( PDF ) Controle da infecção por Salmonella Enteritidis em frangos de corte com ácidos orgânicos e mananoligossacarídio

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA MARIA

CENTRO DE CIÊNCIAS RURAIS

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM MEDICINA VETERINÁRIA

CONTROLE DA INFECÇÃO POR SALMONELLA

ENTERITIDIS EM FRANGOS DE CORTE COM

ÁCIDOS ORGÂNICOS MANANOLIGOSSACARÍDEO

DISSERTAÇÃO DE MESTRADO

Joana Darc Lopes Bassan

Santa Maria, RS, Brasil

2007

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CONTROLE DA INFECÇÃO POR SALMONELLA

ENTERITIDIS EM FRANGOS DE CORTE COM ÁCIDOS

ORGÂNICOS E MANANOLIGOSSACARÍDEO

Por

Joana Darc Lopes Bassan

Dissertação apresentada ao Curso de Mestrado do Programa de Pós-Graduação

em Medicina Veterinária, Área de Concentração em Medicina Veterinária

Preventiva, da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM, RS), como

requisito parcial para obtenção do grau de

Mestre em Medicina Veterinária.

Orientadora: Profª. Drª. Maristela Lovato Flôres

Santa Maria, RS, Brasil

2007

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Universidade Federal de Santa Maria

Centro de Ciências Rurais

Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária

A Comissão Examinadora, abaixo assinada,

aprova a Dissertação de Mestrado

CONTROLE DA INFECÇÃO POR SALMONELLA ENTERITIDIS EM

FRANGOS DE CORTE COM ÁCIDOS ORGÂNICOS E

MANANOLIGOSSACARÍDEO

elaborada por

Joana Darc Lopes Bassan

Como requisito parcial para obtenção de grau de

Mestre em Medicina Veterinária

COMISSÃO EXAMINADORA:

___________________________________

Maristela Lovato Flôres, Drª (UFSM)

(Presidente/Orientador)

___________________________________

Gláucia Denise Kommer, Drª (UFSM)

___________________________________

Geder Paulo Herrmann, Dr. (UFSM)

Santa Maria, 16 de agosto de 2007

Este trabalho é dedicado ao

meu filho Márcio Gabriel

pelo apoio, carinho e o amor

incondicional.

AGRADECIMENTOS

À Deus em tudo que tem realizado em minha vida, pois sem ele nada conseguiria.

À Ele toda honra, toda a glória e todo o meu louvor.

Ao meu esposo Márcio por acreditar no meu trabalho, sempre apoiando em tudo,

inclusive para que este trabalho se realizasse.

Ao meu amado filho Márcio Gabriel motivo de todo o meu empenho, esforço e

estímulo.

Aos meus pais Divor e Sirlei pelo carinho, apoio, paciência, empenho e ajuda com

o meu filho.

À minha orientadora Profª.Drª. Maristela Lovato Flores pelo apoio, dedicação e

amizade.

Ao meu amigo e professor Prof. Dr. Geder Paulo Herrmann pelo apoio, amizade e

por acreditar na minha capacidade.

Às Acadêmicas de Medicina Veterinária, bolsistas no projeto, Taiane Antoniazzi e

Eloísa Bianchi pela ajuda, empenho e dedicação.

À empresa Vetanco do Brasil pelo financiamento na pesquisa.

Aos colegas da Vetanco do Brasil: Mauro Felim e Javier Kuttel pelo apoio.

Aos meus colegas, já mestres, Roberto Marinho Maciel, Gislaine Jacobsen,

Aleverson Barcelos e Stefanie Segabinazi pela amizade e coleguismo e, também, pelos

momentos de estudo e, também, momentos de descontração.

À minha colega e amiga Michele Trindade pela alegre amizade e apoio.

À equipe do Laboratório Central de Diagnósticos e Patologias Aviárias (LCDPA)

pela amizade, momentos de trabalho e pelos momentos de descontração.

À minha grande amiga “irmã” Dilma pela amizade e dedicação incondicional.

À equipe da Clínica Veterinária Pegadas pela compreensão e amizade.

À minha gatinha Valentina pela agradável companhia nos momentos da digitação

do trabalho.

Agrada-te do Senhor, e ele

satisfará os desejos do teu coração.

Entrega o teu caminho ao Senhor,

confia nele, e o mais ele fará.

(Salmo 37:4-5)

RESUMO

Dissertação de Mestrado

Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária

Universidade Federal de Santa Maria

CONTROLE DA INFECÇÃO POR SALMONELLA ENTERITIDIS EM

FRANGOS DE CORTE COM ÁCIDOS ORGÂNICOS E

MANANOLIGOSSACARÍDEO

Autora: Joana Darc Lopes Bassan

Orientadora: Maristela Lovato Flores

Santa Maria, 16 de agosto de 2007

O objetivo deste estudo foi avaliar a ação de dois ácidos orgânicos (ácido fórmico e

ácido propiônico) e de um mananoligossacarídeo (MOS) adicionados à dieta no controle da

infecção intestinal por Salmonella Enteritidis (SE) em frangos de corte. Neste estudo de 39

dias foram

corte. Neste estudo de 39 dias foram utilizadas 150 aves, de um dia de idade, da linhagem

Cobb, lote misto, livre de SE, divididos em seis tratamentos (T) com 25 animais cada, onde:

T1 (dieta e ausência de infecção), T2 (dieta + ácidos orgânicos e ausência de infecção), T3

(dieta + ácidos orgânicos + MOS e ausência de infecção), T4 (dieta + ácidos

orgânicos e

infecção com SE), T5 (dieta + ácidos orgânicos + MOS e infecção com SE) e T6 (dieta e

infecção com SE). No 4º dia após o alojamento, a cama foi instilada, com SE e, a cada sete

dias, cinco aves por grupo foram submetidas à eutanásia por deslocamento cervical,

necropsiadas e realizados os exames bacteriológicos para SE, utilizando-se fezes coletadas

sobre a cama de maravalha dos grupos, e das tonsilas cecais dos animais necropsiados. No 18º

dia, somente 60% das aves estavam infectadas nos tratamentos T4 e T5; no 25º dia, 40% das

aves no T4 e 20% no T5 estavam infectadas; no 32º dia 100% das amostras testadas foram

negativos em ambos os tratamentos (T4 e T5). Constatou-se que o T6 foi 100% positivo até o

32º dia, e no 39º dia reduziu em 20% o número de animais infectados. Dentro dos parâmetros

de avaliação deste experimento, os ácidos orgânicos e o mananoligossacarídeo adicionados à

dieta, possivelmente contribuíram no controle da infecção por SE nas aves testadas.

Palavras-chave: Salmonella Enteritidis, frango de corte, ácidos orgânicos,

mananoligossacarídeo, dieta, bacteriologia.

ABSTRACT

Master’s Dissertation

Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária

Universidade Federal de Santa Maria

CONTROL OF THE INFECTION CAUSED BY SALMONELLA

ENTERITIDIS WITH ORGANIC ACIDS AND

MANNANOLIGOSACCHARIDE IN BROILERS

Author: Joana Darc Lopes Bassan

Advisor: Maristela Lovato Flores

Santa Maria, august 16

2007

The objective of this study work was to evaluate the effect of two organic acids (formic acid

and propionic acid) and of one mannanoligosaccharide added to the diet to control the

intestinal infection caused by Salmonella Enteritidis in broilers. In these 39 days of study it

was used 150 birds, 1-day-old, of the Cobb lineage, both sexes and free of Salmonella

Enteritidis. They were divided in 6 different treatments (T) with 25 birds each, where: T1

(diet and no infection), T2 (diet + organic acids + no infection), T3 (diet + organic acids +

mannanoligosaccharide and no infection), T4 (diet + organic acids and infection with

Salmonella Enteritidis) T5 (diet + organic acids + mannanoligosaccharide + and infection

with Salmonella Enteritidis) T6 (diet and infection with Salmonella Enteritidis). After

housing, the chicken litter was instilled on the 4

day with Salmonella Enteritidis and every

seven days, five birds from each group were killed through cervical dislocation. The necropsy

was performed and also the bacteriological exams to detect Salmonella Enteritidis using the

feces collected over the chicken litter of the groups bacteriological analysis of the cecal

tonsils was done as well. On the 18

day only 60% of birds were infected in treatments T4

and T5; on the 25

day, 40% of birds in T4 and 20% in the T5 were infected; on the 32

day,

100% of tested samples were negative in both treatments. The T6 group was 100% positive

until the 32

day, but on the 39

day, it got reduced in 20% of the number of infected

animals. In the experimental conditions of this study, the organic acids and the

mannanoligosaccharide added to the diet possibly contributted to control the infection caused

by Salmonella Enteritidis on tested birds.

Key words: Salmonella Enteritidis, broilers, organic acids, mannanoligosaccharide, diet,

bacteriology.

LISTA DE TABELAS

TABELA 1 – Composição da dieta, formulada com 30 Kg para cada grupo,

utilizada no experimento...............................................................................................

TABELA 2 – Resultados da análise para Salmonella Enteritidis em fezes e tonsilas

cecais de frangos de corte com e sem adição de ácidos orgânicos e MOS na

ração..............................................................................................................................

LISTA DE ILUSTRAÇÕES

FIGURA 1 – Tratamentos realizados com a adição de dois ácidos orgânicos e um

mananoligossacarídeo (MOS) na dieta para controlar a infecção por Salmonella

Enteritidis em frangos de corte.........................................................................................

FIGURA 2 - Resultados percentuais de aves positivas para Salmonella Enteritidis em

tonsilas cecais de frangos de corte com e sem ácidos orgânicos e MOS na dieta,

durante o período experimental de 35

dias.....................................................................................................................................

SUMÁRIO

RESUMO........................................................................................................

ABSTRACT.....................................................................................................

LISTA DE TABELAS.......................................................................................

LISTA DE ILUSTRAÇÕES..............................................................................

INTRODUÇÃO................................................................................................

CAPÍTULO 1...................................................................................................

REVISÃO BIBLIOGRÁFICA....................................................................................... 15

CAPÍTULO 2..................................................................................................

CONTROLE DA INFECÇÃO POR SALMONELLA ENTERITIDIS EM

FRANGOS DE CORTE COM ÁCIDOS ORGÂNICOS E

MANANOLIGOSSACARÍDEO....................................................................................

RESUMO.......................................................................................................................... 31

ABSTRACT.....................................................................................................

INTRODUÇÃO...............................................................................................

MATERIAL E MÉTODOS............................................................................................ 35

RESULTADOS E DISCUSSÃO........................................................................

CONCLUSÕES................................................................................................

REFERÊNCIAS...............................................................................................................

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS..........................................................................

INTRODUÇÃO

As doenças entéricas, nos últimos anos, tornaram-se um dos maiores desafios para a

avicultura industrial mundial, acarretando perdas de produtividade, aumento de mortalidade

entre as aves e a contaminação de produtos de origem avícola para o consumo humano. Com

freqüência crescente, os produtos avícolas têm sido relacionados com toxinfecções

alimentares em humanos em vários países, sugerindo que os produtos elaborados com carne

de aves portadoras de bactérias possam ser fontes de infecção. A carne de aves pode ser

contaminada com Salmonella sp. quando a bactéria é transferida do conteúdo intestinal à

carcaça durante o processamento e o enfoque maior está voltado à saúde pública. A

ocorrência de surtos de salmonelose humana, relacionada aos produtos avícolas e

determinados por outros sorovares que não Salmonella Enteritidis (SE), tem diminuído

drasticamente na última década. O isolamento de SE, seja em humanos ou aves, aumentou

sensivelmente, atingindo índices superiores a 50% das ocorrências em muitos países

(ANDREATTI FILHO, 2006).

De acordo com Snoeyenbos & Williams (1991), as aves domésticas constituem-se nos

maiores reservatórios de Salmonella existentes na natureza. As salmonelas são mais

freqüentemente relatadas em aves e produtos de origem aviária, particularmente por causa do

confinamento de uma grande população e das atividades dos programas nacionais para

isolamento e identificação.

Na produção em sistema de confinamento existem inúmeros fatores de risco que

podem contribuir para maior prevalência de Salmonella como falta de higiene na granja, a

presença de pragas nos locais de criação, a contaminação dos alimentos e água oferecidos, uso

indiscriminado de antimicrobianos de amplo espectro como promotores de crescimento e a

presença de animais portadores. A etapa de criação pode ser epidemiologicamente muito

importante na disseminação de Salmonella e, conseqüentemente, dar origem a um produto

contaminado. Trabalhos realizados no Brasil e em vários países desenvolvidos e em

desenvolvimento permitem indicar a Salmonella sp. como um dos principais microrganismos

presentes nas contaminações. Levantamentos realizados têm mostrado que 30% a 50% das

carcaças de frangos congeladas ou refrigeradas estão contaminadas por Salmonella sp.

(SILVA, 1998). A contaminação das aves pode ocorrer nas granjas, ou nas diversas etapas

posteriores de produção industrial, distribuição, comercialização e consumo, através da

chamada contaminação cruzada (BAIRD-PARKER, 1990).

Santos et al. (2000) observaram contaminação por salmonelas em carcaças de frangos

congeladas variando de 16% a 53,5 % em incidência, de acordo com as marcas pesquisadas

no comércio varejista de Jaboticabal, SP. Neste estudo, SE foi o sorotipo com maior

ocorrência, totalizando 60,4% dos isolamentos.

Oliveira et al. (2006), ao analisarem 51 amostras de material excretado por aves e 63

amostras de carcaças submetidas a análise bacteriológica e ao teste de sensibilidade a

antimicrobianos, observaram que não foram isoladas salmonelas do material excretado,

contudo, nas amostras de carcaças observa-se a taxa de 11,8%. Três sorotipos foram

identificados: Salmonella enterica sorovar Enteritidis, 50%; Salmonella enterica sorovar

Panamá, 33%; e Salmonella enterica sorovar Newport, 17%. No teste de sensibilidade as

salmonelas foram resistentes a ampicilina e tetraciclina e sensíveis a gentamicina,

metilmicina, carbenicilina e cloranfenicol.

A preocupação mundial com a ocorrência de resistência bacteriana e a

conseqüente proibição do uso de antibióticos promotores de crescimento (APCs) na

alimentação animal levou a uma busca por aditivos naturais que possam substituir os

antibióticos na produção de frangos em todo o mundo. Entre as alternativas está o uso do

mananoligossacarídeo (MOS), derivado de uma cepa específica de levedura, cujos efeitos

benéficos sobre o desempenho produtivo e saúde animal têm sido comprovados através de

pesquisas científicas conduzidas em diversos países (ROPPA, 2006).

As empresas exportadoras tiveram que se adaptar às exigências da União Européia e

adotar não apenas um produto, mas todo um programa que envolve manejo, treinamento,

padronização, qualidade da matéria prima e ingredientes. Atualmente, a indústria avícola

nacional está mais preparada para a substituição dos APCs, obtendo resultados zootécnicos

semelhantes aos que eram obtidos com o uso de antibióticos. Além disso, há vantagens

adicionais como uma maior integridade intestinal, redução da resistência bacteriana, controle

de contaminações no abatedouro, assim como uma melhor resposta imune (ROPPA, 2006).

O tratamento com antimicrobianos das rações contribui para a redução da incidência

de salmonelas nas criações de aves, e a adição de ácidos orgânicos às rações, principalmente

os ácidos graxos de cadeia curta, reduz as infecções por salmonelas em frangos, melhorando o

desempenho das aves (HINTON et al., 1985; OSTERMANN, 2005; JUNIOR & OLIVEIRA,

2006).

O presente trabalho teve como objetivo avaliar a ação de dois ácidos orgânicos (ácido

fórmico e ácido propiônico) e de um mananoligossacarídeo (MOS) adicionados à dieta no

controle da infecção intestinal por Salmonella Enteritidis (SE) em frangos de corte.

CAPÍTULO 1

REVISÃO BIBLIOGRÁFICA

O gênero Salmonella, nome este dado em homenagem a Daniel E. Salmon, Médico

Veterinário do Departamento de Agricultura dos Estados Unidos da América (USDA)

(SNOEYENBOS & WILLIAMS, 1991). A classificação do gênero Salmonella segue ao

esquema Kauffmann-White que divide o mesmo em duas espécies, S. enterica e S. bongori. A

S. enterica apresenta seis subespécies: enterica, salamae, arizonae, diarizonae, houtenae e

indica. Salmonella bongori apresenta uma única subespécie, a bongori. O gênero Salmonella,

é composto por 2.523 sorovares, baseados em reações bioquímicas e sorológicas. A partir

deste nível as salmonelas são classificadas em sorovares e agrupadas de acordo com seus

antígenos somáticos. Conforme Doyle & Cliver (1990), o Manual Bergey classifica as

salmonelas em 50 grupos, que recebem letras do alfabeto, A, B, C

, C

D, etc., baseados na

composição do antígeno somático, sendo que 98% das salmonelas isoladas pertencem aos 12

primeiros grupos (POPOFF et al., 2003).

Historicamente o primeiro relato de toxinfecção alimentar produzido pela Salmonella

Enteritidis (SE) foi descrito por A. Gärtner, em 1888, na Alemanha, quando o mesmo isolou o

agente causal, Bacillus enteritidis, a partir da carne de um bovino e do baço de um homem

que havia falecido após ter consumido carne bovina crua (POPPE, 1999).

As modernas técnicas de produção, desenvolvidas principalmente nos anos 70,

trouxeram inúmeros benefícios, mas também podem predispor as aves a desafios patogênicos,

trazendo dessa forma riscos potenciais, não só à população avícola como também à própria

população humana, através da contaminação dos alimentos advindos das aves. Um desses

efeitos indesejáveis, presentes na produção avícola industrial, resulta da ausência de uma

formação rápida da microflora intestinal natural, e essa ausência, predispõe os pintos à

contaminação por bactérias patogênicas (PETRI, 2002).

A salmonelose é uma das mais prevalentes e mais sérias formas de doenças de origem

alimentar, sendo freqüentemente associada ao consumo do ovo. Muitos levantamentos em

diferentes países têm demonstrado que de 30 a 50% das carcaças de frangos congelados ou

refrigerados estão contaminadas por Salmonella sp. Entretanto, o número de células por

carcaça é muito baixo e geralmente alcança entre cinco e 1.000 células. Muitos esforços têm

sido feitos para reduzir a incidência da contaminação e visam controlar a disseminação de

Salmonella sp. durante o desenvolvimento das aves; a desinfecção desses locais é realizada

com o objetivo de controlar a disseminação desses microrganismos (SILVA, 2005).

Nos últimos trinta anos, a ocorrência de infecção por Salmonella sp. no homem teve

um aumento significativo em vários países. Esse aumento foi observado inclusive em países

com excelentes serviços de saúde e facilidades laboratoriais. Pesquisas em vários países

demonstraram que as carnes tanto de frango quanto as vermelhas, são as maiores fontes de

salmonelose. A contaminação da ração animal tem sido apontada como fonte primária de

infecção nos animais, originando grande número de portadores de Salmonella sp, que são

clinicamente sadios, porém são potenciais disseminadores desse gênero de microrganismo e

possíveis agentes contaminantes durante o processo de abate (SILVA, 2005).

A principal via de transmissão de Salmonella sp é observada na cadeia alimentar. Sua

presença em animais, especialmente aqueles criados com objetivo comercial, mostra que esta

bactéria é considerada o mais incidente e relevante agente causal de enfermidade entérica.

Atualmente são as “salmonelas paratíficas” que ameaçam a aceitação pública dos produtos

avícolas, sendo apontadas como principais responsáveis pelos surtos atribuídos às doenças

veiculadas por alimentos (RODRIGUES, 2005).

O trato intestinal das aves é o órgão mais importante no desenvolvimento da

imunidade geral inespecífica, pois diferentemente de todas as outras espécies animais, as aves

não apresentam linfonodos. Seus tecidos linfóides distribuem-se ao longo do trato intestinal,

sendo constituídos pelas placas de Peyer, tonsilas cecais e a bolsa de Fabricius que é uma

invaginação da parte final do trato digestório. Estes tecidos captam antígenos disponibilizados

no trato digestório que estimulam as células, produtoras de IgA e células T, para o

desenvolvimento de imunidade geral e inespecífica. Através do estímulo imunológico da

mucosa, há produção de anticorpos tipo IgA que bloqueiam os receptores e reduzem o número

de bactérias patogênicas na luz intestinal (JIN, 1997). O trato gastrintestinal realiza funções

básicas como a aquisição e assimilação de alimentos, como também mantêm uma barreira

protetora contra as infecções microbianas e virais (CROOM et al., 2000).

As infecções por Salmonella sp. são adquiridas por ingestão, sendo as tonsilas e as

placas de Peyer portas de entrada para algumas espécies, enquanto outras, que colonizam o

intestino, são invasivas, penetram nas células epiteliais e subseqüentemente, nos macrófagos

da mucosa. As salmonelas produzem doenças através da liberação de enterotoxinas,

citotoxinas e endotoxinas. Uma vez em contato com os macrófagos da lâmina própria ou das

placas de Peyer, as bactérias são fagocitadas, transportadas para os linfonodos regionais e

através da circulação portal, são conduzidas ao fígado (CARLTON & MCGAVIN, 1998). As

salmonelas são microrganismos intracelulares facultativos podendo, ao serem ligadas aos

macrófagos, não serem destruídas e ainda multiplicarem-se dentro destes, o que sugere a

resistência do microrganismo à fagocitose, resultando em uma tendência de cronificação das

doenças provocadas por estas bactérias por meses ou até anos. A severidade da enfermidade

tanto nas aves quanto nos humanos, depende da virulência da cepa, da linhagem e da faixa

etária (BARROW & LOWELL, 1991).

A salmonela sobrevive por meses no ambiente, mas é sensível à luz solar e aos

desinfetantes tais como fenóis, clorados e iodados. Ela necessita colonizar a porção distal do

intestino delgado ou o cólon para produzirem infecção, uma vez que a flora anaeróbica

normal do trato intestinal inibe o seu crescimento, além de bloquearem os acessos das

salmonelas aos sítios de adesão (OLIVEIRA, 2000). Contudo, fatores como terapia com

antibióticos, privação de alimento e água, estresse por transporte ou superlotação, alteram a

flora intestinal normal, predispõem à colonização intestinal pelas salmonelas, que aderem às

células intestinais por meio de fímbrias (QUINN et al., 1994).

A colonização intestinal por grande e diversificado número de bactérias é achado

normal nas aves. Entre as bactérias capazes de colonizar o trato intestinal das galinhas

encontram-se diferentes sorovares de Salmonella causadores de infecções em humanos. A

susceptibilidade da ave à colonização intestinal por Salmonella sp. é maior durante os

primeiros dias de vida, reduzindo-se à medida em que ocorre o crescimento da microbiota

intestinal normal (PIVNICK et al., 1982).

De acordo com Rodrigues (2005), a Salmonella Enteritidis e a Salmonella

Typhimurium presentes no intestino de aves sadias, são capazes de contaminar o meio

ambiente, além de outras aves. Dessa forma, por ocasião do abate, podem originar produtos

contaminados para o consumo humano.

De acordo com Quinn et al. (1994), a S. Enteritidis e a S. Typhimurium, do grupo das

paratíficas, podem produzir nas aves infecção subclínica, enterite e septicemia, podendo ser

transmitida via ovo. Felizmente, a pulorose e o tifo aviário encontram-se controlados na

maioria dos países com avicultura desenvolvida, pois o controle é feito mediante a eliminação

das aves positivas identificadas por bacteriologia e sorologia antes do início da produção,

observando-se regras de biossegurança.

Qualquer país que deseja controlar Salmonella Enteritidis, um sorotipo comum em

aves, precisa passar por estrito controle de importações, com união dos esforços entre

indústrias avícolas, associações avícolas, entidades de pesquisa e o governo. Planos Nacionais

têm sido implementados em muitos países, com o objetivo de controlar a infecção por

Salmonella em animais e principalmente proteger o consumidor (OIE, 2006).

Segundo Varnan & Evans (1991), infecções por Salmonella podem ser graves,

principalmente em pessoas muito jovens, idosas ou imunodeprimidas, sendo considerada

como dose infectante, contagens bacterianas entre 10

e 10

unidades formadoras de colônia

(UFC).

Nas aves, pode existir a transmissão para a progênie pela contaminação do ovo no

trato reprodutivo (LISTER, 1998) ou ao passar pela cloaca. Como no ovo contaminado não

ocorre morte embrionária, existe eclosão do pintinho, que se constitui em importante fonte de

infecção. A transmissão horizontal ocorre por via fecal-oral, sendo a água e ração

contaminadas veículos da infecção; o desenvolvimento do estado de portador pode contribuir

para a persistência do microrganismo no ambiente e conseqüente disseminação da

salmonelose. Outras fontes de transmissão incluem roedores, pássaros e outros animais, o que

favorecem a introdução e disseminação deste a bactéria em propriedades avícolas

(BERCHIERI JÚNIOR, 1995).

Nas aves, as salmoneloses têm três formas de apresentação: pulorose, causada pela

Salmonella Pullorum, tifo aviário, causado pela Salmonella Gallinarum (ambas hospedeiras

adaptadas às aves) e paratifo aviário, causado pelos demais sorovares de Salmonella (espécies

não-adaptadas às aves) (SNOEYENBOS & WILLIANS, 1991).

A pulorose pode acometer aves em todas as idades, sendo, porém mais comum nas aves

jovens, nas quais a mortalidade pode ser mais elevada, uma vez que apresenta uma forma

aguda septicêmica. Em aves adultas apresenta-se de forma crônica e localizada

(SNOEYENBOS, 1991).

As aves que sobrevivem podem apresentar empenamento ruim e crescimento inadequado

para a idade, porém nos casos de matrizes pesadas e poedeiras comerciais, cujo ciclo de vida é

maior, as mesmas conseguem crescer dentro dos parâmetros zootécnicos esperados e produzir

ovos, os quais podem estar contaminados, uma vez que uma das formas de transmissão é a

transovariana. Os sinais clínicos apresentados pelas aves doentes são: sonolência, fraqueza,

perda de apetite, retardo no crescimento, amontoamento, diarréia branca a branco-amarelada e

morte. Em algumas situações também se observa, cegueira e claudicação (BERCHIERI

JÚNIOR, 2000).

O tifo aviário, por sua vez, é uma enfermidade de caráter septicêmico, cujo curso pode ser

agudo ou crônico, aparecendo geralmente em plantéis de aves adultas (POMEROY &

NAGARAJA, 1991). As aves adultas infectadas pelo tifo aviário apresentam queda no

consumo de ração, sonolência, apatia, penas arrepiadas, cabeça pálida, cristas encolhidas e

diarréia amarelo-esverdeada a esverdeada. Poderá também ocorrer queda de postura

(BERCHIERI JÚNIOR, 2000). A distribuição é mundial, infectando principalmente aves

jovens, com até duas semanas de idade (NAGARAJA et al., 1991). As aves mais velhas

normalmente tornam-se portadoras assintomáticas e as aves adultas parecem ser mais

resistentes à doença (BERCHIERI JÚNIOR & BARROW, 1995).

O paratifo aviário é uma doença aguda ou crônica, causada por qualquer Salmonella

que não a S. Pullorum e a S. Gallinarum (BERCHIERI JÚNIOR, 2000). A transmissão das

salmonelas paratíficas pode ocorrer de forma vertical (via ovo) e/ou horizontal (via oral). A

transmissão horizontal pode ocorrer através da ingestão de água e/ou de ração contaminada,

bem como pela ingestão de material fecal (NASCIMENTO et al., 1996).

Segundo Barrow & Lovell (1991), a transmissão vertical, via ovo, da Salmonella

Enteritidis pode ocorrer devido à colonização nos folículos ováricos e oviduto ou por

contaminação fecal seguida de penetração através da casca.

Os sinais clínicos apresentados por aves infectadas pelas salmonelas paratíficas

dependem da idade das mesmas. As aves adultas não os apresentam de forma clara, sendo

raro que ocorram surtos agudos em condições naturais, nestes quadros observa-se:

inapetência, aumento no consumo de água, diarréia e desidratação. Nas aves jovens, fatores

ambientais, grau de exposição e a presença de infecções intercorrentes têm uma participação

importante na severidade de um surto, onde observa-se: sonolência, cabeça baixa, olhos

fechados, asas caídas, penas arrepiadas, anorexia, aumento no consumo de água, diarréia

aquosa profusa com empastamento de cloaca e tendência das aves a se aglomerarem junto à

fonte de calor. Em surtos superagudos com mortes ocorrendo no incubatório ou nos primeiros

dias de idade, as aves podem não apresentar sinais clínicos (NAGARAJA et al., 1991).

A presença de Salmonella sp. no intestino, na pele e entre as penas das aves pode

causar contaminação das carcaças durante o abate e o processamento. A bactéria, que foi

introduzida pelas aves no frigorífico, contamina as dependências e equipamentos,

comprometendo a qualidade do produto final para o consumo humano (HUMPHREY et al.,

1988).

A introdução de Salmonella sp. pode ser minimizada pelo uso de um programa de

biosseguridade. A água de beber das aves deve ser potável ou clorada. Carreadores mecânicos

de organismos incluindo sapatos e roupas de pessoas que manejam as aves podem estar

envolvidos na transmissão. Toda ação deve ser feita para controlar a introdução de salmonelas

por fômites. Ainda, a completa eliminação de aves infectadas do plantel deve ser realizada

(GAST, 2003).

Devido aos prejuízos causados por Salmonella sp., em todo o mundo, passou-se a

implementar medidas de controle na avicultura, sendo que dentre estas medidas deve-se

ressaltar os seguintes pontos: aves de reposição livres de Salmonella sp., controle de vetores,

higiene e desinfecção adequada das instalações, utilização de rações sem contaminação por

Salmonella sp., medidas de biossegurança nas propriedades e monitoramento microbiológico

ambiental e das aves. Normalmente, as carcaças contaminadas com Salmonella sp.

apresentam pequenos números de bactérias (< 100 UFC/carcaças de ave), a menos que haja

uma elevação de temperatura de resfriamento, ocorrendo, como conseqüência, uma intensa

multiplicação (MEAD, 1989; INGRAM & SIMOSEN, 1990).

A presença deste gênero, ainda que detectada por uma única unidade formadora de

colônia, em alimento é totalmente inadmissível (SILVA, 1997). Os alimentos mais

comumente envolvidos são: a carne moída, a lingüiça e a carne de aves (PELCZAR et al.,

1996).

Em relação as Salmonellas, sabe-se que são microrganismos Gram negativos,

aeróbicos, em forma de bastonetes, apresentando pleomorfismo. Todas são positivas à prova

de catalase e negativas à oxidase. São móveis por flagelos peritríquios, porém algumas são

imóveis, com ou sem cápsula e fermentadoras de açúcar. Encontram-se no intestino de

animais e do homem, são eliminadas pelas fezes que contaminam a água e solo (OLIVEIRA,

2000).

O Gênero Salmonella é membro da família enterobacteriaceae, são bastonetes Gram

negativos, medindo 0,7-1,5 µm x 2-5 µm, usualmente móveis por flagelos peritríquios, com

exceção dos sorotipos Gallinarum e Pullorum. Aeróbicas ou anaeróbicas facultativas, formam

colônias de 2 a 4mm de diâmetro. Reduzem nitratos em nitritos. Geralmente produzem gás

em meio com glicose e não fermentam a lactose. A temperatura para crescimento está entre 5

e 46ºC (ótima entre 35 e 37ºC) e pH para crescimento entre 6,0 e 7,0 (HOLT et al., 1994;

SIQUEIRA, 1995; OLIVEIRA, 2000; CAMPOS, 2002).

Para o isolamento de Salmonella sp., no enriquecimento não-seletivo utiliza-se,

geralmente, água peptonada a 1% ou caldo BHI (infusão de cérebro e coração), a uma

temperatura de incubação de 37 ou 42ºC. No enriquecimento seletivo, os caldos Rappaport-

Vassiliadis, Selenito-cistina e Tetrationato são recomendados e utilizados a temperatura de

42ºC (SIQUEIRA, 1995; OLIVEIRA, 2000).

O diagnóstico das infecções por enterobactérias é normalmente realizado pelo

isolamento e identificação da bactéria responsável pela infecção, e como não são exigentes

podem ser cultivadas em meios de uso geral (OLIVEIRA, 2000; TRABULSI & CAMPOS,

2002). Todas as enterobactérias crescem sobre ágar sangue (AS) e ágar MacConkey (MC) e

estes são usados rotineiramente para isolá-las nos laboratórios de diagnóstico. O ágar eosina-

azul-de-metileno (EMB) também pode ser usado no lugar do ágar MacConkey, pois permite

uma diferenciação preliminar entre enterobactérias e outras bactérias Gram negativas

(FARMER III, 1995). O meio sólido Verde Brilhante (VB), Rambach e XLD (xilose-lisina-

desoxicolato) são usados por serem mais seletivos que o ágar MacConkey (QUINN et al.,

1994; BACK, 2002).

No bioquimismo presuntivo, as amostras positivas apresentarão as seguintes

características: Urease-negativa, TSI-alcalino (bisel) com produção de gás positiva ou

negativa, LIA-alcalino na base e H

S positivo ou negativo e no meio SIM o H

S, o indol e a

motilidade são positivo. As colônias isoladas que apresentam essas características seguem

para diferenciação bioquímica definitiva e, se confirmado o perfil esperado, é determinada a

continuidade pela caracterização antigênica. A identificação final do sorotipo normalmente

ocorre em laboratórios credenciados ou de referência (OIE, 2006).

Em meio TSI (ferro tríplice açúcar) a produção de ácido sulfúrico (H

S) é positiva,

provocando coloração negra no fundo do tubo, não produzem indol, porém o citrato é

normalmente utilizado como fonte de carbono. A descarboxilização da lisina e da ornitina são

reações quase sempre positivas. A urease, fenilalanina e triptofano são negativas. Não

produzem lipase e desoxirribonuclease (JAWETZ et al., 1991; HOLT et al., 1994;

OLIVEIRA, 2000; CAMPOS, 2002).

O antígeno somático é parte da parede da célula, composto de lipopolissacarídeo, que

contém endotoxinas que produzem febre no hospedeiro, quando a toxina atinge a corrente

sangüínea. Os flagelos, que são compostos por material protéico, prolongam-se além da

parede da célula bacteriana, sendo responsáveis pela motilidade da mesma e possuindo

antígenos que são úteis na identificação final do agente (DOYLE & CLIVER, 1990).

Nas investigações da Salmonella, em que se utilizam características fenotípicas,

através de esquemas, tem-se uma classificação do sorovar e do fagotipo. A identificação dos

sorovares de Salmonella sp. é determinada principalmente pela caracterização sorológica das

amostras, com soros anti-Salmonella somáticos (O), flagelares (H) e capsulares (K ou Vi).

Este esquema permite o reconhecimento dos sorovares com base nas propriedades antigênicas

das fases um e dois das proteínas flagelares (antígenos H1 e H2), e pelos antígenos de

superfície (parede celular lipopolissacarídica, antígeno O) (LI et al., 1994).

Grande número de testes sorológicos tem sido desenvolvido para o diagnóstico de

infecção por Salmonella sp. em animais. Recentemente, outros testes como o ELISA, são

utilizados na rotina de diagnóstico de Salmonella (GAST, 2003; OIE, 2006). Há uma

tendência crescente para o uso no trabalho diário de métodos de detecção e contagem de

microrganismos, mais rápidos e econômicos do que os clássicos. Este fato tem determinado o

aparecimento de novos procedimentos, entre os quais se destacam as técnicas imunológicas,

conforme refere-se Benitez (2000), sobre o TECRA

UNIQUE

Salmonella que possui alta

sensibilidade e especificidade na detecção de Salmonella sp.

A manutenção da flora desejável tem sido há algum tempo obtida com o uso de

promotores de crescimento, os quais deprimem os microrganismos considerados indesejáveis

e proporcionam um meio favorável para aqueles considerados desejáveis. O aparecimento de

microrganismos resistentes pelo uso de antibióticos promotores de crescimentos (APCs) tem

se tornado freqüentes e determinando medidas severas por parte das Autoridades

Governamentais da Comunidade Européia e de outros países (BOLDUAN, 1999).

Setores da saúde pública do Brasil têm se manifestado contra os antibióticos e a sua

proibição em rações é eminente, seguindo a tendência mundial e obedecendo às normas

internacionais para o banimento completo como promotores de crescimento. Apesar dos

benefícios comprovados sobre o desempenho e saúde animal, o uso de APCs na alimentação

animal é um assunto de grande polêmica em todo o mundo (MILTENBURG, 2000). As

principais preocupações relacionadas à sua utilização na produção animal incluem a perda de

sua eficiência ao longo do tempo e o desenvolvimento de resistência bacteriana em humanos

(ROPPA, 2006).

Roppa (2004) afirma que o meio de atuação dos probióticos no organismo se refere

principalmente à inibição que estes exercem na colonização do intestino por bactérias

patogênicas. Os mecanismos através dos quais os probióticos reduzem as bactérias ou

bactérias patogênicas seriam: produção de substâncias bactericidas, competição por

nutrientes, alteração do metabolismo microbiano, estimulação do sistema imunológico,

competição por sítios de ligação e exclusão competitiva.

Os produtos de exclusão competitiva (EC), ou também chamados de probióticos, são

compostos por microrganismos vivos que, fornecidos às aves, beneficiam o hospedeiro

mediante estímulo das propriedades existentes na microbiota natural. Há dois aspectos

positivos no uso desses produtos na avicultura, ou seja, a determinação de melhores índices

zooeconômicos e a redução da colonização intestinal por alguns patógenos, entre os quais a

Salmonella sp. (JUNIOR & OLIVEIRA, 2006).

Os autores ainda afirmam que a via de administração desses produtos determina uma

melhor ou pior capacidade de colonização intestinal pelas bactérias presentes, sendo descritos

vários métodos de tratamento, embora a campo, a adição à água de beber, ração e

pulverização sobre as aves sejam os mais utilizados. A indicação de uso dos probióticos ou

EC às aves, é que ocorra o mais precocemente possível, a fim de que as bactérias presentes

no produto colonizem e se multipliquem no trato intestinal, iniciando suas atividades

benéficas no hospedeiro antes desse ser contaminado por algum patógeno.

O termo exclusão competitiva é usado para descrever a capacidade de uma microbiota

impedir a colonização intestinal de outras bactérias. A administração de probióticos,

compostos por microrganismos da microbiota intestinal de aves normais, pode determinar

alguma proteção às aves receptoras contra a colonização por alguns patógenos,

particularmente Salmonella sp. São descritos vários métodos de administração da microbiota

intestinal, ou seja, por meio de pulverização sobre as aves, inoculação em ovos embrionados,

inoculação via cloaca, reutilização de cama, inoculação via endoesofágica e adição à ração ou

à água de bebida. O inóculo pode ser obtido a partir de fezes ou de conteúdo cecal recém-

colhidos (ZINPRIN, 1993; JUNIOR & OLIVEIRA, 2006).

Existem alternativas para auxiliar na modulação da função imunológica dos animais,

uma delas é a utilização de ácidos orgânicos, empregados na produção animal. São ácidos

graxos voláteis de cadeia curta, ou seja, ácidos fracos com menores proporções de carboxilas

dissociadas, em comparação aos ácidos fortes (ROPPA, 2006).

Os ácidos orgânicos, propiônico e o fórmico, quando misturados reduzem o pH e

passam a ter uma ação antibacteriana, particularmente contra bactérias Gram negativas. O

modo de ação dos ácidos orgânicos, amplamente utilizados principalmente no controle de

Salmonella sp., embora exercendo também controle sobre outras bactérias, é atribuído à

redução direta do pH intracelular por ionização dos ácidos não dissociados (BARBOSA &

TORRES, 1999).

A ação inibidora dos ácidos orgânicos na forma não dissociada é de 100 a 600 vezes

maior do que a forma dissociada, e podem permear a membrana celular por difusão e liberar

prótons no citoplasma celular (EKLUND, 1983). O influxo de prótons induz a acidificação do

citoplasma e dissipa o potencial de prótons da membrana, e inibindo a geração de energia

(DIEZ-GONZALES & RUSSEL, 1997).

Os ácidos orgânicos de diferentes classes (fórmico, láctico, propiônico, acético, cítrico,

butírico, e outros) têm sido amplamente utilizados na avicultura, tornando-se uma alternativa

aos antibióticos promotores do crescimento (APC) quando provocam um efeito

bacteriostático ou bactericida. Um estudo demonstrou que os ácidos orgânicos oriundos da

fermentação de Lactobacillus sp. promovem um efeito bacteriostático contra Salmonella

Enteritidis ao fornecer um microambiente para a colonização das bactérias ácida tolerantes

como o Lactobacillus, Propionibacterium e Butyrivibrio para a manutenção da acidez do trato

intestinal, além disso, protege os ácidos no trato gastrentérico, evitando a sua metabolização

(FERREIRA & ASTOLFI-FERREIRA, 2006).

A ação dos ácidos reduz o pH e conseqüentemente a flora patogênica, evitando a

destruição das vilosidades intestinais, mantendo a espessura da parede do intestino e da

membrana da mucosa normal, aumentando a absorção integral dos nutrientes (VETANCO,

2005).

Os ácidos orgânicos são completamente metabolizados pela ave no trato

gastrointestinal (TGI), e o controle efetivo dos patógenos contribui para a modulação da

resposta imunológica e conseqüente melhora do desempenho avícola. O uso de acidificadores

com base de ácidos orgânicos em alimentos balanceados para aves, pode dar rendimentos

comparados com os antibióticos promotores de crescimento (ADAMS, 2000).

O conceito moderno de probiótico foi definido por Fuller (1989) como sendo

microorganismos (MO) vivos que, suplementados constantemente na dieta, afetam

beneficamente o organismo animal, atuando no equilíbrio da microbiota intestinal. Os

prebióticos, segundo GIBSON & ROBERFROID (1995), são considerados ingredientes não

digestíveis que estimulam o crescimento e/ou a atividade de um limitado número de

microrganismos capazes de proporcionar um ambiente intestinal saudável ao hospedeiro. São

constituídos de complexos de glicomanonoproteínas, em particular de mananoligossacarídeos

(MOS), capazes de ligarem-se à fímbria das bactérias e inibir a colonização no TGI. Podem

também serem utilizados como nutrientes pelas bactérias. Alguns autores atribuem aumentos

na retenção de alguns minerais e a mineralização óssea à suplementação com prebióticos

(BRADLEY & SAVAGE, 1994; ONIFADE et al.; 1999).

A utilização dos prebióticos do tipo MOS para estabilizar a flora intestinal, reduz o

aparecimento de neoplasias por melhorar a atividade imunológica das aves e também com

resultados para o ganho de peso e conversão alimentar (FLEMMING & FREITAS, 2005).

Obtém-se um hidrolizado de leveduras através de tratamentos químicos e enzimáticos e a

célula deste microrganismo sofre um processo de lise e hidrólise enzimática ocorrendo uma

grande produção de oligossacarídeos de manose e glicose (PÉREZ et al., 2001).

O hidrolizado de Saccharomyces cerevisiae está constituído fundamentalmente por

oligossacarídeos de mananos e glicanos, peptídios de baixo peso molecular, vitaminas do

complexo B, aminoácidos, bases nitrogenadas, nucleosídeos e nucleotídeos. A parede celular

destas leveduras pode ser constituída aproximadamente de 90% polissacarídeos, 5-10% de

proteínas e 1% de lipídeos. Quando a célula de levedura é submetida a um processo de lise e

hidrólise enzimática, é liberado oligossacarídeo de mananos e glicanos, que são importantes

componentes de ação biológica, tais como prebióticos e imunomodulador para animais e

humanos (DE LOACH et al., 1992; 1995; SANCHES, 1997).

Santos et al. (2006) relatam que, diversos aditivos têm sido utilizados como

alternativas aos antibióticos promotores de crescimento em dietas de aves, entre eles o MOS

fosforilado, proporcionando condições favoráveis ao desenvolvimento de microrganismos

benéficos do trato gastrintestinal, resultando em melhor digestão e maior absorção de

nutrientes.

A ligação das bactérias patogênicas no intestino das aves é freqüentemente mediada

pela ligação de lecitinas bacterianas aos receptores contendo D-manose e desta forma os

mananoligossacarídeos podem ser utilizados para diminuir a colonização por bactérias

indesejáveis (ESHDAT et al., 1978).

O sistema de defesa intestinal é significativamente melhorado e aprimorado com o uso

de mananoligossacarídeos fosforilados. A inclusão destes compostos nas dietas animais

promove uma alteração na população microbiana intestinal. Isto ocorre pela capacidade do

MOS se aderir às proteínas contendo manose, encontradas na superfície de bactérias que

contêm fímbrias do tipo 1, como Salmonela sp. e Escherichia coli. Desta forma, os

microrganismos patogênicos não se aderem aos carboidratos presentes na superfície das

células intestinais, sendo eliminados pelas fezes e, portanto, não causando lesões (ROPPA,

2006). O autor ainda afirma que, o controle da aderência da bactéria ao intestino do

hospedeiro implica em uma diminuição ou total inibição do processo infeccioso. Vários

mecanismos para este controle já foram descritos na literatura e envolvem o bloqueio dos

receptores presentes na mucosa do intestino, o bloqueio da adesão da fímbria bacteriana, a

eliminação dos receptores existentes na mucosa do intestino e a inibição da produção da

adesina. As fímbrias do tipo 1 se ligam especificamente à manose através da lecitina presente

em suas extremidades, sendo que esta ligação também já foi observada em células de

levedura. Esta ligação é denominada adsorção e pode ser visualizada ao microscópio óptico,

pois resulta em uma aglutinação das células de levedura.

CAPÍTULO 2

CONTROLE DA INFECÇÃO POR SALMONELLA ENTERITIDIS EM FRANGOS

DE CORTE COM ÁCIDOS ORGÂNICOS E MANANOLIGOSSACARÍDEO

CONTROL OF THE INFECTION CAUSED BY SALMONELLA ENTERITIDIS

WITH ORGANIC ACIDS AND MANNANOLIGOSACCHARIDE IN BROILER

Joana Darc Lopes Bassan

Maristela Lovato Flôres

Taiane Antoniazzi

Eloisa

Bianchi

Javier Kuttel

RESUMO

O objetivo deste estudo foi avaliar a ação de dois ácidos orgânicos (ácido fórmico e

ácido propiônico) e de um mananoligossacarídeo (MOS) adicionados à dieta no controle da

infecção intestinal por Salmonella Enteritidis (SE) em frangos de corte. Neste estudo de 39

dias foram utilizadas 180 aves, de um dia de idade,

rograma de Pós

graduação em M

edicina Veterinária

–

Universidade Federal de Santa Maria (UFSM),

Santa Maria, RS, Brasil. Francisco Crossetti, 355/ Aptº 202, 97050-210, Santa Maria, RS Brasil. E-

mail:

joanabassan@yahoo.com.br

. Autor para correspondência.

Departamento de Medicina Veterinária Preventiva (DMVP), Laboratório Central de Diagnóstico de

Patologias Aviárias, UFSM, Santa Maria, RS, Brasil.

Empresa Vetanco do Brasil, Chapecó, SC, Brasil.