( PDF ) Descrição histopatológica de lesões de músculo peitoral e rim associadas à infecção de campo por vírus da bronquite infecciosa em matrizes e frangos de corte ocorrida no Oeste e Sul de Santa Catarina

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CRISTIANE REGINA CANTELLI

DESCRIÇÃO HISTOPATOLÓGICA DE LESÕES DE MÚSCULO

PEITORAL E RIM ASSOCIADAS À INFECÇÃO DE CAMPO POR

VÍRUS DA BRONQUITE INFECCIOSA EM MATRIZES E FRANGOS

DE CORTE OCORRIDA NO OESTE E SUL DE SANTA CATARINA

LAGES – SC

2007

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UNIVERSIDADE DO ESTADO DE SANTA CATARINA – UDESC

CENTRO DE CIÊNCIAS AGROVETERINÁRIAS – CAV

MESTRADO EM CIÊNCIAS VETERINÁRIAS

CRISTIANE REGINA CANTELLI

DESCRIÇÃO HISTOPATOLÓGICA DE LESÕES DE MÚSCULO

PEITORAL E RIM ASSOCIADAS À INFECÇÃO DE CAMPO POR

VÍRUS DA BRONQUITE INFECCIOSA EM MATRIZES E FRANGOS

DE CORTE OCORRIDA NO OESTE E SUL DE SANTA CATARINA

Dissertação apresentada à coordenação

do curso de Mestrado em Ciências

Veterinárias, como requisito parcial para a

obtenção do título de Mestre.

Orientador: Dr. Célso Pilati

Lages – SC

2007

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CRISTIANE REGINA CANTELLI

DESCRIÇÃO HISTOPATOLÓGICA DE LESÕES DE MÚSCULO

PEITORAL E RIM ASSOCIADAS À INFECÇÃO DE CAMPO POR

VÍRUS DA BRONQUITE INFECCIOSA EM MATRIZES E FRANGOS

DE CORTE OCORRIDA NO OESTE E SUL DE SANTA CATARINA

Dissertação apresentada à coordenação do curso de Mestrado de Ciências

Veterinárias, como requisito para a obtenção do título de Mestre

Banca Examinadora

Orientador: _______________________________________

Prof. Dr. Célso Pilati

Universidade do Estado de Santa Catarina

Membro _______________________________________

Prof. Dr. David Driemeier

Universidade Federal do Rio Grande do Sul

Membro: _______________________________________

Prof. Dra. Glaucia Denise Kommers

Universidade Federal de Santa Maria

Lages, 05 de outubro de 2007

AGRADECIMENTOS

“Celebrar a vida é somar amigos, experiências e conquistas, dando-lhes

sempre algum significado” (Autor Desconhecido). Sendo assim, gostaria de

agradecer as pessoas que, juntamente comigo, fizeram parte dessa etapa e tiveram

seu importante significado:

Ao Professor Célso Pilati, pela orientação, pela grande confiança e

credibilidade, pelos ensinamentos em Patologia Animal e por todos os outros

ensinamentos de vida que ficarão gravados, meu eterno agradecimento.

A todos os professores do mestrado e, em especial, ao professor Aldo Gava,

diretor do Laboratório de Patologia Animal; Professor Alceu Mezzalira, coordenador

do curso de mestrado em Ciências Veterinárias, e ao Professor Aury, pelo incentivo

na conclusão deste curso.

Agradeço a todos os bolsistas, estagiários e funcionários do Laboratório de

Patologia Animal, especialmente à Rita, que ajudaram na coleta e processamento de

material, seus auxílios foram para a execução de todo o processo.

A todos os colegas de turma do mestrado, em especial ao Fernando Furlan,

Denis Spricigo e Luana Neis, pela troca de experiências e também por todos os

churrascos que pudemos compartilhar.

À Perdigão Agroindustrial S/A e Wiper Industrial de Alimentos, pelo auxílio e

disponibilidade na realização da coleta de materiais deste estudo.

Aos meus pais, Dirceu e Salete, sabendo que somente agradecer é pouco

para retribuir tudo o que fizeram por mim. Agradeço toda a preocupação, confiança,

amor, e espero estar proporcionando mais um motivo de orgulho para vocês.

A minha nona Graciosa, por toda sua imensa fé e carinho compartilhados em

toda minha caminhada.

Ao meu namorado Tiago: “O dia mais importante não é o dia em que

conhecemos uma pessoa, e sim quando ela passa a existir dentro de nós”. Agradeço

seu amor, seu companheirismo, seu apoio e paciência.

Toda equipe de matrizes da Perdigão Agroindustrial S/A., Regional de Santa

Catarina, em especial às amigas Rose, Alethéia, Mônica e Fernanda pelas horas de

trabalho conjunto visando ao mesmo objetivo, pela descontração, risadas,

conversas, e ao Juliano pela compreensão e confiança.

Aos meus familiares e a todos os colegas de Empresa que contribuíram com

sua amizade. Muito Obrigada.

RESUMO

Relata-se a ocorrência de quatro surtos espontâneos de Bronquite Infecciosa (BI)

cursando com nefrite e miopatia peitoral objetivando descrever as lesões macro e

microscópicas do rim e músculo. Três surtos ocorreram em frangos de corte

afetando diversos lotes. Um surto ocorreu em matrizes afetando dois núcleos de

criação. Nos frangos de corte, foi observado em alguns lotes alta mortalidade, alto

índice de descarte e em outros alta condenação no abatedouro. Também

observou-se, ronquidão, apatia e desuniformidade. No lote de matriz, foi

observada queda de produção e mortalidade elevada. Todos os animais em que foi

realizada sorologia foram positivos para BI, o mesmo para o lote em que foi

realizada PCR. Na necropsia, observou-se tumefação e palidez renal, palidez e

estrias esbranquiçadas principalmente do músculo peitoral profundo, e em alguns

casos leve edema. No exame histopatológico, as lesões renais consistiam de

hiperplasia glomerular de moderada a intensa, em alguns casos degeneração

tubular e infiltrado inflamatório multifocal intersticial. No músculo, foi observado

edema intersticial, degeneração hialina, vacuolização, hipercontração e miofagia de

fibras musculares. Em um caso observou-se fibrose moderada. Em outros foram

observadas infiltração linfocitária de leve a moderada na traquéia. Nas matrizes,

além das lesões descritas, observou-se hiperplasia linfóide peribronquial e

degeneração hialina nos vasos pulmonares. Em todos os casos foi observada uma

estreita relação entre lesão renal e muscular.

Palavras-chave: Bronquite Infecciosa. Miopatia. Nefropatia. Frangos de corte.

Matrizes.

ABSTRACT

This report describes the occurrence of four natural outbreaks of Infectious

Bronchitis (IB) accompanied by nephritis and pectoral myopathy. The objectives are

to describe the macro and microscopical injuries of the kidneys and muscle. Three

outbreaks affected different flocks of broilers. One case occurred in broiler breeders

affecting two houses of a farm. In the broilers, high mortality and high index of

discarding was observed and also high condemnation in the abattoir. Respiratory

snicks, apathy and ununiformity were observed. In the flock of broiler breeders,

decline of production and high mortality were noticed. All the animals where positive

for IB serology, and positive results were also obtained on the flock where PCR was

carried through. In the necropsy, swollen and renal pallor were observed, pallor and

white streaks mainly of the deep pectoral muscles, and in some cases mild edema.

In the histopathology examination, the kidney injuries consisted of moderate to

intense glomerular hyperplasia, in some cases interstitial multifocal inflammatory

infiltrate and tubular degeneration. In the muscle, interstitial edema was found,

hyaline degeneration, vacuolation, hypercontraction and myophagia of the muscle

fibres. In one case, moderate fibrosis was observed. In other cases, mild to

moderate lymphocytic infiltration was observed in the trachea. In the broiler

breeders, other than the described lesions, a peribrochial lymphoid hyperplasia and

hyaline degeneration was noted in the pulmonary vessels. In all the cases a close

relation was observed between renal and muscular injury.

Keywords: Infectious Bronchitis. Miopathy. Nefropathy. Broilers. Broiler Breeders.

LISTA DE FIGURAS

Figura 01 – Frango de corte 45 dias. Lesão renal. Rins aumentados de volume e

pálidos. Surto nº 1................................................................................40

Figura 02 – Frango de corte 45 dias. Músculo peitoral profundo com áreas e

estrias pálidas. Surto nº 1....................................................................40

Figura 03 - Ave com 56 dias. Corte transversal de músculo peitoral profundo.

Degeneração hialina de fibras, vacuolização e edema intersticial. H&E.

MO. Obj. 40x. Surto nº 1.......................................................................41

Figura 04 – Ave com 98 dias. Músculo peitoral profundo difusamente

esbranquiçado. Surto nº1.....................................................................43

Figura 05 - Ave com 98 dias. Corte longitudinal de músculo peitoral profundo.

Hipercontração de fibras, vacuolização e degeneração em gotas

hialinas. Surto nº 1.H&E. MO. Obj 40x.................................................43

Figura 06 - Ave com 115 dias. Músculo peitoral profundo com extensa área

branco-amarelada de consistência diminuída. Surto nº 1....................44

Figura 07 – Frango de corte com 115 dias. Músculo peitoral profundo com extensa

área de necrose, intensa miofagia e fibrose. Surto nº1. H&E. MO.

Obj.40x.................................................................................................45

Figura 08 – Frango de corte com 115 dias. Músculo peitoral profundo com intensa

fibrose.Tricômero de Masson. Surto nº1 MO. Obj. 40x.......................45

Figura 09 - Frango de corte com 30 dias. Corte longitudinal de músculo peitoral

profundo demonstrando intensa miofagia de fibra. Surto nº 2. MO.

Obj. 40x..................................................................................................46

Figura 10 – Matriz com 36 semanas. Corte de traquéia demonstrando infiltrado

linfocitário difuso moderado na mucosa. Surto nº 3. Lote A. H&E. MO

obj. 100x..............................................................................................48

Figura 11 – Matriz com 28 semanas. A) Hipercelularidade de glomérulo. B)

Glomérulos próximos do normal. Surto nº 3. Lote B. H&E. MO. Obj.

40x.......................................................................................................49

Figura 12 – Matriz com 28 semanas. Rim com infiltrado mononuclear intersticial.

Surto nº 3. Lote B. H&E. MO. Obj. 40x................................................49

Figura 13 – Frango de corte com 32 dias. Músculo peitoral profundo apresentando

miofagia intensa, vacuolização de fibras, degeneração hialina e edema

intersticial. Surto nº 4. Lote D. H&E. MO obj. 40x................................51

Figura 14 – Frango de corte com 32 dias. Músculo peitoral profundo apresentando

miofagia intensa, vacuolização de fibras, degeneração hialina e edema

intersticial. Surto nº 4. Lote D. H&E. MO obj. 40x................................51

SUMÁRIO

1. INTRODUÇÃO....................................................................................................................12

2. REVISÃO DE LITERATURA ............................................................................................14

2.1. Etiologia e Estrutura Viral.............................................................................................14

2.2. Variabilidade do VBI e Sorotipos .................................................................................15

2.3. A Doença: epidemiologia e sinais clínicos....................................................................18

2.3.1. Síndrome Nefrite-nefrose (SNN)................................................................................22

2.4. Lesões............................................................................................................................24

2.4.1. Aves jovens – menos de seis semanas de idade .....................................................24

2.4.2. Aves de postura – matrizes e poedeiras comerciais ...............................................25

2.4.3. Lesões Microscópicas.............................................................................................27

2.5. Miopatia Peitoral ...........................................................................................................28

2.6. Diagnóstico....................................................................................................................31

2.6.1. Isolamento do vírus ................................................................................................32

2.6.2. Diagnóstico sorológico...........................................................................................33

2.6.3. Diagnóstico diferencial...........................................................................................34

2.7. Controle e Vacinação.....................................................................................................34

3. MATERIAL E MÉTODOS..................................................................................................36

3.1 Materiais coletados.........................................................................................................36

3.2. Descrição dos surtos......................................................................................................37

3.2.1. Surto nº 01..............................................................................................................37

3.2.2. Surto nº 02..............................................................................................................38

3.2.3. Surto nº 03..............................................................................................................38

3.2.4. Surto nº 04..............................................................................................................38

4. RESULTADOS....................................................................................................................39

4.1. Surto nº 01 .....................................................................................................................39

4.1.1. Aves com 56 dias....................................................................................................41

4.1.2. Ave com 72 dias.....................................................................................................42

4.1.3. Ave com 98 dias.....................................................................................................42

4.1.4. Ave com 115 dias...................................................................................................44

4.2. Surto nº 02 .....................................................................................................................46

4.3. Surto nº 03 .....................................................................................................................47

4.3.1. Lote A.....................................................................................................................47

4.3.2. Lote B.....................................................................................................................48

4.4. Surto nº 04 .....................................................................................................................50

4.4.1. Lote A.....................................................................................................................50

4.4.2. Lote B.....................................................................................................................50

5. DISCUSSÃO........................................................................................................................52

6. CONCLUSÕES....................................................................................................................56

7. REFERÊNCIAS ..................................................................................................................57

1. INTRODUÇÃO

A Bronquite Infecciosa (BI), também chamada de Bronquite Infecciosa das

Galinhas, é uma doença respiratória viral, aguda, altamente contagiosa,

caracterizada por ruídos traqueais, tosse e espirros (CAVANAGH et al, 2003).

Causada por um coronavírus exclusivo das galinhas, não atacando outras

espécies de aves (Di FABIO, 1993) induz quadros clínicos dos mais variados,

conforme a idade das aves e o tipo de vírus (ITO, 1999) podendo ou não apresentar

sinais clínicos respiratórios (Di FABIO, 1993). O vírus ocorre em muitas variantes

antigênicas como conseqüência de mutações no seu genoma (MURPHY, et al

1999).

Possui grande importância econômica na avicultura industrial, pois provoca

aumento da mortalidade, diminuição do ganho de peso e eficiência alimentar em

frangos de corte, e queda na produção e qualidade interna e externa de ovos em

matrizes (CAVANAGH et al., 2003; ABREU, 2006).

A BI foi descrita pela primeira vez nos Estados Unidos por Schalk e Hawn

(1931) e observada apenas em pintinhos. Cinco anos mais tarde, Beaudette

demonstra que a infecção também ocorre em aves adultas. Depois foi identificada

em diversos países do mundo: Inglaterra/1948, Bélgica/1955, Itália/1955, Holanda/

1956, França/1959, Alemanha/1959, Argentina/1965, Chile/1976 (COLUSI et al.,

1965; HIDALGO et al., 1976).

No Brasil, foi identificada pela primeira vez por Hipolito, no Estado de Minas

Gerais em 1957, que suspeitou da sua presença devido à grande disseminação da

doença nos EUA, e às importações de aves vindas deste país (HIPOLITO, 1973).

Após sua descoberta, outros sorotipos foram sendo identificados ao longo

dos anos em vários países, sendo em 1973 a primeira identificação da síndrome

nefrite-nefrose no Brasil (HIPOLITO, 1973). A partir de 1980, iniciou o processo de

vacinação contra BI utilizando o sorotipo Massachussets, o único liberado para

vacinação no Brasil até os dias atuais (RESENDE, 2003).

Assim, devido à alta transmissão natural da doença e à ocorrência de

múltiplos sorotipos do VBI têm dificultado e aumentado o custo das medidas de

prevenção da doença (CAVANAGH et al., 2003). Surtos de BI nos últimos anos têm

sido menos freqüentes devido à utilização de vacinas, no entanto, a doença ainda

ocorre, até mesmo quando adiciona-se aves infectadas em plantéis vacinados

(MURPHY et al., 1999).

Um novo sorotipo de BI foi identificado na Europa em 1996 (GOUGH et al.,

1992; COOK et al., 1996), distinto do sorotipo vacinal Massachussets, provocando

além de sinais clínicos respiratórios e/ou queda de produção, lesões de miopatia nos

músculos peitorais não observados em surtos anteriores de BI. Essa forma atípica

da doença ainda não havia sido observada no Brasil.

A partir do ano de 2003 no Brasil vêm ocorrendo novos surtos atípicos de BI,

tanto em frangos de corte como em matrizes (TREVISOL et al., 2006), associados

com a apresentação deste novo tipo de lesão, caracterizado por degeneração e

necrose da musculatura peitoral (BRENTANO et al., 2005; TREVISOL et al., 2006),

entretanto essa nova etiopatogenia do VBI ainda precisa ser estudada (RESENDE,

2003).

Devido à falta de informações sobre a descrição das lesões musculares e

renais associadas com a Bronquite Infecciosa das Aves, o objetivo deste estudo foi

caracterizar histopatologicamente as lesões nestes órgãos provenientes de aves de

surtos de campo de bronquite infecciosa.

2. REVISÃO DE LITERATURA

2.1. Etiologia e Estrutura Viral

O Vírus da Bronquite Infecciosa (VBI), causador da Bronquite Infecciosa das

Aves, é um membro da família Coronaviridae, a qual inclui os gêneros Coronavirus e

Torovirus. O VBI está no grupo III do gênero Coronavirus (CAVANAGH et al., 2003)

e é completamente distinto de outros coronavirus que infectam aves (perus) e

mamíferos (RESENDE, 2003).

O VBI tem simetria helicoidal e genoma formado por RNA de fita simples, não

segmentado, de polaridade positiva e com aproximadamente 27,6 kb (PENA et al.,

2005). Tem estrutura pleomórfica, mas geralmente arredondado, com envelope de

aproximadamente 120 nm de diâmetro contendo projeções superficiais (espículas)

com cerca de 20 nm de comprimento (RESENDE, 2003).

O vírus é composto por três grandes proteínas estruturais: as glicoproteínas

da espícula (S) e de membrana (M) da superfície viral, e a nucleoproteína interna

(N). Acredita-se também, que há uma quarta proteína, associada com o envelope do

vírion, a proteína de membrana (E), necessária para a replicação viral (CAVANAGH

et al., 2003).

A proteína N está localizada na parte interna do vírion, estando intimamente

associada ao RNA viral. Anticorpos dirigidos contra essa proteína são os primeiros a

serem detectados após a infecção, entretanto, não estão associados com a proteção

(PENA et al., 2005). Mutações na proteína N podem afetar a estabilidade e a

viabilidade viral (RESENDE, 2003). A glicoproteína M interage com o

nucleocapsídeo interno da partícula viral e tem cerca de 225 aminoácidos, sendo

que desses, somente 10% estão exteriorizados no envelope viral. Tem papel

importante na replicação viral e no processo de recombinação natural entre

diferentes sorotipos de VBI (MURPHY et al., 1999; PENA et al., 2005).

A glicoproteína S é dividida em duas subunidades: S

e S

. A estrutura

espacial da proteína S

tem o formato de clava e penetra no envoltório lipídico da

membrana, atravessando-a. Mais externamente e aderida à S

, está a proteína S

em forma globular. A S

é responsável pela infectividade viral, é a principal indutora

da resposta imune protetora contra a infecção pelo VBI, e também a base dos testes

de diagnóstico para identificar e caracterizar as amostras virais (COOK et al., 1996;

RESENDE, 2003; PENA et al., 2005). A variação na sua composição aminoacídica é

a principal estratégia do VBI para escapar dos mecanismos de defesa do hospedeiro

(PENA et al., 2005).

A subunidade S

tem uma importante função na manutenção da estrutura

espacial da S

e qualquer variabilidade na S

pode afetar a configuração estrutural

da S

, o que dificulta o reconhecimento da mesma por anticorpos específicos

(RESENDE, 2003; PENA et al., 2005;).

De modo geral, o vírus é bastante sensível aos desinfetantes comuns e em

ambientes secos não sobrevive por longos períodos (Di FABIO, 1993).

2.2. Variabilidade do VBI e Sorotipos

Através do seqüenciamento do glicopolipeptídeo S, pode-se constatar que a

variabilidade entre os isolados de VBI concentra-se em duas regiões da subunidade

, chamadas de regiões hipervariáveis (CAVANAGH et al., 2003; PENA et al.,

2005).

Inicialmente as cepas variantes eram bem distintas dos sorotipos conhecidos;

a capacidade de mutação e recombinação do vírus, além da pressão de seleção

através do uso prolongado de vacinas vivas, contribuiu para o aparecimento através

dos anos de uma grande variedade de sorotipos e subtipos (Di FABIO, 1993).

Uma classificação do VBI utilizada atualmente é a dos Patotipos, ou seja, as

amostras são classificadas segundo os órgãos mais lesados pelo vírus. No geral,

dois ou mais sistemas são afetados, já que as amostras têm diferenças entre elas

com relação à virulência e o tropismo (Di FABIO, 2004).

Muitos sorotipos são conhecidos e algumas variantes antigênicas têm sido

relatadas. Dentre os sorotipos de VBI, Di Fabio (2004) relata os mais conhecidos:

- Massachussets (Mass): Primeiro sorotipo a ser descrito. Acomete os tratos

respiratório, reprodutivo e em menor grau o urinário. Altamente patogênica para o

sistema reprodutivo de fêmeas, mas não para o trato urinário, mesmo estando

presente em casos agudos de infecção.

- Beaudette: considerada como cepa mutante derivada da cepa

Massachussets, sendo apatogênica para aves. É uma amostra utilizada como

antígeno no teste de vírus-neutralização. Possui reação homóloga somente com o

sorotipo.

- Connecticut (Conn): primeira descrição de sorotipo diferente do Mass, não

tendo reação cruzada com este. Acomete o trato respiratório, porém é tida como

menos patogênica que a Mass. Causa as mesmas alterações microscópicas do que

a Mass. Não são relatadas infecções no trato genito-urinário.

- Amostras Nefrotrópicas: as amostras pertencentes a este grupo são Gray,

Holte, amostra T australiana e Holland. Esta última tem sua patogenicidade

diminuída quando inoculada sucessivamente em ovos embrionados, o que permite

sua aplicação em vacinas. Não perde, no entanto, a afinidade pelo tecido renal

- Arkansas: variante antigênica. Acomete os tratos respiratório e reprodutivo.

Não é relatada infecção no trato urinário.

Desde 1930 quando a BI foi reconhecida pela primeira vez, e em meados de

1950, quando foi iniciada a vacinação, apenas o sorotipo Mass era prevalente nos

EUA. Um segundo sorotipo foi identificado em 1950, o Connecticut (Conn) e logo se

iniciou o uso da vacina comercial com esta cepa (JIA et al., 2002).

Com a finalidade de verificar o conceito de que o único sorotipo existente no

EUA entre 1930 e 1950 era o Mass, Jia et al. (2002) analisaram 40 isolados de VBI,

sendo que trinta e oito destes foram identificados como pertencentes ao sorotipo

Mass, os outros dois não tiveram relação com aquele sorotipo. Os resultados

indicam que embora o sorotipo Mass fosse prevalente naquela época, outros

sorotipos também estavam presentes.

Cepas do sorotipo Mass têm sido isoladas na Europa desde 1940. Muitos

outros sorotipos, diferentes daqueles norte-americanos, também têm sido isolados

na África, Ásia, Índia, Japão e Coréia, Austrália e Europa (CAVANAGH et al., 2003).

El-Houdfi et al. (1986) isolaram e caracterizaram pela primeira vez o VBI no

Marrocos a partir de seis isolados de campo em lotes de frangos de corte. Cinco

destes isolados demonstraram ser relacionados ao sorotipo Mass, enquanto que o

sexto, designado G, não apresentou correlação com aquele sorotipo. Todos os

isolados causaram doença respiratória típica de VBI em inoculação experimental em

pintinhos SPF. A particularidade do isolado G refere-se a uma predileção do vírus

pelo trato digestivo, em que ele pode ser isolado do esôfago e proventrículo até 21

dias pós-inoculação, e do duodeno até 28 dias. O teste de proteção vacinal com o

sorotipo Mass protegeu contra todos os isolados, com exceção do isolado G.

Isolados variantes também foram descritos por Gelb et al. (1991) que

sorotipificaram 20 cepas de campo do VBI obtidas de aves de postura comercial e

frangos de corte. Nas aves de postura, de um total de sete isolados, cinco foram

considerados sorotipos variantes, sendo que dois diferentes foram isolados na

mesma granja de matrizes com idades múltiplas. Ao contrário do que ocorreu em

frangos de corte, de um total de 13 isolados, apenas um sorotipo foi considerado

variante.

Parsons et al. (1992) relataram quatro isolados variantes, semelhantes entre

si, mas diferentes de todos os outros isolados conhecidos, obtidos de dois lotes de

matrizes vacinadas que apresentaram aumento de mortalidade e queda na produção

de ovos. No experimento, o sorotipo vacinal Mass (H120) não protegeu as aves do

desafio com os novos isolados até 21 dias pós-inoculação.

Na Grã-Bretanha, pelo menos dez sorotipos distintos são conhecidos, todos

diferentes dos sorotipos descritos em muitos países através do mundo (COOK,

1990).

No Brasil, no período entre maio a dezembro de 1995, foi observado em

frangos de corte com idade entre 28 e 44 dias um significante aumento de doença

respiratória, acompanhados por problemas digestivos e renais. No mesmo período,

foi observada queda de produção em lotes de matrizes entre 25 e 60 semanas.

Estes problemas eram vistos principalmente nos Estados do Sudeste em São Paulo

e no Rio de Janeiro; do Sul, no Paraná; e Nordeste, no Estado da Bahia. Muitos

destes lotes não eram vacinados para BI. Di Fabio et al. (2000), caracterizaram os

isolados provenientes de 126 lotes de aves oriundas daqueles Estados. Foram

identificados 15 isolados do VBI, sendo que uma das cepas correspondia ao sorotipo

Mass, enquanto que as outras 14 eram pertencentes a pelo menos quatro grupos

antigênicos diferentes a todos os descritos até aquele momento em outros países,

confirmando a presença de VBI variantes também no Brasil.

A existência de sorotipos variantes no Brasil também foi confirmada por

Resende (2003) através de estudos com isolados de VBI obtidos de surtos ocorridos

em Minas Gerais de 1972 a 1989.

Sabe-se que muitos tipos sorológicos diferentes do VBI são encontrados em

muitos países diferentes e que vários sorotipos diferentes podem coexistir num

determinado país. Além disso, também está claro que os sorotipos comumente

encontrados em um determinado país podem se alterar no decorrer do tempo

(COOK, 1990).

Alguns autores sugerem a possibilidade de uma nova classificação do vírus,

não em sorotipos, mas em Protectotipos. Estes seriam amostras de vírus capazes

de conferir proteção contra sorotipos do mesmo grupo ou de grupos sorologicamente

distintos. Essa idéia provém do fato que, somente algumas alterações de

aminoácidos na glicoproteína S pode gerar o aparecimento de um novo sorotipo de

BI. Portanto, a maior parte da estrutura viral permanece inalterada acarretando em

reações cruzadas entre os sorotipos (Di FABIO, 2004).

A possibilidade da ocorrência de novos sorotipos de VBI é definida por dois

mecanismos: recombinação entre duas partículas virais antigenicamente diferentes,

ou como resultado da pressão de seleção imposta pelo uso, por várias décadas, da

vacina viva de BI. É provável que ambos os mecanismos sejam importantes (COOK,

1990).

O aparecimento de variantes é mais freqüente em plantéis de vida longa,

como reprodutoras e poedeiras, do que em frangos de corte, pelo maior tempo de

contato entre o vírus e o hospedeiro, múltiplas idades e uma maior possibilidade de

erros na replicação viral do genoma. Assim, na região hipervariável S

aparecimento de mutações antigênicas no gene S é grande e pode levar a

emergência de novos sorotipos (Di FABIO, 2004).

2.3. A Doença: epidemiologia e sinais clínicos

O VBI ataca aves de todas as idades, mas os pintos são mais suscetíveis e

apresentam maior mortalidade. As aves adultas, quando recebem o vírus sob a

forma de aerossol apresentam sintomas respiratórios 18 a 24 horas após a

inoculação (HIPOLITO et al., 1979).

A infecção ocorre via trato respiratório e a traquéia é o alvo primário. As

infecções pelo VBI têm um período de incubação curto e seus sinais clínicos como

estertores traqueais, exsudato nasal, são evidentes após 24 a 48 horas de

exposição ao vírus. Além disso, o VBI é um vírus altamente infeccioso, sendo

necessárias poucas partículas virais para iniciar uma infecção (COOK, 1990).

O vírus realiza a invasão via epitélio traqueal, seguido por uma viremia um a

dois dias após a infecção, distribuindo-se em outros órgãos (COOK, 1990;

MURPHY, 1999). Fora o trato respiratório, os tecidos nos quais o VBI é capaz de

causar lesões são os do ovário, oviduto e dos rins (Di FABIO, 1993). Atualmente,

tem-se descrito um novo sorotipo de VBI causando lesões também no músculo

peitoral superficial e profundo, associado ou não a outro tipo de lesão (DHINAKAR

RAJ e JONES, 1996).

A transmissão do vírus entre aves doentes e aves sadias se dá por contato

direto ou indireto. O vírus pode ser transmitido durante qualquer estágio respiratório

da doença e tem sido reisolado de aves infectadas até quatro semanas após a

inoculação. Os portadores são capazes de transmitir o vírus até 43 dias após a

ocorrência da doença e em alguns casos até mesmo depois de dois meses

(HIPOLITO et al., 1979). As aves recuperadas da infecção permanecem susceptíveis

a uma outra infecção por outro sorotipo do VBI (Di FABIO, 1993).

O vírus é excretado a partir do trato respiratório via aerossol por um período

superior a quatro semanas pós-infecção, mas via fezes por um período

consideravelmente maior. O vírus pode também ser excretado via ovo e tem sido

encontrado em pintos recém-nascidos, mas este não é reconhecido como um meio

importante de transmissão do VBI (COOK, 1993).

Estudos realizados por El-Houadfi et al. (1986) com seis isolados de VBI

demonstraram que, ao serem inoculados em aves de três semanas SPF os sinais

clínicos respiratórios de tosse, espirros e conjuntivite tiveram durações diferentes

entre os isolados, e sem ocorrência de mortalidade. Observaram também, que a

permanência dos isolados nos tecidos foi diferente, sendo que o vírus na maioria foi

detectado na traquéia entre 9 e 13 dias, embora em um isolado tenha sido detectado

aos 28 dias. Apenas dois isolados, foram encontrados nos rins, e outros dois nas

fezes.

Os sinais clínicos são dependentes das idades afetadas e sorotipo do VBI.

Em aves jovens, os sinais respiratórios característicos são tosse, espirros, descarga

nasal e ruídos traqueais. Cabeça inchada também pode ser observada, e em alguns

casos, pode haver inchaço dos sinusóides. As aves apresentam-se apáticas,

procuram se aquecer, diminuem consumo de alimentos e ganho de peso

(CAVANAGH et al., 2003).

As infecções respiratórias podem ser complicadas pela presença de

Mycoplasma gallisepticum, M. sinoviae e Escherichia coli, resultando em pericardite,

aerossaculite, peri-hepatite e peritonite (PENA et al., 2005).

Estudos de sorotipificação com isolados de campo de VBI realizados por Gelb

et al. (1991) confirmam que a variação de sinais clínicos da doença está ligada ao

sorotipo e à idade das aves. Cinco isolados foram obtidos de plantéis não vacinados

de frangos de corte que apresentaram doença respiratória, alta mortalidade e

condenação ao abate. Um lote de matrizes que tinha sido vacinado com vacina viva

Mass foi o provável causador da disseminação do vírus nos frangos. Isolados de VBI

também foram obtidos de outro lote de frangos de corte com doença respiratória e

com E. coli associada causando aerossaculite. VBI também foi isolado de um lote de

matrizes com 26 semanas, vacinado, apresentando queda de postura de 15%. Todo

complexo da granja tinha histórico de problemas de produção e qualidade de ovos.

Em aves com idade acima de seis semanas e em aves adultas, os sinais

clínicos são similares, porém não ocorre descarga nasal com freqüência. A doença

pode passar despercebida se o plantel não for observado com cuidado, pois os

sinais são pouco intensos, e os ruídos são apenas observados à noite quando as

aves estão normalmente em silêncio (CAVANAGH et al., 2003).

DiFabio et al. (2000) examinaram vários isolados de VBI provenientes de

surtos de campo em frangos de corte com idade entre 30 a 40 dias, em que

puderam ser observados os seguintes sinais clínicos: lote 1, infecção respiratória +

diarréia; lote 2, sinais respiratórios + aumento de mortalidade; lote 3, sinais

respiratórios.

Em lotes de poedeiras comerciais e matrizes, são vistos declínios na

produção e qualidade de ovos em adição aos sinais respiratórios. Em muitos casos

são observadas alterações na coloração da casca dos ovos, queda de produção e

ausência de sinais respiratórios (CAVANAGH et al., 2003).

A queda de postura pode chegar a 25%, e a incubabilidade pode reduzir em

7%, devido ao aparecimento de ovos de casca mole, sem casca ou com casca

rugosa. A qualidade interna do ovo também é afetada, o albúmen apresenta-se

aquoso (HIPOLITO et al., 1979). A severidade da queda de produção vai variar com

a idade da matriz e com a virulência do VBI (CAVANAGH et al., 2003). Pode ainda

não haver alteração dos ovos e as quedas serem representadas por oscilações na

postura diária (Di FABIO, 1993).

Parsons et al. (1992) caracterizaram o VBI de dois lotes de matrizes de

postura com idades diferenciadas e que apresentaram aumento de mortalidade e

queda na produção de ovos.

Um dos lotes de matrizes com 29 semanas apresentou diminuição do

consumo de ração e aumento da mortalidade em 0,65% de um dia para o outro. Os

sinais clínicos observados foram letargia, depressão, inchaço ao redor dos olhos,

olhos fechados, agitação da cabeça, dificuldade respiratória e asas abertas. Entre 28

e 30 semanas a mortalidade aumentou para 1,5%. Foi observada queda na

produção de ovos de 8% e perda de coloração de casca.

Dois dias depois do início dos sinais clínicos do lote anterior, outro lote de

matrizes com 55 semanas, situado a um quilômetro de distância, também

apresentou sinais clínicos semelhantes. A mortalidade aumentou, houve queda de

produção de 51,9% para 29,5% por quatro semanas, depois mostrou alguma

melhora. Os dois lotes eram vacinados para BI.

Queda na produção de ovos associada com aumento na mortalidade também

foi observada por Di Fabio et al. (2000) em lotes de matrizes entre 25 e 30 semanas

em que foi isolado VBI.

Cook et al. (1986) avaliaram o efeito de três isolados de VBI em relação à

queda de produção de ovos e alteração de coloração de casca em matrizes de

postura comercial. Observaram que os isolados, quando inoculados em aves de

postura de ovos marrons, produziram pequena alteração na produção de ovos, mas

uma significativa alteração na coloração da casca, reportando a importância

econômica deste tipo de infecção.

Infecções em matrizes com um dia podem produzir danos irreversíveis ao

oviduto conduzindo a uma baixa produção e qualidade de ovos quando as aves

entrarem em produção, transformando-se em falsas poedeiras. Presença de

anticorpos maternos tem demonstrado proteger o oviduto de danos provocados pelo

VBI nos primeiros dias de vida (CAVANAGH et al., 2003).

A duração dos sinais clínicos varia de um galpão a outro e entre as aves do

mesmo galpão. Os sinais cessam entre 7 a 18 dias após o início da infecção. A

morbidade no plantel é alta (CAVANAGH et al., 2003), mas a mortalidade que pode

alcançar 25%, só afeta as aves mais jovens, principalmente os pintos (HIPOLITO et

al., 1979).

2.3.1. Síndrome Nefrite-nefrose (SNN)

A infecção respiratória inicial pode ser seguida pela infecção de outros

tecidos, principalmente os do trato reprodutivo da fêmea e os dos rins. Em

decorrência, a irregular produção de ovos ou a nefrite podem ser a seqüela de uma

traqueíte inicial (COOK, 1990).

Alguns sorotipos, denominados sorotipos nefropatogênicos, determinam

lesões renais com vários graus de comprometimento. Esses sorotipos estão

relacionados na etiologia da nefrite-nefrose aviária (PENA et al., 2005).

Os sorotipos nefropatogênicos mais conhecidos são o Holte, Gray e a

Amostra T. Algumas cepas menos atenuadas do sorotipo Holland também causam

lesões no aparelho urinário como a H52. Cepas do sorotipo Massachussets também

podem lesionar o sistema urinário de maneira moderada a severa (Di FABIO, 1993;

ITO, 1999).

Estudos ultraestruturais de rins infectados pelo VBI nefropático revelam que

as células epiteliais do baixo néfron e ductos são os locais primários de replicação

do VBI (CAVANAGH et al., 2003).

VBI nefropáticos geralmente induzem depressão, penas arrepiadas, fezes

aquosas e aumento do consumo de água após o término da fase respiratória.

Empastamento de cloaca e/ou diurese é observado em alguns casos e, comumente,

aves assintomáticas apresentam somente lesões microscópicas no rim

caracterizadas por necrobiose tubular e hiperplasia linfóide. Cepas mais patogênicas

podem induzir a nefrite-nefrose (ITO, 1999).

Hipólito et al., em 1973, isolaram pela primeira vez no Brasil o sorotipo do VBI

causador da SNN, que já havia sido identificado na Austrália e nos Estados Unidos.

Em complementação com aquele estudo, July et al. (1973), analisaram os aspectos

ultraestruturais da partícula viral e descreveram um método mais rápido e simples do

que o descrito por Hipólito et al. (1973), para o diagnóstico laboratorial da doença.

Em outra pesquisa envolvendo seis granjas em Minas Gerais e São Paulo,

com uma população total de mais de 300 mil frangos, Lamas et al. (1979) estudaram

os aspectos clínicos e anatomopatológicos da SNN em aves com idades entre 15 a

45 dias.

Os principais sinais clínicos observados foram aspecto úmido da cama,

mortalidade elevada, cianose de crista e barbela, e diarréia branco-leitosa. O

canibalismo também foi constatado no início da doença, principalmente nos lotes

com 15 e 23 dias de idade.

Macroscopicamente, as aves apresentavam as seguintes lesões: na traquéia

das aves com 23, 35 e 42 dias, observou-se discreta congestão e presença de um

líquido seromucoso; o rim apresentou aumento de volume, duas a três vezes o

tamanho normal, consistência friável e preenchido por um material branco-leitoso,

ureteres dilatados e repletos do mesmo material encontrado nos rins. Os demais

órgãos não apresentaram lesões.

Microscopicamente, a traquéia apresentou edema, congestão discreta e

infiltração de células mononucleares no epitélio e lâmina própria. Em alguns casos,

havia hiperplasia dos folículos linfóides isolados na submucosa. Os pulmões

apresentaram discreta bronquite catarral nos grandes brônquios e hiperplasia

folicular adjacente.

As lesões renais se caracterizaram por degeneração turva e necrose de

coagulação tubular, edema intersticial, acentuado acúmulo de uratos e cilindros

granulosos intratubulares. Além das lesões degenerativas, os autores observaram

uma nefrite intersticial aguda difusa com exsudato de células mononucleares

(linfócitos) tanto na cortical como na medular. Os glomérulos renais mostraram-se

invadidos por células inflamatórias dando um quadro de glomerulite aguda.

Amostras de soro coletadas durante a fase aguda da doença e submetidas à

prova de neutralização foram negativas. No segundo teste, realizado três semanas

após o início do surto nas granjas infectadas o resultado foi positivo para BI.

Butcher et al. (1990) isolaram de rins de frangos de corte uma cepa

Massachussets nefropatogênica designada H13-IBV. Em infecção experimental com

pintinhos SPF, os sinais clínicos observados foram distúrbios respiratórios,

depressão e diarréia.

Macroscopicamente, os rins apresentaram coloração pálida, aumento de

volume e deposição de uratos; engrossamento e edema de sacos aéreos; congestão

da traquéia e presença de exsudato seroso na mucosa.

Na microscopia, as lesões renais se caracterizavam por infiltrado

mononuclear intersticial, degeneração e necrose das células epiteliais; traquéia com

perda dos cílios, infiltrado inflamatório e metaplasia escamosa. As lesões renais

foram mais severas em pintinhos infectados até um dia de idade.

Sinais clínicos semelhantes em frangos de corte foram observados por Lin et

al. (1991) quando isolaram quatro VBI nefropatogênicos diferentes do sorotipo

vacinal utilizado. Na necropsia, constatou-se rins aumentados de volume com

túbulos proeminentes e ureteres distendidos caracterizando uma nefrite

tubulointersticial.

Em 2002, Landman et al. avaliando a proteção vacinal conferida por uma

cepa nefropatogênica, PA/Wolgemuth/98, na Pensilvânia, observaram as seguintes

lesões microscópicas renais provocadas pela cepa em questão: leve a severa

infiltração linfoplasmocitária nos cones medulares, edema, infiltrado heterofílico,

degeneração e necrose tubular.

2.4. Lesões

As lesões limitam-se à traquéia, pulmões e brônquios, mas está na

dependência da idade em que a ave foi afetada e o sorotipo do VBI.

2.4.1. Aves jovens – menos de seis semanas de idade

Sistema Respiratório

As lesões mais comumente encontradas são edema e exsudato catarral ou

mucoso na traquéia e brônquios, congestão pulmonar, inflamação catarral ou

fibrinosa nos sacos aéreos, pericardite e pleurite. Pintos muito novos apresentam

inflamação catarral das vias aéreas e dos seios causando descarga nasal e

lacrimejamento. A coagulação do exsudato forma tampões que podem vedar a luz

da laringe e produzir morte por asfixia. O quadro clínico da síndrome da cabeça

inchada, ou seja, conjuntivite, edema de barbela e sinusite muco-purulenta pode

estar associado ao VBI. Observa-se também, espessamento da mucosa e

submucosa da traquéia. (DiFABIO, 1993; HIPOLITO, 1979).

Em aves em crescimento a traqueíte é o achado mais constante, a mucosa

apresenta-se edemaciada, às vezes congesta e com a superfície coberta por um

exsudato que pode ser claro ou turvo (HIPOLITO, 1979).

Sistema Urinário

As amostras nefrotrópicas produzem de moderada a severa diarréia,

desidratação e graves lesões renais com nefrite, nefrose e urolitíase (GELB et al.,

1991; Di FABIO, 1993).

Especula-se se a urolitíase não seria uma interação de um vírus da BI

associado a altas dietas de cálcio e baixas de fósforo. Falta de água também não

pode ser descartada (Di FABIO, 1993).

Cavanagh et al. (2003), citam autores que realizaram experimentos utilizando

altos níveis de cálcio na alimentação das aves seguido por infecção com a cepa

Gray desenvolvendo assim urolitíase e lesões renais. Em contrapartida, nas mesmas

condições, somente o aumento da taxa de cálcio na alimentação das aves durante

oito semanas não produziu urolitíase.

2.4.2. Aves de postura – matrizes e poedeiras comerciais

Sistema respiratório

Nas aves adultas as lesões são mais ou menos semelhantes às observadas

nas aves em crescimento. O edema é geralmente bem pronunciado e a mucosa

traqueal, não raro, se apresenta coberta por um exsudato mucoso (Di FABIO, 1993).

Muitas vezes não apresentam lesão macroscópica na traquéia, mas podem tornar-se

improdutivas apresentando atrofia ou hipotrofia do oviduto (BACK, 2002).

Em poedeiras comerciais, e menos freqüente em reprodutoras pesadas, pode

ocorrer sinusite e traqueíte complicadas, quando a infecção com o VBI estiver

associada com M. gallisepticum e M. synoviae (BACK, 2002).

Parsons et al. (1992) isolaram o VBI em dois lotes de matrizes de frangos de

corte apresentando queda de produção e mortalidade elevada. As aves

necropsiadas apresentaram carcaças pálidas, traqueíte e grande quantidade de

muco. Rins estavam pálidos e aumentados de volume e pulmões congestos.

Sistema urinário

As lesões vão de discretas, como um ligeiro aumento renal, a um quadro de

urolitíase que é uma condição de degeneração renal seguida de atrofia renal,

fibrose, presença de pedra nos rins formada nos ductos coletores e ureteres de aves

afetadas. Aves mortas geralmente apresentam um quadro de gota úrica visceral

(GELB et al., 199; Di FABIO, 1993).

Nefropatias crônicas ou mesmo problemas digestivos induzidos pelo VBI de

tropismo diferenciado, podem comprometer a qualidade da casca devido à alteração

no metabolismo do cálcio, fósforo e minerais essenciais (ITO, 1999).

Sistema reprodutor

Fase de viremia em que algumas cepas podem atingir e lesar o sistema

reprodutor causando atrofia de ovário, ooforite não purulenta, salpingite com queda

leve a severa na produção de ovos (Di FABIO, 1993).

De modo geral não são observadas lesões macroscópicas no oviduto, exceto

discreto encurtamento. No entanto, a severidade das lesões macro e microscópicas

podem variar conforme a patogenicidade da amostra, idade de infecção, tempo pós-

infecção, e associação com E. coli (ITO, 1999).

Material fluido da gema pode ser encontrado na cavidade abdominal das

fêmeas em produção infectadas pelo VBI (CAVANAGH et al., 2003).

Quando a infecção ocorre nas primeiras semanas de vida ou durante a

maturação do sistema reprodutor, observam-se aves com oviduto e ovário infantil,

tornando-se improdutivas ao longo da vida (BACK, 2002).

Sistema Digestivo

Amostras de VBI com enterotropismo podem estar associadas com

gastroenteropatias, diarréias, diurese e injúria epitelial na bolsa de Fabrícius (Di

FABIO, 1993; ITO, 1999).

Em 1996, na China, foi descrito um sorotipo de VBI causando lesões no

proventrículo em frangos de corte. A doença era caracterizada por um inchaço no

proventrículo, hemorragia e ulceração do órgão (CAVANAGH et al., 2003).

No mesmo país, foram descritos casos em que as aves apresentavam sinais

de depressão, olhos inchados, lacrimejamento, diarréia e sinais respiratórios. A

morbidade foi de 100% e a mortalidade 20%. Lesões macroscópicas demonstraram

que a lesão primária foi o aumento de tamanho/inchaço do estômago glandular

(CAVANAGH et al., 2003).

2.4.3. Lesões Microscópicas

Microscopicamente observa-se hiperplasia e metaplasia epitelial na traquéia e

nos brônquios, edema e infiltração de heterófilos, monócitos e linfócitos na lâmina

própria (BACK, 2002).

Infiltração linfocitária também pode ser vista no oviduto, associada com

metaplasia do epitélio, dilatação glandular e proliferação dos folículos linfóides. O

epitélio do oviduto das fêmeas adultas apresenta-se edemaciado e com infiltração

de células inflamatórias (BACK, 2002).

As lesões renais são características de nefrite intersticial. O vírus causa uma

degeneração hidrópica, vacuolização e descamação do epitélio tubular, infiltração

severa de heterófilos no interstício nos estágios agudos da doença. As lesões nos

túbulos são mais proeminentes na medular. Áreas focais de necrose podem ser

vistas como indicadores de regeneração do epitélio tubular (CAVANAGH et al.,

2003).

Em muitos casos, as alterações degenerativas podem persistir e provocar

uma severa atrofia de uma ou todas as divisões dos néfrons. Na urolitíase, os

ureteres associados com a atrofia renal ficam distendidos por acúmulos de uratos

formando cálculos (CAVANAGH et al., 2003). Observa-se também necrose do

epitélio tubular e acúmulo de material necrótico no lúmen (BACK, 2002).

Algumas lesões de BI foram descritas por El-Houadfi et al. (1986) em um

estudo que caracterizou seis isolados do vírus no Marrocos. Os pintinhos de um dia

inoculados com as estirpes dos VBI apresentaram lesões respiratórias típicas, como

traquéia congesta e com acúmulo de muco, opacidade dos sacos aéreos, congestão

dos sinusóides e com conteúdo mucoso, aumento de volume renal também foi

observado em alguns casos.

As alterações microscópicas na traquéia caracterizaram-se por perda de cílios

e de glândulas mucosas, adelgaçamento do epitélio, infiltrado de células

mononucleares e edema.

2.5. Miopatia Peitoral

A BI continua sendo a causa de sérios problemas econômicos na indústria

avícola devido à constante recombinação do vírus, conseqüente surgimento de

novos sorotipos, sua vasta disseminação e o tropismo pelos diferentes tecidos

(DHINAKAR e JONES, 1996).

Em 1991, foi identificada uma variante do VBI na Grã-Bretanha, em machos

de reprodução vacinados, associada com alta mortalidade das aves e miopatia

bilateral do músculo peitoral superficial e peitoral profundo, lesão até então nunca

descrita relacionada com infecção pelo VBI. A nova variante foi denominada de

793/B ou 4/91

(GOUGH et al., 1992).

Não foi possível distinguir a lesão de miopatia

observada daquela, sem etiologia específica, descrita por Wight e Siller em 1980.

A vacina contra BI usada comumente H120, sorotipo Mass, oferece pouca

proteção contra esta nova variante (Parsons et al., 1992; COOK et al., 1996).

Quatro anos depois da primeira identificação, Cook et al. (1996) analisaram

várias amostras de soros de lotes de aves comerciais de diferentes países com

suspeita de infecção pelo IBV 4/91. Os soros eram originados de lotes de matrizes

de frangos de corte e poedeiras comerciais, com histórico de infecção respiratória

nas aves adultas e quedas de produção e qualidade de ovos, algumas vezes

acompanhadas de mortalidade. A análise dos soros confirma a presença do IBV

4/91 não só na Europa, mas também na Grécia, México, Espanha, Tailândia, Nova

Zelândia, França e Alemanha.

Com o objetivo de conhecer mais sobre o VBI causador desta forma atípica

da doença, Dhinakar Raj e Jones (1996) estudaram a imunopatogênese do isolado

793/B ou 4/91 causador de miopatia peitoral. Foram realizadas inoculações

experimentais em pintinhos SPF e em frangos de corte com seis semanas, sendo as

aves sacrificadas em idades determinadas. Para análise histopatológica, foram

coletadas traquéia, glândula de Harder, músculo peitoral e rins dos frangos de corte,

e dos pintinhos SPF, apenas músculo peitoral.

Nos pintinhos SPF não foram observados sinais respiratórios evidentes e nem

mortalidade durante os 21 dias. A traquéia nos dias três e cinco pós-inoculação (p.i.)

apresentou-se congesta, com acúmulo de muco e pulmões também congestos.

Tecidos respiratórios demonstraram-se normais a partir do dia sete (p.i.). Rim

aumentado e pálido no vigésimo primeiro dia (p.i.), mas não foi observado acúmulo

de uratos. Três aves do grupo apresentaram músculo peitoral pálido em três dias

(p.i). O exame histopatológico do músculo não revelou alterações significativas,

exceto um edema separando as fibras musculares.

Os frangos de corte com seis semanas apresentaram sinais respiratórios

leves com tosse e espirros até três dias (p.i.) e diarréia esverdeada. Na necropsia,

traquéia com bastante muco no terceiro dia (p.i.). O músculo peitoral se apresentou

pálido e edematoso em vinte e um dias (p.i.). Análise histopatológica demonstrou

lesões na traquéia, características de infecção por VBI, mas músculo e rins não

apresentaram lesões.

Com relação ao isolamento viral, este foi mais alto no esôfago seguido de

traquéia, rim, pulmão, reto, bursa, tonsilas cecais, proventrículo, íleo e duodeno. Não

foi isolado vírus do jejuno nem do músculo peitoral em nenhuma ocasião.

Os autores puderam concluir que o isolado 793/B se distribui nos tecidos

respiratórios, digestivo e urinário, entretanto o tropismo e a persistência diferem pela

idade da ave. As particularidades do 793/B são as lesões musculares, rápida

eliminação do vírus do trato respiratório em frangos de seis semanas e a replicação

do vírus no intestino. A patogênese do dano muscular não foi esclarecida, acredita-

se que possa ser resultado de deposição de imunocomplexos nas paredes dos

capilares (DHINAKAR RAJ e JONES, 1996).

Estudos da seqüência aminoacídica da proteína S

têm demonstrado que os

membros do subgrupo 4/91 do VBI diferem de outros isolados europeus e

americanos entre 21% a 48% (DHINAKAR RAJ e JONES, 1996).

No Brasil, essa forma atípica da doença ainda não havia sido descrita. A partir

do ano de 2003, surgiram os primeiros casos de VBI causando lesões de miopatia

peitoral.

Brentano et al. (2005) investigaram três lotes de matrizes pesadas com

suspeita de BI atípica buscando realizar o isolamento do vírus para diagnóstico e a

reprodução experimental. Os lotes apresentaram sinais clínicos de apatia,

dificuldade respiratória, aumento de mortalidade, queda de produção e aparecimento

de ovos com casca fina. Na necropsia, foram observadas necrose e/ou edema na

musculatura do peito e casos de hipertrofia renal com retenção de uratos. Através do

isolamento viral e PCR, foi confirmada a presença da BI atípica nos três lotes de

matrizes suspeitos. Os autores confirmaram o diagnóstico de BI também por

reprodução da doença respiratória e renal in vivo, mas não foi possível reproduzir as

lesões de miopatia em aves leves SPF.

Esses surtos observados no Brasil assemelham-se aos descritos inicialmente

na Europa, cujo novo sorotipo identificado foi o 793/B ou 4/91. Brentano et al. (2006)

realizaram o seqüenciamento do gene S

dos VBI isolados dos três lotes de matrizes

com BI atípica. Nenhuma das três amostras analisadas se agrupa com a 4/91

descrita como novo sorotipo de VBI associado com lesões de miopatia peitoral. Os

autores concluem que, através dos resultados da filogenia, não há necessariamente

uma relação entre o sorotipo variante e as novas lesões de miopatia observadas.

Devido ao aparecimento de outras formas clínicas de BI, e sendo o sorotipo

Massachusetts o único liberado para vacinação no Brasil, Trevisol et al. (2006)

realizaram testes para avaliar a capacidade da amostra vacinal viva H120 proteger

as aves desafiadas com uma amostra de BI isolada de caso clínico de miopatia.

Avaliaram-se sinais clínicos, lesões macroscópicas, e fez-se tentativas de

recuperação viral e análise de ciliostase para determinação dos índices de proteção.

Não houve reprodução das lesões de miopatia e os únicos sinais visíveis foram de

estertores pulmonares e presença de muco nas traquéias.

Através do teste vacinal, houve redução dos sinais clínicos, mas não

completa redução da ciliostase e a alta taxa de recuperação viral demonstra que a

amostra atípica de VBI analisada é uma variante contra a qual não há completa

proteção cruzada pelo sorotipo Massachusetts.

Gomes (2004) na tentativa de correlacionar a lesão de miopatia peitoral com

um vírus variante de BI, realizou um estudo em sete granjas de frangos de corte que

apresentaram altas taxas de mortalidade a partir dos 25 dias de idade. Os sinais

clínicos observados foram diarréia aquosa e, na fase final, estertores traqueais e

espirros. As alterações macroscópicas observadas foram músculo peitoral superficial

com manchas pálidas difusas de forma uni ou bilateral e o músculo peitoral profundo

com intensa palidez, edema gelatinoso e discreta hemorragia na fáscia muscular.

Não foram encontradas alterações significativas na histopatologia, apenas um

grande espaço entre as fibras musculares. Através de isolamento viral e PCR o autor

isolou da traquéia, rins e tonsilas cecais uma amostra considerada variante de VBI.

Não foi possível isolar o vírus do músculo peitoral.

Lesões de miopatia peitoral em lotes de matrizes também foram observadas

por Wight e Siller (1980), porém a única enfermidade associada ao aparecimento da

lesão foi a pododermatite. Os autores classificaram as lesões peitorais

macroscopicamente em três categorias: edema agudo progredindo a uma necrose

esverdeada, presença de uma cicatriz localizada centralmente e pela presença de

tecido fibroadiposo. Microscopicamente a lesão de coloração esverdeada consistia

de necrose com fibras musculares anucleadas circundadas por uma cápsula fibrosa

com uma borda interna reativa, sem infiltrado inflamatório. Os achados indicam se

tratar de uma necrose isquêmica, lesão não relacionada à infecção pelo VBI.

2.6. Diagnóstico

O histórico e os sinais clínicos orientam o diagnóstico presuntivo, mas isso só

é possível nos estágios finais da doença, quando outros fatores como duração da

doença e índice de mortalidade são conhecidos. Nos estágios iniciais a BI pode ser

facilmente confundida com outras doenças respiratórias, como a doença de

Newcastle, laringotraqueíte infecciosa, coriza e a doença crônica respiratória

(HIPOLITO et al., 1979).

Independente dos sistemas afetados, os sinais clínicos desencadeados e as

lesões macro e microscópicas não são patognomônicas de uma infecção pelo VBI,

sendo necessárias outras providências posteriores aos exames clínico e

anatomopatológico para confirmação da infecção (RESENDE, 2003).

Para o sucesso da detecção do VBI em surtos de campo, é necessário o

conhecimento da patogênese do vírus nas aves para minimizar a ocorrência de erros

de diagnóstico. A detecção do vírus é influenciada por numerosos fatores, dentre

eles, cita-se o tempo do início da infecção e a amostragem; nível de imunidade da

ave no momento da infecção; número de aves amostradas; escolha e qualidade dos

órgãos coletados para análise; genética da ave; e possibilidade de imunossupressão

(WIT, 2000).

O diagnóstico de BI deveria incluir o sorotipo do vírus causal devido à grande

variação antigênica das cepas de VBI. Técnicas para detecção do VBI ou anticorpos

induzidos pelo vírus são descritas e comparadas por Wit (2000).

Seguem, nos itens abaixo, algumas considerações sobre o diagnóstico de BI.

2.6.1. Isolamento do vírus

Fragmentos de traquéia, pulmão e rins constituem o material de eleição para

o isolamento do vírus (HIPOLITO et al., 1979).

Todos os VBI podem ser isolados do trato respiratório, onde a maior

concentração de vírus está na traquéia entre os primeiros três a cinco dias após a

infecção. Após este período, a concentração do vírus cai rapidamente. Rins, tonsilas

cecais e swab cloacal são órgãos de eleição no caso de infecção crônica ou em

lotes vacinados onde é esperada uma pequena quantidade de vírus no trato

respiratório (WIT, 2000).

Amostras para isolamento viral são comumente inoculadas em ovos

embrionados. O material coletado, geralmente um pool de órgãos, é triturado e

tratado conforme rotina laboratorial (HIPOLITO et al., 1979). Recomenda-se

inoculação em embriões de 9 a 12 dias de idade pela cavidade alantóide. Após sete

dias, verifica-se a mortalidade, nanismo e enrolamento do embrião e depósito de

uratos nos mesonéfrons.

A inoculação de pintos suscetíveis com líquido alantóide colhido da primeira

passagem, pode abreviar o diagnóstico, já que a mortalidade e o encontro de lesões

podem ocorrer nesta fase. Nos casos positivos, os sinais respiratórios como ruídos

traqueais, aparecem de 18 a 36 horas após a inoculação. Juntando-se essa a outras

informações, o diagnóstico pode ser feito em três a quatro dias.

Em aves vacinadas, é necessário combinar dados de isolamento viral, análise

de patogenicidade e aumento de título de anticorpos circulantes após a ocorrência

do quadro clínico (BACK, 2002).

O isolamento também pode ser feito em cultura de células primárias de rim de

embrião ou de pinto recém-nascido e no epitélio de anel de traquéia. Quando ocorre

o crescimento do VBI, observa-se efeito citopático nas culturas de células renais,

caracterizado pelo aparecimento de células birrefringentes arredondadas. Anéis de

traquéia infectados com o VBI apresentam ciliostase ou perda dos movimentos dos

cílios e degeneração com descamação das células epiteliais (BACK, 2002).

2.6.2. Diagnóstico sorológico

Os métodos sorológicos são altamente recomendáveis para identificação da

BI pela sua especificidade e pela reprodutibilidade dos resultados. Baseia-se na

demonstração de um título ascendente de anticorpos no soro das aves afetadas,

colhida a primeira amostra, na fase inicial da doença, e a segunda, duas a três

semanas após. O título baixo na primeira amostra e o aumento do mesmo na

segunda amostragem é a prova da existência da infecção por VBI (HIPOLITO et al.,

1979).

A sorologia de rotina para o VBI é usualmente feita com vírus-neutralização,

Inibição da hemaglutinação ou ELISA, individualmente ou associados.

- Vírus-neutralização (VN): é o processo preferido para identificar

sorologicamente o VBI, usando-se a amostra Beaudette. Se o anti-soro neutraliza o

vírus, o diagnóstico está feito, mas os resultados negativos podem ser atribuídos a

um vírus da bronquite de grupo sorológico distinto ou a um vírus diferente.

- Inibição da hemaglutinação (IH): prova sorológica qualitativa que pode ser

empregada tanto para a identificação sorológica como no sorodiagnóstico do vírus.

A identificação sorológica faz-se mediante a inibição da hemaglutinação de uma

amostra viral por um soro padrão. O sorodiagnóstico é a detecção no soro do animal

de anticorpos que inibem a hemaglutinação por um vírus específico. O vírus da BI

não é naturalmente hemaglutinante, necessitando de tratamento prévio com a

enzima fosfolipase tipo C para exposição das hemaglutininas, o que torna essa

prova muito trabalhosa e de difícil padronização (Di FABIO e ROSSINI, 2000).

- ELISA: o teste de ELISA é amplamente utilizado na sorologia. A resposta de

anticorpos pode ser detectada mais precocemente pelo ELISA do que pelo teste de

VN (RESENDE, 2003). No entanto, uma grande quantidade de vírus é necessária

para que seja detectado antígeno pelo teste de ELISA, uma vez que a sensibilidade

para detecção de VBI diretamente em órgãos é baixa. Esta técnica é muito usada

quando há uma grande quantidade de amostras a serem analisadas (WIT, 2000).

Também podem ser usadas para pesquisa de anticorpos de bronquite, os

testes de precipitação em ágar-gel (AGP), Imunofluorescência , Imunoperoxidase,

imunoistoquímica e para detecção do genoma do VBI, PCR e RT-PCR que são

muito utilizados atualmente (WIT, 2000).

2.6.3. Diagnóstico diferencial

Existem outros agentes infecciosos que podem ocasionar os mesmos quadros

clínicos observados na BI, tais como a Doença de Newcastle (DN), Laringotraqueíte

(LT), Coriza infecciosa (CI) e Síndrome da Queda de Postura (EDS).

Segundo Di Fabio e Rossini (2000), existem sinais característicos que permitem

diferenciá-las da BI. Na DN, tem-se um quadro mais severo, com mortalidade

elevada e por vezes, sinais nervosos. Na LT, a disseminação é mais lenta. Já na CI,

observa-se edema facial com descarga nasal serosa que, raramente, ocorre na BI.

Quadros reprodutivos tais como, queda na postura e alteração na qualidade dos

ovos, podem ser vistos na EDS. A diferença entre elas reside no fato de que na

EDS não há alteração da qualidade da albumina, o que ocorre na BI.

Ainda há que considerar as interferências ambientais que podem ocasionar

quadros respiratórios. Nos distúrbios reprodutivos, além de causas infecciosas,

existem as causas nutricionais e as ambientais.

2.7. Controle e Vacinação

No Brasil, o único sorotipo liberado para vacinação é o Mass. A decisão de se

optar por VBI vacinais deste sorotipo baseou-se no fato de que conferiam uma

imunogenicidade mais ampla, inclusive sobre VBI pertencentes a outros sorotipos

(RESENDE, 2003).

Atualmente, não existe amostra ou combinação de amostras vacinais de

diferentes sorotipos que produzam proteção cruzada completa contra variantes

emergentes (Di FABIO, 2004).

São utilizadas basicamente as cepas H120 e H52 vivas ou inativadas. O

esquema básico seria uma vacina nas primeiras semanas H120 ocular e após uma

vacina H52 viva por spray ou ocular, ou ainda, uma vacina inativada geralmente

associada a Newcastle e/ou EDS ou Coriza Infecciosa. Durante a produção se

utilizam uma ou duas vacinações com cepas H120 ou H52 vivas (Di FABIO, 1993).

3. MATERIAIS E MÉTODOS

Os materiais analisados foram provenientes de surtos de campo

acompanhados entre 2005 e 2006 nas regiões Oeste e Sul de Santa Catarina, nos

quais as aves apresentavam sinais clínicos compatíveis com Bronquite Infecciosa,

tanto em frangos de corte como em matrizes. Alguns casos acompanhados não

apresentaram sinais clínicos característicos de BI, porém exames complementares

confirmaram o diagnóstico.

Da maioria dos surtos, foram coletados sangue para exame sorológico

(CARDOSO et al., 1996) e, de todos os surtos, órgãos para análise histopatológica

no Laboratório de Patologia da Universidade do Estado de Santa Catarina -

UDESC/CAV.

3.1 Materiais coletados

Em todos os casos acompanhados, as aves foram sacrificadas por

deslocamento cervical, necropsiadas e coletados músculo peitoral superficial e

profundo, traquéia, pulmão, rins, coração, proventrículo, moela, intestino delgado e

grosso.

As amostras coletadas foram mantidas em formol neutro, 10%, para fixação.

Após, os tecidos foram incluídos em parafina, cortados em micrótomo na espessura

de quatro a cinco micras (µm), corados com hematoxilina e eosina (H&E) conforme

as técnicas de rotina, e analisados em microscópio óptico (MO). Alguns cortes de

músculo peitoral foram submetidos à coloração especial de Tricômico de Masson

(PROPHET et al., 1992) para observação de tecido fibroso.

Os cortes de músculo peitoral foram fixados sobre superfície de papelão e

presos nas duas extremidades através de alfinetes para evitar artefatos de contração

muscular.

Em todos os lotes foi realizado exame sorológico através de coleta de sangue

por venopunção.

3.2. Descrição dos surtos

Foram incluídos neste estudo lotes de frangos de corte que apresentaram

sinais clínicos e mortalidade na faixa etária compatível com casos de BI ocorrida em

lotes anteriores no mesmo local.

No caso ocorrido em matrizes, foram selecionados lotes que possuíam sinais

clínicos compatíveis com BI.

Nos surtos acompanhados foram realizadas necropsias de algumas aves,

observadas lesões macroscópicas e coletados órgãos para exame histopatológico,

conforme descrito no item 3.1.

Todos os lotes de matrizes foram vacinados contra BI na recria e produção

com a cepa H120 ou MA5, sorotipo Massachussets.

3.2.1. Surto nº 01

Duas granjas de frangos de corte, com idade de 45 dias, localizadas em

Orleans, Santa Catarina, com sistema automatizado e capacidade para 27.000 aves.

As aves foram vacinadas com cepa H120 no 1º e 10º dias. Sinais clínicos

iniciaram a partir de 21 dias de vida do lote, período em que foi realizada a coleta de

sangue para exame sorológico. A histopatologia foi realizada aos 45 dias de vida.

Deste lote, foram separadas oito aves para observação da evolução da

doença e da lesão muscular.

Assim, com um intervalo de 15 a 20 dias, uma das aves era sacrificada,

realizada a necropsia, coletava-se o material respectivo e comparava-se, através da

microscopia, a evolução das lesões do músculo peitoral.

3.2.2. Surto nº 02

Cinco granjas de frangos de corte, com idade de 30 dias, localizadas na

Região do Vale do Rio do Peixe.

Aves vacinadas contra a doença de Gumboro no campo com 14 ou 18 dias

dependendo da região. Matrizes vacinadas contra BI com a cepa H120 ou MA5 nas

semanas 33, 43 e 53.

3.2.3. Surto nº 03

Granja de matriz de frango de corte, localizada no Vale do Rio do Peixe,

formada por seis núcleos de múltiplas idades com capacidade para 40.000 aves.

Sinais clínicos ocorreram em dois núcleos com intervalo de uma semana entre eles.

Lote A

Matrizes com 36 semanas apresentando aumento da mortalidade quatro dias

após acasalamento de machos provenientes de outro lote.

Lote B

Matrizes com 28 semanas apresentando aumento de mortalidade e queda de

produção.

3.2.4. Surto nº 04

Monitoria de Bronquite Infecciosa realizada em granjas de frangos de corte,

devido à suspeita de infecção pela observação de sinais clínicos compatíveis com a

doença.

Lote A

Lote de frangos de corte com idade de 31dias.

Lote B

Frangos de corte com 32 dias.

4. RESULTADOS

Todos os casos acompanhados são referentes a surtos de campo ocorridos

no período de 2005 e 2006 em matrizes e frangos de corte, nas regiões Oeste e Sul

de Santa Catarina.

4.1. Surto nº 01

Analisaram-se dois lotes de 27.000 frangos de corte, com idade de 45 dias,

apresentando aumento de mortalidade (4,7%), desuniformidade, atraso no

desenvolvimento, ronquidão e apatia. Essas alterações foram observadas a partir de

21 dias de vida do lote.

Foram necropsiadas 20 aves de cada lote. As lesões macroscópicas

observadas foram semelhantes nos dois lotes e se caracterizaram por aumento de

volume renal em quase todas as aves (Figura 01). Algumas apresentaram rins

aumentados e de coloração pálida e músculo peitoral profundo com estrias de

coloração esbranquiçada distribuídas por toda a sua extensão (Figura 02).

Na microscopia, o músculo peitoral apresentou degeneração hialina de fibras,

algumas com vacuolização e outras fibras individuais mostrando intensa miofagia.

No corte longitudinal, observou-se hipercontração de fibras com perda das

estriações transversais e edema intersticial. O rim apresentou glomérulos com

hipercelularidade de leve a moderada, degeneração tubular leve e infiltrado

eosinofílico moderado intersticial. O fígado apresentou necrose individual de

hepatócitos, infiltrado mononuclear focal e infiltrado moderado de eosinófilos no

espaço porta. Intestino com infiltrado linfoplasmocitário difuso moderado.

Outro lote apresentou as mesmas lesões de rins e músculo descritas acima,

mas também foram observadas lesões microscópicas na traquéia, que se

caracterizaram por infiltrado mononuclear difuso severo. Não foram observadas

lesões de fígado e intestino neste lote.

FIGURA 01 – Frango de corte 45 dias. Lesão renal. Rins aumentados de volume e pálidos. Surto nº1.

FIGURA 02 – Frango de corte 45 dias. Músculo peitoral profundo com áreas e estrias pálidas. Surto

nº 1.

Através do exame sorológico das aves realizado aos 21 dias de vida, foi

constatada a presença de infecção pelo Vírus da Bronquite Infecciosa, sendo

confirmada pelas lesões no exame histopatológico.

Deste mesmo lote, foram separadas oito aves e necropsiadas em seqüência

com intervalos de 10 a 15 dias cada uma, para observação da evolução das lesões.

A descrição das lesões macro e microscópicas observadas em cada ave seguem

relatadas nos itens abaixo.

4.1.1. Aves com 56 dias

Macroscopicamente, o músculo peitoral profundo apresentou algumas

pequenas áreas de coloração mais esbranquiçada, e o rim apresentou-se

aumentado de volume.

Na microscopia, o músculo apresentou degeneração hialina de fibras com

vacuolização de algumas e edema intersticial (Figura 03); rim com leve

hipercelularidade do glomérulo, leve degeneração tubular e calcificação isolada de

túbulos.

FIGURA 03 - Ave com 56 dias. Corte transversal de músculo peitoral profundo. Degeneração hialina

de fibras, vacuolização e edema intersticial. H&E. MO. Obj. 40x. Surto nº 1.

4.1.2. Ave com 72 dias

Na macroscopia, o músculo peitoral profundo também apresentou algumas

pequenas áreas de coloração mais esbranquiçada e rins aumentados de volume e

de aspecto pálido.

Microscopicamente, a traquéia apresentou leve infiltrado linfocitário na

mucosa; músculo peitoral com degeneração individual de fibras e miofagia de

algumas fibras; rim com leve hipercelularidade glomerular, degeneração tubular

moderada e infiltrado multifocal linfocitário intersticial.

4.1.3. Ave com 98 dias

Macroscopicamente, o músculo peitoral profundo apresentou uma extensa

área longitudinal de coloração esbranquiçada e algumas estrias no sentido paralelo

de coloração esbranquiçada. Foram observadas também, pequenas áreas de

coloração avermelhada sobre a musculatura peitoral profunda (Figura 04).

Microscopicamente, o músculo apresentou intensa degeneração hialina com

vacuolização, edema intersticial acentuado e algumas fibras apresentaram leve

mineralização central. No corte longitudinal, foi observada intensa hipercontração de

fibras, vacuolização e intensa formação de gotas hialinas (Figura 05). Foi observada

igualmente, miofagia individual de fibras.

O rim apresentou hipercelularidade de leve a moderada, degeneração tubular

leve e infiltrado linfocitário intersticial leve difuso.

FIGURA 04 – Ave com 98 dias. Músculo peitoral profundo difusamente esbranquiçado. Surto nº 1.

FIGURA 05 - Ave com 98 dias. Corte longitudinal de músculo peitoral profundo.

Hipercontração de fibras, vacuolização e degeneração em gotas hialinas. Surto nº 1.

H&E. MO. Obj 40x.

4.1.4. Ave com 115 dias

Macroscopicamente, o músculo peitoral profundo esquerdo apresentou uma

extensa área pálida, que após o rebatimento da fáscia, apresentou consistência

diminuída na superfície. Observou-se também uma pequena área de coloração

vermelho-escura sobre a área pálida (Figura 06). Não foram observadas alterações

renais significativas.

FIGURA 06 - Ave com 115 dias. Músculo peitoral profundo com extensa área branco-amarelada

de consistência diminuída. Surto nº 1.

Microscopicamente, o músculo apresentou degeneração hialina de fibras

difusa moderada, vacuolização, focos com intensa miofagia, infiltrado focal

eosinofílico, edema intersticial, áreas com fibrose, hemorragia multifocal e

proliferação vascular moderada (Figura 07).

No rim, foi observada hipercelularidade de leve a moderada, infiltrado

linfocitário multifocal intersticial e degeneração tubular leve. O pulmão apresentou

hiperplasia linfóide peribronquial.

Para melhor observação das áreas de fibrose, foi realizada coloração de

Tricômico de Masson (Figura 08). Assim, foram evidenciadas áreas com intensa

fibrose e leve infiltração de tecido fibroso entre as fibras musculares envolvendo-as

individualmente.

FIGURA 07 – Frango de corte com 115 dias. Músculo peitoral profundo com extensa área

de necrose, intensa miofagia e fibrose. Surto nº1. H&E. MO. Obj. 40x.

FIGURA 08 – Frango de corte com 115 dias. Músculo peitoral profundo com intensa fibrose.

Tricômico de Masson. Surto nº1 MO. Obj. 40x.

4.2. Surto nº 02

Analisaram-se cinco lotes de frangos de corte, com idade de 30 dias,

apresentando condenação bastante elevada no abatedouro devido à colibacilose.

A mortalidade durante a vida do lote não superou a meta esperada para a

idade, porém a causa da morte da maioria dos frangos era a colibacilose.

Na necropsia, as aves apresentaram músculo peitoral profundo com estrias

esbranquiçadas distribuídas por toda extensão, rins aumentados de volume, bursa

aumentada de volume e algumas com aspecto gelatinoso, sendo que algumas aves

apresentaram granuloma, devido à colibacilose.

Microscopicamente, o músculo peitoral apresentou degeneração hialina de

fibras, algumas com intensa miofagia (Figura 8) e outras com vacuolização e edema

intersticial leve. O rim apresentou hipercelularidade de leve a moderada,

degeneração tubular moderada e infiltrado linfocitário multifocal. A traquéia

apresentou infiltrado linfocitário difuso moderado na mucosa. Dois lotes

apresentaram cortes de pulmão com hiperplasia linfóide peribronquial e infiltrado

linfocitário intersticial moderado.

A sorologia e o PCR (BOOM et al., 1990) de rim, traquéia e pulmão realizados

no período foram positivos para BI. Não se vacinavam os frangos de corte contra BI

no período dos surtos, apenas as matrizes.

FIGURA 09 - Frango de corte com 30 dias. Corte longitudinal de músculo peitoral

profundo demonstrando intensa miofagia de fibra. Surto nº 2. MO. Obj. 40x.

4.3. Surto nº 03

4.3.1. Lote A

Analisado lote de 35.000 matrizes de frangos de corte, com 36 semanas de

idade, apresentando aumento de mortalidade quatro dias após a introdução de

machos para reposição, queda de produção (4,4%), aves paradas, algumas com

bico aberto, demora no consumo de ração de até cinco horas, sendo que a ingestão

normal seria realizada em duas horas.

Foram necropsiadas oito aves. As fêmeas apresentaram alterações de

formato de ovário, duas apresentaram formato pendular e outras duas ovário

marcado como um cinto. Apenas uma apresentou músculo peitoral profundo de

aspecto pálido. Um macho apresentou músculo peitoral com edema bastante

acentuado, laringe com petéquias, tonsilas cecais avermelhadas e aumentadas de

tamanho.

Microscopicamente, a traquéia apresentou infiltrado linfocitário difuso

moderado na mucosa (Figura 10); pulmão com degeneração hialina dos vasos com

endotélio reativo, hiperplasia linfóide peribronquial moderada, presença de exsudato

catarral na luz de brônquio e calcificação focalmente extensa dos capilares aéreos;

rim com hipercelularidade de moderada a acentuada e difusa, infiltrado linfocitário

multifocal e degeneração tubular moderada; o fígado apresentou infiltrado

heterofílico moderado no espaço porta.

FIGURA 10 – Matriz com 36 semanas. Corte de traquéia demonstrando infiltrado linfocitário difuso

moderado na mucosa. Surto nº 3. Lote A. H&E. MO obj. 100x.

4.3.2. Lote B

Outro lote, na mesma granja, com idade de 28 semanas, apresentou aumento

de mortalidade, queda de produção (2.5%), aumento de refugagem de machos e

demora no consumo de ração uma semana depois de observados os sinais clínicos

no Lote A.

Não foram observadas lesões macroscópicas significativas exceto um macho

com músculo peitoral profundo de coloração pálida.

Na microscopia, o músculo peitoral apresentou degeneração hialina difusa e

leve edema intersticial; a traquéia apresentou infiltrado linfocitário difuso moderado

na mucosa e infiltrado eosinofílico leve; rim com hipercelularidade de moderada a

acentuada e difusa, infiltrado monuclear multifocal, degeneração tubular moderada

(Figura 11 e 12) e alguns focos de necrose tubular.

FIGURA 11 – Matriz com 28 semanas. A) Rim com glomérulos de tamanhos normais. B)

Hipercelularidade de glomérulos. Surto nº 3. Lote B. H&E. MO. Obj. 40x.

FIGURA 12 – Matriz com 28 semanas. Rim com infiltrado mononuclear intersticial. Surto nº 3. Lote B.

H&E. MO. Obj. 40x.

B A

4.4. Surto nº 04

Os casos descritos a seguir, referem-se a coletas de rotina em frangos de

corte com 31 dias, devido ao aparecimento constante de lotes de baixo desempenho

final e ronquidão.

Foram realizadas coletas de sangue para sorologia, órgãos para PCR e para

exame histopatológico com suspeita de infecção pelo VBI.

Um dos lotes monitorados apresentou PCR positivo para VBI, porém se

tratava de vírus vacinal.

4.4.1. Lote A

Estudou-se lote de frangos de corte com 31 dias. Macroscopicamente,

foram observadas estrias esbranquiçadas no músculo peitoral profundo e rins

levemente aumentados de volume.

Na microscopia, o músculo peitoral apresentou degeneração hialina de fibras,

miofagia e vacuolização de fibras, além de edema intersticial. A traquéia apresentou

infiltrado linfocitário leve na mucosa; rim com hipercelularidade glomerular

moderada, degeneração tubular leve e infiltrado multifocal linfocitário.

4.4.2. Lote B

Analisaram-se frangos de corte com 32 dias. Na necropsia foram observadas

as mesmas lesões do Lote A.

Microscopicamente, o músculo peitoral profundo apresentou degeneração

hialina, vacuolização de fibras, edema intersticial, extensa área de necrose difusa

acentuada com intensa miofagia e leve infiltrado linfocitário e heterofílico (Figura 13

e 14).

FIGURA 13 – Frango de corte com 32 dias. Músculo peitoral profundo apresentando miofagia intensa,

vacuolização de fibras, degeneração hialina e edema intersticial. Surto nº 4. Lote D.

H&E. MO obj. 40x.

FIGURA 14 – Frango de corte com 32 dias. Músculo peitoral profundo apresentando miofagia intensa,

vacuolização de fibras, degeneração hialina e edema intersticial. Surto nº 4. Lote D.

H&E. MO obj. 40x.

5. DISCUSSÃO

O diagnóstico de miopatia pelo Vírus da Bronquite infecciosa das aves neste

estudo foi confirmado pelos dados epidemiológicos, sinais clínicos, achados macro e

microscópicos, pela sorologia positiva na maioria dos casos e PCR positivo no único

caso em que foi realizada essa técnica.

O uso da sorologia também foi utilizado no diagnóstico da Bronquite

Infecciosa quando do surgimento da variante nefropática (LAMAS, 1979).

No surto nº 03, uma análise de PCR foi positiva para VBI, porém a cepa

identificada foi a vacinal, devido a uma reação de rolagem no incubatório entre aves

vacinadas para as não vacinadas (PLONCOSKY 2006, comunicação pessoal).

Neste estudo foram descritas as lesões macro e microscópicas de nove casos

de BI em frangos de corte e dois em matrizes, demonstrando que a doença é

importante para ambos os tipos de exploração avícola.

Nos frangos de corte, a manifestação da doença ocorreu sempre na quarta

semana de vida, coincidindo provavelmente com a queda nos níveis de anticorpos

maternos, visto que, em alguns surtos não era realizada vacina de BI nas aves de

corte no período, fator epidemiológico importante para diagnóstico clínico.

Outro fator que auxiliou no diagnóstico foi o controle da nefropatia e miopatia

nos frangos de corte pela introdução da vacina, após a ocorrência constante dos

surtos, ou pela troca da vacina por outras cepas vacinais onde já se vacinava ou

ainda pelo reforço na vacinação em alguns casos. Lotes posteriores foram

acompanhados e não foi observada reincidência dos surtos no local.

Os altos níveis de descarte e condenação nos lotes de frangos de corte

ocorreram normalmente por infeccção secundária por E. coli, com a presença ou não

de granuloma. Essa associação também foi demonstrada experimentalmente por

Cook et al. (1986) inoculando a bactéria e o VBI, observando o aumento da

ocorrência de lesões por colibacilose devido à associação da infecção.

No surto nº 02, os sinais clínicos foram detectados pelo aumento da

condenação no abatedouro sem ter ocorrido aumento na mortalidade do lote. Isso

ocorre porque a mortalidade se deve normalmente a infecções secundárias, e nestes

surtos devido ao abate precoce (32 dias), não houve tempo suficiente para

refugagem e aumento da mortalidade.

Em uma das integrações aqui estudadas, não foi observada alta condenação

de animais no abate devido a rigoroso programa de descarte de animais refugos no

campo para diminuir os custos de produção e aumentar a eficiência alimentar, visto

que animais doentes ocupam espaço, servem como reservatório da doença para os

animais saudáveis, e mesmo doentes, acabam ingerindo um pouco de alimento o

que reduz os ganhos do lote.

Neste estudo foi observado que as alterações da traquéia foram constantes,

apesar de ter ocorrido variação na intensidade das lesões. Já as lesões pulmonares

raramente estavam presentes, e quando presentes eram de intensidade baixa e

consistiam apenas de congestão e hiperplasia linfóide peribronquial.

Gomes (2005) descreve casos de miopatia em frangos de corte, onde foram

observadas manchas pálidas difusas, uni ou bilateralmente no músculo peitoral

superficial, e no peitoral profundo intensa palidez, edema gelatinoso difuso e discreta

hemorragia na fáscia muscular. Estas lesões coincidem com as deste estudo, com

exceção do edema gelatinoso que foi observado de forma discreta apenas em

alguns casos.

Por outro lado, na microscopia, o mesmo autor e Dhinakar Raj e Jones

(1996), descrevem apenas grande espaço entre as fibras musculares, ao contrário

deste estudo, em que foram observadas lesões musculares de degeneração hialina,

necrose, vacuolização, edema e hipercontração de fibras.

Nos frangos de corte, foi observado macroscopicamente músculo peitoral com

estrias ou áreas esbranquiçadas, alguns com pequenas áreas avermelhadas e rins

aumentados de volume e pálidos, afetando tanto o músculo peitoral profundo como

o superficial. Esses achados contrariam as alterações provocadas pela Doença de

Oregon, ou Doença do Músculo Verde, que afeta somente o músculo peitoral

profundo (WIGHT e SILLER, 1980), e além disto, o músculo afetado pode

apresentar-se esverdeado, achado que não foi observado em nenhum dos casos

aqui registrados.

Neste estudo não foram observadas lesões de proventrículo em nenhum dos

surtos acompanhados, lesão essa reportada na China em 1996 (CAVANAGH et al.,

2003), fato provavelmente relacionado com cepas virais diferentes ou outros fatores

associados com a BI.

Em todos os casos aqui estudados, observou-se uma relação constante entre

as lesões renais e musculares, mas não uma correlação positiva entre lesões

traqueais e musculares, ou seja, nem todos os animais que apresentaram lesões

musculares, apresentaram lesões de traquéia.

Na traquéia foi observado infiltrado inflamatório linfocitário, mas não foi

observada descamação epitelial e perda dos cílios como descrevem Di Fabio et al.

(2000). Este achado pode estar relacionado à evolução da doença, pois os autores

acima observaram a lesão nos dois primeiros dias de infecção, e neste estudo os

animais foram necropsiados após este período, podendo ter havido regeneração do

epitélio.

A infecção por cepas nefropáticas cursa com tumefação e palidez renal,

assim como túbulos e ureteres distendidos com uratos (LAMAS et al., 1979;

CAVANAGH, et al. 2003). As duas primeiras alterações foram uma constante nos

casos aqui estudados, mas a presença de uratos não foi observada em nenhum dos

casos descritos, podendo estar relacionada a influências de outros fatores, como por

exemplo, a desidratação das aves.

A nefrite intersticial observada neste estudo também foi descrita por Lamas et

al. (1979).

Nos lotes de matrizes, observou-se queda nos níveis de postura e alta

mortalidade, sinais clínicos também observados por Parsons et al. (1992) e Di Fabio

et al. (2000).

Diferentemente do que relataram Wight e Siller (1980), na necrose do

músculo peitoral profundo, observa-se necrose de massa muscular seguida por

regeneração de fibras e infiltração gordurosa, assim como um encapsulamento da

massa muscular necrótica.

Nas análises não foram observadas as lesões descritas pelos autores, mas

sim, um processo reparativo pela proliferação de tecido fibroso. Essa constatação

de fibrose ocorre devido à ação primária do vírus provocando degeneração e

necrose muscular, com posterior reparação, e este por sua vez, torna-se

progressivo, intensificando a fibrose em casos crônicos, como descrito no surto nº

01, frango de corte com 115 dias.

No caso de necrose isquêmica do músculo peitoral, observa-se também

alterações vasculares (WIGHT e SILLER, 1980), que não foram observadas neste

estudo.

Outra patologia que pode levar à necrose do músculo peitoral é a miopatia

nutricional (distrofia muscular) que cursa com edema generalizado, porém mais

pronunciado na região de pescoço, sob as asas e necrose muscular em outros

músculos além do peitoral (FARIA e JUNQUEIRA, 2000). Em nenhum destes locais

foram observadas essas alterações.

Não há regeneração nas lesões musculares, o que indica que a lesão ocorre

na fibra como um todo, diferentemente do observado em outras miopatias onde

geralmente a lesão é segmentar (WIGHT e SILLER, 1980).

No surto ocorrido em matrizes, foi observada degeneração hialina de vasos e

presença de alguns trombos hialinos que podem ser resultantes da deposição de

imunocomplexos levando à degeneração vascular e formação de trombos.

A degeneração hialina de vasos não foi vista nos casos de frangos de corte,

contrariando, portanto, a literatura (DHINAKAR RAJ e JONES, 1996) que descreve

estas alterações resultando em deposição de imunocomplexos, sendo a possível

causa das lesões musculares, segundo os autores.

6. CONCLUSÕES

A BI é uma doença importante em aves pelo alto índice de mortalidade ou

condenação por infecções secundárias.

As lesões renais e musculares sempre estão associadas, porém não ocorre

lesão respiratória em todos os casos de miopatia.

As lesões musculares são diferentes daquelas observadas em outras

doenças que cursam com miopatia.

Determinadas cepas do vírus da Bronquite Infecciosa das aves podem levar à

degeneração e necrose muscular, visto que, nos surtos em que foi realizada a

sorologia, o resultado foi positivo para o VBI. A utilização de imunoistoquímica seria

uma opção para identificar se há replicação viral no músculo.

Novos estudos fazem-se necessários para tentar identificar a cepa viral

associada com a miopatia.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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