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GUIDO MARKS
CARCINOGÊNESE INDUZIDA EM COLO DE RATOS E OS
EFEITOS DA MODULAÇÃO DO INOSITOL HEXAFOSFATO
SOBRE AS VIAS DE SINALIZAÇÃO CELULAR DA APOPTOSE
SÃO PAULO
2007
Tese apresentada à Universidade Federal
de São Paulo - Escola Paulista de
Medicina para obtenção do título de
Doutor em Ciências.
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GUIDO MARKS
CARCINOGÊNESE INDUZIDA EM COLO DE RATOS E OS
EFEITOS DA MODULAÇÃO DO INOSITOL HEXAFOSFATO
SOBRE AS VIAS DE SINALIZAÇÃO CELULAR DA APOPTOSE
ORIENTADOR: PROF. DR. DJALMA JOSÉ FAGUNDES
CO-ORIENTADOR: PROF. DR. CELSO MASSASCHI INOUYE
SÃO PAULO
2007
Tese apresentada à Universidade Federal
de São Paulo - Escola Paulista de Medicina
para obtenção do título de Doutor em
Ciências.
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Marks, Guido
Carcinogênese induzida em colo de ratos e os efeitos da modulação do
inositol hexafosfato sobre as vias de sinalização celular da apoptose. / Guido
Marks. – São Paulo, 2007.
vii, 47f
Tese (Doutorado) – Universidade Federal de São Paulo. Escola Paulista de
Medicina. Programa de Pós-Graduação em Cirurgia e Experimentação.
Induced carcinogenesis in colon of rats and the effects of the modulation of
inositol hexaphosphate on the pathways of cellular signaling of the apoptosis.
1. Ácido fítico 2. Apoptose 3. Marcadores biológicos 4. Anticarcinogênicos
5. Ratos
iii
UNIVERSIDADE FEDERAL DE SÃO PAULO
ESCOLA PAULISTA DE MEDICINA
UNIFESP – EPM
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIRURGIA E
EXPERIMENTAÇÃO
COORDENADOR: PROF. DR. JOSÉ LUIS MARTINS
TESE DE DOUTORADO
AUTOR: Guido Marks
ORIENTADOR: Prof. Dr. Djalma José Fagundes
CO-ORIENTADOR: Prof. Dr. Celso Massaschi Inouye
TÍTULO: Carcinogênese induzida em colo de ratos e os efeitos da modulação do
inositol hexafosfato sobre as vias de sinalização celular da apoptose.
BANCA EXAMINADORA
1 – Presidente: Prof Dr. Djalma José Fagundes
Título: Professor Associado do Departamento de Cirurgia, UNIFESP-EPM
MEMBROS EFETIVOS
2 – Prof. Dr. Ismael Dale Cotrim Guerreiro da Silva
Título: Prof. Associado do Departamento de Ginecologia, UNIFESP-EPM
3 – Prof. Dr. João Ricardo Filgueiras Tognini
Título: Prof. Titular do Departamento de Clínica Cirúrgica, UFMS
4 – Prof. Dr. Manuel de Jesus Simões
Título: Prof. Associado do Departamento de Morfologia, UNIFESP-EPM
5 – Profa. Dr. Maria Aparecida Marchesan Rodrigues
Título: Profa. Titular do Departamento de Patologia, UNESP
MEMBROS SUPLENTES
1 – Prof. Dr. Hélio Plapler
Título: Prof. Adjunto do Departamento de Cirurgia, UNIFESP-EPM
2 – Prof. Dr. Ricardo Dutra Aydos
Título: Prof. Associado do Departamento de Clínica Cirúrgica, UFMS
iv
DEDICATÓRIA
Aos meus pais SIEGFRIED e SILVIA,
pelo estímulo e empenho na minha formação
pessoal e profissional.
À minha esposa ALESSANDRA,
pelo amor.
Aos meus filhos DANIELA e RENAN,
pelo carinho, compreensão e motivação.
Aos meus irmãos INGRID e GUNTHER,
pelo acreditar no futuro.
v
AGRADECIMENTO ESPECIAL
Ao Prof. Dr. Djalma José Fagundes, Professor Associado da Disciplina de
Técnica Operatória e Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de São Paulo – UNIFESP-EPM, antigo Coordenador do
Programa de Pós – Graduação em Cirurgia e Experimentação da UNIFESP-EPM,
orientador desta pesquisa, pela demonstração e em exigir atitude de raciocínio lógico
e execução científica, além da confiança e amizade.
vi
AGRADECIMENTOS
À UNIVERSIDADE FEDERAL DE SÃO PAULO – ESCOLA
PAULISTA DE MEDICINA – UNIFESP-EPM, que me recebeu no Programa de
Pós - Graduação em Cirurgia e Experimentação tornando possível este objetivo.
À UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO DO SUL - UFMS,
Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós-Graduação por ter acreditado na relevância deste
projeto de pesquisa e destinado recursos para a sua execução.
Ao Reitor da Universidade Federal de São Paulo, Prof. Dr. Ulysses
Fagundes Neto, pelo incentivo à pesquisa.
Ao Reitor da Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, Prof. Dr.
Manoel Catarino Paes “Peró”, pelo empenho administrativo demonstrado em
promover-se pesquisa e disponibilizar meios naquela Universidade.
Ao Prof. Dr. José Luiz Martins, Coordenador do Programa Pós-Graduação
em Cirurgia e Experimentação, EPM-UNIFESP, pela administração exemplar do
Programa de Pós-Graduação e entendimento das necessidades dos Pós-Graduandos.
Ao Prof. Dr. José Carlos Dorsa Vieira Pontes, Chefe do Departamento de
Clínica Cirúrgica, Faculdade de Medicina-FAMED, Universidade Federal de Mato
Grosso do Sul, pelo apoio institucional.
Ao Prof. Dr. Luiz Francisco Poli de Figueiredo, Livre-Docente, Titular da
Disciplina de Técnica Operatória e Cirurgia Experimental da UNIFESP-EPM, pelos
ensinamentos.
Ao Prof. Dr. Celso Massaschi Inouye, Professor Titular do Departamento
de Clínica Cirúrgica, Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, pelo apoio e
incentivo do ensino de Pós-Graduação no Estado de Mato Grosso do Sul.
Ao Prof. Dr. Adalberto Abrão Siufi, Doutor e Professor Adjunto da
Disciplina de Oncologia, Departamento de Clínica Cirúrgica da UFMS, pelo
entendimento da necessidade do aprimoramento científico.
Ao Prof. Dr. Manuel de Jesus Simões, Livre-Docente da Disciplina de
Histologia e Biologia Estrutural do Departamento de Morfologia da UNIFESP-EPM,
pelos seus ensinamentos.
vii
Ao Prof. Dr. Olavo de Oliveira Rodrigues, Titular de Cirurgia Torácica da
Universidade de Mogi das Cruzes, pelos ensinamentos e colaboração na formação da
documentação científica durante o programa de pós-graduação.
À Profa. Dra. Mirian A. Ghiraldini Franco, Profa. Adjunto do Centro de
Desenvolvimento de Modelos Experimentais para Medicina e Biologia – CEDEME -
UNIFESP-EPM, pela transmissão de conhecimentos e informações no manejo e
escolha dos animais de experimentação.
Ao Prof. Dr. Murched Omar Taha, Livre-Docente e Professor Afiliado do
Departamento de Cirurgia da UNIFESP–EPM, pelos competentes ensinamentos
transmitidos.
Ao Prof. Dr. Paulo de Oliveira Gomes, Professor Adjunto da Disciplina de
Técnica Operatória e Cirurgia Experimental da UNIFESP-EPM, pelos ensinamentos.
À Profa. Dra. Edna Frasson de Souza Montero, Professora Afiliada ao
Departamento de Cirurgia da UNIFESP-EPM, pelos ensinamentos transmitidos.
À Profª. Dra. Elenir Rose Jardim Cury Pontes, Professora Titular da
Disciplina de Bioestatística do Departamento de Tecnologia em Alimentos da
UFMS, pela realização dos estudos estatísticos e ensinamentos durante o curso
Bioestatística.
Ao Prof. Dr. Luis Carlos Takita, Professor Adjunto da Disciplina de
Patologia e Morfofisiologia do Departamento de Clínica Cirúrgica da UFMS, pela
consultoria prestada durante a realização desta pesquisa e amizade.
A Profa. Dra. Eva Glória Abrão Siufi do Amaral, Assistente IV pelo
Departamento Clínica-UFMS, Mestre pela UNIFESP-EPM, Programa de Pós-
Graduação em Cirurgia e Experimentação, pela revisão.
Ao Dr. Roberto Teruya, Mestre pela UNIFESP-EPM, Programa de Pós-
Graduação em Cirurgia e Experimentação, pela revisão.
À Profa. Dra. Telma Bazzano da Silva Carvalho, Bioterista da UFMS, pela
consultoria.
À Sra. Rosely de Fátima Pellizzon, Bibliotecária responsável pelo Setor de
Referência e Localização de Documentos da Biblioteca Central UNIFESP-EPM.
viii
Aos Médicos Residentes da Disciplina de Oncologia-UFMS pelo
entendimento demonstrado frente à disponibilidade necessária do pesquisador ao
projeto.
A Renan de Albuquerque Marks, acadêmico de Ciências da Computação
do Departamento de Computação e Estatística-UFMS, pela editoração gráfica e de
imagens.
Aos Acadêmicos de Medicina do Curso de Medicina da UFMS, que
souberam entender a importância deste projeto de pesquisa.
Às Secretárias da UNIFESP-EPM, Elaine Maria Alves Bazzi Dantas e
Valdelice Justino Soares, pela colaboração e ajuda inestimável nos trâmites
burocráticos da pós-graduação.
Ao Sr. Rodrigo Avelar, Técnico em Laboratório, Laboratório Screenlab, pelo
processamento histológico e imunoistoquímico.
Ao Sr. Francisco Bezerra da Silva, Auxiliar de Laboratório, do Biotério da
UFMS.
Ao Sr. Misael Borges dos Santos, Técnico em Informática, pela consultoria.
ix
LISTA DE FIGURAS
Figura 1.
Fluxograma de distribuição dos animais nos diversos grupos
segundo a droga administrada e o tempo de observação ................. 7
Figura 2.
Administração de inositol hexafosfato a 1% em água de beber ad
libitum............................................................................................... 8
Figura 3.
Administração de azoximetano via subcutânea na dose 5mg.Kg
-1
... 9
Figura 4.
Fluxograma de administração das drogas e dos períodos de
eutanásia para coleta de material nos diversos grupos de
estudo............................................................................................... 9
Figura 5.
Parede abdominal aberta.................................................................. 10
Figura 6.
Parede abdominal aberta e visibilização de colo
exteriorizado.................................................................................... 11
Figura 7.
Colo ascendente resseccionado com inclusão do íleo
terminal............................................................................................ 11
Figura 8.
Colo ascendente com amostra de um centímetro de colo
resseccionado, aberto na borda contramesenterial e visibilizando-
se a mucosa......................................................................................
12
Figura 9.
Quantificação de biomarcador é executada através de
processamento de imagem assistida por computador....................... 14
Figura 10.
Quantificação da expressão de biomarcador com a utilização do
Software ImageLab em porcentual de área na cripta do colo
(utilizando o filtro RGB/ cor de fundo azul/ intervalo de cor de 0 a
147)................................................................................................... 14
Figura 11.
Imagem convertida em azul da imunoexpressão do biomarcador
na cripta do colo............................................................................. 15
Figura 12.
Quantificação da leitura de biomarcador apresentado em
planilha............................................................................................. 15
Figura 13.
Fotomicrografia de cripta de colo ascendente visibilizando-se a
imunoistoquímica (A) e a quantificação da expressão SOD1 (B,
em coloração azul – círculo). Amostra representativa do Grupo B,
Semana 3, 400X............................................................................... 16
x
Figura 14.
Fotomicrografia de cripta de colo ascendente visibilizando-se a
imunoistoquímica (A) e a quantificação da expressão Fasl (B, em
coloração azul – círculo). Amostra representativa do Grupo B,
semana 3, 400x............................................................................... 16
Figura 15.
Fotomicrografia de cripta de colo ascendente visibilizando-se a
imunoistoquímica (A) e a quantificação da expressão Itpr3 (B, em
coloração azul – círculo). Amostra representativa do Grupo B,
Semana 3, 400x................................................................................. 16
Figura 16.
Fotomicrografia de cripta de colo ascendente visibilizando-se a
imunoistoquímica (A) e a quantificação da expressão PI3KA (B,
em coloração azul – círculo). Amostra representativa do Grupo B,
Semana 3, 400x............................................................................... 17
Figura 17.
Fotomicrografia de cripta de colo ascendente visibilizando-se a
imunoistoquímica (A) e a quantificação da expressão Tgfb2 (B,
em coloração azul – círculo). Amostra representativa do Grupo B,
Semana 3, 400x..............................................................................
17
xi
LISTA DE TABELAS
Tabela 1.
Expressão imunoistoquímica do porcentual médio de área do
biomarcador superoxide dismutase 1 (SOD1) quantificada em dez
criptas de colo segundo os quatro grupos (A=controle, B=AOM,
C=IP6 e D=AOM+IP6) e os períodos de observação em semanas
(W3, W4, W5 e W6). Dados expressos em média da porcentagem de
área e respectivos desvios-padrão...................................................... 19
Tabela 2.
Expressão imunoistoquímica do porcentual médio de área do
biomarcador Fas ligand (Fasl) quantificada em dez criptas de colo
segundo os quatro grupos (A=controle, B=AOM, C=IP6 e
D=AOM+IP6) e os períodos de observação em semanas (W3, W4,
W5 e W6). Dados expressos em média da porcentagem de área e
respectivos desvios-padrão................................................................ 22
Tabela 3.
Expressão imunoistoquímica do porcentual médio de área do
biomarcador inositol 1,4,5 trisphosphate receptor type III (Itpr3)
quantificada em dez criptas de colo segundo os quatro grupos
(A=controle, B=AOM, C=IP6 e D=AOM+IP6) e os períodos de
observação em semanas (W3, W4, W5 e W6). Dados expressos em
média da porcentagem de área e respectivos desvios-padrão............. 25
Tabela 4.
Expressão imunoistoquímica do porcentual médio de área do
biomarcador inositol 1,4,5-trisphosphate 3-kinase A (PI3KA)
quantificada em dez criptas de colo segundo os quatro grupos
(A=controle, B=AOM, C=IP6 e D=AOM+IP6) e os períodos de
observação em semanas (W3, W4, W5 e W6). Dados expressos em
média da porcentagem de área e respectivos desvios-
padrão............................................................................................... 29
Tabela 5.
Expressão imunoistoquímica do porcentual médio de área do
biomarcador transforming growth factor beta 2 (Tgfb2) quantificada
em dez criptas de colo segundo os quatro grupos (A=controle,
B=AOM, C=IP6 e D=AOM+IP6) e os períodos de observação em
semanas (W3, W4, W5 e W6). Dados expressos em média da
porcentagem de área e respectivos desvios-padrão............................ 32
Tabela 6.
Peso inicial, final, ganho de peso no experimento segundo os quatro
grupos (A=controle, B=AOM, C=IP6 e D=AOM+IP6) e os períodos
de observação em semanas (W3, W4, W5 e W6). Dados expressos
em média e desvios-padrão.................................................................. 34
xii
LISTA DE GRÁFICOS
Gráfico 1.
Expressão imunoistoquímica do porcentual médio de área do
biomarcador superoxide dismutase 1 (SOD1) quantificada em dez
criptas de colo segundo os quatro grupos (A=controle, B=AOM,
C=IP6 e D=AOM+IP6) e os períodos de observação em semanas
(W3, W4, W5 e W6). Dados expressos em média da porcentagem
de área e respectivos desvios-padrão............................................. 20
Gráfico 2.
Expressão imunoistoquímica do porcentual médio de área do
biomarcador Fas ligand (Fasl) quantificada em dez criptas de colo
segundo os quatro grupos (A=controle, B=AOM, C=IP6 e
D=AOM=IP6) e os períodos de observação em semanas (W3,
W4, W5 e W6). Dados expressos em média da porcentagem de
área e respectivos desvios-padrão................................................... 23
Gráfico 3.
Expressão imunoistoquímica do porcentual médio de área do
biomarcador inositol 1,4,5 trisphosphate receptor type III (Itpr3)
quantificada em dez criptas de colo segundo os quatro grupos
(A=controle, B=AOM, C=IP6 e D=AOM+IP6) e os períodos de
observação em semanas (W3, W4, W5 e W6). Dados expressos
em média da porcentagem de área e respectivos desvios-
padrão............................................................................................. 26
Gráfico 4.
Expressão imunoistoquímica do porcentual médio de área do
biomarcador inositol 1,4,5-trisphosphate 3-kinase A (PI3KA)
quantificada em dez criptas de colo segundo os quatro grupos
(A=controle, B=AOM, C=IP6 e D=AOM=IP6) e os períodos de
observação em semanas (W3, W4, W5 e W6). Dados expressos
em média da porcentagem de área e respectivos desvios-
padrão............................................................................................. 30
Gráfico 5.
Expressão imunoistoquímica do porcentual médio de área do
biomarcador transforming growth factor beta 2 (Tgfb2)
quantificada em dez criptas de colo segundo os quatro grupos
(A=controle, B=AOM, C=IP6 e D=AOM+IP6) e os períodos de
observação em semanas (W3, W4, W5 e W6). Dados expressos
em média da porcentagem de área e respectivos desvios-padrão.... 33
xiii
LISTA DE SÍMBOLOS E ABREVIATURAS
Akt= protein kinase B
AOM = azoximetano
COX-2 = ciclooxigenase 2
CCR = câncer colo-retal
DISC = death-inducing signaling complex
DNA= deoxyribonucleic Acid
DR= death receptor
ERN = espécie reativa a nitrogênio
ERO = espécie reativa oxigênio
Fasl = Fas ligand
HE = hematoxilina – Eosina.
iNOS= inducible nitric oxide synthase
IP6 = inositol hexafosfato
Itpr3 = inositol 1,4,5 trisphosphate receptor type III
Kg = quilograma(s)
MAPK = mitogen-activated protein kinase
mg Kg
–1
= miligrama por quilograma
mL = mililitro
mM = milimolar
mL Kg
–1
= mililitro por quilograma
N = número total de animais
NO = nitric oxide
microM = micromoles
PI3K= phosphatidylinositol 3-kinase
PI3KA = inositol 1,4,5-trisphosphate 3-kinase A
RGB = red, green, blue
SMAD = smad proteins
SOD1 = superóxide dismutase 1
Tgfb2 = transforming growth factor beta 2
TRAIL = TNF Related Apoptosis-Inducing Ligand
xiv
UFMS= Universidade Federal de Mato Grosso do Sul
UNIFESP-EPM = Universidade Federal de São Paulo - Escola Paulista de Medicina
UNESP= Universidade Estadual Paulista de Botucatu
xv
RESUMO
Objetivo: Estudar os efeitos da modulação do inositol hexafosfato (IP6) na
expressão imunoistoquímica de marcadores biológicos de sinalização celular da
apoptose, em um modelo de carcinogênese induzida pelo azoximetano (AOM).
Métodos: Ratos Wistar (N=112) distribuídos em 4 grupos (n=28): A, controle; B,
AOM (5 mg Kg
-1
, 2x, a partir semana 3); C, IP6 (em água a 1%, seis semanas); D,
IP6+AOM. Eutanásia semanal (n=7), a partir de semana três. Imunoistoquímica de
colo ascendente com marcadores biológicos superoxide dismutase 1 (SOD1), Fas
ligand (Fasl), inositol 1,4,5 trisphosphate receptor type III (Itpr3), inositol 1,4,5-
trisphosphate 3-kinase A (PI3KA) e transforming growth factor beta 2 (Tgfb2).
Quantificação da imunoexpressão com uso de processamento de imagem assistida
por computador. Análise estatística da expressão média entre grupos, semanas em
grupos e grupos em semanas, e estabelecido significância quando p≤0,05.
Resultados: Evidenciou-se na expressão de SOD1 em grupo B, diferença
significante entre as semanas, p=0,0001; e em semana 3, diminuição na expressão
SOD1 do grupo BxD, p<0,0155. Expressão Fasl, diferença significante entre grupos,
p<0,0001; com diminuição na expressão Fasl de grupo BxD, p<0,05. Evidenciou-se
diferença significante entre grupos na expressão de Itpr3, p<0,0001; com diminuição
Itpr3 de grupo BxD, p<0,001. Expressão PI3KA evidenciou-se: a) em semana 3,
diminuição expressão PI3KA de grupo BxD, p=0,0448; b) semana 4, diminuição de
grupo BxD, p=0,0087; em semana 6, diminuição PI3KA de grupo BxD, p<0,001.
Expressão Tgfb2, grupo B, semana 3, diminuição na expressão de grupo BxD,
p<0,001. Conclusão: O inositol hexafostato promove a modulação de marcadores
biológicos com diminuição Fasl, Itpr3 e diminuição pontual em Tgfb2, PI3KA e
SOD1 em carcinogênese de colo.
xvi
ABSTRACT
Objective: To study the effect of the modulation of inositol hexaphosphate (IP6) in
the biological immunohistochemistry expression of markers of to cellular signalling
of apoptosis, in induced model of carcinogenesis of colon induced for the
azoxymethane (AOM). Methods: Wistar rats (N=112) distributed in 4 groups
(n=28): Control; B, AOM (5 mg kg
-1
, 2x, to break week 3); C, IP6 (in water 1%, six
weeks); D, IP6+AOM. Weekly euthanasia (n=7), from week three.
Immunohistochemistry of ascendent colon with biological markers superoxide
dismutase 1 (SOD1), Fas ligand (Fasl), inositol 1,4,5 trisphosphate receptor type III
(Itpr3), inositol 1,4,5-trisphosphate 3-kinase A (PI3KA) and transforming growth
factor beta 2 (Tgfb2). Quantification of the immune-expression with use of image
processing-computer assisted. Analysis statistics of the means between groups,
weeks in groups, groups in weeks, and established significance when p≤0.05.
Results: It was proven in the expression of SOD1 in group B, significant difference
between the weeks, p=0.0001; and in week three, reduction in expression SOD1 of
the group BxD, p<0.0155. Fasl expression, significant difference between groups,
p<0.0001; with reduction in the Fasl expression of BxD group, p<0.05. One proved
significant difference between groups in the expression of Itpr3, p<0.0001; with Itpr3
reduction of BxD group, p<0.001. Expression PI3KA was proven: a) in week three,
reduction expression PI3KA of group BxD, p=0.0448; b) week four, reduction of
group BxD, p=0.0087; in week six, reduction PI3KA of group BxD, p<0.001. Tgfb2
expression, group B, week three, reduction in the expression of group BxD, p<0.001.
Conclusion: Inositol hexaphosphate promotes modulation of biological markers
with reduction Fasl, Itpr3 and prompt reduction in Tgfb2, PI3KA and SOD1 in
carcinogenesis of colon.
xvii
SUMÁRIO
1.
INTRODUÇÃO ..........................................................................................
1
2.
OBJETIVOS...............................................................................................
5
3.
MÉTODOS ................................................................................................
6
4.
RESULTADOS............................................................................................
18
5.
DISCUSSÃO................................................................................................
34
6.
CONCLUSÃO.............................................................................................
41
7.
REFERÊNCIAS..........................................................................................
42
8.
NORMAS ADOTADAS............................................................................
48
9.
APÊNDICE..................................................................................................
49
10
ANEXOS.................................................................................................... 60
1
1. INTRODUÇÃO
A transformação oncogênica conduz à aberração de células do ciclo celular e
a desregulação da apoptose. A aquisição de resistência a apoptose é entendida como
sendo crucial na transformação das células normais em neoplásicas em muitos
tecidos.
A apoptose é um processo fisiológico de eliminação celular e subdivide-se
em fases (iniciação, progressão e execução) que são importantes tanto para a
manutenção da homeostase celular como também para a proliferação e a
diferenciação celular
1
. Uma via de apoptose funcional demonstra ser essencial para
manter números baixos de células com mutação
2
. Apoptose fornece uma defesa
celular inata contra a tumorigênese de duas maneiras: a) pela remoção das células
com instabilidade genômica que se desenvolve durante o tumorigênese; b) e pela
deleção de células que sofrem agressão pelo insulto genotóxico de carcinógenos
3
.
As evidências indicam que as vias de sinalização que regulam a apoptose
estão frequentemente não funcionantes no câncer colo-retal (CCR), com um ponto
inicial aumentado para sua ativação e uma desordem progressiva da homeostase
apoptótica durante a carcinogênese enquanto a instabilidade genômica aumenta
progressivamente. Consequentemente, as células geneticamente defeituosas escapam
da deleção apoptótica e isto, com a sobrevivência possível de clones que possuem
mutações biológicas significantes
4,5
.
Os ligantes de apoptose incluem tumor necrosis factor-a (TNF), lymphotoxin,
Fas-Ligand, Apo3-Ligand e TRAIL (TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand). Os
receptores de apoptose incluem o tumor necrosis factor-receptor 1, fas, death
receptor (DR3, DR4, DR5 e DR6). Uma vez ativados, os receptores de apoptose
recrutam as proteínas adaptadoras, que recrutam por sua vez caspases do iniciador,
causando um complexo pro-apoptotic denominado death-inducing signaling complex
(DISC). Além de ser provocado pelos sinais microambiente, a apoptose pode
também ser ativada dentro da célula através dos sensores específicos que residem no
núcleo e no citoplasma. A via intrínseca de apoptose conduz à formação de um
complexo pró-apoptose denominado apoptosoma. As vias intrínseca e extrínseca de
2
apoptose convergem em um via comum que causa a ativação de enzimas ativadora
de caspases
6
.
A mutação do DNA (Deoxyribonucleic Acid) é uma etapa crítica na
carcinogênese, subdivide-se em fases (iniciação, promoção e progressão) e os níveis
elevados de lesões oxidativas do DNA foram identificados em vários tumores,
implicando fortemente tais lesões na etiologia do câncer. Demonstrado que os danos
do DNA estão ligados predominantemente com o processo da iniciação
7
. As fases da
promoção e da progressão são eventos irreversíveis e relativamente transitórios; a
fase de iniciação da carcinogênese pode fornecer os melhores alvos para a prevenção
do câncer
8
.
O estresse genotóxico desempenhado pelos agentes genotóxicos ao originar
alterações produz efeitos indiretos na tumorigênese através da produção alterada de
radicais livres e de citocinas. As mudanças microambientais causando efeitos diretos
ou indiretos pelo estresse genotóxico podem estar envolvidas na iniciação e na
progressão tumoral e até mesmo, ser um pré-requisito para a tumorigênese
9
. Os
radicais livres, conhecidos como espécie reativa oxigênio (ERO) juntamente com
espécie reativa a nitrogênio (ERN) são reconhecidos por desempenhar um duplo
papel em beneficiar e prejudicar espécies. Esta dupla ação de ERO demonstra que
atua como segundo mensageiro no interior celular, na cascata de sinalização celular,
induzindo e mantendo o fenótipo oncogênico de células de câncer. Entretanto, ERO
pode induzir a senescência e apoptose e assim, atuar como espécie anti-tumor.
A produção cumulativa de ERO/ERN pelas agressões endógeno-exógenas é
comum para muitos tipos de células de câncer e vinculadas a regulação alterada da
via de sinalização celular. O estresse oxidativo induz um desequilíbrio no balanço de
oxidação celular e está relacionado a estimulação oncogênica. A compreensão da
regulação de vias de sinalização reguladas por ERO em células tumorais abre novas
perspectivas para intervenções quimio-gene-terapêuticas ou indução de apoptose
para o tratamento de câncer
10
.
Atualmente os estudos em carcinogênese experimental em colo utilizam o
azoximetano (AOM)
11
como substância carcinogênica e são executados com uso de
endpoint (desfecho) intermediário tais como aberrant crypt foci (ACF)
12
, mucin
depleted foci (MDF) e beta-catenin accumulated crypts (BCAC)
13
, via clássica
3
adenoma-tumor e o estudo de mutações epigenéticas e genéticas (oncogenes)
14,15
em
tumores fenotipicamente instalados.
Marcadores moleculares (biomarcadores) podem ser utilizados como
indicadores de exposição, efeitos e suscetibilidade individual para câncer.
Amostragem de biomarcadores com relação à exposição pode ter um grande impacto
na confiabilidade do mecanismo da ação. O desenvolvimento recente em genômica
oferece uma oportunidade em investigar simultaneamente numerosos oncogenes,
genes supressores de tumor, mudanças fenotípicas em proteínas e a utilização das
mesmas amostras no melhor entendimento de possíveis vias de sinalização que
interferem na carcinogênese; isto se identificando biomarcadores de alto risco para
câncer através técnicas moleculares genéticas tradicionais
16
. Desta maneira, a
apoptose pode ser avaliada com uso de biomarcadores vinculados entre si em vias de
sinalização.
Superóxidos-dismutase é uma família de enzimas que funcionam para
catalizar eficientemente o dismutação de ânions do superóxido. Três originais
dismutases em mamíferos altamente compartimentalizadas foram bioquimicamente e
molecularmente caracterizados. O gene do biomarcador superóxide dismutase 1
(SOD1, CuZn-cuZn-SOD; identificado no cromossoma 11, localização 11q11,
geneID 24786 em Rattus norvergicus)
17
representa 90% da atividade total da
superóxido dismutase
18
.
O gene do biomarcador Fas (Fas) é expresso em epitélio de colo normal,
identificado no cromosoma 1, localização: 1 85.0 cM, geneID 14103
19
, participa da
via de apoptose
20
, relativamente sensível a apoptose Fas mediada
21
e o Fas ligante é
hipoexpresso em tumores de colo
22
.
O gene do biomarcador inositol 1,4,5-trisphosphate receptor (Itpr)
identifcado no cromossoma 20, localização 20p12, geneID 25679, funções
identificadas
23
e participa da via phosphatidylinositol signaling system
24
. O Itpr3 age
como um mensageiro para inositol trifosfato, mediando a via sinalização do cálcio,
isto por que a isoforma Itpr3 perde o feedback de inibição com o cálcio citosólico.
Estes achados fornecem a evidência que o cálcio aumenta a sensibilidade do Itpr3 em
células intactas e suporta a conceito que esta isoforma pode agir como um alvo para
sinalização cálcio (hormônio-induzido)
25
.
4
O gene do biomarcador inositol 1,4,5-trisphosphate 3-kinase A (PI3KA)
identificado no cromosoma 3, localização 3q35, geneID 81677, funções
conhecidas
26
, participa da via do phosphatidylinositol signaling system
27
, via do
metabolismo do cálcio e apoptose
28
. A cascata de transdução de sinal PI3K/Akt foi
investigada extensivamente para seu papel em transformação oncogênica. Estudos
implicaram PI3K e Akt na prevenção de apoptose. Porém, a mais recente evidência
também associou esta via com a regulação na progressão do ciclo celular
29
.
O gene do biomarcador transforming growth factor beta (Tgfb) identificado
no cromossoma 8, localização 8q32, geneID 81810, exerce funções múltiplas e
também apoptose
30
, participa da TGF-beta signalling pathway
31
. O envolvimento de
membros da família TGF-beta na carcinogênese é complexo e atualmente constatam-
se ambas as atividades, supressora e oncogênica. Verifica-se atividade supressora
dominante em tecido normal, mas durante a tumorigênese, mudanças na expressão e
resposta celular provocam um balanço favorável na atividade oncogênica
32,33
.
Quimioprevenção primária no câncer está ganhando importância e é alvo
terapêutico emergente. Quimioprevenção têm como objetivo inibir a iniciação ou
suprimir a promoção-progressão de lesões pré-neoplásicas para câncer invasivo
através do uso de agentes específicos (anticarcinogênicos) naturais ou sintéticos
34
.
Comprovou-se que o ácido fítico (inositol hexafosfato, IP6), substância que participa
da via do phosphatidylinositol signaling system, é um antioxidante que não causa
dano em DNA sob condições experimentais, isto em comparação a outros agentes
antioxidantes que causam danos ao DNA via geração de ERO em presença de íons
de metal e redutores endógenos
35
.
O conceito de indução seletiva de apoptose é válido na quimioprevenção
36
e
assim, questiona-se a capacidade de antioxidantes em modular
34
os receptores de
apoptose na fase inicial da carcinogênese. Propõe-se testar a habilidade do inositol
hexafosfato em modular a apoptose e quantificar a sua efetividade com o uso de
marcadores moleculares.
5
2. OBJETIVOS
Geral
Estudar a expressão de marcadores moleculares de sinalização celular da
apoptose e a modulação com antioxidante em modelo de carcinogênese induzida pelo
azoximetano em colo, em ratos.
Específico
Estudar os efeitos da modulação do inositol hexafosfato na expressão
imunoistoquímica dos marcadores moleculares de sinalização celular da apoptose
(SOD1, FasL, Itpr3, IP3KA, Tgfb2) em um modelo de carcinogênese induzida em
colo de ratos pelo azoximetano.
6
3. MÉTODOS
O projeto de pesquisa foi aprovado pela Comissão de Ética no Uso de
Animais/CEUA da Universidade Federal de Mato Grosso do Sul – UFMS, protocolo
número 64/2004 e referendado pelo Comitê Ética-UNIFESP protocolo número CEP
0183/2006.
Amostra
Utilizaram-se ratos (N=112) Wistar (Rattus norvegicus albinus), machos,
com 08 semanas de idade, peso médio de 150 ± 20 gramas, linhagem EPM-1 e
originários do Biotério Central da UFMS.
A experimentação ocorreu no Laboratório de Carcinogênese Experimental,
anexo ao Biotério Central da UFMS. Os animais foram alojados em caixas de
polipropileno com tampa de arame galvanizado, tamanho padrão para 05 animais. Os
animais foram submetidos a sete dias de adaptação, expostos à iluminação artificial
com ciclos claro/escuro de 12h, temperatura média 22 ± 3°C, com umidade média de
56 ± 13% e alimentados com ração Nuvilab® CR1 (Nuvital Nutrientes e Produtos
Veterinários Ltda®. – Curitiba – PR - Brasil) e água filtrada à vontade.
Distribuição dos Grupos
Os animais foram distribuídos por sorteio em quatro grupos (n=28): Grupo A
(controle), animais que não receberam nenhuma droga; Grupo B (AOM), animais
que receberam somente azoximetano; Grupo C (IP6), animais que receberam apenas
hexafosfato de inositol e Grupo D (AOM+IP6) animais que receberam azoximetano
7
e hexafosfato de inositol. A identificação foi realizada por meio de tatuagem na
cauda, utilizando-se caneta com tinta indelével de cor preta, identificando-se os
grupos por letras de A a D. Cada animal no grupo foi identificado com numeração
crescente de 1 até 28. Em cada semana de observação (terceira, quarta, quinta e
sexta) foram submetidos à eutanásia sete animais de cada grupo para coleta de
material de estudo (Figura1).
Figura 1. Fluxograma de distribuição dos animais nos diversos grupos segundo a
droga administrada e o tempo de observação.
Drogas usadas
Azoximetano (AOM)
Substância carcinogênica, formulação C
2
H
6
N
2
O (Laboratório Sigma®,
produto A9517, lote 70K0847).
Hexafosfato de inositol (IP6)
Substância anti-tumoral, formulação C
6
H
6
O
24
P
6
Na
12
(Laboratório Sigma®,
produto P3168, lote 60231).
Solução salina
Solução salina de cloreto de sódio 0,9% (Laboratório Fresenius-Gabi®).
Ratos
(N=112)
Grupo A
Controle
(
n=28
)
Grupo B
AOM
(
n=28
)
Grupo C
IP6
(
n=28
)
Grupo D
AOM+IP6
(
n=28
)
Sem 3 – W3
(n=7)
Sem 4 – W4
(n=7)
Sem 5 – W5
(n=7)
Sem 6 – W6
(n=7)
Sem 3 – W3
(n=7)
Sem 4 – W4
(n=7)
Sem 5 – W5
(n=7)
Sem 6 – W6
(n=7)
Sem 3 – W3
(n=7)
Sem 4 – W4
(n=7)
Sem 5 – W5
(n=7)
Sem 6 – W6
(n=7)
Sem 3 – W3
(n=7)
Sem 4 – W4
(n=7)
Sem 5 – W5
(n=7)
Sem 6 – W6
(n=7)
8
Administração das drogas
Hexafosfato de inositol (IP6)
Uma quantidade de 10mg da droga foi diluída em 1000mL de água bi-
destilada resultando numa preparação na concentração de 1%. Para cada animal dos
grupos C e D foi oferecida à vontade como única fonte de água para beber durante 6
semanas.
Figura 2. Administração de inositol hexafosfato a 1% em água de
beber ad libitum.
Azoximetano (AOM)
Uma quantidade de 100mg (0,1mL) da droga foi diluída em 49,9mL de
solução salina de cloreto de sódio 0,9% resultando em um volume final de 2,0mL e
na concentração de 2mg.mL
-1
. Para cada animal dos grupos B e D foi administrada
uma dose de 5mg.Kg
-1
, via subcutânea, por duas semanas consecutivas à partir da
terceira semana.
Solução salina
IP6 a 1%
em água de
beber
9
Uma dose de 1ml.Kg
-1
foi administrada por via subcutânea nos animais dos
grupos A e C.
Figura 3. Administração de azoximetano via subcutânea na dose 5mg.Kg
-1
.
Semanas
W1 W2 W3 W4 W5 W6
Grupo A
Grupo B
Grupo C
Grupo D
Eutanásia
+ + + +
Substâncias
IP6 AOM SALINA 0,9% ÁGUA
Figura 4. Fluxograma de administração de drogas e eutanásia nos quatro grupos de
estudo, durante as seis semanas do experimento.
Procedimentos
Coleta de material
Azoximetano
via subcutânea
10
Decorrido o período de observação de cada subgrupo os animais foram
submetidos à injeção intraperitoneal
37
de 150mg.Kg
-1
de pentobarbital sódico o que
levou a parada cardiorespiratória.
Os animais foram posicionados na prancha operatória em decúbito dorsal
horizontal. A parede abdominal foi aberta com bisturi (Figura 5), identificados o
céco e íleo terminal (Figura 6) e resseccionados cerca de dez centímetros de colo
ascendente e três centímetros de íleo terminal com a inclusão do ceco (Figura 7). Um
centímetro de colo direito foi resseccionado a partir da transição íleocólica (Figura
8). O segmento foi aberto pela borda contramesenterial e lavado com solução salina
para remoção dos resíduos e muco entéricos. A peça foi fixada em duplo molde
rígido fenestrado para evitar a dobradura da mesma durante o período de fixação. O
segmento de colo foi imerso em formalina 10% tamponada em volume dez vezes
superior ao volume da peça, durante vinte e quatro horas.
Figura 5. Abertura da parede abdominal e exposição de vísceras.
Parede
Abdominal
aberta
0,5cm
11
Figura 6. Parede abdominal aberta e visibilização de colo exteriorizado.
Figura 7. Colo ascendente resseccionado com inclusão do íleo terminal.
Íleo
Ceco
Colo
ascendente
0,5cm
Colo ascendente
exteriorizado
0,5cm
12
Figura 8. Colo ascendente com amostra de um centímetro de colo resseccionado,
aberto pela borda contramesenterial e visibilizando-se a mucosa.
Preparo de blocos e lâminas.
Os segmentos de colo foram submetidos aos procedimentos rotineiros de
preparação histológica com desidratação progressiva em álcool, inclusão em blocos
de parafina, cinco cortes sagitais em micrótomo, seqüenciais, espessura de 2µm
38
e
afixação em lâmina de vidro silanizada tipo Super Frost Dako®.
Imunoistoquímica.
O processamento imunoistoquímico (técnica avidin-biotin complex, ABC) foi
executado no Laboratório Screenlab® e realizado em cada uma das 5 lâminas de
cada amostra, com a utilização individual de anticorpo primário: anti-SOD1 (epítopo
terminação-N19, SantaCruz, produto SC7277, lote G1604, diluição 1:100); anti-Fasl
(epítopo terminação-N20, SantaCruz®, produto SC834, lote E2804, diluição 1:100);
anti-Itpr3 (epítopo terminação-C20, SantaCruz®, produto SC7277, lote G1604,
diluição 1:100); anti-PI3KA (epítopo terminação-N17, SantaCruz®, produto
SC11206, lote A191, diluição 1:100); anti-Tgfb2 (epítopo terminação-C,
Amostra
colo
aberta
0,5cm
Íleo
Ceco
13
SantaCruz®, produto S90, diluição 1:100). Utilização de anticorpo secundário anti-
rato Dako LSAB®, produto K609, lote 15068; revelador de cor DAB
(diaminobenzidina), Dako®, produto K3468, lote 01317, diluição 1:10); com
obtenção da expressão de marcadores biológicos na coloração marrom.
Captura de imagem da microscopia e optimização fotográfica.
A microscopia óptica e captura da imagem foi realizada em dez criptas de
cada amostra, na mesma sessão e com a mesma luminosidade, utilizando-se
Microscópio (Marca Nikon®, modelo Elipse E200) com lente binocular com
aumento 10X e objetiva no aumento 40X/0,65; acoplado à câmera de vídeo (Marca
SanSung®, modelo SCC131), conectado ao microcomputador via placa de vídeo
(Marca Pinnacle® Studio PCTV – USB ), microcomputador (Duron 750 Mhz, 128
Mb Ram, HD 20 Gigabytes) e sistema operacional Microsoft Windows® 98 SE
(Figura 9). A imagem capturada foi salva para documentação, seguindo-se
codificação previamente elaborada; a seguir, submetida à optimização da qualidade
fotográfica com uso do Software Adobe Photoshop 7.0/ imagem/ ajuste/ curvas/
canal RGB/ automático.
Quantificação da imunoistoquímica.
A quantificação de cada biomarcador foi realizada na área demarcada da
cripta através de processamento de imagem assistida por computador (Figura 9) com
a utilização do Software ImageLab®
39
. A quantificação da densidade de cor marrom
corresponde à imunoexpressão de cada biomarcador em percentual de área
(utilizando o filtro RGB/ cor de fundo azul/ intervalo de cor de 0 a 147, Figura 10):
obtendo-se imagem convertida em azul da imunoexpressão do biomarcador na cripta
do colo (Figura 11). Apresentação do resultado em planilha (Figura 12).
14
Figura 9. Quantificação de biomarcador é executada através de
captura da imagem em microscópio óptico e
processamento de imagem assistida por computador.
Figura 10. Quantificação da expressão de biomarcador com a
utilização do Software ImageLab em percentual de
área na cripta do colo (utilizando o filtro RGB/ cor de
fundo azul/ intervalo de cor de 0 a 147).
Vídeo-
câmera
Microscópio
Imagem
capturada em
tela computador
15
Figura 11. Imagem convertida em azul da imunoexpressão do
biomarcador na cripta do colo.
Figura 12. Quantificação da leitura de biomarcador apresentado em
planilha.
16
Figura 13. Fotomicrografia de cripta de colo ascendente visibilizando-se a imunoistoquímica (A) e a
quantificação da expressão SOD1 (B, em coloração azul – círculo). Amostra representativa do
Grupo B, Semana 3, 400x.
Figura 14. Fotomicrografia de cripta de colo ascendente visibilizando-se a imunoistoquímica (A) e a
quantificação da expressão Fasl (B, em coloração azul – círculo). Amostra representativa do
Grupo B, semana 3, 400x.
Figura 15. Fotomicrografia de cripta de colo ascendente visibilizando-se a imunoistoquímica (A) e a
quantificação da expressão Itpr3 (B, em coloração azul – círculo). Amostra representativa do
Grupo B, Semana 3, 400x.
AB
AB
AB
17
Figura 16. Fotomicrografia de cripta de colo ascendente visibilizando-se a imunoistoquímica (A) e a
quantificação da expressão PI3KA (B, em coloração azul – círculo). Amostra representativa do
Grupo B, Semana 3, 400x.
Figura 17. Fotomicrografia de cripta de colo ascendente visibilizando-se a imunoistoquímica (A) e a
quantificação da expressão Tgfb2 (B, em coloração azul – círculo). Amostra representativa do
Grupo B, Semana 3 ; 400x.
Estudo estatístico.
O estudo estatístico foi realizado no Setor de Bioestatística do Departamento
de Tecnologia de Alimentos da UFMS. Aplicou-se o teste ANOVA para análise da
média do peso inicial entre os grupos; Teste de Kruskal Wallis para análise
comparativa da média do ganho de peso entre os grupos. Teste de Kruskal Wallis e
Análise de Variância para análise comparativa da média de expressão de cada
marcador biológico (SOD1, Fasl, Itpr3, PI3KA, Tgfb2) entre os grupos, seguido pelo
AB
A
B
18
Teste Dunn ou Teste Student-Newman-Keuls. A análise dos dados foi processada
utilizando-se o programa estatístico Epi-Info® e BioEstat® e fixou-se em 0,05 ou
5% (α
≤
0,05) o nível para rejeição da hipótese de nulidade, assinalando-se com um
asterisco os valores significantes.
4. RESULTADOS
O ganho de peso não apresentou diferença entre os grupos no período de
estudo de seis semanas, comprovando assim, que tanto o IP6 quanto o AOM não
interferiram no ganho ponderal dos animais no experimento (Tabela 6).
Expressão do biomarcador SOD1 (Tabela 1 e Gráfico 1).
A comparação de semanas em cada grupo evidenciou: a) Grupo B, diferença
significante entre as semanas (W3xW4xW5xW6, p=0,0001); com diminuição na
expressão SOD1 de semana 3 para semana 4 (W3xW4, p<0,0470) e subseqüente
diminuição significante da semana 4 para a semana 5 (W4xW5, p<0,001) e a seguir,
aumento significante de semana 5 para semana 6 (W5xW6, p<0,0439).
A comparação entre grupos a cada semana evidenciou: a) em semana 3,
diferença significante entre Grupos (AxBxCxD, p<0,0207), com aumento na
expressão de SOD1 do controle em comparação ao administrar-se AOM (AxB,
p<0,0036), diminuição na expressão SOD1 quando se administra concomitantemente
IP6+AOM em comparação ao AOM (BxD, p<0,0155); b) em semana 5, diferença
significante entre Grupos (AxBxCxD, p=0,0332), com diminuição significante na
expressão SOD1 ao administrar-se AOM em comparação ao controle (AxB,
p=0,0451); entretanto, evidenciou-se que a expressão SOD1 está aumentada
significantemente no grupo IP6 em comparação ao grupo AOM (BxC, p=0,0110).
19
Tabela 1. Expressão imunoistoquímica do porcentual médio de área do biomarcador superoxide dismutase 1
(
SOD1) quantificada em dez criptas de colo ascendente
segundo os quatro grupos (A=controle, B=AOM, C=IP6 e D=AOM+IP6) e os períodos de observação em semanas (W3, W4, W5 e W6) quantificado
através de processamento de imagem assistido por computador e uso do software Imagelab®.
Grupos A (controle) B (AOM) C (IP6) D (AOM + IP6)
Semanas W3 W4 W5 W6 W3 W4 W5 W6 W3 W4 W5 W6 W3 W4 W5 W6
0,35 0,26 0,68 0,24 0,43 0,50 0,32 0,33 0,45 0,62 0,29 0,38 0,40 0,27 0,51 0,11
0,15 0,27 0,37 0,27 0,71 0,31 0,08 0,25 0,49 0,39 0,20 0,41 0,50 0,24 0,30 0,32
0,47 0,15 0,37 0,40 0,93 0,22 0,17 0,44 0,76 0,21 0,29 0,31 0,33 0,35 - 0,11
0,38 0,26 0,23 0,12 0,57 0,63 0,20 0,50 0,66 0,21 0,33 0,38 0,79 0,20 0,07 0,27
0,40 0,29 0,19 0,49 0,69 0,42 0,11 0,45 0,19 1,08 0,40 0,31 0,21 0,79 0,19 0,67
0,41 0,64 0,20 0,25 0,60 0,64 0,18 0,40 0,41 0,64 0,88 0,29 0,64 0,52 0,10 0,37
0,54 0,48 0,27 0,19 0,96 0,89 0,20 0,19 0,62 0,71 0,31 0,33 0,25 0,28 0,19 0,81
Média 0,39 0,34 0,33 0,28 0,70 0,52 0,18 0,37 0,51 0,55 0,39 0,34 0,45 0,40 0,23 0,38
+/-DP 0,12 0,17 0,17 0,13 0,19 0,23 0,08 0,11 0,19 0,31 0,23 0,05 0,21 0,22 0,16 0,27
Comparações entre
Grupos Grupos em Semana 3 Grupos em Semana 4 Grupos em Semana 5 Grupos em Semana 6
AxBxCxD
£0,1425 #0,0207*
£0,3637
§0,0332*
# 0,6678
AxB
- 0,0036*
-
0,0451*
-
AxC
- ns
-
0,5901
-
AxD
- ns
-
0,1367
-
BxC
- ns
-
0,0110*
-
BxD
- 0,0155*
-
0,6623
-
CxD
- ns
-
0,0449
-
Semanas
Grupo A Grupo B Grupo C Grupo D
W3xW4xW5x W6
£ 0,4527
#<0,0001*
£0,2133
#0,3518
W3xW4
-
0,0470*
-
-
W3xW5
-
< 0,001*
-
-
W3xW6
-
< 0,001*
-
-
W4xW5
-
< 0,001*
-
-
W4xW6
-
ns
-
-
W5xW6
-
0,0439*
-
-
(#) Análise de variância seguido de Teste t-LSD (Least Significance Difference); (£) Teste Kruskal Wallis seguido de Teste de Dunn; (§) Teste Kruskal Wallis
seguido de Teste de Student-Newman-Keuls. * p ≤ 0,05.
20
-0,50
0,00
0,50
1,00
1,50
2,00
w3 w4 w5 w6 w3 w4 w5 w6 w3 w4 w5 w6 w3 w4 w5 w6
A(controle) B(AOM) C(IP6) D(AOM+IP6)
% expressão SOD1
Gráfico 1. Expressão imunoistoquímica do porcentual médio de área do biomarcador superoxide dismutase 1 (SOD1) quantificada em dez
criptas de colo segundo os quatro grupos (A=controle, B=AOM, C=IP6 e D=AOM+IP6) e os períodos de observação em
semanas (W3, W4,W5 e W6). Dados expressos em média da porcentagem de área e respectivos desvios-padrão.
21
Expressão do biomarcador Fasl (Tabela 2 e Gráfico 2).
Evidencia-se diferença significante entre Grupos (AxBxCxD, p<0,0001); com
elevação significante na expressão Fasl após administração de AOM em comparação
ao controle (AxB, p<0,05); diminuição significante na expressão Fasl com
administração de IP6 em comparação ao AOM (BxC, p<0,05), diminuição
significante na expressão Fasl com administração concomitante AOM+IP6 em
comparação ao grupo AOM (BxD, p<0,05).
A comparação de semanas em cada grupo evidenciou: a) Grupo B, diferença
significante entre as semanas (W3xW4xW5xW6, p=0,0007); com diminuição na
expressão Fasl de semana 3 para semana 4 (W3xW4, p<0,001) e subseqüente
manutenção com diminuição significante em semana 5 e semana 6 (W3xW5,
p<0,001; W3xW6, p<0,0074); b) Grupo D, diferença significante na expressão de
Fasl entre as semanas (W3xW4xW5xW6, p=0,0003), com diminuição na expressão
de Fasl entre semana 3 em comparação a semana 4 e 6 (W3xW4, p=0,0011, elevação
significante na expressão Fasl na semana 4 para 5 (W4xW5, p<0,0050) e
subseqüente diminuição na semana 5 para a semana 6 (W5xW6, p<0,001).
A comparação entre grupos a cada semana evidenciou: a) em semana 3,
diferença significante entre Grupos (AxBxCxD, p<0,0002), diminuição na expressão
de Fasl do grupo IP6 em comparação ao AOM (BxC, p<0,001), diminuição na
expressão Fasl quando administra-se associado IP6+AOM em comparação ao AOM
(BxD, p<0,001); b) em semana 4, diferença significante entre Grupos (AxBxCxD,
p=0,0487), com diminuição significante na expressão Fasl ao administrar-se
IP6+AOM em comparação ao controle (AxD, p=0,0320); diminuição na expressão
Fasl no grupo com administração de AOM+IP6 em comparação ao AOM (BxD,
p=0,0202); c) em semana 6, diferença significante entre grupos (AxBxCxD,
p<0,0043), com aumento na expressão Fasl no grupo AOM em comparação ao
controle (AxB, p<0,0274); elevação na expressão Fasl no grupo AOM em
comparação ao IP6 (BxC, p<0,0143) e, diminuição significante na expressão Fasl no
grupo AOM+IP6 em comparação ao AOM (BxD, p<0,001).
22
Tabela 2. Expressão imunoistoquímica do porcentual médio de área do biomarcador Fas ligand (Fasl) quantificada em dez criptas de colo ascendente segundo os
quatro grupos (A=controle, B=AOM, C=IP6 e D=AOM=IP6) e os períodos de observação em semanas (W3, W4, W5 e W6) quantificado através de
processamento de imagem assistido por computador e uso do software Imagelab®.
Grupos A (controle) B (AOM) C (IP6) D (AOM + IP6)
Semanas W3 W4 W5 W6 W3 W4 W5 W6 W3 W4 W5 W6 W3 W4 W5 W6
1,50 0,77 0,78 1,02 1,13 0,51 1,07 1,27 0,86 0,65 0,52 1,37 0,67 0,74 0,96 0,47
0,68 0,64 1,18 0,85 3,58 0,52 1,09 2,58 0,76 0,68 0,21 1,41 1,21 0,40 1,65 0,52
1,16 0,87 0,58 1,62 2,05 0,91 0,60 1,44 0,81 0,72 0,69 1,17 1,74 0,65 - 0,36
1,20 0,75 0,61 0,98 2,90 1,04 1,05 0,91 1,60 0,32 0,69 0,28 0,99 0,61 0,91 0,18
1,26 0,44 0,61 0,41 1,53 0,73 1,26 2,25 0,46 0,69 0,90 0,58 0,95 0,33 0,48 0,22
0,17 1,64 0,99 0,50 2,48 0,95 1,50 0,91 0,98 0,29 1,69 0,13 1,00 0,50 1,43 0,41
0,74 0,88 1,27 0,64 3,25 1,48 1,32 0,92 1,46 0,77 0,82 0,55 1,24 0,58 0,80 0,67
Média 0,96 0,86 0,86 0,86 2,42 0,88 1,13 1,47 0,99 0,59 0,79 0,78 1,11 0,54 1,04 0,40
+/-DP 0,45 0,38 0,29 0,41 0,90 0,34 0,38 0,68 0,40 0,20 0,46 0,53 0,38 0,16 0,43 0,17
Comparações entre
Grupos
Grupos em Semana 3 Grupos em Semana 4 Grupos em Semana 5 Grupos em Semana 6
AxBxCxD
£0,0001* #0,0002*
§0,0487*
#0,3213
#0,0043*
AxB
< 0,05* < 0,001*
0,8582
-
0,0274*
AxC
ns ns
0,1228
-
ns
AxD
ns ns
0,0320*
-
ns
BxC
< 0,05* < 0,001*
0,0851
-
0,0143*
BxD
< 0,05* < 0,001*
0,0202*
-
< 0,001*
CxD
ns ns
0,5478
-
ns
Semanas
Grupo A Grupo B Grupo C Grupo D
W3xW4xW5x W6
£0,8948
#0,0007*
£0,2600
#0,0003*
W3xW4
-
< 0,001*
-
0,0011*
W3xW5
-
< 0,001*
-
ns
W3xW6
-
0,0074*
-
< 0,001*
W4xW5
-
ns
-
0,0050*
W4xW6
-
ns
-
ns
W5xW6
-
ns
-
<0,001*
(#) Análise de variância seguido de Teste t-LSD (Least Significance Difference); (£) Teste Kruskal Wallis seguido de Teste de Dunn; (§) Teste Kruskal Wallis seguido
de Teste de Student-Newman-Keuls. * p ≤ 0,05.
23
-0,50
0,00
0,50
1,00
1,50
2,00
2,50
3,00
3,50
4,00
w3 w4 w5 w6 w3 w4 w5 w6 w3 w4 w5 w6 w3 w4 w5 w6
A(controle) B(AOM) C(IP6) D(AOM+IP6)
% expressão Fasl
Gráfico 2. Expressão imunoistoquímica do porcentual médio de área do biomarcador Fas ligand (Fasl) quantificada em dez criptas de colo
segundo os quatro grupos (A=controle, B=AOM, C=IP6 e D=AOM=IP6) e os períodos de observação em semanas (W3,
W4, W5 e W6). Dados expressos em média da porcentagem de área e respectivos desvios-padrão.
24
Expressão do biomarcador Itpr3 (Tabela 3 e Gráfico 3).
Evidenciou-se diferença significante entre Grupos (AxBxCxD, p<0,0001);
com elevação significante Itpr3 após administração de AOM (AxB, p<0,001);
ocorrência de diminuição significante Itpr3 após administração de AOM associado
ao IP6 (BxD, p<0,001); entretanto, o nível médio de Itpr3 é significantemente mais
elevado na associação AOM+IP6 em comparação ao controle (AxD, p=0,0164).
A comparação de semanas em cada grupo evidenciou: Grupo B, diferença
significante entre as semanas (W3xW4xW5xW6, p=0,0005); com elevação na
expressão Itpr3 de semana 3 e 4 para a semana 5 (W3xW5, p<0,001; W4xW5,
p<0,001) e subseqüente diminuição significante da semana 5 para a semana 6
(W5xW6, p<0,001).
A comparação entre grupos a cada semana evidenciou: a) em semana 5,
diferença significante entre Grupos (AxBxCxD, p<0,0001), com aumento na
expressão de Itpr3 do controle em comparação ao AOM (AxB, p<0,001) e
diminuição na expressão Itpr3 quando administra-se associado IP6+AOM (BxD,
p<0,001); b) em semana 6, diferença significante entre Grupos (AxBxCxD,
p=0,0435), com diminuição significante na expressão Itpr3 ao administrar-se IP6 em
comparação ao controle (AxC, p=0,0334) entretanto, evidenciou-se que a expressão
Itpr3 é maior no grupo AOM em comparação ao IP6 (BxC, p=0,0259).
25
Tabela 3. Expressão imunoistoquímica do porcentual médio de área do biomarcador inositol 1,4,5 trisphosphate receptor type III (Itpr3) quantificada em dez criptas de
colo ascendente segundo os quatro grupos (A=controle, B=AOM, C=IP6 e D=AOM+IP6) e os períodos de observação em semanas (W3, W4, W5 e W6) e
quantificado através de processamento de imagem assistido por computador com uso do software Imagelab®.
Grupos A (controle) B (AOM) C (IP6) D (AOM + IP6)
Semanas W3 W4 W5 W6 W3 W4 W5 W6 W3 W4 W5 W6 W3 W4 W5 W6
0,72 0,87 0,85 0,70 0,33 0,96 1,63 0,93 0,80 0,47 0,61 0,16 0,70 0,75 0,49 0,38
0,56 0,55 0,57 0,68 0,89 0,67 0,88 0,57 0,74 0,65 0,32 0,49 0,43 0,38 0,58 0,39
0,48 0,40 0,90 0,35 1,22 0,46 1,20 0,41 0,45 0,83 0,27 0,42 0,44 0,41 - 0,49
0,64 0,48 0,68 0,67 0,66 0,93 1,37 0,31 0,69 0,28 0,78 0,65 0,42 0,43 0,36 0,60
0,43 0,51 0,44 0,80 0,51 0,41 1,65 1,19 0,25 0,58 0,51 0,36 0,20 0,36 0,72 0,37
0,91 0,43 0,47 0,76 0,69 0,31 1,04 0,50 0,46 0,37 0,27 0,27 0,32 0,44 0,35 0,66
0,66 0,52 0,50 0,60 0,57 0,80 1,79 0,74 0,47 0,74 0,57 0,48 0,49 0,45 0,18 0,20
Média 0,63 0,54 0,63 0,65 0,70 0,65 1,37 0,66 0,55 0,56 0,48 0,40 0,43 0,46 0,45 0,44
+/- DP 0,16 0,16 0,19 0,15 0,29 0,26 0,34 0,31 0,20 0,20 0,20 0,16 0,15 0,13 0,19 0,17
Comparações entre:
Grupos
Grupos em Semana 3 Grupos em Semana 4 Grupos em Semana 5 Grupos em Semana 6
AxBxCxD
#<0,0001* #0,1194
£0,3919
#<0,0001*
#0,0435*
AxB
< 0,001* -
-
< 0,001*
ns
AxC
ns -
-
ns
0,0334*
AxD
0,0164* -
-
ns
ns
BxC
< 0,001* -
-
< 0,001*
0,0259*
BxD
< 0,001* -
-
< 0,001*
ns
CxD
ns -
-
ns
ns
Semanas
Grupo A Grupo B Grupo C Grupo D
W3xW4xW5x W6
£0,4265
#0,0005*
#0,3896
£0,9882
W3xW4
-
ns
-
-
W3xW5
-
< 0,001*
-
-
W3xW6
-
ns
-
-
W4xW5
-
< 0,001*
-
-
W4xW6
-
ns
-
-
W5XW6
-
<0,001*
-
-
(#) Análise de variância seguido de Teste t-LSD (Least Significance Difference); (£) Teste Kruskal Wallis seguido de Teste de Dunn; (§) Teste Kruskal Wallis seguido
de Teste de Student-Newman-Keuls. * p ≤ 0,05.
26
-0,50
0,00
0,50
1,00
1,50
2,00
w3 w4 w5 w6 w3 w4 w5 w6 w3 w4 w5 w6 w3 w4 w5 w6
A (controle) B (AOM) C (IP6) D (IP6+AOM)
% expressão Itpr3
Gráfico 3. Expressão imunoistoquímica do porcentual médio de área do biomarcador inositol 1,4,5 trisphosphate receptor type III (Itpr3)
quantificada em dez criptas de colo segundo os quatro grupos (A=controle, B=AOM, C=IP6 e D=AOM+IP6) e os períodos de
observação em semanas (W3, W4, W5 e W6). Dados expressos em média da porcentagem de área e respectivos desvios-padrão.
27
Expressão do biomarcador PI3KA (Tabela 4 e Gráfico 4).
Evidenciou-se diferença significante entre Grupos (AxBxCxD, p<0,0001);
com elevação significante PI3KA após administração de AOM (AxB, p<0,05);
ocorrência de aumento significante Ip3kA com administração de AOM associado ao
IP6 em comparação ao controle (AxD, p<0,05); entretanto, o nível médio de PI3KA
é significantemente mais elevado no AOM em comparação ao IP6 (AxD, p=0,05).
A comparação de semanas em cada grupo evidenciou: a) Grupo B, diferença
significante entre as semanas (W3xW4xW5xW6, p=0,0021); com diminuição na
expressão PI3KA de semana 3 para semana 4 (W3xW4, p<0,050) e subseqüente
aumento significante da semana 4 para a semana 5 e mantendo-se até a semana 6
(W4xW5, p<0,05; W4xW6, p<0,05); b) Grupo D, diferença significante na
expressão de PI3KA entre as semanas (W3xW4xW5xW6, p=0,0063); com
diminuição na expressão de PI3KA entre semana 3 e 4 e 5 em comparação a semana
6 (W3xW6, p=0,0061; W4xW6, p=0,0051; W5xW6, p=0,0020).
A comparação entre grupos a cada semana evidenciou: a) em semana 3,
diferença significante entre Grupos (AxBxCxD, p<0,0017), com aumento na
expressão de PI3KA do controle em comparação ao IP6 (AxC, p<0,0121), aumento
na expressão PI3KA quando se administra IP6+AOM em comparação ao controle
(AxD, p<0,0203), diminuição significante na expressão de PI3KA de AOM em
comparação a AOM+IP6 (BxD, p=0,0448; b) em semana 4, diferença significante
entre Grupos (AxBxCxD, p=0,0255), com aumento significante na expressão PI3KA
ao administrar-se IP6+AOM em comparação ao controle (AxD, p=0,0101);
entretanto, evidenciou-se que a expressão PI3KA diminui significantemente de AOM
em comparação ao grupo com administração de AOM+IP6 (BxD, p=0,0087); e que,
administração AOM+IP6 mantém a expressão de PI3KA aumentada em comparação
ao grupo IP6 (CxD, p=0,0147); c) em semana 5, diferença significante entre grupos
(AxBxCxD, p<0,0025), evidenciou-se a ocorrência exclusiva de aumento na
expressão PI3KA no grupo AOM em comparação ao controle (AxB, p<0,05); d) em
semana 6, diferença significante entre Grupos (AxBxCxD, p<0,0001), com aumento
na expressão de PI3KA com administração AOM em comparação ao controle (AxB,
p<0,001); expressão aumentada de PI3KA no grupo AOM em comparação ao IP6
28
(BxC, p<0,001) e, diminuição significante na expressão PI3KA no grupo AOM+IP6
em comparação ao AOM (BxD, p<0,001).
29
Tabela 4. Expressão imunoistoquímica do porcentual médio de área do inositol 1,4,5-trisphosphate 3-kinase A (PI3KA) quantificada em dez criptas de colo
ascendente segundo os quatro grupos (A=controle, B=AOM, C=IP6 e D=AOM+IP6) e os períodos de observação em semanas (W3, W4, W5 e W6)
quantificado através de processamento de imagem assistido por computador e uso do software Imagelab®.
Grupos A (controle) B (AOM) C (IP6) D (AOM + IP6)
Semanas W3 W4 W5 W6 W3 W4 W5 W6 W3 W4 W5 W6 W3 W4 W5 W6
0,41 0,27 0,15 0,19 0,94 0,50 0,78 1,40 0,86 0,57 0,34 0,51 0,47 0,91 0,59 0,44
0,29 0,30 0,21 0,39 0,77 0,37 0,75 1,01 0,49 0,41 0,24 0,21 0,83 0,77 0,52 0,28
0,54 0,43 0,15 0,31 0,92 0,45 0,65 0,92 0,63 0,29 0,33 0,37 0,75 0,61 - 0,15
0,37 0,51 0,13 0,16 0,83 0,35 0,75 0,54 0,29 0,65 0,23 0,43 0,69 0,56 0,98 0,43
0,34 0,42 0,48 0,16 0,45 0,28 0,86 0,88 0,41 0,24 0,81 0,40 0,40 0,31 0,73 0,23
0,24 0,42 0,48 0,10 0,96 0,16 0,73 0,96 0,75 0,26 0,75 0,23 0,50 0,47 0,36 0,26
0,29 0,18 0,41 0,14 0,61 0,38 1,18 0,48 0,82 0,21 0,54 0,27 0,46 - 0,68 0,31
Média 0,35 0,36 0,29 0,21 0,78 0,36 0,81 0,88 0,61 0,38 0,46 0,35 0,59 0,61 0,64 0,30
+/-DP 0,10 0,11 0,16 0,10 0,19 0,11 0,17 0,31 0,22 0,17 0,24 0,11 0,17 0,21 0,21 0,10
Comparações entre
Grupos Grupos em Semana 3 Grupos em Semana 4 Grupos em Semana 5 Grupos em Semana 6
AxBxCxD
£<0,0001* #0,0017*
#0,0255*
£0,0025*
#<0,0001*
AxB
< 0,05* < 0,001*
ns
< 0,05*
< 0,001*
AxC
ns 0,0121*
ns
ns
ns
AxD
< 0,05* 0,0203*
0,0101*
ns
ns
BxC
< 0,05* ns
ns
ns
< 0,001*
BxD
ns 0,0448*
0,0087*
ns
< 0,001*
CxD
ns ns
0,0147*
ns
ns
Semanas
Grupo A Grupo B Grupo C Grupo D
W3xW4xW5x W6
£0,0968
£0,0021*
#0,0739
#0,0063*
W3xW4
-
< 0,05*
-
ns
W3xW5
-
ns
-
ns
W3xW6
-
ns
-
0,0061*
W4xW5
-
< 0,05*
-
ns
W4xW6
-
< 0,05*
-
0,0051*
W5xW6 -
ns
-
0,0020*
(#) Análise de variância seguido de Teste t-LSD (Least Significance Difference); (£) Teste Kruskal Wallis seguido de Teste de Dunn; (§) Teste Kruskal Wallis seguido
de Teste de Student-Newman-Keuls. * p ≤ 0,05.
30
-0,50
0,00
0,50
1,00
1,50
2,00
w3 w4 w5 w6 w3 w4 w5 w6 w3 w4 w5 w6 w3 w4 w5 w6
A(controle) B(AOM) C(IP6) D(AOM+IP6)
% expressão PI3K
A
Gráfico 4. Expressão imunoistoquímica do porcentual médio de área do biomarcador inositol 1,4,5-trisphosphate 3-kinase A (PI3KA)
quantificada em dez criptas de colo segundo os quatro grupos (A=controle, B=AOM, C=IP6 e D=AOM=IP6) e os períodos de
observação em semanas (W3, W4, W5 e W6). Dados expressos em média da porcentagem de área e respectivos desvios-
padrão.
31
Expressão do biomarcador Tgfb2 (Tabela 5 e Graf.5).
A comparação de semanas em cada grupo evidenciou: a) Grupo B, diferença
significante entre as semanas (W3xW4xW5xW6, p<0,0001); com diminuição na
expressão Tgfb2 de semana 3 para semana 4 (W3xW4, p<0,001) e subseqüente
manutenção com diminuição significante em semana 5 e semana 6 (W3xW5,
p<0,001; W3xW6, p<0,001); b) Grupo C, diferença significante entre as semanas
(W3xW4xW5xW6, p<0,0034), com diminuição na expressão Tgfb2 de semana 3
para semana 4 (W3xW4, p<0,001), subseqüente manutenção com diminuição
significante em semana 3 em comparação a semana 6 (W3xW6, p<0,0241), aumento
na expressão Tgfb2 da semana 3 em comparação a semana 6 (W3xW6, p<0,00);
Grupo D, diferença significante na expressão de Tgfb2 entre as semanas
(W3xW4xW5xW6, p=0,0062), com diminuição na expressão de Tgfb2 entre semana
3 em comparação a semana 4 e 5 (W3xW4, p=0,0222; W3xW5, p<0,001), elevação
significante na expressão Tgfb2 na semana 5 para 6 (W5xW6, p<0,0162).
A comparação entre grupos a cada semana evidenciou: a) em semana 3,
diferença significante entre Grupos (AxBxCxD, p<0,0003), aumento na expressão
Tgfb2 do grupo AOM em comparação ao controle (AxB, p<0,001), diminuição na
expressão Tgfb2 quando administra-se IP6+AOM em comparação ao AOM (BxD,
p<0,001).
32
Tabela 5. Expressão imunoistoquímica do porcentual médio de área do biomarcador transforming growth factor beta 2 (Tgfb2) quantificada em dez criptas de colo
ascendente segundo os quatro grupos (A=controle, B=AOM, C=Ip6 e D=AOM+IP6) e os períodos de observação em semanas (W3, W4, W5 e W6)
quantificado através de processamento de imagem assistido por computador e uso do software Imagelab®.
Grupos A (controle) B (AOM) C (IP6) D (AOM + IP6)
Semanas W3 W4 W5 W6 W3 W4 W5 W6 W3 W4 W5 W6 W3 W4 W5 W6
3,02 2,61 0,48 0,77 3,52 3,76 0,35 1,75 3,21 2,87 1,36 2,15 3,55 2,46 1,37 0,77
2,92 2,96 2,83 0,95 5,28 2,26 0,88 0,91 3,06 3,79 0,70 0,95 3,48 1,57 1,17 3,03
2,08 2,81 0,96 0,83 5,34 1,01 0,54 2,18 3,85 2,15 0,77 1,64 2,41 3,29 - 0,87
3,92 1,90 2,72 1,07 9,68 3,36 0,84 2,39 2,24 2,27 1,48 0,93 3,45 1,39 0,99 2,38
1,80 1,49 0,51 2,14 4,03 2,71 1,06 3,49 1,93 3,51 1,00 2,81 2,29 2,69 0,89 2,33
2,11 1,49 0,63 3,52 6,46 1,12 0,55 1,42 2,29 1,04 1,50 2,41 2,71 1,60 1,12 3,46
3,19 0,48 1,14 2,82 5,89 1,08 1,54 1,52 3,62 0,56 0,91 2,03 3,37 0,19 1,40 4,14
Média 2,72 1,96 1,32 1,73 5,74 2,19 0,82 1,95 2,89 2,31 1,10 1,85 3,04 2,17 1,16 2,43
+/- DP 0,75 0,89 1,02 1,11 2,01 1,15 0,40 0,84 0,74 1,20 0,34 0,71 0,55 0,76 0,20 1,26
Comparações entre
Grupos
Grupos em Semana 3 Grupos em Semana 4 Grupos em Semana 5 Grupos em Semana 6
AxBxCxD
£0,7642 #0,0003*
#0,8692
£0,3719
#0,5936
AxB
- < 0,001*
-
-
-
AxC
- ns
-
-
-
AxD
- ns
-
-
-
BxC
- < 0,001*
-
-
-
BxD
- < 0,001*
-
-
-
CxD
- ns
-
-
-
Semanas
Grupo A Grupo B Grupo C Grupo D
W3xW4xW5x W6
£0,0779
#< 0,0001*
#0,0034*
#0,0062*
W3xW4
-
< 0,001*
Ns
0,0222*
W3xW5
-
< 0,001*
< 0,001*
< 0,001*
W3xW6
-
< 0,001*
0,0241*
ns
W4xW5
-
ns
0,0099*
ns
W4xW6
-
ns
ns
Ns
W5xW6 -
ns
ns
0,0162*
(#) Análise de variância seguido de Teste t-LSD (Least Significance Difference); (£) Teste Kruskal Wallis seguido de Teste de Dunn; (§) Teste Kruskal Wallis seguido
de Teste de Student-Newman-Keuls. * p ≤ 0,05.
33
-0,50
0,50
1,50
2,50
3,50
4,50
5,50
6,50
7,50
8,50
w3 w4 w5 w6 w3 w4 w5 w6 w3 w4 w5 w6 w3 w4 w5 w6
A(controle) B(AOM) C(IP6) D(AOM+IP6)
% expressão Tgfb
2
Gráfico 5. Expressão imunoistoquímica do porcentual médio de área do biomarcador transforming growth factor beta 2 (Tgfb2)
quantificada em dez criptas de colo segundo os quatro grupos (A=controle, B=AOM, C=IP6 e D=AOM+IP6) e os períodos de
observação em semanas (W3, W4, W5 e W6). Dados expressos em média da porcentagem de área e respectivos desvios-
padrão.
34
5. DISCUSSÃO
Carcinogênese de colo induzida em ratos com AOM é um modelo experimental padrão e
mimetiza a seqüência adeno-carcinoma humano permitindo o estudo de variação em dietas e o
efeito de substâncias quimiopreventivas
40
; resultados indicam que ratos adultos podem ser usados
em modelos de estudos
41
, carcinogênese de colo de curta duração é utilizada
42,
43
.
A utilização de biomarcador como endpoint está ganhando ampla aceitação no diagnóstico
precoce em experimentações de curto prazo de quimioprevenção do câncer no lugar dos endpoints
intermediários tradicionais do câncer. Biomarcadores genéticos moleculares podem ser utilizados
Tabela 6. Peso inicial, final, ganho de peso no experimento segundo os quatro grupos
(A=controle, B=AOM, C=IP6 e D=AOM+IP6) e os períodos de observação em
semanas (W3, W4,W5 e W6). Dados expressos em média e desvios-padrão.
Peso
g
valor p
Grupos
Administração
Substâncias
semana
n
Inicial
a
Final
Ganho
Peso
b
Ganho
peso
Média
± DP
S3,AxBxCxD
S4,AxBxCxD
S5,AxBxCxD
S6,AxBxCxD
W3 7 1171 1916 745
106±34
W4 7 721 1935 1208
172±43
W5 7 748 2165 1417
202±37
A
Controle
W6 7 651 2186 1516
216
±
64
W3 7 1101 1898 797
113±23
W4 7 860 1983 1123
160±33
W5 7 763 2116 1353
193±32
B
AOM
W6 7 541 2021 1480
211
±
35
W3 7 1046 1970 924
132±43
W4 7 765 1900 1135
162±40
W5 7 782 2118 1336
190±30
C
IP6
W6 7 650 2082 1432
204
±
64
W3 7 1165 1972 807
115±31
W4 7 886 1900 1034
147±42
W5 7 788 2043 1255
179±25
D
IP6/AOM
W6 7 496 2014 1518
216
±
32
0,5617
0,7218
0,6080
0,9654
a
Peso inicial grupos: AxBxCxD, p=0,02274 (ANOVA). * p≤0,05.
b
Ganho de peso grupos: AxBxCxD, p=0,9131 (Análise de Variância). * p≤0,05.
35
como ferramentas na identificação de risco, screening e avaliação de cura de câncer. Biomarcadores
apresentam alto potencial para identificar mudanças envolvidas no desenvolvimento de novas
abordagens na quimioprevenção, e é área de pesquisas promissoras
44
.
O carcinógeno genotóxico azoximetano (AOM) alquila
DNA, formando adutos de DNA,
indução de mutação no gene K-ras e gene β-catenin (transição G-para-A). Mutação K-ras no códon
12 pode contribuir para indução de mudanças hiperplásicas, enquanto mutações β-catenin são vistas
por envolver a geração de lesões displásicas. Mutação K-ras ativa as vias MAPK e Itpk, e
hiporegulação ciclina D1 e COX-2, também alterando expressão iNOS na presença de estímulo
inflamatório. Mutação em β-Catenin estabiliza proteína β-catenin no citoplasma e ativa transcrição
de alvos da via β-catenin/Tcf, assim como cyclin D1 e cmyc. Alterações β-Catenin podem também
estar envolvidas nas alterações de iNOS. Nitric oxide (NO) produzido por iNOS causa danificação
no DNA e neovascularização, enquanto ativa COX-2. Hiperexpressão de COX-2 produz excesso de
prostaglandinas, provoca carcinogênese de colo e indica a necessidade de investigação da
vinculação entre via Wnt/β-catenin/Tcf e K-ras/MAPK. Estes carcinógenos causam adutos do DNA,
tendo por resultado iniciar mutações e o desenvolvimento subseqüente de tumor
45
.
Os danos do DNA devido aos carcinógenos causam “anomalias nucleares” no
compartimento proliferativo da cripta
46
. Os estudos subseqüentes confirmaram uma resposta
apoptótica aguda aos carcinógenos genotóxicos em colo
47
e a iniciação de tumorigênese
48
. Algumas
células danificadas são reparadas outras não
49
. Propôs-se que esta resposta apoptótica reativa aos
danos do DNA é o mecanismo biológico para a proteção contra tumorigênese. Aumento
significativo na apoptose encontrado no período e com poucas células apoptóticas em epitélio não
exposto ao AOM. Inicia-se identificação de apoptose após 3h como linha base em ratos machos
Sprague Dawley, e o máximo de apoptose com 9 h (índice apoptótico de 18.8%) e diminuiu
significativamente (p<0.05) entre 9 e 12h
50
.
Em importante série de experimentos, testado o efeito de 18 agentes citotóxicos diferentes e
com distribuição de apoptose em criptas de 3 a 12h após administração de cada agente. Constatou-
se que sete agentes utilizados, o pico de atividade apoptótica aconteceu 9h após administração. O
estudo sugere que a diferente suscetibilidade para carcinogênese de colo AOM-induzida não é
baseada na alquilação inicial do DNA do tecido alvo e é improvável depender da capacidade
metabólica diferencial
51
.
Quimioprevenção é uma nova ciência que utiliza agentes para inibir, atrasar ou reverter a
carcinogênese. As observações recentes sugerem um número em potencial de alvos para a
36
quimioprevenção
52
; existe revisão aonde se avaliou os agentes mais promissores contra a
carcinogênese de ratos e camundongos, os quais utilizaram o foco de cripta aberrante (FCA) como
endpoint
53
, entretanto não foi considerada a capacidade em promover mutação pelos agentes
antioxidantes e neste experimento, selecionou-se antioxidante-IP6 que não provoca mutação. O
câncer colo-retal tem uma história natural de transição do precursor à lesão maligna com duração
média 15-20 anos, fornecendo uma janela com oportunidade para intervenções e prevenção
eficazes. O progresso recente na biologia e na farmacologia molecular realça a probabilidade que a
prevenção do câncer confiará cada vez mais na quimioprevenção.
Investigou-se a absorção e distribuição de IP6 em ratos: a radioatividade foi medida na
urina, fezes, sangue, os índices do intervalo gastrointestinal e vários órgãos e tecidos em 1 e 24 h
após a administração intragástrica. Da radioatividade total, 79.0 +/- 10.0% foram absorvidos e
26.6% foram degradados pelo menos durante o período de 24 h que seguem a ingestão. A absorção
era rápida; 11.0 +/- 2.6% da radioatividade foram detectados na parede do estômago (4.4 +/- 3.7%)
e o intestino delgado superior (6.6 +/- 1.9%), 6.5 +/- 2.6% no músculo esquelético e 4.0 +/- 1.5% na
pele após 1h. Elevada radioatividade após 24h estavam no fígado (4.0 +/- 0.9%), rins (2.2 +/-
1.1%), músculo (18.1 +/- 3.4%) e na pele (10.1 +/- 3.3%). A análise do plasma e da urina
demonstrou que a maioria da radioatividade era devido ao myo-inositol e às quantidades pequenas
do monofosfato do inositol (InsP1). As células do epitélio gástrico, entretanto, apresentavam o
inositol e os vários fosfatos de inositol (InsP1-6). Os dados sugerem que esse IP6 solúvel quando
administrado na água de beber é absorvido rapidamente através do estômago e do intestino delgado,
se torna desfosforilado rapidamente dentro das células mucosas e é distribuído aos vários órgãos
como inositol e o InsP1
54
.
Concentração celular endógena de IP6 em mamíferos apresenta valores de 0.01–1 mM
55
e
níveis mais elevados é necessário para sua atividade farmacológica. Publicações mostram que
atividade anti-câncer em modelo animal usam dose superior a 15 mM em oferta continua em água
de beber
56
. Em experimento aonde ratos iniciaram uso Na-IP6 1% na água de beber com início 1
semana antes da administração do carcinógeno, obteve-se redução em 34.7% em tumor colo-retal
em comparação ao controle. Uma redução similar na incidência foi observada também quando o
suplemento Na-IP6 foi iniciado 2 semanas após a última dose do carcinógeno
57
. Resultado
demonstra não haver nenhuma diferença significativa na prevalença e na freqüência do tumor entre
os dois grupos do pH, entretanto o tamanho do tumor após ingestão 1% IP6 (pH 7.4) era o menor
(65% menor do que aqueles de pH 11.3, p<0.005). Não se constatou nenhuma diferença
37
significativa nos níveis séricos: Mg2+, Ca2+, Fe2+ e Zn2+ entre ratos do controle e aqueles tratado
com IP6 1% e, demonstrando que o IP6: (a) é consistentemente anti-neoplásico em tumor de colo
de maneira dose-dependente, (b) mantém sua atividade anti-neoplásica no pH fisiológico e (c) não
tem nenhum efeito tóxico demonstrável na administração em longo prazo
58
.
A quantificação imunoistoquímica da expressão de biomarcadores neste estudo foi
executada através de metodologia quantitativa com uso de método flexível de separação e
quantificação de análise de cor da imagem e que têm fundamentos divulgados
59
. O algoritmo
reconverte a informação de cor adquirida em vermelho-verde-azul (RGB) por meio de imagem
fotográfico-digital e calcula a contribuição de cada uma das cores da absorção de RGB. O algoritmo
avalia combinações diferentes de diaminobenzidina, hematoxilina e eosina. O resultado da
quantificação das diferentes colorações não é influenciado significantemente pela combinação de
colorações múltiplas em uma única amostra. Eventual controvérsia é esclarecida com evidência
onde a quantificação das diferentes colorações não é influenciada significativamente pela
combinação de colorações múltiplas em uma única amostra. O algoritmo de conversão da cor
resulta na quantificação independente e comparável às combinações da coloração assim como, os
procedimentos imunoistoquímicos não influenciam na quantidade de coloração na amostra devido a
descoloração isto, pelo fato de que a solubilidade e saturação serem preservados. Este algoritmo da
análise de imagem fornece um método robusto e flexível para a análise imunoistoquímica objetiva
das amostras com até três colorações diferentes usando um microscópio de laboratório e instalação
padrão da câmera do RGB
60
.
Correlação-SOD1. A comparação de semanas em cada grupo evidenciou: a) Grupo B,
diminuição na expressão SOD1 de semana 3 para a semana 5, compatível com exaustão de SOD1
pelos H
2
O
2
, produção esta promovida pelo AOM; e, a seguir, aumento significante de semana 5
para semana 6, compatível com a recuperação na produção SOD1.
A comparação entre grupos a cada semana evidenciou: a) em semana 3, aumento na
expressão de SOD1 com administração AOM em comparação ao controle, caracterizando ser o
AOM efetivo como gerador de ROS e é explicado pela: a) ação exogenamente gerada de ERO e
ERN por toxina
61
; b) estresse oxidativo aumentado em células de câncer força estas células a
produzir enzimas antioxidantes tais como o SOD para o eliminar ERO
62
. Diminuição na expressão
SOD1 quando se administra concomitantemente IP6+AOM em comparação ao AOM confirma a
capacidade antioxidante do IP6
63
; b) em semana 5, diminuição significante na expressão SOD1 ao
administrar-se AOM em comparação ao controle, compatível com a exaustão de SOD1 induzida
38
pelo AOM ; entretanto, evidenciou-se que a expressão SOD1 está aumentada significantemente no
grupo IP6 em comparação ao grupo AOM, resultado este que necessita ser investigado.
Correlação-Fasl. Evidenciou-se elevação significante na expressão Fasl após administração
de AOM em comparação ao controle e, tal evidência após administração de AOM confirma que: a)
aumento em níveis de ERO sugere importância da via oxidativa na apoptose mediada-Fas
64
; b) e
que antecipa para a fase inicial (indução) da carcinogênese a hiperexpressão de Fasl, resultado
original deste estudo. Diminuição significante na expressão Fasl com administração exclusiva de
IP6 em comparação ao AOM carateriza resultado original; e confirma-se neste experimento com
IP6 de que a utilização de antioxidante e inibidores de apoptose como agente terapêutico pode ser
vantajoso
65
. Neste modelo de carcinogênese de curta duração não foi possível comprovar que Fasl é
hipoexpresso em tumor de colo
66
porque a curta duração do experimento não permitiu a instalação
de tumor.
Correlação-Itpr3. Evidenciou-se aumento significante de Itpr3 após administração de
AOM e é concordante com: (a) resposta apoptótica aguda ao AOM no colo
48
e inicialização da
tumorigênese
67
; (b) Itpr3 está seletivamente aumentado na apoptose
68
, têm participação ativa da
apoptose em uma diversidade de tecidos
48
, estresse oxidativo resulta em ativação aberrante do canal
Itpr
69
e o aumento seletivo durante apoptose de linfócitos
68
.
A comparação de semanas em cada grupo evidenciou: Grupo B, elevação na expressão Ipr3
de semana 3 para a semana 5 e posterior diminuição significante da semana 5 para a semana 6. O
aumento inicial é evidência original e explica-se a diminuição na expressão Itpr3: a) quando
apoptose é induzida pela via extrínseca ou intrínseca, indução será mais eficiente através do
silenciamento do Itpr3 e a transmissão de sinais de cálcio para mitocôndria
70
; b) ativação crônica da
hidrólise de fosfoinosídeos pode reduzir Itpr3
71
; c) evidência de que redução Itpr3 inibe apoptose
72
.
A ocorrência de diminuição significante Itpr3 após administração de AOM+IP6 entretanto, o nível
médio de Itpr3 é significantemente mais elevado na associação AOM+IP6 em comparação ao
controle.
A comparação entre grupos a cada semana evidenciou: a) em semana 5, com aumento na
expressão de Itpr3 do controle em comparação ao AOM e diminuição na expressão Itpr3 quando
administra-se associado IP6+AOM, demonstrando ser o IP6 efetivo em neutralizar o AOM ; b) em
semana 6, diminuição significante na expressão Itpr3 ao administrar-se IP6 em comparação ao
controle entretanto, evidenciou-se que a expressão Itpr3 é maior no grupo AOM em comparação ao
IP6. Os resultados relacionados vinculam-se: a) o Itpr3 exige uma concentração mais elevada de
39
IP3 (resultante da hidrólise de IP6) para alcançar a reação máxima de 3.2 microM contra 0.5
microM para o Itpr1, para efeito de comparação. Aumento na atividade no canal de membrana na
presença de alta concentração de IP3 pode ser importante durante períodos de estimulação
prolongada, considerando que a modulação alostérica pelo ATP pode ajudar na modulação
intracelular da sinalização de Ca2+
73
; b) expressão seletiva de um tipo de receptor particular
influenciará a sensibilidade de Ca2+ de acordo com a concentração celular de IP3
74
; c) o feito do
mensageiro intracelular IP3
é mediado pelo Itpr e estes canais governam a troca de cálcio, sob o
controle de co-agonistas IP
3
e Ca
2+ 75
.
Correlação-PI3KA. Evidenciou-se elevação significante PI3KA após administração de
AOM em concordância com resultado que demonstra que a hiperativação da via PI3K ou da via
Raf/MAPK é suficiente para tumorigênese
76
; ocorrência de aumento significante PI3KA com
administração de AOM+IP6 em comparação ao controle, caracteriza resultado original; entretanto,
o nível médio de PI3KA é significantemente mais elevado no AOM em comparação ao IP6.
A comparação de semanas em cada grupo evidenciou: a) Grupo B, diminuição na expressão
PI3KA de semana 3 para semana 4 e posterior aumento significante da semana 4 para a semana 6,
evidenciando resultado original; b) Grupo D, diminuição na expressão de PI3KA entre semana 3 e 4
e 5 em comparação a semana 6 resultado que demonstra redução na expressão PI3KA para nível
similar ao controle em semana 6 e concordante de que o IP6 promove alteração na transdução de
sinais com bloqueio de PI3K
77
.
A comparação entre grupos a cada semana evidenciou: a) em semana 3, aumento na
expressão de PI3KA do controle em comparação ao IP6, aumento na expressão PI3KA quando se
administra associado IP6+AOM em comparação ao controle, diminuição significante na expressão
de PI3KA de AOM em comparação a AOM+IP6, evidenciando ser o IP6 ativo na neutralização da
hiper-expressão de PI3KA ao administrar-se AOM – resultado original deste experimento; b) em
semana 4, aumento significante na expressão PI3KA ao administrar-se IP6+AOM em comparação
ao controle; entretanto, evidenciou-se que a expressão PI3KA diminui significantemente de AOM
em comparação ao grupo com administração de AOM+IP6, evidenciando ser IP6 efetivo em
neutralizar os efeitos AOM; e que, administração AOM+IP6 mantêm a expressão de PI3KA
aumentada em comparação ao grupo IP6; c) em semana 5, aumento na expressão PI3KA no grupo
AOM em comparação ao controle, demonstrando ser IP6 efetivo em aumentar expressão PI3KA; d)
em semana 6, aumento na expressão de PI3KA com administração AOM em comparação ao
controle; expressão aumentada de PI3KA no grupo AOM em comparação ao IP6; diminuição
40
significante na expressão PI3KA no grupo AOM+IP6 em comparação ao AOM, evidenciando ser o
IP6 efetivo em neutralizar o AOM. Confirma-se resultado de que biomarcador PI3K pode ser útil
em avaliar a efetividade do IP6 e resultados sugerem que ação anti-carcinogênica do IP6 ocorre
através inibição PI3K
77
.
Correlação-Tgfb2. A hiperexpressão de Tgfb2 após administração de AOM na
comparação entre grupos a cada semana evidenciou: a) em semana 3, aumento na expressão Tgfb2
do grupo AOM em comparação ao controle, caracterizando a capacidade do AOM em promover
aumento na expressão Tgfb2. A diminuição na expressão Tgfb2 quando se administra associado
IP6+AOM em comparação ao AOM, confirma a eficácia na associação de IP6 para neutralizar os
efeitos nocivos do AOM (publicados na dose de 20mg Kg
-1
)
78
e agora administrou-se AOM na dose
de 5 mg Kg
-1
e ainda assim, confirma-se resultado que dá suporte para a hipótese de que a via TGF-
beta poderia representar um importante alvo terapêutico
79
.
O aumento na expressão Tgfb2 após administração de AOM confirma a efetividade da
droga; a diminuição na expressão Tgfb2 de semana 3 para 6, caracteriza a interrupção na
administração; b) Grupo C, diminuição na expressão Tgfb2 de semana 3 para semana 4 e 6;
aumento na expressão Tgfb2 da semana 3 para semana 6, são resultados que necessitam de
comprovação; em Grupo D, diminuição na expressão de Tgfb2 entre semana 3 para a semana 5,
evidencia resultado original. A elevação significante com administração de AOM na dose de 5mg
Kg
-1
na expressão Tgfb2 na semana 5 para 6 é concordante com a interpretação de hiperexpressão
devido à ativação ou desregulação na via sinalização TGFbeta
80
.
Confirmou-se neste experimento que o entendimento de eventos identificados com uso de
marcadores moleculares como endpoint na carcinogênese inicial de colo é capaz de avaliar a
efetividade de substância antioxidante-IP6. Assim como, confirmou-se que, o direcionamento de
eventos críticos associados à carcinogênese traz o entendimento de que a intervenção com dietas
evita o desenvolvimento do câncer através da indução de apoptose, particularmente com agentes
bioativos como alvo terapêutico emergente
81
.
41
6. CONCLUSÃO
O inositol hexafosfato promove modulação de biomarcadores com diminuição na expressão
dos biomarcadores de sinalização celular Fasl e Itpr3 e diminuição pontual em Tgfb2, PI3KA e
SOD1 na carcinogênese de colo induzida pelo azoximetano em ratos.
42
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49
9. APÊNDICE
Procedimento de imunoistoquímica com uso biomarcadores (SOD1, Itpr3, PI3KA, Fasl e Tgfb2)
pelo sistema avidin-biotin complex (ABC):
A)Descrição:
Fixação dos espécimes em formol tamponado a 10%
Cortes: em parafina, 2 micrômetros de espessura
Afixação em lâminas silanizadas SuperFrost Dako®
B) Sequência da coloração imunoistoquímica:
1) Desparafinização e hidratação:
Xilol a 60ºC por 15 minutos;
Xilol a temperatura ambiente por 15 minutos;
Etanol 100%(3x) por 30 segundos cada;
Etanol 95% por 30 segundos;
Etanol 80% por 30 segundos;
Etanol 70% por 30 segundos;
2) Lavagem com água corrente e destilada;
3) Recuperação antigênica com incubação das lâminas em solução de recuperação antigênica
(Dako®, produto S1699, lote 074270) em panela a vapor a 95º na diluição 1:10, durante 20
minutos;
4) Bloqueio da peroxidase endógena com solução de peróxido de hidrogênio (H
2
O
2
) a 3%, em dois
banhos de 10 minutos cada, seguido de lavagem em água corrente e destilada e tampão BPS
(Solução Salina tamponada com fosfatos 0,01M/pH 7,4);
5) Diluição com anticorpo primário a 1:100 (individual para cada corte da amostra, para cada um
dos cinco anticorpos), com diluente de anticorpo Dako®, código S1699;
6) Aplicação de anticorpo primário nas lâminas por 30 segundos;
7) Lavagem com tampão PBS;
8) Aplicação de anticorpo secundário anti-rato (solução 1 do kit LSAB®) e incubação por 10
minutos;
9) Lavagem em tampão PBS;
50
10) Aplicação de Estreptavidina-peroxidase (solução 2 do kit LSAB®) e incubação por 10 minutos;
11) Lavagem em tampão PBS;
12) Aplicação da solução de substrato-cromógeno DAB (diamino-benzidina), Dako®, diluição 1:10,
por cinco minutos;
13) Lavagem em água destilada;
14) Contra-coloração com Hematoxilina de Harris (Qeel®) por um minuto;
15) Lavagem das lâminas em passagem em etanol por 30 segundos em cada solução com
concentrações progressivas, conforme passo (a) da seqüência de coloração;
16) Montagem de lamínula com resina Entellan (Merck®) sobre a lâmina.
17) Interpretação da coloração imunoistoquímica:
(a) A imunoexpressão de cada um dos biomarcadores foi considerada positiva
quando as células epiteliais adquiriram coloração marrom citoplasmática e/ou de
membrana e/ou em núcleo.
51
1 2 3 4 5 6 7 8 9101112131415161718192021222324
01-W1 10/09/04 53 45 35 35 31 35 45 35 30 30 45 25 40 40 40 40 29 50 40 40 40 40 41 33
2 11/09/04 53 45 35 35 31 35 45 35 30 30 45 25 40 40 40 40 29 50 40 40 40 40 41 33
3 12/09/04 53 45 35 35 31 35 45 35 30 30 45 25 40 40 40 40 29 50 40 40 40 40 41 33
4 13/09/04 53 45 35 35 31 35 45 35 30 30 45 25 40 40 40 40 29 50 40 40 40 40 50 33
5 14/09/04 53 45 35 35 31 35 45 35 30 30 45 25 40 30 53 53 29 50 53 40 53 40 33 41
6 15/09/04 53 45 35 35 31 35 45 35 30 30 45 25 40 30 53 53 29 50 53 40 53 40 33 41
7 16/09/04 33 45 40 45 37 37 30 40 35 30 45 45 40 30 53 53 29 50 53 40 53 40 33 41
08-W2 17/09/04 33 45 40 45 37 37 30 40 35 30 45 45 40 30 53 53 29 50 53 40 53 40 33 41
9 18/09/04 55 45 45 50 45 35 30 40 40 40 37 25 60 40 45 50 35 25 50 55 50 60 45 35
10 19/09/04 55 45 50 45 35 37 30 40 40 40 37 25 60 40 45 50 35 25 50 55 50 60 45 35
11 20/09/04 50 60 60 60 40 40 40 40 40 50 50 75 60 40 55 60 35 50 50 60 60 60 56 50
12 21/09/04 50 60 60 60 40 40 40 40 40 50 50 75 60 40 55 60 35 50 50 60 60 60 56 50
13 22/09/04 20 40 40 60 40 40 40 40 45 50 25 18 60 40 55 60 25 25 20 60 40 60 25 25
14 23/09/04 20 40 40 60 40 40 40 40 45 50 50 50 60 40 55 60 25 25 20 60 40 60 25 25
15-W3 24/09/04 40 60 60 40 40 50 33 50 50 50 50 50 25 18 25 50 30 25 35 25
16 25/09/04 40 60 60 40 40 50 33 50 13 25 50 50 25 18 25 50 30 25 35 25
17 26/09/04 50 33 30 40 40 50 30 50 13 25 35 45 25 25 35 50 30 30 35 25
18 27/09/04 50 33 30 40 40 50 30 50 13 25 35 45 25 25 35 50 30 30 35 25
19 28/09/04 30 33 30 40 40 50 30 40 13 25 35 45 25 25 35 50 30 30 35 25
20 29/09/04 30 33 30 40 40 50 30 40 13 25 35 45 25 25 35 50 30 30 35 25
21 30/09/04 30 26 30 40 40 50 40 40 17 17 35 45 25 25 25 50 30 50 35 25
22-W4 01/10/04 26 30 40 40 35 35 17 17 50 18 25 25 50 40 25 17
23 02/10/04 25 30 40 40 35 35 17 17 50 18 25 25 50 40 25 17
24 03/10/04 25 30 40 40 35 35 25 25 50 18 25 25 50 40 25 17
25 04/10/04 25 30 40 40 35 35 25 25 50 18 25 25 50 40 25 18
26 05/10/04 25 30 40 40 35 35 25 25 50 18 25 25 50 40 25 18
27 06/10/04 25 30 25 25 35 35 25 25 50 18 25 25 50 40 25 25
28 07/10/04 25 30 25 25 20 30 25 25 50 18 25 25 50 40 35 25
29-W5 08/10/04 25 25 20 30 20 35 35 25
30 09/10/04 20 31 13 27 13 31 33 50
31 10/10/04 20 31 13 27 13 31 33 50
32 11/10/04 20 31 13 27 13 31 33 50
33 12/10/04 37 31 18 31 33 31 31 31
34 13/10/04 37 31 18 31 33 31 31 31
35 14/10/04 37 31 18 31 33 31 31 31
36-W6 15/10/04 37 31 18 31 33 31 31 31
45,29 46,43 41,79 45,36 35,71 36,86 39,29 37,86 35,71 37,14 43,50 36,29 48,57 37,14 48,71 50,86 30,14 42,86 43,71 47,86 48,00 48,57 39,79 36,86
12,92 6,02 8,90 10,82 4,78 2,21 6,46 2,57 5,84 9,14 6,63 19,00 10,27 4,69 6,58 7,97 3,48 11,72 11,38 9,55 7,75 10,27 10,04 7,65
41,85
3,71
Caixa caixa
(controle) (AOM) (IP6)
Média
Média geral :
DP
DP
Quadro 1. Administração IP6 e água
Dia Data
Grupo A Grupo B Grupo C Grupo D
(IP6 + AOM)
Caixa Caixa
52
Dia 01 10/09/04 25 47 N S N S S
Dia 02 11/09/04 24 47 N S N S S
Dia 03 12/09/04 20 46 N S N S S
Dia 04 13/09/04 17 62 N S S S S
Dia 05 14/09/04 17 68 N S N S S
Dia 06 15/09/04 19 51 N S N S S
Dia 07 16/09/04 20 42 N S S S S
Dia 08 17/09/04 20 42 N S N S S
Dia 09 18/09/04 20 51 N S N S S
Dia 10 19/09/04 24 50 N S N S S
Dia 11 20/09/04 25 51 N S S S S
Dia 12 21/09/04 24 49 N S N S S
Dia 13 22/09/04 25 47 N S N S S
Dia 14 23/09/04 27 56 N S S S S
Dia 15 24/09/04 26 55 N S N S S
Dia 16 25/09/04 26 55 N S N S S
Dia 17 26/09/04 27 44 N S N S S
Dia 18 27/09/04 27 43 N S S S S
Dia 19 28/09/04 27 52 N S N S S
Dia 20 29/09/04 20 40 N S N S S
Dia 21 30/09/04 20 64 N S S S S
Dia 22 01/10/04 20 47 N S N S S
Dia 23 02/10/04 20 79 N S N S S
Dia 24 03/10/04 19 85 N S N S S
Dia 25 04/10/04 17 81 N S S S S
Dia 26 05/10/04 20 65 N S N S S
Dia 27 06/10/04 22 46 N S N S S
Dia 28 07/10/04 22 47 N S S S S
Dia 29 08/10/04 23 42 N S N S S
Dia 30 09/10/04 25 64 N S N S S
Dia 31 10/10/04 26 60 N S N S S
Dia 32 11/10/04 21 73 N S S S S
Dia 33 12/10/04 23 64 N S N S S
Dia 34 13/10/04 25 73 N S N S S
Dia 35 14/10/04 27 87 N S S S S
Dia 36 15/10/04 26 70 N S N S S
22
,
67 56
,
81
3,22 13,22
Limpeza
gaiolas
Alimentação Água
DP
Quadro 2. Controle de alimentação, tem
p
eratura, umidade, luminosidade e ruído
Data
MÉDIA
Temp.
Celsius
Umidade
do ar
Ruído
Luminosidade
(claro/escuro)
53
Q
ua
d
ro
3
.
Ad
m
i
n
i
straç
ã
o
d
e azox
i
metano
Peso Horário Peso Horário
Semana adm Semana adm
W3 AOM e W4 AOM e
salina mg ml salina mg ml
A
1
1
248
6.15
2,4
A
1
2
315
6.15
3,1
A
1
3
275
6.15
2,7
A
1
4
272
6.15
2,7
A
1
5
264
6.15
2,6
A
2
6
314
6.16
3,1
A
2
7
228
6.16
2,2
A
2
8
216
6.16
2,1
241
6,28
2.4
A
2
9
310
6.16
3,1
323
6,29
3.2
A
2
10
267
6.16
2,6
282
6,3
2.8
A
3
11
224
6.28
2,2
232
6,31
2.3
A
3
12
269
6.28
2,6
285
6,31
2.8
A
3
13
229
6.28
2,2
250
6,32
2.5
A
3
14
306
6.28
3
322
6,33
3.2
A
3
15
299
6.28
2,9
306
6,33
3.0
A
4
16
284
6.18
2,8
288
6,34
2.8
A
4
17
254
6.18
2,5
266
6,34
2.6
A
4
18
276
6.18
2,7
284
6,35
2.8
A
4
19
313
6.18
3,1
320
6.36
3.2
A
4
20
277
6.18
2,7
287
6.37
2.8
A
5
21
257
6.22
2,5
281
6.37
2.8
A
5
22
249
6.22
2,4
275
6.39
2.7
A
5
23
267
6.22
2,6
276
6.42
2.7
A
5
24
267
6.22
2,6
267
6.40
2.6
A
6
25
283
6.24
2,8
298
6.44
2.9
A
6
26
201
6.24
2
321
6.43
3.2
A
6
27
288
6.24
2,8
303
6.33
3.0
A
6
28
251
6.24
2,5
261
6.44
2.6
B
7
1
290
6.41
5,8
2,9
B
7
2
252
6.41
5
2,5
B
7
3
295
6.41
5,8
2,9
B
7
4
244
6.41
4,8
2,4
B
7
5
302
6.41
6
3
B
8
6
239
6.45
4,6
2,3
B
8
7
276
6.45
5,4
2,7
B
8
8
233
6.45
4,6
2,3
244
6.31
4.8
2.4
B
8
9
291
6.45
5,8
2,9
305
6.31
6.0
3.0
B
8
10
296
6.45
5,8
2,9
318
6.33
6.2
3.1
B
9
11
252
6.47
5
2,5
267
6.35
5.4
2.6
B
9
12
225
6.47
4,4
2,2
229
6.35
4.4
2.2
B
9
13
344
6.47
6,8
3,4
353
6.36
7.0
3.5
B
9
14
246
6.47
4,4
2,4
267
6.37
5.2
2.6
B
9
15
226
6.47
4,4
2,2
266
6.37
5.2
2.6
B
10
16
279
6.49
5,4
2,7
282
6.39
5.6
2.8
B
10
17
288
6.49
5,6
2,8
301
6.40
6.0
3.0
B
10
18
262
6.49
5,2
2,6
270
6.40
5.4
2.7
B
10
19
295
6.49
5,8
2,9
306
6.41
6.0
3.0
B
10
20
281
6.49
5,6
2,8
292
6.41
5.8
2.9
B
11
21
228
6.51
4,1
2,2
304
6.43
6.0
3.0
B
11
22
241
6.51
4,6
2,4
257
6.43
5.0
2.5
B
11
23
224
6.51
4,4
2,2
238
6.44
4.6
2.3
B
11
24
230
6.51
4,6
2,3
244
6.45
4.8
2.4
B
12
25
315
6.53
6,2
3,1
329
6.46
6.4
3.2
B
12
26
216
6.53
4,2
2,1
249
6.47
4.8
2.4
B
12
27
220
6.53
4,4
2,2
262
6.46
5.2
2.6
B
12
28
191
6.53
3,8
1,9
220
6.47
4.4
2.2
Dose AOM
Semana: W3 Semana: W4
Grupo
Caixa
Identific.
Dose AOM
54
Q
ua
d
ro
4
.
Ad
m
i
n
i
s
t
raç
ã
o
d
e azox
i
me
t
ano
Peso Horário Peso Horário
Semana adm Semana adm
W3 AOM e W4 AOM e
salina m
g
ml salina m
g
ml
C
13
1
339
6.27
3,3
C
13
2
281
6.27
2,8
C
13
3
286
6.27
2,8
C
13
4
259
6.27
2,5
C
13
5
269
6.27
2,6
C
14
6
213
6.31
2,1
C
14
7
323
6.31
3,2
C
14
8
266
6.31
2,6
277
6.53
2.7
C
14
9
227
6.31
2,2
250
6.54
2.5
C
14
10
291
6.31
2,9
325
6.55
3.2
C
15
11
290
6.33
2,9
299
6.56
2.9
C
15
12
277
6.33
2,7
280
6.56
2.8
C
15
13
229
6.33
2,2
238
6.57
2.3
C
15
14
266
6.33
2,6
231
6.58
2.3
C
15
15
259
6.33
2,5
278
6.58
2.7
C
16
16
229
6.34
2,2
236
7.00
2.3
C
16
17
313
6.34
3,1
314
7.00
3.1
C
16
18
293
6.34
2,9
295
7.01
2.9
C
16
19
332
6.34
3,3
334
7.02
3.3
C
16
20
257
6.34
2,5
273
6.59
2.7
C
17
21
261
6.37
2,6
279
7.02
2.7
C
17
22
258
6.37
2,5
287
7.03
2.8
C
17
23
225
6.37
2,2
241
7.03
2.4
C
17
24
284
6.37
2,8
293
7.04
2.9
C
18
25
289
6.38
2,8
303
7.04
3.0
C
18
26
246
6.38
2,4
270
7.05
2.7
C
18
27
223
6.38
2,2
250
7.05
2.5
C
18
28
211
6.38
2,1
240
7.05
2.4
D
19
1
288
6.55
5,6
2,8
D
19
2
256
6.55
5
2,5
D
19
3
267
6.55
5,2
2,6
D
19
4
272
6.55
5,4
2,7
D
19
5
281
6.55
5,6
2,8
D
20
6
288
6.59
5,6
2,8
D
20
7
320
6.59
6,4
3,2
D
20
8
250
6.59
5
2,5
277
6.49
5.4
2.7
D
20
9
226
6.59
4,4
2,2
250
6.50
5.0
2.5
D
20
10
266
6.59
5,2
2,6
325
6.51
6.4
3.2
D
21
11
308
7.01
6
3
299
6.51
5.8
2.9
D
21
12
287
7.01
5,6
2,8
280
6.52
5.8
2.8
D
21
13
306
7.01
6
3
238
6.52
4.6
2.3
D
21
14
285
7.01
5,6
2,8
231
6.54
4.6
2.3
D
21
15
288
7.01
5,6
2,8
278
6.54
5.4
2.7
D
22
16
248
7.04
4,8
2,4
236
6.57
4.6
2.3
D
22
17
269
7.04
5,2
2,6
314
6.57
6.2
3.1
D
22
18
255
7.04
5
2,5
295
6.56
5.8
2.9
D
22
19
252
7.04
5
2,5
334
6.58
6.6
3.3
D
22
20
285
7.04
5,6
2,8
273
6.57
5.4
2.7
D
23
21
309
7.06
6
3
279
6.59
5.4
2.7
D
23
22
300
7.06
6
3
287
7.00
5.6
2.8
D
23
23
288
7.06
5,6
2,8
241
7.00
4.8
2.4
D 23 24 247 7.06 4,8 2,4 293 7.00 5.8 2.9
D 24 25 271 7.08 5,4 2,7 303 7.02 6.0 3.0
D 24 26 273 7.08 5,4 2,7 270 7.02 5.4 2.7
D 24 27 191 7.08 3,8 1,9 250 7.03 5.0 2.5
D 24 28 201 7.08 4 2 240 7.03 4.8 2.4
Dose AOM
Semana: W3 Semana: W4
Grupo
Caixa
Identifi
c
Dose AOM
55
Identif
Amostra
Grupo
abcdefghi j
Média
Grupo
abcdefghi j
Média
soga01
1 A 0,40 0,60 0,20 0,20 0,10 0,50 0,20 0,40 0,40 0,50 0,35 B 0,30 0,30 0,30 0,40 0,70 0,30 0,20 0,70 0,60 0,50 0,43
soga02
2 A 0,00 0,60 0,10 0,20 0,10 0,00 0,20 0,10 0,10 0,10 0,15 B 1,00 1,20 0,30 0,70 0,70 0,10 0,30 0,30 1,30 1,20 0,71
soga03
3 A 0,40 0,40 0,50 0,60 0,20 0,40 0,20 1,10 0,20 0,70 0,47 B 0,80 0,90 1,10 1,10 1,30 1,00 1,40 0,90 0,50 0,30 0,93
soga04
4 A 0,50 0,50 0,40 0,70 0,30 0,20 0,30 0,20 0,40 0,30 0,38 B 0,40 0,80 0,30 0,40 0,30 1,40 1,40 0,20 0,20 0,30 0,57
soga05
5 A 0,10 0,30 0,10 0,10 0,20 0,10 0,10 0,60 1,40 1,00 0,40 B 0,60 0,90 1,20 0,60 0,40 0,40 0,60 0,60 0,80 0,80 0,69
soga06
6 A 0,20 0,10 0,20 0,80 0,70 0,40 0,40 0,30 0,20 0,80 0,41 B 0,40 0,60 0,80 0,40 0,30 0,60 0,20 0,70 1,10 0,90 0,60
soga07 7 A 0,60 0,70 0,60 0,70 0,80 0,40 0,20 0,50 0,50 0,40 0,54 B 1,00 1,60 0,90 0,90 1,20 0,80 0,90 0,20 0,80 1,30 0,96
W3 Med 0,39 W3 Méd 0,70
DP 0,12 DP 0,19
Max 0,51 Máx 0,89
Mín 0,26 Mín 0,51
soga08
8 A 0,10 0,10 0,10 0,10 0,20 0,10 0,50 0,30 0,70 0,40 0,26 B 0,50 0,30 0,50 1,00 0,40 0,80 0,70 0,20 0,30 0,30 0,50
soga09
9 A 0,20 0,10 0,20 0,20 0,10 0,20 0,10 0,40 0,70 0,50 0,27 B 0,20 0,10 0,20 0,20 0,50 0,40 0,40 0,50 0,40 0,20 0,31
soga10
10 A 0,00 0,10 0,10 0,10 0,20 0,10 0,10 0,40 0,30 0,10 0,15 B 0,20 0,30 0,10 0,40 0,10 0,20 0,10 0,30 0,20 0,30 0,22
soga11
11 A 0,20 0,10 0,10 0,30 0,50 0,10 0,20 0,20 0,70 0,20 0,26 B 0,40 0,60 0,50 0,70 0,00 0,10 0,00 1,60 1,10 1,30 0,63
soga12
12 A 0,10 0,10 0,10 0,20 0,20 0,10 0,20 0,80 0,30 0,80 0,29 B 0,20 0,40 0,30 0,30 0,10 0,40 0,40 0,50 0,50 1,10 0,42
soga13
13 A 0,40 0,30 0,90 0,30 0,40 0,20 0,80 0,90 1,30 0,90 0,64 B 0,50 0,50 0,60 0,70 1,10 0,20 0,30 1,20 1,00 0,30 0,64
soga14
14 A 0,20 0,50 1,00 0,40 0,30 0,40 0,80 0,70 0,20 0,30 0,48 B 0,90 0,60 0,80 0,40 0,90 1,30 0,70 1,10 1,00 1,20 0,89
W4 Med 0,34 W4 Méd 0,52
DP
0,17
Dp
0,23
Max
0,50
Máx
0,74
Mín
0,17
Mín
0,29
soga15
15 A 0,30 0,30 0,60 0,60 0,50 0,40 0,40 1,50 0,90 1,30 0,68 B 0,50 0,00 0,40 0,20 0,20 0,30 0,30 0,40 0,40 0,50 0,32
soga16
16 A 0,10 0,10 0,10 0,70 0,70 0,70 0,10 0,50 0,50 0,20 0,37 B 0,00 0,00 0,10 0,00 0,00 0,00 0,20 0,20 0,10 0,20 0,08
soga17
17 A 0,50 0,70 0,90 0,10 0,30 0,20 0,00 0,40 0,40 0,20 0,37 B 0,10 0,30 0,00 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,40 0,40 0,17
soga18
18 A 0,10 0,20 0,10 0,10 0,10 0,00 0,00 0,30 0,40 1,00 0,23 B 0,30 0,30 0,40 0,10 0,40 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,20
soga19
19 A 0,00 0,10 0,10 0,10 0,10 0,00 0,00 0,60 0,30 0,60 0,19 B 0,00 0,00 0,00 0,30 0,10 0,00 0,00 0,20 0,20 0,30 0,11
soga20
20 A 0,20 0,10 0,20 0,20 0,20 0,10 0,10 0,30 0,20 0,40 0,20 B 0,10 0,20 0,20 0,00 0,10 0,10 0,00 0,60 0,20 0,30 0,18
soga21
21 A 0,40 0,30 0,20 0,10 0,60 0,20 0,20 0,10 0,40 0,20 0,27 B 0,20 0,10 0,20 0,00 0,00 0,20 0,00 0,30 0,60 0,40 0,20
W5 Med 0,33 W5 Méd 0,18
DP
0,17
DP
0,08
Max
0,50
Máx
0,26
Mín
0,16
Mín
0,10
soga22
22 A 0,20 0,10 0,10 0,10 0,20 0,30 0,10 0,10 0,30 0,90 0,24 B 0,10 0,10 0,40 0,10 0,20 0,20 0,40 0,70 0,70 0,40 0,33
soga23
23 A 0,10 0,00 0,50 0,10 0,20 0,10 0,10 0,40 0,30 0,90 0,27 B 0,10 0,10 0,00 0,00 0,10 0,20 0,10 0,70 0,60 0,60 0,25
soga24
24 A 0,30 0,30 0,30 0,30 0,20 0,20 0,90 0,30 0,60 0,60 0,40 B 0,30 0,30 0,30 0,30 0,10 0,30 0,10 1,00 0,80 0,90 0,44
soga25
25 A 0,10 0,00 0,20 0,10 0,10 0,20 0,10 0,10 0,10 0,20 0,12 B 0,50 1,60 0,30 0,20 0,40 0,30 0,40 0,50 0,40 0,40 0,50
soga26 26 A 0,70 0,80 0,80 0,10 0,10 0,20 0,50 0,50 0,40 0,80 0,49 B 0,20 0,60 0,30 0,40 0,50 0,10 0,40 0,70 1,20 0,10 0,45
soga27
27 A 0,10 0,10 0,10 0,20 0,10 0,10 0,00 0,20 0,40 1,20 0,25 B 0,40 0,50 0,30 0,40 0,50 0,10 0,40 0,60 0,50 0,30 0,40
soga28
28 A 0,00 0,00 0,00 0,00 0,10 0,00 0,00 0,80 0,40 0,60 0,19 B 0,10 0,10 0,10 0,00 0,10 0,30 0,20 0,30 0,30 0,40 0,19
W6 Méd 0,28 W6 Méd 0,37
DP
0,13
DP
0,11
Máx
0,41
Máx
0,48
Mín
0,15
Mín
0,25
sogc01
1 C 0,30 0,30 0,30 0,20 0,30 1,10 0,40 0,40 0,60 0,60 0,45 D 0,40 0,30 0,60 0,40 0,30 0,40 0,60 0,40 0,20 0,40 0,40
sogc02
2 C 0,20 0,20 0,30 0,70 0,90 0,10 0,50 0,80 0,80 0,40 0,49 D 0,40 0,10 0,10 0,30 0,30 0,30 0,20 1,30 1,30 0,70 0,50
sogc03
3 C 1,00 0,40 1,00 0,60 0,60 0,30 0,90 1,30 0,60 0,90 0,76 D 0,70 0,10 0,50 0,10 0,30 0,10 0,10 0,60 0,40 0,40 0,33
sogc04
4 C 0,20 0,20 0,10 0,20 0,40 1,30 0,20 1,00 0,80 2,20 0,66 D 0,60 0,50 0,50 0,40 0,90 0,30 0,70 1,40 0,90 1,70 0,79
sogc05
5 C 0,20 0,10 0,20 0,20 0,10 0,10 0,30 0,20 0,20 0,30 0,19 D 0,30 0,10 0,10 0,30 0,30 0,30 0,20 0,20 0,10 0,20 0,21
sogc06
6 C 0,10 0,20 0,10 0,30 0,30 0,50 0,30 0,80 0,60 0,90 0,41 D 0,40 0,30 0,80 0,10 0,90 0,60 0,90 1,30 0,80 0,30 0,64
sogc07
7 C 1,00 1,00 0,70 0,50 0,10 0,20 0,30 0,90 0,60 0,90 0,62 D 0,40 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 0,50 0,25
W3 Méd 0,51 W3 Méd 0,45
DP
0,19 DP 0,21
Máx
0,70 Máx 0,66
Mín
0,32 Mín 0,23
sogc08
8 C 0,30 0,30 0,40 0,10 0,10 0,50 0,50 1,20 1,10 1,70 0,62 D 0,40 0,10 0,40 0,10 0,10 0,10 0,10 0,40 0,60 0,40 0,27
sogc09
9 C 0,20 0,20 0,40 0,50 0,20 0,20 0,20 0,40 0,40 1,20 0,39 D 0,20 0,10 0,00 0,20 0,00 0,10 0,10 0,20 0,80 0,70 0,24
sogc10
10 C 0,00 0,10 0,30 0,10 0,20 0,00 0,00 0,40 0,40 0,60 0,21 D 0,20 0,20 0,20 0,20 0,30 0,80 0,40 0,60 0,10 0,50 0,35
sogc11
11 C 0,00 0,00 0,10 0,30 0,10 0,10 0,10 0,60 0,50 0,30 0,21 D 0,20 0,50 0,10 0,10 0,30 0,20 0,10 0,10 0,30 0,10 0,20
sogc12
12 C 1,30 0,50 1,00 0,50 0,50 1,30 1,30 2,40 1,00 1,00 1,08 D 0,30 0,50 0,70 0,60 1,00 0,60 0,70 0,90 1,70 0,90 0,79
sogc13 13 C 0,50 0,80 0,80 0,40 0,30 0,50 0,40 0,90 0,70 1,10 0,64 D 0,50 0,40 0,70 0,40 0,40 0,70 0,50 0,50 0,50 0,60 0,52
sogc14
14 C 0,40 0,50 0,50 1,20 0,60 0,30 0,50 0,70 1,10 1,30 0,71 D 0,20 0,70 0,20 0,20 0,10 0,20 0,20 0,30 0,30 0,40 0,28
W4 Méd 0,55 W4 Méd 0,40
DP
0,31 DP 0,22
Máx
0,86 Máx 0,62
Mín
0,24 Mín 0,17
sogc15
15 C 0,30 0,10 0,10 0,20 0,30 0,20 0,20 0,60 0,10 0,80 0,29 D 0,20 0,80 1,00 0,80 0,60 0,20 0,70 0,40 0,20 0,20 0,51
sogc16
16 C 0,20 0,20 0,00 0,10 0,20 0,40 0,20 0,30 0,20 0,20 0,20 D 0,40 0,10 0,20 0,10 0,10 0,10 0,20 0,40 0,40 1,00 0,30
sogc17
17 C 0,20 0,10 0,30 0,10 0,10 0,10 0,20 0,40 0,80 0,60 0,29 D -
sogc18
18 C 0,00 0,10 0,20 0,10 0,10 0,20 0,10 0,90 0,40 1,20 0,33 D 0,00 0,00 0,00 0,10 0,00 0,10 0,00 0,10 0,10 0,30 0,07
sogc19
19 C 0,70 0,30 1,30 0,20 0,50 0,10 0,10 0,10 0,50 0,20 0,40 D 0,10 0,20 0,20 0,20 0,30 0,20 0,00 0,30 0,30 0,10 0,19
sogc20
20 C 0,50 0,50 1,10 1,30 2,10 1,20 1,00 0,30 0,20 0,60 0,88 D 0,20 0,10 0,10 0,10 0,10 0,00 0,10 0,10 0,00 0,20 0,10
sogc21
21 C 0,30 0,40 0,30 0,30 0,70 0,40 0,30 0,10 0,10 0,20 0,31 D 0,30 0,30 0,10 0,10 0,10 0,20 0,30 0,00 0,10 0,40 0,19
W5 Méd 0,39 W5 Méd 0,23
DP
0,23 Dp 0,16
Máx
0,61 Máx 0,39
Mín
0,16 Mím 0,07
sogc22
22 C 0,40 0,30 0,70 0,80 0,30 0,10 0,30 0,30 0,30 0,30 0,38 D 0,20 0,10 0,10 0,00 0,00 0,10 0,10 0,10 0,20 0,20 0,11
sogc23
23 C 0,40 0,50 0,40 0,50 0,30 0,30 0,40 0,50 0,20 0,60 0,41 D 0,00 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,90 0,80 0,90 0,32
sogc24
24 C 0,40 0,40 0,40 0,20 0,30 0,20 0,20 0,40 0,40 0,20 0,31 D 0,10 0,10 0,30 0,10 0,00 0,10 0,00 0,10 0,30 0,00 0,11
sogc25
25 C 0,30 0,20 0,70 0,00 0,40 0,10 0,20 0,40 0,90 0,60 0,38 D 0,30 0,10 0,10 0,20 0,10 0,00 0,20 0,50 0,50 0,70 0,27
sogc26
26 C 0,20 0,20 0,20 0,20 0,40 0,40 0,20 0,20 0,20 0,90 0,31 D 0,60 0,40 0,70 0,30 0,90 0,80 0,40 1,00 0,80 0,80 0,67
sogc27
27 C 0,10 0,10 0,30 0,10 0,10 0,70 0,50 0,30 0,40 0,30 0,29 D 0,20 0,40 0,60 0,40 0,40 0,30 0,30 0,50 0,30 0,30 0,37
sogc28
28 C 0,30 0,40 0,40 0,10 0,20 0,20 0,20 0,40 0,40 0,70 0,33 D 1,20 0,60 0,60 0,80 0,20 0,90 0,30 1,40 1,10 1,00 0,81
W6 Méd 0,34 W6 Méd 0,38
DP 0,05 DP 0,27
Máx 0,39 Máx 0,65
Mín 0,30 Mín 0,11
Quadro 5 - Porcentual de expressão SOD1 em cripta de cólon ascendente quantificado pelo Imagelab
®
56
Identif
Amostra
Grupo
abcdefghi j
Média
Grupo
abcdefghi j
Média
faga01
1 A 1,40 1,50 1,30 0,90 1,80 1,40 1,80 1,70 1,50 1,70 1,50 B 1,80 1,20 0,90 0,70 1,30 1,00 0,90 1,00 1,00 1,50 1,13
faga02
2 A 1,20 1,40 0,70 0,10 0,40 0,20 0,20 0,90 1,60 0,10 0,68 B 2,60 1,80 3,40 2,90 3,10 2,90 2,50 4,40 6,50 5,70 3,58
faga03
3 A 2,00 0,90 0,60 1,90 1,00 1,20 1,40 1,00 0,90 0,70 1,16 B 2,10 2,50 2,00 2,10 1,90 2,30 2,20 1,70 1,70 2,00 2,05
faga04
4 A 1,00 1,00 1,40 0,80 1,60 1,90 0,80 1,20 1,30 1,00 1,20 B 3,90 2,80 3,20 3,60 2,80 3,10 3,80 2,20 1,80 1,80 2,90
faga05
5 A 1,50 1,60 1,50 1,60 1,10 1,10 1,40 0,30 0,90 1,60 1,26 B 1,70 2,40 3,00 1,10 0,80 2,00 1,00 1,40 0,80 1,10 1,53
faga06
6 A 0,20 0,30 0,10 0,10 0,10 0,20 0,10 0,20 0,20 0,20 0,17 B 1,10 1,60 2,70 3,30 3,40 2,50 3,20 1,60 1,90 3,50 2,48
faga07 7 A 0,10 0,30 0,30 0,50 0,30 0,50 0,20 1,80 1,80 1,60 0,74 B 2,50 2,90 4,40 3,20 2,70 2,20 4,20 3,10 3,10 4,20 3,25
W3 Méd 0,96 W3 Méd 2,42
DP 0,45 DP 0,90
Máx 1,41 Máx 3,32
Mín 0,51 Mín 1,52
faga08
8 A 0,90 1,00 1,00 0,70 0,50 0,60 0,70 0,80 0,90 0,60 0,77 B 0,20 0,50 0,10 0,10 0,20 0,60 0,50 0,80 1,10 1,00 0,51
faga09
9 A 0,70 0,30 1,90 0,90 0,20 0,40 0,70 0,40 0,50 0,40 0,64 B 0,80 0,50 0,30 0,30 0,10 0,10 0,20 0,80 0,90 1,20 0,52
faga10
10 A 0,60 0,10 0,00 0,10 0,20 0,50 0,50 2,10 2,70 1,90 0,87 B 0,40 0,70 0,80 0,50 1,30 0,60 0,70 1,30 1,30 1,50 0,91
faga11
11 A 1,10 0,80 0,70 0,60 0,20 0,40 0,80 0,50 1,60 0,80 0,75 B 0,90 1,00 0,90 1,10 0,90 1,30 1,10 0,70 1,60 0,90 1,04
faga12
12 A 0,20 0,10 0,60 0,40 0,20 0,20 0,70 0,80 0,80 0,40 0,44 B 0,50 0,70 0,60 0,70 0,60 0,80 0,50 0,40 0,70 1,80 0,73
faga13
13 A 1,40 1,20 0,40 1,20 1,40 0,20 0,70 4,10 3,60 2,20 1,64 B 0,10 0,20 0,80 0,30 0,60 0,20 0,20 3,00 2,90 1,20 0,95
faga14
14 A 0,70 1,40 0,40 0,80 1,30 0,40 0,90 0,80 1,10 1,00 0,88 B 1,00 1,50 1,80 1,50 1,50 1,50 1,70 1,40 1,10 1,80 1,48
W4 Méd 0,86 W4 Méd 0,88
DP
0,38
DP
0,34
Máx
1,23
Máx
1,21
Mín
0,48
Mín
0,54
faga15
15 A 0,90 0,90 0,60 2,00 0,40 0,40 0,90 0,30 1,00 0,40 0,78 B 1,10 1,00 1,70 1,20 1,00 1,30 1,80 0,30 0,70 0,60 1,07
faga16
16 A 1,30 1,40 1,00 0,90 1,40 1,30 1,60 1,00 0,60 1,30 1,18 B 0,60 1,80 0,70 0,30 0,60 0,60 0,90 1,50 2,00 1,90 1,09
faga17
17 A 0,40 0,50 0,20 0,60 0,30 0,50 0,30 0,40 1,30 1,30 0,58 B 0,50 1,00 0,40 0,60 0,30 0,30 0,50 0,60 0,80 1,00 0,60
faga18
18 A 0,30 0,80 1,10 0,70 0,70 0,80 0,30 0,40 0,40 0,60 0,61 B 0,50 2,10 1,50 1,10 1,00 0,90 2,30 0,40 0,40 0,30 1,05
faga19
19 A 0,70 0,50 0,40 0,40 0,60 0,40 0,20 0,60 1,50 0,80 0,61 B 0,90 2,00 2,30 1,20 1,00 1,70 1,10 1,10 0,30 1,00 1,26
faga20
20 A 0,50 0,30 1,10 3,40 0,40 2,10 0,80 0,20 0,80 0,30 0,99 B 0,70 0,60 0,90 1,00 0,60 0,60 0,50 4,10 3,50 2,50 1,50
faga21
21 A 1,10 1,00 1,10 1,40 1,30 1,80 1,70 1,50 0,70 1,10 1,27 B 0,60 0,70 1,60 1,80 0,50 1,50 0,60 2,00 1,80 2,10 1,32
W5 Méd 0,86 W5 Méd 1,13
DP
0,29
DP
0,28
Máx
1,15
Máx
1,41
Mín
0,57
Mín
0,84
faga22
22 A 0,70 0,80 0,70 0,90 0,50 0,90 0,50 1,40 1,90 1,90 1,02 B 1,20 1,40 0,60 0,70 0,50 0,70 1,70 4,00 0,90 1,00 1,27
faga23
23 A 0,50 0,30 1,20 0,30 0,70 1,00 1,80 1,70 0,30 0,70 0,85 B 2,40 2,70 2,50 2,30 2,40 4,00 1,70 2,30 3,40 2,10 2,58
faga24
24 A 1,50 0,90 1,80 0,80 1,00 1,60 0,70 2,70 2,50 2,70 1,62 B 1,90 1,30 1,20 0,70 0,50 1,20 1,40 2,20 2,10 1,90 1,44
faga25
25 A 0,30 0,40 0,40 0,50 0,60 0,50 0,80 1,20 2,80 2,30 0,98 B 0,70 0,60 0,50 0,60 2,80 0,70 0,80 0,70 1,10 0,60 0,91
faga26 26 A 0,10 0,50 0,70 0,10 0,30 0,10 0,20 0,70 0,50 0,90 0,41 B 3,40 2,40 3,50 2,60 2,80 2,40 0,70 2,10 1,30 1,30 2,25
faga27
27 A 0,20 0,40 0,30 0,30 0,30 0,20 0,10 1,70 0,80 0,70 0,50 B 1,50 0,80 1,10 0,70 0,80 1,20 0,70 1,00 0,50 0,80 0,91
faga28
28 A 0,40 0,10 0,10 0,30 0,40 0,40 0,10 1,70 1,40 1,50 0,64 B 0,50 0,50 0,80 1,90 0,50 0,70 0,30 0,70 2,70 0,60 0,92
W6 Méd 0,86 W6 Méd 1,47
DP
0,41
DP
0,68
Máx
1,27
Máx
2,15
Mín
0,45
Mín
0,78
fagc01
1 C 1,10 0,60 0,60 0,70 0,40 0,40 0,40 1,10 1,70 1,60 0,86 D 0,90 0,40 0,40 0,70 0,20 0,80 0,90 0,70 0,90 0,80 0,67
fagc02
2 C 0,90 0,50 0,60 0,40 0,30 0,30 0,40 1,70 1,10 1,40 0,76 D 1,30 0,90 1,00 1,70 1,70 1,10 0,60 1,30 1,40 1,10 1,21
fagc03
3 C 0,90 1,10 1,30 0,70 0,30 0,70 0,90 0,40 0,70 1,10 0,81 D 2,00 2,00 2,40 2,40 1,70 1,40 0,50 0,90 2,30 1,80 1,74
fagc04
4 C 1,50 1,10 1,80 1,80 1,90 1,90 1,30 1,20 1,80 1,70 1,60 D 0,30 1,30 0,30 1,40 0,40 2,40 0,50 2,40 0,50 0,40 0,99
fagc05
5 C 0,20 0,10 0,10 0,10 0,20 0,10 0,20 1,70 0,50 1,40 0,46 D 1,40 1,40 1,00 0,20 1,50 0,90 1,30 1,10 0,40 0,30 0,95
fagc06
6 C 0,60 1,50 0,70 0,80 2,00 0,60 1,60 0,60 0,80 0,60 0,98 D 1,60 0,80 1,80 0,50 0,60 0,90 0,70 0,90 0,70 1,50 1,00
fagc07
7 C 1,30 1,60 1,60 1,60 1,30 1,60 1,30 1,70 1,40 1,20 1,46 D 0,30 0,60 0,70 0,50 0,40 1,10 0,30 2,10 2,90 3,50 1,24
W3 Méd 0,99 W3 Méd 1,11
DP
0,40 DP 0,33
Máx
1,39 Máx 1,45
Mín
0,59 Mín 0,78
fagc08
8 C 0,50 0,60 0,70 0,30 0,40 0,30 0,30 1,00 0,80 1,60 0,65 D 0,50 0,30 0,90 0,40 0,40 0,60 0,50 1,60 0,40 1,80 0,74
fagc09
9 C 0,10 0,50 1,10 0,50 0,20 0,50 0,50 1,40 1,20 0,80 0,68 D 0,20 0,30 0,30 0,20 0,50 0,20 0,40 1,50 0,20 0,20 0,40
fagc10
10 C 0,80 0,50 0,60 0,50 0,70 1,10 0,60 1,40 0,70 0,30 0,72 D 0,80 0,20 0,10 0,20 0,30 0,10 0,10 2,90 0,80 1,00 0,65
fagc11
11 C 0,30 0,40 0,10 0,40 0,30 0,40 0,40 0,20 0,30 0,40 0,32 D 0,30 0,70 0,30 0,40 0,50 0,50 0,70 1,00 1,00 0,70 0,61
fagc12
12 C 0,70 1,30 1,70 0,20 0,50 1,20 0,30 0,50 0,20 0,30 0,69 D 0,20 0,10 0,20 0,20 0,50 0,20 0,20 0,40 0,70 0,60 0,33
fagc13 13 C 0,80 0,20 0,10 0,10 0,20 0,40 0,20 0,30 0,30 0,30 0,29 D 0,10 0,20 0,20 0,20 0,30 0,20 0,20 1,30 0,90 1,40 0,50
fagc14
14 C 0,20 1,30 1,10 0,90 0,20 0,70 1,20 0,70 1,00 0,40 0,77 D 0,90 0,40 0,80 0,50 0,40 0,30 0,30 1,00 0,90 0,30 0,58
W4 Méd 0,59 W4 Méd 0,54
DP
0,20 DP 0,16
Máx
0,79 Máx 0,69
Mín
0,39 Mín 0,38
fagc15
15 C 0,50 0,40 0,40 0,20 0,30 0,40 0,50 0,70 0,90 0,90 0,52 D 0,50 1,40 1,10 1,30 1,40 0,60 0,80 1,00 0,70 0,80 0,96
fagc16
16 C 0,30 0,10 0,10 0,10 0,00 0,10 0,30 0,50 0,30 0,30 0,21 D 1,30 1,40 1,80 4,20 2,80 1,00 2,70 0,40 0,30 0,60 1,65
fagc17
17 C 1,90 0,70 1,10 0,40 0,30 0,40 0,70 0,30 0,50 0,60 0,69 D -
fagc18
18 C 0,40 0,90 2,00 0,30 0,60 0,80 0,50 0,70 0,40 0,30 0,69 D 0,30 0,60 0,50 1,10 1,00 1,30 2,30 0,70 0,70 0,60 0,91
fagc19
19 C 0,30 0,20 0,30 0,30 0,40 0,50 0,30 1,70 2,90 2,10 0,90 D 0,40 0,60 0,50 0,20 0,50 0,20 0,30 0,60 0,80 0,70 0,48
fagc20
20 C 0,80 2,20 1,80 2,10 2,60 0,60 2,70 1,40 1,20 1,50 1,69 D 1,90 2,30 1,40 0,60 3,00 0,50 1,30 0,70 1,40 1,20 1,43
fagc21
21 C 0,40 0,40 0,80 0,60 2,00 0,60 0,60 0,60 0,90 1,30 0,82 D 1,70 0,50 0,60 0,80 0,20 0,60 0,50 0,80 1,20 1,10 0,80
W5 Méd 0,79 W5 Méd 1,04
DP
0,46 DP 0,43
Máx
1,25 Máx 1,47
Mín
0,33 Mín 0,61
fagc22
22 C 2,20 1,80 1,40 2,00 1,70 1,30 0,60 0,50 0,90 1,30 1,37 D 0,10 0,40 0,20 0,50 0,40 0,20 0,90 0,90 0,50 0,60 0,47
fagc23
23 C 1,80 0,90 1,00 1,60 1,40 1,20 2,90 0,60 1,30 1,40 1,41 D 0,40 0,40 1,20 0,40 0,40 1,20 0,40 0,30 0,10 0,40 0,52
fagc24
24 C 0,90 2,00 1,00 0,60 1,00 1,50 1,80 0,70 1,30 0,90 1,17 D 0,20 0,40 0,10 0,20 0,10 0,20 0,20 0,70 0,60 0,90 0,36
fagc25
25 C 0,10 0,30 0,10 0,10 0,20 0,30 0,20 0,90 0,40 0,20 0,28 D 0,30 0,10 0,10 0,10 0,00 0,10 0,10 0,40 0,10 0,50 0,18
fagc26
26 C 0,70 0,70 0,00 0,30 0,50 0,30 0,60 0,90 0,90 0,90 0,58 D 0,30 0,20 0,30 0,30 0,10 0,30 0,40 0,10 0,10 0,10 0,22
fagc27
27 C 0,00 0,00 0,20 0,00 0,10 0,20 0,20 0,20 0,30 0,10 0,13 D 0,30 0,40 0,50 0,50 0,80 0,30 0,50 0,10 0,30 0,40 0,41
fagc28
28 C 0,70 0,30 0,20 0,60 1,60 0,10 0,30 0,50 0,80 0,40 0,55 D 0,60 1,00 0,90 1,00 0,50 0,60 0,10 0,30 0,60 1,10 0,67
W6 Méd 0,78 W6 Méd 0,40
DP 0,53 DP 0,17
Máx 1,31 Máx 0,57
Mín 0,26 Mín 0,23
Quadro 6 - Porcentual de expressão Fasl em cripta de cólon ascendente quantificado pelo Imagelab
®
57
Identif
Amostra
Grupo
abcdefghi j
Média
Grupo
abcdefghi j
Média
irga01
1 A 0,60 0,20 0,40 0,50 0,10 0,30 0,30 1,60 1,50 1,70 0,72 B 0,10 0,00 0,10 0,20 0,20 0,20 0,10 0,70 1,10 0,60 0,33
irga02
2 A 0,20 0,30 0,60 0,60 0,60 0,90 0,50 0,60 0,70 0,60 0,56 B 0,60 0,50 0,70 0,80 0,40 0,40 0,50 1,40 1,80 1,80 0,89
irga03
3 A 0,10 0,10 0,20 0,40 0,30 0,10 0,40 0,60 1,20 1,40 0,48 B 0,70 0,90 1,40 0,90 1,20 0,80 1,40 1,40 1,90 1,60 1,22
irga04
4 A 0,50 0,40 0,10 0,40 0,40 0,20 0,10 1,00 1,00 2,30 0,64 B 0,20 0,10 0,20 0,10 0,20 0,10 1,00 2,50 1,70 0,50 0,66
irga05
5 A 0,20 0,10 0,10 0,30 0,10 0,10 0,10 0,90 1,70 0,70 0,43 B 0,10 0,10 0,00 0,00 0,00 0,10 0,20 1,30 2,80 0,50 0,51
irga06
6 A 0,20 0,20 0,10 0,20 0,10 0,60 0,10 2,30 2,90 2,40 0,91 B 0,20 0,60 0,30 0,40 0,40 0,70 1,40 0,60 1,20 1,10 0,69
irga07 7 A 0,60 0,80 0,60 0,70 0,30 0,10 0,10 1,20 1,00 1,20 0,66 B 0,20 0,30 0,50 0,10 0,30 0,30 0,30 0,90 2,30 0,50 0,57
W3 Méd 0,63 W3 Méd 0,70
DP 0,16 DP 0,29
Máx 0,79 Máx 0,98
Mín 0,47 Mín 0,41
irga08
8 A 0,70 0,80 0,60 0,60 0,30 1,30 0,50 1,30 1,50 1,10 0,87 B 0,50 0,80 0,40 0,50 0,60 0,80 2,10 1,20 0,70 2,00 0,96
irga09
9 A 2,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,20 0,90 0,60 0,60 0,70 0,55 B 0,20 0,20 0,10 0,10 0,10 0,10 0,20 2,80 1,00 1,90 0,67
irga10
10 A 0,60 0,70 0,10 0,20 0,20 0,10 0,20 0,40 0,70 0,80 0,40 B 0,40 0,40 0,10 0,20 0,30 0,30 0,20 0,80 1,30 0,60 0,46
irga11
11 A 0,50 0,20 0,20 0,30 0,30 0,30 0,10 1,00 1,20 0,70 0,48 B 0,70 0,40 0,40 0,20 0,80 0,60 0,50 2,20 2,10 1,40 0,93
irga12
12 A 0,30 0,20 0,20 0,10 0,30 0,40 0,40 1,20 1,20 0,80 0,51 B 0,10 0,20 0,20 0,30 0,10 0,10 0,20 0,60 0,70 1,60 0,41
irga13
13 A 0,40 0,40 0,10 0,20 0,30 0,10 0,20 1,20 0,70 0,70 0,43 B 0,10 0,10 0,00 0,00 0,10 0,10 0,00 1,30 0,70 0,70 0,31
irga14
14 A 0,20 0,40 0,30 0,20 0,30 0,20 0,20 1,20 1,00 1,20 0,52 B 0,20 0,20 0,10 0,10 0,40 0,20 0,00 3,00 1,80 2,00 0,80
W4 Méd 0,54 W4 Méd 0,65
DP 0,16 DP 0,26
Máx 0,69 Máx 0,91
Mín 0,38 Mín 0,39
irga15
15 A 0,20 0,10 0,70 0,60 0,70 2,20 0,80 0,70 1,40 1,10 0,85 B 1,40 2,10 1,20 1,90 1,60 1,60 1,00 2,00 2,10 1,40 1,63
irga16
16 A 0,50 0,30 0,20 0,20 0,40 0,20 0,50 0,80 1,20 1,40 0,57 B 0,80 1,00 1,20 0,80 0,50 0,40 1,00 0,60 1,40 1,10 0,88
irga17
17 A 0,10 0,10 2,20 2,20 2,20 0,00 0,00 1,30 0,20 0,70 0,90 B 0,80 1,80 0,60 1,40 1,20 1,00 1,40 1,30 1,10 1,40 1,20
irga18
18 A 0,10 0,10 0,30 0,20 0,20 0,80 0,10 1,50 2,00 1,50 0,68 B 0,90 1,50 1,30 2,00 1,80 1,00 1,50 1,40 1,10 1,20 1,37
irga19
19 A 0,20 0,50 0,40 0,10 0,30 0,30 0,10 1,20 0,80 0,50 0,44 B 1,80 0,90 1,60 0,70 1,10 2,10 0,70 2,00 3,30 2,30 1,65
irga20
20 A 0,50 0,10 0,80 0,90 0,00 0,10 0,20 0,50 0,80 0,80 0,47 B 2,10 0,60 0,80 0,90 1,00 1,00 0,60 0,80 1,50 1,10 1,04
irga21
21 A 0,20 0,60 0,10 0,30 0,20 0,10 0,10 1,00 1,30 1,10 0,50 B 0,80 1,70 2,30 1,20 1,60 1,10 1,90 2,50 3,00 1,80 1,79
W5 Méd 0,63 W5 Méd 1,37
Dp 0,19 DP 0,34
Máx 0,82 Máx 1,71
Mín 0,44 Mín 1,02
irga22
22 A 0,50 0,40 0,30 0,30 0,30 0,40 0,20 1,30 1,80 1,50 0,70 B 1,00 0,80 0,70 1,60 0,40 0,70 1,00 1,60 0,90 0,60 0,93
irga23
23 A 0,10 1,30 0,10 0,30 0,20 1,70 0,20 1,60 0,50 0,80 0,68 B 0,90 0,10 0,20 0,10 0,30 0,50 0,20 1,00 1,60 0,80 0,57
irga24
24 A 0,20 0,50 0,20 0,40 0,50 0,50 0,20 0,30 0,30 0,40 0,35 B 0,00 0,10 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,00 1,40 1,60 0,41
irga25
25 A 0,80 1,00 1,00 0,20 0,20 0,10 1,00 0,80 0,50 1,10 0,67 B 0,00 0,00 0,10 0,00 0,00 0,00 0,10 1,20 1,20 0,50 0,31
irga26 26 A 1,00 0,60 0,20 0,90 1,30 0,90 0,60 1,00 1,00 0,50 0,80 B 0,30 0,50 0,30 0,20 0,20 5,80 0,30 1,00 1,10 2,20 1,19
irga27
27 A 1,00 1,00 0,60 0,60 0,20 1,10 1,20 0,80 0,50 0,60 0,76 B 0,10 0,20 0,00 0,10 0,00 0,10 0,20 2,10 1,40 0,80 0,50
irga28
28 A 0,30 0,70 0,70 0,90 0,50 0,40 0,70 0,60 0,70 0,50 0,60 B 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,20 0,20 2,50 2,80 1,20 0,74
W6 Méd 0,65 W6 Méd 0,66
DP 0,15 DP 0,31
Máx 0,80 Máx 0,97
Mín 0,50 Mín 0,35
irgc01
1 C 0,50 0,80 0,50 0,40 1,40 1,50 0,70 1,10 0,80 0,30 0,80 D 0,40 0,60 0,70 0,20 0,10 0,40 0,40 1,20 1,60 1,40 0,70
irgc02
2 C 0,20 0,30 0,10 0,20 0,50 0,60 0,20 1,30 2,70 1,30 0,74 D 0,20 0,40 0,60 0,20 0,20 0,40 0,20 0,70 0,60 0,80 0,43
irgc03
3 C 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,20 1,20 1,20 1,30 0,45 D 1,00 0,20 0,20 0,00 0,30 0,10 0,10 0,50 1,10 0,90 0,44
irgc04
4 C 1,00 0,70 0,60 0,60 0,30 0,30 0,30 0,90 1,10 1,10 0,69 D 0,10 0,10 0,10 0,20 0,40 0,20 0,00 1,10 1,20 0,80 0,42
irgc05
5 C 0,10 0,20 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,40 1,10 0,20 0,25 D 0,10 0,10 0,00 0,00 0,00 0,10 0,10 0,50 0,70 0,40 0,20
irgc06
6 C 0,10 0,20 0,10 0,30 0,20 0,10 0,30 1,50 0,70 1,10 0,46 D 0,20 0,10 0,10 0,20 0,10 0,10 0,10 0,50 0,50 1,30 0,32
irgc07
7 C 0,20 0,10 0,10 0,10 0,20 0,20 0,10 1,40 1,20 1,10 0,47 D 0,50 0,10 0,40 0,10 0,10 0,40 0,60 1,10 0,90 0,70 0,49
W3 Méd 0,55 W3 Méd 0,43
DP 0,20 DP 0,15
Máx 0,75 Máx 0,58
Mín 0,35 Mín 0,27
irgc08
8 C 0,20 0,10 0,20 0,20 0,30 0,20 0,40 0,80 1,40 0,90 0,47 D 0,60 0,40 0,20 0,60 0,40 0,30 0,30 1,70 0,90 2,10 0,75
irgc09
9 C 0,30 0,30 0,20 0,20 0,60 0,30 0,40 0,90 1,70 1,60 0,65 D 0,30 0,20 0,10 0,40 0,20 0,10 0,40 0,40 0,90 0,80 0,38
irgc10
10 C 0,60 0,40 0,50 0,50 0,50 0,60 0,40 1,50 1,30 2,00 0,83 D 0,00 0,00 0,10 0,10 0,00 0,10 0,30 0,40 2,00 1,10 0,41
irgc11
11 C 0,10 0,00 0,10 0,20 0,10 0,10 0,10 0,60 1,10 0,40 0,28 D 0,10 0,10 0,10 0,00 0,30 0,00 0,10 1,40 1,00 1,20 0,43
irgc12
12 C 0,40 0,20 0,40 0,30 0,40 0,20 0,30 1,10 1,20 1,30 0,58 D 0,20 0,10 0,10 0,20 0,10 0,20 0,10 0,70 0,80 1,10 0,36
irgc13 13 C 0,60 0,10 0,10 0,00 0,00 0,20 0,10 0,60 1,10 0,90 0,37 D 0,10 0,10 0,00 0,00 0,20 0,10 0,10 1,00 1,40 1,40 0,44
irgc14
14 C 0,40 0,40 0,80 0,40 0,60 0,90 0,60 0,70 1,60 1,00 0,74 D 0,00 0,10 0,10 0,30 0,00 0,10 0,60 0,50 1,50 1,30 0,45
W4 Méd 0,56 W4 Méd 0,46
DP 0,20 DP 0,13
Máx 0,76 Máx 0,59
Mín 0,36 Mín 0,33
irgc15
15 C 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,60 2,30 2,20 0,61 D 0,10 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,20 1,70 1,90 0,49
irgc16
16 C 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,20 1,30 0,70 0,32 D 0,10 0,10 0,10 0,20 0,00 0,10 0,10 1,40 2,00 1,70 0,58
irgc17
17C0,000,000,100,100,100,100,200,900,600,600,27D-----------
irgc18
18 C 0,10 0,20 0,00 0,10 0,20 0,00 0,30 2,60 2,50 1,80 0,78 D 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,30 1,00 1,30 0,36
irgc19
19 C 0,10 0,00 0,10 0,10 0,10 0,00 0,00 0,80 0,70 3,20 0,51 D 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 3,80 1,50 1,90 0,72
irgc20
20 C 0,20 0,10 0,10 0,00 0,10 0,10 0,30 0,70 0,50 0,60 0,27 D 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,40 1,30 0,80 0,35
irgc21
21 C 0,00 0,00 0,00 0,10 0,10 0,00 0,10 1,10 2,50 1,80 0,57 D 0,00 0,10 0,00 0,00 0,00 0,10 0,00 0,40 0,60 0,60 0,18
W5 Méd 0,48 W6 Méd 0,45
DP 0,20 DP 0,19
Máx 0,67 Máx 0,64
Mín 0,28 Mín 0,26
irgc22
22 C 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,10 0,30 0,20 0,16 D 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 2,10 0,80 0,90 0,38
irgc23
23 C 0,10 0,20 0,00 0,20 0,30 0,10 0,20 0,90 1,80 1,10 0,49 D 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,30 1,20 1,40 0,39
irgc24
24 C 0,00 0,00 0,10 0,60 0,00 0,00 0,00 0,90 1,50 1,10 0,42 D 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,80 1,70 1,40 0,49
irgc25
25 C 0,10 0,60 0,60 0,60 1,00 0,80 0,40 0,80 0,70 0,90 0,65 D 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 2,30 1,60 2,10 0,60
irgc26
26 C 0,00 0,00 0,10 0,00 0,00 0,00 0,00 1,10 1,20 1,20 0,36 D 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,60 1,10 1,00 0,37
irgc27
27 C 0,10 0,00 0,00 0,10 0,10 0,10 0,00 1,10 0,20 1,00 0,27 D 0,00 0,00 0,00 0,00 1,30 0,00 0,00 1,40 2,00 1,90 0,66
irgc28
28 C 0,80 0,30 0,10 0,30 0,20 0,10 0,20 0,60 0,80 1,40 0,48 D 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,70 0,60 0,70 0,20
W6 Méd 0,40 W6 Méd 0,44
DP 0,16 DP 0,16
Máx 0,56 Máx 0,60
Mín 0,24 Mín 0,29
Quadro 7 - Porcentual de expressão Itpr3 em cripta de cólon ascendente quantificado pelo Imagelab
®
58
Identif
Amostra
Grupo
abcdefghi j
Média
Grupo
abcdefghi j
Média
pkga01
1 A 0,30 0,00 0,10 0,10 0,30 0,20 0,70 0,40 1,20 0,80 0,41 B 0,30 0,30 0,30 0,40 0,20 0,20 0,80 2,10 2,10 2,70 0,94
pkga02
2 A 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,30 0,90 0,70 0,29 B 0,10 0,10 0,10 0,10 0,00 0,00 0,00 2,20 2,30 2,80 0,77
pkga03
3 A 0,20 0,30 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 1,20 1,50 1,70 0,54 B 0,10 0,10 0,00 0,00 0,10 0,10 0,10 2,90 2,90 2,90 0,92
pkga04
4 A 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,10 1,20 1,40 0,37 B 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 2,40 2,70 3,20 0,83
pkga05
5 A 0,00 0,00 0,20 0,10 0,00 0,10 0,00 0,90 0,90 1,20 0,34 B 0,00 0,00 0,00 0,00 0,10 0,00 0,00 2,00 1,20 1,20 0,45
pkga06
6 A 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,60 1,00 0,80 0,24 B 0,00 0,00 0,10 0,10 0,10 0,10 0,20 2,80 3,40 2,80 0,96
pkga07 7 A 0,00 0,10 0,00 0,10 0,20 0,00 0,00 0,90 0,60 1,00 0,29 B 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 2,80 1,30 2,00 0,61
W3 Méd 0,35 W3 Méd 0,78
DP 0,10 DP 0,19
Máx 0,45 Máx 0,97
Mín 0,25 Mín 0,59
pkga08
8 A 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,80 1,00 0,90 0,27 B 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,20 1,10 2,70 0,50
pkga09
9 A 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,20 0,90 0,90 0,30 B 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,10 1,20 1,00 1,40 0,37
pkga10
10 A 0,20 0,20 0,20 0,10 0,20 0,30 0,30 1,00 0,70 1,10 0,43 B 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,60 1,50 1,40 0,45
pkga11
11 A 0,00 0,00 0,00 0,10 0,10 0,10 0,00 1,50 1,50 1,80 0,51 B 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,50 1,00 1,00 0,35
pkga12
12 A 0,10 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,50 1,30 1,30 0,42 B 0,20 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,80 1,00 0,80 0,28
pkga13
13 A 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,10 1,70 1,40 0,42 B 0,10 0,10 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,30 0,60 0,50 0,16
pkga14
14 A 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,90 0,50 0,40 0,18 B 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,80 2,00 1,00 0,38
W4 Méd 0,36 W4 Méd 0,36
DP
0,11
DP
0,11
Máx
0,48
Máx
0,47
Mín
0,25
Mín
0,24
pkga15
15 A 0,00 0,10 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,40 0,40 0,60 0,15 B 0,10 0,00 0,10 0,00 0,00 0,00 0,00 2,20 2,50 2,90 0,78
pkga16
16 A 0,00 0,00 0,30 0,30 0,00 0,30 0,20 0,50 0,10 0,40 0,21 B 0,90 0,50 0,60 0,30 0,60 0,70 0,30 1,20 1,50 0,90 0,75
pkga17
17 A 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,70 0,70 0,10 0,15 B 0,80 0,70 0,30 0,90 0,30 0,20 0,50 0,90 1,50 0,40 0,65
pkga18
18 A 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,50 0,20 0,60 0,13 B 1,30 1,10 0,30 0,80 0,90 0,90 0,80 0,50 0,10 0,80 0,75
pkga19
19 A 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,30 1,60 1,90 0,48 B 0,50 0,70 0,50 0,90 0,90 0,40 0,90 0,60 2,10 1,10 0,86
pkga20
20 A 0,00 0,10 0,10 0,10 0,00 0,00 1,60 0,40 1,00 1,50 0,48 B 1,50 0,50 0,90 0,90 1,00 0,40 0,60 0,80 0,20 0,50 0,73
pkga21
21 A 0,00 0,00 1,40 1,20 0,00 0,10 0,00 0,60 0,40 0,40 0,41 B 0,70 0,70 1,10 1,30 1,10 1,80 1,50 1,30 1,30 1,00 1,18
W5 Méd 0,29 W5 Méd 0,81
DP
0,16
DP
0,17
Máx
0,45
Máx
0,99
Mín
0,12
Mín
0,64
pkga22
22 A 0,00 0,00 1,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,30 0,20 0,40 0,19 B 1,10 1,30 1,60 1,70 1,10 1,60 1,10 1,70 1,40 1,40 1,40
pkga23
23 A 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,10 0,70 1,80 1,30 0,39 B 0,80 0,50 1,30 2,40 1,50 1,70 1,10 0,20 0,30 0,30 1,01
pkga24
24 A 0,10 0,50 0,20 0,30 0,30 0,50 0,50 0,20 0,40 0,10 0,31 B 0,70 0,90 1,10 1,60 1,00 1,50 1,30 0,90 0,10 0,10 0,92
pkga25
25 A 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,50 0,60 0,50 0,16 B 1,10 0,60 0,10 0,30 0,10 0,10 0,20 1,60 0,40 0,90 0,54
pkga26 26 A 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,60 0,70 0,30 0,16 B 1,10 1,80 0,10 0,90 2,20 0,60 0,70 0,50 0,20 0,70 0,88
pkga27
27 A 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,40 0,30 0,30 0,10 B 0,80 0,90 1,20 0,70 0,60 0,60 1,40 0,20 3,00 0,20 0,96
pkga28
28 A 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,60 0,70 0,10 0,14 B 0,30 0,40 0,20 0,50 0,40 0,50 0,80 0,70 0,70 0,30 0,48
W6 Méd 0,21 W6 Méd 0,88
DP
0,10
DP
0,31
Máx
0,31
Máx
1,19
Mín
0,10
Mín
0,58
pkgc01
1 C 1,60 1,00 0,50 0,10 0,80 0,70 0,80 1,50 0,70 0,90 0,86 D 0,20 0,30 0,20 0,50 0,30 0,20 0,70 0,90 0,70 0,70 0,47
pkgc02
2 C 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,50 2,00 1,40 0,49 D 0,00 0,00 0,10 0,10 0,00 0,00 0,00 2,50 2,20 3,40 0,83
pkgc03
3 C 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 2,40 2,60 1,30 0,63 D 0,70 0,50 0,70 0,60 0,30 0,40 0,40 1,60 1,50 0,80 0,75
pkgc04
4 C 0,00 0,10 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,60 1,50 0,70 0,29 D 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,90 2,50 2,50 0,69
pkgc05
5 C 0,10 0,00 0,00 0,00 0,10 0,00 0,00 1,10 1,40 1,40 0,41 D 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,50 1,00 1,50 0,40
pkgc06
6 C 0,00 0,10 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,80 3,70 2,90 0,75 D 0,00 0,00 0,10 0,00 0,00 0,00 0,00 2,00 1,70 1,20 0,50
pkgc07
7 C 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 3,70 2,90 1,60 0,82 D 0,00 0,00 0,00 0,00 0,10 0,20 0,00 1,10 2,10 1,10 0,46
W3 Méd 0,61 W5 Méd 0,59
DP
0,22 DP 0,17
Máx
0,82 Máx 0,75
Mín
0,39 Mín 0,42
pkgc08
8 C 0,00 0,00 0,10 0,30 0,00 0,00 0,00 2,40 1,30 1,60 0,57 D 1,50 0,40 1,20 1,00 0,40 0,60 0,50 0,70 1,50 1,30 0,91
pkgc09
9 C 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,60 0,60 1,90 0,41 D 1,30 0,60 0,50 0,40 0,50 1,30 1,30 0,90 0,50 0,40 0,77
pkgc10
10 C 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,80 1,00 1,10 0,29 D 0,50 0,50 0,90 0,50 0,60 0,70 0,60 0,60 0,80 0,40 0,61
pkgc11
11 C 0,00 0,10 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 2,40 2,00 2,00 0,65 D 0,50 0,50 0,90 0,60 0,30 0,80 0,60 0,50 0,60 0,30 0,56
pkgc12
12 C 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,10 0,60 0,70 0,24 D 0,20 0,30 0,60 0,10 0,70 0,10 0,10 0,60 0,10 0,30 0,31
pkgc13 13 C 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,90 1,20 0,50 0,26 D 0,80 0,40 0,70 0,30 0,60 0,30 0,80 0,30 0,30 0,20 0,47
pkgc14
14C0,000,000,000,000,000,000,000,500,900,700,21D----------####
W4 Méd 0,38 W4 Méd 0,61
DP
0,17 DP 0,21
Máx
0,50 Máx 0,82
Mín
0,20 Mín 0,39
pkgc15
15 C 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,10 0,00 1,30 1,00 1,00 0,34 D 0,90 0,60 0,80 0,80 0,80 0,30 0,70 0,20 0,40 0,40 0,59
pkgc16
16 C 0,40 0,00 0,10 0,00 0,10 0,10 0,00 0,50 0,50 0,70 0,24 D 0,60 0,40 0,50 0,80 0,30 0,90 0,70 0,30 0,40 0,30 0,52
pkgc17
17C0,100,000,000,000,000,200,000,200,402,400,33D-----------
pkgc18
18 C 0,00 0,10 0,00 0,30 0,10 0,10 0,00 0,60 0,60 0,50 0,23 D 1,40 1,30 1,30 1,10 1,20 1,10 0,60 0,70 0,60 0,50 0,98
pkgc19
19 C 1,30 0,40 0,60 0,40 0,80 0,80 0,40 1,20 0,60 1,60 0,81 D 0,60 0,80 0,30 0,70 0,80 0,80 0,80 0,70 0,90 0,90 0,73
pkgc20
20 C 1,10 0,80 0,90 0,80 0,60 0,50 0,70 0,60 0,80 0,70 0,75 D 0,50 0,20 0,60 0,20 0,40 0,20 0,50 0,40 0,20 0,40 0,36
pkgc21
21 C 0,30 0,80 0,40 0,60 0,50 0,40 0,80 0,70 0,40 0,50 0,54 D 0,40 0,60 0,40 1,10 0,20 0,50 0,30 1,40 0,80 1,10 0,68
W5 Méd 0,46 W5 Méd 0,64
DP
0,24 DP 0,21
Máx
0,70 Máx 0,85
Mín
0,22 Mín 0,43
pkgc22
22 C 0,60 0,40 0,60 0,70 0,70 0,10 0,50 0,60 0,20 0,70 0,51 D 0,70 0,80 0,40 0,30 0,50 0,30 0,30 0,40 0,30 0,40 0,44
pkgc23
23 C 0,00 0,20 0,10 0,40 0,30 0,20 0,10 0,20 0,20 0,40 0,21 D 0,10 0,30 0,70 0,30 0,30 0,30 0,20 0,10 0,20 0,30 0,28
pkgc24
24 C 0,40 0,50 0,50 0,30 0,30 0,20 0,30 0,70 0,30 0,20 0,37 D 0,40 0,20 0,20 0,10 0,10 0,10 0,12 0,10 0,10 0,10 0,15
pkgc25
25 C 0,50 0,50 0,20 0,40 0,20 1,00 0,50 0,10 0,20 0,70 0,43 D 0,50 0,80 1,00 0,60 0,70 0,20 0,30 0,10 0,10 0,00 0,43
pkgc26
26 C 0,20 0,20 0,70 0,50 0,50 0,30 0,40 0,60 0,40 0,20 0,40 D 0,20 0,30 0,10 0,20 0,10 0,30 0,30 0,50 0,20 0,10 0,23
pkgc27
27 C 0,20 0,10 0,40 0,20 0,10 0,20 0,40 0,20 0,30 0,20 0,23 D 0,10 0,30 0,10 0,10 0,40 0,20 0,20 0,70 0,20 0,30 0,26
pkgc28
28 C 0,10 0,30 0,20 0,20 0,10 0,30 0,10 0,60 0,20 0,60 0,27 D 0,20 0,10 0,10 0,10 0,10 0,20 0,20 0,70 1,00 0,40 0,31
W6 Méd 0,35 W6 Méd 0,30
DP 0,11 DP 0,10
Máx 0,46 Máx 0,10
Mín 0,23 Mín 0,20
Quadro 8 - Porcentual de expressão PI3KA em cripta de cólon ascendente quantificado pelo Imagelab
®
59
Identif
Amostra
Grupo
abcdefghi j
Média
Grupo
abcdefghi j
Média
bega01
1A
2,20 3,20 2,50 3,70 3,60 2,50 4,00
2,80 2,70 3,00 3,02 B 5,40 0,80 1,60 1,60 4,80 4,30 3,90 2,00 2,20 8,60 3,52
bega02
2A
3,00 2,50 2,90 1,90 3,20 2,80 2,80
2,80 3,50 3,80 2,92 B 5,40 12,10 8,40 3,40 1,20 2,80 3,60 5,40 3,20 7,30 5,28
bega03
3A
0,90 1,30 3,50 3,00 2,30 2,40 2,50
1,20 1,00 2,70 2,08 B 4,00 4,90 4,90 2,70 2,20 2,40 2,30 10,20 6,90 12,90 5,34
bega04
4A
3,40 2,30 3,00 3,80 3,40 5,80 3,70
4,20 4,10 5,50 3,92 B 12,30 4,80 13,30 13,10 9,90 9,10 11,30 10,40 8,10 4,50 9,68
bega05
5A
1,90 1,80 0,90 1,30 2,30 3,00 1,40
2,50 1,80 1,10 1,80 B 4,20 2,80 2,20 3,90 3,60 8,70 4,90 4,10 3,20 2,70 4,03
bega06
6A
1,50 3,00 1,70 1,40 1,60 1,60 1,80
2,40 3,10 3,00 2,11 B 6,90 6,50 7,10 6,70 6,80 9,20 5,50 6,80 3,70 5,40 6,46
bega07
7A
4,50 3,50 2,80 3,00 3,70 4,10 3,10
2,30 1,80 3,10 3,19 B 8,10 4,80 5,90 5,80 5,20 6,50 6,40 3,50 7,20 5,50 5,89
W3 Méd 2,72 W3 Méd 5,74
DP 0,75 DP 2,01
Máx 3,47 Máx 7,75
Mín 1,97 Mín 3,73
bega08
8A
5,90 1,20 1,90 1,70 1,40 1,80 1,80
3,60 4,70 2,10 2,61 B 3,00 5,00 5,90 2,70 3,90 1,50 2,90 5,00 4,00 3,70 3,76
bega09
9A
1,50 1,00 1,70 0,70 6,20 0,50 6,50
4,60 2,20 4,70 2,96 B 2,50 4,10 0,60 4,40 0,60 0,70 2,00 4,40 1,10 2,20 2,26
bega10
10 A
2,20 2,20 1,00 3,10 2,30 4,50 4,00
2,60 3,10 3,10 2,81 B 0,40 0,50 0,50 2,00 3,30 0,40 0,40 0,90 1,00 0,70 1,01
bega11 11 A 2,30 0,20 1,00 1,60 2,00 0,60 1,30 4,30 4,20 1,50 1,90 B 2,30 4,70 4,10 5,20 3,90 4,20 4,30 1,10 2,10 1,70 3,36
bega12
12 A
0,60 0,40 0,60 1,40 1,40 1,60 1,50
2,50 2,70 2,20 1,49 B 2,60 1,30 1,70 3,90 4,20 3,40 3,30 1,90 2,00 2,80 2,71
bega13
13 A
0,30 0,30 1,10 0,50 0,50 0,70 0,40
4,00 3,50 3,60 1,49 B 0,50 1,00 0,50 0,70 1,50 1,00 1,70 2,80 0,70 0,80 1,12
bega14
14 A 0,20 0,40 0,50 0,60 0,50 0,20 0,60 0,60 0,70 0,50 0,48 B 0,80 1,20 2,40 2,40 1,60 0,10 1,30 0,30 0,50 0,20 1,08
W4 Méd 1,96 W4 Méd 2,19
DP 0,89 DP 1,15
Máx
2,86
Máx
3,33
Mín
1,07
Mín
1,04
bega15
15 A
1,00 0,60 1,10 0,20 0,20 0,30 0,40
0,20 0,40 0,40 0,48 B 0,60 0,90 0,20 0,40 0,10 0,10 0,30 0,30 0,30 0,30 0,35
bega16
16 A
2,70 1,00 2,20 2,20 2,10 1,00 2,20
5,30 5,10 4,50 2,83 B 0,90 0,50 1,30 0,70 1,10 0,30 0,40 1,30 1,30 1,00 0,88
bega17 17 A 0,80 0,30 1,30 1,30 0,90 0,90 0,20 1,40 1,50 1,00 0,96 B 0,60 1,00 0,60 0,20 0,30 0,30 0,20 0,40 0,60 1,20 0,54
bega18
18 A
1,40 2,10 2,20 1,00 2,50 3,10 1,60
4,50 4,10 4,70 2,72 B 0,10 0,50 0,10 0,60 0,20 0,20 0,10 1,50 3,20 1,90 0,84
bega19
19 A
0,30 0,60 0,30 0,30 0,30 0,30 0,40
0,70 1,00 0,90 0,51 B 0,90 0,80 0,70 0,50 1,30 1,50 0,40 1,10 1,50 1,90 1,06
bega20
20 A
0,30 0,30 0,20 1,50 0,50 0,40 0,20
0,60 1,00 1,30 0,63 B 0,20 0,10 0,40 0,30 0,40 0,30 0,20 1,10 2,00 0,50 0,55
bega21
21 A
1,10 1,20 1,30 0,90 0,40 0,70 1,40
1,60 1,00 1,80 1,14 B 2,90 1,50 0,90 0,90 2,00 1,90 2,60 1,30 0,70 0,70 1,54
W5 Méd 1,32 W5 Méd 0,82
DP
1,02
DP
0,40
Máx
2,34
Máx
1,22
Mín
0,30
Mín
0,42
bega22
22 A
1,10 1,60 0,30 0,40 0,10 0,40 0,20
1,30 0,70 1,60 0,77 B 1,10 2,80 1,20 3,40 1,50 1,80 0,90 1,10 1,70 2,00 1,75
bega23 23 A 0,40 1,00 0,70 0,50 0,30 0,10 1,20 3,00 0,70 1,60 0,95 B 1,40 1,30 1,50 1,00 0,40 1,70 0,60 0,40 0,50 0,30 0,91
bega24
24 A
1,50 0,20 0,20 1,30 2,10 0,30 1,80
0,30 0,20 0,40 0,83 B 2,00 3,80 1,20 2,90 2,70 1,70 0,30 1,30 1,30 4,60 2,18
bega25
25 A
1,50 0,30 0,40 1,90 1,20 1,80 0,90
0,70 1,00 1,00 1,07 B 1,40 1,40 3,50 3,00 2,30 1,60 2,10 2,20 4,60 1,80 2,39
bega26
26 A
3,10 2,40 2,10 0,80 1,10 1,00 1,40
2,90 3,30 3,30 2,14 B 2,00 4,50 1,90 5,30 3,20 1,60 5,70 3,60 2,80 4,30 3,49
bega27
27 A
6,90 5,70 2,10 2,80 2,50 3,50 2,40
2,60 2,30 4,40 3,52 B 1,10 2,10 1,30 1,90 1,00 2,00 1,30 0,70 1,90 0,90 1,42
bega28 28 A 3,90 2,80 2,10 1,90 2,40 1,80 4,10 3,50 2,50 3,20 2,82 B 1,30 0,90 1,30 1,50 0,80 2,60 1,60 1,50 1,80 1,90 1,52
W6 Méd 1,73 W6 Méd 1,95
DP
1,11
DP
0,84
Máx
2,83
Máx
2,79
Mín
0,62
Mín
1,11
begc01 1 C 2,80 2,10 3,40 3,00 2,80 2,90 4,90 4,70 3,50 2,00 3,21 D 2,90 3,50 3,60 3,30 3,60 4,10 4,90 3,10 3,30 3,20 3,55
begc02
2C
2,70 3,40 3,40 2,80 2,80 3,70 2,80
2,00 3,00 4,00 3,06 D 2,20 3,10 2,80 3,70 2,90 2,90 3,60 3,80 4,70 5,10 3,48
begc03
3C
4,10 4,00 4,10 3,60 2,80 5,80 3,40
2,80 4,00 3,90 3,85 D 1,60 1,20 2,80 0,70 2,30 2,20 4,50 3,00 2,80 3,00 2,41
begc04
4C
2,00 1,80 1,40 2,10 2,30 1,60 2,90
2,70 2,70 2,90 2,24 D 3,90 4,60 4,30 1,00 4,70 2,90 2,80 3,40 3,80 3,10 3,45
begc05
5C
3,20 3,00 1,20 1,60 1,80 1,80 1,30
1,80 2,00 1,60 1,93 D 2,30 1,20 2,00 2,90 1,90 4,60 1,20 1,70 1,80 3,30 2,29
begc06
6C
2,20 2,90 2,50 1,50 1,60 3,10 2,50
2,50 1,60 2,50 2,29 D 3,70 4,00 3,40 1,50 0,90 3,10 2,70 2,50 3,30 2,00 2,71
begc07
7C
3,80 4,00 3,40 3,10 3,90 4,80 3,10
3,50 2,80 3,80 3,62 D 5,20 0,80 3,40 3,30 2,40 4,80 2,50 4,70 3,60 3,00 3,37
W3 Méd 2,89 W3 Méd 3,04
DP
0,74 DP 0,55
Máx
3,63 Máx 3,58
Mín
2,15 Mín 2,49
begc08
8C
2,90 2,60 1,90 3,60 1,80 3,10 2,40
3,50 3,40 3,50 2,87 D 3,20 0,90 2,00 0,80 2,40 2,80 2,40 3,00 4,40 2,70 2,46
begc09
9C
3,70 5,90 3,50 3,60 4,10 4,50 4,90
3,10 3,50 1,10 3,79 D 1,90 0,90 1,80 2,10 2,00 2,00 1,70 1,10 1,20 1,00 1,57
begc10
10 C
2,60 2,60 2,10 1,80 1,20 1,90 2,10
1,50 2,80 2,90 2,15 D 3,30 4,40 1,90 5,20 5,50 4,30 1,60 2,50 1,60 2,60 3,29
begc11
11 C
1,90 1,60 2,00 1,40 1,40 2,80 1,70
2,80 3,40 3,70 2,27 D 0,50 1,00 0,50 0,60 0,50 0,70 0,80 2,30 4,00 3,00 1,39
begc12
12 C
0,70 2,60 4,20 4,00 4,00 4,00 4,50
2,10 3,10 5,90 3,51 D 4,80 4,30 4,00 2,30 2,60 1,50 1,50 2,00 1,80 2,10 2,69
begc13
13 C
0,70 0,80 1,70 1,20 1,90 1,10 0,70
1,60 0,30 0,40 1,04 D 1,30 2,00 1,30 2,10 1,60 2,40 0,90 1,30 0,80 2,30 1,60
begc14
14 C
0,90 1,40 0,60 0,40 0,40 0,50 0,30
0,70 0,20 0,20 0,56 D 0,00 0,10 0,10 0,30 0,10 0,50 0,30 0,20 0,10 0,20 0,19
W4 Méd 2,31 W4 Méd 2,17
DP
1,20 DP 0,76
Máx
3,51 Máx 2,93
Mín
1,11 Mín 1,40
begc15
15 C
2,50 1,30 1,10 1,70 1,40 1,60 0,60
0,90 1,00 1,50 1,36 D 1,30 1,30 1,10 1,70 1,40 1,60 1,60 0,80 1,40 1,50 1,37
begc16
16 C
0,60 0,50 0,60 0,40 0,70 0,80 1,00
0,60 1,20 0,60 0,70 D 0,90 1,80 2,20 1,20 1,20 1,50 1,50 0,40 0,50 0,50 1,17
begc17
17 C
0,90 0,70 1,70 1,40 0,30 0,20 1,00
0,90 0,30 0,30 0,77 D -
begc18
18 C
0,90 2,00 1,10 1,40 1,20 1,00 1,60
2,00 2,00 1,60 1,48 D 0,70 2,10 1,20 0,70 1,20 0,90 1,50 0,70 0,30 0,60 0,99
begc19
19 C
0,50 1,10 0,40 0,30 1,30 0,90 1,10
1,50 1,60 1,30 1,00 D 1,60 1,20 0,50 0,80 1,00 1,00 0,60 1,10 0,60 0,50 0,89
begc20
20 C
1,50 1,00 0,90 0,60 0,90 0,50 0,90
1,40 4,50 2,80 1,50 D 1,50 1,00 0,90 0,60 0,90 0,50 0,90 1,30 1,80 1,80 1,12
begc21
21 C
0,40 0,90 0,90 0,30 0,30 0,10 0,10
3,40 1,80 0,90 0,91 D 1,00 2,20 1,50 1,30 1,80 1,00 0,80 1,70 1,60 1,10 1,40
W5 Méd1,10 W5 Méd1,16
DP
0,34 DP 0,20
Máx
1,44 Máx 1,36
Mín
0,76 Mín 0,95
begc22
22 C
1,20 2,50 1,80 2,10 2,50 2,40 1,20
1,40 4,00 2,40 2,15 D 0,80 0,40 0,40 1,00 0,50 0,50 0,20 1,90 1,20 0,80 0,77
begc23
23 C
0,50 0,60 1,40 0,30 0,60 0,90 0,20
3,30 1,30 0,40 0,95 D 0,40 0,90 1,80 2,60 5,00 3,70 3,20 3,90 3,30 5,50 3,03
begc24
24 C
1,50 1,70 1,80 1,10 1,80 1,90 2,20
2,00 1,30 1,10 1,64 D 1,30 0,20 0,30 2,70 0,40 0,20 0,70 0,50 1,30 1,10 0,87
begc25
25 C
0,50 0,60 0,60 1,30 1,20 0,80 0,90
1,60 1,30 0,50 0,93 D 3,80 2,80 2,50 1,50 1,10 2,30 4,00 1,60 2,40 1,80 2,38
begc26
26 C
3,20 2,30 2,90 3,20 2,90 3,40 2,90
3,20 2,00 2,10 2,81 D 2,90 2,40 1,70 1,80 3,00 1,50 1,40 2,90 2,80 2,90 2,33
begc27
27 C
1,50 1,20 1,40 2,30 0,70 4,60 4,20
4,00 2,70 1,50 2,41 D 4,10 3,20 3,20 3,00 5,40 3,80 3,70 3,40 1,90 2,90 3,46
begc28
28 C
1,20 3,70 1,80 1,90 1,30 2,60 2,20
2,80 1,20 1,60 2,03 D 5,50 4,70 3,90 5,00 2,60 2,80 4,40 5,00 4,90 2,60 4,14
W6 Méd 1,85 W6 Méd 2,43
DP 0,71 DP 1,26
Máx 2,56 Máx 3,69
Mín 1,13 Mín 1,16
Quadro 9 - Porcentual de expressão Tgfb2 em cripta de cólon ascendente quantificado pelo Imagelab
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60
10. ANEXOS
61
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