( PDF ) Ação do dimetilsulfóxido e da dexametasona nos parâmetros do líquido cefalorraquidiano e na permeabilidade da barreira hematoencefálica de bovinos.

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIÁS

ESCOLA DE VETERINÁRIA

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIA ANIMAL

AÇÃO DO DIMETILSULFÓXIDO E DA DEXAMETASONA NOS

PARÂMETROS DO LÍQUIDO CEFALORRAQUIDIANO E NA

PERMEABILIDADE DA BARREIRA HEMATOENCEFÁLICA DE

BOVINOS

Augusto Ricardo Coelho Moscardini

Orientador: Prof. Dr. José Renato Junqueira Borges

GOIÂNIA

2007

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Milhares de livros grátis para download.

AUGUSTO RICARDO COELHO MOSCARDINI

AÇÃO DO DIMETILSULFÓXIDO E DA DEXAMETASONA NOS

PARÂMETROS DO LÍQUIDO CEFALORRAQUIDIANO E NA

PERMEABILIDADE DA BARREIRA HEMATOENCEFÁLICA DE

BOVINOS

Dissertação apresentada para obtenção

do grau de Mestre em Ciência Animal

junto à Escola de Veterinária da

Universidade Federal de Goiás

Área de Concentração:

Patologia, Clínica e Cirurgia

Orientador:

Prof. Dr. José Renato Junqueira Borges – FAV/UnB

Comitê de Orientação:

Prof. Dr.Luiz Antonio Franco da Silva – EV/UFG

Prof. Dr.Dirson Vieira – EV/UFG

GOIÂNIA

2007

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iii

AUGUSTO RICARDO COELHO MOSCARDINI

Dissertação defendida e aprovada em 24 de março de 2007, pela

seguinte Banca Examinadora:

________________________________________________________________

Prof. Dr. José Renato Junqueira Borges – FAV/UnB

Presidente da Banca

________________________________________________________________

Prof. Dr. Márcio Botelho de Castro – FAV/UnB

________________________________________________________________

Prof. Dr. Maria Clorinda Soares Fioravante – EV/UFG

AGRADECIMENTOS

Agradeço aos meus pais Marcos Antônio e Maria das Dores pelo apoio em todos os

momentos. Ao orientador e amigo Professor José Renato Junqueira Borges pelo

conhecimento compartilhado, companheirismo, paciência e dedicação empregados

nesse e em tantos outros trabalhos. Ao membro do comitê de orientação Professor

Luiz Antônio Franco da Silva pelos ensinamentos e confiança depositados em tão

pouco tempo de convivência, exemplo de dignidade e trabalho constantes. Ao outro

membro do comitê de orientação Professor Dirson Vieira que revisou pacientemente

o projeto contribuindo enormemente para o experimento e para a conclusão do

trabalho. Á Grazieli Marinheiro pelo companheirismo, realização das contagens

celulares, organização dos materiais, confecção e coloração das lâminas e auxílio

em toda parte laboratorial realizada na Universidade de Brasília. À equipe ECRB

(Equipe de contenção rápida de bezerros): Ernane de Paiva, Guilherme Carneiro,

Grazieli Marinheiro, João Gabriel, Rômulo Peixoto, Senhor Viteli (pai do Rômulo),

Denise Caldeira, Ronan Sakayo, Tiago Paim e Renato Bizinoto. Essas pessoas

desenvolveram papel crucial na parte mais importante do trabalho, sempre com

paciência. A contenção foi realizada com energia e perfeição. Á equipe da Fazenda

Água Limpa-UnB, aos vaqueiros Miltão e Miltinho e ao Professor José Mauro Diogo

por ceder o espaço e os animais para a realização do experimento. Ao Laboratório

de Patologia Clínica Veterinária da UnB na pessoa da Professora Giane Regina

Paludo onde foram realizadas análises de proteína, contagem celular e coloração de

lâminas. Aos grandes amigos Lucas Jacomini Abbud e Gustavo Lage Costa pelo

companheirismo, presteza e receptividade enquanto estive em Goiânia, essas duas

pessoas também fizeram parte desse trabalho. Ao Laboratório de Patologia Clínica

Veterinária da UFG na pessoa da Professora Maria Clorinda Soares Fioravanti que

colocou desde o início toda estrutura do laboratório a disposição para realização do

trabalho. Ao amigo Sr. Jesus Jácomo Manzan pelos conselhos e conversas sempre

proveitosas durante as visitas ao Sítio São Francisco de Assis. Ao Laboratório de

Análises Clínicas do HUB (Setor de Análises Bioquímicas) principalmente ao

bioquímico Robério que sempre me atendeu e auxiliou com muito paciência e

presteza durante toda a fase experimental. Ao Professor Antônio Raphael Teixeira

Neto pela amizade, revisão do trabalho, e sugestões que sempre contribuíram para

melhor. Aos eternos irmãos Eduardo Fonseca (Aparício) e Renato Ferreira II

(Renatinho Diagonóstico) pelos anos que trabalhamos juntos e lutamos lado a lado.

Os ideais e a forte amizade que nos une são inabaláveis. Ao Professor Paulo

Henrique Jorge Cunha (e mais uma vez ao Professor José Renato) com os quais

cruzei pela primeira vez a porteira de uma fazenda com o olhar de Médico

Veterinário de grandes animais. Seus ensinamentos são e serão válidos sempre na

minha vida profissional e particular. Aos amigos Cap. Moreira e Rodrigo França. Á

FINATEC-DF que forneceu apoio financeiro para aquisição do material utilizado no

trabalho. Á Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

pelo fornecimento da bolsa de estudos durante o curso. Ao Programa de Pós-

graduação em Ciência Animal – UFG pelo auxílio na aquisição do material e pela

organização com a qual trata o programa de pós-graduação em ciência animal. À

empresa MARCOLAB Trajetória Farmacêutica, Coméstica e Veterinária LTDA pelo

fornecimento das medicações utilizadas no trabalho. Aos amigos da turma de

mestrado 2005/UFG. Obrigado a todos.

Quem só fala, por mais que diga é esquecido

quando cala. Quem escreve, não. As palavras

ficam nas páginas coladas, fechadas, se

significando umas com as outras. Enquanto durar

o papel e o olho leitor, ficarão por aí, palpitando,

esperando, dizendo, entendendo.

Darcy Ribeiro

vii

SUMÁRIO

1 INTRODUÇÃO...........................................................................................................1

2 REVISÃO DE LITERATURA......................................................................................2

2.1 Líquido cefalorraquidiano........................................................................................2

2.1.1 Celularidade.........................................................................................................2

2.1.2 Exames Bioquímicos no LCR..............................................................................3

a) Concentração de glicose..........................................................................................3

b) Níveis de proteína ...................................................................................................4

c) Eletrólitos no LCR.....................................................................................................5

d) Determinações enzimáticas no LCR .......................................................................6

2.2 Barreira hematoencefálica .....................................................................................8

2.3 Medicamentos utilizados na terapia das doenças do sistema nervoso................10

2.3.1 Dimetilsulfóxido..................................................................................................10

2.3.2 Dexametasona...................................................................................................13

3 OBJETIVOS ............................................................................................................14

3.1 Objetivo geral........................................................................................................14

3.2 Objetivo específico...............................................................................................14

4 MATERIAL e MÉTODOS ........................................................................................15

4.1 Administração de medicamentos.........................................................................15

4.2 Colheita de líquido cefalorraquidiano ...................................................................16

4.3 Colheita de sangue...............................................................................................17

4.4 Análise do líquido cefalorraquidiano.....................................................................18

4.5 Análise do soro ....................................................................................................18

4.6 Análise estatística ................................................................................................19

5 RESULTADOS e DISCUSSÃO................................................................................20

5.1 Contenção e colheita de LCR...............................................................................20

5.2 Celularidade .........................................................................................................21

5.3 Proteínas totais liquóricas, albumina sérica e quociente de albumina..................24

5. 4 Eletrólitos no LCR ..............................................................................................28

5.5 Creatinaquinase e lactatodesidrogenase no LCR ................................................32

5.6 Glicemia e glicorraquia..........................................................................................35

6 Conclusões .............................................................................................................40

7 REFERÊNCIAS........................................................................................................41

ANEXOS.....................................................................................................................46

viii

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 Médias e desvios padrões das contagens de hemácias do LCR nos

momento 0 e após cada um dos tratamentos (T) nos grupos SF, DX e

DM..............................................................................................................23

Figura 2 Médias e desvios padrões das contagens de leucócitos do LCR nos

momento 0 e após cada um dos tratamentos (T) nos grupos SF, DX e

DM..............................................................................................................23

Figura 3 Médias e desvios padrões dos níveis de albumina sérica nos animais antes

(0) e após tratamentos (T), nos grupos SF, DX e DM................................25

Figura 4 Médias e desvios padrões dos níveis de proteína total liquórica nos animais

antes (0) e após tratamentos (T), nos grupos SF, DX e DM......................25

Figura 5 Médias e desvios padrões dos quocientes de albumina nos animais antes

(0) e após tratamentos (T), nos grupos SF, DX e DM................................26

Figura 6 Médias e desvios padrões dos valores liquóricos de cloro nos animais antes

(0) e após tratamentos (T) nos grupos SF, DX e DM................................28

Figura 7 Médias e desvios padrões dos valores liquóricos de potássio nos animais

antes (0) e após tratamentos (T) nos grupos SF, DX e DM.......................29

Figura 8 Médias e desvios padrões dos valores liquóricos de sódio nos animais

antes (0) e após tratamentos (T) nos grupos SF, DX e DM.......................30

Figura 9 Médias e desvios padrões dos níveis liquóricos de CK nos animais antes (0)

e após tratamentos (T) nos grupos SF, DX e DM.......................................33

Figura 10 Médias e desvios padrões dos níveis liquóricos de LDH nos animais antes

(0) e após tratamentos (T) nos grupos SF, DX e DM..............................33

Figura 11 Médias e desvios padrões dos teores séricos de glicose nos animais antes

(0) e após tratamentos (T) nos grupos SF, DX e DM................................37

Figura 12 Médias e desvios padrões da glicorraquia nos animais antes (0) e após

tratamentos (T) nos grupos SF, DX e DM.................................................37

Figura 13 Médias e desvios padrões dos percentuais de glicorraquia em relação a

glicemia nos animais antes (0) e após tratamentos (T) nos grupos SF, DX e

DM..............................................................................................................38

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 Médias e desvios padrões das contagens de hemácias e leucócitos do LCR

nos momento 0 e após cada um dos tratamentos (T)...............................22

Tabela 2 Médias e desvios padrões dos níveis de proteína total liquóricas, albumina

sérica e quociente de albumina no momento 0 e após cada um dos

tratamentos (T)...........................................................................................24

Tabela 3 Médias e desvios padrões das concentrações de eletrólitos do LCR nos

grupos SF (solução de NaCl 0,9% estéril), DX (dexametasona) e DM

(DMSO) antes e após os tratamentos........................................................28

Tabela 4 Médias e desvios padrões das concentrações de CK no LCR dos grupos SF

(solução de NaCl 0,9% estéril), DX (dexametasona) e DM (DMSO) antes e

após os tratamentos..................................................................................32

Tabela 5 Médias e desvios padrões das concentrações de glicose no LCR, no soro e

percentual de glicorraquia em relação a glicemia dos grupos SF (solução

de NaCl 0,9% estéril), DX (dexametasona) e DM (DMSO) antes e após os

tratamentos.................................................................................................36

LISTA DE QUADROS

Quadro 1 Comparação entre característica dos endotélios da barreira

hematoencefálica e endotélio dos capilares sistêmicos..........................10

Quadro 2 Valores da contagem de hemácias e leucócitos no LCR dos animais do

Grupo SF (controle) nos momentos 0 e após o tratamento........................46

Quadro 3 Valores da contagem de hemácias e leucócitos no LCR dos animais do

Grupo DX (tratados com dexametasona) nos momentos 0 e após o

tratamento.................................................................................................46

Quadro 4 Valores da contagem de hemácias e leucócitos no LCR dos animais

do Grupo DM (tratados com DMSO) nos momentos 0 e após o

tratamento. ...............................................................................................46

Quadro 5 Níveis de proteína total liquórica e albumina sérica dos animais do Grupo

SF (controle) nos momentos 0 e após o tratamento. .................................47

Quadro 6 Níveis de proteína total liquórica e albumina sérica dos animais do Grupo

DX (tratados com dexametasona) nos momentos 0 e após o

tratamento..................................................................................................47

Quadro 7 Níveis de proteína total liquórica e albumina sérica dos animais do Grupo

DM (tratados com DMSO) nos momentos 0 e após o

tratamento..................................................................................................47

Quadro 8 Níveis de sódio, potássio e cloro no LCR dos animais do Grupo SF

(controle) nos momentos 0 e após o tratamento........................................48

Quadro 9 Níveis de sódio, potássio e cloro no LCR dos animais do Grupo DX

(tratados com dexametasona) nos momentos 0 e após o tratamento........48

Quadro 10 Níveis de sódio, potássio e cloro no LCR dos animais do Grupo DM

(tratados com DMSO) nos momentos 0 e após o tratamento....................48

Quadro 11 Níveis de CK e LDH no LCR dos animais do Grupo SF (controle) nos

momentos 0 e após o tratamento...............................................................49

Quadro 12 Níveis de CK e LDH no LCR dos animais do Grupo DX (tratados com

dexametasona) nos momentos 0 e após o tratamento...............................49

Quadro 13 Níveis de CK e LDH no LCR dos animais do Grupo DM (tratados com

DMSO) nos momentos 0 e após o tratamento...........................................49

Quadro 14 Glicemia e glicorraquia dos animais do Grupo SF (controle) nos

momentos 0 e após o tratamento...............................................................50

Quadro 15 Glicemia e glicorraquia dos animais do Grupo DX (tratados com

dexametasona) nos momentos 0 e após o tratamento...............................50

Quadro 16 Glicemia e glicorraquia dos animais do Grupo DM (tratados com DMSO)

nos momentos 0 e após o tratamento........................................................50

xii

RESUMO

Os fármacos usualmente utilizados no tratamento de lesões do sistema nervoso em

ruminantes muitas vezes não têm apresentado bons resultados. Apesar de ser uma

droga ainda pouco estudada, o dimetilsulfóxido (DMSO) tem sido utilizado no

tratamento das doenças do sistema nervoso em grandes animais. O trabalho avaliou

a influência do DMSO na permeabilidade da barreira hematoencefálica e nos

parâmetros do líquido cefalorraquidiano (LCR) de bovinos mestiços, jovens e sadios,

comparando esses valores aos de animais tratados com dexametasona. 21 animais

foram divididos em grupos de sete bezerros formando um grupo controle, tratado

apenas com solução de NaCl 0,9%, grupo DX, tratado com dexametasona e grupo

DM tratado com DMSO. Os medicamentos foram administrados por via endovenosa.

Foram realizadas duas colheitas de sangue e LCR (antes e depois dos tratamentos)

respeitando-se um intervalo de 15 dias. A colheita de LCR foi realizada no espaço

atlanto-occipital. Foram medidos os quocientes de albumina (pela divisão da proteína

total do LCR/ albumina sérica) após a administração de dimetilsulfóxido e de fosfato

sódico de dexametasona. O trabalho também avaliou a contagem celular,

parâmetros bioquímicos (glicose, proteínas, cloro, potássio e sódio) e enzimáticos

(lactatodesidrogenase- LDH e creatinaquinase-CK) no LCR após administração

endovenosa de DMSO e dexametasona. Os níveis de sódio, cloro e glicose no LCR

após o tratamento com DMSO estavam aumentados significativamente. Valores de

LDH estavam aumentados na segunda colheita (após os tratamentos) em todos os

grupos, inclusive no controle. O tratamento com dexametasona se mostrou mais

eficiente na abertura da barreira hematoencefálica a proteínas, pois o grupo de

animais tratados com esse fármaco apresentou aumento nos valores de proteína

total do LCR e no quociente de albumina. O DMSO e a dexametasona podem ter

causado uma pequena irritação no tecido encefálico, uma vez que os valores de

creatinaquinase no LCR dos bovinos estavam aumentados após o tratamento no

grupo DX e DM. A contagem celular de hemácias no grupo tratado com DMSO

também se mostrou superior, confirmando essa teoria. O aumento da LDH liquórica

nos animais de todos os grupos mostrou que a colheita de LCR no espaço atlanto-

xiii

occipital pode ter causado traumatismo na dura-máter ou no tecido encefálico

durante a colheita.

Palavras-chave: antiinflamatório, DMSO, líquor, proteína, sistema nervoso.

xiv

ABSTRACT

The ruminat medicines, usually, using in the treatment of nervous system insult in the

most of the time don’t present nice result. The dimethylsulfoxide (DMSO), in spite of

this drug have a little study, has used in the treatment of nervous system disease in

large animal load. This study evaluated DMSO influence in blood brain barrier

permeability and in cerebrospinal fluid (CSF) parameters of half-breed, younger and

healthy bovine. The values of these exams were compared between of animal treaty

with dexametasone. Twenty-one animals were divided in groups of seven calves that

made the control group, treated only with saline solution (NaCl 0,9%), DX group,

dexametasone treatment and DMSO group where the animals were treated with

dimethylsulfoxide. The medications were realized in venous injection. Two blood and

two cerebrospinal fluid samples were collected (before and later of the treatments)

after fifteen days of interval. The cerebrospinal fluid was collected from the

cerebellomedullary cistern. The albumin quotients were measured for the division of

the total protein of CSF and serum albumin after dimethylsulfoxide and

dexametasone administration. This work also evaluates cellular counting,

biochemistries parameters (glucose, proteins, chlorine, potassium and sodium) and

enzymatics parameters (lactate dehydrogenase and creatinine phosphokinase) in the

CSF after venous administration of DMSO and dexametasone. The sodium, glucose

and chlorine levels in CSF after DMSO treatment were increased significantly. The

values of lactate dehydrogenase were enlarged on the second collected (after the

treatment) in all of groups, besides in the control group. The dexametasone treatment

showed more efficient in the blood brain barrier opening to the proteins, because the

animals treated with this drug present increase total protein value in cerebrospinal

fluid and in the albumin quotient.

Key-words: antiinflammatory, cerebrospinal fluid, DMSO, nervous system, proteins.

1 INTRODUÇÃO

O tratamento de doenças do sistema nervoso apresenta algumas

particularidades pelo fato do tecido nervoso do encéfalo e o da medula espinhal não

se regenerarem, bem como pela impermeabilidade da barreira hematoencefálica a

muitos antibióticos. O tratamento das infecções do sistema nervoso é limitado pela

existência da barreira hematoencefálica e hematoliquórica, que evitam a penetração

de substâncias dentro do sistema nervoso ou no líquido cefalorraquidiano

(RADOSTITS, 2002).

Os fármacos usualmente utilizados no tratamento das injúrias do sistema

nervoso em ruminantes, muitas vezes, não apresentam bons resultados. Apesar de

ser uma droga ainda pouco estudada, o dimetilsulfóxido (DMSO) tem sido muito

empregado no tratamento de traumatismos e quaisquer outras doenças que levem a

inflamação no tecido nervoso dos grandes animais. O elevado potencial

antiinflamatório e a capacidade de penetração no sistema nervoso central

representam algumas das justificativas para o seu uso freqüente. A possibilidade do

dimetilsulfóxido alterar a permeabilidade da barreira hematoencefálica necessita de

estudo adicional (JACOB, 2006). O efeito desse fármaco em aumentar a

permeabilidade nos capilares encefálicos é controverso (ZIYLAN et al., 1988).

O estudo da ação do DMSO no sistema nervoso dos bovinos e sua

comparação com o fosfato sódico de dexametasona, droga mais utilizada para

terapias do sistema nervoso em animais de produção, são de grande importância

para justificar ou não sua utilização nos casos de injúria nesses tecidos, além de

verificar se esse fármaco pode realmente facilitar a passagem de outros compostos

para o sistema nervoso central. O aumento do quociente de albumina ou a simples

passagem de proteínas para o líquido cefalorraquidiano pode ajudar a esclarecer o

uso do dimetilsulfóxido na terapia das doenças do sistema nervoso central em

ruminantes. A verificação da passagem de outros compostos como enzimas, glicose

e eletrólitos após o tratamento, também podem ajudar a esclarecer a efetividade no

dimetilsulfóxido em modificar a permeabilidade dessa estrutura.

2 REVISÃO DE LITERATURA

2.1 Líquido cefalorraquidiano

O líquido cefalorraquidiano (LCR) protege e nutre o parênquima,

mantendo ainda a homeostasia regional. O LCR tem importância na regulação da

pressão intracraniana, e serve ainda como um tampão químico para o sistema

nervoso central, pelo auxílio que presta à manutenção das concentrações iônicas em

níveis adequados (COLES, 1984).

O LCR é formado em sua maior parte no plexo coróide dos ventrículos

laterais pela filtração do plasma a por transporte ativo de substâncias através da

barreira hematoencefálica. O LCR no sistema ventricular flui caudal e difusamente

pela abertura lateral do quarto ventrículo e circula ao redor do cérebro e medula

espinhal. A presença do LCR no espaço subaracnóideo separa o cérebro e a

medula do osso do crânio e vértebras, reduzindo traumas no delicado tecido nervoso

e removendo produtos do metabolismo cerebral (SCOTT, 2004).

É possível ao clínico veterinário obter o LCR e utilizar o resultado dos

exames laboratoriais como apoio no diagnóstico diferencial das doenças do sistema

nervoso central. A colheita e o exame do LCR estão indicados sempre que haja

evidência clínica de enfermidade do sistema nervoso central. Ocasionalmente, a

avaliação do LCR pode ter utilidade como um método prognóstico para a evolução

da doença e para acompanhamento da resposta ao tratamento (COLES, 1984).

2.1.1 Celularidade

O LCR normal contém menos de cinco leucócitos por microlitro. Um

aumento no número de células nucleadas pode ser resultado de uma lesão ou

inflamação das meninges, cérebro ou medula espinhal (COLES, 1984).

No LCR normal, estão contidas quase que exclusivamente células

mononucleares (linfócitos – 60% a 80% e monócitos – 20% a 40%). O LCR de

pacientes com necrose cerebrocortical ou listeriose, demonstram, ao lado de uma

pequena parte de linfócitos, mais monócitos (40% a 80%) e poucos granulócitos

neutrofílicos. Processos purulentos como abscesso cerebral ou medular e

meningoencefalomielites sépticas, provocam aumento celular constituído quase que

exclusivamente de neutrófilos (STÖBER, 1993). A observação de neutrófilos é com

freqüência um sinal de infecção bacteriana ou piogênica (COLES, 1984).

2.1.2 Exame bioquímico no LCR

a) Concentração de glicose

A glicose não é uma substância lipossolúvel e por isso necessita de

transporte ativo para atingir o LCR e o tecido nervoso. A proteína transportadora de

glicose da membrana das células da barreira hematoencefálica é a GLUT 1 que

consiste em 492 aminoácidos e tem 12 domínios transmembrânicos (LATERRA &

GOLDSTEIN, 1991).

A concentração de glicose no LCR se iguala aproximadamente em 60% a

70% dos níveis desse açúcar no sangue. Em animais sadios, os valores de glicose

no LCR oscilam entre 40mg/dL a 80mg/dL. A glicorraquia depende da glicemia, da

permeabilidade da barreira hematoencefálica e da presença ou ausência de

microorganismos glicolíticos. O fluxo de glicose no LCR depende de uma

concentração de glicose relativamente maior no plasma (LATERRA & GOLDSTEIN,

1991; COLES, 1984). Quando a concentração de glicose no sangue é baixa,

rapidamente o transporte através da barreira é aumentado, quando a glicemia está

alta, o transporte é freado. Sendo assim, a concentração de glicose do LCR depende

da glicemia (ROSENBERG, 1990).

A técnica utilizada para detecção de glicose no LCR é a mesma utilizada

para determinação desse componente no sangue (COLES, 1984). A concentração

média de glicose no LCR de dez bovinos jovens mestiços foi de 45,55mg/dl com

valor máximo de 77,34mg/dl e mínimo de 13,27mg/dl (ARAÚJO, 2003).

b) Níveis de proteína

A albumina é a proteína plasmática de menor peso molecular (69.000PM).

Por ser a menor dessas moléculas, é também a primeira a escapar da corrente

sanguínea, caso a permeabilidade das paredes capilares seja aumentada, em

condições como processos inflamatórios. A albumina constitui 40% a 60% da

concentração total de proteínas séricas e sua concentração normal no sangue na

espécie bovina é de 3,2g/dL. A γ-globulina é a principal imunoglobulina presente no

LCR apesar de estar presente em baixíssimas quantidades (COLES, 1984).

No LCR normal, os níveis de proteínas são extremamente baixos (12-

40mg/dL) consistindo quase inteiramente de albumina, já que é um ultrafiltrado do

plasma (MAYHEW & BEAL, 1980; COLES, 1984). FISHMAN (1992) estima que o

percentual de albumina do LCR em relação ao valor da proteína total é de 50%-70%

e que a γ-globulina tem níveis muito baixos nesse fluido (5%-12%).

A concentração total de proteína no LCR aumenta, tanto nas doenças

inflamatórias como nas não inflamatórias do sistema nervoso central. As globulinas

constituem a fração de maior interesse, por elevarem-se nos estados patológicos

(COLES, 1984). ARAÚJO (2003) estudando valores médios de LCR normal em

bezerros mestiços encontrou um valor médio de proteína total nesse fluido de

20,77mg/dl.

Alterações nos níveis de proteína do LCR podem ser classificadas em três

grandes categorias conforme SORJONEN (1987):

- Distúrbio da barreira hematoencefálica (aumento do quociente de albumina ou

aumento da concentração de albumina no LCR);

- Produção intratecal de imunoglobulinas com decréscimo na porcentagem de

albumina;

- As duas condições juntas.

O quociente de albumina (concentração de albumina no LCR dividido pela

concentração sérica de albumina) é o mais preciso indicador de disfunção da barreira

hematoencefálica (SCOTT, 2004).

Embora o LCR tenha mais cloretos que o sangue, a quantidade de

proteínas é muito menor que a existente no plasma (MACHADO, 2002A). A

contaminação do LCR com sangue durante a colheita pode aumentar a concentração

de proteína nesse fluido, mas apenas em contagens de eritrócitos acima de 2000 /µl

isso pode ocorrer (SCOTT, 2004).

c) Eletrólitos no LCR

Canais iônicos específicos e transportadores iônicos promovem o

movimento de eletrólitos através da barreira hematoencefálica. A existência de

trocadores luminais Na

e Cl

/HCO

ainda não está bem esclarecida. A membrana

externa das células endoteliais encefálicas têm uma concentração relativamente alta

de Na

-K

-ATPase, que troca o K

extracelular com o Na

intracelular com gasto de

energia. Em conjunto com os canais de K

dos astrócitos, essa bomba, localizada na

parede externa do lúmen, pode ter um papel importante na remoção do K

extracelular liberado durante a intensa atividade neuronal (LATERRA & GOLDSTEIN,

1991).

Os métodos empregados na determinação dos níveis de cloreto do LCR

são análogos aos processos de avaliação do eletrólito no sangue. O nível normal

desse elemento no LCR de animais domésticos oscila entre 650 a 850mg/dL. Os

valores de cloreto estão reduzidos nos episódios de meningite e há uma relação

inversa entre seus valores e os de proteínas totais (COLES, 1984). Distúrbios de

osmolaridade do líquido extracelular do sistema nervoso e perturbações do equilíbrio

hidroeletrolítico e ácido-base são os principais fatores de variações na concentração

liquórica deste íon (MELO et al., 2003). Os valores médios de cloretos no LCR de

bezerros holandeses são de 123mEq/L (JEAN et al., 1997). A concentração de cloro

no LCR de dois animais com encefalite viral por herpesvírus bovino-5 foi de

305mEq/L e 216mEq/L; nesse mesmo experimento, bovinos com raiva,

polioencefalomalácia e abscesso compressivos no sistema nervoso central

permaneceram com valores desse eletrólito liquórico inferiores a 150mEq/L

(ALBUQUERQUE et al., 2005).

Há poucas informações sobre os níveis de outros eletrólitos (Na

e K

) no

LCR dos animais domésticos (COLES, 1984). O valor normal em humanos do teor

de sódio no LCR é de 138mEq/L bem próximo ao teor desse mesmo eletrólito

encontrado no soro nessa espécie. Valores de potássio permanecem em torno de

2,8mEq/L (FISHMAN, 1992). Durante a privação de água, os níveis de sódio no LCR

de animais podem atingir 160mEq/L a 200mEq/L (LUTTGEN, 1989).

d) Determinações enzimáticas no LCR

Os aumentos nas atividades enzimáticas do LCR podem indicar lesão no

tecido encefálico ou alteração da permeabilidade na barreira hematoencefálica

porém, as determinações enzimáticas no LCR não foram completamente

compreendidas (MAYHEW & BEAL, 1980; COLES, 1984). Os níveis liquóricos de

creatinaquinase (CK), lactatodesidrogenase (LDH) e aspartato aminotransferase

(AST) estão aumentados no LCR durante a destruição tecidual no sistema nervoso

de animais domésticos ou aumento de permeabilidade das barreiras entre o sangue

e o encéfalo. Os valores de referência dessas enzimas no LCR são controversos em

medicina veterinária (LUTTGEN, 1989).

- Lactatodesidrogenase

As maiores atividades de LDH encontradas no LCR de bovinos doentes

foram de 42U/L e 12U/L em animais com abscesso parahipofisário (ALBUQUERQUE

et al., 2005).

- Creatinaquinase

A creatinaquinase não atravessa a barreira hematoencefálica íntegra e

toda a atividade de CK encontrada normalmente no sistema nervoso é uma

isoenzima (CK-BB), produto da degeneração da mielina (WILSON, 1977; HAYES,

1987). A atividade aumentada de CK tem sido detectada em associação com

diversas doenças neurológicas. O CK plasmático normalmente não penetra no LCR,

assim, qualquer atividade do CK nesse fluido será derivada provavelmente do

sistema nervoso central (COLES, 1984).

Outra teoria sobre a elevação de CK no LCR é resultante do aumento da

permeabilidade na barreira hematoencefálica, com a penetração de enzima sérica no

tecido nervoso (INDRIERI et al., 1980). A atividade da CK pode aumentar em

doenças neurológicas particularmente em doenças degenerativas, que atinjam a

substância branca ou por contaminação sanguínea e gordura extradural (JACKSON

et al., 1996).

Não há relação entre a atividade do CK no LCR e o CK plasmático em

bovinos (BUCHNER et al., 1996).

JEAN et al. (1997) obtiveram valores de CK em LCR colheitado na

cisterna magna de dez bezerros holandeses variando entre 0 e 4U/L. Estudando

parâmetros bioquímicos no LCR de 15 bovinos com sinais neurológicos,

ALBUQUERQUE et al. (2005) não encontraram diferenças nos valores de CK para

animais com raiva, leucose medular e abscesso parahipofisário, ficando esse valor

em 1U/L em todas as doenças.

LATERRA & GOLSTEIN (1991) demostraram que, pacientes humanos

com traumatismo do sistema nervoso central, podem ter os níveis enzimáticos

elevados no LCR de dois a nove dias após o episódio traumático. JACKSON et al.

(1996) provaram que a contaminação com sangue do LCR não era suficiente para o

aumento significativo de CK nesse mesmo fluido.

2.2 Barreira hematoencefálica

A primeira noção de que os capilares do sistema nervoso central teriam

uma permeabilidade diferente dos demais foi obtida através de experiências

realizadas no início do século XX. Verificou-se que, injetando corantes vitais em um

animal, todos os órgãos se coravam com exceção do encéfalo. Entretanto, quando

os corantes eram injetados no LCR, havia coloração do tecido nervoso. Surgiu assim

a idéia de que qualquer substância do LCR já estaria em contato com o tecido

nervoso e que existiria uma barreira entre o sangue e esse mesmo tecido

(MACHADO, 2002B).

Essa barreira mantém um ambiente estável para a atividade neuronal,

excluindo substâncias tóxicas e protegendo neurônios contra neurotransmissores

circulantes (LATERRA & GOLDSTEIN, 1991). A microvasculatura encefálica é

composta por células endoteliais, por pericitos com propriedades semelhantes aos

do músculo liso, que ficam dispostos adjacentes aos capilares, e ainda, por

processos astrogliais que cobrem mais de 95% da superfície externa dos microvasos

(ABBOTT, 2005). A comparação entre as características do endotélio da barreira

hematoencefálica e o endotélio sistêmico se encontram no Quadro 1.

Os componentes essenciais ao funcionamento do sistema nervoso podem

atravessar a barreira hematoencefálica para o LCR de três formas: por difusão de

substâncias lipossolúveis, pelo transporte facilitado ou ativo mediado por receptores

de substâncias hidrossolúveis e por canais iônicos. Gases lipossolúveis como o O

o CO

chegam no tecido encefálico por difusão. O quociente de permeabilidade da

barreira hematoencefálica para muitas substâncias é diretamente proporcional à

lipossolubilidade (LATERRA & GOLDSTEIN, 1991).

Transportadores endoteliais específicos carreiam substratos energéticos,

aminoácidos essenciais e peptídeos da corrente sanguínea para o encéfalo e

removem metabólitos. Os vasos da barreira são impermeáveis a moléculas pouco

lipossolúveis quando comparadas a moléculas muito lipossolúveis. O coeficiente de

permeabilidade da barreira hematoencefálica para muitas substâncias é diretamente

proporcional a lipossolubilidade, medido pelo coeficiente de partição óleo-água. Por

outro lado, drogas com coeficiente de partição óleo-água muito elevado são pouco

solúveis no sangue e se ligam à albumina sérica, o que reduz sua liberação no

encéfalo (LATERRA & GOLDSTEIN, 1991). Muitas substâncias que precisam

atravessar a barreira hematoencefálica não são lipossolúveis e, portanto atravessam

por intermédio dos mecanismos de transporte mediado (ABBOTT, 2005). A

permeabilidade da barreira hematoencefálica é um importante limitador que interfere

na escolha do antimicrobiano adequado para a terapêutica das doenças do sistema

nervoso central (SCOTT, 2004).

O quociente de permeabilidade da barreira hematoencefálica foi

primeiramente estudado em 1964. Pacientes humanos com esclerose múltipla

ingeriam brometo e posteriormente eram determinadas as concentrações dessa

substância no LCR e no plasma. O teste era denominado teste do brometo.

(OLUKOGA et al., 1997). JEAN et al. (1997) obtiveram o quociente de albumina

entre 1,5 a 6,5 (x 10

-3

) estudando valores do LCR em bezerros holandeses

tranqüilizados com xilazina.

A permeabilidade da barreira hematoencefálica algumas vezes pode ser

aumentada por um processo reversível através da administração endovenosa de

agentes hiperosmóticos como o manitol ou uréia. Tem sido sugerido que a

administração endovenosa de dimetilsulfóxido e 5-fluorouracil também podem agir da

mesma forma, porém de maneira menos agressiva (NEUWELT et al., 1983;

MACHADO, 2002B).

QUADRO 1 - Comparação entre característica dos endotélios da barreira

hematoencefálica e endotélio dos capilares sistêmicos

Propriedade

Endotélio da barreira

hematoencefálica

Endotélio sistêmico

Junção oclusiva Sim Não

Fenestra Poucas Muitas

Resistência elétrica Alta Baixa

Espaço perivascular Pequeno Grande

Concentração mitocondrial Alta Baixa

Envolvimento por astrócitos Sim Não

Enzimas específicas Sim Não

Transporte específico de

glicose (GLUT 1)

Sim Não

Receptor específico de

proteína

Sim Não

Fonte: DAVSON & SEGAL (1995); BRIGHTMAN (1989); ROWLAND et al. (1991).

2.3 Medicamentos utilizados na terapia das doenças do sistema nervoso

2.3.1 Dimetilsulfóxido

O dimetilsulfóxido (DMSO) é um subproduto do processamento da

madeira e da destilação do petróleo. Foi inicialmente empregado como solvente

industrial e agora vem sendo muito utilizado como veículo para diversos

medicamentos (TASAKA, 1999).

A ação antiinflamatória do DMSO e do seu metabólito, o dimetilsulfeto

reside na propriedade de remover radicais livres, principalmente hidroxilas. Aumenta

ainda a perfusão tecidual, melhora a ação estabilizadora de membranas realizada

pelos corticosteróides, além de inibir a quimiotaxia de células inflamatórias e carrear

substâncias de baixo peso molecular. Também é capaz de penetrar a barreira

hematoencefálica, diminuindo a produção de prostraglandinas no sistema nervoso

central (TASAKA, 1999). Outros efeitos farmacológicos incluem inibição ou estímulo

de enzimas, vasodilatação (devida à liberação da histamina) e inibição da agregação

plaquetária (BRAYTON, 1986). O DMSO tem sido efetivo no tratamento do edema

cerebral traumático, reduzindo a pressão intracraniana (de la TORRE et al., 1973;

IKEDA & LONG, 1990).

Estudos recentes demonstraram que oxidantes podem abrir canais de

potássio na superfície de arteríolas cerebrais e que antioxidantes como o DMSO,

impedem a abertura desses canais (ROSENBLUM, 2001).

A capacidade do DMSO em penetrar nos tecidos, reflete a troca com a

água nas membranas biológicas. As mucosas, membranas lipídicas das células, as

organelas e a barreira hematoencefálica são igualmente penetradas sem lesão

irreversível na membrana (BRAYTON, 1986). O potencial do DMSO de penetrar nos

tecidos sem causar danos significativos provavelmente se dá por sua natureza

apolar, sua capacidade de aceitar ligações com o hidrogênio e sua estrutura

pequena e compacta. Essas combinações de propriedades resultam na habilidade

do composto em se ligar com a água, proteínas, hidratos de carbono, ácido nucléico,

substâncias iônicas e outros constituintes do organismo. O DMSO pode exercer um

efeito indireto nos sistemas biológicos em virtude das mudanças de estrutura que

causa na água. Entre as conseqüências mais importantes desse efeito podemos citar

a mudança na conformação e nas ligações das proteínas (SZMANT, 2006).

RAMMIER & ZAFFARONI (1967) atribuíram a capacidade de passagem e

modificação transitória de barreiras biológicas pelo DMSO ao fato desse composto

se ligar com a água, modificando-a e em seguida mudando reversivelmente a

conFiguração da proteína.

BRINK & STEIN (1967) dissolveram carbono 14 em DMSO aplicando

injeções intraperitoneais em ratos dessa mistura. Os autores encontraram

quantidades maiores de carbono 14 no cérebro de ratos do grupo experimental,

concluindo que o DMSO resultou em danos na barreira hematoencefálica. Existem

trabalhos se opondo ao fato de que o DMSO pode abrir a barreira hematoencefálica

e aumentar a concentração encefálica de compostos solúveis em água quando

administrados juntos. Para verificar isso, GREIG et al. (1985) administraram

melphalan (um composto antineoplásico) e albumina sérica humana misturados ou

não com o DMSO por via endovenosa em ratos. Os pesquisadores chegaram a

conclusão que o DMSO não aumentou a permeabilidade de agentes solúveis em

água através da barreira hematoencefálica. NEUWELT et al. (1983) testaram a

capacidade do DMSO em abrir a barreira hematoencefálica em 25 ratos através do

corante Evans-blue. Os resultados desses autores não permitiram afirmar que o

DMSO possui potencial para abrir a barreira e ainda notaram efeitos colaterais como

hemoglobinúria e convulsões.

Após a administração de 1g/Kg, ocorrem concentrações plasmáticas

máximas da droga, entre quatro e seis horas. Os níveis detectáveis persistem no

plasma por 400 horas (WONG & REINERTSON, 1984). As mucosas, as membranas

lipídicas das células e as organelas, e a barreira hematoencefálica são igualmente

penetradas (BRAYTON, 1986).

O DMSO é parcialmente metabolizado por enzimas microsomais

hepáticas, mas a via primária de eliminação parece ser a urinária. Embora uma

quantidade significante de DMSO possa ser eliminada na bile a maior parte sofre

circulação entero-hepática (WONG & REINERTSON, 1984).

O DMSO possui uma grande margem de segurança. Os sinais associados

à dose máxima próxima da dose letal incluem sedação, diurese, hemólise

intravascular e hemoglobinúria (BRAYTON, 1986). Adição de DMSO no sangue

causa efeitos que variam de acordo com a concentração e método de administração.

Em concentrações de 50% ou mais, há hemólise instantânea e precipitação de

fibrinogênio. Injeções intravenosas de DMSO podem causar irritação e necrose

locais, dependendo da concentração e freqüência. A lesão ocorre rapidamente,

especialmente em concentrações acima de 80%. Há reação inflamatória perivascular

e trombose. Injeção intra-arterial de 100% de DMSO produz lesão acentuada no

endotélio e massas de aglutinação de células vermelhas (RUBIN, 1983). Injeções

intravenosas em macacos de 3g/Kg em 40% de solução uma vez ao dia durante

nove dias produziram um aumento transitório no ritmo respiratório e um aumento

quatro vezes maior na diurese e hemólise de eritrócitos (de la TORRE et al., 1981).

2.3.2 Dexametasona

Os hormônios esteróides são lipossolúveis e se difundem através das

membranas celulares para o citoplasma, sem depender de um sistema transportador.

(McDONALD, 2004). Glicocorticóides extremamente potentes e de longa duração,

como a dexametasona e a betametasona, possuem estas características graças à

sua ligação reduzida com proteínas plasmáticas, menor velocidade de excreção e

maior afinidade com receptores (JERICÓ, 1999).

O cortisol e os glicocorticóides sintéticos, em concentrações

farmacológicas, podem apresentar alguns efeitos mineralocorticóides, promovendo a

retenção de sódio, excreção de potássio e expansão do volume extracelular.

Enquanto o íon sódio é reabsorvido nos túbulos renais, a água também é absorvida

osmoticamente aumentando o volume do líquido extracelular e mantendo a

concentração de sódio extracelular quase constante. Este aumento de volume

extracelular leva a um aumento de pressão arterial causando o efeito de diurese de

pressão (excreção aumentada de água e sal). O cortisol aumenta todas as enzimas

necessárias à conversão de aminoácidos à glicose nas células hepáticas além de

mobilizar os aminoácidos a partir de tecidos extra-hepáticos, principalmente

músculos (GUYTON, 1997; JERICÓ, 1999).

Além de aumentar a conversão de aminoácidos em glicose, o cortisol inibe

a utilização periférica da glicose, o que leva a um aumento das reservas teciduais de

glicogênio, especialmente no fígado. Ocorrem hiperglicemia e glicosúria. A

administração excessiva de cortisol, provoca retenção de sódio e diurese de

potássio. A administração elevada desse tipo de droga pode favorecer a excreção de

cálcio, fósforo e nitrogênio (McDONALD, 2004).

3 OBJETIVOS

3.1 Objetivo geral

Avaliar a influência do dimetilsulfóxido administrado por via endovenosa

na permeabilidade da barreira hematoencefálica e nos parâmetros do líquido

cefalorraquidiano de bovinos sadios, comparando esses valores com animais

tratados com dexametasona.

3.2 Objetivos específicos

Mensurar o quociente de albumina (pela divisão da proteína total do LCR/

albumina sérica) após a administração de dimetilsulfóxido e de fosfato sódico de

dexametasona.

Avaliar contagem eritrocitária e diferenciação leucocitária, parâmetros

bioquímicos (glicose, proteínas, cloro, potássio e sódio) e enzimáticos

(lactatodesidrogenase – LDH, creatinaquinase – CK) no líquido cefalorraquidiano

após administração endovenosa de DMSO, comparando com valores do grupo que

recebeu fosfato sódico de dexametasona.

4 MATERIAL E MÉTODOS

De um lote de 50 animais, foram escolhidos 21 bovinos machos jovens (de

18-24 meses) mestiços, sadios, oriundos do rebanho da Fazenda Água Limpa –

Universidade de Brasília (UnB). Todos os animais selecionados, após o exame

clínico, foram considerados hígidos e identificados com brincos numerados. Após 15

dias, os bovinos foram pesados individualmente em balança eletrônica. O

delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com três grupos e sete

repetições conforme descrito a seguir.

1. Grupo SF - animais controle;

2. Grupo DX - administração de fosfato de sódio de dexametasona;

3. Grupo DM - administração de DMSO.

Os animais foram mantidos em piquete de Brachiaria decumbens,

recebiam mistura mineral comercial e água (ad libitum), e quatro quilos de silagem de

milho por dia para cada animal. Os bovinos permaneceram na fazenda Água Limpa

onde foram realizadas todas as colheitas.

O trabalho foi dividido em duas etapas. A primeira colheita de sangue e

LCR (momento 0) foi realizada com os animais antes da administração das drogas e

a segunda colheita (tratamento – momento T), após a administração dos

medicamentos (duas semanas após o momento 0). Qualquer evidência

macroscópica ou laboratorial de contaminação das amostras, levava ao descarte do

animal, sendo substituído no dia seguinte, por outro do mesmo lote, em iguais

condições.

4.1 Administração dos medicamentos

Foram administrados os medicamentos ao grupo DX e grupo DM, e no

grupo SF (controle), apenas solução estéril de NaCl 0,9% (Solução Fisiológica 0,9% -

Laboratório Sanobiol Ltda – Pouso Alegre, Minas Gerais, Brasil). Antes da

administração dos medicamentos todos os animais foram contidos ao solo com

cordas e colocados em decúbito lateral direito. Todos os bovinos foram mantidos

nesta posição por um período de 30 minutos, suficiente para a administração

endovenosa dos fármacos, utilizando-se cateter nº 18 (Jelco - Medex do Brasil, São

Paulo, Brasil) e equipos flexíveis descartáveis (Compojet Biomedica Ltda – Salvador,

Bahia, Brasil).

Os animais do grupo DX receberam individualmente fosfato sódico de

dexametasona (Dexacorte – Marcolab - Trajetória Farmacêutica, Coméstica e

Veterinária Ltda, Rio de Janeiro, Brasil), por via endovenosa, na dose de 0,25 mg/Kg

(MAYHEW, 1989), diluída em solução de NaCl 0,9% estéril.

No grupo DM foi administrado individualmente DMSO (Dimesol 99,78% -

Marcolab - Trajetória Farmacêutica, Coméstica e Veterinária Ltda, Rio de Janeiro,

Brasil), em uma dose de 1g/Kg (ROBINSON, 1997). A droga foi veiculada por via

endovenosa e diluída em solução de NaCl 0,9% estéril a uma concentração de 10%

de DMSO.

Nos animais do grupo SF (controle) foi administrada apenas solução

estéril de NaCl a 0,9% de maneira semelhante aos tratamentos dos demais grupos.

4.2 Colheita de líquido cefalorraquidiano

As colheitas de LCR foram realizadas cinco horas após a administração

do DMSO, dexametasona e solução de NaCl para todos grupos. Cada animal foi

contido novamente ao solo com cordas, sendo colocados em decúbito lateral direito.

Foi realizada tricotomia formando um quadrado de aproximadamente 10 cm de lado,

na parte dorsal da região cervical, na transição entre o crânio e a coluna vertebral.

Para a punção atlanto-occipital, utilizou-se agulha metálica número 12,

estéril, com mandril (agulha metálica com mandril nº12 – Becton e Dickinson do

Brasil, Juiz de Fora, Brasil). Durante o procedimento, a cabeça do animal foi

posicionada paralela ao solo e flexionada em direção ao pescoço, formando um

ângulo de 90º como na técnica descrita por STÖBER (1993). A região da tricotomia

foi previamente lavada e limpa com solução de álcool-iodado. Não foi realizado

qualquer tipo de anestesia ou sedação nos animais. Durante o procedimento a

agulha foi introduzida paralelamente a linha da mandíbula, no ponto central do

triângulo formado pela protuberância do osso occipital e as duas bordas do osso

atlas de acordo com a descrição de SCOTT (2004). A agulha foi introduzida até

ultrapassar a dura-máter e o mandril retirado para que o LCR pudesse fluir

espontaneamente até os tubos de colheita. Foram colhidos aproximadamente oito

mililitros de LCR de cada animal.

As amostras de LCR foram colhidas em três tubos de ensaio estéreis

identificados e colocados imediatamente em caixas de isopor contendo gelo a uma

temperatura aproximada de 2-5ºC. A primeira amostra de cada animal foi desprezada

para evitar qualquer tipo de contaminação por sangue advindo da colheita. Os

outros dois tubos foram acondicionados e transportados ao laboratório em um prazo

máximo de uma hora para análise.

4.3 Colheita de sangue e determinação da glicemia

A colheita de sangue foi realizada após a punção atlanto-occipital,

utilizando-se para isso agulhas 40 x 9 mm (Agulha Hipodérmica - Becton e Dicknson

do Brasil, Juiz de Fora, Brasil) e adaptador para tubos de vácuo. A venopunção foi

realizada na veia jugular ainda com o animal contido ao solo. Foram colheitadas

amostras de sangue, em dois tubos com vácuo (Tubo tampa amarela com ativador

de coágulo - Becton e Dickinson do Brasil, Juiz de Fora, Brasil) por animal, contendo

oito mililitros de sangue. Os frascos permaneceram acondicionados em isopor com

gelo até a chegada ao laboratório.

A medição da glicemia foi realizada ainda com o animal em decúbito. A

amostra de sangue originada por punção da veia auricular foi colocada em tiras

específicas e medidas imediatamente em aparelho glicosímetro portátil Accu-Chek

Advantagec Diagnóstica Brasil Ltda.

4.4 Análise do líquido cefalorraquidiano

Foram determinados no LCR dos bovinos, de todos os grupos, contagem

e diferenciação celular, glicorraquia, teor de proteínas totais, atividade das enzimas

LDH e CK e concentração de cloro, sódio e potássio.

A contagem de células nucleadas e de eritrócitos em todas as amostras

de LCR foi realizada em câmara de Fucks-Rosental (Câmara de Fucks-Rosental –

Labex S/A - Aparecida de Goiânia, Goiás, Brasil). A contagem diferencial celular foi

realizada em lâminas coradas com panótico (Coloração Panótico rápido – Laborclin

produtos para Laboratório LTDA, Paraná, Brasil) preparadas com amostras de 500 µl

do LCR, centrifugadas a 1500 rpm durante cinco minutos em citocentrífuga

(Citocentrífuga Cientec 2000D - Cientec Equipamentos para Laboratórios Ltda,

Piracicaba, São Paulo, Brasil).

Os níveis de proteínas totais foram determinados em espectrofotômetro

semi-automático (Espectrofotômetro - Bio-2000 - Bioplus Produtos para Laboratórios

Ltda, São Paulo, Brasil), utilizando-se o método de microdosagem (Sensiprot -

Labtest Diagnóstica S/A, São Paulo, Brasil) no Laboratório de Patologia Clínica

Veterinária da UnB. As determinações da concentração de glicose (Labtest

Diagnóstica S/A, São Paulo, Brasil), LDH e CK (Konelab Prime 60 - Thermo Fisher

Scientific, Vantaa, Finlândia) foram feitas em aparelho de espectrofotometria. Os

níveis de eletrólitos no LCR foram determinados pelo método do eletrodo íon seletivo

(AVL 9140 Autolyzer - AVL Scientific Corporation, Geórgia, EUA) no laboratório de

análises clínicas do Hospital Universitário de Brasília - UnB.

4.5 Análise do soro

As amostras de sangue foram centrifugadas (Centrifuga Excelsa Baby I,

modelo 206-BL, Fanen, São Paulo, Brasil) a 3000 rpm por cinco minutos para

separação das frações soro e células, determinação da concentração de albumina de

todos os animais. A determinação de albumina foi realizada utilizando aparelho semi-

automático no Laboratório de Patologia Clínica Veterinária - UnB.

O quociente de albumina foi determinado dividindo-se o valor da

concentração total de proteínas do LCR pelo valor encontrado na determinação de

albumina no soro em cada colheita (PT/ALB).

4.6 Análise estatística

A comparação das médias entre o momento 0 e o tratamento foi realizada

pelo teste t de Student (Prism 4 - GraphPad Software Inc., San Diego, Califórnia,

EUA). A analise de variância (ANOVA) e o teste de Tukey foram empregados para a

comparação das médias entre os tratamentos (SAMPAIO, 1998).

5 RESULTADOS e DISCUSSÃO

Vários compostos são utilizados na tentativa de realizar terapia correta em

doenças do sistema nervoso em ruminantes. Existem doenças importantes como a

polioencefalomalácia, os traumatismos encefálicos/medulares, as encefalites

bacterianas ou os abscessos compressivos que, quando tratadas precocemente,

podem melhorar de forma considerável o prognóstico. A escolha correta da droga

deve levar em conta sua capacidade de agir e penetrar no tecido encefálico ou de

veicular outras drogas que irão auxiliar na terapêutica desse sistema. A comprovação

de que o DMSO possui alguma influência na barreira hematoencefálica é uma

informação importante para o clínico no momento de utilizar esse medicamento em

doenças neurológicas dos ruminantes.

Existem várias formas de promover o aumento de permeabilidade da

barreira hematoencefálica em animais. A forma mais comum é administrar

compostos hiperosmóticos como o manitol e a uréia, fazendo com que as células dos

capilares da barreira percam água para o lúmen do vaso e abram assim as junções

oclusivas (MACHADO, 2002B). Tem sido sugerido que o DMSO (e outros compostos

como o 5-fluorouracil) também podem agir da mesma forma, porém de maneira

menos invasiva (NEUWELT et al., 1983). Por essa razão, o fármaco foi escolhido

para o estudo.

Não houve diferença significativa (P>0,05) na comparação dos momentos

0 entre os grupos em todos os parâmetros avaliados, mostrando que os valores de

proteína liquórica, celularidade, enzimas, eletrólitos e quociente de albumina eram

semelhantes nos três grupos antes do início do tratamento.

5.1 Contenção e colheita de LCR

De acordo com a técnica descrita por STÖBER (1993), não é preciso

sedar bovinos para obtenção do LCR no espaço atlanto-occipital. No presente

trabalho, apenas a contenção com cordas e o auxilio de dois ajudantes foi possível

realizar todas as colheitas, sem a necessidade de nenhum tipo de sedação ou

anestesia local. No estudo realizado por ALBUQUERQUE et al. (2005), a contenção

também foi bem sucedida apenas com a utilização de cordas e auxiliares, não

havendo necessidade de contenção química, apesar das colheitas no trabalho citado

terem sido realizadas em animais doentes.

Um dos animais do grupo DM (animal 2D20) apresentou hemoglobinúria

após a administração endovenosa do DMSO. Não foi notado qualquer outro tipo de

efeito colateral nos bovinos do grupo DM após a administração do DMSO ou

qualquer tipo de seqüelas causadas pela agulha durante a punção em nenhum dos

grupos. NEUWELT et al. (1983) notaram efeitos colaterais após aplicação

experimental de DMSO em ratos como convulsões e hemoglobinúria, porém a

aplicação foi realizada por via intracarotídea, potencializando o efeito tóxico da

droga. A hemoglobinúria do animal que recebeu DMSO pode ser explicada pelo fato

do DMSO causar hemólise intravascular (BRAYTON, 1986).

Todos os animais que receberam DMSO exalaram um cheiro adocicado

no ar expirado e em todos os fluidos orgânicos (sangue, urina e LCR) cerca de

alguns minutos após o início da administração dessa droga. Isso reforça a afirmação

feita por BRAYTON (1986) de que o DMSO penetra rapidamente em todos os

tecidos orgânicos. Um efeito semelhante é relatado em humanos descrito como

exalação de cheiro de alho e gosto de alho na boca devido à excreção pulmonar de

pequena quantidade de DMSO como dimetilsulfona, um subproduto do metabolismo

dessa droga (SANTOS et al., 2003).

5.2 Celularidade

As médias e desvios padrões das contagens de hemácias e leucócitos do

LCR dos animais de todos os grupos estão demonstrados na Tabela 1.

A contagem de leucócitos no LCR de todos os grupos permaneceu

inalterada (Figura 2), já a contagem de hemácias no grupo tratado com DMSO

apresentou-se estatisticamente diferente (P<0,05) nos momentos 0 e pós-tratamento

(Figura 1).

MELO et al. (2003) afirmam que a contaminação durante a colheita do

LCR pode levar a resultados errôneos sobre esse fluido, aumentando principalmente

a contagem de hemácias. A maior contagem de hemácias no LCR dentre os animais

que participaram do experimento foi de 15 hemácias por microlitro, mostrando que

durante a colheita não houve contaminação. A contagem celular foi válida para

garantir que os valores encontrados no LCR eram exclusivamente desse fluido e que

não foram misturados a elementos sanguíneos.

O tempo entre a colheita e a chegada ao laboratório parece não ter

influenciado na contagem de células. LUCAS et al. (2004) afirmam que as contagens

podem ser realizadas em até seis horas após a colheita, sem perdas significativas na

contagem de eritrócitos e células nucleadas.

TABELA 1 - Médias e desvios padrões das contagens de hemácias e leucócitos do LCR

nos momento 0 e após cada um dos tratamentos (T) - Brasília, 2007

Grupo SF Grupo DX Grupo DM

SF-0 SF-T DX-0 DX-T DM-0 DM-T

Hemácias (cel/µl)

1,4 ± 0,8 2,6 ± 2,9 4 ± 3,3 2,4 ± 1,7 3,7 ± 3,1 7,3

± 5,2*

Leucócitos (cel/µl)

9,1 ± 8,4 8 ± 3,7 7 ± 6,1 5,9 ± 4

8,1 ± 6,1 9,6 ± 6,3

* Médias diferem entre si (p<0,05) no momento 0 e tratamento para o mesmo tipo celular

O aumento do número de hemácias e leucócitos nos animais tratados com

o DMSO pode ser explicado possivelmente pela ação vasodilatadora causada por

esse medicamento nos capilares do tecido encefálico e da barreira hematoencefálica

(BRAYTON, 1986).

FIGURA 1 - Médias e desvios padrões das contagens de

hemácias do LCR nos momento 0 e após cada

um dos tratamentos (T) nos grupos SF, DX e

DM.

Médias diferem entre si para um mesmo

grupo (p<0,05)

FIGURA 2 - Médias e desvios padrões das contagens de

leucócitos do LCR nos momento 0 e após

cada um dos tratamentos (T) nos grupos SF,

DX e DM. Médias não diferem entre si (p>0,05)

5.3 Proteínas totais liquóricas, albumina sérica e quociente de albumina

O resultado da mensuração dos níveis de proteínas totais liquóricas (PTL),

albumina sérica e quociente de albumina antes (0) e depois dos tratamentos (T)

encontram-se na Tabela 2. Os valores de PTL não diferiram (p>0,05) entre o

momento 0 e tratamentos (T) em todos os grupos (Figura 4). A comparação entre os

grupos dos animais após os tratamentos demonstrou diferença significativa (p<0,05)

entre o grupo DX e os grupos SF e DMSO (Figura 4). O quociente de albumina

(Figura 5) apresentou-se elevado no grupo DX em relação aos grupos SF e DM

(p<0,05). Não foram observadas diferenças entre o momento 0 dos diferentes

tratamentos (p>0,05). Os valores de albumina sérica não diferiram (p>0,05) entre o

momento 0 e tratamentos (T) em todos os grupos (Figura 3)

TABELA 2 - Médias e desvios padrões dos níveis de proteína total liquóricas, albumina

sérica e quociente de albumina no momento 0 e após cada um dos

tratamentos (T) - Brasília, 2007

Grupo SF Grupo DX Grupo DM

SF-0 SF-T DX-0 DX-T DM-0 DM-T

Albumina

soro (g/dl)

3,5±0,5 3,6±0,2 3,7±0,5 3,8±0,4 3,4 ± 0,3 3,9 ± 0,9

Proteína

LCR (mg/dl)

35,5±25,0 22,2±3,2

33,6±19,5 44,1±19,5

22,8±11,0 23,7±6,5

Quociente

de albumina

11,0 ± 9,1 6,2±0,7

9,1±5,7 11,7±5,6

7,0±4,3 6,3±1,7

AB - Médias com letras diferentes em uma mesma linha, após os tratamentos (T),

diferem entre si (p<0,05)

FIGURA 3 - Médias e desvios padrões dos níveis de

albumina sérica nos animais antes (0) e

após tratamentos (T), nos grupos SF, DX

e DM. Médias não diferem entre si

(p>0,05)

FIGURA 4 - Médias e desvios padrões dos níveis de

proteína total liquórica nos animais antes

(0) e após tratamentos (T), nos grupos SF,

DX e DM. Tratamentos (T) seguidos de

letras distintas diferem entre si (p<0,05)

FIGURA 5 - Médias e desvios padrões dos quocientes

de albumina nos animais antes (0) e após

tratamentos (T), nos grupos SF, DX e

DM. AB-Médias nos momentos T,

seguidas de letras distintas, diferem entre

si (p<0,05)

Apesar dos valores de PTL não aumentarem estatisticamente quando

comparados entre os momentos 0 e T (Figura 4) no grupo tratado com

dexametasona e no grupo tratado com DMSO houve aumento nos valores. No grupo

não tratado (SF) houve decréscimo não significativo de PTL.

O grupo que recebeu a dexametasona como tratamento obteve aumento

significativo do quociente de albumina após o momento T, quando comparado com

outro grupo, sugerindo que a dexametasona permitiu a passagem de proteínas

menores como a albumina.

A dexametasona é um glicocorticóide potente e de longa duração,

possuindo a característica de ligação reduzida com proteínas (JERICÓ, 1999). Essa

informação, permite descartar a possibilidade da dexametasona ter aumentado o

valor de proteínas no LCR por ligação e transporte para o tecido nervoso já que essa

droga é lipossolúvel e atinge com facilidade o tecido encefálico. Se ainda assim essa

teoria fosse proposta, a dexametasona não cumpriria seu papel em situações de

doença neurológica, pois segundo JERICÓ (1999), os esteróides ligados a proteínas

não apresentam atividade biológica, sendo somente sua fração livre capaz de

acionar mecanismos intracelulares adequados a sua função.

O aumento nas proteínas séricas e PTL do Grupo DX tratado com

dexametasona era esperado já que esse glicocorticóide aumenta o catabolismo e

diminui a síntese de proteínas (JERICÓ, 1999). No entanto, as proteínas produzidas

no fígado (como a albumina) são aumentadas, provavelmente por elevação na

atividade das enzimas hepáticas responsáveis pela síntese protéica e aumento de

transporte de aminoácidos para dentro das células hepáticas. O cortisol mobiliza

aminoácidos a partir dos tecidos não hepáticos diminuindo, assim, as reservas

protéicas tissulares e aumentando a síntese protéica hepática (GAYTON, 1999).

No caso do aumento após o tratamento do grupo DM, a albumina pode ter

penetrado no sistema nervoso central de duas maneiras: na primeira, o DMSO pode

ter carreado essas moléculas através da barreira até o tecido encefálico e na

segunda, o DMSO pode ter causado realmente um aumento de permeabilidade

nessa estrutura, permitindo a passagem de albumina. COLES (1984) afirma que a

albumina é a proteína de menor peso molecular e por ser menor é a primeira a

escapar caso a permeabilidade das paredes dos capilares seja aumentada.

As médias do quociente de albumina nos animais antes e depois dos

tratamentos variaram de 6,2 a 11,7 (x 10

-3

) diferindo de valores de 1,5 a 6,5 (x 10

-3

)

encontrados por JEAN et al. (1997) em LCR colhidos de bezerros holandeses jovens

sedados com xilazina.

Foi realizada a comparação das variações individuais de cada animal

(∆=subtração do valor de proteína liquórica do momento T menos os valores do

momento 0) não havendo diferenças entre os três grupos (p>0,05).

5.4 Eletrólitos no LCR

As médias e desvios padrões dos níveis de eletrólitos no LCR dos animais

durante o experimento encontram-se na Tabela 3. Os níveis de cloro do LCR (Figura

6) não sofreram variação em nenhum animal dentro dos grupos ou quando

comparados entre eles (p>0,05). Valores de potássio (Figura 7) antes dos

tratamentos (momento 0) foram diferentes dos valores (p<0,05) encontrados após o

tratamento no grupo SF e no grupo DM. Não houve diferença significativa quando os

grupos foram comparados entre si (p>0,05). Os níveis liquóricos de sódio (Figura 8)

apresentaram diferenças apenas entre o momento 0 e os bovinos tratados com

DMSO (p<0,05). O nível de sódio no LCR dos animais tratados (Figura 8) apresentou

diferença significativa (p<0,05) entre o grupo SF e os grupos DX e DM, apesar das

variações terem sido pequenas.

TABELA 3 - Médias e desvios padrões das concentrações de eletrólitos do LCR nos grupos SF

(solução de NaCl 0,9% estéril), DX (dexametasona) e DM (DMSO) antes e após os

tratamentos - Brasília, 2007

Grupo SF Grupo DX Grupo DM

SF-0 SF-T DX-0 DX-T DM-0 DM-T

Cl (mEq/L)

116,7±1,4 116,1±0,7 117,7±2,1 117,4±1,7 117,4±1,5 117,4±0,8

K (mEq/L)

2,7±0,1

2,8±0,0*

2,8±0,2 2,9±0,1 2,8±0,1

2,9±0,1

Na (mEq/L)

135,6±0,8 136,0±1,0

138,0±1,9 139,3±1,1

137,1±1,3 138,0±1,0

* Médias distintas para um mesmo eletrólito e grupo diferem entre si (p<0,05).

Médias com

letras distintas diferem entre si (p<0,05) na comparação entre os tratamentos (momento T)

para um mesmo eletrólito

FIGURA 6 - Médias e desvios padrões dos valores

liquóricos de cloro nos animais antes (0) e

após tratamentos (T) nos grupos SF, DX e

DM. Médias não diferem entre si (p>0,05)

FIGURA 7 - Médias e desvios padrões dos valores

liquóricos de potássio nos animais antes (0)

e após tratamentos (T) nos grupos SF, DX e

DM. * Médias diferem entre si (p<0,05) no

momento 0 e tratamento

FIGURA 8 - Médias e desvios padrões dos valores liquóricos

de sódio nos animais antes (0) e após

tratamentos (T) nos grupos SF, DX e DM. AB-

Médias com letras distintas no momento T

diferem entre si (p< 0,05). * Médias diferem

entre si (p<0,05) no momento 0 e tratamento

Apesar de não haver diferenças estatísticas entre momentos (0 e T) ou

entre os grupos, os níveis de cloro no trabalho estiveram em desacordo com a

afirmação de COLES (1984) onde os níveis de cloro são inversamente proporcionais

aos níveis de PTL. A Tabela 2 mostra que nos grupos onde foram encontrados

maiores elevações de proteína, foram os grupos que obtiveram maiores

concentrações de cloreto. JEAN et al. (1997) encontraram valor médio de 123mEq/L

de cloro no LCR de bezerros normais, permanecendo próximo a valores encontrados

no presente trabalho de 116 a 119mEq/L, apesar dos dois trabalhos terem sido

realizados em animais de idades e raças diferentes. Já STEINBERG (1973) obteve

valores bem diferentes, variando entre 183mEq/L e 204mEq/L (trabalho realizado em

vacas sadias adultas). A não observação de um aumento nos níveis de cloro no LCR

após os tratamentos é um fato que enfraquece a teoria de que esses dois

medicamentos (DMSO e fosfato sódico de dexametasona) possam alterar

significantemente a permeabilidade da barreira hematoencefálica, pois em estudo

feito por ALBUQUERQUE et al. (2005), o valor desse eletrólito se elevou para 305

mEq/L e 216 mEq/L em animais portadores de meningoencefalites virais multifocais.

As encefalites virais em ruminantes causam inflamação não supurativa do tecido

encefálico, aumentando a permeabilidade da barreira hematoencefálica (SCOTT,

2004).

As variações e os desvios padrão (Tabela 3) de todos os eletrólitos

avaliados no trabalho antes a após as colheitas foram muitos pequenos, mesmo

quando os resultados foram comparados entre os grupos e mesmo havendo

diferença significativa.

O potássio permaneceu estatisticamente igual somente no grupo tratado

com dexametasona, aumentou suas concentrações no LCR dos grupos controle e

tratado com DMSO. A dexametasona, assim como outros corticóides, estimulam a

diurese (McDONALD, 2004), fato que pode ter contribuído para a baixa de potássio,

pois provavelmente houve queda desse eletrólito em todos os fluidos orgânicos.

Para FISHMAN (1992) os valores de potássio no LCR de humanos estão

em torno de 2,8mEq/L. Mesmo sendo em espécies diferentes, os valores

encontrados por esse autor são muito semelhantes aos valores encontrados no

presente trabalho.

Apenas os bovinos que receberam DMSO tiveram aumento nos níveis de

Na liquórico. Esse fato pode reforçar a teoria da influência do DMSO na

permeabilidade da barreira hematoencefálica. STEINBERG (1973) estudando

valores de eletrólitos no LCR de vacas adultas sadias obteve valores de potássio

muito semelhantes aos encontrados no presente trabalho (entre 2,8mEq/L e

3,0mEq/L).

Os aumentos ou a não variação nos valores das concentrações de

eletrólitos no LCR podem sugerir que ocorreu algum evento importante na

permeabilidade da barreira, porém, deve-se levar em conta que os mecanismos de

ação das duas drogas nas células do tecido nervoso não são bem elucidados,

podendo o aumento ou diminuição desses eletrólitos ser conseqüência da alteração

do equilíbrio osmótico do meio e influenciando na perda ou captação de alguns

desses compostos.

5.5 Creatinaquinase e lactatodesidrogenase no LCR

As médias e desvios padrões das concentrações de CK no LCR dos

grupos SF (solução de NaCl 0,9% estéril), DX (dexametasona) e DM (DMSO) antes

e após os tratamentos estão demonstrados na Tabela 4. Houve diferença

significativa (p<0,05) entre os níveis de CK nos momentos 0 e T do grupo DM e do

grupo DX, o que não ocorreu com o grupo SF controle (Figura 9). Não houve

diferença nos valores de CK na comparação entre os três grupos (p>0,05) após o

tratamento.

Os valores de LDH liquórico apresentaram elevação significativa (p<0,05)

nos três grupos entre os momentos 0 e momento T (Figura 10). Não foram

observadas diferenças entre os grupos (p>0,05), porém, os maiores níveis dessa

enzima foram encontrados no grupo tratado com DMSO (Figura 10).

TABELA 4 - Médias e desvios padrões das concentrações de CK no

LCR dos grupos SF (solução de NaCl 0,9% estéril), DX

(dexametasona) e DM (DMSO) antes e após os tratamentos

- Brasília, 2007

Grupo SF Grupo DX Grupo DM

SF-0 SF-T DX-0 DX-T DM-0 DM-T

CK (U/L)

1,3±0,5 2,4±1,6 1,1±0,4 2,9±1,1*

1,0±0,0 2,4±1,0*

LDH (U/L)

8,0±2,2 16,1±4,4

6,9±2,8 20,7±10,6* 7,6±6,1 23,3±5,9

Médias diferem entre si (p<0,05) no momento 0 e tratamento para uma

mesma enzima

FIGURA 9 - Médias e desvios padrões dos níveis liquóricos de

CK nos animais antes (0) e após tratamentos (T)

nos grupos SF, DX e DM. * Médias diferem entre si

no momento 0 e tratamento (p<0,05)

FIGURA 10 - Médias e desvios padrões dos níveis liquóricos de

LDH nos animais antes (0) e após tratamentos (T)

nos grupos SF, DX e DM. * Médias diferem entre si

no momento 0 e tratamento (p<0,05)

Os aumentos de níveis enzimáticos no LCR podem demonstrar algum grau

de lesão no tecido nervoso na maioria das espécies ou alteração da permeabilidade

da barreira hematoencefálica (MAYHEW & BEAL, 1980; COLES, 1984; INDRIELI et

al., 1980). O aumento do LDH em todos os grupos pode ser explicado,

possivelmente, pela pequena lesão causada pela agulha no espaço subdural no

momento da primeira colheita.

Aumentos plasmáticos da atividade de CK e LDH têm sido notados em

resposta ao exercício (HARRIS, 1998; ANDREWS et al., 1995). A contenção com

cordas e o tempo necessário para a administração dos medicamentos (30 minutos)

podem ter influenciado os níveis de plasmáticos e liquóricos de CK e LDH já que

houve aumento dessas enzimas em alguns grupos após a administração dos

medicamentos. Porém, BUCHER et al. (1996) estudando o LCR de bezerros, não

encontraram relação entre o CK plasmático e o CK liquórico, reforçando a

informação de que o aumento dessa enzima no LCR depende exclusivamente de

lesão no tecido encefálico ou aumento de permeabilidade.

WILSON (1977) afirma que toda a atividade de CK encontrada no sistema

nervoso, se a barreira hematoencefálica estiver íntegra, é da isoenzima CK-BB

resultante da degeneração da mielina. Essa afirmação pode corroborar para o fato

do DMSO e da dexametasona terem influenciado a abertura da barreira, fazendo

com que o CK plasmático penetrasse no LCR, já que a administração dessas duas

drogas elevou os níveis de CK liquórico para valores significantemente maiores que

no momento 0. O reagente utilizado para medição da enzima CK NAK detectou

níveis desse composto no LCR de bovinos. Os níveis de CK no soro de animais

submetidos a exercícios ou lesões atingem o pico no primeiro dia após a injúria ou

exercício e retornam completamente aos valores basais no quarto dia, diferente do

LDH que atinge seu pico no quarto dia e começa a retornar a níveis normais a partir

do sétimo dia (CLARKSON & EBBELING, 1988).

A contaminação com sangue durante a colheita de LCR não pode ser

utilizada como justificativa para o aumento de CK no grupo DX e no grupo DM já que

foi utilizado a mesma técnica para a colheita no grupo controle, onde esse aumento

não foi observado.

Valores de CK liquórico de bezerros holandeses sadios foram de 0 a 4U/L

(JEAN at al., 1997) estando bem próximos de 1,0U/L a 2,9U/L, valores encontrados

no LCR de animais avaliados no presente trabalho. Em bovinos com encefalites

virais ou metabólicas do sistema nervoso, os valores permaneceram próximos de

1,0U/L (ALBUQUERQUE et al., 2005). A diferença desses valores pode ser

explicada pela variação nas técnicas, armazenagens e metodologia para análises de

eletrólitos dos dois trabalhos.

No presente experimento esperava-se um aumento significativo de das

atividades de CK no LCR após a administração do DMSO nos animais do grupo DM.

Segundo COLES (1984), o LDH está presente em altas concentrações nas hemácias

e há incremento dessa enzima devido à hemólise. Uma das reações indesejáveis do

DMSO é a hemólise intravascular, mesmo que seja em menor grau (BRAYTON,

1986). O animal que apresentou hemoglobinúria após a administração do DMSO não

teve valores elevados de LDH no LCR.

O aumento da atividade do LDH em todos os grupos após o tratamento em

relação ao momento 0 pode ser explicado pela contenção na hora da colheita.

Diferentemente do CK, o LDH é uma enzima tardia e pode permanecer elevada no

plasma até sete dias após a lesão. O aumento do LDH plasmático pode ter

influenciado o aumento dessa enzima no LCR.

Alguns autores acreditam que o DMSO pode causar danos a vários tipos

de tecidos, inclusive ao tecido encefálico e que a alteração na permeabilidade da

barreira seria promovida justamente por esse fator (BRINK & STEIN, 1968; KOCSIS

et al., 1983). O aumento das duas enzimas nos grupos tratados pode colaborar com

essa teoria e sugerir que a permeabilidade aumentada pela dexametasona tenha

mecanismo semelhante.

As atividades enzimáticas de CK e LDH aumentadas mesmo após 15 dias

de intervalo entre uma coleta e outra sugerem que o comportamento das duas

isoenzimas no tecido nervoso são diferentes do comportamento das isoenzimas no

soro, desaparecendo em um tempo muito maior após a lesão.

5.6 Glicemia e glicorraquia

As médias e desvios padrões das concentrações de glicose no LCR, no

soro e percentual de glicorraquia em relação a glicemia dos grupos SF, DX e DM

antes e após os tratamentos encontram-se descritas na Tabela 5.

O teor de glicose sérica no grupo DX apresentou um incremento (p<0,05)

após o tratamento em relação ao momento 0 (Figura 11), fato também observado no

grupo DM. Os grupos DM e DX apresentaram diferença quando comparados os

momentos T em relação ao grupo controle (p>0,05).

A glicorraquia no grupo tratado com DMSO apresentou diferença entre os

momentos 0 e momento T (p<0,05), fato não observado nos demais grupos (Figura

12). Apesar dos percentuais de glicose do LCR em relação à glicose sérica dos

grupos tratados com dexametasona e DMSO estarem aumentados (Tabela 5), não

foi registrada diferença significativa (p>0,05) entre os animais dos três grupos ou

quando comparados os grupos entre si (Figura 13).

TABELA 5 - Médias e desvios padrões das concentrações de glicose no LCR, no soro e

percentual de glicorraquia em relação a glicemia dos grupos SF (solução de NaCl

0,9% estéril), DX (dexametasona) e DM (DMSO) antes e após os tratamentos -

Brasília, 2007

Grupo SF Grupo DX Grupo DM

SF-0 SF-T DX-0 DX-T DM-0 DM-T

Glicemia

(mg/dl)

84,1±9,3 90,1±16,2

88,1±12,9 112,3±14,5

84,9±17,1 110,3±12,1

Glicorraquia

(mg/dl)

48,3±16,5 53,3±10,3 48,9±13,4 66,3±13,3 47,0±8,6 63,7±5,9

% glicose do

LCR/glicemia

56,6%±15,9 60,5%±15,8 55,5%±13,2 59%±9 56,5%±10,45 58,5%±10,4

Médias diferem entre si no momento 0 e tratamento (p<0,05). AB-Médias com letras diferentes

em uma mesma linha, após os tratamentos (T), diferem entre si (p<0,05)

FIGURA 11 - Médias e desvios padrões dos teores

séricos de glicose nos animais antes (0)

e após tratamentos (T) nos grupos SF,

DX e DM. * Médias diferem entre si no

momento 0 e tratamento (p<0,05). AB -

Médias com letras diferentes em uma

mesma linha, após os tratamentos (T),

diferem entre si (p<0,05)

FIGURA 12 - Médias e desvios padrões da glicorraquia

nos animais antes (0) e após tratamentos

(T) nos grupos SF, DX e DM. * Médias

diferem entre si no momento 0 e

tratamento (p<0,05)

FIGURA 13 - Médias e desvios padrões dos percentuais

de glicorraquia em relação à glicemia nos

animais antes (0) e após tratamentos (T)

nos grupos SF, DX e DM. Médias não

diferem entre si (p>0,05)

Em todos os grupos houve aumento da glicemia após os tratamentos.

Sendo o aumento significativo (p<0,05) apenas nos grupos DM e DX. Esse fato pode

se explicado pela concentração de cortisol endógeno lançados na corrente

sanguínea cerca de quatro horas antes, quando foi realizada a contenção dos

animais para administração das drogas. Segundo GUYTON (1997), o cortisol

aumenta todas as enzimas necessárias à conversão de aminoácidos à glicose nas

células hepáticas favorecendo rapidamente sua formação. Os glicocorticóides são

agentes hiperglicemiantes, obtendo esse efeito através de: inibição da captação e da

utilização periférica da glicose (antagonizando a ação da insulina); e promoção da

gliconeogênese a partir de aminoácidos e ácidos graxos livres (JERICÓ, 1999).

Apesar do grupo que recebeu dexametasona como tratamento ter

aumentado estatisticamente a glicemia, somente o grupo tratado com DMSO fez com

que esse açúcar conseguisse penetrar no tecido nervoso dos bovinos. Os animais do

grupo DM tiveram em média um aumento de 16,7mg/dl de glicose quando

comparados os momentos 0 e momentos T, confirmando a hipótese de TAKASA

(1999) onde DMSO aumenta a permeabilidade vascular.

Outra teoria que pode explicar o aumento da glicose no LCR dos bovinos

do grupo DM é de que a vasodilatação promovida pela liberação de histamina após a

aplicação de DMSO (BRAYTON, 1986) tenha favorecido a penetração de

componentes sanguíneos que normalmente não conseguiriam penetrar no tecido

nervoso.

A glicose não é uma substância lipossolúvel, sendo transportada

ativamente por uma proteína de membrana, a GLUT 1 (LATERRA & GOLDSTEIN,

1991), por esse fator, a glicose é uma das substâncias que podem denunciar o

aumento de permeabilidade da barreira do sangue para o tecido nervoso e

corroborar com a teoria de que o DMSO se liga fortemente a proteínas de

membranas causando sua desnaturação (KEANE et al., 1988). Ao se ligar com

algum composto as proteínas perdem a conformação (LEHNINGER et al., 1993) e

promovem a perda estrutural das membranas formadoras da barreira

hematoencefálica, permitindo assim a passagem de algumas substâncias pelo dano

causado a barreira.

ARAÚJO (2003) estudando valores normais de LCR em bezerros mestiços

na mesma faixa de idade do presente trabalho, encontrou uma média de 45,5 mg/dL

de glicose no LCR (valores entre 13mg/dL e 77mg/dL), com valores bem próximos

aos encontrados nos três grupos antes dos tratamentos.

6 CONCLUSÕES

O tratamento com dexametasona possivelmente se mostrou mais eficiente

na abertura da barreira hematoencefálica a proteínas, pois o grupo de animais

tratados com esse fármaco apresentou aumento nos valores de proteína total do

líquido cefalorraquidiano e no quociente de albumina.

O DMSO pode ter causado aumento da permeabilidade nos capilares

encefálicos, causando aumento do teor de hemácias e leucócitos no LCR após o

tratamento com essa dorga.

O aumento da atividade da lactatodesidrogenase e da creatinaquinase

liquórica nos animais de todos os grupos mostrou que a colheita de líquido

cefalorraquidiano no espaço atlanto-occipital pode ter causado traumatismo na dura-

máter ou no tecido encefálico durante o procedimento. O tempo de espera entre as

duas colheitas (15 dias) não foi suficiente para a normalização da atividade dessas

enzimas no LCR.

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Limerick, v.89, n.1, p.74-79, 1988.

ANEXOS

QUADRO 2 – Valores da contagem de hemácias e leucócitos no LCR dos animais do

Grupo SF (controle) nos momentos 0 e após o tratamento

MOMENTO 0 MOMENTO T

ANIMAL

Hemácias

(cel/µl)

Leucócitos

(cel/µl)

Hemácias

(cel/µl)

Leucócitos

(cel/µl)

1 5 1 6

3 27 2 8

1 10 1 7

1 6 3 10

1 10 1 7

2 4 9 15

1 2 1 3

QUADRO 3 – Valores da contagem de hemácias e leucócitos no LCR dos animais do

Grupo DX (tratados com dexametasona) nos momentos 0 e após o

tratamento

MOMENTO 0 MOMENTO T

ANIMAL

Hemácias

(cel/µl)

Leucócitos

(cel/µl)

Hemácias

(cel/µl)

Leucócitos

(cel/µl)

3 2 3 6

5 13 1 2

X10

3 15 6 13

X11

11 12 2 2

X12

2 4 1 3

X13

1 0 2 7

X14

3 3 2 8

QUADRO 4 – Valores da contagem de hemácias e leucócitos no LCR dos animais do

Grupo DM (tratados com DMSO) nos momentos 0 e após o tratamento

MOMENTO 0 MOMENTO T

ANIMAL

Hemácias

(cel/µl)

Leucócitos

(cel/µl)

Hemácias

(cel/µl)

Leucócitos

(cel/µl)

D15

2 17 1 6

D16

0 2 1 4

D17

2 11 6 13

D18

7 2 15 20

D19

1 3 8 5

D20

7 14 12 5

D21

7 8 8 13

QUADRO 5 – Níveis de proteína total liquórica e albumina sérica dos animais do Grupo SF (controle)

nos momentos 0 e após o tratamento

MOMENTO 0 MOMENTO T

ANIMAL

Proteína LCR

(mgdl)

Albumina soro

(g/dl)

Proteína LCR

(mg/dl)

Albumina soro

(g/dl)

80,2 3,21 18,1 3,16

10,5 3,85 19,0 3,60

19,3 3,74 21,6 3,35

27,1 4,07 24,3 3,75

57,6 2,54 22,5 3,77

18,1 3,81 22,0 3,64

35,6 3,55 27,6 3,63

QUADRO 6 – Níveis de proteína total liquórica e albumina sérica dos animais do Grupo DX (tratados

com dexametasona) nos momentos 0 e após o tratamento

MOMENTO 0 MOMENTO T

ANIMAL

Proteína LCR

(mgdl)

Albumina soro

(g/dl)

Proteína LCR

(mg/dl)

Albumina soro

(g/dl)

46,7 3,61 74,9 3,70

8,5 3,20 23,7 3,22

X10

26,8 3,29 59,0 3,64

X11

64,7 3,49 44,1 3,68

X12

27,8 4,59 32,4 4,43

X13

27,1 4,25 30,6 4,43

QUADRO 7 – Níveis de proteína total liquórica e albumina sérica dos animais do Grupo DM (tratados

com DMSO) nos momentos 0 e após o tratamento

MOMENTO 0 MOMENTO T

ANIMAL

Proteína LCR

(mgdl)

Albumina soro

(g/dl)

Proteína LCR

(mg/dl)

Albumina soro

(g/dl)

D15

24,5 3,33 23,2 3,2

D16

21,3 3,64 21,5 3,46

D17

18,2 3,44 34,9 4,52

D18

17,2 3,41 29,0 4,31

D19

46,6 2,82 19,1 2,54

D20

18,3 3,78 23,2 4,01

D21

13,7 3,24 15,4 5,56

QUADRO 8 – Níveis de sódio, potássio e cloro no LCR dos animais do Grupo SF

(controle) nos momentos 0 e após o tratamento

MOMENTO 0 MOMENTO T

ANIMAL

(mEq/L)

S1 135 2,7 116 136 2,8 116

S2 135 2,8 115 135 2,8 116

S3 137 2,8 118 135 2,8 115

S4 135 2,6 118 136 2,8 116

S5 136 2,8 115 136 2,9 116

S6 136 2,7 118 138 2,8 117

S7 135 2,6 117 136 2,9 117

QUADRO 9 – Níveis de sódio, potássio e cloro no LCR dos animais do Grupo DX

(tratados com dexametasona) nos momentos 0 e após o tratamento

MOMENTO 0 MOMENTO T

ANIMAL

(mEq/L)

X8 138 2,9 115 140 3 116

X9 140 2,9 116 140 2,8 118

X10 136 2,6 118 139 2,8 121

X11 136 2,7 120 141 2,9 117

X12 137 2,7 119 138 3 117

X13 138 2,6 116 138 2,8 116

X14 141 3 120 139 2,7 117

QUADRO 10 – Níveis de sódio, potássio e cloro no LCR dos animais do Grupo DM

(tratados com DMSO) nos momentos 0 e após o tratamento

MOMENTO 0 MOMENTO T

ANIMAL

(mEq/L)

D15 136 2,7 118 137 2,8 116

D16 135 2,7 115 137 2,9 118

D17 139 2,8 119 140 3 118

D18 138 2,8 119 138 2,9 118

D19 137 2,9 116 138 2,9 118

D20 137 2,7 118 138 2,8 117

D21 138 2,8 117 138 2,9 117

QUADRO 11 – Níveis de CK e LDH no LCR dos

animais do Grupo SF (controle) nos

momentos 0 e após o tratamento

MOMENTO 0 MOMENTO T

ANIMAL

LDH

(U/L)

LDH

(U/L)

S1 10 1 16 2

S2 7 1 17 2

S3 5 2 12 2

S4 8 1 12 2

S5 6 1 19 2

S6 9 1 13 1

S7 11 2 24 6

QUADRO 12 – Níveis de CK e LDH no LCR dos

animais do Grupo DX (tratados com

dexametasona) nos momentos 0 e T

MOMENTO 0 MOMENTO T

ANIMAL

LDH

(U/L)

LDH

(U/L)

X8 5 1 21 3

X9 12 1 42 4

X10 5 2 14 3

X11 7 1 24 4

X12 9 1 20 1

X13 6 1 15 2

X14 4 1 9 3

QUADRO 13 – Níveis de CK e LDH no LCR dos

animais do Grupo DM (tratados com

DMSO) nos momentos 0 e após o

tratamento

MOMENTO 0 MOMENTO T

ANIMAL

LDH

(U/L)

LDH

(U/L)

D15 19 1 18 2

D16 9 1 23 1

D17 4 1 33 3

D18 0 1 26 4

D19 10 1 27 3

D20 7 1 20 2

D21 4 1 16 2

QUADRO 14 – Glicemia e glicorraquia dos animais do Grupo SF (controle) nos momentos 0

e após o tratamento

MOMENTO 0 MOMENTO T

ANIMAL

Glicemia

(mg/dl)

Glicorraquia

(mg/dl)

Glicemia

(mg/dl)

Glicorraquia

(mg/dl)

S1 72 32 80 43

S2 81 37 91 46

S3 80 62 62 58

S4 90 45 87 49

S5 97 57 112 67

S6 93 74 102 66

S7 76 31 97 44

QUADRO 15 – Glicemia e glicorraquia dos animais do Grupo DX (tratados com

dexametasona) nos momentos 0 e após o tratamento

MOMENTO 0 MOMENTO T

ANIMAL

Glicemia

(mg/dl)

Glicorraquia

(mg/dl)

Glicemia

(mg/dl)

Glicorraquia

(mg/dl)

X8 100 60 117 61

X9 97 71 132 78

X10 70 43 99 54

X11 78 31 96 72

X12 93 40 130 88

X13 102 45 108 56

X14 77 52 104 55

QUADRO 16 – Glicemia e glicorraquia dos animais do Grupo DM (tratados com DMSO) nos

momentos 0 e após o tratamento

MOMENTO 0 MOMENTO T

ANIMAL

Glicemia

(mg/dl)

Glicorraquia

(mg/dl)

Glicemia

(mg/dl)

Glicorraquia

(mg/dl)

D15 95 45 116 67

D16 79 47 117 61

D17 107 62 123 66

D18 95 50 106 57

D19 53 40 119 67

D20 84 50 88 72

D21 81 35 103 56

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