudo de Clavelou e

colaboradores(1989).Naliteratura,aquelesparâmetros(concentraçãoevolume)têmvariado

de 0,02% a 15% e de 20 a 150 μL, conforme o estudo (Raboisson  e Dallel,

 2004).

Concentrações de formalina até 1,5% têm sido utilizadas para melhorar a sensibilidade do

teste, além de diminuírem o sofrimento dos animais (Clavelou et al., 1995). Altas

concentraçõesdeformalinageramumparaleloagravamentodareaçãoinflamatóriateciduale

dainjúriatecidual(RaboissoneDallel,2004)edessensibilizaçãodefibras

nervosasperiféricas

(PuigeSorkin,1995).

118

Possível explicação para os resultados descritos no teste de latê ncia de retirada da

caudaestariarelacionadaàsviasnociceptivasmedularesquefazemaintegraçãodeestímulos

dolorosos periféricos com  a atividade em níveis de controle superiores. Quando o estímul o

nociceptivo é aplicado abaixo da região cervical, a principal via medular nociceptiva

integradora utilizada é o trato espinotalâmico lateral, que ascende até o núcleo ventral

póstero‐lateral do tálamo e, posteriormente, ao córtex somestésico primário (Pacák e

Palkovits, 2001; Le Bars, 2001) (Figuras 1, 41 e 42). A ativação determinada pelo estímulo

térmico,provocadopelaluzincandescente sobreapeledoanimalduranteotestedetail‐flick,

percorre essa via medular ascendente (Figura 42)(Le Bars, 2001). Todavia, quando o agente

irritante (no caso, solução de formalina a 5%) é aplicado na região orofacial, a estimulação

nociceptiva aferente, transmitida ao núcleo caudal do nervo trigêmeo, trafega pelo trato

trigeminotalâmicoatéo núcleoventralpóstero‐medialdotálamoe,daí,aocórtexsomestésico 

primário (Figuras 1 e 41). Apesar de ambas as vias transportarem os mesmos tipos de

informações nociceptivas e terminarem na mesma área  cortical, ascendem de modo

independente, carreando informações de áreas diferentes do corpo (Figura 1, 41 e 42).

Possivelmente a ativação do trato trigeminotalâmico não seja capaz de atuar sobre

mecanismosdescendentesmodulatóriosrelacionadosàviaespinotalâmicalateral.(Bearetal.,

1996 Morgan e Mikhail, 1996; Chudler e Bonica, 2001; Pacák e Palkovits, 2001; Terman e

Bonica,2001;Messlinger,2006,Schünkeetal.,2007)

No experimento 2, observaram‐se diferenças significativas entre as latências de

retirada da cauda aferidas 15 minutos após a administração dostratamentos propostos, em

comparaçãocomasobtidasem30minutose2horas.Nessafase,depois dos30minutos,há

queda

gradualnasmedidasdetail‐flick. Em2horas,foramencontradasasmenoreslatências

deretiradadacauda,quesemostraramsignifi cativamentediferentesdasobtidasnoperíodo

basaleem15minutos.Esseachadoécompatívelcomodeumestadohiperalgésico.Todavia, 

nãoseevidencioudiferençasignificativaentreosgrupos

(Figura18).

119





Figura41.Viasnociceptivasdaregião da cabeçaecervicalalta.Essasviasseguem os 

ramos do nervo trigêmio (V1‐V3). Os neurônios  aferentes primários situam‐se dentro do

gângliotrigeminaleseusaxôniosterminamnonúcleoespinhaldonervotrigêmeo.Osaxônios

do 2

neurônio cruzama linha médiae ascendem pelo  trato trigeminotalâmico até o núcleo

ventral póstero‐medial do tálamo. Dessa região parte os axônios do 3

 neurônio que

terminaramnocótexsomestésicoprimário (AdaptadodeSchünkeetal.,2007)



Nervo Oftálmmico (V1)

Nervo Maxilar (V2)

Nervo Mandibular (V3)

120



Figura42.Via s nociceptivasdaregiãodotroncoemembros.Osaxôniosdosneurônios

primários terminam nos neurônios  de projeção no corno posterior da medula. Os axônios

destes neurônios cruzam a linha média e ascendem pelo trato espinotalâmico e

espinomesencefálico até o tálamo, mas não fazem conexão com onúcleo ventral póstero‐

medialdotálamo,comoaviatrigeminotalâmica.(AdaptadodeSchünkeetal.,2007)



121

Essahiperalgesianãopareceestarrelacionadaaoprocessonociceptivodesencadeado

pela formalina. Pode estar associada a um processo de modulação das vias nociceptivas,

gerado pelo número de vezes que a cauda dos animais foi submetida ao  estímulo

termoalgésico durante a realização do teste de tail‐flick. Seria um fenômeno de habituação,



decorrente da repetida exposição ao teste, fazendo com os animais passassem a retirar a

cauda mais rapidamente ao serem colocados no aparelho. Caso isso realmente tenha

acontecido, esse processo foi rapidamente modulado pelas vias antinociceptivas,

desaparecendoem4horaseassimpermanecendonosdiassubseqüentes.

Em nenhum momento dos experi mentos

1 e 2, foram observados achados

característicosdeanalgesia.Essefenômenopoderiaterocorridosecundariamenteaoestresse

agudogerad o peloprocedimentoexperimental(AmireAmit,1978;Hayesetal.,1978;Bodnar,

1986).Esperar‐se‐ia que, duranteoperíodo de observação,ocorresseaumentodaslatências 

de retirada da cauda, fato

que não foi observado. Todavia, se isso ocorreu, deve ter sido

adequadamentemodulado,pois,duranteosprimeiros30minutosdeexperimento,nãoforam

observadasalteraçõescaracterísticasdesseprocesso.

Por outro lado, como conseqüência da lesão gerada pela formalina, poderia ocorrer

um eventual estado hiperalgésico. Todavia, as medidas do tempo gasto em

 reflexode auto‐

limpeza, avaliadas em períodos curtos (15 minutos, 30 minutos, 2 horas e 4 horas) ou mais

prolongados(24horas,48horas,7diase14dias),nãomostrarampadrãodiferenciadoentre

osgrupos(Figuras12,18e19).

Duranteafasedeobservaçãotardiadoexperimento2

(em24horas,48horas,7dias e 

14dias),foiavaliado,nocampoaberto,apenasocomportamentodeauto‐limpezaespontâneo

apresentadopelosanimais.Nenhumestimulodiretoouindiretofoiaplicadosobreelesnesse

período. Se a lesão tecidual causada pela formalina foi capaz de alterar a funcionalidade

neuronal,aponto

deinduzirmemóriacelularemníveltrigeminal,talvezissoserefletissecomo

diminuiçãodolimiarexcitatório dessascélulas.Assim,serianecessárioumestímulosubliminar

122

paradesencadearocom portamentonociceptivotípiconessemodeloexperimental.Contudo,

issonãofoiobservado(Figura16).

Recentemente, foi docum entado que a estimulação nervosa repetitiva pode induzir

potenciação de longa duração (long‐term potentiation ou LTP, em inglês) na transmissão 

aferenteprimária,mediadaporfibrasdetipoC,nonúcleocaudal

donervotrigêmeo(Lianget

al.,2005).

Acapacidadedetransformarexperiênciastransitóriasemmemóriapelo cérebro tem

sidoassociadacomalteraçõessinápticasinduzi dasporumatransmissãoneuronalrápidaede

alta freqüência (long‐term potentiation ou LTP), descoberta por Lømo (1966) e descrita por

BlisseLømo(1973).Estí mulos

rápidosedealtafreqüência(100Hz)nasviasaferentesdogiro

denteadodohipocampopodeinduzirLTP.Essefenômenoé arepresentaçãoeletrofisiológica

do postulado de Donald Hebb (1949), pelo qual, quando dois neurônios são ativados

repetidamenteporalgumtempo,ocorrealguma interaçãoentreeles,demodoque,ao

final,a

atividadedeumconduzàatividadedooutro.

O processo de LTP envolve vias de transdução celular dependente de cálcio,

necessitando de um transitório, porém significante, aumento pós‐sináptico da concentração

decálciointracelular(Ryghetal.,2002).Oglutamato,agindoemreceptoresglutamatérgicos

metabotrópicos, induzativação defosfolipase‐C, comconseqüenteliberação dediacilglicerol

(que,porsuavez,ativaproteínasquinases)edeinositoltrifosfato(IP

)(quemediaaliberação

docálciointracelularparaocitosol).GlutamatotambémagesobrereceptoresAMPA,abrindo

canaisiônicosdesódio.Esseinfluxodesódiogeraumpotencialpós‐sinápticodespolarizante

capazdeexpeliroíonmagnésiodointeriordocanal decálcioNMDA,aumentandoaindamais

aconcentraçãode

cálciointracelular.Esteaumentogeraativaçãodeproteínasquinases‐C,que

fosforilam o canal de cálcio, neutralizando os locais de fixação do íon magnésio, de modo a

manter o canal aberto e aumentar a excitabilidade do neurônio. Todo esse complexo

123

mecanismo contribui para a facilitação ou potenciação sináptica, que é o substrato da

memóriacelular(Hudspith,1997;Basbaum,1996;WoolfeManion,1999).

OprocessodeLTPfoiexaustivamenteestudadocomoummodelocelulardememória

eaprendizado.Entretanto,recentesestudos demonstraramquemecanismossimilarespodem

ocorreremviasnociceptivas,estando

envolvidoscomo aparecimentodehiperalgesia,alodinia

e analgesia (Sandkühler, 2000). Assim como no hipocampo, esse processo também pode

acontecer em neurônios nociceptivos do corno dorsal da medula espinhal, podendo

representar uma primitiva forma somatossensorial de “memória e aprendizado celular” na

circuitarianociceptivaespi nhal(Ryghetal., 2002).

Não existem

 métodos  experimentais que possam reproduzir a totalidade de um

fenômenofisiológicoou fisiopatogênicode determinadaentidade nosológica.No estudodas

dores cefálicas com componente vascular, principalmente de enxaqueca ou  de cefaléia em

salvas,aativaçãodosistematrigeminovascularéoprincipaleventofisiopatogênicoenvolvido 

(Moskowitz,1984).Todavia,acausaprimária

eosfatoresquelevamaestaativaçãonãosão

completamente esclarecidos. Acredita‐se que tenha causa multifatorial, envolvendo desde

mecanismosgeneticamenteherda dos(mutaçõesnosgenesCACNA1Anocromossomo19p13e

ATP1A2 no cromossomo 1q23, responsáveis por alterações em canais de cálcio e sódio,

respectivamente) até influências ambientais e psicossomáticas (Pietrobon

 et al., 2003;

Moskowitz,2007;Hargreaves,2007).

Conforme já mencionado, outra importante maneira de ativar o sistema

trigeminovascular é por meio da administração de nitroglicerina  sistemicamente. Padrões

comportamentaisnociceptivosassociadosaessemodelodeativaçãodosistematrigeminalsão

pouco explorados. Por esse motivo, elaborou‐se o experimento 3. Nele,

 observou‐se

importante redução da atividade de auto‐limpeza(grooming) nos dois grupos estudados,  no

tempode5minutosapósaadministraçãodenitroglicerina ouveículo,emcomparaçãocomos

valoresbasaiseaquelesobtidosem1 hora,2horase4horas(Figura21).Otempogastopelos

124

animaisrealizandoaquelecomportamentotambémsemostrousignificativamentemenoraos

30 minutos, em comparação com o que foi observado em 2 horas (Figura 21). Não foram

observadas alterações nos períodos de 24 e 48 horas (Figura 19). Concluiu‐se, assim,  que a

administraçãodostratamentospropostos–nitroglicerinaeveículo–

levouàrápidadiminuição

do tempo despendido no comportame nto de auto‐limpeza (aos 5 minutos). A partir dos 30

minutos,osvaloresdesseparâmetrocomeçaramavoltaraosníveis basais,demodoqueem1

horanãomaisdiferiramdaquelesobtidosantesdaadministraçãodostratamentospropostos.

As medidas de

tempo gasto em auto‐limpeza aos 30 minutos assumiram posição

intermediária, pois não foram diferentes daquelas obtidas aos 15 minutos, nem das

observadasem 1hora.Os dadossugerem, portanto, que ocomportamento deauto‐limpeza

nãoésensívelaosefeitosdaadministraçãodenitroglicerina.

Noexperimento3,tambémforamavaliadas

aslatênciasderetiradadacauda após a 

administraçãodenitroglicerinaeveículo,emdiferentestempos(basal,30minutos,24horase

48 horas), não tendo sido observadas diferenças significativas entre os grupos ou entre os

períodosdeavaliação(Figura23).

Desdeas primeirasdescrições  de Sobrero (1846),se reconhece

que dor de cabeça é

umdosprincipaisefeitosadversosrelacionadosaousodenitratosorgânicos.Essescompostos, 

quando metabolizados, são importantes doadores de óxido nítrico (Moncada et al., 1991;

MarsheMarsh,1997;Kerinetal.,2001;Bergerotetal.,2006).

Estudos de Olesen e colaboradores (1993) e

Iversen e colaboradores  (1993)

propuseram que a patofisiologia da enxaqueca estaria relacionada à hipersensibilidade ao

óxido nítrico. Em modelos experimentais de cefaléia em seres humanos, a administração de

nitroglicerina (NTG) é capaz de desen cadear dor de cabeça mais proeminente em pacientes

comhistóriapréviadecefaléiaprimáriadoquenoscontroles

(KrabbeeOlesen,1980;Sicuteri

etal.,1987;Olesene Thomsen,1993;LarseOlesen,2001).Alémdisso,aquelefármacojáfoi

descrito como ativador de vias nociceptivas trigeminais, levando à maior expressão de c‐fos

125

em núcleo trigeminal caudal (Tassorelli e Joseph, 1995). Em modelos experimentais  para o

estudodecefaléia,usodenitroglicerinaédescritocomoummodelocomplexo,categorizado

comoneurovasculardeativaçãotrigeminal(Bergerotetal.,2006).

Com base nessas evidências, esperava‐se que a nitroglicerina fosse capaz de

desencadearprocessonociceptivo

mediadopelosistematrigeminovascular,caracterizadopor

aumento nas medidas de auto ‐limpeza, parâmetro comportamental eleito como medida

nociceptiva relacionada à nocicepção trigeminal no primeiro experimento dessa Dissertação.

Todavia, os resultados demonstraram, ao contrário, marcada redução  da quelas medidas

comportamentais (Figura 21). Além disso, tanto os animais que receberam nitroglicerina,

quantoaquelesque

receberamveículo,nasdoseseconcentraçõesestipuladas,apresentaram

o mesmo padrão de resposta comportamental. Logo, o efeito observado não se mostro u

relacionadoespecificamenteàadministraçãodofármaco.

Talresultado,inicialmente,apresenta estreitarelaçãotemporalcomoperíodonoqual

pode ocorrer hipotensão arterial decorrente do uso de nitratos. Em experimentos

com

animais, quando nitroglicerina é administrada sistemicamente, cerca de 1 a 4  minutos após,

pode‐se observar hipotensão arterial sistêmica (Michel, 2007). Além disso, a dose de

nitroglicerina empregada nos experimentos desta Dissertação é reconhecidamente capaz de

induzirhipotensão,que pode perdurarporaté75 minutos(Needleman, 1970).Essefármaco

induz

 hipotensão arterial por meio de vasodilatação mediada pelo óxido nítrico (Tassorelli e

Joseph,1995a).

Nitroglicerina(trinitrato deglicerina ouNTG)éum nitrato  orgânico.Apresentameia‐

vida plasmática de cerca de 1 a 4 minutos, que pode ser prolongada em tecidos lipofílicos,

incluindoocérebro.Essecompostoérapidamentemetabolizado

nomeiointracelularemNO,

queéumimportantemensageironeuronal,comdiversasfunçõessinalizadorastantonoSNC,

quanto no Sistema Nervoso Periférico (Moncada et al., 1991; Bergerot et al., 2006).Sua

metabolização é realizada pela enzima mitocondrial aldeído‐d‐hidrogenase (Michel, 2006).

126

Agindo em sistema cardiovascular, causa vasodilatação, acarretando diminuição da pressão

diastólica e discreta redução em resistência vascular pulmonar  e débito cardíaco. Em altas

doses,écapazdegerarestasevenosa,aumentoderesistênciaarteriolarereduçãodepressão 

arterial (sistólica e diastólica) e débito cardíaco, podendo acionar mecanismos autonômicos 

regulatóriosdas

funçõescardiovasculares(Michel,2006).

A administra ção de nitratos orgânicos  desencadeia uma consistente e sustentada

ativação de áreas cardiovasculares centrais e regiões envolvidas na percepção e na

transmissão do processodoloroso (Tassorelli e Joseph, 1995a; 1995b; 1996; Tassorelli et al.,

1997).

Expressão de c‐fos é observada em várias regiões

 cerebrais após a administração

sistêmica de nitroglicerina. Esse fenômeno é encontrado em algumas áreas primariamente

envolvidas na resposta barorreceptora, onde os neurônios são ativados em resposta a um

episódiodehipotensão(sub‐núcleosmedialelateraldonúcleodotratosolitário),assimcomo

nobulbo(porçãoventro‐lateral),queexerce

papelfundamentalnaregulaçãofásicaetônicada

pressão arterial (Tassorelli e Joseph, 1995a). Aumento de expressão daquele pró‐oncogene

também é observado em áreas não relacionadas às funções cardiovasculares, como em

núcleos comissurais, sugerindo que esse fenômeno não esteja estritamente relacionado ao

controledapressãoarterial.Algunsdoslocaisque

apresentamabundanteexpressãodec‐fos

após a administração de nitroglicerina apresentam íntima relação com os processos

nociceptivos desencadea dos por injúria tecidual subcutânea, provocada pela injeção de

formalinaa5%naregiãoorofacial(TassorellieJoseph,1995a).

No núcleo caudal espinhal do nervo trigêmeo, a maioria das células imunorreativas

para

c‐fos é encontrada na lâmina I, que recebe aferência de fibras nociceptivas não‐

mielinizadas, e na lâmina II, de onde as informações daquelas fibras são transmitidas para

centrosrostrais(TassorellieJoseph,1995a).Taisachadossugeremumapossívelativaçãodos

127

neurônios envolvidos na sensibilidade de face, vasos sangüíneos ou meninges (Nozaki et al.,

1992;Kaubeetal.,1993).

Aexpressãodec‐fosobservadanosnúcleoscaudalespinhaldotrigêmeoecomissural

do trato solitário pode ser diretamente afetada pelo efeito da nitroglicerina no sistema

trigeminovascular, onde ocorre a regulação

 do s mecanismos nociceptivos e vasculares

cerebrais. Wei e colaboradores (1992) demonstraram que a vasodilatação cerebral indu zida

pela nitroglicerina é inibida por antagonista de receptores para CGRP, provavelmente  o

principal regulador do sistema trigeminovascular, e que a denervação crônica trigeminal

diminuiarespostadasarteríolascerebraisaessenitratoorgânico.

Estudos

demonstraramqueexisteimportanteaumentodeGMPcnonúcleotrigeminal

caudal entre 2 e 4 horas após a administração de nitroglicerina, sendo que o maior valor é

observadonoperíodode4horas(Torfgardet al.,1989;TorfgardeAhnler, 1991;Tassorelliet

al.,2004).Essesachadospredominaramnasfibrasneuronais

donúcleocaudaldotrigêmeoe

dotratotrigeminoespinhal.Noselementosvascularesassociados,níveisaumentadosdeGMPc

ficaram restritos às paredes das pequenas arteríolas corticais e capilares. Possivelmente, o

aumento desse nucleotídeo seja resultante de uma cascata de eventos secundários à

administração de NTG, que possivelmente inclui ativação de estruturas

perivasculares e

neurôniosdotroncoencef á lico,seguidapelaexpressãodogenedeNOS

i

.

Essefenômenosugerequeanitroglicerinainduzalteraçõesespecíficasnasparedesde

microvasos,oque,porsuavez,ativariaasfibrastrigeminovascularesoriginadasemgângliode

Gasser. Esse composto seria responsável por uma super‐regulação de GMPc em arteríolas

corticais e neurônios trigeminais nociceptivos. Paralelamente, a nitroglicerina induz

significativas alterações

 de fluxo sangüíneo em córtex somatossensorial, que perduram por

mais de 2 horas. Portanto, esse fármaco é capaz de induzir indiretamente alterações

neuroquímicasnonúcleocaudaldonervotrigêmeo.TaisachadossugeremqueaviaNO‐GMPc

128

sejaumaconexãoentreoseventosvasculareseneuronaisenvolvidosnodesencadeamentoe

namanutençãodasdorescefálicas,principalme nteemenxaqueca(Tassorellietal.,2004).

Se a  maior expressão de GMPc e a atividade algésica trigeminal desencadeada pela

administração de nitroglicerina  são eventos  que ocorrem de modo paralelo, teoricamente o

tempo entre 2 e 4 horas seria aquele em que maior registro de atividade nociceptiva seria

observada.Todavia, no experimento 3, ocomportamento sugestivo de atividade noci ceptiva

sófoiobservadonos primeiros5minutosapósotratamentocomaquelefármaco.Alémdisso,

elefoidenaturezaconflitanteaoresultadoesperado–

reduçãoemvezdeaumentodotempo

gasto em auto‐limpeza (Figura 18). Possivelmente, se ocorreu processo álgico secundário à

administraçãodenitroglicerina,elefoimoduladoadequadamentepelasviasdescendentesde

dorouoparâmetrodeaferiçãoadotado(tempodegrooming)não foiadequadoparadetectá‐

lo.

Tassoreli e Joseph

 (1995a) demonstraram marcante expressão de c‐fos na porção

ventrolateralcaudaldasubstânciacinzentaperiaquedutal, queapresentaimportanteatuação

nos mecanismos nociceptivos. Similar expressão desse proto‐oncogene naquela região

tambémpodeserobservadaapóshipotensãohipovolêmica(ChaneSawchenko,1993).Paraos

primeiros autores, é possível que os mecanismos relacionados

tanto à hipotensão, quanto à

estimulação nociceptiva possam estar envolvidos, especialmente quando considerada a

ativação dos neurônios no núcleo caudal do trigêmeo, sendo que as projeções desta última

estruturaàsubstânciaperiaquedutalpareceterimportanteenvolvimentonessefenômeno.

Densaexpressãodec‐fosemáreasdeintegraçãodasrepostas vegetativa,endócrina

e 

comportamental também é observada após tratamento com nitrato orgânico. São descritas

extensas conexões entre núcleo parabraquial e regiões de tronco e mesen céfalo, tais como

núcleodotratosolitário,medulaventrolateral,substânciaperiaquedutalcinzenta,hipotálamo

periventricular e núcleo central da amígdala (Tassoreli e Joseph, 1995a; Pacák e Palkovits,

2001). A

porção ventrolateral do núcleo parabraquial recebe suas maiores aferências dos

129

núcleosdotratosolitárioeáreapóstremaeprojeta‐seaosnúcleosprosencefálicoscomfunção

integradora autonômica (Herbet et al., 1990; Tassoreli e Joseph, 1995a; Pacák e Palkovits,

2001).

Outroimportantelocal deexpressãode c‐fos é olocus coeruleus,quepossivelmente

não apresenta papel ativo na regulação vasomotora.

 Estudos demonstraram ausência de

projeçõesdosnúcleosdotratosolitárioparaessaestrutura,bemcomoqueelapareceexercer 

poucoounenhumefeitosobreapressãoarterial(Anston‐Jonesetal.,1986;Valentinoetal.,

1986).Olocuscoeruleusrecebeaferênciasdosneurôniosdaporçãoventro‐lateraldobulboe

as encaminha para áreas prosencefálicas e vasos cerebrais. Assim,  aquela região parece

exercerfunçãofundamentalnasinalizaçãoenacoor denaçãodarepostaglobalaosefeitosda

nitroglicerina(Valentinoetal.,1980;Goadsbyetal.,1982;Anston‐Jonesetal.,1986;Kachidian

etal.,1990;Pieriboneetal.,1991).

O estudo conduzido por Tassoreli e Joseph (1995a) sugere que a nitroglicerina pode 

ativar áreas envolvidas com mecanismos neuroendócrinos e vegetativos, uma vez que foi

observadaintensaexpres são dec‐fosnosnúcl eos paraventriculareshipotalâmicos,queestão

intrinsecamente envolvidos com aqueles mecanismos. Share (1988) também demonstrou

intensa expressão desse proto‐oncogene

 em núcleos supra ‐ópticos, fato que pode estar

relacionado à secreção de vasopressina  secundária à hipotensão gerada por aquele

nitrovasodilatador.

Grande número de neurônios do núcleo central da amígdala também apresentou

intensa expressão de c‐fos após a administração de nitroglicerina, o que estaria mais

relacionadaaosfenômenosnociceptivosdo

queaoscardiovascularespropriamenteditos.As

conexões daquela estrutura límbica com a substância cinzenta periaquedutal reforçam o

vínculo entre os circuitos que coordenam as funções vegetativas e os eventos nociceptivos

(TassorelieJoseph,1995a;PacákePalkovits,2001).

130

Alémdisso,extensaexpressãodec‐fosnascélulasdoórgãosubfornicialpodeocorrer

secundariamenteaousodenitroglicerina.Essefatopodeestarrelacionadoaoacessodiretode

substâncias circulantes (angiotensina e vasopressina) aos receptores neurais localizados no

interior daquele órgão, o que seria resultante das respostas  vegetativa, neuroendócrina e

comportamental

 mediadas por suas conexões com o núcleo paraventricular do hipotálamo

(TassorellieJoseph,1995a).

Assim como a nitroglicerina, o veículo, por ter sua composição à base de alcoóis

(mistura de etanol [30%], propilenoglicol [50%] e água [40 %]) também seria propício a

desencadearrelaxamentovascularehip o tensãoarterial.Possivelmente,esses

efeitosestariam

mais correlacionados ao etanol. Vários mecanismos foram propostos para justificar a

capacidade do etanol de desencadear hipotensão (El‐Mas e Abdel‐Rahman, 2007). Howe e

colaboradores (1989) atribuíram o efeito hipotensor do etanol às alterações no controle

vegetativo cardiovascular,  que podem ser abolidos após o bloqueio. Outros fatores

relacionados

 a  esse fenômeno incluem inibição do influxo de cálcio para dentro do músculo

lisovascular(Turlapatyetal.,1979),promoçãodas atividadesdeprostaglandinasendoteliaise

óxidonítrico(Grennbergetal.,1993),induçãodedepressãomiocárdica(Kelbaeketal.,1985)

eaumentodorelaxamentovascular,mediadoporreceptores

deadenosina(Rekiketal.,2002).

Ascoincidentesmedidasdeauto‐limpezaencontradasentreosgruposquereceberam

nitroglicerina e veículo podem estar relacionadas aos efeitos hipotensores que ambo s os

compostos desencadeiam, por meio das vias óxido‐nitrérgicas, e não necessariamente

relacionadasao desencadeamentodeumprocessonociceptivopropriamentedito.

Alémdisso,

oefeitodecorrentedanitroglicerinapo deriaserpotencializadopelosalcoóisquecompõemo

veículo em que é diluída. Assim, poder‐se‐ia esperar valores intermediários das medidas de

auto‐limpezanosanimaisdogrupocontrole,fatotambémnão ocorrido.

Aadministraçãodenitroglicerinaemindivíduoscomenxaquecaou

cefaléiaemsalvas

desencadeia dor cefálica mais proeminente do que naqueles previamente hígidos.

131

Possivelmente, isso estaria relacionado a uma hipersensibilidade ao óxido nítrico (Iversen et

al.,1993;Olesenetal.,1993).Outrapossibilidadeéadequeindivíduoscomhistóriapréviade

dor de cabeça apresentassem um sistema trigeminal sensibilizado, o que facilitaria o

desencadeamento da dor ou exacerbaria sua intensidade. Essa hipótese

 corroboraria os

resultados observados no terceiro experimento, pois os animais apenas receberam

nitroglicerina por via sistêmica, sem apresentar experiências nociceptivas mediadas pelo

sistematrigeminalpreviamente.

Aassociaçãodemodelosno ciceptivosabrangendoasmaisvariadasformasdeativação

do sistema trigeminovascular seria interessante durante estudos  experimentais relacionados

às dores orofaciais e

cefálicas com componente vascular. Por isso, nessa Dissertação, foi

propostooexperimento4comesseobjetivo.Associou‐seummodelodeativaçãoperiféricado

sistema trigeminal (dor orofacial induzida pela formalina) com outro de ativação sistêmica

neurovascular, utilizando composto vasodilatador (nitroglicerina). Procurou‐se avaliar as

medidas do tempo total gasto com

 o reflexo de auto‐limpeza e de latência de retirada da

cauda.

 Na análise do tempo despendido em comportamento de auto‐limpeza, não foram

encontradas diferenças significativas entre os grupos no primeiro dia da primeira semana,

imediatamente antes da  administração dos tratamentos propostos (Tabela 7). Ao se

compararemas medidasbasais de cadauma dastrês semanas deexperimento, observou‐se

redução daquele tempo na segunda e na terceira semanas em relação à primeira,

independentementedosgruposconsiderados(Figura25).Esseachadopodeestarrelacionado

aofenômenodehabituação.Como,duranteoexperimento,osanimaisforamsubmetidosao

mesmo ambiente por várias vezes, há tendência a reduzir os parâmetros comportamentais

com a familiarização com o campo aberto (Thiel et al., 1998, 1999; Viana et al., 2001). É

importanteressaltarquetodas essasmedidas,indep endentementedasemanaavaliada,foram

132

obtidasantesdaadministraçãodequalquertratamento,nãoestando,portanto,relacionadas à

injeçãodassoluçõesemestudo.

 Naanálisedotempodespendidoemgrooming 15minutos após a  administraçãodos

tratamentos propostos, novamente observaram‐se diferenças significativas das segunda e

terceirasemanaemre laçãoàprimeira,independentementedosgruposexperimentais (Figura

26). Houve redução do comportamento de auto‐limpeza, provavelmente como resultado da

habituação ao ambiente.  Adicionalmente, foram também observadas diferenças entre os

gruposeinteraçãoentreestes eassemanasdeavaliação.Naprimeirasemana,osanimaisque

receberamsoluçãosalina,porviasubcutânea,eumdostrêstratamentospropostosparaavia

intraperitoneal (solução salina, veículo ou ni troglicerina,  correspondendo, respectivamente,

aos grupos SS, SV e SN) não diferiram entre si (Figura 26). Concluiu‐se, assim, que a

nitroglicerina não interferiu sobreo parâmetro comportamental nesse período de avaliação.

Esse resultado complementa o que foi visto no experimento 3, em que houve redução do

tempo gasto em auto‐limpeza entre 5 e 30 minutos depois da administração de veículo ou

nitroglicerina(Figura21).

 Ainda na primeira semana de avaliação, foi observado que a administração de

formalina, por via subcutânea, associada à solução salina, por via intraperitoneal

(correspondendo aogrupo FS), levouao aumento dotempo despendido no comportamento

de auto‐limpeza, em relação ao grupo controle, que recebeu solução  salina tanto por via

subcutânea, quanto por via intraperitoneal, correspondendo ao grupo SS. De fato, aquele

grupo(FS)diferiudetodos aquelesquereceberamsolução salina,por viasubcutânea(SS,SVe

SN),edoquerecebeuformalina,porviasubcutânea,enitroglicerina, por via intraperitoneal

(FN)(Figura26).Taisdadosconfirmamaquelesobtidosnosexperimentos1e2(Figuras15e

16).

O comportamento observado no grupo que  recebeu solução formalina, por via

subcutânea, e veículo, por via intraperitoneal (grupo FV), apresentou um padrão

133

intermediário, de modo que não diferiu do grupo  que recebeu solução salina, por via

subcutânea,eveículo,porviaintraperitoneal(grupoSV),nemdogrupoquerecebeusolução

formalina, por via subcutânea, e salina, por via intraperitoneal (grupo FS) (Figura 26). Isso

sugere que o veículo pode apresentar certo efeito no modelo de dor orofacial induzida por

formalina,revertendo parcialmente oaumento do tempo gasto em auto‐limpeza por  aquela

substânciairritante.

 Observou‐se, ainda na primeira semana, que os animais para os quais foram

administradas formalina, por via subcutânea, e salina, por via intraperitoneal (grupo FS)

diferiram significativame nte daqueles que receberam formalina, por via subcutânea, e

nitroglicerina, por via intraperitoneal (grupo FN) (Figura 26). Os primeiros despenderam

significativamente mais tempo em auto‐limpeza do que os segundos. Assim, embora a

administraçãodenitroglicerina(grupoSN)nãotenhaapresentadoefeitoporsisó,foicapazde

reverter o aumento do tempo gasto em auto‐limpeza determinado pela formalina. Logo, no

primeiro dia da primeira semana de tratamento, 15 minutos após receberem o nitrato, os

animais expostos ao modelo de dor orofacial pela formalina voltaram a apresentar

comportamentosimilaraodoscontroles(quereceberamsalina,porviasubcutânea,eumdos

três tratamentospropostos para uso  por via intraperitoneal, correspondendo aosgrupos SS,

SVeSN)(Figura23).Nasduassemanasseguintes,todososgruposavaliados(correspondendo

aSS,SV,SN,FS,FVeFN)diferiramsignificativamentedogrupoquerecebeuformalina, porvia 

subcutânea,esoluçãosalina,porviaintraperitoneal(FS),naprimeirasemanadeexperimento. 

De fato, nas segunda e terceira semanas, a solução de formalina não foi novamente

administrada. Isso pode explicar a ausência do efeito observado na primeira semana, com

aumento do tempo de grooming. Co mo esse efeito não ocorreu aqui, a administração de

nitroglicerina também não levou a alterações de comportamento em relação aos controles

(Figura 26). Concluiu‐se que a ni troglicerina só reverte o efeito agudo da administração da

134

formalina, quando há aumento do tempo em auto‐limpeza (fase aguda do modelo de dor

orofacial).Nãoexerceefeitoemlongoprazonessemodelo.

Porfim,15minutosapósaadministração dos tratamentospropostos,nassegunda e

terceira semanas de experimento, observou‐se redução do tempo despendido em auto‐

limpeza,emcomparaçãocomaprimeirasemana,independentementedosgruposestudados,

sugerindomaisumavezmaisahabituaçãoaoambiente(Figura26)(Thieletal,1998and1999;

Vianaetal,2001).

Podem‐se aventar algumas hipóteses para explicar a reversão que a nitroglicerina

determinousobreoaumentodogroominginduzidopelaformalina.

Pormeiodotradicionalmodelodedordesencadeadapelaadministraçãosubcutânea

de formalina  na pata dos animais, Okuda ecolabo radores (2001) demonstraram que, com o

uso de alta concentração de agente irritante, formalina 10% , não há produção de efeito

máximo no comportamento nociceptivo, nem produção de óxido nítrico ou liberação de

glutamato no corno dorsal da medula espinhal. Os autores sugerem que esse fato pode ser

decorrentedaaltaintensidadedoestímulonociceptivogerado.Comoresultadodeaferência

nociceptiva persistente ou intensa, haveria maior ativação dos mecanismos descendentes

inibitórios de controle da dor, envolvendo várias estruturas supra‐espinhais.  Com isso, a

respostafinalobservadaseriaumefeitomaisatenuadoaoestímulonocivo.

Comoosmodelosdedororofacialinduzidapelaformalinaeexperimentaldecefaléia

induzidapor nitratoscompartilhamde processosfisiopatogênicoscomuns, poder‐se‐iasupor

queanitroglicerina,agindocomoumdoadordeóxido nítricoestejaatuandosinergicamente

com o agente irritante, potencializando seu efeito nociceptivo. Alguns autores referem que

aquele fár m aco, um pró‐formador de óxido nítrico, influencia indiretamente o fenômeno

doloroso,especialmenteoprocessodesensibilizaçãodosnociceptoresdesegundaordemem

nível medular (Saito et al., 1994; Lin et al., 1999). Como  conseqüência da atuação pró‐

nociceptivadosdoiscompostos–formalinaenitroglicerina–emdoissítiosdistintos,ocorreria

135

maior ativação das vias descendentes inibitórias e esta, por sua vez, determinaria como

resultadofinalaatenuaçãodarespostacomportamental,comretornodas medidasdetempo

gastocomocomportamentodeauto‐limpezaàquelasencontradasnoperíodo basal.

OóxidonítricoestáenvolvidoemumavariedadedefunçõesfisiológicasnosSNC.Há

evidências de sua atuação sobre respostas nociceptivas e inflamatórias. Tem sido proposta,

por exemplo , uma complexa interação entre os sistemas óxido‐nitrérgicos e opióides,

envolvendo paralelamente mecanismos GABAérgicos e glutamatérgicos de tipo N‐metil‐D‐

aspartato(NMDA) (Homayounetal., 2002;Okuducue Onal,  2005).Morfina eóxidonítrico

parecem atuar de forma acoplada em diversos processos (Ferreira et al., 1991;Gyires, K.,

1994;Kolesnikovetal, 1993;Bhargava,1995;DambisyaeLee,1996).

Morfinapodeestimular

aliberaçãodeóxidonítricoemdiferentestecidos,incluindoeminênciamediaderatos(Stefano

etal.,1997).Temsidosugeridoquealiberaçãodeóxidonítricoinduzidapormorfinapodeser

mediadapor receptores mu(Welterset al., 2000).Poroutrolado,a administraçãoagudade

substratos de

 NO altera a distribuição de morfina no encéfalo e na medula espinhal,

possivelmenteporinibiçãodacaptaçãodemorfinaemsítioscentrais(Bhargavaetal.,1998).

Taisalteraçõestêmsidoimplicadasnamodulação daanalgesiadamorfinaporNO(Bhargava

etal.,1998).Estudos propõemefeitomoduladordosistemaNO

sobreaanalgesiaevocadapor

receptoresopióides,especialmenteosdetipomu(McDonaldetal.,1994;Fideckaetal.,1997;

Capassoetal.,1998;Homayounetal.,2003;Chenaetal.,2006).

Conforme Spruijt e colaboradores (1992), em situações de estresse agudo, após a

ativação do eixo hipotálamo‐hipófise‐adrenal, se observou importante aumento do

comportamento de auto‐limpeza, mediado principalmente pela ação de ACTH (hormônio

adrenocortrópico). Também se observou papel de ADH, que foi capaz de desencadear tal

parâmetrocomportamentalporlongosperíodos.Segundoessesautores,existeumasériede

evidênciasassociandoosistemaopióidecomodesencadeamentodocomportamentodeauto‐

136

limpeza, principalmente por meio da ação de ACTH. É reconhecido que baixas doses de

morfina ouβ‐endorfina são capazes de gerar atividade de auto‐limpeza. A administração de

antagonistaopióide,comonaloxona,podeinibiressecomportamento,quandodesencadeado

pelaaçãodeACTH epeptídeosopióides.Alémdisso,aadministraçãodeACTHeβ‐endorfina

nasubstânciacinzentaperiaquedutalpoderesultaremexcessivoaumentonoreflexodeauto‐

limpeza(Spruijtetal.,1992).

Assim, vários sistemas neuro‐humorais relacionados a esse modelo experimental

podem estar influenciando, direta ou indiretamente, o padrão comportamental de auto‐

limpeza15minutosapósaadministraçãoassociadadeformalinaenitroglicerina,noprimeiro

dia do experimento. Entretanto, mais estudos necessitam ser realizados para melhor

elucidação

dessasobservações.Antagonistasopióidespoderiam serutiliza dos comafinalidade

deavaliaropapeldo sistema  opióidenosefeitosobservados quandodaassociação dos  dois

modelos,dedororofacialeneurovasculardecefaléia.

Naanálisedotempodespendidoemgrooming30mi nutos,120minutose240minutos

apósaadministração dostratamentospropostos,nãoseobservaramdiferençassignificativas,

querentreosgrupos,querentreassemanasdeobservação(Figuras27,28e29),confirmando

dados dos experimentos 2 e 3. Parece haver uma dissociação entre os tempos em que há

maiorproduçãode óxido nítrico,representadapela atividadedeGMPcduranteosperíodos

de 2 e 4 horas (Torfgard et al., 1989; Torfgard e Ahnler, 1991; Tassorelli et al., 2004), e a

medidacomportamentalemquestão.

Quando da avaliação daquele parâmetro 24 e 48 horas após a instituição dos

tratamentos em estudo, apareceram diferenças significativas entre as semanas,

independentemente dos grupos, demodo que o tempo gasto emauto‐limpeza foimaior na

terceira semana do experimento, em comparação,  respectivamente, com a segunda ou a

primeira.

137

No experimento 4, também foram avaliadas as medidas de latência de retirada da

cauda(tail‐flick).Nãoseobservaramdiferençassignificativas,querentreosgrupos,querentre

as semanas, nos períodos imediata mente antes (basal) e após 15 minutos, 30 minutos, 240

minutos,24horas e48horasdaadministraçãodostratamentospropostos(Figuras32a34,36

a35).Apenasnotempode2horasobservou‐seaumentosignificativodaslatênciasderetirada

da cauda nas segunda e terceira semanas de observação em relação à primeira,

independentementedosgruposexperimentais.Talresultadopodeseratribuídoàhabituação

dosanimaisàexposiçãoaoaparelho,demodoque,comarepetiçãodoteste,familiarizam‐se

comoestímuloaplicadoepassamademorarmaispararetiraracauda.

Essesresultados diferemdos de Costae colaboradores  (2005),que relataramestado

hiperalgésico 2 a 4 horas após a administração de nitroglicerina, por via intraperitoneal, na

dose de 10 mg/kg. Todavia, tal resultado poderia estar relacionado ao modelo utilizado por

estesautores,quealémdediferirdopropostonesteexperimento,tambémapresenta técnicas

deinduçãoaestressecrônico,comcontençãodosanimaisporlongosperíodos.

Por meio da observação da evolução de peso corporal dos animais, é possível supor

queaexposiçãodos animaisaosmodelospropostosnãointerferiucomseuestadodesaúde

geral. No decorrer das semanas, houve aumento gradual daquele peso, o que é o padrão

habitual,esperado,paraanimaissadios.

138



Conclusões

139



¾ Onúmero de cruzamentos (crossings) emcampo aberto,utilizando omodelo dedor

orofacialinduzidapelaformalina,nãoapresentoudife rençasignificativaemrelaçãoao

grupocontrole.Combasenesseachado,sugere‐sequeonúmerodecruzamentosnão

ésensívelàadministraçãodeformalinaporviasubcutânea.



¾ Onúmeroderespostasdeorientação (rearing)emcampoaberto,utilizandoomodelo

dedororofacialinduzidapelaformalina,nãosemostroudiferentedaqueleobservado

nogrupocontrole.Combasenesseachado,sugere‐sequeonúmeroderespostasde

orientaçãonãoésensívelàadministraçãodeformalina

porviasubcutânea.



¾ Otempogastoemreflexodeauto‐limpeza(grooming),emcampoaberto,utilizandoo

modelo de dor orofacial induzida pela formalina, apresentou um valor superior ao

grupo controle durante os primeiros 20 minutos do experimento. Com base nesse 

achado,sugere‐sequeessedeveser

consideradocomooparâmetrorepresentativoda

respostanociceptivanomodelodedororofacialinduzidapelaformalinaduranteesta

janelatemporal.



¾ Otempogastoemreflexodeauto‐limpeza(grooming),emcampoaberto,utilizandoo

modelo neurovascular de ativação trigeminal por administração sistêmica de

nitroglicerina,nãoapresentoudiferençaem

relação aoseucontrole.Combasenesse

achado, sugere‐se que o comportamento de auto‐limpeza não é sensível à

administraçãodessevasodilatadorsistêmico.



¾ Otempogastoemreflexodeauto‐limpeza(grooming),emcampoaberto,nomodelo

associado de dor orofacial induzida pela formalina e ativa ção

trigeminal por

administração sistêmica de nitroglicerina, apresentou uma redução em relação ao

140

grupo controle que recebeu apenas formalina por via subcutânea e salina por via

intraperitoneal. Com base nesse achado, sugere‐se que a nitrogl icerina é capaz de

reverter o aumento do comportamento de auto‐limpeza induzido pela formalina

subcutânea.



¾ Arespostanociceptiva,avaliadapormeiodamedidadoreflexode

retiradadacaudaa

estímulo térmico nocivo(tail‐flick latency), no modelo de  dor orofacialinduzida pela

formalina,não apresentoualteraçõessignificativas quandocomparadas com ogrupo

controle. Com basenesse achado, sugere‐se que este método não é adequado para

avaliar resposta das vias nociceptivas relacionadas à ativação  do

 trato

trigeminotalâmico.



¾ Arespostanociceptiva,avaliadapormeiodamedidadoreflexoderetiradadacaudaa

estímulo térmico nocivo (tail‐flick latency), no modelo neurovascular de ativação

trigeminal por administração sistêmica de nitroglicerina, não apresentou diferença

com relação aos controles em nenhum momento do experimento. Com base nesse

achado, sugere‐se que a nitroglicerina não é capaz de desencadear uma resposta

comportamental capaz de ser me nsurada,  ou este método não é sensível para

avaliaçãonociceptivanestemodelodenocicepção.



¾ Arespostanociceptiva,avaliadapormeiodamedidadoreflexoderetiradadacaudaa

estímulo térmico nocivo (tail‐flick latency), no modelo associado de dor orofacial

induzida pela formalina e ativação trigeminal por administração sistêmica de

nitroglicerina, apresentou alterações sugestivas de analgesia apenas 2 hora s após

administrado o

 tratamento, durante a segunda e terceira semana de experimento,

porém o res ultado não foi diferente do grupo controle. Com base nesse achado,

141

sugere‐sequeasalteraçõesrelacionadasaestarespostanociceptivaestárelacionada

àhabituaçãoeomesmonãoésensívelparaavaliaçãodeatividadenociceptivaneste

modelo.



142



Perspectivas

143



¾ Os estudos envolvidos nessa Dissertação contribuíram para a elaboração de dois

capítulosdelivrosdidáticos:

1. Ferreira MBC, Perla AS. Dores crônicas orofaciais. In: Wannmacher L,

Ferreira MBC, eds. Farmacologia Clínica para Dentistas. 3 ed. Rio de

Janeiro:GuanabaraKoogan;2007:231‐249.

2. Ferreira MBC, Perla AS. Farmacologia

 do Sistema Nervoso Central. In:

WannmacherL,FerreiraMBC,eds.Farmacologia Clínica para Dentistas.3

ed.RiodeJaneiro:GuanabaraKoogan;2007:109‐115.



¾ Apartirdosresultadosobtidos dessaDissertação,estãosendoelaboradostrêsartigos,

que estão em fase de conclusão e serão encaminhados para as revistas Pain

 e

Cephalalgia.



1. Estudo comportamental por meio da análise das medidas do reflexo de

auto‐limpeza e retirada da  cauda no modelo de ativação  periférica

trigeminalsecundárioàadministraçãodeformalinasubcutânea.



2. Avaliação da atividade nociceptiva por meio do estudo do tempo

dispendidonoreflexodeauto‐limpeza,

apósativaçãotrigeminalsistêmica

poradministraçãodenitroglicerinaporviaintraperitoneal.



3. Influênciadaadminstraçãosistêmicadenitroglicerinanomodeloorofacial

deformalina.



144



¾ OsresultadosobtidosnessaDissertaçãotambémservirãodebaseparaelaboraçãodo

projetodeDoutorado.Procurar‐se‐ámapearasviasnociceptivas,comsuasrespectivas

estruturas, após a ativação da via trigeminal, tanto perifericamente, pela

administração de formalina por via subcutânea, quanto sistemicamente, pela

administração de nitroglicerina, por meio

 de estudos imunoistoquímicos env o lvendo

expressãodec‐foseneuropeptídeosrelacionadosàfisiopatogeniadasdorescefálicas,

comoCGRPeSubstânciaP.

Omesmoprocessotambémseráaplicadonomodeloqueassociaosdoismétodosde

ativação das vias trigeminais (central eperiférico). Nele,também seestudará asvias

moduladoras descendentes

da nocicep ção, especialmente no que tange o

envolvimentodasviasoxidonitrérgicas.

O maior conhecimento deste modelo poderá torná‐lo uma ferramente últil para o

estudodenovosmedicamentosnotratamentodedoresorofaciais.



145



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