( PDF ) Estudo da radiopacidade e avaliação morfológica da reparação óssea utilizando-se B-tricálcio fosfato e polímero de Mamona como implantes

UNIVERSIDADE DE PERNAMBUCO

FACULDADE DE ODONTOLOGIA DE PERNAMBUCO

ESTUDO DA RADIOPACIDADE E AVALIAÇÃO MORFOLÓGICA DA

REPARAÇÃO ÓSSEA UTILIZANDO-SE β-TRICÁLCIO FOSFATO

E POLÍMERO DE MAMONA COMO IMPLANTES

RIEDEL FROTA

Camaragibe

2006

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UNIVERSIDADE DE PERNAMBUCO

FACULDADE DE ODONTOLOGIA DE PERNAMBUCO

ESTUDO DA RADIOPACIDADE E AVALIAÇÃO MORFOLÓGICA DA

REPARAÇÃO ÓSSEA UTILIZANDO-SE β-TRICÁLCIO FOSFATO

E POLÍMERO DE MAMONA COMO IMPLANTES

RIEDEL FROTA

Tese apresentada ao Programa de Pós-Graduação em

Odontologia da Faculdade de Odontologia da

Universidade de Pernambuco, área de concentração

em Cirurgia e Traumatologia Buco-Maxilo-Facial para

obtenção do título de Doutor

Orientador: Profª. Drª. Márcia Maria Fonseca da Silveira

Co-orientador: Profª. Drª. Ana Paula Veras Sobral

Camaragibe

2006

DEDICATÓRIA

Aos meus pais, Ernesto e Itassucê, pela dedicação e por terem me

ensinado princípios valiosos.

Aos meus irmãos, Tassel, Thaúsi e Slayton, que como eu, abraçaram a

Odontologia como profissão e buscam a cada dia uma vida melhor a partir do

próprio trabalho.

Ao meu irmão Seyssel, não mais presente entre nós, por ter compartilhado

a infância comigo e ter mostrado como é possível enfrentar as dificuldades da vida

com serenidade.

À minha esposa Ana Flávia, grande incentivadora dos meus projetos, pelo

amor e pela paciência dedicada a mim durante todo o período do mestrado e

doutorado e por ter gerado, dentro de si, a coisa mais valiosa que hoje tenho –

meu filho Arthur.

Ao meu filho Arthur, que com apenas um sorriso, aliviava todo o meu

cansaço e me dava forças para continuar. Não foi fácil abrir mão do teu abraço

para concluir este trabalho, mas fiz isso por todos nós.

AGRADECIMENTO ESPECIAL

À Profª Márcia Silveira, por quem tenho grande estima. Sua amizade, seu

exemplo e conhecimento foram fundamentais na minha formação.

À Profª Ana Paula, sempre disposta a ajudar, por me incentivar e acreditar

em mim, nos momentos mais difíceis deste trabalho.

AGRADECIMENTOS

Á UPE, minha segunda casa. O meu muito obrigado.

Á UFRPE, que disponibilizou seus laboratórios de pesquisa e biotério para

a realização deste trabalho.

Á UFPE, que cedeu seu laboratório de pesquisa no Departamento de

Energia Nuclear (DEN) para o desenvolvimento deste trabalho.

Ao professor Emanuel Dias, que sempre travou uma luta incessante para

que a Cirurgia Buco-Maxilo-Facial atingisse um lugar de destaque na sociedade.

Ao professor Valdemiro Júnior, que possibilitou a realização dele junto à

UFRPE.

Ao professor Belmiro, que através do seu exemplo, sua segurança e

experiência, sempre soube mostrar qual o melhor caminho a seguir.

A Roberto Araújo e Camila, pela amizade e disponibilidade em ajudar

sempre que eu precisava.

Aos amigos Joaquim, Ana Cláudia, Luiz Carlos que acompanharam de

perto minha trajetória.

Ao primo Alexandre Nogueira, que me acompanha desde a graduação,

em Fortaleza, compartilhando comigo tanto os momentos difíceis quanto os de

conquistas.

Ao amigo, Álvaro, um irmão que conquistei fora da família.

Ao amigo, Jorge Orestes, sempre dando o apoio necessário para que eu

pudesse concluir esta trajetória.

Ao amigo Cristiano, que, sendo filho de pessoas tão queridas como

Margarida e Euclides, não poderia deixar de ser tão prestativo e dedicado.

Ao querido amigo Ronaldo, que me ensinou a primar sempre pela

humildade e companheirismo.

Aos amigos e professores da disciplina de Semiologia, Márcia, Ronaldo,

Vânia e Aquilina, que me compreenderam e me incentivaram durante a

realização do meu curso.

Aos funcionários do laboratório de Patologia FOP – UPE, Catarina e

Armando, pela grande contribuição no desenvolvimento deste trabalho.

Ao Dr. Ivan, que em alguns momentos se privou da companhia de sua

esposa Márcia, durante o processo de orientação, e que, com seu jeito calmo,

sempre me transmitia serenidade.

À amiga Maria Luiza, pessoa extremamente atenciosa e disponível a

ajudar, pela preciosa contribuição que deu a este trabalho.

À Professora Helen, que possibilitou parte do desenvolvimento desta

pesquisa junto ao DEN.

Morre lentamente, quem passa os dias queixando-se da sua má sorte

ou da chuva incessante.

Morre lentamente, quem abandona um projeto antes de iniciá-lo,

não pergunta sobre um assunto que desconhece ou não responde quando lhe

indagam sobre algo que sabe.

Evitemos a morte em doses suaves, recordando sempre que estar vivo exige

um esforço muito maior que o simples fato de respirar.

Somente a perseverança fará com que conquistemos um estágio esplêndido

de felicidade. (Quem morre? Texto de Pablo Neruda)

RESUMO

O presente trabalho foi desenvolvido com o intuito de avaliar a reparação óssea,

frente à utilização de implantes de β-tricálcio fosfato e polímero de mamona. O

estudo foi pareado (controle/experimento) correspondendo ao mesmo animal,

onde foram utilizados 105 ratos distribuídos aleatoriamente em 2 grupos G1 (β-

tricálcio fosfato) e G2 (polímero de mamona). Confeccionou-se defeito no osso

parietal em cada lado da sutura sagital mediana do animal, onde o lado esquerdo

correspondeu ao experimento e o lado direito ao controle. Foram realizadas

avaliação histológica e análise radiográfica nos períodos de 7, 15, 30, 60 e 90 dias

e os resultados submetidos à análise estatística. A partir dos resultados, pôde-se

concluir que a reparação óssea nos períodos avaliados apesar de não significante

do ponto de vista estatístico, apresentou melhores resultado no grupo G2, tanto no

controle quanto no experimento. Os materiais utilizados foram biocompatíveis, o β-

tricálcio fosfato sofreu degradação parcial comportando-se de forma bimodal,

enquanto o polímero de mamona não sofreu degradação. Os materiais utilizados

foram radiolúcidos sendo necessário a adição de radiopacificadores.

Descritores: regeneração óssea, materiais biocompatíveis, Ricinus

ABSTRACT

The present work was developed with the intention of to evaluate the bone

regeneration, front to the use of implantations of β-tricalcium phosphate and ricinus

polymer. The study it was paired (control/experiment) corresponding to the same

animal, where 105 distributed rats had been used random in 2 G1 groups (β-

tricalcium phosphate) and G2 (ricinus polymer). It was confectioned defect in the

parietal bone in each side of the sagittal medium suture of the animal, where the

left side corresponded to the experiment and the right side to the control. They had

been carried through histology evaluation and radiography analysis in the periods

of 7, 15, 30, 60 and 90 days and the results submitted to the analysis statistics.

From results, could be concluded that bone repair in the evaluated periods

although not significant of the point of statistical sight, presented better resulted in

the G2 group, as much in the control how much in the experiment. The materials

had been biocompatíveis, β-tricalcium phosphate it suffered degradation partial

behaving of bimodal form, the ricinus polymer did not suffer degradation and, still,

that the used materials are radiolucent.

Descriptors: bone regeneration, biocompatible materials, ricinus

LISTA DE FIGURAS

Figura 4.1 - Rato Wistar, macho, adulto, com 4 meses de idade 37

Figura 4.2 - Acondicionamento dos animais na gaiola 38

Figura 4.3 - Tricotomia e contenção do animal na mesa cirúrgica 41

Figura 4.4 - Incisão linear da pele e periósteo com bisturi 42

Figura 4.5 - Exposição do osso parietal após deslocamento do retalho 43

Figura 4.6 - Defeitos ósseos de 5mm de diâmetro, implante de β-tricálcio

fosfato granulado e controle 44

Figura 4.7 - Defeitos ósseos de 5mm de diâmetro, implante de polímero de

mamona floculado e controle 44

Figura 4.8 - Sutura interrompida simlples do periósteo com mononylon 5-0 45

Figura 4.9 - Sutura contínua festonada da pele com mononylon 5-0 45

Figura 4.10 - Medicor Budapeste Tipo SR-331 47

Figura 4.11 - Filme oclusal, etiqueta de chumbo, corpos de prova,

espécimes e penetrômetro de alumínio 48

Figura 4.12 - Radiografia que corresponde ao período de 60 dias do G1 52

Figura 4.13 - Radiografia que corresponde ao período de 90 dias do G2 53

Figura 5.1 - Aspecto histológico da parede do defeito ósseo (*), do material

implantado, (>), e vasos sangüíneos congestos. Grupo 1A -7dias (H.E. 10X)

76

Figura 5.2 - Atividade osteoblástica (<) na periferia da parede do defeito

ósseo. Grupo 1A - 7 dias (H.E. 40X) 76

Figura 5.3 – Neoformação óssea (*) entre a parede do defeito e o material 76

implantado. Grupo 1A – 15 dias (H.E. - 10X)

Figura 5.4 - Detalhe da área de neoformação óssea da Figura 5.5. Grupo

1A - 15 dias (H.E. – 40X) 76

Figura 5.5 - - Aspecto histopatológico da neoformação óssea observada no

grupo 1A – 30 dias (H.E. - 40X) 76

Figura 5.6 - Na região do asterisco (*) observa-se perda do aspecto reticular

do tecido conjuntivo envolvendo o material implantado sugestivo de

degradação do mesmo. Grupo 1A – 30 dias (H.E. - 40X) 76

Figura 5.7 - Neoformação de tecido ósseo entre o material implantado.

Grupo 1A – 60dias(H.E. - 40X) 77

Figura 5.8 – Atividade osteoblástica na área de neoformação óssea. Grupo

1A -60 dias (H.E. - 100X) 77

Figura 5.9 - Neoformação de tecido ósseo entre o material implantado.

Grupo 1A – 90dias(H.E. - 40X) 77

Figura 5.10 – Maior aumento da figura 5.9 (H.E. - 100X) 77

Figura 5.11 - Atividade osteoblástica (<) na periferia da parede do defeito

ósseo. Grupo 1B - 7 dias(H.E. - 100X) 77

Figura 5.12 - Neoformação de tecido ósseo na extremidade do defeito

ósseo, vasos sangüíneos congestos e tecido conjuntivo fibroso. Grupo 1B –

15 dias (H.E. - 40X)

77

Figura 5.13 - Área de neoformação óssea (*) no sentido da parede óssea ao

centro do defeito. Grupo 1B – 30 dias (H.E. - 40 X). 78

Figura 5.14 - Área de neoformação óssea no sentido da parede óssea ao 78

centro do defeito. Grupo 1B – 60 dias (H.E. – 40 X).

Figura 5.15 - Área de neoformação óssea no sentido da parede óssea ao

centro do defeito. Grupo 1B – 90 dias (H.E. – 100 X). 78

Figura 5.16 – Tecido conjuntivo fibroso na periferia do material implantado.

Grupo 2A - 7 dias(H.E. – 200 X). 78

Figura 5.17 - Área de neoformação óssea na periferia do material

implantado. Grupo 2A – 15 dias (H.E. – 40 X). 78

Figura 5.18 - Área de neoformação óssea na periferia do material

implantado. Grupo 2A – 15 dias (H.E. – 100 X). 78

Figura 5.19 Atividade osteoblastica e tecido conjuntivo fibroso. Grupo 2A –

30 dias (H.E. – 100 X). 79

Figura 5.20 - Área de neoformação óssea no sentido da parede óssea ao

centro do defeito. Grupo 2A – 30 dias (H.E. – 40 X). 79

Figura 5.21 - Área de neoformação óssea. Grupo 2A – 60 dias (H.E. – 100

X). 79

Figura 5.22 - Área de neoformação óssea no sentido da parede óssea ao

centro do defeito. Grupo 2A – 60 dias (H.E. – 40 X). 79

Figura 5.23 – Tecido conjuntivo fibroso e atividade osteoblástica na periferia

do material implantado. Grupo 2A – 60 dias (H.E. – 200 X).

79

Figura 5.24 - Atividade osteoblástica. Grupo 2A – 90 dias (H.E. – 200 X). 79

Figura 5.25 – Tecido conjuntivo. Grupo 2B – 7 dias (H.E. – 100X) 80

Figura 5.26 - Área de neoformação óssea no sentido da parede óssea ao

centro do defeito. Grupo 2B - 15 dias (H.E. - 100 X). 80

Figura 5.27 - Área de neoformação óssea e tecido conjuntivo fibroso. Grupo

2B – 30 dias (H.E. - 100 X). 80

Figura 5.28 - Área de neoformação óssea. Grupo 2B – 60 dias (H.E. - 100

X). 80

Figura 5.29 - Área de neoformação óssea. Grupo 2B – 90 dias (H.E. - 100

X). 80

LISTA DE TABELAS

Tabela 5.1 - Valores da radiopacidade verificada no filme 1B do grupo G1 56

Tabela 5.2 - Valores da radiopacidade verificada no filme 2B do grupo G1 57

Tabela 5.3 - Valores da radiopacidade verificada no filme 3B do grupo G1 58

Tabela 5.4 - Valores da radiopacidade verificada no filme 4B do grupo G1 59

Tabela 5.5 - Valores da radiopacidade verificada no filme 5B do grupo G1 60

Tabela 5.6 - Valores da radiopacidade verificada no filme 1P do grupo G2 61

Tabela 5.7 - Valores da radiopacidade verificada no filme 2P do grupo G2 62

Tabela 5.8 - Valores da radiopacidade verificada no filme 3P do grupo G2 63

Tabela 5.9 - Valores da radiopacidade verificada no filme 4P do grupo G2 64

Tabela 5.10 - Valores da radiopacidade verificada no filme 5P do grupo G2 65

Tabela 5.11 - Valores da radiopacidade verificada no filme C 66

Tabela 5.12 - Valores médios da radiopacidade em mmAl por períodos nos

grupos G1 e G2

67

LISTA DE GRÁFICOS

Gráfico 5.1 - Correspondente da D.O. do penetrômetro em mmAl no filme 1B 56

Gráfico 5.2 - Correspondente da D.O. do penetrômetro em mmAl no filme 2B 57

Gráfico 5.3 - Correspondente da D.O. do penetrômetro em mmAl no filme 3B 58

Gráfico 5.4 - Correspondente da D.O. do penetrômetro em mmAl no filme 4B 59

Gráfico 5.5 - Correspondente da D.O. do penetrômetro em mmAl no filme 5B 60

Gráfico 5.6 - Correspondente da D.O. do penetrômetro em mmAl no filme 1P 61

Gráfico 5.7 - Correspondente da D.O. do penetrômetro em mmAl no filme 2P 62

Gráfico 5.8 - Correspondente da D.O. do penetrômetro em mmAl no filme 3P 63

Gráfico 5.9 - Correspondente da D.O. do penetrômetro em mmAl no filme 4P 64

Gráfico 5.10 – Correspondente da D.O. do penetrômetro em mmAl no filme

5P

65

Gráfico 5.11 – Correspondente da D.O. do penetrômetro em mmAl no filme C 66

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

BMP: proteína morfogenética óssea

β-[Ca

3

(Po

4

)

2

]: β-tricálcio fosfato

DNA: ácido desoxirribonucléico

FOP: Faculdade de Odontologia de Pernambuco

G: grupo

HA: hidroxiapatita

HCL: ácido clorídrico

H.E.: Hematoxilina e Eosina

N: número

P: nível de significância

pH: potencial hidrogeniônico

R: rato

rh: recombinate

TCP: tricálcio fosfato

TGF: fator transformador de crescimento

UPE: Universidade de Pernambuco

UFRPE: Universidade Federal Rural de Pernambuco

UFPE: Universidade Federal de Pernambuco

DEN: Departamento de Energia Nuclear

DO : Densidade Óptica

LISTA DE SÍMBOLOS

% percentual

= igual a

≡ equivalente

: razão

α: letra grega “alfa”

β: letra grega “beta”

ºC: grau Celsius

cm: centímetros

g: grama

h: hora

Hz: hertz

Kg: quilograma

Kg/ml: quiilograma por mililitro

µ: mícron

µm: micrômetro

M: molar

mg: miligrama

mg/Kg: miligrama por quilo

min: minuto

ml: mililitro

mm: milímetro

: marca registrada

rpm: rotações por minuto

mmAl: milímetro de alumínio

SUMÁRIO

1 INTRODUÇÃO 20

2 REVISÃO DA LITERATURA 23

2.1 Reparação Óssea 23

2.2 β-tricálcio fosfato 26

2.3 Polímero de Mamona 30

2.4 Radiopacidade 34

3 OBJETIVOS 36

3.1 Objetivo Geral 36

3.2 Objetivos Específicos 36

4 MATERIAIS E MÉTODOS 37

4.1 Seleção da Amostra 37

4.2 Critério de exclusão da amostra 37

4.3 Acondicionamento dos Animais 38

4.4 Alimentação dos Animais 39

4.5 Grupos de Estudo 39

4.6 Desenho do Estudo 39

4.7 Identificação das Gaiolas e dos Animais 40

4.8 Anestesia 40

4.9 Técnica Cirúrgica 41

4.10 Cuidados Pós-Operatórios 45

4.11 Eutanásia dos Animais 46

4.12 Obtenção dos Espécimes 46

4.13 Técnica Radiográfica 47

4.14 Mensuração da Densidade Óptica 48

4.15 Avaliação Radiográfica 49

4.16 Processamento do Material para Análise Morfológica 53

4.17 Análise Morfológica 53

4.18 Análise Estatística 54

4.19 Considerações Éticas 54

5 RESULTADOS 55

5.1 Avaliação Radiográfica 55

5.2 Análise Morfológica 67

5.3 Análise Estatística 81

6 DISCUSSÃO 87

7 CONCLUSÃO 100

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 101

APÊNDICE 109

ANEXOS 114

20

1 INTRODUÇÃO

1

A reparação óssea é um processo fisiológico, que permite o

desenvolvimento local de um tecido com características idênticas a do tecido

primário da região que sofreu o trauma (FIGUEIREDO, TAKITA e

GOLDENBERG, 1997).

Diante de um defeito ósseo crítico, o organismo torna-se inábil para

regenerá-lo fisiologicamente e a menos que se lance mão de outros métodos

que contribuam para auxiliar sua capacidade ósteo-reparadora, este irá

promover uma cicatrização por tecido fibroso (VOLPON, XAVIER,

GONÇALVES, 1982; CALIXTO et al, 2001; BOLSON et al, 2005).

A reconstrução destas áreas de lesões amplas, seja em tecidos moles

ou duros, sempre foi um dos grandes desafios para a ciência, despertando

grande interesse por parte dos cirurgiões buco-maxilo-faciais, ortopedistas e

oncologistas (RIOS et al, 1996; GONÇALVES, CATANZARO GUIMARÃES,

GARCIA, 1998; CALIXTO et al, 2001; BOLSON et al, 2005).

Estudos sobre transplantes ósseos concluíram que o osso autógeno é o

melhor material para a enxertia. Sabe-se, entretanto, que este tipo de enxerto

apresenta algumas desvantagens tais como, o uso de uma área doadora

distante do leito cirúrgico receptor, desconforto no pós-operatório, cicatrizes,

1

Trabalho elaborado de acordo com a Associação Brasileira de Normas Técnicas (ABNT): NBR

6023:2002 Referências; NBR 6024:2003 Numeração; NBR 6027:2003 Sumário; NBR: 6028:2003

Resumos; NBR 6032:1989 Abreviações; NBR 10520: 2002 Informação e Documentação - Apresentações

de citações e NBR 14724:2002 informações e documentação - Trabalhos acadêmicos.

21

maior tempo cirúrgico e risco de infecção, além de ser um recurso de fonte

esgotável (ONEIDA, WESLEY, 2005; FRUENTEFRIA, BRITO, WEISMANN,

1998; GONÇALVES, CATANZARO GUIMARÃES, GARCIA, 1998).

Diante deste quadro, tem-se procurado criar ou extrair da natureza,

materiais que substituam o osso ou que associados a ele, ou a outros

materiais, promovam o incremento da reparação e neoformação óssea, sendo,

desta forma, biocompatíveis, osteocondutores e/ou osteoindutores. A busca

incessante para se conseguir uma melhoria nas propriedades físicas destes

materiais levou pesquisadores a adicionar radiopacificadores com o objetivo de

distigui-los radiograficamente dos tecidos circunjacentes.

A radiopacidade é a propriedade que os corpos apresentam de absorver

os raios X. Os corpos que não apresentam resistência à passagem desses

raios, radiograficamente, resultam imagens radiolúcidas e os que apresentam

resistência, exibem imagens radiopacas.(TAVANO, ESTEVAN, 1993). Quando

os materiais apresentam radiopacidade, ganham uma ferramenta muito

importante na avaliação do seu comportamento durante sua proservação,

podendo ser feitas comparações acerca do tempo de permanência no

organismo e seu comportamento biológico, promovendo ou não o incremento

na reparação óssea já que quando valorizadas quantitativamente, pela

densidade radiográfica, constituem informações relevantes, para viabilizarem

hipóteses diagnósticas mais confiáveis a serem relacionadas aos achados

microscópicos (BEYER-OLSEN, ORSTAVIK, 1981; TAVANO et al, 1999).

22

Neste estudo tem como finalidade, avaliar a reparação óssea em calotas

cranianas de ratos com a utilização dos implantes de β-tricálcio fosfato e

polímero de mamona.

23

2 REVISÃO DA LITERATURA

2.1 Reparação Óssea

O processo de reparação do tecido ósseo, após um trauma segue

estágios bem definidos e interdependentes que culminam na formação de osso

próprio da região avaliada. Inicialmente forma-se um coágulo que sofre

processo de reabsorção e organização com células mesenquimais

indiferenciadas, oriundas do periósteo, do endósteo e do leito cirúrgico

receptor, invadindo a área a ser reparada, acompanhadas pelos vasos

neoformados. À medida que as células indiferenciadas adentram a área em

questão, transformam-se em osteoblastos que iniciam a deposição da matriz

óssea. Este osso neoformado, posteriormente, sofre processo de remodelação,

adaptando a sua arquitetura às forças funcionais solicitadas pelo organismo

(CATANZARO GUIMARÃES, 1982).

O processo de ossificação pode ser classificado em intramembranoso e

endocondral. Apesar desta divisão acadêmica, o tecido ósseo proveniente dos

dois tipos de ossificação é idêntico do ponto de vista histológico e imunológico,

referindo-se apenas esta classificação ao processo de formação do osso.

Neste processo o osso forma-se através da diferenciação das células

mesenquimais indiferenciadas em osteoblastos. As alterações citológicas

provenientes do seguimento do processo produzem osteoblastos diferenciados

que começam a secretar colágeno e as proteoglicanas da matriz óssea ou

osteóide. Com esta deposição os osteoblastos ficam mais esparsados,

24

mantendo-se unidos, entretanto, através de seus prolongamentos

citoplamáticos. Com a calcificação da matriz os osteoblastos tornam-se

osteócitos, células que garantem a vitalidade óssea e são interligadas apesar

da calcificação da matriz. Concomitantemente, as células primitivas

circundantes situadas na membrana proliferam, dando origem a uma

população celular que pode agora ser considerada osteoprogenitora. Algumas

destas células que entram em contato com as espículas inicialmente formadas,

transformam-se em osteoblastos e acrescentam mais matriz óssea. Por este

método de crescimento, as espículas crescem e se unem a uma rede

trabecular que tem a forma geral do osso em desenvolvimento. Através de

atividade mitótica contínua, as células osteoprogenitoras mantêm seu número

e, portanto, constituem-se em fonte constante de osteoblastos para

crescimento das espículas ósseas. Este osso imaturo é caracterizado,

internamente, por espaços que se interligam, ocupados por tecido conjuntivo e

vasos sanguíneos (ROSS, ROWRELL, 1993).

Quando há uma perda óssea muito grande, há a necessidade da

utilização de enxerto para viabilizar a reparação na tentativa de levar o osso a

uma condição pré-existente. De modo geral a maioria dos enxertos ósseos

transplantados evolui para necrose no leito receptor e embora sejam

considerados necróticos, não há preocupação com fenômenos infecciosos e

imunológicos pois estes mantém inalterada a sua composição molecular e

estrutural. A manutenção da integridade da estrutura lamelar calcificada no

osso necrótico o capacita a receber um implante osseointegrado e estabelecer

estabilidade primária. Durante a primeira semana pós enxertia, a resposta

25

inflamatória desencadeada pelo enxerto é responsável pela neoformação

vascular com brotamentos vasculares invadindo os espaços do enxerto.

Durante a segunda semana forma-se tecido de granulação com diminuição da

resposta inflamatória e aumento da atividade osteoclástica que forma lacunas

ósseas vazias no interior do enxerto que serão povoadas por algumas células

viáveis do enxerto que são células osteogênicas oriundas dos envoltórios do

endósteo e do periósteo e por células do leito receptor que promoverão a

incorporação do enxerto ao osso. Após as duas primeiras semanas já é

possível observar as diferenças entre a incorporação dos enxertos cortical e

esponjoso principalmente quanto à revascularização, neoformação óssea,

mecanismos de reparo e propriedades mecânicas do enxerto (PINTO

MIYAGUSKO, PEREIRA, 2003).

Apesar do método mais corrente de revascularização ocorrer com

crescimento de vasos do leito receptor para o enxerto, nas primeiras horas

após o transplante pode-se observar anastomoses término-terminais dos vasos

do enxerto com os do leito receptor. Dando seguimento ao processo, células

osteoprogenitoras tanto do enxerto quanto do leito receptor diferenciam-se em

osteoblastos sendo desta forma responsáveis inicialmente pela deposição de

osteóide nas proximidades da trabéculas ósseas necróticas que são

posteriormente reabsorvidas por osteoclastos. Assim o enxerto ósseo

esponjoso é consolidado principalmente por um processo de neoformação

óssea aposicional. Por ser neoformado, a resistência inicial deste osso é

inicialmente menor passando por um aumento progessivo modulado por

estimulação adequada (PINTO, MIYAGUSKO, PEREIRA, 2003).

26

A fundamental diferença histológica entre o processo de incorporação do

enxerto cortical e esponjoso ocorre na lenta revascularização do primeiro,

diminuindo a possibilidade de anastomoses término-terminais. Em média o

enxerto cortical leva o dobro do período de tempo para este processo de

revascularização e este retardo é proveniente de sua própria estrutura

arquitetônica, já que a atividade osteoclástica precede a revascularização.

Como a atuação dos osteoclastos o enxerto começa a perder resistência

mecânica devido o aumento da porosidade que pode chegar a 50%. Outra

diferença entre os enxertos cortical e medular é que o primeiro tende a

permanecer com uma parte viável e outra necrótica, enquanto que, o

esponjoso tende a ser completamente substituido com o tempo (PINTO,

MIYAGUSKO, PEREIRA, 2003).

2.2 β-tricálcio fosfato

O β-tricálciofosfato β-[Ca

3

(Po

4

)

2

] é um fosfato tricálcio puro na fase beta

obtido por manipulação à baixa temperatura, promovendo, dessa forma, maior

estabilidade do produto, quando presente em meio aquoso. Este produto

apresenta como propriedades, a radiopacidade, a osteocondução e a

reabsorção progressiva, à medida que ocorre o processo de neoformação

óssea. Gruber (1999) utilizou o β-tricálcio fosfato como substituto ósseo após

ablação de tumores e fraturas em cirurgias de mão e ressaltou a importância

da utilização de substitutos ósseos reabsorvíveis, tendo em vista a diminuição

do tempo cirúrgico, além de evitar outra intervenção cirúrgica, sob anestesia

geral, com obtenção de uma cicatriz na região da crista ilíaca. Além do

27

exposto, também é interessante observar que se a degradação do material

ocorre e simultaneamente há neoformação óssea na área, para a região

maxilo-facial, a possibilidade da inserção de implantes para reabilitação oral

seria extremamente importante.

Lind et al (2001) realizaram um estudo pareado onde adaptaram

implantes de titânio, cobertos com β-tricálcio fosfato, com e sem associação do

fator transformador de crescimento β1 (TGF-β1), no côndilo femural de 10 cães

adultos. Após o período de 6 semanas de avaliação os autores constataram

que o grupo com a presença de TGF-β1 apresentou maior volume de

neoformação óssea, sugerindo que β-tricálcio fosfato associado ao TGF-β1

acelera a atividade reparadora na neoformação óssea próxima a implantes.

Fujita et al (2003) utilizaram blocos de β-tricálcio fosfato (β-TCP) e

Hidroxiapatita (HA) para avaliar as diferenças na osteogênese e na reabsorção

dos materiais implantados no osso parietal de ratos Wistar. As análises

histológicas e histomorfométricas realizadas nos períodos de 1, 2, 4, 8 e 24

semanas e os espécimes corados por hematoxilina-eosina e van Gieson. Na

análise dos resultados observaram que os blocos de HA apresentavam

resistência à carga compressiva 3 vezes maior que a do β-tricálcio fosfato, a

neoformação óssea foi mais efetiva com a HA, a degradação do β-tricálcio

fosfato em meio aquoso foi maior que a da HA, e os dois materiais

apresentavam praticamente o mesmo grau de osteocondutividade. Com base

no exposto os autores puderam concluir que é mais adequado o uso de HA que

de β-tricálcio fosfato no caso de enxertos por aposição.

28

Frota (2003), avaliando histologicamente o processo de regeneração

óssea frente à implantação de β-tricálcio fosfato na calota de 30 ratos nos

períodos de 7, 15 e 30 dias, em estudo pareado, pôde concluir que a reparação

óssea foi similar nos grupos controle e experimental, não sendo

estatisticamente significante para os períodos avaliados e que o implante

comportou-se como um material biocompatível.

Pang et al (2004), avaliaram a formação óssea associada à proteína

morfogenética do osso tipo 4 (BMP-4) na calvária de 140 ratos. Foi

confeccionado defeito de 8mm de diâmetro e de espessura total onde foram

testados esponja de colágeno reabsorvível, β-tricálcio fosfato, isolados ou

associados à BMP-4 na dosagem de 2.5 ou 5 microgramas. Os grupos foram

avaliados nos períodos de 2 e 8 semanas. Observaram que houve aumento na

formação óssea nas associações com BMP-4 sem, entretanto, parecer ser

dose dependente.

Shiratori et al (2005), avaliaram a neoformacão óssea a partir da

implantação de grânulos de β-tricálcio fosfato no fêmur de 65 ratos que foram

avaliados histológica e morfométricamente nos períodos de 3, 7, 10, 14 e 30

dias. Os resultados foram encorajadores quanto a utilização deste material já

que a quantidade de osso neoformado no grupo experimental foi maior que no

grupo controle demonstrando ser este material osteocondutor.

Kim et al (2005), com o intuito de promover o processo de osteoindução

e tendo em vista as limitações decorrentes da permanência das proteínas

29

morfogeneticas no sítio de implantação, procurou associar a proteína

morfotenética do osso recombinante tipo 2 (rhBMP-2) a substâncias

carreadoras quais fossem o β-tricálcio fosfato ou uma esponja de colágeno

reabsorvível. Para tal, utilizou quatro grupos, rhBMP-2/ ACS, rhBMP-2/ β-

tricálcio fosfato, ACS e β-tricálcio fosfato. Durante as avaliações histológica e

imunohistoquimica após implantação no subcutâneo dos ratos no período de 2

semanas observou-se formação de osso nos grupos onde existia associação

com a rhBMP-2. No período de 8 semanas houve um acréscimo da

neoformação somente no grupo rhBMP-2/β-tricálcio fosfato. Atribuíram isso, a

necessidade da provisão de um espaço para a formação e maturação óssea

durante os estágios mais avançados da reparação.

Handschel et al (2005) avaliaram a regeneração óssea e a interação

material-osso frente à implantação de β-tricálcio fosfato

na calvária de 21 ratos

após os períodos de 1, 45 e 180 dias em estudo pareado. A análise histológica

mostrou que o implante não apresentou significativa degradação, havendo

permanência do material após 180 dias sem neoformação óssea completa no

lado experimental mesmo em cavidades abaixo do limite crítico, em contraste

com a regeneração óssea no lado controle, promovendo o fechamento

completo do defeito para o mesmo período. No lado experimental evidenciou-

se fina camada de tecido conjuntivo fibroso sem a presença de osteoblastos

denotando a incapacidade de osteocondução atribuída a este implante.

Oneida e Wesley (2005), com o intuito de avaliar a regeneração óssea

da mandíbula utilizaram a proteína morfogenética do osso tipo 2 (BMP-2)

30

veiculada a dois carreadores, polímero de acido hialurônico (HY) e um

composto de colágeno, hidroxiapatita e β-tricálcio fosfato (colágeno/HA/β-

tricálcio fosfato). Para tal, criaram defeitos bilaterais de 5mm na mandíbula de

16 cães que foram avaliados histologicamente após 6 semanas. Com o

experimento os autores puderam observar que os espécimes que continham

BMP-2 exibiram neoformação óssea maior que os implantado isoladamente, e

que a associação BMP-2/HY, tendeu a ter neoformação e deposição de

osteóide um pouco maior que a observada na associação BMP-

2/colágeno/HA/β-tricálcio fosfato apesar dos resultados não serem

estatisticamente significantes. Sendo assim, concluíram que tanto

colágeno/HA/β-tricálcio fosfato quanto HY podem ser utilizados eficazmente

como carreadores para a BMP-2.

2.3 Polímero de Mamona

O polímero de mamona foi desenvolvido em 1984 pelo grupo de

pesquisa chefiado pelo Prof. Gilberto Chierici de Química Analítica e

Tecnologia de Polímeros da Escola de Engenharia de São Carlos-USP. À base

de moléculas vegetais extraídas da mamona e com estrutura molecular

semelhante a dos organismos vivos, a sua formação ocorre através da reação

química entre um pré-polímero e um poliol. A mamona possui um grande

potencial oleoquímico, que garante o fornecimento de polióis e pré-polímeros a

partir da produção de ácidos graxos em larga escala. Além disto, o óleo de

mamona, também conhecido como óleo de rícino, pode ser considerado como

31

um poliol natural por conter 03 radicais hidroxilas passíveis de serem usados

na síntese de polímeros (CARVALHO et al, 1997; LEONEL et al, 2004).

O polímero derivado do óleo de mamona possui uma fórmula molecular

que tem mostrado compatibilidade com os tecidos vivos, apresentando

aspectos favoráveis de processabilidade, flexibilidade de formulação,

versatilidade de temperatura de curva e controle de pico exotérmico na

transição líqüido-gel. Possui também excelentes propriedades estruturais, além

de não liberar vapores e radicais tóxicos quando implantados. A literatura

apresenta trabalhos em que o polímero de mamona foi implantado em defeitos

ósseos, de modo que bons relatos sobre o seu comportamento clínico e

biológico têm sido encontrados. Além dessas vantagens, é passível de

esterilização, biodegradável, pode sofrer incorporação ao carbonato de cálcio

com o intuito de favorecer a remodelação óssea e tem baixo custo (COSTA et

al, 1997; MASTRANTÔNIO, RAMALHO, 2003; LEONEL et al, 2004).

Ignácio et al (1997) avaliaram as propriedades de bicompatibilidade e

osteocondução do polímero de mamona confeccionando defeitos de 2cm de

comprimento da diáfise radial de coelhos com implantação posterior da

poliuretana vegetal. Os períodos de observação foram 2, 4, 8 e 16 semanas

sendo avaliados radiográfica e histológicamente. Os resultados demonstraram

como propriedades: biocompatibilidade e osteocondução. Sendo, desta forma,

um material satisfatório para ser utilizado como substituto ósseo.

32

Calixto et al (2001) testaram a biocompatibilidade do polímero de

mamona em alvéolo de ratos pós extração e a possíbilidade de alteração da

cronologia do reparo alveolar. Para isso, utilizaram 80 ratos que foram

submetidos à vivisecação nos períodos de 1, 2, 3 e 6 semanas. Observaram

que flocos de resina de forma irregular e tamanho variável, entre 700-1.200µm,

localizaram-se entre os terços alveolares médio e cervical, inicialmente

circundados por tecido de granulação e posteriormente por quantidade

progressivamente maior de tecido ósseo. A interface implante osso foi

visualizada em algumas áreas, entretanto, o que predominava era presença de

tecido conjuntivo interposto. Os autores não observaram presença de

inflamação, entretanto, a análise morfométrica revelou um retardo do reparo no

grupo experimental entre 13% a 20% quando comparado ao controle. Os

autores, entretanto, concluíram que o polímero de mamona é um material

biocompatível e capaz de osseointegração direta.

Leonel et al (2003) avaliaram a importância da porosidade do polímero

de mamona na neoformação óssea através de avaliação histológica,

mostrando que os poros encontravam-se preenchidos por tecido conjuntivo,

principalmente, por fibras colágenas neoformadas, fibroblastos, macrófagos e

por capilares sangüíneos em formação. A invasão dos poros do polímero por

tecido conjuntivo promovia ligação deste implante com o tecido ósseo do leito

receptor. Com o passar do tempo observou-se, inclusive, tecido do tipo

osteóide preenchendo os poros remanescentes. Os autores ressaltaram como

característica importante a arquitetura interna porosa do polímero que favorece

o processo de osteocondução pela penetração de capilares em seus poros.

33

Mastrantônio e Ramalho (2003) no intuito de avaliar histologicamente o

comportamento do polímero de mamona com e sem carbonato de cálcio,

implantaram discos no tecido subcutâneo de camundongos e avaliaram a

resposta tecidual nos períodos de 7, 20, 30 e 60 dias. Os autores concluíram

que os dois implantes mostraram-se biocompatíveis.

Leonel et al (2004) avaliaram a ação do polímero de mamona durante a

neoformação óssea, utilizaram 45 ratos wistar criando defeitos ósseos de 2mm

no arco zigomático e preenchendo-os com polímero de mamona em bloco. A

avaliação histológica foi realizada nos períodos de 15, 30, 60, 90 e 120 dias. O

polímero de mamona utilizado neste estudo mostrou ser implante adequado,

uma vez que foi substituído por osso neoformado na medida em que foi sendo

reabsorvido.

Castelo Branco et al (comunicação pessoal) compararam

histologicamente a regeneração óssea frente à implantação da matriz óssea

desmineralizada de origem humana e do polímero de mamona. Os autores

utilizaram 24 coelhos onde foram preparadas duas cavidades cirúrgicas na

calota craniana. Os animais foram divididos em dois grupos I (matriz óssea

desmineralizada de origem humana) e grupo II (polímero de mamona). O

controle foi preenchido apenas com o sangue do animal. A análise histológica

foi realizada nos períodos pós-operatórios de 4, 7 e 15 semanas e revelou que

tanto o grupo controle quanto os grupos I e II apresentaram aumento na

neoformação óssea ao longo do tempo, sendo que esta reparação se deu mais

34

rapidamente no grupo controle, mesmo mostrando diminuição importante na

espessura. Desta forma puderam concluir que os implantes eram

biocompatíveis, sendo o polímero reabsorvido mais tardiamente e

apresentando resultados superiores aos encontrados com a utilização da

matriz óssea desmineralizada de origem humana.

2.4 Radiopacidade

A radiopacidade, propriedade importante e desejável para os materiais

intrabucais e meios de contraste é avaliada através da densidade óptica (D.O.)

e possibilita sua identificação no exame radiográfico. Na cirurgia e

traumatologia buco-maxilo-facial, a utilização de contrastes tem sido muito

utilizada para avaliação e planejamento cirúrgico de lesões vasculares e

císticas como hemangiomas e cistos nasolabiais. Esta característica,

entretanto não é um privilégio da nossa especialidade, sendo utilizada em

materiais das diversas áreas como dentística, endodontia e prótese (BEYER-

OLSEN, ORSTAVIK, 1981; SILVEIRA et al, 2000).

Silva et al (1997) avaliaram radiograficamente o comportamento

biológico do tecido ósseo frente à implantação do polímero de mamona em

rádio de coelhos nos períodos de 15, 30, 90 e 120 dias. Em seus resultados

encontraram uma intensificação da radiopacidade no controle em relação ao

polímero de mamona que manteve uma constância da radiopacidade. Pela

análise qualitativa da radiopacidade, puderam concluir que as radiografias

convencionais padronizadas e com qualidade eram excelentes meios para

35

investigação não invasiva do comportamento biológico do tecido ósseo.

Relataram ainda que critérios pré-estabelecidos sistematizam e conferem

reprodutibilidade aos estudos radiográficos do processo de reparo ósseo.

Tavano et al (1999) com o intuito de avaliar densidade radiográfica

digital do tecido ósseo associado ou não a implante de polímero de mamona,

confeccionou defeitos de 0,5cm no rádio de 12 coelhos implantando

posteriormente o polímero no lado esquerdo. Os animais foram avaliados nos

períodos de 15, 30, 90 e 120 dias onde se observou a densidade radiográfica

das áreas teste e controle nos diferentes períodos demonstrando a evolução do

processo de reparo e também que os resultados do polímero de mamona nos

períodos experimentais foram constantes, quanto a sua radiopacidade.

Bolson et al (2005) avaliaram a reparação óssea do ponto de vista

clínico, radiográfico, macroscópico e histológico do polímero de mamona em 20

animais (coturnix japonica) separados aleatoriamente em grupos de 5 cada.

Radiografias foram realizadas imediatamente após a cirurgia e nos períodos de

15, 30, 60 e 90 dias onde observaram aumento da densidade radiográfica local

promovida pelo material. A análise macoscópica em cortes longitudinal e

transversal revelou que a poliuretana vegetal não foi absorvida em nenhum do

grupos, sendo observada, entretanto, diminuição da resistência do implante. A

análise dos dados coletados possibilitou concluir que o implante de poliuretana

vegetal apresenta características de biocompatibilidade e osteointegração.

36

3 OBJETIVOS

3.1 Objetivo Geral

Este trabalho teve como objetivo avaliar comparativamente a reparação

de defeitos ósseos confeccionados na calota craniana de ratos Wistar,

utilizando como implantes o β-tricálcio fosfato (β-TCP)

2

e o polímero de

mamona

3

nos períodos de 7, 15, 30, 60 e 90 dias através da radiopacidade e

da análise morfológica.

3.2 Objetivos Específicos

3.2.1 Avaliar o grau de radiopacidade do tecido ósseo da calota craniana, do

osso neoformado, do β-tricálciofosfato e do polímero de mamona nos

intervalos propostos.

3.2.2 Avaliar a biocompatibilidade e a neoformação óssea.

2

Cerasorb®

3

Poliquil Araraquara®

37

4 MATERIAIS E MÉTODOS

4.1 Seleção da amostra

No presente trabalho, foram utilizados 105 ratos machos albinos (Rattus

norvegicus da família Muridae, da variedade Wistar) adultos jovens, com 4

meses de idade e peso corporal variando entre 300 e 400 gramas (Figura 4.1).

A utilização destes animais no presente experimento foi definida devido à

ausência de variações hormonais e maturação do tecido ósseo nesta etapa do

desenvolvimento (LUCA et al, 1996).

Figura 4.1 - Rato Wistar, macho, adulto, com 4 meses de idade

4.2 Critérios de exclusão da amostra

Do ponto de vista clínico, a exclusão da amostra ocorreria nos animais

que apresentassem infecção, exposição do implante e deiscência da sutura,

bem como, os que apresentassem alguma patologia no transcorrer dos

38

períodos de experimentação. Do ponto de vista histológico, seriam excluídos os

espécimes que apresentarem perda do material testado durante o

processamento da amostra e os que apresentassem interposição de tecido

mole (tecido intracraniano) na área avaliada.

4.3 Acondicionamento dos animais

Os animais foram acondicionados em gaiolas plásticas com altura

interna de 18cm atapetada com maravalha de pinus, sendo acondicionados 5

animais por gaiola (Figura 4.2). Os animais foram mantidos no biotério da

Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) na temperatura de 23ºC

± 2ºC, ciclo claro-escuro de 12hs. As trocas de cama e limpeza de gaiolas,

bebedouros e comedouros foram efetuadas três vezes por semana, segundo o

protocolo de limpeza e desinfecção do biotério da UFRPE.

Figura 4.2 - Acondicionamento dos animais na gaiola

39

4.4 Alimentação dos animais

Os animais receberam água e ração sólida peletizada

4

, com alto teor de

proteína (20 a 27%) ad libitum.

4.5 Grupos de estudo

Os 105 ratos que foram distribuídos aleatoriamente em 2 grupos G1 (β-

TCP) e G2 (Polímero de mamona) com 10 animais cada, nos períodos de 7,

15, 30, 60 e 90 dias, com seus respectivos subgrupos A (experimento) e B

(controle). Para cada período analisado, 01 animal adicionalmente foi avaliado

radiograficamente sem que fosse submetido à trepanação da calota, com o

intuito de observar a radiopacidade e características do trabeculado ósseo da

calota craniana. Este animal correspondeu ao parâmetro radiográfico para os

períodos avaliados.

4.6 Desenho do estudo

O estudo foi do tipo pareado com a utilização dos lados direito e

esquerdo como controle e experimento, respectivamente.

4

Labina

®

- Purina Nutrimentos

40

4.7 Identificação das gaiolas e dos animais

Cada gaiola foi identificada individualmente, bem como, cada animal

onde constaram: data de nascimento, vermifugação, cirurgia, sacrifício, peso

do animal, nome do experimento e responsáveis pela pesquisa, sendo esta

identificação executada com tinta nankim na cauda do rato, de forma circular,

onde cada anel pintado correspondeu a um número específico. Todos os dados

relacionados ao experimento foram anotados em fichas padronizadas para

coleta de dados (APÊNDICE A).

4.8 Anestesia

Para a administração de drogas e procedimentos cirúrgicos, cada rato foi

pesado no dia anterior no intuito de minimizar o estresse no momento da

cirurgia. Para a anestesia geral destes animais, foi utilizado 0,3ml de Cloridrato

de Quetamina (60-90mg/kg)

5

e Cloridrato de Xilazina (4-8mg/kg)

6

diluídos de

1:1 e aplicados no músculo da coxa do animal, obtendo-se um período de

aproximadamente duas horas de anestesia. Imediatamente após a anestesia, a

tricotomia da região mediana da calota craniana dos ratos foi realizada desde a

porção fronto-nasal até a região occipital. Os animais foram imobilizados em

uma mesa cirúrgica específica (Steriotax) pela região temporal através de pinos

de contensão lateral, bem como pelos incisivos superiores e inferiores em local

específico (Figura 4.3) (FROTA, 2003).

5

Francotar

®

- Virbac

6

Virbaxyl

®

- Virbac

41

Figura 4.3 - Tricotomia e contenção do animal na mesa cirúrgica

4.9 Técnica Cirúrgica

Inicialmente, foi efetuada anti-sepsia da região da calota craniana, com

Polivinilpirrolidona-iodo

7

a 10% na região a ser incisada. Em seguida, foram

feitas aposição do campo cirúrgico e infiltração anestésica local de 0,1ml de

Cloridrato de Lidocaína com Adrenalina

8

, na concentração de 1:200.000. Este

procedimento foi adotado, com o intuito de diminuir o sangramento no trans-

operatório e promover um maior conforto no pós-operatório imediato. Uma

incisão linear foi efetuada através da pele e periósteo, indo da região fronto-

nasal a protuberância occipital externa, com o uso de lâmina de bisturi

9

número

15, montada em cabo de bisturi

10

Bard-Parker número 3 (Figura 4.4).

7

Povidine Degermante

®

- Ceras Johnson

8

Xylocaína

®

com Epinefrina 1:200.000 - AstraZeneca

9

Feather Safety Razor CO., LTD. Medical Division

10

Bard-Parker

TM

42

Com o destaca-periósteo

11

de Molt, promoveu-se descolamento do

periósteo, com mínimo traumatismo para que não houvesse retardo no reparo

ósseo. O afastamento do retalho foi efetuado com descoladores delicados

(Figura 4.5) (FROTA, 2003).

Figura 4.4 - Incisão linear da pele e periósteo com bisturi

Após a exposição dos tecidos, a ostectomia foi obtida com broca

trefina

12

5mm de diâmetro montada em uma peça de mão reta para micro

motor elétrico Dentec

13

- modelo 405N, acionado a uma velocidade de

25.000rpm e com irrigação externa com soro fisiológico

14

0,9%, para evitar

superaquecimento e necrose óssea subseqüente (PEREIRA, PERRI de

CARVALHO, OKAMOTO, 1996; FROTA, 2003).

11

Quinelato Schobell Industrial Ltda

12

Sistema de implantes PPMM

13

Dentec Indústria e Comércio Ltda

14

Soro Fisiológico

®

- Darrow

43

Figura 4.5 - Exposição do osso parietal após deslocamento do retalho

O defeito de 5mm utilizado, foi considerado crítico para a neoformação

óssea espontânea na espécie e área utilizadas neste experimento segundo

Bosh, Melsen e Vargervik (1998) e Bohning, Davenport e Jeansonne (1999).

A ostectomia criou um defeito ósseo circular de 5mm de diâmetro e de

espessura total (1mm), nos lados direito e esquerdo, localizados na região

parietal, tendo-se o cuidado de não comprometer a dura-máter. O defeito ósseo

criado no lado esquerdo teve localização mais cefálica, enquanto o defeito

criado no lado direito teve uma localização mais caudal (FROTA, 2003).

Após a confecção dos defeitos ósseos, estes foram preenchidos com

coágulo, β-tricálcio fosfato ou polímero de mamona utilizando-se a porção

convexa da cureta de Molt

15

para ajudar na adaptação dos enxertos de modo

que o defeito fosse preenchido (Figuras 4.6 e 4.7).

15

Quinelato Schobell Industrial Ltda

44

Figura 4.6 - Defeitos ósseos de 5mm de diâmetro, implante de β-tricálcio

fosfato granulado e controle

Figura 4.7 - Defeitos ósseos de 5mm de diâmetro, implante

de polímero de mamona floculado e controle

Após estes tempos cirúrgicos, efetuou-se sutura interrompida para o

periósteo e sutura contínua festonada para a pele (Figuras 4.8 e 4.9). O fio de

sutura utilizado foi de poliamida

16

(mononylon 5-0) por ser um fio que

reconhecidamente provoca pouca reação inflamatória (MAGALHÃES, 1993).

16

Ethicon

®

- Johnson & Johnson

β

-

tricálcio fosfato 500

-

1000

µ

m

Defeito ósseo

polímero de mamona floculado

Defeito ósseo

45

Figura 4.8 - Sutura interrompida simples do periósteo com mononylon 5-0

Figura 4.9 - Sutura contínua festonada da pele com mononylon 5-0

4.10 Cuidados pós-operatórios

Os animais foram mantidos em ambiente sem ar condicionado, com o

intuito de manter o ambiente aquecido no período pós-anestésico, evitando

assim, hipotermia corporal, depressão cardio respiratória e óbito (HARKNESS,

WAGNER, 1993). Os cuidados pós-operatórios foram no sentido de promover a

mínima manipulação dos animais (LUCA et al, 1996). Foi efetuada a limpeza

46

da ferida cirúrgica, para que os animais que despertassem primeiro da

anestesia não ficassem estimulados a praticar o canibalismo, devido ao odor

exalado pelo sangue presente na ferida cirúrgica. A dieta foi mantida

(FIGUEIREDO, TAKITA, GOLDENBERG, 1997).

4.11 Eutanásia dos animais

Os ratos dos grupos G1 e G2 foram eutanasiados nos períodos de 7, 15,

30, 60 e 90 dias do pós-operatório com uma dose letal (1ml) de Quetamina e

Xilazina na proporção de 1:1.

4.12 Obtenção dos espécimes

Para possibilitar as análises, foi realizada uma incisão trapezoidal de

espessura total abrangendo os tecidos moles da região parietal da calota

craniana. As peças estudadas foram obtidas mediante ressecção parcial da

calota craniana, efetuada com broca carbide

17

número 702, montadas em peça

de mão reta e acionadas por micromotor elétrico Dentec - modelo 405N, a uma

velocidade de 25.000 rpm, com margem de segurança, com o objetivo de não

haver um superaquecimento do espécime, com conseqüente necrose e

alteração dos resultados (FROTA, 2003).

17

Implantes - Biomateriais Dentoflex Instrumentos Cirúrgicos

47

4.13 Técnica radiográfica

A técnica radiográfica utilizada foi a do feixe central de raios X incidindo

no sentido crânio-caudal com uma distância foco-filme de 40cm. O aparelho

utilizado foi o Medicor Budapeste Tipo SR-331 com 65kVp e 10mA, filtragem

total equivalente a 2,5mm de alumínio, determinada pela norma P.H. 2.9 de

1964, da American Standart Association e o filme utilizado foi o oclusal (Kodak

Insight) (Figura 4.10). Um dos espécimes do controle radiográfico foi utilizado

como piloto para o estabelecimento do posicionamento e tempo de exposição

que foi de 0,4 segundos.

Figura 4.10 - Tomada radiográfica com Medicor Budapeste Tipo SR-331

Cada filme foi identificado com uma etiqueta de chumbo que

correspondia ao período e ao implante utilizado. No filme ficaram dispostos

cinco corpos de prova, cinco calotas e o penetrômetro de alumínio de forma

48

padronizada. Com isso, minimizava-se a possibilidade de alterações durante a

tomada radiográfica. (Figura 4.11).

Figura 4.11 - Filme oclusal, etiqueta de chumbo, corpos

de prova, espécimes e penetrômetro de alumínio posicionados

4.14 Mensuração da densidade óptica

A mensuração das densidades ópticas das radiografias foi efetuada

através de um fotodensitômetro (Densitometer model 07-443, Nuclear

Associates - Victoreen) da marca Macbeth TD 931, calibrado com base nas

especificações do fabricante. As leituras no fotodensitômetro foram executadas

em cinco pontos aleatórios nos corpos de prova e em três pontos aleatórios

para cada região estudada; tanto controle quanto experimento. Os dados foram

anotados em fichas específicas. Os corpos de prova foram confeccionados em

latão com 10mm de diâmetro por 1mm de altura com intuito de conter os

implantes radiografados e posteriormente avaliados através da densidade

óptica.

49

4.15 Avaliação radiográfica

Inicialmente, realizou-se um estudo piloto utilizando-se a norma 57 da

American Dental Association (1983), referente à propriedade física de

radiopacidade, a fim de conhecer e estabelecer a influência de fatores como

posicionamento, tempo de exposição, corrente elétrica e processamento do

filme na avaliação.

Para avaliar a densidade óptica dos implantes, foram confeccionados

cinco corpos de prova que consistiram de uma matriz circular de latão com

10mm diâmetro interno por 1mm de altura, segundo requisitos estabelecidos

na norma 57 da American Dental Association (1983). Estas matrizes foram

preenchidas com β-tricálcio fosfato e polímero de mamona onde uma placa de

vidro foi utilizada para auxiliar na confecção dos corpos de prova servindo

como base para colocação da matriz. A placa foi disposta sobre uma bancada

fixa, na qual foi colocada a matriz de latão e adaptados os materiais. Para

evitar a mobilização dos materiais nas matrizes e facilitar o deslocamento

desses de um filme para outro, o conjunto foi mantido com uma fita adesiva.

Com o intuito de transformar os dados da densidade óptica em uma

medida mundialmente padronizada, utilizamos o penetrômetro; um dispositivo

de alumínio constituído de 10 gradações que apresentam espessuras de 1 a

10mm, onde foi possível traçar um gráfico que relaciona a D.O. com a

espessura em mm de alumínio. A partir deste gráfico, foi possível obter o valor

50

médio da densidade óptica de cada material e das áreas analisadas e a

espessura de alumínio correspondente.

Para a irradiação foi formado um conjunto com cinco corpos de prova

com o mesmo tipo de material, cinco calotas que correspondiam a um período

específico e o penetrômetro de alumínio sendo posicionados em cada filme

oclusal a ser avaliado. O conjunto filme, corpos de prova, espécimes e

penetrômetro foi posicionado sobre um suporte de isopor, colocado em uma

mesa fixa, na qual foi mantida distância foco-filme de 40cm. O isopor foi

utilizado para distanciar as amostras da mesa, evitando que a irradiação

retroespalhada atingisse o filme radiográfico e, portanto afetasse a

radiopacidade. O tempo de exposição foi de 0,4s.

Após a adaptação dos corpos de prova, espécimes e penetrômetro

sobre o filme oclusal Insight fabricado pela Eastman Kodak, (Rochester) com

sensibilidade E/F - (24 a 96 R* Röentgen recíproco), lote 4107352, validade,

dezembro de 2007, foi utilizada como fonte produtora de raios X, um aparelho

da marca Medicor Budapeste Tipo SR-331 com 65kVp e 10mA, filtragem total

equivalente a 2,5mm de alumínio, determinada pela norma P.H. 2.9 de 1964,

da American Standart Association com tempo de exposição de 0,4s. A exatidão

e precisão do aparelho de raios X foi previamente avaliada pelo Laboratório de

Metrologia de Radiações Ionizantes do Departamento de Energia Nuclear -

DEN, da Universidade Federal de Pernambuco-UFPE, garantindo desta forma

a reprodutibilidade do estudo que deverá não ser inferior a 3%.

51

As soluções utilizadas para o processamento foram o revelador e fixador

produzidos pela Kodak Brasileira Comércio e Indústria Ltda. As substâncias

foram diluídas 24 horas antes do início do experimento de acordo com as

especificações do fabricante e colocadas em tanques, um para revelador e

outro para fixador, com capacidades para 10 litros de solução, vedada ao ar

por uma tampa com a finalidade de evitar a oxidação da solução.

De acordo com as recomendações da norma P.H. 2.9 de 1964, da

American Standart Association o processamento foi realizado no espaço de 2 a

24 horas após a exposição dos filmes, pois as ionizações causadas nos

halogenetos de prata da emulsão radiográfica já se estabilizaram, sendo os

filmes processados no espaço de 3 horas. O método utilizado foi

temperatura/tempo, (24ºC) com 3 minutos de revelação, lavagem intermediária,

10 minutos de fixação e 20 minutos para lavagem final.

As medidas da densidade óptica do β-tricácio fosfato, do polímero de

mamona e do controle foram coletadas a partir do fotodensitômetro no

Laboratório de Metrologia, do Departamento de Energia Nuclear (DEN) da

Universidade Federal de Pernambuco (UFPE). A mensuração da densidade

óptica foi executada através da leitura direta da radiografia pelo

fotodensitômetro, que mediu a quantidade de luz que passava através do filme

por um orifício de 1 mm de diâmetro.

Para que o controle radiográfico fosse o mais rigoroso possível e não

houvesse possibilidade de troca na seqüência radiográfica, foram utilizados

52

pequenos números de chumbo fixados por cera utilidade número 7 no lado

direito do filme, tomando-se como referência o picote. Estes pequenos

números traduziam informações a respeito do tipo de material utilizado e

período avaliado.

Cada radiografia correspondeu a um período e a um tipo de implante

específico (Figura 4.12 e 4.13). As mensurações foram feitas de forma aleatória

em 5 pontos para cada corpo de prova, 3 pontos para os espécimes tanto do

lado controle quanto experimental e 1 ponto para a escala de alumínio. Foram

obtidas médias das leituras das densidades ópticas, anotadas em ficha

específica e posteriormente convertidas em mm/Al através de equação física

específica.

Figura 4.12 - Radiografia que corresponde ao período de 60 dias do G1

53

Figura 4.13 - Radiografia que corresponde ao período de 90 dias do G2

4.16 Processamento do material para análise morfológica

Os espécimes foram fixados em formol tamponado a 10%, à

temperatura ambiente e posteriormente descalcificados em solução de ácido

nítrico a 0,5% por 15 dias. Após a descalcificação, os espécimes foram lavados

em água corrente, por 24 horas, desidratados em cadeia crescente de álcool

(70 a 100%), diafanizados em banhos de xilol e incluídos em parafina. Os

espécimes foram seccionados em cortes semi-seriados de 4µm no maior

diâmetro do defeito e corados por Hematoxilina e Eosina (H.E.).

4.17 Análise morfológica

A análise histológica foi realizada no Laboratório de Patologia da

Faculdade de Odontologia de Pernambuco (FOP-UPE), por um examinador.

Foram utilizados como parâmetros histológicos, infiltrado inflamatório, reação

de corpo estranho, tecido conjuntivo fibroso, atividade osteoblástica e

54

neoformação óssea (formação de osteóide, tecido ósseo imaturo e maturo).

Para a avaliação dos resultados histológicos nos diferentes parâmetros foi

utilizado, (1) para presente e (0) para ausente. Quando presente, o infiltrado

inflamatório foi classificado como leve (1), leve a moderado (2), moderado (3),

moderado a intenso (4) e intenso (5). Os dados foram registrados em tabelas

confeccionadas para cada período de análise (APÊNDICE B).

4.18 Análise estatística

Como forma de análise obteve-se freqüências absolutas e percentuais

por tempo de avaliação e foram utilizados os testes de Mc-Nemar para

comparação entre grupos experimentais e controle de cada material e o teste

Exato de Fisher para comparação entre os grupos experimentais. O nível de

significância ou margem de erro na aplicação dos testes foi de 5.0%. Os dados

foram digitados na planilha Excel e os dados processados no programa

estatístico SPSS (Statistical Package for the Social Sciences).

4.19 Considerações éticas

O estudo foi desenvolvido segundo as normativas contidas no Colégio

Brasileiro de Experimentação Animal e após aprovação pelo Comitê de Ética

da Universidade de Pernambuco sob número 141/04 (Anexo A).

55

5 RESULTADOS

5.1 Avaliação Radiográfica

A nomenclatura utilizada para a coleta de dados e análise radiográfica

foi para o filme 1B (β-tricálcio fosfato com 7dias), 2B (β-tricálcio fosfato com 15

dias), 3B (β-tricálcio fosfato com 30 dias), 4B (β-tricálcio fosfato com 60 dias),

5B (β-tricálcio fosfato com 90 dias), 1P (polímero de mamona com 7 dias), 2P

(polímero de mamona com 15 dias), 3P (polímero de mamona com 30 dias), 4P

(polímero de mamona com 60 dias), 5P (polímero de mamona com 90 dias) e

C (controle radiográfico). Foi utilizado também G1CP (corpo de prova do grupo

G1), G2CP (corpo de prova grupo G2), G1E (experimento do grupo G1), G2E

(experimento do grupo G2), G1C (controle do grupo G1), G2C (controle do

grupo G2), D.O.(densidade óptica) e mmAl (milímetro de alumínio).

Os valores das médias das densidades ópticas, dos materiais e dos

espécimes obtidos da leitura no fotodensitômetro nos doze filmes irradiados e

seus correspondentes em mmAl, estão apresentados nas tabelas 5.1, 5.2, 5.3,

5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 5.10 e 5.11. A tabela 5.12 descrita em mmAl sintetiza

os valores médios da radiopacidade verificada nos períodos de 7, 15, 30 60 e

90 dias com relação a G1CP, G1E, G1C, G2CP, G2E e G2C. Os gráficos 5.1,

5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 5.10 e 5.11 correspondem à densidade

óptica do penetrômetro em mmAl.

56

A tabela 5.1 descreve os valores da radiopacidade verificada no filme

1B, onde foi observado que G1CP obteve média da densidade óptica de 1,43,

que correspondeu a 0,68mmAl, G1E obteve média da densidade óptica de

1,46, que correspondeu a 0,60mmAl e G1C obteve média da densidade óptica

de 1,40, que correspondeu a 0,71mmAl.

Tabela 5.1 - Valores da radiopacidade verificada no filme 1B do grupo G1

1B D.O. mmAl

G1CP 1,43 0,68

G1E 1,46 0,60

G1C 1,40 0,71

O gráfico 5.1 ilustra a curva ajustada da D.O. do penetrômetro em

função da espessura em mmAl no filme 1B, possibilitando o cálculo da

equivalência de alumínio.

y = -0,3843Ln(x) + 1,3504

R

2

= 0,9973

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

1,6

0 2 4 6 8 10 12

Espessura (mmAl)

D.O

Gráfico 5.1 - Correspondente da D.O. do penetrômetro em mmAl no filme 1B

57

A tabela 5.2 descreve os valores da radiopacidade verificada no filme

2B, onde foi observado que G1CP obteve média da densidade óptica de 1,43,

que correspondeu a 0,68mmAl, G1E obteve média da densidade óptica de

1,52, que correspondeu a 0,50mmAl e G1C obteve média da densidade óptica

de 1,7, que correspondeu a 0,30mmAl.

Tabela 5.2 - Valores da radiopacidade verificada no filme 2B do grupo G1

2B D.O. mmAl

G1CP 1,43 0,68

G1E 1,52 0,50

G1C 1,70 0,30

O gráfico 5.2 ilustra a curva ajustada da D.O. do penetrômetro em

função da espessura em mmAl no filme 2B, possibilitando o cálculo da

equivalência de alumínio.

y = -0,3843Ln(x) + 1,3504

R

2

= 0,9973

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

1,6

0 2 4 6 8 10 12

Espessura (mmAl)

D.O

Gráfico 5.2 - Correspondente da D.O. do penetrômetro em mmAl no filme 2B

58

A tabela 5.3 descreve os valores da radiopacidade verificada no filme

3B, onde foi observado que G1CP obteve média da densidade óptica de 1,43,

que correspondeu a 0,68mmAl, G1E obteve média da densidade óptica de

1,54, que correspondeu a 0,47mmAl e G1C obteve média da densidade óptica

de 1,68, que correspondeu a 0,32mmAl.

Tabela 5.3 - Valores da radiopacidade verificada no filme 3B do grupo G1

3B D.O. mmAl

G1CP 1,43 0,68

G1E 1,54 0,47

G1C 1,68 0,32

O gráfico 5.3 ilustra a curva ajustada da D.O. do penetrômetro em

função da espessura em mmAl no filme 3B, possibilitando o cálculo da

equivalência de alumínio.

y = -0,3843Ln(x) + 1,3504

R

2

= 0,9973

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

1,6

0 2 4 6 8 10 12

Espessura (mmAl)

D.O

Gráfico 5.3 - Correspondente da DO do penetrômetro em mmAl no filme 3B

59

A tabela 5.4 descreve os valores da radiopacidade verificada no filme

4B, onde foi observado que G1CP obteve média da densidade óptica de 1,46,

que correspondeu a 0,65mmAl, G1E obteve média da densidade óptica de

1,50, que correspondeu a 0,55mmAl e G1C obteve média da densidade óptica

de 1,70, que correspondeu a 0,32mmAl.

Tabela 5.4 - Valores da radiopacidade verificada no filme 4B do grupo G1

4B D.O. mmAl

G1CP 1,46 0,65

G1E 1,50 0,55

G1C 1,70 0,32

O gráfico 5.4 ilustra a curva ajustada da D.O. do penetrômetro em

função da espessura em mmAl no filme 4B, possibilitando o cálculo da

equivalência de alumínio.

y = -0,3961Ln(x) + 1,3852

R

2

= 0,9976

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

1,6

0 2 4 6 8 10 12

Espessura (mmAl)

D.O

Gráfico 5.4 - Correspondente da DO do penetrômetro em mmAl no filme 4B

60

A tabela 5.5 descreve os valores da radiopacidade verificada no filme

5B, onde foi observado que G1CP obteve média da densidade óptica de 1,48,

que correspondeu a 0,62mmAl, G1E obteve média da densidade óptica de

1,55, que correspondeu a 0,47mmAl e G1C obteve média da densidade óptica

de 1,77, que correspondeu a 0,25mmAl.

Tabela 5.5 - Valores da radiopacidade verificada no filme 5B do grupo G1

5B D.O. mmAl

G1CP 1,48 0,62

G1E 1,55 0,47

G1C 1,77 0,25

O gráfico 5.5 ilustra a curva ajustada da D.O. do penetrômetro em

função da espessura em mmAl no filme 5B, possibilitando o cálculo da

equivalência de alumínio.

y = -0,3942Ln(x) + 1,4044

R

2

= 0,9929

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

1,6

0 2 4 6 8 10 12

Espessura (mmAl)

D.O

Gráfico 5.5 - Correspondente da DO do penetrômetro em mmAl no filme 5B

61

A tabela 5.6 descreve os valores da radiopacidade verificada no filme

1P, onde foi observado que G2CP obteve média da densidade óptica de 1,64,

que correspondeu a 0,36mmAl, G2E obteve média da densidade óptica de 1,50

que correspondeu a 0,54mmAl e CG2 obteve média da densidade óptica de

1,52 que correspondeu a 0,50mmAl.

Tabela 5.6 - Valores da radiopacidade verificada no filme 1P do grupo G2

1P D.O. mmAl

G2CP 1,64 0,36

G2E 1,50 0,54

G2C 1,52 0,50

O gráfico 5.6 ilustra a curva ajustada da D.O. do penetrômetro em

função da espessura em mmAl no filme 2P, possibilitando o cálculo da

equivalência de alumínio.

y = -0,3555Ln(x) + 1,2739

R

2

= 0,9995

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

0 2 4 6 8 10 12

Espessura (mmAl)

D.O

Gráfico 5.6 - Correspondente da DO do penetrômetro em mmAl no filme 5B

62

A tabela 5.7 descreve os valores da radiopacidade verificada no filme

2P, onde foi observado que G2CP obteve média da densidade óptica de 1,66,

que correspondeu a 0,34mmAl, G2E obteve média da densidade óptica de

1,59, que correspondeu a 0,42mmAl e G2C obteve média da densidade óptica

de 1,60, que correspondeu a 0,41mmAl.

Tabela 5.7 - Valores da radiopacidade verificada no filme 2P do grupo G2

2P D.O. mmAl

G2CP 1,66 0,34

G2E 1,59 0,42

G2C 1,60 0,41

O gráfico 5.7 ilustra a curva ajustada da D.O. do penetrômetro em

função da espessura em mmAl no filme 2P, possibilitando o cálculo da

equivalência de alumínio.

y = -0,3521Ln(x) + 1,2779

R

2

= 0,9957

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

0 2 4 6 8 10 12

Espessura (mmAl)

D.O

Gráfico 5.7 - Correspondente da DO do penetrômetro em mmAl no filme 2P

63

A tabela 5.8 descreve os valores da radiopacidade verificada no filme

3P, onde foi observado que CPG2 obteve média da densidade óptica de 1,60,

que correspondeu a 0,40mmAl, EG2 obteve média da densidade óptica de

1,56, que correspondeu a 0,46mmAl e CG2 obteve média da densidade óptica

de 1,62, que correspondeu a 0,39mmAl.

Tabela 5.8 - Valores da radiopacidade verificada no filme 3P do grupo G2

3P D.O. mmAl

G2CP 1,60 0,40

G2E 1,56 0,46

G2C 1,62 0,39

O gráfico 5.8 ilustra a curva ajustada da D.O. do penetrômetro em

função da espessura em mmAl no filme 3P, possibilitando o cálculo da

equivalência de alumínio.

y = -0,3525Ln(x) + 1,2905

R

2

= 0,9941

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

0 2 4 6 8 10 12

Espessura (mmAl)

D.O

Gráfico 5.8 - Correspondente da DO do penetrômetro em mmAl no filme 3P

64

A tabela 5.9 descreve os valores da radiopacidade verificada no filme

4P, onde foi observado que G2CP obteve média da densidade óptica de 1,60,

que correspondeu a 0,39mmAl, G2E obteve média da densidade óptica de

1,63, que correspondeu a 0,39mmAl e G2C obteve média da densidade óptica

de 1,60, que correspondeu a 0,40mmAl.

Tabela 5.9 - Valores da radiopacidade verificada no filme 4P do grupo G2

4P D.O. mmAl

G2CP 1,60 0,39

G2E 1,63 0,39

G2C 1,60 0,40

O gráfico 5.9 ilustra a curva ajustada da D.O. do penetrômetro em

função da espessura em mmAl no filme 4P, possibilitando o cálculo da

equivalência de alumínio.

y = -0,3334Ln(x) + 1,2456

R

2

= 0,9909

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

0 2 4 6 8 10 12

Espessura (mmAl)

D.O

Gráfico 5.9 - Correspondente da DO do penetrômetro em mmAl no filme 4P

65

A tabela 5.10 descreve os valores da radiopacidade verificada no filme

5P, onde foi observado que G2CP obteve média da densidade óptica de 1,73,

que correspondeu a 0,30mmAl, G2E obteve média da densidade óptica de

1,70, que correspondeu a 0,30mmAl e G2C obteve média da densidade óptica

de 1,68, que correspondeu a 0,32mmAl.

Tabela 5.10 - Valores da radiopacidade verificada no filme 5P do grupo G2

5P D.O. mmAl

G2CP 1,73 0,30

G2E 1,70 0,30

G2C 1,68 0,32

O gráfico 5.10 ilustra a curva ajustada da D.O. do penetrômetro em

função da espessura em mmAl no filme 5P, possibilitando o cálculo da

equivalência de alumínio.

y = -0,3895Ln(x) + 1,3683

R

2

= 0,9964

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

1,6

0 2 4 6 8 10 12

Espessura (mmAl)

D.O

Gráfico 5.10 - Correspondente da DO do penetrômetro em mmAl no filme 5P

66

A tabela 5.11 descreve os valores da radiopacidade verificada no filme C

(controle radiográfico), onde foi observado que o lado E (experimental) obteve

média da densidade óptica de 1,49, que correspondeu a 0,56mmAl e o lado C

(controle) obteve média da densidade óptica de 1,47, que correspondeu a

0,58mmAl.

Tabela 5.11 - Valores da radiopacidade verificada no filme C

C D.O. mmAl

Lado E

1,49 0,56

Lado C

1,47 0,58

O gráfico 5.11 ilustra a curva ajustada da D.O. do penetrômetro em

função da espessura em mmAl no filme C (controle radiográfico), possibilitando

o cálculo da equivalência de alumínio.

y = -0,3434Ln(x) + 1,3057

R

2

= 0,9979

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

0 2 4 6 8 10 12

Espessura (mmAl)

D.O

Gráfico 5.11 - Correspondente da DO do penetrômetro em mmAl no filme C

67

A tabela 5.12 sintetiza os valores médios da radiopacidade em mmAl

nos períodos de 7, 15, 30 60 e 90 dias com relação a G1CP, G1E, G1C,

G2CP, G2E e G2C.

Tabela 5.12 - Valores médios da radiopacidade em mmAl

por períodos nos grupos G1 e G2.

Período G1CP

G1E

G1C

G2CP

G2E

G2C

7 0,68 0,59

0,71

0,36 0,54

0,50

15

0,68 0,50

0,30

0,34 0,42

0,41

30

0,68 0,48

0,32

0,40 0,46

0,39

60

0,65 0,55

0,32

0,39 0,39

0,40

90

0,62 0,47

0,25

0,30 0,30

0,32

5.2 Análise Morfológica

A análise morfológica foi descrita para os grupos G1 (β-TCP) e G2

(Polímero de mamona) com 10 animais cada, nos períodos de 7, 15, 30, 60 e

90 dias.

7 dias

G1A (β-tricálcio fosfato - Experimento)

Dos 10 animais deste grupo, um foi excluído da amostra devido à perda

do material durante o processamento. O infiltrado inflamatório do tipo

68

linfoplasmocitário identificado em dois animais sendo um de moderado a

intenso e um leve. Neoformação vascular com vasos sanguíneos congestos e

áreas hemorrágicas foram visualizados em todos os animais. Em um animal

estavam presentes células gigantes multinucleadas de permeio ao material,

sugerindo reação de corpo estranho. O tecido conjuntivo localizado próximo ao

material implantado exibia-se fibroso nos 9 casos avaliados, sendo verificada

ainda, a presença de tecido conjuntivo de aspecto reticulado entre os grânulos

do material implantado (Figura 5.1). Oito dos nove casos examinados

apresentavam atividade osteoblástica na periferia do defeito ósseo. Em dois

animais observou-se deposição de osteóide, tendo um ocorridona periferia do

material implantado (Figura 5.2) e outro entre os grânulos do material e

próximo ao osso pré-existente.

G1B (β-tricálcio fosfato - Controle)

Em um animal foi visualizado infiltrado inflamatório linfoplasmocitário

leve. Neoformação vascular exibindo vasos sanguíneos congestos e áreas

hemorrágicas foram visualizados em todos os animais estudados. O tecido

conjuntivo foi do tipo fibroso. Nos 10 casos avaliados houve atividade

osteoblástica na periferia do defeito ósseo e em nenhum dos casos se

observou deposição osteóide (Figura 5.11). Em dois animais visualizamos

neoformação óssea trabecular na periferia do defeito.

69

G2A (Polímero de mamona - Experimento)

Não visualizamos presença de infiltrado inflamatório nem reação de

corpo estranho nos animais avaliados. Tecido conjuntivo fibroso foi evidenciado

em todos os animais (Figura 5.16). Atividade osteoblástica foi observada em

todos os casos. Em um animal ocorreu neoformação óssea associada à

periferia do defeito. Um espécime foi excluído da amostra devido à falha no

processamento laboratorial.

G2B (Polímero de mamona - Controle)

Não verificamos presença de infiltrado inflamatório ou osteóide. Todos

os animais deste período apresentaram tecido conjuntivo fibroso (Figura 5.25).

Neoformação óssea ocorreu em um animal sendo restrita à periferia do defeito.

Atividade osteoblástica esteve presente em todos os casos.

15 dias

G1A (β-tricálcio fosfato - Experimento)

Não foi observado infiltrado inflamatório, nem reação do tipo corpo

estranho. Tecido conjuntivo fibroso e atividade osteoblástica foram visualizados

em todos os casos. Foi verificado, ainda, entre os grânulos do material

implantado tecido conjuntivo exibindo aspecto reticular. Observou-se que nos

10 casos ocorreu neoformação óssea na periferia do β-tricálcio fosfato e do

70

defeito ósseo (Figura 5.3 e 5.4). Houve neoformação óssea acentuada em dois

animais de forma centrípeta (da periferia para o centro do defeito).

G1B (β-tricálcio fosfato - Controle)

Não foi observado infiltrado inflamatório. Tecido conjuntivo fibroso e

atividade osteoblástica estiveram presentes em todos os casos (Figura 5.12).

Nos 10 animais avaliados ocorreu neoformação óssea na periferia do defeito,

sendo em um animal, extensa.

G2A (Polímero de mamona - Experimento)

Não foram evidenciadas reação inflamatória nem reação de corpo

estranho. O tecido conjuntivo fibroso esteve presente em todos os casos e

presença de osteóide foi evidenciada em quatro animais (Figura 5.17). A

neoformação óssea foi limitada à periferia do defeito. Dois animais

apresentaram neoformação óssea exacerbada (Figura 5.18). Atividade

osteoblástica foi visualizada em todos os casos. Um espécime foi excluído da

amostra devido à falha no processamento laboratorial.

G2B (Polímero de mamona - Controle)

Não visualizamos infiltrado inflamatório e tecido conjuntivo fibroso foi

observado em todos os casos. Osteóide foi identificado apenas um animal.

Neoformação óssea ocorreu na periferia do defeito em oito animais, sendo que

71

em um destes, verificamos também neoformação óssea em áreas centrais do

defeito. Atividade osteoblástica esteve presente em todos os casos (Figura

5.26).

30 dias

G1A (β-tricálcio fosfato - Experimento)

Não foi observado infiltrado inflamatório, nem reação do tipo corpo

estranho. O tecido conjuntivo encontrado foi do tipo fibroso apresentando

discreto aumento da celularidade. Observou-se nas áreas centrais entre os

grânulos do β-tricálcio fosfato, perda do padrão reticular, demonstrando que o

implante foi parcialmente degradado sem a presença de células gigantes

multinucleadas. A atividade osteoblástica estava presente em todos os casos.

Nos 10 animais avaliados ocorreu neoformação óssea na periferia do defeito

ósseo e na periferia do implante (Figura 5.5 e 5.6).

G1B (β-tricálcio fosfato - Controle)

Não foi observado infiltrado inflamatório. O tecido conjuntivo foi do tipo

fibroso apresentando aumento da celularidade. Atividade osteoblástica foi

visualizada em todos os casos. Nos 10 animais avaliados houve neoformação

óssea centrípeta, a partir da periferia do defeito ósseo (Figura 5.13).

72

G2A (Polímero de mamona - Experimento)

Não estavam presentes reação inflamatória e reação de corpo estranho.

O tecido conjuntivo fibroso foi visualizado em todos os casos, entretanto, a

formação de osteóide não foi observada. Atividade osteoblástica estava

presente em todos os casos (Figura 5.19). Neoformação óssea foi visualizada

em todos os espécimes tendo ocorrido de forma centrípeta em direção ao

defeito (Figura 5.20 e 5.21). Um animal apresentou neoformação óssea em

toda a extensão do defeito.

G2B (Polímero de mamona - Controle)

Infiltrado linfoplasmocitário não foi visualizado para este período. Todos

os casos apresentaram tecido conjuntivo fibroso. Osteóide só foi visualizado

em um animal adjacente ao osso neoformado. Neoformação óssea foi

observada em todos os 10 casos bem como atividade osteoblástica, sendo

mais intensa em quatro animais que praticamente obliteravam o defeito (Figura

5.27).

60 dias

G1A (β-tricálcio fosfato - Experimento)

Não foi observado infiltrado inflamatório, nem reação do tipo corpo

estranho. O tecido conjuntivo encontrado foi do tipo fibroso. Degradação parcial

do implante foi observada em todos os casos, exibindo ora perda arquitetônica

73

do implante, ora irregularidades nas margens. A atividade osteoblástica estava

presente em oito dos nove casos avaliados. Osteóide foi visualizado em quatro

animais ora ao redor dos implantes, ora adjacente ao osso neoformado (Figura

5.7 e 5.8). Um animal exibiu tecido conjuntivo fibroso e degradação parcial do

implante e outro foi excluído da amostra devido falhas no processamento

laboratorial.

G1B (β-tricálcio fosfato - Controle)

Não foi observado infiltrado inflamatório. O tecido conjuntivo foi do tipo

fibroso e esteve presente em todos os animais bem como neoformação óssea

centrípeta, a partir da periferia do defeito, entretanto esta se apresentou mais

exacerbada em dois animais. Em um animal, a neoformação óssea ocorreu em

áreas centrais do defeito. Atividade osteoblástica esteve presente em todos os

casos avaliados (Figura 5.14).

G2A (Polímero de mamona - Experimento)

Não esteve presente reação inflamatória nem reação de corpo estranho

nos animais avaliados. O tecido conjuntivo fibroso foi visualizado em todos os

casos, sendo mais diferenciado em cinco animais (Figura 5.22). Osteóide foi

observado em apenas um animal. Atividade osteoblástica ocorreu em todos os

casos avaliados (Figura 5.23). A neoformação óssea esteve presente em todos

os espécimes e a partir do defeito.

74

G2B (Polímero de mamona - Controle)

Infiltrado linfoplasmocitário e osteóide não foram visualizados para este

período. Tecido conjuntivo fibroso foi evidenciado em todos os animais.

Neoformação óssea bem como atividade osteoblástica estavam presentes em

todos os casos, sendo mais intensa em seis animais, praticamente obliterando

o defeito (Figura 5.28).

90 dias

G1A (β-tricálcio fosfato - Experimento)

Infiltrado inflamatório e reação tipo corpo estranho não foram

observados. O tecido conjuntivo encontrado foi do tipo fibroso em todos os

animais. Degradação parcial do implante foi observada em todos os casos e

exibindo ora perda arquitetônica do implante, ora irregularidades nas margens.

A atividade osteoblástica foi observada em sete dos nove casos avaliados, já

que um espécime foi excluído da amostra devido à falha no processamento

laboratorial. Osteóide esteve presente em apenas um animal. A neoformação

óssea esteve presente em sete dos nove casos avaliados, já que, dois deles,

apresentaram tecido conjuntivo fibroso e degradação parcial do implante

(Figura 5.9 e 5.10).

75

G1B (β-tricálcio fosfato - Controle)

Não foi observado infiltrado inflamatório. O tecido conjuntivo foi do tipo

fibroso e esteve presente em todos os animais, bem como neoformação óssea

centrípeta, a partir da periferia do defeito ósseo. Em dois animais, a

neoformação óssea ocorreu, também, em áreas centrais do defeito enquanto

que nos outros casos, a neoformação foi limitada à periferia do defeito.

Atividade osteoblástica esteve presente em todos os casos avaliados (Figura

5.15).

G2A (Polímero de mamona - Experimento)

Reação inflamatória e reação de corpo estranho não foram observadas

para este período. O tecido conjuntivo fibroso esteve presente em todos os

casos, entretanto, a formação de osteóide só foi observada em três animais

animais. Neoformação óssea na periferia do defeito e atividade osteoblástica

foram visualizados em oito dos nove espécimes. Um animal apresentou tecido

conjuntivo fibroso (Figura 5.24). Um espécime foi excluído da amostra devido à

falha no processamento laboratorial.

G2B (Polímero de mamona - Controle)

Infiltrado linfoplasmocitário e osteóide não foram visualizados para este

período. Tecido conjuntivo fibroso foi observado em todos os animais.

Neoformação óssea foi intensa em todos os casos com obliteração,

76

praticamente completa, em quase todos. Atividade osteoblástica esteve

presente em todos os casos avaliados. Um espécime foi perdido devido

problemas laboratoriais (Figura 5.29).

5.3

5.

4

5.

5

5.

6

77

5.7

5.8

5.9

5.10

5.11 5.12

78

5.13

5.14

5.15 5.16

5.17 5.18

79

5.19 5.20

5.21 5.22

5.23 5.24

80

5.25 5.26

5.27 5.28

5.29

81

5.3 Análise Estatística

5.3.1 Reação de corpo estranho

Os resultados obtidos aos 7 dias, nos grupos G1 e G2 não apresentaram

reação de corpo estranho, que fosse estatisticamente significante.

Tabela 5.13 – Avaliação da reação de corpo estranho para G1A e G2A

segundo o tempo de avaliação

Grupo experimental

Tempo de avaliação Reação a corpo estranho 1 2 Grupo total Valor de p

(em dias) n % n % N %

•

••

• 7

Sim 1 11,1 - - 1 5,6 p

(1)

= 1,0000

Não 8 88,9 9 100,0

17 94,4

TOTAL 9 100,0

9 100,0

18 100,0

•

••

• 15

Sim - - - - - - **

Não 10 100,0

9 100,0

19 100,0

TOTAL 10 100,0

9 100,0

19 100,0

•

••

• 30

Sim - - - - - - **

Não 10 100,0

10 100,0

20 100,0

TOTAL 10 100,0

10 100,0

20 100,0

•

••

• 60

Sim - - - - - - **

Não 9 100,0

10 100,0

19 100,0

TOTAL 9 100,0

10 100,0

19 100,0

•

••

• 90

Sim - - - - - - **

Não 9 100,0

9 100,0

18 100,0

TOTAL 9 100,0

9 100,0

18 100,0

(**) – Não foi possível determinar devido a ocorrência de freqüência nula em uma das categorias.

(1) – Através do teste Exato de Fisher.

82

5.3.2 Reação Inflamatória

Em todos os períodos analisados, houve reação inflamatória apenas no

período inicial de 7 dias, tanto com o uso β-tricálcio fosfato (G1), quanto no seu

controle. No mesmo período, não houve reação inflamatória para o polímero de

mamona (G2) e os resultados estatísticos não foram significantes. Nos

períodos subseqüentes a reação inflamatória foi ausente.

Tabela 5.14 – Avaliação da reação inflamatória para G1A e G1B segundo o

tempo de avaliação

Subgrupo

Tempo de avaliação Inflamação A B Grupo total Valor de p

(em dias) n % n % N %

•

••

• 7

Sim 2 22,2 1 10,0 3 15,8 p

(1)

= 0,5637

Não 7 77,8 9 90,0 16 84,2

TOTAL 9 100,0

10 100,0

19 100,0

•

••

• 15

Sim - - - - - - **

Não 10 100,0

10 100,0

20 100,0

TOTAL 10 100,0

10 100,0

20 100,0

•

••

• 30

Sim - - - - - - **

Não 10 100,0

10 100,0

20 100,0

TOTAL 10 100,0

10 100,0

20 100,0

•

••

• 60

Sim - - - - - - **

Não 9 100,0

10 100,0

19 100,0

TOTAL 9 100,0

10 100,0

19 100,0

•

••

• 90

Sim - - - - - - **

Não 9 100,0

10 100,0

19 100,0

TOTAL 9 100,0

10 100,0

19 100,0

(**) – Não foi possível determinar devido a ocorrência de freqüência nula em uma das categorias.

(1) – Através do teste Mc-Nemar.

83

Tabela 5.15 – Avaliação da ocorrência da inflamação para G1A e G2A segundo

o tempo de avaliação

Grupo experimental

Tempo de avaliação Inflamação 1 2 Grupo total Valor de p

(em dias) n % n % N %

•

••

• 7

Sim 2 22,2 - - 2 11,1 p

(1)

= 0,4706

Não 7 77,8 9 100,0

16 88,9

TOTAL 9 100,0

9 100,0

18 100,0

•

••

• 15

Sim - - - - - - **

Não 10 100,0

9 100,0

19 100,0

TOTAL 10 100,0

9 100,0

19 100,0

•

••

• 30

Sim - - - - - - **

Não 10 100,0

10 100,0

20 100,0

TOTAL 10 100,0

10 100,0

20 100,0

•

••

• 60

Sim - - - - - - **

Não 9 100,0

10 100,0

19 100,0

TOTAL 9 100,0

10 100,0

19 100,0

•

••

• 90

Sim - - - - - - **

Não 9 100,0

10 100,0

19 100,0

TOTAL 9 100,0

10 100,0

19 100,0

(**) – Não foi possível determinar devido a ocorrência de freqüência nula em uma das categorias.

(1) – Através do teste Exato de Fisher.

5.3.3 Tecido Conjuntivo Fibroso

Em todos os grupos analisados houve a presença de tecido conjuntivo

fibroso, não evidenciando diferenças estatisticamente significante, quando os

grupos G1 e G2 são comparados aos seus respectivos controles, nem quando

comparados entre si (G1 versus G2).

84

5.3.4 Atividade Osteoblástica

Os dados encontrados evidenciam ausência de atividade osteoblástica

em 1 caso do G1, no período de 7 dias, 1 caso no mesmo grupo, no período de

60 dias, e 2 casos no período de 90 dias. Do mesmo modo, no G2, também

houve ausência de atividade osteoblástica em 1 caso, no período de 90 dias.

No entanto, do ponto de vista estatístico, pode-se afirmar que tais resultados,

dentro da amostra estudada, não apontam diferenças significativas.

Tabela 5.16 – Avaliação da atividade osteoblástica para G1A e G2A segundo o

tempo de avaliação

Grupo experimental

Tempo de avaliação Atividade osteoblástica 1 2 Grupo total Valor de p

(em dias) n % n % N %

•

••

• 7

Sim 8 88,9 9 100,0

17 94,4 p

(1)

= 1,0000

Não 1 11,0 - - 1 5,6

TOTAL 9 100,0

9 100,0

18 100,0

•

••

• 15

Sim 10 100,0

9 100,0

19 100,0

**

Não - - - - - -

TOTAL 10 100,0

9 100,0

19 100,0

•

••

• 30

Sim 10 100,0

10 100,0

20 100,0

**

Não - - - - - -

TOTAL 10 100,0

10 100,0

20 100,0

•

••

• 60

Sim 8 88,9 10 100,0

18 94,7 p

(1)

= 0,4737

Não 1 11,1 - - 1 5,3

TOTAL 9 100,0

10 100,0

19 100,0

•

••

• 90

Sim 7 77,8 8 88,9 15 83,3 p

(1)

= 1,0000

Não 2 22,2 1 11,1 3 16,7

TOTAL 9 100,0

9 100,0

18 100,0

(**) – Não foi possível determinar devido a ocorrência de freqüência nula em uma das categorias.

(1) – Através do teste Exato de Fisher.

85

5.3.5 Neoformação óssea

Tanto no G1 quanto no G2, os resultados estatísticos foram

estatisticamente não significantes como visto nas tabelas abaixo.

Tabela 5.17 – Avaliação da ocorrência da neoformação óssea para G2A e G2B

segundo o tempo de avaliação

Subgrupo

Tempo de avaliação Neoformação óssea A B Grupo total Valor de p

(em dias) n % n % N %

•

••

• 7

Sim 1 11,1 1 10,0 2 10,5 p

(1)

= 1,0000

Não 8 88,9 9 90,0 17 89,5

TOTAL 9 100,0

10 100,0

19 100,0

•

••

• 15

Sim 9 100,0

8 80,0 17 89,5 **

Não - - 2 20,0 2 10,5

TOTAL 9 100,0

10 100,0

19 100,0

•

••

• 30

Sim 10 100,0

10 100,0

20 100,0

**

Não - - - - - -

TOTAL 10 100,0

10 100,0

20 100,0

•

••

• 60

Sim 10 100,0

10 100,0

20 100,0

**

Não - - - - - -

TOTAL 10 100,0

10 100,0

20 100,0

•

••

• 90

Sim 8 88,9 9 100,0

17 94,4 **

Não 1 11,1 - - 1 5,6

TOTAL 9 100,0

9 100,0

18 100,0

(**) – Não foi possível determinar devido a ocorrência de freqüência nula em uma das categorias.

(1) – Através do teste Mc-Nemar.

86

Tabela 5.18 – Avaliação da neoformação óssea para G1A e G2A segundo o

tempo de avaliação

Grupo experimental

Tempo de avaliação Neoformação óssea 1 2 Grupo total Valor de p

(em dias) n % n % N %

•

••

• 7

Sim - - 1 11,1 1 5,6 p

(1)

= 1,0000

Não 9 100,0

8 88,9 17 94,4

TOTAL 9 100,0

9 100,0

18 100,0

•

••

• 15

Sim 10 100,0

9 100,0

19 100,0

**

Não - - - - - -

TOTAL 10 100,0

9 100,0

19 100,0

•

••

• 30

Sim 10 100,0

10 100,0

20 100,0

**

Não - - - - - -

TOTAL 10 100,0

10 100,0

20 100,0

•

••

• 60

Sim 8 88,9 10 100,0

18 94,7 p

(1)

= 0,4737

Não 1 11,1 - - 1 5,3

TOTAL 9 100,0

10 100,0

19 100,0

•

••

• 90

Sim 7 77,8 8 88,9 15 83,3 p

(1)

= 1,0000

Não 2 22,2 1 11,1 3 16,7

TOTAL 9 100,0

9 100,0

18 100,0

(**) – Não foi possível determinar devido a ocorrência de freqüência nula em uma das categorias.

(1) – Através do teste Exato de Fisher.

87

6 DISCUSSÃO

As cerâmicas de fosfato de cálcio têm sido utilizadas clinicamente, há

vários anos, passando por um processo contínuo de aperfeiçoamento para

associar a boa estabilidade em meio aquoso, a biocompatibilidade, a

osteocondução, e a reabsorção; características que têm sido demonstradas em

estudos clínicos e experimentais (GARBIN, GARBIN, 1994; RUEGER,

LINHART, SUMMERFELDT, 1998). O β-tricálcio fosfato, como uma destas

cerâmicas, tem apresentado, em estudos experimentais em ratos, algumas

propriedades esperadas para um substituto ósseo, dentre elas, a de

reabsorção, mesmo que parcial. Esta característica é considerada de grande

importância para a cirurgia e traumatologia buco-maxilo-facial, pois possibilita a

sua substituição por tecido ósseo próprio da região, com restauração de suas

propriedades fisiológicas normais, possibilitando absorver cargas mastigatórias

de forma efetiva, além de servir como leito propício para implantes (RUEGER,

LINHART, SUMMERFELDT, 1998).

Contrapondo os estudos anteriores, Handschel et al (2005) demonstram

que este material sofre um processo de degradação muito lento sendo

observado até seis meses após sua implantação. Acreditam que este processo

de degradação é supostamente decorrente de um fenômeno chamado troca de

fosfato de cálcio cerâmico por contato e, desta forma, a interface de contato é

muito importante para determinar a subseqüente resposta tecidual. A maioria

dos estudos que tem mostrado este processo de degradação foi realizada em

tecido ósseo que é submetido à carga, fator que pode ser preponderante para

88

explicar este fenômeno. Este último ponto parece ser verdade em decorrência

da observação de ampla degradação do material após implantação no fêmur

de coelhos no estudo de Neo et al, (1998). Handschel et al (2005) discordam

ainda da osteocondutividade já que, após 45 dias, forma-se uma fina camada

de tecido conjuntivo fibroso ao redor dos grânulos e destes ao osso

neoformado, isolando-os. Apesar disso, consideram este implante

biocompatível.

O polímero de mamona por sua vez é um material que tem sido descrito

como sendo biocompatível e osteocondutor, tendo sua estrutura reabsorvida à

medida que ocorre substituição por osso neoformado. Ignácio et al (1997)

utilizaram polímero de mamona em defeitos criados no rádio de coelhos e

observaram uma intensa reabsorção após 16 semanas; fato este discordante

do estudo de Castelo Branco et al (comunicação pessoal) que observaram uma

permanência, quase total, do polímero após 15 semanas de avaliação. Esta

disparidade de achados pode ser decorrente do modelo experimental avaliado,

pois assim como o presente estudo, o de Castelo Branco et al (comunicação

pessoal) não submeteu o implante de polímero de mamona a carga funcional.

Este fato parece não ser exclusivo deste tipo de implante, já que o β-tricácio

fosfato apresentou comportamento similar.

Uma dificuldade encontrada para a avaliação dos substitutos ósseos

reside na utilização de um modelo animal próprio, que possua as

características fisiológicas dos ossos do complexo maxilo-facial e mimetize um

defeito não reparável fisiologicamente, dificuldade esta, pode ser vista quando

89

da utilização de modelo ósseo com regeneração intramembranosa (BOSH,

MELSEN, VARGERVICK, 1998).

Outra dificuldade reside na impossibilidade de um meio asséptico para o

experimento, onde a colonização bacteriana poderia influenciar sobremaneira

nos resultados. No experimento, optou-se pela utilização da calota craniana,

constituída de osso de origem embrionária, semelhante aos ossos do complexo

maxilo-facial, formada por uma placa que apresenta corticais externa e interna

compactas, relativamente espessas, com faixa intermediária estreita de osso

medular com reparação intramembranosa (ROSS, ROMRELL, 1993).

A calota craniana de ratos Wistar possibilita estudo pareado, com

acesso cirúrgico único, morbidade reduzida e sem interferências entre os lados

controle e experimental. A morte e outros efeitos indesejáveis como paralisia,

distúrbios respiratórios ou sinais de dor para os animais também não foram

observados, comportamento este, semelhante ao encontrado por Bosh,

Melsen, Vargervick (1998). Os mesmos autores ainda estabeleceram critérios

para modelo de estudo de reparação óssea, tais como o uso de defeitos acima

do limite crítico, animais de baixo custo, facilmente manuseados e

anestesiados, que apresentassem disponibilidade no mercado e que

incluíssem osso cortical e medular no defeito, permitindo avaliação histológica

e radiográfica.

Apesar das vantagens, pelos resultados do nosso estudo existe uma

hipótese de que pode haver influência sistêmica ou local por contigüidade de

90

uma determinada substância implantada no lado experimental sobre o lado

controle. Isso parece ter ocorrido com o β-tricálcio fosfato influenciando

negativamente a resposta do lado controle quando comparada ao controle com

polímero de mamona.

Como no defeito de 5mm de diâmetro na calota de ratos Wistar

obtivemos neoformação óssea obliterando totalmente o defeito no lado controle

ao término de 90 dias, não podemos concordar que este corresponda ao limite

crítico para este animal, nesta localização. Este fato por si só não causou

prejuízo ao referido estudo porque foi realizada análise comparativa entre os

implantes em relação à reparação óssea. Se fosse avaliada a característica de

osteoindução, este modelo seria inviável.

O limite crítico como preconizado por Bosh, Melsen e Vargervick (1998)

após avaliação com 6 meses e 1 ano, de defeitos criados na calota craniana de

ratos Wistar com 5mm de diâmetro, não foi efetivo no nosso estudo, pois houve

no controle, neoformação em toda a extensão do defeito. Desta forma,

sugerimos que em experimentos similares utilizando animais da mesma

espécie, o diâmetro seja reavaliado.

A utilização do motor a 25.000 rpm, com irrigação abundante com

solução fisiológica para minimizar o trauma térmico, foi efetiva e pôde ser

constatada por ter causado uma reação tecidual mínima semelhante à

encontrada em outros ensaios experimentais (OKAMOTO, YAMAMOTO,

91

SONODA, 1994; PERRI de CARVALHO et al, 1994; PEREIRA, PERRI de

CARVALHO, OKAMOTO, 1996).

A utilização do β-tricálcio fosfato como implante no tecido ósseo sugere

ser um material biocompatível, pois as reações inflamatórias observadas

histologicamente foram evidenciadas em apenas dois ratos do G1A fato este

esperado, já que este corresponde ao experimento pós-operatório de 7 dias, no

qual as reações inflamatórias do material implantado, em um primeiro

momento, podem inibir a resposta à reparação inicial pela perpetuação da sua

fase inflamatória. Observa-se ainda a presença de reação inflamatória em um

animal do G1B, demonstrando, com isso, que o processo inflamatório não é

decorrente, exclusivamente, do material utilizado e, sim, inerente ao próprio

processo de reparação tecidual, embora esta resposta inflamatória tenha sido

mais branda que no G1A, resultados estes corroboram os achados de Rueger,

Linhart e Summerfeldt (1998), em que a resposta inflamatória no tecido ósseo

dos animais investigados foi considerada discreta.

Para o mesmo período de 7 dias, tanto o G2A quanto o G2B,

comportaram-se de forma melhor que o G1, demonstrando ser este material

também biocompatível como observado nos estudos de Ignácio et al (1997),

Mastrantônio e Ramalho (2003), Castelo Branco et al (comunicação pessoal),

Bolson et al (2005).

Nos períodos de 15, 30, 60 e 90 dias tanto G1 quanto G2 foram isentos

de resposta inflamatória, sendo concordantes com os estudos de Kamakura et

92

al (1999), Leonel et al (2004) que observaram o declínio da resposta

inflamatória em relação ao tempo.

A reação de corpo estranho só foi evidenciada em um caso do G1A,

parecendo, desta forma, ser uma resposta isolada e individual do animal 9G1A

aos 7 dias, entretanto, este tipo de reação já foi constatada por Rueger, Linhart

e Summerfeldt (1998) após a implantação de β-tricálcio fosfato em tecido mole,

tendo sido observada, por estes autores, reação de corpo estranho. A

implantação ortotópica no estudo experimental em ratos apresentou,

entretanto, uma reação menor, desta forma, este tipo de reação não parece ser

uma resposta incomum, mas em tecido ósseo ela tende a diminuir com o

tempo.

No G2 não houve reação de corpo estranho em nenhum animal, fato

este observado também no estudo de Mastrantônio e Ramalho (2003) após

implantação de polímero de mamona em tecido subcutâneo de camundongos.

Desta forma, o polímero de mamona comportou-se menos irritante aos tecidos

que o β-tricálcio fosfato.

As reações inflamatórias e de corpo estranho encontradas nesta

pesquisa corroboram os padrões aceitos para materiais biocompatíveis,

descritos por Estrela (2001), onde deve haver discreta ou nenhuma reação

tecidual nos períodos avaliados ou, ainda, reação de moderada a intensa ao

final de 7 dias, reduzindo sua intensidade com o decorrer dos períodos,

devendo não ser significante aos 60 dias.

93

Segundo Leonel et al (2004), a resposta do tecido ósseo aos materiais

implantados permite classificá-los como biotolerantes, bioinertes ou bioativos.

Os biotolerantes são aqueles que apresentam na sua interface uma camada de

tecido fibroso; já os bioinertes são os materiais que promovem um contato

direto com o tecido ósseo, enquanto que os bioativos são aqueles que

estimulam o crescimento ósseo. Alguns biomateriais promovem a neoformação

óssea através do processo da osteocondução, e este se caracteriza pela

capacidade de conduzir ou direcionar a neoformação óssea sobre e entre a

estrutura do implante. Desta forma, as superfícies das partículas dos

biomateriais servem como uma matriz sobre a qual a reparação óssea ocorre,

sendo este fenômeno provavelmente favorecido pela penetração de capilares

sangüíneos através dos poros do biomaterial. De acordo com o observado,

tanto polímero de mamona quanto o β-tricálcio fosfato, apresentaram-se como

osteocondutores por permitir o crescimento de tecido ósseo sobre a sua

superfície externa.

Os grupos G1 e G2 apresentaram tecido conjuntivo do tipo fibroso com

variações com relação à celularidade que apresentava-se aumentada na

medida em que havia transformação das células indiferenciadas em células

osteoprogenitoras, retratada pela modificação da morfologia celular de

fusiforme a arredondada. Não foi evidenciada fibrose ao redor do material

implantado separando-os entre si e isolando destes o tecido ósseo como

apresentado por Handschel et al (2005). A presença de tecido conjuntivo do

tipo fibroso circundando os implantes é um achado similar aos encontrados por

Neo et al (1998), Kamakura et al (1999), Leonel et al (2003) sendo indício de

94

osteocondução já que sem fibrose ao redor dos implantes, existe a

possibilidade de maior diferenciação deste tecido e integração do implante ao

osso como visto por Bolson et al (2005).

Atividade osteoblástica foi visualizada em todos os animais dos grupos

G1, exceto em 1 animal do G1A com 7 dias, 1 animal do G1A aos 60 dias e 2

animais do G1A aos 90 dias. Como o estudo foi pareado e no G1B foi

observada a presença de atividade osteoblástica, sugere-se, inibição da

atividade osteoblástica por ação direta do material implantado. O impacto das

partículas de β-tricálcio fosfato na função dos osteoblastos pode ser devido ao

decréscimo da sua adesão com o tempo, pois estas células parecem ser

ancoragem-dependente e quando o processo de adesão é perturbado, a

função do osteoblasto pode ser comprometida como discutido por Pioletti et al

(2000).

Já no grupo G2 a atividade osteoblástica foi visualizada em todos os

animais, exceto em 1 animal do G2A aos 90 dias, o que sugere a possibilidade

de uma resposta individual deste animal ao polímero de mamona.

A deposição de osteóide pôde ser constatada em 8 casos do grupo G1A

sendo 3 aos 7 dias, 4 aos 60 dias e 1 aos 90 dias. Isso nos sugere uma

estimulação do processo inicial de reparação que se perde com o tempo como

o descrito por Handschel et al (2005), onde o material parece ter um

comportamento bimodal ao longo do tempo.

95

Os animais avaliados apresentaram neoformação óssea lenta e gradual,

confirmando os resultados de Ross e Romrell (1993). A neoformação óssea

extensa aos 15 dias em 2 animais dos grupos G1A e G2A sugerem

estimulação da neoformação óssea em estágios mais precoces sendo

ligeiramente mais evidente que nos respectivos controles. A partir dos 30 dias,

o G2 parece ter um comportamento melhor com relação à neoformação tanto

no controle quanto no experimento.

Tanto aos 60 dias quanto aos 90 dias o melhor resultado foi verificado

no o G2B, onde verificamos extensa neoformação óssea em todos os animais

com obliteração quase que total dos defeitos. Assim como no estudo de

Handschel et al (2005), o crescimento ósseo foi mais intenso no caso do β-

tricálcio fosfato nos estágios iniciais da implantação enquanto em

contraposição ao crescimento mais lento nos estágios finais. Este resultado

pode ser explicado segundo Pioletti et al (2000), se as partículas de β-tricálcio

fosfato modificarem o sinal intracelular com uma possível conseqüência do

decréscimo da função dos osteoblastos, modulando a expressão gênica para

ativação destas células. Esse resultado tem sido observado com o colágeno

tipo I onde as células semelhantes a osteoblastos estavam em contato com

implantes de β-tricálcio fosfato. Sendo assim, o decréscimo da produção da

matriz extracelular pelos osteoblastos pode levar a uma diminuição da

osteointegração do β-tricálcio fosfato podendo ser causada pela modulação da

expressão dos genes devido à reorganização dos filamentos de actina. Uma

outra possibilidade da pequena neoformação óssea ocorrer tardiamente deve-

96

se a possibilidade de acidificação do meio resultante da degradação do

implante (NEO et al, 1998).

A radiopacidade é uma propriedade física desejável a todos os materiais

utilizados em odontologia devendo ser suficiente para que possam ser

distinguidos radiograficamente das estruturas que compõem o elemento

dentário e as estruturas ósseas adjacentes. No âmbito da odontologia, ela é

amplamente utilizada na endodontia, na prótese, na dentística e na

implantodontia para o planejamento pré-cirúrgico e protético. Na cirurgia buco-

maxilo-facial, é de crucial importância no acompanhamento pós-operatório dos

pacientes que se submetem a cirurgia para exérese de hemangiomas, cistos

em tecidos moles, levantamento do seio maxilar para inserção de implantes,

principalmente com a utilização de materiais aloplásticos.

No desenvolvimento deste trabalho preferiu-se utilizar para as medidas

da radiopacidade, as densidades ópticas, por ser um método que oferece

poucas variações, permitindo reconhecer as popriedades de emulsão dos

filmes, nas menores radiopacidades. Hurter e Driffield (1890), já preconizavam

o emprego das densidades ópticas, ao invés da opacidade, pois, enquanto esta

oscila de 1 a 10.000, para os depósitos fotográficos ou radiográficos, as

densidades ópticas variam de 0 a 4, sendo desta forma melhor controlado em

pesquisas.

Após aferição das densidades ópticas e a equivalência em mmAl para os

períodos de 7, 15, 30, 60 e 90 dias para os corpos de prova, experimento e

97

controle do grupo G1 e para os corpos de prova, experimento e controle do

grupo G2, observamos que houve uma menor variação na mensuração dos

corpos de prova no G1 quando comparado aos corpos de prova no G2 devido

a uma maior homogeneidade do β-tricálcio fosfato que tem sua apresentação

em grânulos, enquanto que o polímero de mamona tem uma apresentação

floculada mais irregular. Desta forma, quando submetidos á irradiação, os raios

X podem incidir de tal forma que a leitura no fotodensitômetro pode ser

variável. Com relação aos corpos de prova, ainda podemos constatar que o β-

tricálcio fosfato apresenta maior espessura em mmAl sendo desta forma menos

radiolúcido que o polímero de mamona. A terminologia radiolúcido empregada

para os dois materiais é cabível devido ao fato de ser considerado um material

radiopaco somente aquele que apresente espessura maior ou igual a 4mmAl.

Devido a pequena espessura da calota craniana dos ratos Wistar,

observamos também que esta deve ser considerada radiolúcida já que os

valores mensurados no controle radiográfico são menores que 4mmAl, com

uma diferença não significativa para o lado controle e experimento.

Quando comparamos os grupos G1 e G2 com relação ao experimento,

verificamos que as medidas em G1 são invariavelmente maiores que em G2

sendo isso decorrente da menor radiolucidez apresentada pelo β-tricálcio

fosfato com relação ao polímero de mamona que mostra-se mais radiolúcido.

Quando comparamos os grupos G1 e G2 com relação aos controles

cirúrgicos, observamos que o G2 apresentou-se menos radiolúcido que o G1

em praticamente todos os casos. Desta forma, podemos inferir que o grupo

98

controle do G2 reparou de forma mais efetiva que o grupo controle do G1, já

que as medidas em mmAl foram maiores no grupo controle do G2, salvo uma

das medidas do grupo controle do G1, que pode representar uma resposta

individual mais efetiva de um animal.

Quando comparamos experimento e controle dentro de um mesmo

grupo como no G1, constatamos que a reparação parece ter sido mais efetiva

no controle pois, mesmo o experimento apresentanto menor radiolucidez, há de

se observar que se feita a subtração da densidade em mmAl do material

implantado, o controle terá maior espessura em mmAl. Desta forma, o controle,

tanto no grupo G1, quanto no G2, parecem apresentar superioridade com

relação à radiopacidade, sugerindo reparação óssea, condição esta observada

histologicamente.

Sendo assim, constatamos que os dois materiais são radiolúcidos do

ponto de vista radiográfico, pois, representam valores menores que 1mm de

alumínio. Se estes materiais fossem implantados no interior do tecido ósseo

passariam despercebidos por serem radiolúcidos, principalmente, se houvesse

a manutenção das corticais vestibular e lingual como pôde ser visto no estudo

clássico de Bender e Seltzer (1961), que ao dividir sagitalmente uma

mandíbula, removeu 5cm de estrutura medular e submeteu radiografias à

análise de vários radiologistas que não identificaram a perda de estrutura

medular.

Com vista a isso, sugerimos a inclusão de substâncias

radiopacificadoras exibindo número atômico alto para auxiliar na distinção dos

tecidos circunjacentes. Outra sugestão seria a utilização de marcadores

99

fluorescentes em estudos experimentais como o intuito de predizer melhor o

estágio de formação e a presença de tecido ósseo ou pré-ósseo.

100

7 CONCLUSÃO

A partir dos resultados obtidos, pôde-se concluir que:

• O tecido ósseo da calota dos animais avaliados bem como os materiais

utilizados são radiolúcidos. Sendo o β-tricálcio fosfato menos radiolúcido

que o polímero de mamona, se faz necessário a adição de

radiopacificadores.

• A reparação óssea nos períodos avaliados, apesar de não

estatísticamente significante, apresentou melhores resultados no grupo

G2, tanto no controle quanto no experimento. Entretanto os materiais

utilizados foram considerados biocompatíveis e osteocondutores.

• O β-tricálcio fosfato sofreu degradação parcial comportando-se de forma

bimodal. Enquanto o polímero de mamona não sofreu degradação, nos

períodos avaliados.

101

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109

110

APÊNDICE B - Ficha para coleta de resultados morfológicos

RESULTADOS DA ANÁLISE MORFOLÓGICA

Animal Grupo Período Inflam RCE TCF Ativ Ost Osteóide

Neof Os

1 1 7 0 0 1 1 0 0

2 1 7 0 0 1 1 0 0

3 1 7 . . . . . .

4 1 7 3 0 1 1 0 0

5 1 7 0 0 1 0 0 0

6 1 7 1 0 1 1 1 0

7 1 7 0 0 1 1 1 0

8 1 7 0 0 1 1 1 0

9 1 7 0 1 1 1 0 0

10 1 7 0 0 1 1 0 0

1 1 15 0 0 1 1 0 1

2 1 15 0 0 1 1 0 1

3 1 15 0 0 1 1 0 1

4 1 15 0 0 1 1 0 1

5 1 15 0 0 1 1 0 1

6 1 15 0 0 1 1 0 1

7 1 15 0 0 1 1 0 1

8 1 15 0 0 1 1 0 1

9 1 15 0 0 1 1 0 1

10 1 15 0 0 1 1 0 1

1 1 30 0 0 1 1 0 1

2 1 30 0 0 1 1 0 1

3 1 30 0 0 1 1 0 1

4 1 30 0 0 1 1 0 1

5 1 30 0 0 1 1 0 1

6 1 30 0 0 1 1 0 1

7 1 30 0 0 1 1 0 1

8 1 30 0 0 1 1 0 1

9 1 30 0 0 1 1 0 1

10 1 30 0 0 1 1 0 1

1 1 60 0 0 1 1 1 1

2 1 60 0 0 1 1 1 1

3 1 60 0 0 1 1 0 1

4 1 60 0 0 1 1 1 1

5 1 60 . . . . . .

6 1 60 0 0 1 1 1 1

7 1 60 0 0 1 0 0 0

8 1 60 0 0 1 1 0 1

9 1 60 0 0 1 1 0 1

10 1 60 0 0 1 1 0 1

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10 2 90 . . . . . .

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