( PDF ) Avaliação in situ da capacidade remineralizadora de selantes que contenham fosfato de cálcio amorfo e/ou fluoreto

KÉLIO GARCIA SILVA

Avaliação

in situ

da capacidade remineralizadora

de selantes que contenham fosfato de cálcio

amorfo e/ou fluoreto

Orientadora: Profa. Dra. Denise Pedrini

Araçatuba

2007

Tese apresentada à Faculdade de

Odontologia da Universidade Estadual

Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Câmpus

de Araçatuba, para obtenção do título de

“Doutor em Odontopediatria”

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Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

Catalogação-na-Publicação

Serviço Técnico de Biblioteca e Documentação – FOA / UNESP

Silva, Kélio Garcia

S586a Avaliação in situ da capacidade remineralizadora de selantes

que contenham fosfato de cálcio amorfo e/ou fluoreto / Kélio

Garcia Silva. - Araçatuba : [s.n.], 2007

71 f. : il. ; tab.

Tese (Doutorado) – Universidade Estadual Paulista, Faculdade de

Odontologia, Araçatuba, 2007

Orientador: Profa. Dra. Denise Pedrini

1. Fosfatos de cálcio 2. Fluoretos 3. Selantes de fossas e fissuras

4. Remineralização dentária

Black D27

CDD 617.645

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

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Nascimento: 27.04.1975 – JATAÍ/GO

Filiação: Osvaldo Ferreira Silva

Ana Esméria Garcia Silva

1998/2001: Curso de Graduação em Odontologia pela Faculdade de Odontologia de

Araçatuba – UNESP

2003/2004: Curso de Pós-Graduação em Odontopediatria, nível de Mestrado, na

Faculdade de Odontologia de Araçatuba – UNESP

2005/2007: Curso de Pós-Graduação em Odontopediatria, nível de Doutorado, na

Faculdade de Odontologia de Araçatuba – UNESP

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

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Silva KG. Avaliação in situ da capacidade remineralizadora de selantes que contenham fosfato de

cálcio amorfo e/ou fluoreto. [Tese]. Araçatuba: UNESP – Universidade Estadual Paulista; 2007.

O objetivo desse estudo foi avaliar in situ o potencial remineralizador de selantes que contenham

fosfato de cálcio amorfo e/ou fluoreto em esmalte com lesão artificial de cárie. Dez voluntários

participaram do estudo com duração de 5 dias para cada grupo (esmalte desmineralizado +

Fluroshield, esmalte desmineralizado + Aegis (ACP), esmalte desmineralizado + Fluoreto

(experimental), esmalte desmineralizado + ACP + Fluoreto (experimental) e esmalte

desmineralizado – Controle) e intervalo de 7 dias entre eles. Dez dias antes do início e durante

todo o experimento foi utilizado dentifrício não fluoretado. Após o período intrabucal foi

avaliada a porcentagem de recuperação de microdureza de superfície (%MDS), recuperação da

área mineral integrada (∆Z) e determinada a concentração de fluoreto (µg F/mm

3

), cálcio (µg

Ca/mm

3

) e fósforo (µg P/mm

3

) presentes no esmalte. Os dados obtidos da %MDS e ∆Z foram

submetidos à Análise de Variância seguida do teste de Tukey, e os do fluoreto, cálcio e fósforo

foram submetidos ao teste de Kruskal-Wallis (p<0,05). Todas as variáveis foram submetidas à

análise de regressão e ajustadas de acordo com a tendência. O grupo de materiais com fluoreto

e/ou ACP apresentaram maior capacidade remineralizadora (%MDS e ∆Z) quando comparado

com o grupo Controle. O grupo com apenas ACP apresentou resultado melhor ou semelhante

quando comparado com os outros grupos e a associação do ACP e fluoreto não mostrou ser

mais eficiente. A distância de 150 µm mostrou mais remineralizada quando comparada com a de

∗

Normalização segundo a revista Operative Dentistry (Anexo A).

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Resumo

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600 µm para os valores de %MDS. As concentrações de fluoreto, cálcio e fósforo presentes no esmalte

variaram de acordo com o grupo analisado. Entre as variáveis avaliadas, somente foi verificada

correlação entre %MDS e ∆Z. Concluiu-se que os selantes que contêm fosfato de cálcio amorfo e/ou

fluoreto foram capazes de promover a remineralização.

Palavras-chave: Fosfato de cálcio amorfo, fluoretos, selantes de fossas e fissuras, remineralização

dentária.

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Silva KG. In situ evaluation of sealants with amorphous calcium phosphate and/or fluoride and their

remineralization ability. [Thesis]. Araçatuba: UNESP – São Paulo State University; 2007.

The aim of this study was to evaluate in situ the remineralization potential of sealants containing

amorphous calcium phosphate and/or fluoride in artificially induced enamel carious lesions. Ten

volunteers enrolled the study that had duration of five days for each group (demineralized enamel +

Fluroshield, demineralized enamel + Aegis (ACP), demineralized enamel + Fluoride (experimental),

demineralized enamel + ACP + Fluoride (experimental) and demineralized enamel - Control). A wash-

out period of seven days was allowed between the treatments. Ten days before and during the whole

experiment the volunteers used non-fluoridated dentifrice. After the intrabucal period, the percentage

recovery of surface microhardness (%RSM) and the recovery of integrated mineral area (∆Z) were

evaluated. The concentration of fluoride (µg F/mm

3

), calcium (µg Ca/mm

3

) and phosphorous (µg

P/mm

3

) present in enamel were also determined. Data obtained from %RSM and ∆Z were submitted

to Analysis of Variance followed by Tukey test. Data from fluoride, calcium and phosphorous were

submitted to Kruskal-Wallis test (p<0.05). All variables were evaluated also by regression analysis and

adjusted according to the tendency. The groups from fluoride materials and/or ACP presented higher

remineralization ability (%RSM and ∆Z) when compared to the Control group. The group with only

ACP showed a better or similar result when compared to the other groups. The ACP association with

fluoride didn’t show a higher efficacy. For %RSM, the 150 µm distance showed a higher

remineralization when compared to the 600 µm distance. The concentrations of fluoride, calcium and

phosphorous present in enamel varied according to the group evaluated. Between the variables

Abstract

AbstractAbstract

Abstract

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

evaluated, only %RSM and ∆Z were correlated. It was concluded that the sealants with amorphous

calcium phosphate and/or fluoride were able to promote enamel remineralization.

Keywords: Amorphous calcium phosphate, fluoride, pit and fissure sealants, tooth remineralization.

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Introdução 18

Proposição 20

Material e Método 21

Resultado 26

Discussão 29

Conclusão 32

Referências 33

Anexos 37

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Apesar de todos os avanços científicos mostrados na prevenção, a prevalência de cárie na

superfície oclusal ainda é alta.

1-2

Na tentativa de prevenir a doença cárie nesta região os selantes de

fóssulas e fissuras foram desenvolvidos e desde então largamente recomendados e utilizados na

odontologia.

Dentre os agentes que têm o propósito de remineralizar ou minimizar formação de cáries

podem-se incluir: íons cálcio e fosfato da saliva ou de outras fontes (dentifrícios, goma de mascar,

bebidas, soluções remineralizantes e materiais restauradores) e/ou liberação/introdução de fluoreto de

fonte sistêmica (fluoretação da água e comprimidos) ou tópica (dentifrícios, vernizes, géis, goma de

mascar e materiais restauradores).

O cálcio e o fosfato da saliva é a defesa natural contra a perda mineral

do dente. Contudo, é verificado que se apenas cálcio e fosfato salivar estiverem disponíveis, essa

remineralização ocorrerá somente na parte mais superficial da lesão, ficando o restante apenas

paralisado.

3

Como método adicional de controle da cárie, o fluoreto presente no ambiente bucal tem

exercido um importante papel na estrutura dentária diminuindo a desmineralização e potencializando a

remineralização.

Entretanto, o efeito do fluoreto pode ser limitado pela disponibilidade de cálcio e

fosfato no local da lesão

3

ou na saliva.

4

O fosfato de cálcio amorfo (ACP) tem sido identificado como um possível precursor na

formação biológica da hidroxiapatita. Aplicações odontológicas baseadas nas propriedades únicas do

ACP estão sendo desenvolvidas, bem como o aprimoramento de suas propriedades e associações com

produtos que possuem semelhante potencial anti-desmineralizante/remineralizante.

5-10

Uma concentração suplementar de íons cálcio e fosfato quando fornecida sem insolubilizar o

fluoreto, poderia aumentar sua eficiência.

11-12

Nesse sentido, as propriedades do fosfato de cálcio

amorfo e/ou fluoreto deveriam ser avaliadas em selantes de fóssulas e fissuras, de modo a atuar como

Introdução

IntroduçãoIntrodução

Introdução

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

19

alternativa favorável no processo de remineralização do esmalte, tornando-se um método adicional na

prevenção da cárie dentária.

20

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o

O objetivo deste estudo foi verificar in situ a capacidade remineralizadora de selantes que

contenham fosfato de cálcio amorfo e/ou fluoreto em esmalte com lesão artificial de cárie.

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

21

M

MM

M

MM

M

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o

oo

o

1. Preparação dos blocos de esmalte e análise da microdureza de superfície (MDS)

Dentes incisivos bovinos (Comissão de Ética na Experimentação Animal (CEEA) protocolo n°

95/05 - FOA - UNESP) (Anexo B) foram armazenados em formol 2%, pH 7,0 durante 30 dias

13

e

posteriormente seccionados e polidos para obtenção de blocos de esmalte (4x3x2 mm) (Anexo C e D).

Testes de microdureza foram realizados utilizando o microdurômetro Shimadzu Micro Hardness Tester

HMV-2000 (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japan), com penetrador tipo Knoop, carga estática de 25

gramas e tempo de 10 segundos, acoplado ao Software para análise de imagem CAMS-WIN (NewAge

Industries, Inc., Southampton, PA, USA) (Anexo E). Foram realizadas 5 impressões, na superfície do

esmalte, separadas entre si por uma distância de 100 µm, nas distâncias de 150, 300 e 600 µm da borda

seccionada, totalizando 15 impressões (Anexo E). Duzentos blocos foram selecionados com dureza

entre 320 a 360 Knoop (KHN).

2. Indução da lesão artificial de cárie

Lesões artificiais de cárie foram produzidas através da imersão em solução

14

contendo 1,3

mmol/L Ca, 0,78 mmol/L P em tampão acetato 0,05 mol/L, em pH 5,0; 0,0315 ppm F (24

mL/bloco), por um período de 16 horas, a uma temperatura de 37

o

C) (Anexo F).

Os blocos foram

submetidos à microdureza de superfície pós-desmineralização (MDS

1

) sendo realizadas 5 impressões,

entre as 5 impressões iniciais (MDS) nas distâncias previamente definidas da borda do bloco (Anexo E).

A

C

B

D

Material e Método

Material e MétodoMaterial e Método

Material e Método

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

22

3. Seleção dos voluntários e protocolo in situ

Dez adultos jovens saudáveis (5 homens e 5 mulheres), estudantes da Faculdade de Odontologia

de Araçatuba – UNESP, com fluxo salivar não estimulado normal (≥ 0,2 mL/min)

15-17

participaram da

pesquisa após explicação dos seus objetivos e leitura da Carta de Esclarecimento ao Voluntário e

assinatura do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido, aprovado no Comitê de Ética em Pesquisa

(CEP) processo nº 2005-01860 (FOA – UNESP) (Anexo G). Um exame intra-bucal confirmou

ausência de atividade de cárie, doença periodontal ou qualquer tipo de lesão na cavidade bucal. Foram

excluídos fumantes, os que utilizavam medicamentos ou que possuíam doenças crônicas sistêmicas.

18

A

arcada superior de cada voluntário foi moldada para a confecção de dispositivo palatino em resina

acrílica com 4 cavidades

19

posicionadas bilateralmente na região do segundo pré-molar e primeiro

molar.

Dez dias antes do início da fase experimental foi fornecido aos voluntários dentifrício não

fluoretado

16-17,19

escova dentária e instruções sobre higiene bucal (Anexo H). O dispositivo palatino

contendo bloco de esmalte desmineralizado + selante ou bloco de esmalte desmineralizado – controle

permaneceu na cavidade bucal por 5 dias

17

e foi higienizado durante a escovação por 15 segundos

20

sendo somente removido durante a higienização e as principais refeições.

15,20

Cinco períodos

experimentais foram estabelecidos: esmalte desmineralizado + Fluroshield, esmalte desmineralizado +

Aegis (ACP), esmalte desmineralizado + Fluoreto (selante experimental), esmalte desmineralizado +

ACP + Fluoreto (selante experimental) e esmalte desmineralizado - Controle. Entre os períodos

experimentais houve um prazo de espera de 7 dias

16,19

no qual todos os voluntários continuaram

utilizando dentifrício não fluoretado. Amostra da água ingerida pelos voluntários (10 mL) foi coletada

no segundo e quarto dia do período experimental para determinação do fluoreto presente (Anexo H).

Material e Método

Material e MétodoMaterial e Método

Material e Método

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

23

4. Confecção dos corpos-de-prova e adaptação ao bloco de esmalte

Foram confeccionados 40 corpos-de-prova para cada selante analisado [Fluroshield (Dentsply

Internacional Inc, Milford, DE, USA); Aegis (ACP) (Bosworth, Skokie, IL, USA); Fluoreto - selante

experimental (Bosworth, Skokie, IL, USA); ACP + Fluoreto - selante experimental (Bosworth, Skokie,

IL, USA)], os quais foram obtidos a partir de matrizes metálicas que apresentam uma cavidade de 3 mm

de largura, 2 mm de altura e 1 mm de espessura (Anexo I). Os materiais foram inseridos em um único

incremento na cavidade da matriz, com o objetivo de evitar a inclusão de bolhas de ar durante os

procedimentos de inserção. A seguir, a superfície do material foi recoberta com tira matriz de poliéster,

seguida da aplicação de uma lâmina de vidro. Nestas condições, aplicou-se força durante 10 segundos,

para que houvesse o extravasamento do excesso do material. A fotopolimerização foi realizada com

auxílio de aparelho fotopolimerizador VIP (Bisco, Schaumburg, IL, USA), por período de 40 segundos,

nas superfícies superior e inferior.

21

Após o endurecimento, os excessos foram cuidadosamente

removidos (Anexo I). Os corpos-de-prova foram justapostos às bordas seccionadas dos blocos de

esmalte e fixados com auxílio de cera pegajosa. Este conjunto (bloco de esmalte desmineralizado +

corpo-de-prova ou esmalte desmineralizado) foi fixado com cera pegajosa em cada cavidade do

dispositivo palatino, que permitia o seu correto posicionamento (Anexo J).

5. Avaliação da microdureza após o período intrabucal

Os blocos de esmalte foram removidos do dispositivo palatino e submetidos ao teste de

microdureza de superfície final (MDS

2

), utilizando a mesma metodologia do item 1. A 150, 300 e 600

µm da borda seccionada do bloco de esmalte foram realizadas 5 impressões, entre as 5 impressões

iniciais, separadas entre si por uma distância de 100 µm (Anexo E). Avaliou-se a porcentagem de

recuperação da microdureza de superfície (%MDS=[[MDS

2

– MDS

1

]/MDS – MDS

1

]x100) em cada

distância. A seguir, uma secção longitudinal foi realizada no centro dos blocos e uma das metades foi

Material e Método

Material e MétodoMaterial e Método

Material e Método

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

24

incluída em resina acrílica incolor e polida (Anexo K). Para a análise da microdureza em secção

longitudinal (MDSL) foi utilizada carga estática de 25 gramas e tempo de 10 segundos. As impressões

foram realizadas a distâncias de 150, 300 e 600 µm da borda seccionada e nas profundidades de 10, 30,

50, 70, 90, 110, 220 e 330 µm da superfície externa do esmalte, totalizando 24 impressões (Anexo K). A

área integrada (KHN x µm) do esmalte hígido (Z

1

) e após período intrabucal (Z

2

) foram calculadas

22

até

a profundidade de 70 µm, seguido do cálculo de recuperação da área mineral integrada, cuja fórmula

∆Z = (Z

2

- Z

1

) (Anexo N). A profundidade da lesão foi mensurada da distância da superfície até onde a

dureza retornou a 95% do nível do esmalte hígido.

6. Análise de fluoreto, cálcio e fósforo presentes no esmalte após o período intrabucal e

concentração de fluoreto na água ingerida pelos voluntários

As outras metades dos blocos seccionados longitudinalmente foram submetidas ao

procedimento de microabrasão

23

(Anexo L). Para análise de fluoreto e de cálcio utilizou-se,

respectivamente, os eletrodos específicos Orion 9609-BN (Orion Research, Inc., Beverly, MA, USA),

previamente calibrado com soluções padrão (0,09 a 1,44 µgF/mL), e Orion 9300 (Orion Research, Inc.,

Beverly, MA, USA), previamente calibrado com soluções padrão (10 a 160 µgCa/mL), acoplados a um

analisador de íons Orion 720 A (Orion Research, Inc., Beverly, MA, USA) (Anexo L). Para

determinação do fluoreto, foi acrescentado TISAB III (“tampão ajustador de força iônica total”, Orion

Research Inc, Beverly, MA, USA), conforme planilha do Anexo O, e para o cálcio, ISA (“ajustador de

força iônica”, Orion Research Inc, Beverly, MA, USA), conforme planilha do Anexo P. O fósforo foi

dosado através do método colorimétrico

23

utilizando espectrofotômetro (Hitachi U-1100 UV/Vis

spectrophotometer - Hitachi High Technologies, Tokyo, Japan) no comprimento de onda de 660 nm e

solução-padrão de fósforo (3mg%) (Anexo L), conforme planilha do Anexo Q. Os valores foram

expressos em µg/mm

3

. A determinação do fluoreto na água ingerida pelos voluntários foi realizada

utilizando um eletrodo específico combinado para íon fluoreto (Orion 9609-BN) e analisador de íons

Material e Método

Material e MétodoMaterial e Método

Material e Método

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

25

digital (Orion 720 A), previamente calibrado com soluções padrão (0,1 a 1,6 µgF/mL) em TISAB III,

sendo as dosagens realizadas sob agitação constante (TE-081 – Tecnal, Piracicaba, SP, Brasil) (Anexo

L), conforme planilha do Anexo R. Os valores foram expressos em µgF/mL.

7. Análise estatística

Os dados obtidos da %MDS e ∆Z após comprovação de sua homogeneidade foram submetidos

à Análise de Variância seguida do teste de Tukey. Os dados de fluoreto, cálcio e fósforo presentes no

esmalte foram analisados pelo teste de Kruskal-Wallis. Todas as variáveis foram submetidas à análise de

regressão e ajustadas de acordo com a tendência. As análises foram realizadas utilizando o software

GMC versão 2002 e o nível de significância estabelecido foi de 5%.

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

26

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A análise de água ingerida pelos voluntários durante todo o período do experimento mostrou

um valor médio de 0,72 ppm F (máximo 1,29 e mínimo 0,03).

A Tabela 1 (Anexo M) mostra os resultados da porcentagem de recuperação de microdureza de

superfície (%MDS) de acordo com as distâncias e os grupos.

Tabela 1 – Porcentagem de recuperação de microdureza de superfície (%MDS) (média ±dp, n=10) de

acordo com as distâncias e os grupos.

Grupos

Distâncias

(µm)

Controle Fluroshield

ACP + Fluoreto

(Experimental)

Aegis

Fluoreto

(Experimental)

150 18,7±2,5a

*

32,8±3,8e,f 32,5±5,2d,e,f 33,9±3,9g,h 34,3±4,8h

300 18,5±2,6a 31,7±4,0c,d 31,6±4,8c,d 33,0±4,0f,g 32,9±4,6e,f

600 18,2±2,5a 30,3±4,6b 31,0±4,4b,c 32,0±4,0d,e 32,0±4,3d,e

Total 18,5±2,4A

+

31,6±4,1B 31,7±4,7B 33,0±3,9C 33,1±4,5C

Médias seguidas de letras distintas diferem estatisticamente (5%).

*

Letras minúsculas: comparação

da %MDS entre os grupos e as distâncias.

+

Letras maiúsculas: comparação dos valores totais da

%MDS entre os grupos.

Em relação à distância da borda seccionada do esmalte, o Controle não apresentou diferença

significante nas distâncias analisadas. Para os demais grupos, a distância de 150 µm apresentou o maior

valor de %MDS quando comparado com a distância de 600 µm. Considerando as médias dos valores

totais de %MDS

(Tabela 1) o Fluoreto e o Aegis foram os materiais que demonstraram maiores valores

de %MDS sendo semelhantes entre si (p>0,05). O Fluroshield e o ACP + Fluoreto apresentaram

valores intermediários de %MDS sendo semelhantes entre si (p>0,05). O Controle mostrou o menor

valor de %MDS sendo diferente dos demais grupos (p<0,05).

Resultado

ResultadoResultado

Resultado

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

27

0

50

100

150

200

250

300

350

400

Controle Fluroshield ACP +

Fluoreto

Aegis Fluoreto

Grupos

µ

g Ca/mm

3

a

b

c

b,c

(A) (B)

(C)

Figura 1. Gráficos das concentrações (µg/mm

3

)

de fluoreto (A), cálcio (B) e fósforo (C) (média ±

ep, n=10) presentes no esmalte após o período

intrabucal de acordo com os grupos. Letras

distintas indicam diferenças estatisticamente

significantes (5%).

Para a concentração de fluoreto presente no esmalte (Figura 1A), foi observada semelhança para

o Fluoreto, ACP + Fluoreto e Fluroshield (p>0,05) apresentando os maiores valores. O ACP +

Fluoreto foi estatisticamente semelhante ao Aegis. O Controle foi semelhante ao Aegis e apresentou o

menor valor diferindo significativamente dos demais grupos.

Em relação ao cálcio presente no esmalte (Figura 1B), maiores valores foram verificados para o

Fluroshield, Aegis e Fluoreto, semelhantes entre si (p>0,05). O ACP + Fluoreto mostrou semelhança

com o Aegis e Fluoreto (p>0,05). O menor valor foi verificado para o Controle diferindo

significativamente dos demais.

Para a concentração de fósforo presente no esmalte (Figura 1C), o ACP + Fluoreto foi

semelhante ao Aegis apresentando os menores valores (p>0,05). O Fluroshield foi semelhante ao

Fluoreto com valores intermediários (p>0,05). O maior valor foi encontrado no Controle e apresentou

diferente dos demais grupos (p<0,05).

0

30

60

90

120

150

180

210

Controle Fluroshield ACP +

Fluoreto

Aegis Fluoreto

Grupos

µ

g P/mm

3

c

b

a

b

0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0.9

Controle Fluroshield ACP +

Fluoreto

Aegis Fluoreto

Grupos

µ

g F/mm

3

a

c

b,c

a,b

c

Resultado

ResultadoResultado

Resultado

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

28

-11500

-10500

-9500

-8500

-7500

-6500

-5500

-4500

150 300 600

Distância

∆

Z (Área Integrada)

Controle

Fluroshield

ACP +

Fluoreto

Aegis

Fluoreto

b

A,B

b,c

a

b

c

a

B

A

A,B

A

A A

A

+

B

b

c

*

Figura 2. Gráfico da recuperação da área mineral integrada (∆Z) (média ±ep, n=10) em

relação à distância da borda seccionada do esmalte. Médias seguidas de letras distintas

diferem estatisticamente (5%).

*

Letras minúsculas: comparação dos valores entre os

grupos para cada distância.

+

Letras maiúsculas: comparação dos valores entre às

distâncias para cada grupo.

De acordo com a Figura 2, o grupo Controle apresentou o menor ∆Z sendo significativamente

diferente dos demais grupos em todas as distâncias analisadas. Para os demais grupos, nas distâncias de

300 e 600 µm não foi verificada diferença significante nos valores de ∆Z. Observando as distâncias em

cada grupo, no Controle, Fluroshield e ACP + Fluoreto não foi verificada diferença significante entre

as distâncias analisadas, porém, no Aegis e Fluoreto houve diferença significante nas distâncias de 150 e

600 µm.

Entre as variáveis analisadas (%MDS, ∆Z, fluoreto, cálcio e fósforo) somente foi verificada

correlação entre %MDS e ∆Z (r=0,9822; p=0,001).

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

29

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D

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Frente a novos materiais que vem sendo introduzidos na prática odontológica, além de ser

importante estudar e comprovar suas propriedades, é interessante propor modificações ou associações

que possam contribuir para o seu melhor desempenho. Selantes com a propriedade de liberação de

cálcio e fosfato através da presença do ACP já estão sendo comercializados. Entretanto, trabalhos

avaliando a sua capacidade remineralizadora nas condições do ambiente bucal ainda não foram

realizados.

Neste estudo, os materiais foram adaptados aos blocos de esmalte, para propiciar a realização

da microdureza de superfície final próxima ao material. Trabalhos realizados

24-25

confeccionaram

cavidades convencionais no esmalte para os testes envolvendo materiais. Porém, ao pressionar o

material na cavidade, ocorreria um excesso sobre a superfície de esmalte cobrindo as impressões iniciais

e mesmo realizando o polimento da superfície estas impressões seriam removidas não permitindo o

cálculo da porcentagem de alteração de microdureza de superfície. O objetivo de realizar essa

metodologia foi de propiciar a realização da microdureza de superfície e em secção longitudinal e

verificar se haveria diferenças entre elas, isto é, determinar se os efeitos dos materiais seriam mais

superficiais ou em profundidade na lesão de cárie artificial. Como os resultados mostraram uma

correlação significante, poder-se-ia optar por apenas um dos testes em outros estudos.

Os valores determinados de fluoreto na água ingerida mostraram-se constantes para a maioria

dos voluntários no decorrer do estudo e com variações entre os voluntários. Isto ocorreu devido à

ingestão de água de diferentes fontes (mineral ou abastecimento público). Os resultados não sugerem

uma grande interferência desse fluoreto na remineralização do esmalte, uma vez que o Controle

apresentou menores valores de %MDS, fluoreto presente no esmalte e ∆Z (Tabela 1, Figura 1A e 2).

Discussão

DiscussãoDiscussão

Discussão

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

30

Todos os grupos avaliados foram capazes de promover a remineralização, inclusive o Controle,

o que demonstra que o modelo in situ utilizado foi capaz de ativar o processo de remineralização.

Porém, o Controle mostrou uma capacidade remineralizadora menor em relação aos demais grupos,

sendo verificada uma grande quantidade de fósforo e menores de fluoreto e cálcio presentes no esmalte

(Figura 1). Uma menor proporção molar de cálcio/fosfato ou deficiência de cálcio na apatita dentária

geralmente é atribuída a substituição desses íons por outros durante a remineralização,

26

entre eles o

fosfato monohidrogenado (HPO

4

2-

), que resultou em um mineral menos duro (Tabela 1). O resultado

dos demais grupos foi devido à liberação de íons provenientes dos materiais que favoreceram a

remineralização do esmalte.

6,27

Dessa forma, não somente o fluoreto foi capaz de promover a

remineralização, mas também o ACP, como pode ser observado na Tabela 1 e Figura 2. Nos grupos

contendo somente fluoreto além dos resultados de %MDS e ∆Z, observa-se maior presença de fluoreto

e cálcio e menor quantidade de fósforo no esmalte, quando comparado ao Controle. O fluoreto

liberado pelo material atuou como um catalisador acelerando a remineralização, o que resultou também

em de cristais de apatita ricos em fluoreto (Figura 1A) que são mais mineralizado

28-29

e apresentando-se

mais duro (Tabela 1). O grupo que continha apenas ACP apresentou a menor concentração de fluoreto

e fósforo, porém quantidade de cálcio semelhante aos demais selantes. Somando-se aos resultados de

%MDS e ∆Z, observa-se que o ACP promoveu uma supersaturação dos níveis de cálcio e fósforo em

proporções favoráveis para formação de hidroxiapatita,

5-7

verificado pelo maior valor de cálcio em

relação ao fósforo presente no esmalte (Tabela 1B e C) que é característica de uma apatita mais pura e

melhor estruturada e consequentemente mais dura (Tabela 1).

O ACP + Fluoreto não mostrou ser mais eficaz que os outros materiais (Tabela 1 e Figura 2),

uma vez que se esperava um sinergismo entre o fluoreto e o ACP liberado por esse material. Contudo,

isso não foi verificado em nosso estudo, apesar da concentração de fluoreto, cálcio e fósforo presentes

no esmalte ser semelhante ao Aegis (Figura 1) que apresentou maior potencial remineralizador e

semelhante ao Fluoreto (Tabela 1 e Figura 2). Os dados de fluoreto e cálcio presentes no esmalte

podem indicar uma insolubilização de parte do fluoreto e cálcio liberados pelo selante (Figura 1A e B) e

Discussão

DiscussãoDiscussão

Discussão

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

31

isto pode ter interferido no produto depositado no esmalte não apresentando melhores resultados de

%MDS e ∆Z em relação aos outros selantes.

Um ponto crítico do selamento é sua margem e suas imediações, locais que podem ocorrer

maior acúmulo de biofilme, dificultando a remineralização da saliva, sendo assim, um local mais ácido

que as áreas mais distantes.

15

Em nosso estudo, os valores que indicam a remineralização foram maiores

nas regiões mais próximas da borda seccionada do bloco (150 µm) (Tabela 1 e Figura 2). Isto

provavelmente ocorreu devido à maior concentração de íons nessa região e conseqüente incorporação

pelo esmalte,

6,24,27,30

embora um efeito à distância do material também possa promover a

remineralização da lesão de cárie.

27

Este estudo mostrou a eficácia do fluoreto e do ACP na capacidade remineralizadora dos

materiais testados em ambiente bucal, mesmo apresentando formas diferentes de deposição de apatita.

A formulação do selante com ACP e fluoreto deve ser modificada e novas formulações com alteração

na proporção ACP/fluoreto poderiam ser testadas.

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

32

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C

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C

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Concluiu-se que os selantes que contêm fosfato de cálcio amorfo e/ou fluoreto foram capazes

de promover a remineralização.

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

33

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∗∗

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∗

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Normalização segundo a revista Operative Dentistry (Anexo A).

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37

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

A

n

e

x

o

s

A

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o

A

NORMALIZAÇÃO: REVISTA OPERATIVE DENTISTRY

OPERATIVE DENTISTRY

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Manuscripts with errors in language, spelling, punctuation, grammar and/or syntax

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Anexo A

Anexo A Anexo A

Anexo A 38

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

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In addition, the corresponding author must provide:

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Anexo A

Anexo A Anexo A

Anexo A 39

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

2. complete mailing address for each author

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4. positions (professor, visiting professor, research scientist)

5. affiliation (Department of Dental Materials, School of Dentistry, University

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2. a clinical revelance statement

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4. introduction, methods & materials, results, discussion and conclusion

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6. acknowledgement, disclaimer and/or recognition of support (if needed) on

separate page

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1. a running (short) title

2. purpose

3. description of technique

4. list of materials used

5. potential problems

6. summary of advantages and disadvantages

7. references

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2. a clinical relevance statement based on the conclusions of the review

3. conclusions based on the literature review…without this, the review is just

an exercise

4. references

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2. full name of manufacturer

3. city, state and/or country of manufacturer

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Please limit size of tables to no more than one page. Running a table on to a

Anexo A

Anexo A Anexo A

Anexo A 40

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

second page complicates the page-setting process and is confusing for the

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163-68).

4. Abstracts should be avoided when possible but, if used, must include the

above plus the abstract number and page number.

5. Book chapters must include chapter title, book title in italics, editors names

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6. Websites may be used as references, but must include the date (day, month

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Anexo A

Anexo A Anexo A

Anexo A 41

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

7. Papers in the course of publication should only be entered in the references

if they have been accepted for publication by a journal and then given in

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8. DO NOT include unpublished data or personal communications in the

reference list. Cite such references parenthetically in the text and include a

date.

EXAMPLES OF REFERENCE STYLE

•

Journal article:

two authors Evans DB & Neme AM (1999) Shear bond strength of composite

resin and amalgam adhesive systems to dentin American Journal of Dentistry 12(1) 19-

25.

•

Journal article:

multiple authors Eick JD, Gwinnett AJ, Pashley DH & Robinson SJ (1997) Current

concepts on adhesion to dentin Critical Review of Oral and Biological Medicine 8(3) 306-

335.

•

Journal article:

special issue/supplement Van Meerbeek B, Vargas M, Inoue S, Yoshida Y,

Peumans M, Lambrechts P and Vanherle G (2001) Adhesives and cements to

promote preservation dentistry Operative Dentistry (Supplement 6) 119-144.

•

Abstract:

Yoshida Y, Van Meerbeek B, Okazaki M, Shintani H & Suzuki K (2003)

Comparative study on adhesive performance of functional monomers Journal of

Dental Research 82(Special Issue B) Abstract #0051 p B-19.

•

Corporate publication:

ISO-Standards (1997) ISO 4287 Geometrical Product Specifications Surface

texture: Profile method – Terms, definitions and surface texture parameters Geneve:

International Organization for Standardization 1st edition 1-25.

•

Book:

single author Mount GJ (1990) An Atlas of Glass-ionomer Cements Martin Duntz Ltd,

London.

•

Book:

two authors Nakabayashi N & Pashley DH (1998) Hybridization of Dental Hard

Tissues Quintessence Publishing Tokyo.

Anexo A

Anexo A Anexo A

Anexo A 42

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

•

Book:

chapter Hilton TJ (1996) Direct posterior composite restorations In: Schwarts RS,

Summitt JB, Robbins JW (eds) Fundamentals of Operative Dentistry Quintessence

Chicago 207-228.

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corporate publication National Association of Social Workers (2000) NASW

Practice research survey 2000. NASW Practice Research Network, 1. 3. Retrieved

online September 8, 2003 from: http://www.socialworkers.org/naswprn/default

43

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

A

n

e

x

o

B

COMISSÃO DE ÉTICA NA EXPERIMENTAÇÃO ANIMAL (CEEA)

44

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

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C

OBTENÇÃO

DOS

BLOCOS

DE

ESMALTE

BOVINO

- Secções: radicular; face vestibular; vestibular longitudinal e

transversal.

1. Coroa de dente bovino incisivo central inferior,

separada da raiz através de disco diamantado de

duas faces (D 91 - KG Sorensen, São Paulo, SP,

Brasil), montado em motor de bancada (Nevoni,

São Paulo, SP, Brasil), mantido sob refrigeração

(água destilada/deionizada).

2. Coroa dentária fixada em placa de acrílico (4x4x

0,4 cm) com cera pegajosa (Kota Ind. e Com.

LTDA, São Paulo, SP, Brasil) pela sua face

proximal.

3. Placa montada em cortadeira (Isomet Low

Speed Saw - Buehler, Lake Bluff, IL, USA) sob

refrigeração com água destilada/deionizada.

4. Secção da coroa utilizando disco diamantado

(série 15 HC Diamond – n. 11-4244 - Buehler,

Lake Bluff, IL, USA) separando a superfície

vestibular da lingual.

5. Face vestibular fixada na placa de acrílico.

Anexo C

Anexo C Anexo C

Anexo C 45

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

6. Secção da face vestibular no sentido

longitudinal, na porção mais plana, utilizando-se 2

discos diamantados (série 15 HC Diamond – n. 11-

4243 - Buehler, Lake Bluff, IL, USA), montados

em cortadeira (Isomet Low Speed Saw – Buehler)

sob refrigeração com água destilada/deionizada e

separados por um disco espaçador de alumínio

com 4 mm de espessura.

7. Secção da face vestibular no sentido transversal,

na porção mais plana, utilizando-se 2 discos

diamantados (série 15 HC Diamond n. 11-4243 -

Buehler), montados em cortadeira (Isomet Low

Speed Saw – Buehler) sob refrigeração com água

destilada/deionizada e separados por um disco

espaçador de alumínio com 4 mm de espessura.

8. Fragmento vestibular do dente bovino, fixado

sobre placa de resina. Ao lado, bloco de esmalte

dentário (4x4x2 mm).

46

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

A

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x

o

D

DESGASTE E POLIMENTO DOS BLOCOS DE ESMALTE

- Planificação da dentina, polimento do esmalte e secção transversal.

1. Bloco de esmalte fixado em disco de resina

acrílica pré-fabricada (± 3 cm de diâmetro por ±

8 mm de espessura), com auxílio de cera pegajosa

(Kota Ind. e Com. LTDA), com a superfície

dentinária voltada para cima.

2. Ajuste da dentina para obtenção de superfícies

paralelas entre esmalte e dentina, utilizando

politriz (APL-4 - AROTEC S.A. Ind. e Com.,

Cotia, SP, Brasil) e lixas de granulação 320

(Carbimet Paper Discs 30-5108-320 - Buehler,

Lake Bluff, IL, USA), 2 pesos, durante 20

segundos sob baixa rotação e refrigeração.

3. Blocos polidos fixados com a superfície do

esmalte voltada para cima.

4. Secções transversais realizadas a uma distância

de 1 mm da borda do bloco, utilizando um disco

diamantado (disco n. 11-4243 série 15 HC

Diamond - Buehler) e cortadeira (Isomet Low

Speed Saw - Buehler), sob refrigeração com água

destilada/deionizada. A parte maior (4x3x2 mm)

do bloco foi utilizada no experimento, sendo a

menor parte descartada.

Anexo D

Anexo DAnexo D

Anexo D

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

47

Seqüência do polimento do esmalte:

1. Pedra-pomes, água deionizada e taça de borracha montada em contra-ângulo em baixa-

rotação;

2. Na politriz APL-4 AROTEC – lixa de granulação 600 (30 segundos – 2 pesos), 800 (30

segundos – 2 pesos) e 1200 (30 segundos – 2 pesos) (Carbimet Paper Discs, 30-5108 -

Buehler, Lake Bluff, IL, USA) e refrigeração a água. Limpeza em lavadora ultrassônica e

água destilada/deionizada por 2 minutos, entre cada lixa;

3. Na politriz APL-4 AROTEC – acabamento final com disco de papel feltro TEXMET

1000 (Buehler Polishing Cloth, Lake Bluff, IL, USA) (1 minuto – 2 pesos) e suspensão de

diamante 1 micron base-água (Buehler, Lake Bluff, IL, USA);

4. Limpeza em lavadora ultrassônica utilizando solução detergente (Ultramet Sonic Cleaning

Solution - Buehler, Lake Bluff, IL, USA) diluída 20:1 em água destilada/deionizada (3

minutos);

5. Lavagem durante 30 segundos com jato de água destilada/deionizada.

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

48

A

n

e

x

o

E

AVALIAÇÃO DA MICRODUREZA DE SUPERFÍCIE

- Microdureza inicial, pós-desmineralização e final.

1. Microdurômetro (Shimadzu Micro

Hardness Tester HMV-2.000 - Shimadzu

Corporation, Kyoto, Japan) com

penetrador tipo Knoop, acoplado ao

Software para análise de imagem (CAMS-

WIN - NewAge Industries, Inc.,

Southampton, PA, USA).

2. Bloco de esmalte sendo submetido à

leitura no microdurômetro, carga estática

de 25 gramas e tempo de 10 segundos,

para análise da microdureza de superfície.

3. Fotomicrografia das impressões da

análise de microdureza de superfície

inicial (a), pós-desmineralização (b) e

final (c) do esmalte (Aumento: 100x).

150

µm

300

µm

600

µm

100

µm

a

Borda seccionada

b

c

150

µm

300

µm

600

µm

100

µm

a

Borda seccionada

b

c

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49

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F

INDUÇÃO DA LESÃO ARTIFICIAL DE CÁRIE

- Isolamento dos blocos e imersão em solução artificial de cárie.

1. Blocos isolados com uma fina camada de

esmalte cosmético de unha vermelho (esmalte

dentário exposto).

2. Blocos imersos em solução artificial de cárie à

temperatura de 37ºC por 16 horas (24

mL/bloco).

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

50

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x

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G

COMITÊ DE ÉTICA EM PESQUISA (CEP)

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

51

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x

o

H

INSTRUÇÕES

AOS

VOLUNTÁRIOS

1. Dez dias antes do início da fase experimental e por todo o período do estudo utilizar o

dentifrício fornecido.

2. Não utilize produtos para bochecho ou outros agentes tópicos de qualquer natureza.

3. Não utilize vitaminas ou suplementos sistêmicos e alimentos que contenham fluoreto

durante a fase experimental.

4. O dispositivo palatino deverá ser utilizado por 5 dias durante todo o dia e a noite.

Poderá ser removido da boca somente durante a higienização bucal, nas principais

refeições e para ingestão de líquidos. NÃO ESQUECER DE RECOLOCAR O

APARELHO.

5. Quando o dispositivo palatino estiver fora da boca guarde-o na caixa de estocagem com

uma gaze umedecida.

6. Realize a higiene bucal diária normalmente (3 vezes ao dia - após as principais refeições

e antes de dormir). Higienizar os blocos de esmalte no aparelho com escova e dentifrício

por 15 segundos, sem colocar muita pressão na escova.

7. Coletar amostra de água no frasco J10 no 2º e 4º dia, e estocar em ambiente refrigerado

(geladeira -4ºC).

8. Caso tenha alguma dúvida entrar em contato.

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

52

A

n

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x

o

I

CONFECÇÃO DOS CORPOS-DE-PROVA

- Selantes, matriz, fotopolimerização e corpos-de-prova.

1. Selantes: A. Fluroshield; B. Aegis (ACP);

C. Fluoreto (experimental); D. ACP +

Fluoreto (experimental).

2. Matriz metálica constituída por 3 partes. A:

base; B e C: partes que justapostas formam os

orifícios para inserção dos materiais.

3. Matriz montada criando 4 cavidades de 3

mm de largura, 2 mm de altura e 1 mm de

espessura para cada corpo-de-prova.

4. Fotopolimerização dos corpos-de-prova.

A

B

C

D

A

B

C

Anexo I

Anexo I Anexo I

Anexo I 53

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

5. Corpos-de-prova confeccionados.

54

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

A

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x

o

J

DISPOSITIVO PALATINO

- Justaposição do bloco de esmalte ao corpo-de-prova e dispositivo palatino.

1. Esquema apresentando a justaposição do

bloco de esmalte ao corpo-de-prova.

2. Bloco de esmalte justaposto ao corpo-de-

prova e fixados com auxílio de cera pegajosa.

3. Dispositivo palatino.

Esmalte

bovino

C

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p

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-

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p

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a

Esmalte

bovino

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Esmalte

bovino

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Esmalte

bovino

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55

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

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K

AVALIAÇÃO DA MICRODUREZA EM SECÇÃO LONGITUDINAL

- Preparo dos corpos-de-prova e microdureza em secção longitudinal.

1. Blocos de esmalte fixados em lamínula de

vidro com cera pegajosa (Kota Ind. e Com.

LTDA) para secção no sentido longitudinal no

centro da área exposta, utilizando disco

diamantado (série 15 HC Diamond n. 11-4243

– Buehler) montado em cortadeira sob

refrigeração com água destilada/deionizada.

2. Embutidora metalográfica (PRE 30S -

AROTEC, Cotia, SP, Brasil) - utilizada para

inclusão de uma das metades do bloco de

esmalte em 5 gramas de resina acrílica (Buehler

Transoptic Powder, Lake Bluff, IL, USA),

pressão de 150 Kgf/cm

2

, tempo de

aquecimento de sete minutos e mais sete

minutos de resfriamento. Os blocos foram

fixados em posição com cola adesiva (Super

Bonder – Loctite, Itapevi, SP, Brasil).

3. Blocos (2x3x2 mm) – plano longitudinal

voltado para a superfície da resina acrílica, a

qual foi polida.

4. Microdurômetro (Shimadzu Micro Hardness

Tester HMV-2.000 - Shimadzu Corporation,

Kyoto, Japan), com penetrador tipo Knoop,

acoplado ao Software para análise de imagem

(CAMS-WIN - NewAge Industries, Inc.,

Southampton, PA, USA).

Anexo K

Anexo K Anexo K

Anexo K 56

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

5. Bloco de esmalte sendo submetido à leitura

no microdurômetro, carga estática de 25

gramas e tempo de 10 segundos, para análise

da microdureza em secção longitudinal.

6. Fotomicrografia das impressões da análise

de microdureza em secção longitudinal do

esmalte. (Aumento: 100x)

Seqüência do polimento dos blocos de esmalte:

1. Na politriz APL-4 AROTEC - lixa de granulação 320 (1 minuto - 2 pesos), 600 (2

minutos – 2 pesos), 800 (2 minutos – 2 pesos) e 1200 (2 minutos – 2 pesos)

(Carbimet Paper Discs, 30-5108, Buehler) e refrigeração a água. Limpeza em

lavadora ultrassônica e água destilada/deionizada por 2 minutos, entre cada lixa;

2. Na politriz APL-4 AROTEC - acabamento final com disco de papel feltro

MICROCLOTH SUPREME PSA (Buehler Polishing Cloth) e suspensão de

diamante 1/4 micron base-água (Buehler) (2 minutos);

3. Limpeza em lavadora ultrassônica utilizando solução detergente (Ultramet Sonic

Cleaning Buehler) diluída 20:1 em água destilada/deionizada (3 minutos);

4. Lavagem durante 30 segundos com jato de água destilada/deionizada.

Superfície do esmalte

150 µm 300 µm 600 µm

Borda seccionada

Anexo L

Anexo LAnexo L

Anexo L

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

57

A

n

e

x

o

L

DETERMINAÇÃO DE FLUORETO

,

CÁLCIO E FÓSFORO

- Biópsia por microabrasão (análise do fluoreto, cálcio e fósforo no esmalte) e determinação de

fluoreto na água ingerida pelos voluntários.

1. A outra metade dos blocos seccionados

longitudinalmente foram medidos com

paquímetro digital (Mitutoyo CD-15B,

Mitutoyo Sul Americana, Suzano, SP, Brasil

) para

obtenção da área da superfície do esmalte.

2. Blocos colados em mandril e

posicionados em um microscópio

modificado acoplado a um relógio

comparador digital (Mitutoyo 543–250B,

Mitutoyo Sul Americana, Suzano, SP, Brasil

).

3. Desgaste com disco de lixa auto-adesiva

(13 mm de diâmetro) de granulação 600

(Silicon-Carbide, Buehler, Lake Bluff, IL,

USA) em frasco de poliestireno cristal (J-

10, Injeplast, São Paulo, SP, Brasil) para

remoção de uma camada de 50 µm de

esmalte de cada bloco.

Anexo L

Anexo LAnexo L

Anexo L

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

58

4. As superfícies dos blocos foram lavadas

com 0,4 mL de água deionizada, no interior

dos frascos onde acrescentou 0,4 mL de

HCl 1 mol/L. Os frascos foram mantidos

sob agitação constante por 15 minutos na

mesa agitadora (TE-420 Orbital – Tecnal,

Piracicaba, SP, Brasil) e seguido da adição

de 0,8 mL de NaOH 0,5 mol/L.

5. Para análise de fluoreto e cálcio do

esmalte utilizou-se, respectivamente, os

eletrodos específicos Orion 9609-BN

(Orion Research, Inc., Beverly, MA, USA)

e Orion 9300 (Orion Research, Inc.,

Beverly, MA, USA) acoplados a um

analisador de íons Orion 720 A (Orion

Research, Inc. , Beverly, MA, USA).

6. Para análise do fósforo do esmalte

pipetou 100 µL de amostra, 2200 µL de

água destilada/deionizada e 500 µL de

ácido molibdico, agitou-se e após 10

minutos adicionou-se 200 µL de reativo

redutor. Agitou-se novamente e, após 20

minutos, a intensidade de cor foi medida

em espectrofotômetro (Hitachi U-1100

UV/Vis spectrophotometer - Hitachi High

Technologies, Minato-ku, Tokyo, Japan) no

comprimento de onda de 660 nm. Utilizou-

se solução-padrão de fósforo de

concentração 3mg%.

7. Para a determinação do fluoreto na

água ingerida pelos voluntários utilizou-se

um eletrodo específico combinado para

íon fluoreto (Orion 9609 BN, Orion

Research, Inc.) e analisador de íons digital

(Orion 720 A, Orion Research, Inc.).

Anexo L

Anexo LAnexo L

Anexo L

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

59

A

n

e

x

o

M

MICRODUREZA

DE

SUPERFÍCIE

- Tabela dos resultados.

Valores médios da porcentagem de recuperação de microdureza de superfície

(%MDS) de acordo com as distâncias nos diferentes grupos.

Controle

Fluroshield

Distância µm Distância µm

Voluntário

150 300 600

Voluntário

150 300 600

1 19,2 19,2 18,6 1 32,0 30,6 29,9

2 16,8 16,8 16,5 2 33,1 32,4 31,5

3 16,9 16,4 16,5 3 34,9 34,0 32,1

4 19,7 21,5 19,1 4 34,6 32,7 31,7

5 23,3 23,2 23,0 5 37,0 36,2 35,7

6 20,5 18,7 20,7 6 33,6 33,6 32,0

7 15,1 14,4 15,2 7 25,8 24,7 21,5

8 16,3 16,4 15,6 8 28,6 27,6 25,3

9 18,8 18,7 17,2 9 29,9 28,1 26,7

10 20,2 20,1 19,6 10 38,0 37,2 36,1

Média=

18,7 18,5 18,2

Média=

32,8 31,7 30,3

dp=

2,5 2,6 2,5 dp=

3,8 4,0 4,6

ep=

0,8 0,8 0,8 ep=

1,2 1,3 1,4

ACP + Fluoreto

Aegis

Distância µm Distância µm

Voluntário

150 300 600

Voluntário

150 300 600

1 35,7 33,5 32,6 1 34,9 33,8 32,6

2 35,3 33,9 31,7 2 32,7 32,0 30,9

3 38,2 36,6 36,3 3 32,9 31,4 29,2

4 38,5 36,9 36,3 4 37,1 35,9 35,1

5 38,1 37,6 36,1 5 34,6 33,4 32,7

6 29,9 30,8 29,5 6 40,0 38,6 38,7

7 29,6 29,0 28,2 7 25,2 23,7 23,7

8 28,7 28,3 29,8 8 31,7 30,6 29,9

9 25,5 24,3 24,1 9 36,3 36,2 34,5

10 25,6 25,6 25,4 10 33,7 34,0 32,9

Média=

32,5 31,6 31,0

Média=

33,9 33,0 32,0

dp=

5,2 4,8 4,4 dp=

3,9 4,0 4,0

ep=

1,7 1,5 1,4 ep=

1,2 1,3 1,3

Fluoreto

Distância µm

Voluntário

150 300 600

1 35,7 33,6 32,7

2 37,3 36,4 35,7

3 37,0 34,6 33,9

4 40,4 38,3 37,1

5 36,5 34,9 33,5

6 38,0 36,8 35,7

7 27,3 25,6 25,7

8 26,8 26,2 25,3

9 35,0 34,5 33,2

10 29,3 28,4 27,5

Média=

34,3 32,9 32,0

dp=

4,8 4,6 4,3

ep=

1,5 1,4 1,4

60

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

A

n

e

x

o

N

MICRODUREZA

EM

SECÇÃO

LONGITUDINAL

- Modelo de planilha e tabela dos resultados.

Modelo – Planilha de recuperação da área mineral integrada (∆Z)

Distância de 150 µm

Voluntário

10µm 30µm 50µm 70µm 90µm 110µm 220µm 330µm Área integrada

1

107,3 168,3 323,0 319,7 331,5 321,3 323,7 302,0

14096,7

2

138,3 252,0 304,0 249,5 321,5 294,0 300,0 349,5

14998,3

3

134,3 188,0 274,7 305,0 337,3 323,7 345,7 322,7

13646,7

4

139,3 221,3 287,7 277,0 285,5 348,0 330,3 322,0

14343,3

5

130,5 230,3 270,0 273,5 341,0 347,7 327,5 324,5

14046,7

6

158,5 221,3 236,8 262,0 320,0 315,0 324,5 341,0

13366,7

7

65,3 205,3 331,3 311,0 306,5 329,7 344,0 328,0

14495,8

8

98,0 189,3 318,0 379,3 384,7 378,0 341,0 333,3

14920,0

9

115,0 236,0 284,5 291,3 324,5 342,3 322,0 345,3

14472,5

10

112,5 253,8 281,5 299,0 327,0 289,5 313,8 297,0

14820,0

média=

119,9 216,6 291,1 296,7 327,9 328,9 327,2 326,5 14320,7

dp=

26,3 28,4 28,6 36,5 25,5 26,6 14,1 17,2 538,7

ep=

8,3 9,0 9,0 11,6 8,1 8,4 4,5 5,4 170,3

Distância de 300 µm

Voluntário

10µm 30µm 50µm 70µm 90µm 110µm 220µm 330µm Área integrada

1

97,3 153,3 304,8 337,3 342,0 318,3 336,0 328,7

13505,0

2

119,5 162,8 280,8 280,5 280,5 348,0 341,0 315,5

12870,0

3

119,8 209,5 256,8 272,0 282,0 320,3 343,3 335,3

13242,5

4

105,5 217,7 253,7 310,0 339,0 338,7 341,3 324,7

13581,7

5

112,0 214,0 267,5 262,3 344,7 349,0 320,0 326,5

13372,5

6

119,0 168,5 263,5 327,0 335,0 331,7 324,0 314,5

13100,0

7

65,3 177,7 317,0 287,3 312,7 339,7 350,3 337,3

13419,2

8

88,8 201,8 293,0 338,5 354,3 331,3 336,0 348,3

14167,5

9

114,3 158,0 276,0 290,0 308,0 311,5 348,5 344,3

12723,3

10

87,3 238,0 274,0 317,7 308,0 336,5 319,0 326,5

14290,0

média=

102,9 190,1 278,7 302,2 320,6 332,5 336,0 330,2 13427,2

dp=

18,0 29,6 20,7 27,5 26,2 12,5 11,3 11,2 502,5

ep=

5,7 9,4 6,5 8,7 8,3 4,0 3,6 3,5 158,9

Distância de 600 µm

Voluntário

10µm 30µm 50µm 70µm 90µm 110µm 220µm 330µm Área integrada

1

92,0 176,5 296,8 321,5 321,3 328,0 352,7 326,0

13600,0

2

100,0 165,7 234,5 257,3 298,0 307,5 304,0 308,0

11576,7

3

119,3 195,5 265,0 272,3 310,0 283,0 280,8 308,0

13125,0

4

73,0 176,8 238,5 261,0 289,3 302,5 303,5 334,7

11645,0

5

102,5 181,5 243,3 253,5 332,5 322,7 313,0 303,0

12055,0

6

110,0 251,8 259,5 306,8 339,5 325,0 323,0 312,5

14392,5

7

64,0 159,5 256,8 288,5 319,3 315,5 332,7 314,5

11850,0

8

95,8 197,3 299,0 312,8 344,7 345,0 352,0 332,7

14010,0

9

118,5 112,0 240,0 251,5 251,5 324,0 321,5 277,0

10740,0

10

95,0 209,8 268,8 288,8 309,5 324,7 337,0 320,0

13407,5

média=

97,0 182,6 260,2 281,4 311,6 317,8 322,0 313,6 12640,2

dp=

17,8 36,2 23,0 26,0 27,4 16,9 22,7 16,7 1219,8

ep=

5,6 11,4 7,3 8,2 8,7 5,3 7,2 5,3 385,7

Anexo N

Anexo N Anexo N

Anexo N

61

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

Valores médios da recuperação da área mineral integrada (∆Z) de acordo com

as distâncias nos diferentes grupos.

Distância de 150 µm

Voluntário

Controle Fluroshield ACP + Fluoreto Aegis Fluoreto

1 -11821,0 -8684,3 -7822,6 -5731,0 -5731,0

2 -9997,6 -7022,6 -7652,6 -4829,3 -4829,3

3 -12389,3 -7417,6 -6658,5 -6181,0 -6181,0

4 -10377,6 -7987,6 -5778,5 -5484,3 -5484,3

5 -8687,6 -5017,6 -6756,8 -5781,0 -5781,0

6 -10634,3 -6345,1 -5869,3 -6461,0 -6461,0

7 -10964,3 -5952,6 -7913,5 -5331,8 -5331,8

8 -11251,0 -5900,1 -6532,6 -4907,6 -4907,6

9 -10147,6 -5202,6 -7733,5 -5355,1 -5355,1

10 -9477,6 -5533,5 -7582,6 -5007,6 -5007,6

Média=

-10574,8 -6506,4 -7030,0 -5507,0 -5507,0

dp=

1094,3 1229,1 814,5 538,7 538,7

ep=

346,0 388,7 257,6 170,3 170,3

Distância de 300 µm

Voluntário

Controle Fluroshield ACP + Fluoreto Aegis Fluoreto

1 -11162,6 -7605,1 -8351,0 -6322,6 -6322,6

2 -12214,3 -7672,6 -8227,6 -6957,6 -6957,6

3 -10889,3 -8639,3 -8420,1 -6585,1 -6585,1

4 -10387,6 -8834,3 -6757,6 -6246,0 -6246,0

5 -10021,0 -8692,6 -6700,1 -6455,1 -6455,1

6 -10092,6 -6777,6 -6534,3 -6727,6 -6727,6

7 -12659,3 -6060,1 -8142,6 -6408,5 -6408,5

8 -9881,0 -8352,6 -5902,6 -5660,1 -5660,1

9 -9896,0 -6817,6 -7812,6 -7104,3 -7104,3

10 -10241,0 -4607,6 -8321,0 -5537,6 -5537,6

Média=

-10744,5 -7406,0 -7517,0 -6400,5 -6400,5

dp=

989,8 1358,4 940,3 502,5 502,5

ep=

313,0 429,6 297,3 158,9 158,9

Distância de 600 µm

Voluntário

Controle Fluroshield ACP + Fluoreto Aegis Fluoreto

1 -10551,0 -7285,1 -8450,1 -6227,6 -6227,6

2 -9967,6 -9675,1 -8277,6 -8251,0 -8251,0

3 -11269,3 -8291,8 -8085,1 -6702,6 -6702,6

4 -10532,6 -9160,1 -7360,1 -8182,6 -8182,6

5 -10622,6 -8760,1 -8792,6 -7772,6 -7772,6

6 -9284,3 -6570,1 -8550,1 -5435,1 -5435,1

7 -11701,8 -6217,6 -7371,0 -7977,6 -7977,6

8 -10577,6 -9195,1 -7432,6 -5817,6 -5817,6

9 -10942,6 -6205,1 -8802,6 -9087,6 -9087,6

10 -10836,0 -5660,1 -8688,5 -6420,1 -6420,1

Média=

-10628,5 -7702,0 -8181,0 -7187,5 -7187,5

dp=

663,8 1482,7 590,2 1219,8 1219,8

ep=

209,9 468,9 186,6 385,7 385,7

62

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

A

n

e

x

o

O

DETERMINAÇÃO

DO

FLUORETO

PRESENTE

NO

ESMALTE

- Modelo de planilha e tabela dos resultados.

Modelo – Planilha de determinação do fluoreto presente no esmalte.

Padrão

Primeira

Segunda

Terceira

Média

0,090

135,6

130,5

129,3

131,80

0,180

117,4

113,6

112,0

114,33

0,360

98,6 95,6 93,0

95,73

0,720

79,7 76,4 75,4

77,17

1,440

62,8 59,5 58,6

60,30

Blanck

167,2

170,9

173,8

170,63

0,090

0,080

0,008

0,082 -1,08715018

131,80

-1,0853101

0,082

0,42

0,180

0,080

0,008

0,164 -0,78612018

114,33

-0,7935520

0,161

-1,70

0,360

0,080

0,008

0,327 -0,48509018

95,73

-0,4828630

0,329

0,51

0,720

0,080

0,008

0,655 -0,18406019

77,17

-0,1727308

0,672

2,64

1,440

0,080

0,008

1,309 0,11696981

60,30

0,1090051

1,285

-1,82

0,000

0,040

0,000

170,63

-1,7339709

0,018

intercepção

1,1162387532

inclinação -0,0167037094

Temp.: 25

o

C

Rquad

0,9997181943

Slope

-59,9

Voluntário

mV log F calc. µg F/mL calc. mL amostra µg F volume da biópsia

µ

g F liberado

comprimento largura espessura

µg F/mm

3

132,6 -1,0987 0,08 0,088 0,007 1,6 0,127 2,19 1,81 0,05 0,64

131,4 -1,0786 0,08 0,088 0,007 1,6 0,134 2,20 1,81 0,05 0,67

143,2 -1,2757 0,05 0,088 0,005 1,6 0,085 1,85 1,46 0,05 0,63

129,5 -1,0469 0,09 0,088 0,008 1,6 0,144 1,90 1,41 0,05 1,07

126,2 -0,9918 0,10 0,088 0,009 1,6 0,163 2,14 1,69 0,05 0,90

125,8 -0,9851 0,10 0,088 0,009 1,6 0,166 2,14 1,87 0,05 0,83

134,3 -1,1271 0,07 0,088 0,007 1,6 0,119 1,82 1,70 0,05 0,77

132,0 -1,0887 0,08 0,088 0,007 1,6 0,130 2,07 1,57 0,05 0,80

133,2 -1,1087 0,08 0,088 0,007 1,6 0,125 2,22 1,85 0,05 0,61

134,6 -1,1321 0,07 0,088 0,006 1,6 0,118 2,11 1,61 0,05 0,69

131,2 -1,0753 0,08 0,088 0,007 1,6 0,135 2,32 1,81 0,05 0,64

138,4 -1,1956 0,06 0,088 0,006 1,6 0,102 1,93 1,67 0,05 0,63

131,4 -1,0786 0,08 0,088 0,007 1,6 0,134 2,26 1,74 0,05 0,68

122,7 -0,9333 0,12 0,088 0,010 1,6 0,187 2,07 1,93 0,05 0,93

143,8 -1,2858 0,05 0,088 0,005 1,6 0,083 1,83 1,33 0,05 0,68

135,0 -1,1388 0,07 0,088 0,006 1,6 0,116 1,86 1,47 0,05 0,85

124,1 -0,9567 0,11 0,088 0,010 1,6 0,177 2,13 1,77 0,05 0,94

140,8 -1,2356 0,06 0,088 0,005 1,6 0,093 1,95 1,53 0,05 0,62

145,3 -1,3108 0,05 0,088 0,004 1,6 0,078 1,85 1,86 0,05 0,45

148,2 -1,3593 0,04 0,088 0,004 1,6 0,070 1,99 1,26 0,05 0,56

122,3 -0,9266 0,12 0,088 0,010 1,6 0,189 2,12 1,90 0,05 0,94

135,7 -1,1505 0,07 0,088 0,006 1,6 0,113 1,98 1,84 0,05 0,62

139,4 -1,2123 0,06 0,088 0,005 1,6 0,098 1,79 1,85 0,05 0,59

132,5 -1,0970 0,08 0,088 0,007 1,6 0,128 2,14 1,64 0,05 0,73

136,7 -1,1672 0,07 0,088 0,006 1,6 0,109 2,20 1,66 0,05 0,60

140,6 -1,2323 0,06 0,088 0,005 1,6 0,094 2,05 1,55 0,05 0,59

146,7 -1,3342 0,05 0,088 0,004 1,6 0,074 2,06 1,86 0,05 0,39

127,8 -1,0185 0,10 0,088 0,008 1,6 0,153 1,90 2,03 0,05 0,80

134,8 -1,1354 0,07 0,088 0,006 1,6 0,117 2,13 1,73 0,05 0,64

134,1 -1,1237 0,08 0,088 0,007 1,6 0,120 2,03 1,45 0,05 0,82

135,9 -1,1538 0,07 0,088 0,006 1,6 0,112 1,99 1,66 0,05 0,68

128,7 -1,0335 0,09 0,088 0,008 1,6 0,148 2,25 1,87 0,05 0,70

137,7 -1,1839 0,07 0,088 0,006 1,6 0,105 2,26 1,75 0,05 0,53

143,4 -1,2791 0,05 0,088 0,005 1,6 0,084 1,99 1,74 0,05 0,49

133,0 -1,1054 0,08 0,088 0,007 1,6 0,126 2,02 1,89 0,05 0,66

125,7 -0,9834 0,10 0,088 0,009 1,6 0,166 2,35 1,71 0,05 0,83

122,5 -0,9300 0,12 0,088 0,010 1,6 0,188 2,36 1,73 0,05 0,92

140,2 -1,2256 0,06 0,088 0,005 1,6 0,095 1,86 1,75 0,05 0,58

124,9 -0,9701 0,11 0,088 0,009 1,6 0,171 1,79 1,88 0,05 1,02

129,2 -1,0419 0,09 0,088 0,008 1,6 0,145 2,10 1,76 0,05 0,79

9

10

5

6

7

8

1

2

3

4

µg F/mL calc. C.V.%

[

padrão] µ

g/mL

TISAB III

µg F/mL

mL do padrão log F calc.log F mV

Curva de calibração

TISAB III (1:10)

Anexo O

Anexo O Anexo O

Anexo O

63

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

Voluntário

mV log F calc. µg F/mL calc. mL amostra µg F volume da biópsia

µg F liberado

comprimento largura espessura

µ

g F/mm

3

131,2 -1,0753 0,08 0,088 0,007 1,6 0,135 2,19 1,81 0,05 0,68

125,8 -0,9851 0,10 0,088 0,009 1,6 0,166 2,20 1,81 0,05 0,83

141,4 -1,2457 0,06 0,088 0,005 1,6 0,091 1,85 1,46 0,05 0,67

132,0 -1,0887 0,08 0,088 0,007 1,6 0,130 1,90 1,41 0,05 0,97

124,1 -0,9567 0,11 0,088 0,010 1,6 0,177 2,14 1,69 0,05 0,98

121,1 -0,9066 0,12 0,088 0,011 1,6 0,198 2,14 1,87 0,05 0,99

131,2 -1,0753 0,08 0,088 0,007 1,6 0,135 1,82 1,70 0,05 0,87

127,5 -1,0135 0,10 0,088 0,009 1,6 0,155 2,07 1,57 0,05 0,95

132,1 -1,0903 0,08 0,088 0,007 1,6 0,130 2,22 1,85 0,05 0,63

131,7 -1,0836 0,08 0,088 0,007 1,6 0,132 2,11 1,61 0,05 0,78

128,5 -1,0302 0,09 0,088 0,008 1,6 0,149 2,32 1,81 0,05 0,71

137,4 -1,1789 0,07 0,088 0,006 1,6 0,106 1,93 1,67 0,05 0,66

125,6 -0,9817 0,10 0,088 0,009 1,6 0,167 2,26 1,74 0,05 0,85

121,0 -0,9049 0,12 0,088 0,011 1,6 0,199 2,07 1,93 0,05 1,00

142,2 -1,2590 0,06 0,088 0,005 1,6 0,088 1,83 1,33 0,05 0,72

134,0 -1,1221 0,08 0,088 0,007 1,6 0,121 1,86 1,47 0,05 0,88

121,2 -0,9083 0,12 0,088 0,011 1,6 0,198 2,13 1,77 0,05 1,05

137,7 -1,1839 0,07 0,088 0,006 1,6 0,105 1,95 1,53 0,05 0,70

141,5 -1,2473 0,06 0,088 0,005 1,6 0,091 1,85 1,86 0,05 0,53

146,7 -1,3342 0,05 0,088 0,004 1,6 0,074 1,99 1,26 0,05 0,59

123,9 -0,9534 0,11 0,088 0,010 1,6 0,178 2,12 1,90 0,05 0,88

132,0 -1,0887 0,08 0,088 0,007 1,6 0,130 1,98 1,84 0,05 0,72

135,8 -1,1521 0,07 0,088 0,006 1,6 0,113 1,79 1,85 0,05 0,68

130,6 -1,0653 0,09 0,088 0,008 1,6 0,138 2,14 1,64 0,05 0,78

128,0 -1,0218 0,10 0,088 0,008 1,6 0,152 2,20 1,66 0,05 0,83

138,0 -1,1889 0,06 0,088 0,006 1,6 0,104 2,05 1,55 0,05 0,65

143,8 -1,2858 0,05 0,088 0,005 1,6 0,083 2,06 1,86 0,05 0,43

125,0 -0,9717 0,11 0,088 0,009 1,6 0,171 1,90 2,03 0,05 0,89

131,2 -1,0753 0,08 0,088 0,007 1,6 0,135 2,13 1,73 0,05 0,73

131,6 -1,0820 0,08 0,088 0,007 1,6 0,132 2,03 1,45 0,05 0,90

136,9 -1,1705 0,07 0,088 0,006 1,6 0,108 1,99 1,66 0,05 0,65

124,9 -0,9701 0,11 0,088 0,009 1,6 0,171 2,25 1,87 0,05 0,81

136,0 -1,1555 0,07 0,088 0,006 1,6 0,112 2,26 1,75 0,05 0,57

137,9 -1,1872 0,06 0,088 0,006 1,6 0,104 1,99 1,74 0,05 0,60

129,3 -1,0436 0,09 0,088 0,008 1,6 0,145 2,02 1,89 0,05 0,76

122,5 -0,9300 0,12 0,088 0,010 1,6 0,188 2,35 1,71 0,05 0,94

112,9 -0,7696 0,17 0,088 0,015 1,6 0,272 2,36 1,73 0,05 1,33

138,9 -1,2039 0,06 0,088 0,006 1,6 0,100 1,86 1,75 0,05 0,61

122,0 -0,9216 0,12 0,088 0,011 1,6 0,192 1,79 1,88 0,05 1,14

124,6 -0,9650 0,11 0,088 0,010 1,6 0,173 2,10 1,76 0,05 0,94

Repetição

9

10

1

2

3

4

5

6

7

8

Anexo O

Anexo O Anexo O

Anexo O

64

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

Valores médios da concentração de fluoreto presente no esmalte

(µgF/mm

3

) de acordo com os grupos.

Grupos

Voluntários

Controle Fluroshield

ACP + Fluoreto

(Experimental)

Aegis

Fluoreto

(Experimental)

1

0,54 0,77 0,80 0,49 0,75

2

0,59 0,89 0,71 0,50 0,90

3

0,56 0,67 0,73 0,57 0,66

4

0,61 0,82 0,70 0,65 0,77

5

0,52 0,68 0,68 0,54 0,85

6

0,58 0,74 0,60 0,61 0,90

7

0,63 0,65 0,61 0,71 0,79

8

0,54 0,74 0,89 0,72 0,93

9

0,63 0,67 0,65 0,57 0,59

10

0,55 0,92 0,72 0,71 0,83

Média=

0,57 0,76 0,71 0,61 0,80

dp= 0,04 0,09 0,09 0,09 0,11

ep= 0,01 0,03 0,03 0,03 0,04

65

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

A

n

e

x

o

P

DETERMINAÇÃO

DO

CÁLCIO

PRESENTE

NO

ESMALTE

- Modelo de planilha e tabela dos resultados.

Modelo – Planilha de determinação do cálcio presente no esmalte.

Data

Primeira

Segunda

Terceira

Média

10,0

-31,0 -33,1 -31,4

-31,83

20,0

-21,7 -23,6 -21,6

-22,30

40,0

-12,6 -14,6 -13,7

-13,63

80,0

-3,3 -6,9 -5,6

-5,27

160,0

6,8 0,9 3,0

3,57

Blank

-53,2 -51,2 -51,4

-51,93

9,90 0,080

9,9 0,99546368

-31,83

0,9829649

9,62

-2,84

19,80 0,080

19,8 1,29660114

-22,30

1,3098393

20,41

3,10

39,64 0,080

39,6 1,59816883

-13,63

1,6069977

40,46

2,05

79,38 0,080

79,4 1,89973718

-5,27

1,8938700

78,32

-1,34

158,65 0,080

158,7 2,20044408

3,57

2,1967430

157,31

-0,85

0,02

intercepção

2,074450887

inclinação

0,034287517

Rquad

0,99950

Slope 29,2

Temp.: 25

o

C

Voluntário mV log Ca calc. µg Ca/mL calc. mL amostra µg Ca volume da biópsia

HCl ou NaOH mL

µg Ca liberado

comprimento largura espessura

µ

g Ca/mm

3

-13,0 1,6287 42,53 0,080 3,40 1,6 0,020 68,901 2,30 1,86 0,05 322,12

-17,3 1,4813 30,29 0,080 2,42 1,6 0,031 49,400 2,35 1,63 0,05 257,93

-19,8 1,3956 24,86 0,080 1,99 1,6 0,002 39,831 1,79 1,83 0,05 243,19

-15,9 1,5293 33,83 0,080 2,71 1,6 0,005 54,294 2,04 1,41 0,05 377,52

-12,7 1,6390 43,55 0,080 3,48 1,6 0,028 70,901 2,18 1,82 0,05 357,40

-15,3 1,5499 35,47 0,080 2,84 1,6 0,017 57,354 2,23 1,91 0,05 269,31

-14,4 1,5807 38,08 0,080 3,05 1,6 0,004 61,082 1,84 1,84 0,05 360,84

-13,5 1,6116 40,89 0,080 3,27 1,6 0,007 65,703 2,19 1,61 0,05 372,69

-13,4 1,6150 41,21 0,080 3,30 1,6 0,016 66,595 2,15 1,80 0,05 344,16

-12,7 1,6390 43,55 0,080 3,48 1,6 0,001 69,725 2,10 1,33 0,05 499,29

-12,2 1,6561 45,30 0,080 3,62 1,6 0,003 72,623 2,06 1,71 0,05 412,33

-15,3 1,5499 35,47 0,080 2,84 1,6 0,005 56,928 2,08 1,69 0,05 323,90

-14,0 1,5944 39,30 0,080 3,14 1,6 0,034 64,221 2,07 1,83 0,05 339,07

-15,5 1,5430 34,91 0,080 2,79 1,6 0,002 55,932 1,99 1,31 0,05 429,10

-14,4 1,5807 38,08 0,080 3,05 1,6 0,003 61,044 1,92 1,55 0,05 410,24

-14,3 1,5841 38,38 0,080 3,07 1,6 0,003 61,528 2,10 1,41 0,05 415,59

-15,8 1,5327 34,10 0,080 2,73 1,6 0,016 55,100 2,05 1,43 0,05 375,91

-15,0 1,5601 36,32 0,080 2,91 1,6 0,003 58,220 1,86 1,92 0,05 326,05

-14,1 1,5910 38,99 0,080 3,12 1,6 0,005 62,585 2,33 1,81 0,05 296,80

-13,2 1,6219 41,87 0,080 3,35 1,6 0,030 68,241 2,21 1,98 0,05 311,90

-12,7 1,6390 43,55 0,080 3,48 1,6 0,028 70,901 2,16 1,93 0,05 340,15

-15,0 1,5601 36,32 0,080 2,91 1,6 0,003 58,220 1,82 1,43 0,05 447,40

-12,3 1,6527 44,95 0,080 3,60 1,6 0,037 73,581 2,26 1,87 0,05 348,21

-12,8 1,6356 43,21 0,080 3,46 1,6 0,000 69,134 2,10 1,57 0,05 419,37

-16,4 1,5121 32,52 0,080 2,60 1,6 0,020 52,681 2,11 1,51 0,05 330,69

-15,3 1,5499 35,47 0,080 2,84 1,6 0,005 56,928 1,99 1,95 0,05 293,41

-15,1 1,5567 36,03 0,080 2,88 1,6 0,030 58,735 2,23 1,69 0,05 311,70

-14,4 1,5807 38,08 0,080 3,05 1,6 0,004 61,082 2,05 1,90 0,05 313,64

-16,7 1,5018 31,76 0,080 2,54 1,6 0,026 51,638 2,22 1,69 0,05 275,27

-13,1 1,6253 42,20 0,080 3,38 1,6 0,002 67,600 1,82 1,82 0,05 408,16

-14,2 1,5876 38,69 0,080 3,09 1,6 0,008 62,209 2,11 1,63 0,05 361,75

-14,6 1,5739 37,48 0,080 3,00 1,6 0,005 60,163 2,06 1,43 0,05 408,47

-16,2 1,5190 33,04 0,080 2,64 1,6 0,015 53,354 2,06 1,81 0,05 286,19

-16,6 1,5053 32,01 0,080 2,56 1,6 0,007 51,439 1,86 1,40 0,05 395,08

-15,3 1,5499 35,47 0,080 2,84 1,6 0,000 56,751 2,13 1,68 0,05 317,19

-13,1 1,6253 42,20 0,080 3,38 1,6 0,099 71,693 2,15 1,62 0,05 411,67

-14,9 1,5636 36,61 0,080 2,93 1,6 0,032 59,743 2,20 1,57 0,05 345,94

-16,4 1,5121 32,52 0,080 2,60 1,6 0,003 52,128 1,91 1,85 0,05 295,05

-16,1 1,5224 33,30 0,080 2,66 1,6 0,016 53,810 2,05 1,45 0,05 362,05

-12,0 1,6630 46,03 0,080 3,68 1,6 0,003 73,779 2,19 1,69 0,05 398,69

Curva de calibração

[padrão]

µ

g/mL

ISA (0,0016 mL) / 0.08 mL - pH

±9.0

log Ca

µ

g Ca/mL

mV log Ca calc.mL do padrão µg Ca/mL calc. C.V.%

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Anexo P

Anexo P Anexo P

Anexo P

66

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

Repetição

Voluntário mV log Ca calc. µg Ca/mL calc. mL amostra µg Ca volume da biópsia

HCl ou NaOH mL

µg Ca liberado

comprimento largura espessura

µ

g Ca/mm

3

-13,0 1,6287 42,53 0,080 3,40 1,6 0,020 68,901 2,30 1,86 0,05 322,12

-15,8 1,5327 34,10 0,080 2,73 1,6 0,031 55,611 2,35 1,63 0,05 290,36

-18,9 1,4264 26,69 0,080 2,14 1,6 0,002 42,764 1,79 1,83 0,05 261,10

-17,0 1,4916 31,01 0,080 2,48 1,6 0,005 49,778 2,04 1,41 0,05 346,11

-12,7 1,6390 43,55 0,080 3,48 1,6 0,028 70,901 2,18 1,82 0,05 357,40

-14,7 1,5704 37,19 0,080 2,98 1,6 0,017 60,136 2,23 1,91 0,05 282,37

-14,8 1,5670 36,90 0,080 2,95 1,6 0,004 59,183 1,84 1,84 0,05 349,62

-14,1 1,5910 38,99 0,080 3,12 1,6 0,007 62,663 2,19 1,61 0,05 355,45

-12,0 1,6630 46,03 0,080 3,68 1,6 0,016 74,378 2,15 1,80 0,05 384,38

-16,0 1,5259 33,56 0,080 2,68 1,6 0,001 53,733 2,10 1,33 0,05 384,77

-11,6 1,6767 47,50 0,080 3,80 1,6 0,003 76,146 2,06 1,71 0,05 432,33

-14,6 1,5739 37,48 0,080 3,00 1,6 0,005 60,163 2,08 1,69 0,05 342,30

-14,9 1,5636 36,61 0,080 2,93 1,6 0,034 59,816 2,07 1,83 0,05 315,81

-16,0 1,5259 33,56 0,080 2,68 1,6 0,002 53,767 1,99 1,31 0,05 412,50

-14,9 1,5636 36,61 0,080 2,93 1,6 0,003 58,681 1,92 1,55 0,05 394,36

-15,4 1,5464 35,19 0,080 2,82 1,6 0,003 56,410 2,10 1,41 0,05 381,02

-16,3 1,5156 32,78 0,080 2,62 1,6 0,016 52,967 2,05 1,43 0,05 361,36

-13,2 1,6219 41,87 0,080 3,35 1,6 0,003 67,110 1,86 1,92 0,05 375,84

-15,0 1,5601 36,32 0,080 2,91 1,6 0,005 58,293 2,33 1,81 0,05 276,44

-13,5 1,6116 40,89 0,080 3,27 1,6 0,030 66,643 2,21 1,98 0,05 304,60

-15,9 1,5293 33,83 0,080 2,71 1,6 0,028 55,072 2,16 1,93 0,05 264,21

-17,8 1,4641 29,12 0,080 2,33 1,6 0,003 46,673 1,82 1,43 0,05 358,67

-13,4 1,6150 41,21 0,080 3,30 1,6 0,037 67,460 2,26 1,87 0,05 319,25

-13,2 1,6219 41,87 0,080 3,35 1,6 0,000 66,985 2,10 1,57 0,05 406,34

-13,1 1,6253 42,20 0,080 3,38 1,6 0,020 68,360 2,11 1,51 0,05 429,11

-14,3 1,5841 38,38 0,080 3,07 1,6 0,005 61,605 1,99 1,95 0,05 317,51

-15,4 1,5464 35,19 0,080 2,82 1,6 0,030 57,360 2,23 1,69 0,05 304,40

-14,6 1,5739 37,48 0,080 3,00 1,6 0,004 60,125 2,05 1,90 0,05 308,73

-18,7 1,4333 27,12 0,080 2,17 1,6 0,026 44,096 2,22 1,69 0,05 235,06

-15,0 1,5601 36,32 0,080 2,91 1,6 0,002 58,184 1,82 1,82 0,05 351,31

-15,8 1,5327 34,10 0,080 2,73 1,6 0,008 54,827 2,11 1,63 0,05 318,83

-17,0 1,4916 31,01 0,080 2,48 1,6 0,005 49,778 2,06 1,43 0,05 337,96

-16,7 1,5018 31,76 0,080 2,54 1,6 0,015 51,289 2,06 1,81 0,05 275,11

-18,6 1,4367 27,33 0,080 2,19 1,6 0,007 43,926 1,86 1,40 0,05 337,37

-18,9 1,4264 26,69 0,080 2,14 1,6 0,000 42,711 2,13 1,68 0,05 238,71

-15,6 1,5396 34,64 0,080 2,77 1,6 0,099 58,852 2,15 1,62 0,05 337,94

-12,5 1,6459 44,24 0,080 3,54 1,6 0,032 72,207 2,20 1,57 0,05 418,10

-16,1 1,5224 33,30 0,080 2,66 1,6 0,003 53,377 1,91 1,85 0,05 302,12

-15,0 1,5601 36,32 0,080 2,91 1,6 0,016 58,692 2,05 1,45 0,05 394,90

-14,6 1,5739 37,48 0,080 3,00 1,6 0,003 60,088 2,19 1,69 0,05 324,70

5

1

10

2

3

4

9

6

7

8

Anexo P

Anexo P Anexo P

Anexo P

67

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

Valores médios da concentração de cálcio presente no esmalte

(µgCa/mm

3

) de acordo com os grupos.

Grupos

Voluntários

Controle Fluroshield

ACP + Fluoreto

(Experimental)

Aegis

Fluoreto

(Experimental)

1

234,29 320,52 412,23 305,60 302,56

2

312,78 348,12 276,07 399,51 338,13

3

321,78 343,00 305,46 310,44 390,43

4

305,76 337,22 358,01 371,90 387,21

5

290,89 299,62 316,48 261,34 328,62

6

275,84 374,35 280,85 263,99 362,95

7

274,14 408,53 273,82 327,93 326,15

8

291,11 374,25 298,33 386,95 337,10

9

327,63 349,54 322,48 335,77 324,91

10

126,17 403,50 346,40 297,28 355,19

Média=

276,0 355,9 319,0 326,1 345,3

dp= 59,3 34,6 43,4 48,1 28,3

ep= 18,8 10,9 13,7 15,2 9,0

68

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

A

n

e

x

o

Q

DETERMINAÇÃO

DO

FÓSFORO

PRESENTE

NO

ESMALTE

- Modelo de planilha e tabela dos resultados.

Modelo – Planilha de determinação do fósforo presente no esmalte.

Doseamento de fósforo inorgânico - Fiske & Subbarow

Padrão - 3 mg%

Amostra - t.e= 0,1 ml

tubo água molibdato reat.redutor

branco 2.3 mL 0,5 mL 0,2 mL

padrão 0,25 mL 2.05 mL 0,5 mL 0,2 mL

amostra 0,1 mL 2,20 mL 0,5 mL 0,2 mL

A660 MÉDIA

µ

g P/0,1 mL

voluntário bloco 0.287 0.290 0.2885

HCl ou NaOH mL

µg P/1,6 mL

comprimento largura espessura

µ

g P/mm

3

1 0.050 0.042 0.0460 1.11 0.000 17.84 1.79 1.83 0.05 108.89

2

0.051 0.052 0.0515 1.34 0.002 21.45 2.35 1.63 0.05 111.98

3

0.058 0.050 0.0540 1.40 0.034 22.94 2.04 1.41 0.05 159.49

4

0.054 0.058 0.0560 1.46 0.035 23.80 2.30 1.86 0.05 111.28

1

0.063 0.065 0.0640 1.66 0.016 26.89 2.18 1.82 0.05 135.53

2

0.059 0.044 0.0515 1.25 0.002 19.99 1.84 1.84 0.05 118.10

3

0.074 0.071 0.0725 1.88 0.003 30.21 2.23 1.91 0.05 141.87

4

0.052 0.054 0.0530 1.38 0.001 22.06 2.19 1.61 0.05 125.12

1

0.051 0.045 0.0480 1.25 0.010 20.09 2.15 1.80 0.05 103.82

2

0.051 0.045 0.0480 1.16 0.006 18.68 2.06 1.71 0.05 106.06

3

0.041 0.045 0.0430 1.04 0.007 16.74 2.10 1.33 0.05 119.91

4

0.050 0.051 0.0505 1.31 0.004 21.06 2.08 1.69 0.05 119.81

1

0.079 0.067 0.0730 1.90 0.003 30.42 2.07 1.83 0.05 160.61

2

0.060 0.067 0.0635 1.54 0.001 24.64 1.92 1.55 0.05 165.56

3

0.059 0.054 0.0565 1.37 0.002 21.93 1.99 1.31 0.05 168.27

4

0.056 0.065 0.0605 1.57 0.000 25.16 2.10 1.41 0.05 169.97

1

0.057 0.058 0.0575 1.49 0.022 24.25 2.05 1.43 0.05 165.41

2

0.048 0.060 0.0540 1.31 0.002 20.96 1.86 1.92 0.05 117.40

3

0.050 0.058 0.0540 1.40 0.002 22.49 2.33 1.81 0.05 106.65

4

0.070 0.064 0.0670 1.74 0.001 27.89 2.21 1.98 0.05 127.45

A660 MÉDIA

µ

g P/0,1 mL

voluntário bloco 0.311 0.308 0.3095

HCl ou NaOH mL

µg P/1,6 mL

comprimento largura espessura

µ

g P/mm

3

1

0.061 0.083 0.0720 1.87 0.011 30.15 2.16 1.93 0.05 144.66

2

0.048 0.046 0.0470 1.14 0.002 18.25 1.82 1.43 0.05 140.21

3

0.084 0.098 0.0910 2.21 0.002 35.33 2.26 1.87 0.05 167.18

4

0.060 0.054 0.0570 1.48 0.012 23.89 2.10 1.57 0.05 144.90

1

0.073 0.069 0.0710 1.72 0.002 27.56 1.99 1.95 0.05 142.06

2

0.065 0.073 0.0690 1.79 0.006 28.81 2.11 1.51 0.05 180.83

3

0.063 0.063 0.0630 1.64 0.003 26.25 2.23 1.69 0.05 139.32

4

0.090 0.080 0.0850 2.06 0.005 33.06 2.05 1.90 0.05 169.75

1

0.061 0.058 0.0595 1.55 0.016 25.00 2.22 1.69 0.05 133.25

2

0.052 0.054 0.0530 1.38 0.029 22.44 2.11 1.63 0.05 130.52

3

0.046 0.043 0.0445 1.08 0.002 17.28 1.82 1.82 0.05 104.31

4

0.064 0.056 0.0600 1.45 0.009 23.39 2.06 1.43 0.05 158.83

1

0.060 0.059 0.0595 1.44 0.018 23.33 2.13 1.68 0.05 130.39

2

0.072 0.053 0.0625 1.51 0.010 24.38 2.06 1.81 0.05 130.79

3

0.055 0.060 0.0575 1.39 0.002 22.32 1.86 1.40 0.05 171.44

4

0.055 0.060 0.0575 1.39 0.016 22.52 2.15 1.62 0.05 129.30

1

0.050 0.056 0.0530 1.38 0.018 22.29 2.20 1.57 0.05 129.09

2

0.058 0.057 0.0575 1.39 0.034 22.77 2.05 1.45 0.05 153.19

3

0.058 0.060 0.0590 1.43 0.005 22.95 1.91 1.85 0.05 129.88

4

0.063 0.066 0.0645 1.56 0.184 27.88 2.19 1.69 0.05 150.68

1

2

3

4

9

10

5

6

7

8

Anexo Q

Anexo Q Anexo Q

Anexo Q

69

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

Valores médios da concentração de fósforo presente no esmalte

(µgP/mm

3

) de acordo com os grupos.

Grupos

Voluntários

Controle Fluroshield

ACP + Fluoreto

(Experimental)

Aegis

Fluoreto

(Experimental)

1

155,03 122,91 127,79 110,17 116,15

2

200,81 130,16 120,16 95,41 137,10

3

177,84 112,40 123,65 102,29 146,26

4

169,34 166,11 128,73 104,25 147,90

5

213,09 129,23 123,57 101,83 116,49

6

182,50 149,24 82,54 99,78 131,90

7

189,34 157,99 83,50 105,29 147,20

8

203,00 131,73 114,05 121,00 135,35

9

168,59 140,48 112,59 123,47 135,38

10

140,13 140,71 121,29 105,43 152,73

Média=

180,0 138,1 113,8 106,9 136,6

dp= 22,6 16,3 17,0 9,0 12,7

ep= 7,2 5,2 5,4 2,8 4,0

70

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

A

n

e

x

o

R

DETERMINAÇÃO

DO

FLUORETO

NA

ÁGUA

INGERIDA

PELOS

VOLUNTÁRIOS

- Modelo de planilha e tabela dos resultados.

Modelo – Planilha de determinação do fluoreto na água ingerida pelos voluntários.

Data

Primeira

Segunda

Terceira

Média

Blanck

197,1

212,2

217,8

209,03

0,0625

157,0

154,4

157,4

156,27

0,1250

138,0

139,0

139,4

138,80

0,250

120,7

119,7

120,2

120,20

0,500

103,0

103,3

103,7

103,33

1,000

85,3

86,0

86,3

85,87

Teste 1

102,9 102,7 102,4

102,67

Teste 2

103,8

104,1

103,6

103,83

1,00 0,100 0,900 0,100 -1,00000000

156,27

-1,001927032 0,0996 -0,44

1,00 0,200 0,800 0,200 -0,69897000

138,80

-0,703689942

0,198

-1,09

1,00 0,400 0,600 0,400 -0,39794001

120,20

-0,38610159

0,411

2,69

1,00 0,800 0,200 0,800 -0,09691001

103,33

-0,098109285

0,798

-0,28

2,00 0,800 0,200 1,600 0,20411998

85,87

0,200127806 1,585 -0,92

média

-0,01

Curva Total

intercepção 1,666270449 inclinação -0,017074643 Rquad 0,99980

Slope

-58,6

Temp.: 25

o

C

Blanck

0,000 0,250 0,250 0,000

209,03

-1,902899006 0,013

Teste 1

1,000 0,800 0,200 0,800

102,67

-0,08672619

0,819

2,32

Teste 2

1,000 0,800 0,200 0,800

103,83

-0,106646606

0,782

-2,27

Controle

Fluroshield

Voluntário Dia

mV log F calc. ppm F

Voluntário Dia

mV log F calc. ppm F

2

o

177,2

-1,3593562

0,044

2

o

176,5

-1,3474040

0,045

4

o

186,9

-1,5249803

0,030

4

o

175,9

-1,3371592

0,046

2

o

109,9

-0,2102328

0,616

2

o

103,6

-0,1026625

0,789

4

o

109,9

-0,2102328

0,616

4

o

102,9

-0,0907103

0,812

2

o

109,6

-0,2051104

0,624

2

o

157,6

-1,0246932

0,094

4

o

109,0

-0,1948656

0,638

4

o

160,7

-1,0776246

0,084

2

o

108,6

-0,1880357

0,649

2

o

104,1

-0,1111998

0,774

4

o

110,3

-0,2170626

0,607

4

o

104,1

-0,1111998

0,774

ACP + Fluoreto

Aegis

Voluntário Dia

mV log F calc. ppm F

Voluntário Dia

mV log F calc. ppm F

2

o

175,6

-1,3320368

0,047

2

o

159,3

-1,0537201

0,088

4

o

175,0

-1,3217920

0,048

4

o

166,3

-1,1732426

0,067

2

o

112,3 -0,2512119 0,561

2

o

105,7 -0,1385193 0,727

4

o

112,5 -0,2546268 0,556

4

o

104,7 -0,1214446 0,756

2

o

109,5 -0,2034029 0,626

2

o

105,7 -0,1385193 0,727

4

o

155,6 -0,9905439 0,102

4

o

160,8 -1,0793321 0,083

2

o

185,7 -1,5044907 0,031

2

o

181,8 -1,4378996 0,036

4

o

109,5 -0,2034029 0,626

4

o

186,0 -1,5096131 0,031

Fluoreto

Voluntário Dia

mV log F calc. ppm F

2

o

189,3

-1,5659594

0,027

4

o

179,8

-1,4037503

0,039

2

o

107,5

-0,1692536

0,677

4

o

109,4

-0,2016954

0,628

2

o

183,9

-1,4737563

0,034

4

o

114,4

-0,2870687

0,516

2

o

183,3

-1,4635115

0,034

4

o

184,7

-1,4874160

0,033

Curva de calibração

mL padrão

mL H

2

O deio

C.V. %

mL HCl M

log F calc. µg F/mL calc.

log F calc.

[Mistura] µg/mL

µg F/mL calc.

C.V.%

2

mL padrão [Mistura] ug/mL log F

mV

4

1

2

3

4

1

2

3

1

2

3

4

3

[padrão] ug/mL

[padrão] µg/mL

4

1

2

3

4

Anexo R

Anexo RAnexo R

Anexo R

Doutorado – Kélio Garcia Silva – UNESP - 2007

Valores médios da concentração de fluoreto na água ingerida pelos

voluntários (µgF/mL) de acordo com os grupos.

Grupos

Voluntários

Controle Fluroshield

ACP + Fluoreto

(Experimental)

Aegis

Fluoreto

(Experimental)

1

0,04 0,05 0,05 0,07 0,03

2

0,62 0,81 0,56 0,75 0,65

3

0,65 0,09 0,38 0,41 0,28

4

0,63 0,78 0,33 0,03 0,04

5

0,87 0,86 1,01 1,11 1,03

6

0,81 1,01 0,90 1,06 0,87

7

0,72 0,87 1,00 1,05 1,08

8

0,81 0,98 0,88 1,09 0,81

9

0,68 1,29 0,91 1,07 0,99

10

0,95 0,92 0,97 1,05 0,87

Média=

0,68 0,77 0,70 0,77 0,66

dp= 0,25 0,39 0,34 0,44 0,40

ep= 0,04 0,05 0,05 0,07 0,03

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