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ISABELLE VANDERLEI MARTINS
ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS E DE HEMOSTASIA NA
LEISHMANIOSE VISCERAL CANINA
RECIFE
2008
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1
UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE PERNAMBUCO
PRÓ-REITORIA DE PESQUISA E PÓS-GRADUAÇÃO
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIA VETERINÁRIA
ISABELLE VANDERLEI MARTINS
ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS E DE HEMOSTASIA NA
LEISHMANIOSE VISCERAL CANINA
Dissertação apresentada ao Programa de Pós-
Graduação em Ciência Veterinária do Departamento
de Medicina Veterinária da Universidade Federal
Rural de Pernambuco, como requisito parcial para
obtenção do grau de Mestre em Ciência Veterinária.
Orientador:
Prof Dr Leucio Câmara Alves
RECIFE
2008
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2
Ficha catalográfica
CDD 636. 708 969 364
1. Calazar canino
2. Epidemiologia
3. Diagnóstico
4. Sorologia
5. Sinais clínicos
6. Desordens hemostáticas
7. Alagoas
I. Alves, Leucio Câmara
II. Título
M386a Martins, Isabelle Vanderlei
Aspectos epidemiológicos e de hemostasia na
Leishmaniose visceral canina / Isabelle Vanderlei Martins.–
2008.
76 f. : il.
Orientador : Leucio Câmara Alves
Dissertação (Mestrado em Ciência Veterinária) - Uni -
versidade Federal Rural de Pernambuco. Departamento de
Medicina Veterinária.
Inclui anexo e bibliografia
3
UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE PERNAMBUCO
PRÓ-REITORIA DE PESQUISA E PÓS-GRADUAÇÃO
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIA VETERINÁRIA
ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS E DE HEMOSTASIA NA
LEISHMANIOSE VISCERAL CANINA
Dissertação de Mestrado elaborada por
ISABELLE VANDERLEI MARTINS
Aprovada em 08 / 02 / 2008
BANCA EXAMINADORA
_______________________________________
Prof. Dr. Leucio Câmara Alves
Orientador – Departamento de Medicina Veterinária da UFRPE
_______________________________________
Prof
a
. Dr
a
. Marta Pedrosa Souto Maior
Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento - AL
_______________________________________
Prof. Dr. Fábio Luíz da Cunha Brito
Unidade Acadêmica de Garanhuns da UFRPE
_______________________________________
Prof. Dr. Wagnner José Nascimento Porto
Faculdade de Ciências Biológicas e da Saúde do CESMAC - AL
4
À minha família, que apoiou as minhas escolhas
inteiramente, que me ajudou, confortou e entendeu os
momentos de ausência, de estresse, de correria...
São exemplo de dedicação!
5
AGRADECIMENTOS
Ao meu DEUS, pela vida, por a cada amanhecer, ver que mais um dia surge a minha frente, com
tantas oportunidades, tantas graças concebidas e tanta VIDA! Ah! E por nunca ter permitido que
me acontecesse nada nas minhas viagens no ônibus de meia-noite! Obrigada meu Pai do Céu!
Aos meus amados pais, Vera Lúcia e Carlos Augusto Martins, que sempre me apoiaram em tudo,
sempre me acompanharam (até em minhas coletas!!!), orientaram e me proporcionaram todas as
chances de crescer e ser alguém na vida, com palavras de sabedoria, amor e muito sacrifício. E
por cuidarem dos meus “filhinhos animais” na minha ausência!! Amo vocês!!!
Aos meus irmãos, Júnior e Rodrigo Martins, por todos os momentos de alegrias, de tristezas, por
nossas “brigas” que sempre nos ensinam a sermos melhores, e pelo querer bem.
A minha querida avó Ayerba Martins, além de tudo madrinha, grande torcedora dos netos, pelo
apoio, compreensão, amor e auxílio em toda minha vida.
Aos meus avós que olham por mim junto ao meu Deus, Mário Acioly, um grande homem que,
infelizmente não conheci, mas foi a base pra minha mãe, Maria da Glória (vó Glorinha), pelo
amor aos animais, sei que herdei isso dela, e João Peixoto (Major), meu padrinho, que de onde
estiver, continuará olhando e se orgulhando de sua “primaneta ratinha”.
Ao meu noivo, Felipe Bastos, amigo e companheiro de todas as horas, meu grande amor, pela
renúncia, compreensão, por todo amor e força, pelos momentos de carinho, de aprendizado,
diversão, e por todo o auxílio que me deu na realização deste trabalho. Teria sido muito difícil
sem sua ajuda! E a sua família, Feitoza Bastos, que sempre me recebe como os seus!
Aos familiares sempre presentes em minha vida, particularmente aos primos João Eduardo
Ronalsa, Adriana Cerqueira, Carolina Wanderley, Juliana Wanderley, Mariana Buarque, Cláudia
Borba, Gerlane Borba, e aos tios Carlos Ronalsa e Maria Wanderley, pelo auxílio direto ou
indireto nas minhas coletas.
Ao meu tio José Antônio Cerqueira (tio Tonho), pelo auxílio no capítulo de distribuição espacial,
que se dedicou com tanto afinco, pelas vezes em que ficamos “até tarde” fazendo os mapas...
Muito obrigada tio!!
A Lalá Machado, prima que me acolheu em sua casa esses dois anos, como se eu fosse filha,
obrigada por tudo!!! Por permitir que eu me sentisse tão bem, como se fosse em minha própria
casa!! A Dôra Gurgel, Elyzabeth e Eraldo, que me apoiaram e torceram pelo meu mestrado.
Ao meu orientador, professor Dr Leucio Câmara Alves, pela confiança demonstrada me
aceitando como sua orientada, pelos ensinamentos específicos e de vida passados ao longo desses
dois anos, por compreender os momentos de “fuga” para casa, e pela amizade e preocupação
demonstrados.
Aos amigos graduandos e pós-graduandos do Laboratório de Doenças Parasitárias dos Animais
Domésticos da UFRPE, em especial a Nadja, Ivana, Alessandra, Danillo, Andréa, Gilsan,
6
Antônio, Marilene, Edna, Samanta, Elizete, Edenilze, Whaubtyfran, Eduardo, Débora, Carlos,
Fabiane, Paola, Ana Maria, Márcia Paula, Auxiliadora, Marco, Rita, João, Jônatas, pelo convívio
agradável, pelas dicas e apoio recebido ao longo do mestrado, e a todos aqueles que passaram por
este departamento durante este período.
A professora Dra. Maria Aparecida da Glória Faustino, pela boa convivência e pelo apoio durante
esse período.
Aos colegas e amigos da turma de mestrado e pós-graduandos de outras turmas, Ana Cristine,
Rosana Léo, Sandra Monteiro, Jairo Macedo, Paulo Peixoto, Roberto Rômulo, Edmilson (Sapo) e
tantos outros que faziam “aquela farra” nas aulas de seminário e fora delas.
Aos amigos veterinários, Dra. Karen Mascaro, Dr. Wagnner Porto, Dra. Geovania Braga, Dra.
Marta Souto Maior, que acreditaram em mim, intercederam e apoiaram a minha entrada no
mestrado.
A Coordenação do Programa de Pós-Graduação em Ciência Veterinária da UFRPE, pelo apoio
acadêmico; aos Professores, pela dedicação, por dividirem seus conhecimentos profissionais e de
vida, e aos funcionários do departamento de Medicina Veterinária dessa instituição!
A Ana Katarina, funcionária do COMUT, na Biblioteca Central da UFRPE, por ter sido tão
“gente boa”, auxiliando na busca de periódicos.
A Rodrigo Alves de Lira e Mineo Nakazaua, do Laboratório de Imunoparasitologia do Centro de
Pesquisa Aggeu Magalhães, Fundação Oswaldo Cruz, pela acolhida e auxílio na realização dos
testes sorológicos.
A Dra. Jacqueline Monteiro Martins, farmacêutica bioquímica do Setor de Hemostasia da
Unidade de Laboratório (ULAB) do Hospital das Clínicas da UFPE, pela acolhida amigável e
paciente, auxiliando e possibilitando a realização de uma parte deste trabalho.
A Médica Veterinária, Dra. Gisele Cláudia Penso, proprietária da Clínica Le Petit, em Concórdia,
Santa Catarina, que me auxiliou muito atenciosamente com a coleta das amostras do grupo
controle; e Dr Giovane da UFPE, por possibilitar o transporte dessas amostras até Recife.
Aos queridos amigos de profissão Lígia Buzzá, Diogo Câmara, Almir Tavares, Carla Andréa,
Cláudia Sarmento, Patrícia Magalhães, Sandra Trindade, Manoel Felipe, Carolina Gomes,
Catiúcia Maia, que cedeu até seu carro para esta pesquisa, a todos pelo auxílio nas coletas de
minhas amostras, além da grande amizade demonstrada, também aos seus funcionários, e aos
estudantes Adriana Mattos e Alex, também pelo auxílio nas coletas.
A Secretaria Municipal de Saúde e ao Centro de Controle de Zoonoses do Município de Maceió,
por me receberem e cederem informações sobre a Leishmaniose Visceral na nossa cidade,
importantes para este trabalho.
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As pessoas que me acompanharam em algumas coletas, alguns líderes comunitários ou pessoas
conhecidas nas comunidades, como seu Aurélio, Joais, Ginaldo, Lela, Zé Otávio e alguns agentes
de saúde, por facilitarem a entrada em algumas casas.
A população de Maceió, que nos recebeu em suas casas, de várias maneiras, às vezes com uma
grande acolhida, preocupados em ajudar de verdade, até nos dando presentes como água de côco
e um saco de limão, outras vezes de forma hilária, situação como a que fui confundida com um
“pedinte” por um senhor idoso que já não enxergava e nem ouvia bem: “ – Venha depois minha
filha, tem nada agora não, viu!!!!” São cenas, lembranças, aprendizados de vida que vou guardar
sempre comigo!!!
Aos cães da cidade, que se doaram a este trabalho, alguns um pouco trabalhosos como a
cadelinha Belinha, uma Pinscher que nos fez correr muito atrás dela ao redor de sua casa, outros
muito gentilmente, como foi o caso da SRD Pipoca, que após a coleta de sangue, sentou no meu
colo e não quis mais sair!!!! São muitas histórias!!!
Aos meus “filhinhos do coração”, Nala, Vicky, Pingo e Zé, que me impulsionam a ser o que sou,
a aprender mais a cada dia, que me recebem com tanto amor no olhar... E a todos que já se foram
e deixaram suas pegadinhas gravadas em minha vida (Duquesa, Lucky...) Inesquecíveis!!!
A todos aqueles que compreenderam minha ausência em algumas situações importantes, mas
sabendo que eu estava presente em pensamento, por toda amizade, carinho que recebi, apoio e
auxílio...
De todo o coração, MUITO OBRIGADA!
Que DEUS os abençoe sempre!
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Q uerer é poder...
“Se você estiver intim am ente ligado a D eus, poderá ir m uito
m ais longe do que im agina e terá poder para conseguir coisas
com as quais jamais sonhou. N ão há lim ites para as suas
idéias e planos, basta querer e acreditar. Pense que você pode
e não há nada ou ningu ém que poderá anular as suas chances
e possibilidades. H á som en te um detalhe com o qual você d eve
se preocupar: se o que você qu er é realm ente bom para você e
plano de D eus pra sua vida. S e você sentir no seu coração que
é bom , que D eus está no n egócio, então, faça e seja feliz.
D eus está sem pre com você!!”
(A u tor desconhecido)
"O s olhos de D eus estão sobre os cam inhos do hom em ".
(Jó 34:21)
9
ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS E DE HEMOSTASIA NA LEISHMANIOSE
VISCERAL CANINA
Resumo
No Brasil, a Leishmaniose Visceral Canina (LVC) representa um sério problema na medicina
veterinária, especialmente onde a doença tem associação com o processo de urbanização das
cidades. Os cães ainda são considerados os principais reservatórios e podem apresentar uma
grande diversidade de sinais clínicos, incluindo lesões de pele, desordens nutricionais,
linfadenomegalia e onicogrifose. A finalidade deste estudo foi determinar não somente a
prevalência e a distribuição espacial da LVC, mas também verificar os sinais clínicos em cães
com leishmaniose visceral da cidade de Maceió, Estado de Alagoas, e avaliar os níveis
plasmáticos de fibrinogênio e o tempo de protrombina (TP) de cães atendidos no Hospital
Veterinário da Universidade Federal Rural de Pernambuco. Um total de 425 cães domiciliados
foi investigado para a presença de anticorpos anti-Leishmania sp através do teste ELISA, e
avaliados os sinais clínicos relacionados à LVC. Usando o sistema de informação espacial como
o sistema de posicionamento global, os dados foram plotados de acordo com a procedência dos
cães soropositivos. Os resultados mostraram que 1,9% (08/425) dos animais foram positivos ao
teste sorológico, sendo os bairros de Benedito Bentes (6,7%), Petrópolis (6,7%) e Ipioca (6,3%)
as principais áreas endêmicas, pertencentes aos distritos sanitários VI, IV e I respectivamente.
Lesões de pele e perda de peso foram os principais sintomas observados em 75% dos cães
positivos. Os outros cães soropositivos mostraram-se assintomáticos para a LVC. Por outro lado,
amostras de plasma de 31 cães foram usadas para avaliar os níveis plasmáticos de fibrinogênio e
o TP. Foram observadas alterações nos níveis de fibrinogênio em 45,4% (10/22) e no TP em
95,4% (21/22) nos animais do grupo infectado (GI). Contudo, nenhuma diferença estaticamente
significativa (p<0,05) entre GI e GC foi observada. Conclui-se que a cidade estudada é uma
região endêmica para o calazar canino, e os cães das áreas endêmicas devem ser avaliados
cuidadosamente quanto aos sinais clínicos e à presença de anticorpos anti-Leishmania sp, a fim
de se prevenir a disseminação da doença. A avaliação dos níveis plasmáticos de fibrinogênio e
TP não mostrou nenhum valor diagnóstico na LVC.
Palavras-chave: Calazar Canino, Epidemiologia, Sistema de Posicionamento Global, Fatores de
Coagulação.
10
EPIDEMIOLOGICAL AND HEMOSTASY ASPECTS IN CANINE VISCERAL
LEISHMANIASIS
Abstract
In Brazil, Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) represents a serious problem in veterinary
medicine, especially where the disease has association with the urbanization of the cities. Dogs
still the major reservoir host and may presents a great diversity of clinical signs, including skin
lesions, nutritional disorders, enlargement of lymph nodes and onycogryphosis. The purpose of
this study was not only to estimate the prevalence and the spatial distribution of CVL but also
verify the clinical signs in dogs with visceral leishmaniasis from Maceio city, Alagoas State and
evaluate the plasma fibrinogen levels and prothrombin time (PT) in dogs infected by Leishmania
(Leishmania) chagasi examinated in the Veterinarian Hospital of the Rural Federal University of
Pernambuco. A total of 425 domiciliated dogs were investigated to anti-Leishmania sp antibodies
by ELISA test, and evaluate to clinical signs related to CVL. Using the spatial information
system such as global positioning system the data was plotted according of seropositive dogs.
The results showed 1.9% (08/425) animals were positive to serological test, being the Benedito
Bentes (6.7%), Petrópolis (6.7%) and Ipioca (6.3%) the major endemic areas, which belongs to
sanitary districts VI, IV and I respectively. Skin lesions and weight loss were the major
symptoms observed in 75% of positive dogs. The other seropositive dogs showed no clinical
signs of CVL. On the other hand, plasma samples of 31 dogs were used to evaluate the plasma
fibrinogen levels and PT. It was observed changes in fibrinogen level of 45.4% (10/22) and
95.4% (21/22) of PT in infected group (IG). However no statically significant difference (p<0.05)
between IG and GC were observed. In conclusion, as the studied city is an endemic region of
canine kala-azar, and dogs from endemic areas must be carefully evaluated to clinical signs and
for the presence of antibodies anti-Leishmania sp in order to prevent the spread of the disease.
The evaluation of plasma fibrinogen levels and PT showed no diagnostic value in the CVL.
Keywords: Canine Kala-azar, Epidemiology, Global Positioning System, Factors Coagulation
11
LISTA DE TABELAS
CAPÍTULO I:
Tabela 1. Freqüência absoluta e relativa dos animais com sorologia positiva para L. (L.) chagasi da
cidade de Maceió, segundo raça e porte do cão, 2008 .................................................................. 39
Tabela 2. Freqüência absoluta e relativa dos animais com sorologia positiva para L. (L.) chagasi, da
cidade de Maceió, segundo a idade e o sexo, 2008 ....................................................................... 40
Tabela 3. Freqüência absoluta e relativa dos sinais clínicos encontrados em cães com diagnóstico
sorológico positivo para LVC na cidade de Maceió, 2008 ............................................................ 41
CAPÍTULO II:
Tabela 1. Resultado do inquérito sorológico em cães domiciliados da cidade de Maceió,
apresentando distribuição por distrito sanitário e amostras examinadas com soropositividade, 2008
........................................................................................................................................................ 57
CAPÍTULO III:
Tabela 1. Média, Mediana e Desvio Padrão dos valores encontrados na determinação do
fibrinogênio (mg/dL) e do TP (s), em cães com LVC (GI) e grupo controle (GC), 2008 ........... 69
12
LISTA DE ILUSTRAÇÕES
CAPÍTULO II:
Figura 1. Distribuição dos bairros onde foi realizada a pesquisa para LVC, no município de
Maceió, 2008 .............................................................................................................................. 53
Figura 2. Espacialização das amostras de cães avaliados para LVC, através da introdução de
símbolos circulares em pontos no mapa, com as coordenadas obtidas por GPS, no município de
Maceió, 2008 ............................................................................................................................. 54
Figura 3. Distribuição espacial da LVC nos sete distritos sanitários da cidade de Maceió,
apresentando o percentual de cães soropositivos nos bairros pesquisados, 2008 ..................... 56
13
SUMÁRIO
1 INTRODUÇÃO GERAL .................................................................................................... 15
1.1 Agente etiológico ............................................................................................................ 15
1.2 Vetor ................................................................................................................................ 16
1.3 Reservatórios ................................................................................................................. 16
1.4 Distribuição geográfica .................................................................................................. 17
1.5 Sinais clínicos da LVC ................................................................................................... 19
1.6 Achados laboratoriais .................................................................................................... 21
1.7 Diagnóstico ....................................................................................................................... 22
1.8 Referências ....................................................................................................................... 24
2 OBJETIVOS .......................................................................................................................... 32
2.1 Objetivo geral .................................................................................................................. 32
2.2 Objetivo específico .......................................................................................................... 32
3 CAPÍTULO I:
ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS DE CÃES COM INFECÇÃO NATURAL POR
Leishmania (Leishmania) chagasi, PROCEDENTES DE MACEIÓ, ALAGOAS
..................................................................................................................................................... 33
Resumo ................................................................................................................................... 34
Abstract .................................................................................................................................. 35
3.1 Introdução ....................................................................................................................... 36
3.2 Material e métodos .......................................................................................................... 36
3.3 Resultados e discussão .................................................................................................... 38
3.4 Conclusão ......................................................................................................................... 42
3.5 Referências ....................................................................................................................... 43
14
4 CAPÍTULO II:
DISTRIBUIÇÃO ESPACIAL DA LEISHMANIOSE VISCERAL CANINA EM MACEIÓ,
ALAGOAS ................................................................................................................................ 48
Resumo ................................................................................................................................... 49
Abstract .................................................................................................................................. 50
4.1 Introdução ....................................................................................................................... 51
4.2 Material e métodos .......................................................................................................... 51
4.2.1 Área estudada ........................................................................................................... 51
4.2.2 Animais .................................................................................................................... 52
4.2.3 Espacialização das amostras .................................................................................... 52
4.3 Resultados e discussão .................................................................................................... 55
4.4 Conclusão ......................................................................................................................... 60
4.5 Referências ....................................................................................................................... 61
5 CAPÍTULO III:
AVALIAÇÃO DOS NÍVEIS PLASMÁTICOS DE FIBRINOGÊNIO E TEMPO DE
PROTROMBINA EM CÃES COM INFECÇÃO NATURAL POR Leishmania
(Leishmania) chagasi .............................................................................................................. 64
Resumo .................................................................................................................................. 65
Abstract ................................................................................................................................. 66
5.1 Introdução ...................................................................................................................... 67
5.2 Material e métodos .......................................................................................................... 67
5.3 Resultados e discussão ................................................................................................... 69
5.4 Conclusão ......................................................................................................................... 70
5.5 Referências ....................................................................................................................... 71
6 CONCLUSÕES GERAIS .................................................................................................... 73
7 ANEXO ................................................................................................................................. 74
ANEXO 1: Ficha de avaliação ............................................................................................ 75
15
1 INTRODUÇÃO GERAL
A Leishmaniose Visceral (LV), também conhecida como calazar, é uma doença sistêmica
e grave, que apresenta caráter zoonótico (FERRER, 1999; BRASIL, 2004; RIBEIRO, 2005a).
Sua distribuição geográfica é mundial e pode ser encontrada em várias regiões do Brasil (ALVES
e FAUSTINO, 2005). A principal espécie envolvida no Brasil é a Leishmania (Leishmania)
chagasi (FEITOSA et al., 2000), cuja transmissão é realizada por flebotomíneos, destacando-se a
espécie Lutzomyia longipalpis (RIBEIRO, 2005b).
Os cães domésticos, além de serem acometidos pela enfermidade, têm sido considerados
seus principais reservatórios urbanos (SANTA ROSA e OLIVEIRA, 1997; FEITOSA, 2001;
ALVES e FAUSTINO, 2005; RIBEIRO, 2005b).
Segundo Ribeiro (2005a), a disseminação dos parasitas ocorre da pele para os linfonodos,
baço, medula óssea, e para todo o organismo, com possível desenvolvimento posterior do quadro
clínico (FEITOSA, 2001). Dependendo da imunocompetência do hospedeiro, os sinais clínicos
tornam-se evidentes num período que varia de três meses a vários anos (NOLI, 1999; SANTA
ROSA e OLIVEIRA, 1997; FEITOSA, 2001).
1.1 Agente etiológico
Segundo sua classificação taxonômica, o gênero Leishmania agrupa espécies de
protozoários pertencentes ao reino Protista, sub-reino Protozoa, filo Sarcomastigophora, sub-filo
Mastigophora, classe Zoomastigophora, ordem Kinetoplastida e sub-ordem Trypanosomatida
(LEVINE et al., 1980). Pertencente ao complexo Leishmania donovani, L. (L.) chagasi é a
espécie encontrada no Brasil. Alguns autores a consideram semelhante a Leishmania
(Leishmania) infantum presente no Velho Mundo, com base em perfis isoenzimáticos (MELO,
2004).
L. (L.) chagasi é um parasita intracelular obrigatório das células do sistema fagocítico
mononuclear, podendo ser encontrada nas formas predominantes amastigota e promastigota
(NOLI, 1999; SANTA ROSA e OLIVEIRA, 1997; BRASIL, 2004). A forma amastigota é uma
estrutura sem flagelo livre, localizando-se nos tecidos dos hospedeiros vertebrados, no interior de
16
macrófagos, onde se multiplica por divisão binária, ou ainda, pode ser encontrada livre entre as
células (NOLI, 1999; LUVIZOTTO, 2005). A forma promastigota ou forma flagelada encontra-
se no trato digestório de hospedeiros invertebrados e em cultivos de laboratório (NOLI, 1999).
1.2 Vetor
Os principais vetores do calazar são insetos dípteros, denominados flebotomíneos,
pertencentes à ordem Díptera, família Psychodidae, sub-família Phlebotominae (GALATI et al.,
1997; MATTOS JR et al., 2004), e popularmente conhecidos como mosquito palha, cangalhinha,
birigui ou tatuquiras (BRASIL, 2004; ALVES e FAUSTINO, 2005). No Brasil, a principal
espécie transmissora é o Lu. longipalpis, mas recentemente, a espécie Lutzomyia cruzi vem sendo
relatada no Estado de Mato Grosso do Sul, incriminada como possível vetor (GALATI et al.,
1997; SANTOS et al., 2003).
Esses vetores desenvolvem-se em ambientes terrestres úmidos e ricos em matéria orgânica
e de baixa incidência luminosa. Eram originalmente encontrados em matas, mas
progressivamente foram adaptando-se ao ambiente rural, e mais recentemente, a ambientes
urbanos, nas periferias dos grandes centros, no peri e intradomicílio, e em abrigos de animais
domésticos. As fêmeas são hematófagas obrigatórias, o que possibilita a maturação dos ovários, e
apresentam hábitos ecléticos, podendo realizar o repasto sanguíneo em várias espécies de
vertebrados domésticos e silvestres, principalmente roedores, aves, cães, o homem (BRASIL,
2004).
1.3 Reservatórios
Várias espécies de mamíferos têm sido encontradas naturalmente infectadas por
Leishmania sp, mas destacam-se como reservatório, canídeos silvestres, como as raposas
(Dusicyon vetulus e Cerdocyon thous) (PALATINIK-DE-SOUSA et al., 2001; VIANNA, 2001) e
marsupiais, como o gambá (Didelphis marsupialis), animais de hábitos sinantrópicos que podem
propiciar elo epidemiológico entre os ciclos silvestres e domésticos (SILVA et al., 2005).
17
Por representar o principal reservatório da doença em ambiente urbano, o cão doméstico
assume importante papel na cadeia de transmissão da LV (NOLI, 1999; SANTA ROSA e
OLIVEIRA, 1997; FEITOSA, 2001; VIANNA, 2001).
Um dos fatores que, aparentemente, dão aos cães essa grande importância como
reservatório, é a presença desses animais convivendo e compartilhando o domicílio com o
homem, além do intenso parasitismo cutâneo que os cães infectados podem apresentar. Animais
assintomáticos também são capazes de servir como fonte de infecção para flebótomos, e apesar
de serem capazes de infectar um número menor de vetores, em geral é a maioria em uma
população (SILVA et al., 2005).
1.4 Distribuição Geográfica
No Brasil, a LV encontra-se em várias áreas de transmissão, com diferentes perfis
epidemiológicos, associados ou não a problemas sócio-econômicos e sanitários, particularmente
na região Nordeste, onde está ligada à pobreza e à subnutrição na população humana e canina,
conseqüentemente (ALVES e FAUSTINO, 2005).
A enfermidade tem sido considerada reemergente no país (ARIAS et al., 1996). O ciclo
de transmissão, que anteriormente ocorria no ambiente silvestre e rural, hoje também se
desenvolve em centros urbanos (GONTIJO e MELO, 2004). Esse processo de urbanização ocorre
devido a circunstâncias epidemiológicas favoráveis associadas à redução do espaço ecológico
natural desta zoonose, que conduziram à migração populacional para as periferias das grandes
cidades, gerando favelas, onde as condições sócio-econômicas e sanitárias são mínimas (ARIAS
et al., 1996; VIANNA, 2001).
As degradações ambientais criam condições que permitem a aproximação entre homens,
populações de Lu. Longipalpis e de cães e raposas, forçando a adaptação do vetor ao ambiente
urbano, e possibilitando novos ciclos de transmissão (SANTA ROSA e OLIVEIRA, 1997;
SILVA et al., 2005).
Por outro lado, a presença de cães infectados também contribui para a dispersão da
doença durante as migrações de humanos de áreas endêmicas para não endêmicas (ARIAS et al.,
1996). Estes movimentos populacionais permitem tanto a introdução do agente causador da LV
18
em áreas livres, quanto à inserção de indivíduos susceptíveis em áreas endêmicas (DANTAS-
TORRES e BRANDÃO-FILHO, 2006).
A primeira epidemia de LV em grandes centros urbanos teve origem em Teresina (PI) em
1981 (COSTA et al., 1990). Duas décadas depois, o processo de urbanização se intensificou,
ocorrendo importantes epidemias, destacando-se altas taxas de prevalências da doença canina em
várias cidades do Brasil (GONTIJO e MELO, 2004). Na região Norte, foram registrados casos
em Santarém (PA) e Palmas (TO) (MELO, 2004). Quanto à região Centro Oeste, Moura et al.
(1999) verificaram no município de Cuiabá (MT) 64,5% de amostras positivas para leishmaniose
canina. Posteriormente, Nunes et al. (2001) e Cortada et al. (2004), registraram freqüências da
infecção canina de 23,7% e 75,3% em Bonito e Anastácio (MS), respectivamente.
Na região Sudeste, desde 1993, inquéritos epidemiológicos caninos vêm sendo realizados,
tendo como fundo a epidemia de LV no município de Belo Horizonte (MG) (ALVES e
BEVILACQUA, 2004). No Estado de São Paulo, o primeiro relato de Leishmaniose Visceral
Canina (LVC) ocorreu em 1998, na cidade de Araçatuba (IKEDA et al., 2003). Em 1999,
Camargo-Neves et al. (2001) realizaram um inquérito sorológico canino, mostrando prevalência
geral de 12,1% nesse município. Em municípios do Rio de Janeiro também são relatados focos da
doença (MARZOCHI et al., 1984).
O diagnóstico da LV na região Sul do país é raro e sugere extensão a partir de focos
endêmicos de outras regiões do país. Apesar disso, casos esporádicos de LVC foram registrados
na região de Santa Maria (RS) (POCAI et al., 1998).
Mas é na região Nordeste onde é relatado o maior número de casos desta enfermidade
(ALVES e FAUSTINO, 2005), sendo observada a infecção canina em todos os Estados dessa
região, principalmente em municípios da Bahia (SHERLOCK e ALMEIDA, 1970; ASHFORD et
al., 1998), Ceará (ALVES et al., 1998), Maranhão (GUIMARÃES et al., 2005; BRAGA, 2007),
além do Piauí (COSTA et al., 1990). A expansão e urbanização da LV com casos humanos e
caninos vêm ocorrendo em várias cidades de grandes e médios portes, como em João Pessoa (PB)
(GOMES et al., 2001), Mossoró (RN) (MATOS et al., 2006) e Aracajú (SE) (MELO, 2004). No
Estado de Pernambuco, apesar de poucos relatos da freqüência do calazar canino na Região
Metropilitana na cidade do Recife (ALBUQUERQUE et al., 2007), Dantas-Torres et al. (2006)
verificou em Paulista uma soroprevalência canina de 40,3%.
19
O Estado de Alagoas encontra-se entre os 19 Estados brasileiros que registram casos de
LV (ALAGOAS, 1999), e tem maior incidência em municípios situados no litoral e no sertão
(ALAGOAS, 2001). Segundo o Ministério da Saúde (2005), Maceió é classificada como cidade
de transmissão intensa, com uma média de 5,6 casos humanos/ano. Porém, nem todos os bairros
da cidade apresentam o mesmo índice de infectividade, havendo as zonas de risco dentro do
município (ALAGOAS, 2005). Estudos realizados por Lima et al. (2005) sugerem que a
distribuição da LVC em Maceió não está restrita apenas às áreas litorâneas, fato também
observado por Calheiros (2005), encontrando-se atualmente em processo de urbanização.
1.5 Sinais clínicos da LVC
A LVC apresenta uma grande variedade de características clínicas que vão de aparente
estado sadio a um quadro severo, podendo evoluir para óbito (SANTA ROSA e OLIVEIRA,
1997). Numa infecção por Leishmania sp, as células do sistema mononuclear fagocitário
infectadas por parasitas atuam como células apresentadoras de antígenos, estimulando os
linfócitos (CD4+) T auxiliares (Th) do tipo 1, podendo a infecção ser debelada, ou do tipo 2, com
o aparecimento dos sinais clínicos (NOLI, 1999).
Os sinais são pouco específicos como emagrecimento, diminuição ou perda do apetite,
dermatopatias, diarréia, febre irregular, apatia, lesões oculares, epistaxe, anemia,
linfoadenomegalia, esplenomegalia, hepatomegalia, emaciação e onicogrifose (FERRER, 1999;
BONATES, 2003; ALVES e FAUSTINO, 2005).
Nessa enfermidade, também podem aparecer outras formas clínicas atípicas, incluindo
desordens cardiovasculares, respiratórias, digestivas, renais, neurológicas e músculo-esqueléticas
(BLAVIER et al., 2001; RIBEIRO, 2005a). Por apresentar essa diversidade de sinais, os animais
acometidos são classificados como assintomáticos, quando não apresentam sinais de LVC;
oligossintomáticos, aqueles que apresentam sinais leves, e sintomáticos, os que apresentam sinais
característicos (RIBEIRO, 2005a).
A pele é o primeiro órgão de contato com a Leishmania sp, assim, as lesões cutâneas são
as observações mais freqüentes e aparentes, apresentando nos animais infectados uma grande
variedade de processos patológicos, consistindo em áreas de alopecia, com descamação
eczematosa ou furfurácea, principalmente periocular e pregas de pele (HERNANDEZ-
20
RODRIGUEZ et al., 1987; SÃO PAULO, 2003), seborréia seca disseminada por todo o corpo ou
mais localizada, úlceras cutâneas ou mucosas, hiperqueratoses e nódulos intradérmicos
(HERNANDEZ-RODRIGUEZ et al., 1987; FERRER, 1999; BLAVIER et al., 2001; FEITOSA,
2006).
Em relação às manifestações oculares na LVC, ocorrem mais freqüentemente blefarite,
conjuntivite ou ceratoconjuntivite, edema corneal, glaucoma e uveíte (FERRER, 1999).
O acometimento do sistema renal, à nível intersticial e/ou glomerular também é relatado
na LVC, descrevendo-se glomerulonefrite proliferativa, membranoproliferativa difusa e nefrite
intersticial (TAFURI et al., 2001) compatível com a deposição de imunocomplexos provocados
pela doença, fato relatado também por Ferrer (1999).
Quanto ao sistema respiratório, as alterações pulmonares descritas na LVC são as de
pneumonia intersticial crônica, com infiltrado linfoplasmocitário e, ocasionalmente, macrófagos
nos septos alveolares (LUVIZOTTO, 2006).
A ocorrência de problemas locomotores na LVC pode ser decorrente de neuralgia,
poliartrite, sinovite, polimiosite, osteomielite, fissuras nos coxins ou úlceras interdigitais
(FEITOSA, 2006). São também descritos casos de lesões osteolíticas e periostite proliferativa
(FERRER, 1999). Poliartrites são geralmente resultados de depósitos de imunocomplexos
(FEITOSA, 2006).
A infecção por Leishmania sp ainda pode causar inflamações granulomatosas no trato
digestório, resultando em enterites hemorrágicas, colites crônicas e ulcerativas, com melena
(BLAVIER et al., 2001). Muitos animais sofrem uma diarréia crônica oriunda do intestino grosso
(FERRER, 1999).
Manifestações nervosas também podem ocorrer associadas à LVC. Dentre as alterações,
destacam-se tetraparesia, convulsões, mioclonias, andar em círculos, nistagmo, tremor de
intenção, alterações em nervos cranianos, como estrabismo, paralisia da mandíbula e ptose labial,
decorrentes da deposição de imunocomplexos ou de infecções secundárias no sistema nervoso
central (FEITOSA, 2006), além de meningite (VIÑUELAS et al., 2001) e meningoencefalite
(LIMA et al. 2003).
A hepatomegalia consiste num dos principais achados clínicos do calazar canino. A
progressão dos sinais clínicos na LVC é acompanhada pelo parasitismo hepático, que estimula
uma reatividade inflamatória (CIARAMELLA e CORONA, 2003). A esplenomegalia também é
21
um achado freqüente na LVC. As alterações patológicas variam de intensidade, e as lesões
macroscópicas estão relacionadas com a evolução da doença (LUVIZOTTO, 2006).
Outro sinal importante em cães provenientes de áreas endêmicas é a onicogrifose
(ALVES e FAUSTINO, 2005). Essa alteração é atribuída à baixa atividade dos cães e
conseqüente falta de desgaste das unhas (MARZOCHI et al. 1984; STRAUSS-AYALI e
BANETH, 2001).
Em relação às linfadenopatias, o envolvimento do sistema hemolinfático é caracterizado
por linfadenomegalia, ocorrendo em mais de 90% dos casos (LUVIZOTTO, 2006). Os
linfonodos apresentam-se muito reativos, podendo-se observar a presença de células plasmáticas,
eosinófilos, macrófagos e formas amastigotas de Leishmania sp (NOLI, 1999).
De acordo com Ferrer (1999), cinco a 10% dos cães com LVC apresentam episódios de
epistaxe. A origem desse sangramento ainda não é totalmente entendida, mas parece resultar de
lesões inflamatórias e ulcerativas da mucosa nasal e/ou a alterações no mecanismo de coagulação
(NOLI, 1999), como uma falha na hemostasia primária, causada por parede vascular anormal,
trombocitopenia e/ou função plaquetária defeituosa (FERRER, 1992).
1.6 Achados laboratoriais
As alterações laboratoriais em cães infectados com L. (L.) chagasi em geral são
inespecíficas. Contudo, alterações hematológicas, particularmente diminuição da série
eritrocitária (IKEDA et al., 2003), têm sido relatadas como conseqüência de uma eritropoiese
diminuída, que pode ser em decorrência de hipoplasia ou aplasia medular (FERRER, 1992;
MORENO et al., 1998).
As desordens hemostáticas, incluindo diáteses hemorrágicas (JÜTTNER et al., 2001),
hematúria (HERNANDEZ-RODRIGUEZ et al., 1987), coagulação intravascular disseminada
(CID) (FONT et al., 1994), trombocitopenia, além de distúrbios nos fatores de coagulação como
tempo de trombina (TT), tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA) e tempo de
protrombina (PT) prolongados, elevação dos níveis de fibrinogênio e de produtos da degradação
da fibrina, sugerem a participação da Leishmania sp nos processos de hemostasia (MORENO,
1999), influenciando a função plaquetária e a síntese e metabolismo desses fatores de coagulação
(CIARAMELLA et al., 2005).
22
Por outro lado alterações, na série leucocitária têm sido relatadas como achado ocasional
na LVC (FERRER, 1992; KOUTINAS et al., 1999).
Do ponto de vista bioquímico, as alterações mais significantes dizem respeito aos níveis
das proteínas totais e das suas frações (KEENAN et al., 1984). O aumento das proteínas totais dá-
se pela exacerbada ativação policlonal de linfócitos B, com conseqüente produção de anticorpos
(KOUTINAS et al., 1999), o que explica a hipergamaglobulinemia. Em contraste, observam-se
baixos valores de albumina (RIBEIRO, 2005b).
Elevação dos teores de uréia (NIETO et al., 1992; SOLANO-GALLEGO et al., 2003) e
creatinina (NIETO et al., 1992; RIBEIRO, 2005b), da alanina aminotransferase (ALT)
(COUTINHO et al., 2005) e de lipídios totais (RAMOS et al., 1994), têm sido relatados, porém
cães infectados com Leishmania sp podem apresentar valores normais (COUTINHO et al., 2005).
Segundo Mattos Jr et al. (2004) os constituintes séricos são desprovidos de valor
diagnóstico, pois a baixa especificidade dos exames hematológicos e bioquímicos séricos torna
imprescindível o exame sorológico.
1.7 Diagnóstico
O diagnóstico da LVC deve ser realizado de maneira criteriosa, em virtude da
inespecificidade de sinais clínicos (FEITOSA, 2001; GONTIJO e MELO, 2004) e à grande
porcentagem de cães assintomáticos (FERRER, 1999).
Existem três categorias de testes utilizados no diagnóstico da LVC: os métodos
parasitológicos, onde busca-se a visibilização do parasito; os métodos sorológicos, detectando-se
anticorpos anti-Leishmania sp; e os métodos moleculares (FERRER, 1999).
Uma forma segura de diagnóstico é a pesquisa parasitológica, que permite a identificação
direta do parasito na forma amastigota, quando procedente de tecido do hospedeiro vertebrado.
Apresenta alta especificidade (100%), no entanto a sensibilidade é baixa, em torno de 60%
(LUVIZOTTO, 2005). Pode ser realizada através de esfregaços de material proveniente de
aspirado esplênico, de medula óssea, linfonodos ou de biópsia hepática, corados pelo método de
Giemsa, Wrigth ou Leishman, e ainda, pelo método de coloração rápida Panótico (SANTA
ROSA e OLIVEIRA, 1997), além do exame citológico de raspados de lesões cutâneas e pele
íntegra (ALVES e FAUSTINO, 2005).
23
Técnicas de imunoistoquímica são métodos que podem ser aplicados em biópsias de pele,
assim como esfregaços e cortes histológicos, aumentando a acurácia do diagnóstico etiológico
(LUVIZOTTO, 2005), pois são altamente sensíveis e específicos para a detecção do antígeno de
Leishmania em tecidos (FERRER, 1999).
As provas sorológicas podem ser realizadas, através dos testes de Imunofluorescência
Indireta (IFI), Ensaio Imunoenzimático (ELISA) ou o Teste de Aglutinação Direta (TAD),
imunocromatografia e “inmunoblot”. (MARZOCHI et al, 1984; SANTA ROSA e OLIVEIRA,
1997), imunocitoquímica e as técnicas de fixação do complemento (ALVES e FAUSTINO,
2005). Apesar das técnicas sorológicas apresentarem alta sensibilidade e especificidade, nem
sempre um resultado soropositivo pode ser conclusivo de doença ativa, da mesma forma que cães
infectados podem ser soronegativos (LUVIZOTTO, 2005).
Dentre os métodos moleculares, a reação em cadeia pela polimerase (PCR) permite a
amplificação do DNA do parasito. A extração do DNA pode ser realizada a partir de amostras de
tecidos do paciente, incluindo medula óssea, sangue, aspirado de linfonodos e biópsia cutâneas, e
também do vetor. A sensibilidade e especificidade são altas, próximas a 100% (FERRER, 1999;
LUVIZOTTO, 2005).
24
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32
2 OBJETIVOS
2.1 Objetivo Geral:
• Avaliar os aspectos epidemiológicos e de hemostasia na Leishmaniose Visceral Canina.
2.2 Objetivos Específicos:
• Calcular a prevalência da Leishmaniose Visceral Canina em Maceió;
• Avaliar as características clínicas de cães com infecção natural por Leishmania
(Leishmania) chagasi da cidade de Maceió;
• Verificar a distribuição espacial da Leishmaniose Visceral Canina nos distritos
sanitários de Maceió;
• Avaliar os níveis plasmáticos de fibrinogênio e tempo de protrombina (TP) em
cães com infecção natural por Leishmania (Leishmania) chagasi.
33
CAPÍTULO I
ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS DE CÃES COM INFECÇÃO NATURAL
POR Leishmania (Leishmania) chagasi, PROCEDENTES DE MACEIÓ,
ALAGOAS
34
ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS DE CÃES COM INFECÇÃO NATURAL
POR Leishmania (Leishmania) chagasi, PROCEDENTES DE MACEIÓ,
ALAGOAS, BRASIL
Resumo
A Leishmaniose Visceral (LV) representa um sério problema de saúde pública no Velho e Novo
Mundo, sendo o cão o principal reservatório da doença no Brasil. Dependendo do tipo de resposta
imune celular, alguns cães infectados não mostram sinais clínicos. No entanto, a Leishmaniose
Visceral Canina (LVC) pode apresentar uma grande variedade de sinais clínicos, incluindo lesões
de pele, perda de peso, linfadenopatia e onicogrifose. O objetivo desta pesquisa foi calcular a
prevalência e avaliar os sinais clínicos em cães infectados por Leishmania (Leishmania) chagasi
provenientes da cidade de Maceió, Estado de Alagoas. Para tanto, foram avaliados 425 cães
domiciliados, não somente para presença de anticorpos anti-Leishmania sp através do teste
ELISA, mas para a freqüência de sinais clínicos relacionados à LVC. Os resultados mostraram
que 1,9% (08/425) dos cães foram positivos ao teste sorológico. Lesões de pele e perda de peso
foram os principais sintomas observados em 75% (06/08) dos cães positivos. Os outros cães
soropositivos mostraram-se assintomáticos para a LVC. Conclui-se que cães de áreas endêmicas
devem ser avaliados cuidadosamente a fim de se adotar medidas de controle para a LVC.
Palavras - chave: Leishmaniose Visceral Canina, Sorologia, Sinais clínicos
35
EPIDEMIOLOGICAL ASPECTS OF DOGS WITH NATURAL INFECTION
BY Leishmania (Leishmania) chagasi, FROM MACEIÓ CITY ALAGOAS,
BRAZIL
Abstract
Visceral Leishmaniasis (VL) represents a serious problem of public health in both Old and New
World, and the dog is the principal reservoir of this disease in Brazil. Depending on the type of
cellular immune response some infected dogs do not show any clinical signs. Nevertheless
Canine Visceral Leishmaniais (CVL) may presents a variety of symptoms including skin lesions,
loss of weight, lymphadenopathy, and onycogryphosis. The goal of this research was to calculate
the prevalence of CVL and to evaluate the clinical signs in dogs infected by Leishmania
(Leishmania) chagasi from Maceio city, Alagoas State. Of a total of 425 domiciliated dogs were
investigated not only to anti-Leishmania sp antibodies by ELISA test, but also to clinical signs
related to CVL. The results showed 1.9% (08/425) of dogs were positive to serological test. Skin
lesions and weight loss were the major symptoms observed in 75% (06/08) of positive dogs. The
other seropositive dogs showed no clinical signs of CVL. In conclusion dogs from endemic areas
must be carefully evaluated in order to adopt measured of control for the CVL.
Keywords: CanineVisceral Leishmaniasis, Serology, Clinical signs
36
ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS DE CÃES COM INFECÇÃO NATURAL
POR Leishmania (Leishmania) chagasi, PROCEDENTES DE MACEIÓ,
ALAGOAS
3.1 Introdução
A Leishmaniose visceral (LV) é considerada um sério problema de saúde pública que
atinge vários Estados do território brasileiro, onde os cães domésticos representam o principal
reservatório urbano (PARANHOS-SILVA et al., 1996; FRANÇA-SILVA et al., 2003).
À semelhança da LV, a Leishmaniose visceral canina (LVC) é relatada em áreas rurais e
periurbanas do Brasil (BRASIL, 2004; GONTIJO e MELO, 2004; MELO, 2004). Contudo, esse
quadro vem se invertendo nos últimos anos, com a adaptação do vetor ao meio urbano (SANTA
ROSA e OLIVEIRA, 1997).
Os cães infectados podem apresentar desde a forma assintomática, até uma doença de
evolução fatal (RIBEIRO, 2005), sendo o curso clínico da doença dependente de fatores
relacionados à natureza da resposta imune do hospedeiro, à patogenicidade do parasito, além do
estado nutricional do animal (SANTA ROSA e OLIVEIRA, 1997). Dentre os sinais clínicos
observados, destacam-se as dermatopatias, onicogrifose, linfadenopatia, emagrecimento, atrofia
muscular e alterações musculares (RIBEIRO, 2005), hepatoesplenomegalia, anorexia, depressão,
epistaxe, artropatias, ascite, e envolvimento renal (CIARAMELLA e CORONA, 2003).
Levando-se em consideração relatos sobre a ocorrência da LV no município de Maceió,
Alagoas, além da existência de poucos estudos sobre a doença na população canina desse
município, objetivou-se calcular a prevalência da LVC em Maceió, além de avaliar as
características clínicas de cães com infecção natural por Leishmania (Leishmania) chagasi.
3.2 Material e Métodos
Foram coletadas amostras sanguíneas de 425 cães domiciliados de ambos os sexos, de
várias raças e idades, nos sete distritos sanitários do município de Maceió. O cálculo da amostra
foi realizado segundo Astudillo (1979), tomando-se como base a prevalência preliminarmente
37
estimada em 5% para a LVC na cidade de Maceió
1
, intervalo de confiança de 95% e um erro
admissível na estimativa da prevalência de 10%.
n = p.(100 - p) . z
2
(d . p / 100)
2
Onde: p = prevalência esperada
z = intervalo de confiança
d = erro admissível na estimativa da prevalência
Cada animal foi registrado em ficha individual (Anexo 1), que contemplou informações
como nome, idade, sexo, responsável, endereço, além de dados clínicos e epidemiológicos. O
exame físico constou principalmente da inspeção de pele e fâneros, além de palpação abdominal
e de gânglios linfáticos, onde se observou a existência ou não de sinais sugestivos de LVC,
segundo Ferrer (1999).
De todos os animais foram coletados, aproximadamente, 5 ml de sangue das veias cefálica
ou safena, com seringa
2
e agulha
3
, e acondicionados em tubos de ensaio estéreis, sem
anticoagulante para obtenção dos soros, que foram, então, mantidos inclinados até a completa
retração do coágulo. As amostras de soros resultantes foram centrifugadas
4
a 1.500 rotações por
minuto (r.p.m.), por 5 minutos, e armazenadas em tubos de polipropileno
5
a – 20°C para posterior
análise laboratorial.
Para o diagnóstico da LVC, o teste ELISA foi realizado através do kit ELISA/S7
6
, tendo
como base um peptídeo recombinante, segundo as instruções do fabricante. A leitura da reação
foi realizada em um leitor de ELISA
7
em densidade óptica de 450 nanômetros. O cálculo do
ponto de corte foi realizado através da média aritmética das densidades ópticas dos soros não
reagentes, somado ao fator R = 0,142. O teste sorológico foi realizado no Laboratório de
1
Dados da Secretaria Municipal de Saúde
2
Seringa descartáveis 5 ml, Becton Dickson
3
Agulhas descartáveis 25x7mm, Becton Dickson
4
Centrífuga para tubos, Modelo Q-222T, Quimis
5
Tubos de propileno, Eppendorff, WWR
6
Kit para diagnóstico do Calazar canino ELISA/S7, Biogene Ind. e Com. Ltda, Recife/PE
7
Equipamento Microplate Reader, Model 3550, Bio Rad
38
Imunoparasitologia do Departamento de Imunologia do Centro de Pesquisas Aggeu
Magalhães/Fundação do Instituto Oswaldo Cruz (Cpqam/FIOCRUZ).
Para verificar a associação entre as variáveis categóricas e a positividade da infecção, foi
utilizado o teste de Independência de Pearson. Nas tabelas onde a freqüência esperada foi menor
que cinco em mais de 20% das caselas, utilizou-se o p-valor do teste Exato de Fisher (AGRESTI,
1996). O software utilizado para análise dos dados foi o R Project 2.2.1.
3.3 Resultados e discussão
O teste sorológico ELISA revelou uma prevalência de 1,9% (08/425) nos animais
pesquisados.
Esse resultado aqui encontrado está próximo àqueles relatados por Sherlock e Almeida
(1970), que observaram a freqüência de 1,7% de cães sororeagentes na Bahia, porém, inferiores a
todos os outros dados relacionados à prevalência da LVC no Brasil (PARANHOS-SILVA et al.,
1996; MOURA et al., 1999; BEVILACQUA et al., 2001; CAMARGO-NEVES et al., 2001;
NUNES et al., 2001; FRANÇA-SILVA et al., 2003; AZEVEDO et al., 2004; CORTADA et al.,
2004; SILVA et al., 2005; DANTAS-TORRES et al., 2006).
Do mesmo modo, os resultados aqui expostos foram também inferiores àqueles citados
por Calheiros (2005), que observou em Maceió, uma freqüência de 3,48% de positividade nos
cães, utilizando a técnica de Imunofluorescência indireta (RIFI). Outros dois estudos, também
utilizando-se a RIFI, foram realizados por Vila Nova (2003) e Costa (2004), desta vez com cães
errantes de Maceió, observando-se a freqüência de 22,9% e 22,6% de animais sororeagentes.
Segundo Calheiros (2005), esses percentuais poderiam não representar a realidade de
casos da infecção ao se considerar a população geral de cães, pois estes animais haviam sido
recolhidos das ruas pelo Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) da capital por estarem
abandonados e/ou doentes, além de apresentarem deslocamento de uma área para outra com
grande freqüência, estando, assim, mais expostos ao vetor e a adquirir a infecção, do que os cães
domiciliados. Alves et al., (1998), num estudo realizado no município de Fortaleza (CE),
descreveram essa diferença observada na prevalência da infecção entre cães errantes (1,59%) e
domiciliados (0,28%).
39
A discordância observada entre as prevalências pode ser devido, principalmente, ao
estágio da infecção, ao número de amostras, natureza do antígeno, teste sorológico empregado,
como assegura Ferrer (1999).
Segundo Alves e Bevilacqua (2004), testes que apresentem elevada sensibilidade devem
ser preferidos para os inquéritos epidemiológicos na LVC. A alta sensibilidade evitaria que
animais positivos não permanecessem como fontes de infecção para o vetor e desse para o ser
humano e outros animais.
Quanto à raça e o porte dos animais, os resultados podem ser observados na Tabela 1.
Tabela 1. Freqüência absoluta e relativa dos animais com sorologia positiva para L.
(L.) chagasi da cidade de Maceió, segundo raça e porte do cão. 2008.
Animais Positivos
Variável
Número total
de animais
Freqüência
absoluta
Prevalência
(%)
Raça
Sem Raça Definida (SRD) 202 5 2,5
Poodle 89 1 1,1
Rottweiler 6 1 16,7
Dogue alemão 4 1 25,0
Outras raças 124 - -
Porte do cão
Pequeno 199 2 1,0
Médio 128 2 1,6
Grande 81 3 3,7
Gigante 17 1 5,9
Apesar de ter sido observado maior quantidade de cães SRD com sorologia positiva para
o calazar, França-Silva et al. (2003), em pesquisa realizada em Montes Claros (MG), afirmaram
que a raça Boxer e a Cocker Spaniel foram as mais freqüentes à infecção por Leishmania sp.
Matos et al. (2006), em Mossoró (RN), verificou como a raça mais acometida o American Pit
Bull, seguido de cães SRD, fato explicado pelo grande número de cães da referida raça na cidade,
não sendo comprovada predisposição racial.
Por outro lado, a ocorrência da LVC tem sido descrita com uma maior freqüência nas
raças de grande e gigante porte, pois estas estão mais expostas ao inseto vetor por permanecerem
mais tempo ao ar livre (FERRER, 1992).
40
Com relação ao sexo e idade, apesar do número de fêmeas infectadas (2,1% - 05/233) ter
sido maior que o de machos (1,6% - 03/192) e o maior numero de cães sororeagentes terem idade
inferior a sete anos (Tabela 2) à análise estatística não revelou diferença significativa.
Tabela 2. Freqüência absoluta e relativa dos animais com sorologia positiva para L.
(L.) chagasi da cidade de Maceió, segundo a idade e o sexo. 2008.
Grupo
Variável
Positivos Negativos
Total % p-valor
FA FR % FA FR %
Idade
< 1 ano 1 1,9 53 98,1 54 12,7
1 – 7 anos 5 1,8 268 98,2 273 64,2
> 7 anos 2 2,0 96 98,0 98 23,1
0,99
Sexo
Fêmeas 5 2,1 228 97,9 233 54,8
Machos 3 1,6 189 98,4 192 45,2
0,66
TOTAL 8 1,9 417 98,1 425 100,0
-
*p-valor do teste de independência (se p-valor < 0,05, as variáveis são independentes).
FA= Freqüência absoluta; FR= Freqüência relativa
Comparando-se os dados obtidos quanto ao sexo com os de outros autores (COSTA,
2004; VILA NOVA, 2003; CALHEIROS, 2005), foi evidenciado maior predominância de
machos em seus estudos, no entanto a literatura afirma não haver predisposição sexual para a
doença, uma vez que não foram encontrados dados observando esta relação de infecção por L.
chagasi (FERRER, 1992; NOLI, 1999).
Quanto à idade, estes resultados são concordantes com Hernandez-Rodriguez et al.
(1987), os quais relataram que os animais jovens e adultos foram considerados os mais
susceptíveis à infecção. Segundo Matos et al. (2006), a partir desta idade os cães em geral são
colocados na parte externa dos domicílios, o que aumenta o contato com o vetor.
Dos animais soropositivos para a LVC, 25% (02/08), apresentavam-se assintomáticos no
momento do exame. Isso pode ser explicado pela natureza da resposta imune do animal (SANTA
ROSA e OLIVEIRA, 1997). De acordo com Bonates (2003), os assintomáticos constituem cerca
de 20 a 40% da população soropositiva. O restante dos animais com sorologia positiva foi
classificado como sintomáticos. Os sinais clínicos observados nos animais deste estudo
encontram-se na Tabela 3.
41
Tabela 3. Freqüência absoluta e relativa dos sinais clínicos encontrados em cães com
diagnóstico sorológico positivo para LVC na cidade de Maceió, 2008.
Sinais clínicos
Freqüência absoluta
Freqüência relativa (%)
Emagrecimento
4
50,0
Úlcera cutânea
3
37,5
Alopecia
3
37,5
Onicogrifose
2
25,0
Lesão em borda de orelha
2
25,0
Vômito
1
12,5
Conjuntivite
1
12,5
Nódulo cutâneo
1
12,5
Epistaxe
1
12,5
Afecção respiratória
1
12,5
Em relação aos cães sintomáticos, 75% (06/08) apresentaram dois ou mais sinais clínicos
sugestivos de LVC, dentre eles dermatopatias (50%), emagrecimento (50%) e onicogrifose
(25%). Esses são sinais já referidos em cães com leishmaniose em Maceió (VILA NOVA, 2003;
CALHEIROS, 2005). Segundo Ribeiro (2005), esses achados em conjunto com linfadenopatia,
atrofia muscular e alterações musculares, hepatoesplenomegalia, anorexia, depressão, epistaxe,
artropatias e ascite são os sinais clínicos mais observados na LVC.
Com relação às dermatopatias, alopecia, úlceras cutâneas, lesão em borda de orelha e
nódulo cutâneo foram as lesões mais observadas neste trabalho. Segundo Fondevila et al. (1997)
a razão para a ocorrência das dermatopatias pode ser decorrente da resposta imune dos animais
infectados, além da pele ser o primeiro órgão de contato com a Leishmania sp (HERNANDEZ-
RODRIGUEZ et al., 1987; SÃO PAULO, 2003).
A razão para o emagrecimento observado pode estar associado ao fato de que a infecção
por Leishmania sp geralmente evolui para forma crônica com comprometimento de vários
órgãos, particularmente aqueles onde há multiplicação dos parasitas nas células do sistema
fagocítico mononuclear (SFM), além das alterações degenerativas e gastrointestinais resultantes
desse processo (CIARAMELLA e CORONA, 2003).
A onicogrifose aqui encontrada tem sido referenciada por vários autores (MARZOCHI et
al, 1984; CIARAMELLA et al, 1997; NATAMI et al, 2000; ALMEIDA et al, 2005) na
dependência da fase de evolução da doença, sendo imprecisa sua comparação com outros
achados descritos na literatura. Contudo, essa alteração é atribuída à baixa atividade dos cães e
42
conseqüente falta de desgaste das unhas (MARZOCHI et al. 1984; STRAUSS-AYALI e
BANETH, 2001), ou pode estar associado à presença de parasito estimulando a matriz ungueal
(FEITOSA, 2006).
Sinais como alteração respiratória, conjuntivite, epistaxe e vômito foram verificados em
animais isolados, em menor freqüência, como observado por alguns autores (FERRER, 1999,
MATTOS JR et al., 2004). A conjuntivite estava associada à alopecia periocular num mesmo
animal, corroborando os relatos de Feitosa (2001), que cita a associação entre alterações oculares
e dermatite facial em quadros de LVC.
3.4 Conclusão
Maceió apresenta-se como região endêmica para a LVC, constituindo-se em sério
problema de saúde pública. Animais adultos, com sinais clínicos sugestivos de LVC, procedentes
de áreas endêmicas devem ser submetidos à pesquisa de anticorpos anti-Leishmania sp, com a
finalidade de adoção de medidas de controle, visando a diminuição da prevalência da infecção
canina neste município.
43
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VILA NOVA, M. C. Leishmaniose visceral canina na cidade de Maceió: epidemiologia e
diagnóstico. 2003. 46f. Dissertação (Mestrado em Química e Biotecnologia) - Universidade
Federal de Alagoas, Maceió.
48
CAPÍTULO II
DISTRIBUIÇÃO ESPACIAL DA LEISHMANIOSE VISCERAL CANINA
EM MACEIÓ, ALAGOAS
49
DISTRIBUIÇÃO ESPACIAL DA LEISHMANIOSE VISCERAL CANINA
EM MACEIÓ, ALAGOAS
Resumo
A Leishmaniose Visceral (LV) no Brasil é causada pela Leishmania (Leishmania) chagasi e tem
sido relatada em algumas cidades, as quais vêm sofrendo um processo de urbanização, onde os
cães são os principais reservatórios para o parasito. O objetivo desta pesquisa foi analisar a
distribuição espacial da Leishmaniose Visceral Canina na cidade de Maceió. Usando o sistema de
informação espacial, como o sistema de posicionamento global, o levantamento foi realizado em
28 dos 50 bairros da cidade de Maceió, e os dados plotados de acordo com a procedência dos
cães soropositivos. Os resultados mostraram que a doença está amplamente distribuída na maioria
das áreas da cidade, particularmente nos bairros Benedito Bentes (6,7%), Petrópolis (6,7%) e
Ipioca (6,3%), que pertencem aos distritos sanitários VI, IV e I respectivamente. Considerando
que a cidade estudada é uma região endêmica para o calazar, as áreas positivas devem ser
monitoradas a fim de se prevenir a propagação da doença, inclusive para o homem.
Palavras - chave: Calazar, Urbanização, Nordeste do Brasil
50
SPATIAL DISTRIBUTION OF CANINE VISCERAL LESIHMANIASIS IN
MACEIO CITY, ALAGOAS STATE, BRAZIL
Abstract
Visceral Leishmaniasis (VL) in Brazil is caused by Leishmania (Leishmania) chagasi and has
been reported in some cities, which come suffering a process from urbanization, where dogs are a
reservoir host. The goal of this research was to analyze the spatial distribution of Canine Visceral
Leishmaniasis in Maceio city. Using the spatial information system such as global positioning
system, the survey was carried out in 28 of 50 quarters of the Maceio city and the data was
plotted according of seropositive dogs. The results showed the disease is widely spread in most of
the areas of the city, particularly in Benedito Bentes (6.7%), Petrópolis (6.7%) and Ipioca (6.3%),
which belongs to sanitary districts VI, IV and I respectively. Considering the studied city is an
endemic region of kala-azar, the positive areas must be monitored in order to prevent the spread
of the disease.
Keywords: Kala-azar, Urbanization, Northeast of Brazil
51
DISTRIBUIÇÃO ESPACIAL DA LEISHMANIOSE VISCERAL CANINA
EM MACEIÓ, ALAGOAS
4.1 Introdução
A Leishmaniose Visceral (LV), conhecida como calazar, apresenta-se como uma
enfermidade parasitária, crônica, sendo considerada reemergente no Brasil, desde meados da
década de 1990 (ARIAS et al., 1996).
Embora seja uma doença de ocorrência rural, a Leishmaniose Visceral Canina (LVC), da
mesma forma que a LV, urbanizou-se nos últimos anos e hoje ocorre em importantes centros
urbanos do Brasil (SANTA ROSA e OLIVEIRA, 1997; POCAI et al., 1998; MOURA et al.,
1999; DANTAS-TORRES et al., 2006).
Nesse processo de urbanização, de forma semelhante ao observado em outras cidades
nordestinas como, Teresina (PI) (COSTA et al., 1990), São Luís (MA) (SILVA et al., 1997) e
Fortaleza (CE) (ALVES et al., 1998), a LVC ou o calazar canino já foi diagnosticado na Cidade
de Maceió por Vila Nova (2003), Costa (2004) e Calheiros (2005), que observaram a freqüência
de 3,48%, 22,9% e 22,6% respectivamente.
O município de Maceió oferece condições ambientais adequadas à multiplicação dos
vetores da leishmaniose, além de fatores sócio-econômicos e sanitários favoráveis à manutenção
dessa enfermidade (ALAGOAS, 2005; CALHEIROS, 2005). Sendo assim, objetivou-se com esse
estudo, verificar a distribuição espacial da LVC nos distritos sanitários de Maceió.
4.2 Material e Métodos
4.2.1 Área estudada
Situada no nordeste brasileiro, Maceió, capital do Estado de Alagoas, (09° 39' 57" latitude
Sul e 35° 44' 07" longitude Oeste) ocupa uma área de aproximadamente 511 Km
2
. O município
possui clima tropical quente e úmido, com temperatura máxima de 29°C e mínima de 24°C
52
(MENEZES, 2000) e índices pluviométricos sempre superiores a 1.410 mm/ano. A umidade
relativa do ar é em média 79,2%. (IBGE, 2006).
4.2.2 Animais
Foram coletadas 425 amostras sanguíneas de cães domiciliados, de ambos os sexos, de
várias raças e idades, para a realização do inquérito sorológico, utilizando-se o teste ELISA
8
. As
amostras foram coletadas em 28 localidades sorteadas aleatoriamente (Figura 1), representando
56% do total de bairros deste município. Cada animal foi registrado em ficha individual (Anexo
1), contendo dados clínicos, dados sobre o vetor, além de características ambientais e sociais.
4.2.3 Espacialização das amostras
A espacialização no mapa, das residências onde foram detectadas as amostras dos cães
soropositivos, foi realizada utilizando-se as coordenadas planas obtidas através de
posicionamento por satélites. Para a obtenção das coordenadas através de posicionamento por
satélites, utilizou-se um receptor de navegação GPS
9
– Global Positioning System (Sistema de
Posicionamento Global), com 12 canais. O receptor GPS foi configurado para fornecer as
posições em coordenadas planas na projeção UTM (Universal Transverse Mercator), no Sistema
SAD-69 (South American Datum de 1969), correspondente ao sistema de coordenadas da Base
Cartográfica do Município de Maceió.
Utilizando-se o programa AutoCAD Map foi realizada a espacialização das residências no
mapa com o abairramento de Maceió, através da introdução de símbolos circulares em pontos
com as coordenadas obtidas por GPS (Figura 2).
8
Kit para diagnóstico do Calazar canino ELISA/S7, Biogene Ind. e Com. Ltda, Recife/PE
9
GPS - Garmin, modelo Etrex, com 12 canais
53
Figura 1. Distribuição dos bairros onde foi realizada a pesquisa para LVC, no
município de Maceió, 2008.
54
Figura 2. Espacialização das amostras de cães avaliados para LVC, através da
introdução de símbolos circulares em pontos no mapa, com as coordenadas
obtidas por GPS, no município de Maceió, 2008.
55
4.3 Resultados e discussão
Os resultados mostraram 1,9% de positividade nos 425 cães avaliados, distribuindo-se em
seis dos sete distritos sanitários de Maceió, mostrando-se mais freqüente no distrito VI. A Figura
3 mostra a distribuição espacial da LVC, por distrito sanitário, e o percentual de soropositividade
nos bairros envolvidos na pesquisa. A Tabela 1 apresenta o total de amostras examinadas e os
índices de positividade por distrito sanitário.
56
Figura 3. Distribuição espacial da LVC nos sete distritos sanitários da cidade de
Maceió, apresentando o percentual de cães soropositivos nos bairros
pesquisados, 2008.
57
Tabela 1. Resultado do inquérito sorológico em cães domiciliados da cidade de Maceió,
apresentando distribuição por distrito sanitário, 2008.
Distrito
sanitário
Bairros
trabalhados
Casas
visitadas
Amostras
examinadas
Animais
soropositivos
Positividade
(%)
DS I
08 83 121 02 1,6
DS II
05 66 87 01 1,1
DS III
04 20 39 01 2,6
DS IV
04 59 80 01 1,3
DS V
02 04 06 00 -
DS VI
01 23 30 02 6,7
DS VII
04 42 62 01 1,6
TOTAL
28 297 425 08 1,9
Das 28 localidades examinadas, 25% (7/28) apresentaram amostras positivas, sendo
observada uma maior concentração em bairros de periferia. Esse achado também foi verificado
por Alves et al. (1998) em Fortaleza (CE), em 1998, quando um grande número de animais
positivos foi registrado em bairros com características semi-urbanas, em áreas referidas como de
transição. São essas áreas de periferias que abrigam populações que sofrem precárias condições
de vida (BEVILACQUA et al., 2001), conseqüência do aumento rápido e descontrolado das
cidades do nordeste brasileiro com expansão de seu perímetro urbano sobre áreas naturais
circunvizinhas (ARIAS et al., 1996), proporcionando ambiente adequado para o desenvolvimento
do vetor (SANTA ROSA e OLIVEIRA, 1997).
Por outro lado, existe uma tendência do calazar canino a se expandir pelo litoral, como
conseqüência da migração de pessoas e seus animais domésticos de áreas endêmicas para não
endêmicas, causando surtos pela presença de hospedeiros susceptíveis (PEDROSA e ROCHA,
2004). Além disso, é uma doença conhecida como própria de área de clima seco com precipitação
pluviométrica anual inferior a 800mm, e o ambiente composto por vales e montanhas
(ALAGOAS, 2001; BRASIL, 2004).
Este fato pôde ser observado por Calheiros (2005), onde as maiores prevalências para a
infecção foram verificadas nos distritos sanitários I, II e IV (6,48%, 5,19% e 7,36%,
respectivamente), sendo estes distritos encontrados na região litorânea da cidade de Maceió, à
margem da Lagoa Mundaú e/ou Oceano Atlântico.
58
Em Maceió, embora a distribuição de casos humanos, caninos e a presença de
flebotomíneos seja mais evidenciada no litoral norte da cidade, equivalente ao DS I,
(ALAGOAS, 2001) não se pode afirmar que a doença é exclusiva dessa região. Desta forma, a
distribuição da LVC em Maceió, não está restrita às áreas litorâneas (Lima et al., 2005),
observando-se que a doença já encontra-se urbanizada, mesmo em áreas distantes do litoral como
relatado na cidade de Belo Horizonte, onde é endêmica e essencialmente urbana (BEVILACQUA
et al., 2001).
No distrito sanitário I, os bairros que apresentaram positividade para a LVC foram
Guaxuma e Ipioca com, respectivamente, 3,5% e 6,3% de cães sororeagentes ao teste ELISA.
Existe nessa região, grande desequilíbrio ambiental, estimulado por uma verdadeira
especulação imobiliária, já que trata-se de área de beleza e vocação turística, além de imensurável
importância econômica para o município e Estado. Com isso há a alteração da paisagem natural,
com retirada da vegetação, aterramento de mangues, desvio de córregos, proporcionando uma
rápida adaptação do vetor ao meio mais urbanizado (ALAGOAS, 1999).
Wanderley (2004), afirma que no bairro de Ipioca, uma das áreas de maior casuística do
calazar humano e canino, o que se tem observado é o aumento cada vez maior da população que
dispõe de condições inadequadas de moradia, educação e assistência médica, além da ausência de
saneamento básico.
A Secretaria Municipal de Saúde de Maceió, através do Programa de Controle da
Leishmaniose Visceral (PCL), vem atuando nessas áreas, consideradas endêmicas para o calazar,
com as atividades de inquérito canino e entomológico, eutanásia dos cães positivos, borrifação e
ações educativas (ALAGOAS, 1999).
O DS II, apesar da menor freqüência quando comparado aos demais distritos, apresentou
no bairro do Prado, o porcentual de 4,6% de animais positivos, um dos bairros litorâneos mais
antigos de Maceió, que aos poucos foi se modernizando, com dezenas de casas construídas, ruas
pavimentadas e arborizadas, transformando-se num reduto de classe média da capital
(PIMENTEL, 2002).
No distrito III, o bairro que apresentou animais positivos para a LVC foi o Farol com a
prevalência de 5,0%. Este bairro caracteriza-se por ser tradicional, de ocupação antiga e que
apresenta forte identidade local. É totalmente urbanizado, predominando o comércio, onde as
59
casas antigas deram lugar a centros empresariais, edifícios, escolas, agências bancárias e outros
estabelecimentos comerciais (PIMENTEL, 2002).
Neste estudo, a maior soroprevalência observada por distrito sanitário ocorreu no DS VI,
representado pelo bairro Benedito Bentes, com um porcentual de 6,7% de positividade.
Esse bairro é um conjunto habitacional criado há vinte anos e que, atualmente, abriga
muitos outros conjuntos ao seu redor, que juntos às favelas e grotas formam o maior bairro em
área (PIMENTEL, 2002) e apresenta grande densidade habitacional e demográfica, com uma
população de 78.785 habitantes (ALAGOAS, 2006). Ocupa áreas de assentamento tipicamente
periféricas, caracterizadas como fronteira de expansão urbana (PIMENTEL, 2002).
Já nos distritos IV e VII, que apresentam bairros mais recentes como Petrópolis (no DS
IV) e Santos Dumont (no DS VII), observou-se taxas de prevalências de 6,7% e 3,1%,
respectivamente. Não foi verificada positividade em nenhum dos bairros pesquisados do distrito
V.
Em todos os bairros que apresentaram resultados positivos para a LVC, com exceção do
Prado e do Farol que eram urbanizados, foram observadas ruas sem asfalto, acúmulo de matéria
orgânica e/ou de lixo a céu aberto, falta de saneamento básico, áreas de vegetação próximo às
casas visitadas, os quais são considerados fatores de risco para a infecção. Isso demonstra que a
doença coexiste em Maceió em áreas de marcadas diferenças sócio-econômicas.
Segundo Saltos e Lopes (1999), em áreas endêmicas há uma forte associação entre
condições precárias de moradia, notadamente a coleta de lixo com a freqüência de casos de
leishmaniose visceral na população humana.
Abrigos de animais domésticos próximos às habitações também é um fator que favorece a
concentração de flebótomos e de reservatórios mamíferos próximos ao homem. A presença de
galinheiros e de raposas foi altamente significante para a ocorrência da doença, em estudo
realizado por Wanderley (2004), no bairro de Ipioca, em Maceió. No presente estudo, foram
relatadas criações de outros animais, inclusive galinhas em quase todos os domicílios que
apresentaram positividade, corroborando as citações acima.
Segundo o Ministério da Saúde (2005), Maceió é classificada como cidade de transmissão
intensa, com uma média de 5,6 casos humanos/ano. Mas nem todos os bairros da cidade
apresentam o mesmo índice de infecção, havendo as zonas de risco dentro do município. Os
60
bairros mais representativos são Tabuleiro dos Martins, Benedito Bentes, Riacho Doce e Serraria
(ALAGOAS, 2005).
Como o vetor encontra-se, provavelmente, espalhado por todo o município, e algumas
áreas com acúmulo de matéria orgânica, lixo e outras fontes de alimentação como em chiqueiros,
galinheiros, canis, têm-se as condições necessárias para a ocorrência e permanência da doença na
cidade (ALAGOAS, 2005).
4.4 Conclusão
Em função dos resultados obtidos, faz-se necessário o monitoramento da infecção canina
nos distritos sanitários com maior índice de positividade, com vistas à implantação das ações de
controle por parte das autoridades de vigilância epidemiológica para prevenir a incidência da
doença na população.
61
4.5 Referências
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1999.
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Maceió, 2001.
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CALHEIROS, P. W. B. Leishmaniose visceral canina na cidade de Maceió-Alagoas. 2005.
55f. Dissertação (Mestrado em Química e Biotecnologia) - Universidade Federal de Alagoas,
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COSTA, C. H. N., et al. Epidemia de leishmaniose visceral no Estado do Piauí, Brasil, 1980-
1986. Rev. Saúde Pública, São Paulo, v. 24, n. 5, out. 1990.
62
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de imunoflurescência indireta (RIFI) em Maceió – Alagoas. 2004. 22f. Monografia
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<http://www.ibge.gov.br/>. Acesso em: 28 set. 2006.
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63
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Federal de Alagoas, Maceió.
VILA NOVA, M. C. Leishmaniose visceral canina na cidade de Maceió: epidemiologia e
diagnóstico. 2003. 46f. Dissertação (Mestrado em Química e Biotecnologia) - Universidade
Federal de Alagoas, Maceió.
64
CAPÍTULO III
AVALIAÇÃO DOS NÍVEIS PLASMÁTICOS DE FIBRINOGÊNIO E
TEMPO DE PROTROMBINA EM CÃES COM INFECÇÃO NATURAL
POR Leishmania (Leishmania) chagasi
65
AVALIAÇÃO DOS NÍVEIS PLASMÁTICOS DE FIBRINOGÊNIO E
TEMPO DE PROTROMBINA EM CÃES COM INFECÇÃO NATURAL
POR Leishmania (Leishmania) chagasi
Resumo
A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) apresenta uma grande diversidade de sinais clínicos,
incluindo as desordens hemostáticas, como epistaxe e coagulação intravascular disseminada
(CID). O fibrinogênio e o tempo de protrombina (TP) são as vias do sistema hemostático.
Entretanto, poucas são as informações a respeito da avaliação destes fatores em cães com
infecção natural por Leishmania (Leishmania) chagasi. O objetivo desta pesquisa foi avaliar os
níveis plasmáticos de fibrinogênio e TP em cães com leishmaniose visceral. Foram utilizadas
amostras de plasma de 31 cães. Todos os animais foram examinados para pesquisa de formas
amastigotas de L. (L.) chagasi através de biópsia de medula óssea e anticorpos anti-Leishmania
sp através do teste ELISA. Após estes testes, os cães foram separados em dois grupos, ou seja, 22
pertencentes ao grupo infectado (GI) e nove ao grupo controle (GC). Os resultados mostraram
alterações nos níveis de fibrinogênio em 45,4% (10/22) e no TP em 95,4% (21/22) nos animais
do GI. Contudo, nenhuma diferença estaticamente significativa (p<0,05) entre GI e GC foi
observada. Estes resultados indicam que os níveis de fibrinogênio e TP não têm valor diagnóstico
na LVC.
Palavras - chave: Calazar canino, Desordens hemostáticas, Bioquímica clínica
66
EVALUATION OF THE PLASMA FIBRINOGEN LEVELS AND
PROTHROMBIN TIME IN DOGS WITH NATURAL INFECTION OF
Leishmania (Leishmania) chagasi
Abstract
Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) presents a great diversity of clinical signs, including
disorders haemostatic such as epistaxis and disseminated intravascular coagulation (DIC). The
fibrinogen and the prothrombin time (PT) are the pathway of haemostatic system. However, there
is little information concerning the evaluation of theses factors in dogs with natural infection of
Leishmania (Leishmania) chagasi. The goal of this research was to evaluate the plasma
fibrinogen levels and PT in dogs with visceral leishmaniasis. Plasma samples of 31 dogs were
used. All animals were examined to L. (L.) chagasi amastigote forms by bone narrow biopsy and
to anti-Leishmania sp antibodies by ELISA test. After these tests, the dogs were separated in two
groups, as following, 22 belonged to the infected group (IG) and nine to the control group (CG).
The results showed changes in fibrinogen level of 45.4% (10/22) and 95.4% (21/22) of PT in IG.
However no statically significant difference (p<0.05) between IG and GC were observed. These
results indicate that fibrinogen levels and PT do not have disgnostic value in the CVL.
Keywords: Canine Kala-azar, Haemostatic disorders, Clinical Biochemistry
67
AVALIAÇÃO DOS NÍVEIS PLASMÁTICOS DE FIBRINOGÊNIO E
TEMPO DE PROTROMBINA EM CÃES COM INFECÇÃO NATURAL
POR Leishmania (Leishmania) chagasi
5.1 Introdução
A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) é uma doença sistêmica crônica nos cães,
podendo, entretanto, evoluir para uma forma aguda (PINELLI et al., 1999; FEITOSA et al.,
2000).
Dentre os sinais característicos da LVC, destacam-se dermatopatias, linfadenopatias,
onicogrifose, lesões oculares, disfunção renal e hepática além de
alterações hematológicas e
hemostáticas, (HERNANDEZ-RODRIGUEZ et al., 1987; FERRER, 1992; FONT et al., 1994;
JÜTTNER et al., 2001; CORONA et al., 2004), como epistaxe (JÜTTNER et al., 2001) e
coagulação intravascular disseminada (CID) (FONT et al., 1994).
O envolvimento da hemostasia na LVC é múltiplo e complexo (VALLADARES et al.,
1998; CORONA et al., 2004), podendo estar relacionado à severidade dos sinais clínicos
(CORONA et al., 2004; LOMTADZE et al., 2005).
Segundo Moreno (1999), desordens hemostáticas, incluindo distúrbios nos fatores de
coagulação como tempo de trombina (TT) e tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA)
prolongados, elevação dos níveis de fibrinogênio e de produtos da degradação da fibrina,
sugerem que a infecção por Leishmania sp interfere na hemostasia primária, na coagulação e na
fibrinólise. Sendo assim, objetivou-se com este trabalho, avaliar os níveis plasmáticos de
fibrinogênio e tempo de protrombina (TP) em cães com infecção natural por Leishmania
(Leishmania) chagasi.
5.2 Material e Métodos
Foram utilizados 31 cães de ambos os sexos, de diversas raças, com idade variando entre
um e 11 anos, sendo divididos em dois grupos a saber: Grupo Infectado (GI), constituído por 22
cães naturalmente infectados por L. (L.) chagasi, compreendendo nove fêmeas e 13 machos,
68
encaminhados ao ambulatório do Hospital Veterinário do Departamento de Medicina Veterinária
da Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), e o Grupo Controle (GC), composto
por nove cães hígidos, compreendendo seis fêmeas e três machos, provenientes do município de
Concórdia, Santa Catarina, considerada área não endêmica para a LVC. O diagnóstico dos
animais de cada grupo foi confirmado através de exames clínicos, parasitológicos e sorológicos
10
.
De cada animal foi coletado, aproximadamente, cinco mililitros (mL) de sangue por
punção da veia cefálica, utilizando-se, para tanto, agulhas
11
e seringas
12
descartáveis. O sangue
foi transferido para tubos estéreis contendo Ácido Etilenodiamino Tetra-acético de Sódio
(EDTA)
13
, e após a obtenção do plasma, este foi acondicionado em tubos de polipropileno
14
e
armazenado em freezer a -20°C até a realização dos testes.
A determinação do fibrinogênio e do TP foi realizada segundo o método fotométrico,
utilizando-se kit comercial
15
, em equipamento analisador de coagulação
16
. As amostras foram
processadas no Setor de Hemostasia da Unidade de Laboratório (ULAB) do Hospital das
Clínicas, na Universidade Federal de Pernambuco (UFPE). Os valores de referência utilizados
para o fibrinogênio foram 200 a 400 mg/dL, descritos por Kaneko et al. (1997), e para o TP
foram utilizados os valores 4,07 a 9,67 segundos, sugeridos por Lopes et al. (2005).
A análise descritiva dos dados foi realizada por meio de tabela para as variáveis
qualitativas, e para as quantitativas, foram calculadas as medidas de tendência central (Média,
Mediana) e variabilidade (Variância e desvio padrão). Para verificar a associação entre as
variáveis categóricas e os grupos GI e GC, foi utilizado o Teste de Independência. Na tabela onde
a freqüência esperada foi menor que cinco em mais de 20% das caselas, utilizou-se o p-valor do
Teste Exato de Fisher (AGRESTI, 1996). Na comparação de médias do TP e do Fibrinogênio
entre os grupos GI e GC, foi utilizado o Teste de Mann-Whitney (SIEGEL, 1978). Para todas as
conclusões foram considerados o nível de significância de 5% e o intervalo de confiança (IC) de
95%. O software utilizado para análise dos dados foi o R Project 2.2.1.
10
Kit ELISA para Diagnóstico do Calazar Canino FioCruz Bio Manguinhos
11
Agulhas descartáveis, 25x7 mm, Becton Dickinson, Curitiba, PR, Brasil
12
Seringas descartáveis, 5 ml, Becton Dickinson, Curitiba, PR, Brasil
13
Tubos estéreis com EDTA, Becton Dickinson Vacutainer Systems, Curitiba, PR, Brasil
14
Tubos de polipropileno, Eppendorff, WWR
15
Kit PT Fibrinogen Recombinat, Instrumentation Laboratory Company
16
Equipamento IL ACL 3000, Diamond Diagnostics, USA
69
5.3 Resultados e discussão
Na Tabela 1 estão representados os resultados da dosagem do fibrinogênio e do TP.
Tabela 1. Média, Mediana e Desvio Padrão dos valores encontrados na determinação
do fibrinogênio (mg/Dl) e do TP (s), em cães com LVC (GI) e grupo controle (GC),
2008.
Variáveis N Média
IC(95%) Mediana
Desvio
Padrão
Valor
Mínimo
Valor
Máximo
*p-valor
Fibrinogênio
GI 22 266,5 175,7 – 304,3 259,5 129,6 94,0 547,0
GC 9 259,0 202,0 – 316,0 272,0 74,1 157,0 372,0
0,896
TP
GI 22 26,8 16,1 – 32,8 20,8 16,0 7,2 79,3
GC 9 25,7 17,1 – 34,2 21,1 11,1 17,5 50,5
0,740
*p-valor do teste de Mann-Whitney (se p-valor < 0,05, as médias entre os grupos diferem)
Com relação à média dos níveis de fibrinogênio e do tempo de protrombina nos dois
grupos estudados, observa-se que a média do GI é maior que a do GC, e possui uma maior
variância tanto para o fibrinogênio como para o TP. Porém a análise estatística não revelou
diferença significativa entre os grupos GI e GC.
Quanto ao sexo e à idade, a análise estatística também não revelou diferença
estatisticamente significante entre os valores de fibrinogênio e PT em ambos os grupos.
Em relação ao GI, as alterações nos níveis de fibrinogênio foram verificadas em 45,4%
(10/22) dos animais onde 31,8% (07/22) deles apresentaram valores abaixo dos parâmetros
normais, e apenas 13,6% (03/22) mostraram-se elevados, sem, entretanto diferença
estatisticamente significante.
Apesar de vários trabalhos relatarem valores de fibrinogênio normais (FONT et al. 1994;
CORTESE et al., 2006) ou diminuídos (VALLADARES et al., 1998; MORENO 1999), existe
consenso que alteração do fibrinogênio é rara na LVC e quando ocorre, está associada à co-
infecção com Ehrlichia sp (JÜTTNER et al. 2001).
É ainda provável que alterações no fibrinogênio possam ser secundárias a lesões hepáticas
crônicas, causadas pelo parasitismo da L. (L.) chagasi no fígado (PUMAROLA et al., 1991;
FERRER, 1992), já que este fator é sintetizado neste órgão (DAVIE, 1995).
70
Quanto ao TP, a alteração mais observada foi o tempo prolongado em 96,8% (30 cães)
dentre os quais, 21 animais (95,5%-21/22) eram naturalmente infectados para LVC e nove
animais (100%-09/09) pertenciam ao grupo controle. Ao testar a independência entre os grupos e
a alteração do TP, o teste não revelou diferença estatística.
Este resultado é discordante de Valladares et al. (1998), Moreno (1999), Jüttner et al.
(2001) e Corona et al. (2004) que observaram valores normais de TP em cães com infecção por
Leishmania sp.
Por outro lado, Basu et al. (1970) e Lomtadze et al. (2005) observaram TP prolongado em
pacientes humanos que apresentavam a forma severa da leishmaniose visceral.
A explicação para alteração nos valores de TP pode ser devido a uma síntese exacerbada
de proteínas anormais em função da presença do parasito no sistema retículo-endotelial, o que
pode interferir na função plaquetária e nos fatores de coagulação (BASU et al., 1970).
Em relação ao grupo controle, onde todos os animais apresentaram valores de TP
prolongados, alguns fatores como espécie, raça, sexo, idade, dieta e estado de nutrição podem ter
influenciado nas determinações do TP (DUNCAN et al., 1994).
5.4 Conclusão
A determinação dos níveis de fibrinogênio e TP não têm valor diagnóstico na LVC.
71
5.5 Referências
AGRESTI, A. An Introduction to Categorical Data Analysis. New York: John Wiley. 1996.
BASU, A. K. et al. Haemostasis in Kala-azar. Transactions of the Royal Society of Tropical
Medicine and Hygiene, v. 64, n. 4, p. 581-587. 1970.
CORONA, M. et al. Haemostatic disorders in dogs naturally infected by Leishmania infantum.
Veterinary Research Communications, Amsterdam, v. 28, p. 331-334, aug. 2004.
CORTESE, L. et al. Platelet aggregation and haemostatic response in dogs naturally co-infected
by Leishmania infantum and Ehrlichia canis. Journal of Veterinary Medicine Series A, Berlin,
v. 53, p. 546-548, dec. 2006.
DAVIE, E. W. Biochemical and molecular aspects of the coagulation cascade. Thrombosis and
Haemostasis, v. 74, n.1, p. 1-6. 1995.
DUNCAN, J. R. et al. Quality control, test validity, and reference values. In: ____. Veterinary
Laboratory Medicine-Clinical Pathology. 3ª. ed. Iowa: Iowa State University, 1994. cap. 13, p.
229-234.
FEITOSA, M. M. et al. Aspectos clínicos de cães com leishmaniose visceral no município de
Araçatuba – São Paulo (Brasil). Clínica Veterinária, São Paulo, ano 5, n. 28, p. 36 – 44,
set./out., 2000.
FERRER, L. M. Leishmaniasis. In: KIRK, R. W.; BONAGURA, J. D. Current veterinary
therapy: small animal practice. Philadelphia: W. B. Saunders, 1992. p. 266-270.
FONT, A. et al. Visceral leishmaniasis and disseminated intravascular coagulation in a dog.
Journal of the American Veterinary Medical Association, Shaumburg, v. 204, n. 7, p. 1043-
1044, apr. 1994.
72
HERNANDEZ-RODRIGUEZ, S. et al. Aspectos clínicos de la leishmaniosis canina. Revista
Ibérica de Parasitología, Barcelona, v. extraordinário, p. 61-66. 1987.
JÜTTNER, C. et al. Evaluation of the potencial causes of epistaxis in gogs with natural visceral
leishmaniasis. The Veterinary Record, London, v. 149, n. 6, p. 176-179. 2001.
KANEKO, J. J. et al. Appendixes. In: KANEKO, J. J. et al. Clinical biochemistry of domestic
animals. 5 ed. New York: Academic Press, 1997. p. 885-905.
LOMTADZE, M. L. et al. Functional status of haemostasis system inpatients with visceral
leishmaniasis. Georgian Medical News, New York, v. 128, n. 11, p. 59-62. 2005.
LOPES, S. T. A. et al. Valores de referência do tempo de protrombina (TP) e tempo de
tromboplastina parcial ativada (TTPa) em cães. Ciência Rural, Santa Maria, v. 35, n. 2, p. 381-
384, mar-abr. 2005.
MORENO, P. Evaluation of secondary haemostasis in canine leishmaniasis. The Veterinary
Record, London, v. 144, p. 169-171, feb. 1999.
PINELLI, E. et al. Cellular immune responses in canine leishmaniais. In: KILLICK-
KENDRICK. Canine leishmaniasis: an update, 1999, Barcelona. Proceedings... Barcelona, 1999.
p. 60-64.
PUMAROLA, M. et al. Canine Leishmaniasis associated with systemic vasculitis in two dogs.
Journal of comparative pathology, Amsterdam, v. 105, n. 3, p. 279-286. 1991.
SIEGEL, S. Estatística não paramétrica: para ciências do comportamento. São Paulo:
McGraw-Hill do Brasil, 1978. 350p.
VALLADARES, J. E. et al. Study of haemostatic disorders in experimentally induced
leishmaniasis in Beagle dogs. Research in Veterinary Science, London, v. 64, p. 195-198. 1998.
73
6 CONCLUSÕES GERAIS
Conclui-se a partir deste estudo que:
• Maceió apresenta-se como região endêmica para a LVC, constituindo-se em sério
problema de saúde pública. Animais adultos, com sinais clínicos sugestivos de
LVC, procedentes de áreas endêmicas devem ser submetidos à pesquisa de
anticorpos anti-Leishmania sp, com a finalidade de adoção de medidas de controle,
visando a diminuição da prevalência da infecção canina neste município;
• Em função dos resultados obtidos, faz-se necessário o monitoramento da infecção
canina nos distritos sanitários com maior índice de positividade, com vistas à
implantação das ações de controle por parte das autoridades de vigilância
epidemiológica para prevenir a incidência da doença na população;
• A determinação dos níveis de fibrinogênio e TP não têm valor diagnóstico na LVC.
74
ANEXO
75
LEISHMANIOSE VISCERAL CANINA
1. FICHA DE IDENTIFICAÇÃO N°.............. Data:................................
Nome do proprietário: .....................................................................................................................
Nome do animal:.................................................................... Idade:.................. Sexo: F( ) M( )
Raça:.................................................................................. Pelagem: ( )curta ( )média ( )longa
Porte: ( )pequeno ( )médio ( )grande ( )gigante
Cor: ( )branca ( )preta ( )marrom ( )dourada ( )cinza ( )champagne ( )tigrado
Procedência: ( )comprou ( )adotou ( )encontrou ( )ganhou Local:............................................
Viagens: ( )sim ( )não Local: ....................................................................................................
Endereço:...........................................................................................................................................
Bairro:..................................................................................... Fone:.............................................
2. AVALIAÇÃO DO ANIMAL
Início da sintomatologia:........ meses
Vermifugado: ( )sim ( )não
Apetite normal: ( )sim ( )não
Perda de peso: ( )sim ( )não
Oftalmopatia presente ( )sim ( )não
Micção normal: ( )sim ( )não
Fezes normais: ( )sim ( )não
Epistaxe: ( )sim ( )não
Problema articular: ( )sim ( )não
Aumento de linfonodo ( )sim ( )não
Grifose: ( )sim ( )não
Ulcera cutânea: ( )sim ( )não
Edema de focinho ( )sim ( )não
Alopecia ( )sim ( )não
Outros sinais:..................................................
........................................................................
........................................................................
O animal já cruzou? ( )sim ( )não
Resultou em filhotes? ( )sim ( )não
3. MATERIAL COLETADO
Punção de medula ( )
Esternal ( ) Ilíaca ( )
Aspirado de linfonodo ( )
Raspado/pele integra ( )
Raspado/pele lesionada ( )
Soro ( )
Plasma ( )
4. DADOS SOBRE O VETOR
Presença de mosquito: ( )sim ( )não
Como é conhecido:.........................................
Presença de ectoparasitos ( )sim
( )não
Carrapato ( ) Pulga ( )
5. LOCALIZAÇÃO DAS LESÕES
6. CARACTERÍSTICAS AMBIENTAIS,
SOCIAIS E ECONÔMICAS
• Condições de moradia:
Casa de alvenaria ( )
Água canalizada e sanitário ( )
Casa de taipa ( )
Apenas água ( )
Moradia sem saneamento ( )
Não há registro ( )
Coleta de lixo ( )
Iluminação elétrica ( )
Zona rural ( ) Zona urbana ( )
76
• Presença próxima à moradia:
Morros ( )
Vegetação ( )
Lixão ( )
Acúmulo de matéria orgânica ( )
Esgoto a céu aberto ( )
Praia ( )
Rio ou lagoa ( )
• Quantas pessoas moram na casa?
De 0 a 10 anos ( )
De 11 a 15 anos ( )
De 16 a 25 anos ( )
De 26 a 35 anos ( )
De 36 a 45 anos ( )
De 46 a 55 anos ( )
De 56 a 65 anos ( )
A partir de 66 anos ( )
Presença de outros animais na casa?
( )sim ( )não
Quais e quantos? ............................................
........................................................................
........................................................................
• Conhecimentos sobre a LVC:
Conceito ( )
Aspectos clínicos ( )
Transmissão ( )
Controle ( )
Já ouviu falar ( )
Não conhece ( )
Houve algum caso de LV na casa?
Canino ( )sim ( )não
Humano ( )sim ( )não
Quanto tempo? ..............................................
Obs.:...............................................................
........................................................................
........................................................................
7. RESULTADO
Parasitológico de medula +( ) - ( )
Esternal +( ) - ( ) Ilíaca +( ) - ( )
Parasitológico de linfonodo +( ) - ( )
Parasitológico/pele integra +( ) - ( )
Parasitológico/pele lesionada+( ) - ( )
Sorologia/ELISA +( ) - ( )
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