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Todos os protocolos experimentais envolvendo animais foram procedidos de
acordo com os princípios éticos em pesquisa com animais de laboratório, adotados pelo
Colégio Brasileiro de Experimentação Animal e com o artigo 2000 Report of the AVMA
Panel on Euthanasia (AVMA, 2001).
I.1.3.2. Animais infectados
Um total de oito cães, sem raça definida, distribuídos em três grupos
experimentais distintos, foram experimentalmente inoculados com N. caninum pela via
oral durante a realização deste trabalho. Primeiramente, quatro cães, divididos em dois
grupos (G1: 2 cães, irmãos, machos, de 1 ano de idade – 1A e 1B; G2: 2 cães, irmãos,
machos, de 60 dias de idade – 2A e 2B) ingeriram infectados tecidos de bezerro. Estes
animais foram destinados para experimentos de fenotipagem da resposta imune celular
e cinética da produção de anticorpos durante 250 dias, com datas de coleta de soro
sanguíneo realizadas nos dias 0, 3, 5, 7, 10, 14, 20, 25, 30, 35, 42, 50, 58, 64, 75, 85,
92, 100, 110, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 225, 235 e 250 dpi. Ao final do
experimento, os cães foram eutanasiados com injeção letal de T-61, para a observação
de alterações post mortem. Apesar de o planejamento inicial contar com apenas os dois
grupos acima descritos, as amostras de PBMC cultivadas e armazenadas com o intuito
de se analisar a expressão de citocinas pelos cães do G1 e G2 sofreram com uma forte
degradação do mRNA. Para que estas informações fossem obtidas, utilizou-se um
grupo adicional de cães (G3: 4 cães, irmãos, machos, de 2 meses de idade – 3A, 3B,
3C e 3D), inoculados por meio da ingestão de ovos embrionados experimentalmente
infectados, com o objetivo de se observar a expressão de citocinas durante a fase
aguda da infecção (Período de observação de 90 dias). As fezes de todos os cães
infectados foram colhidas entre dois dias pré-infecção até 40 dpi para a identificação de
oocistos de N. caninum liberados, por meio de técnica de flutuação por sacarose
(GONDIM et al., 2002). O delineamento experimental está apresentado de forma
resumida na Figura 1.
I.1.3.3. Animais controles
O grupo controle foi constituído por um total de 17 cães, sendo 2 cães de 1 ano
de idade, irmãos, acompanhados durante o mesmo período experimental e por