( PDF ) Avaliação do processo de cicatrização de lesões, tratadas com laser de baixa intensidade, através de sistema de aquisição e tratamento de imagem

UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM

ENGENHARIA MECÂNICA

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Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação em

Engenharia Mecânica da Universidade Federal de Minas

Gerais, como requisito parcial à obtenção do título de Mestre

em Engenharia Mecânica.

Área de concentração: Calor e Fluidos – Bioengenharia

Orientador: Prof. Dr. Roberto Márcio de Andrade (UFMG)

Co-orientador: Prof. Dr. Marcos Pinotti Barbosa (UFMG)

Belo Horizonte

Escola de Engenharia da UFMG

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FIGURA 7: Aplicação do bastão no dorso do animal por 1 minuto...........................................43

FIGURA 8: Identificação do animal...........................................................................................44

FIGURA 9: Aspecto inicial das lesões.......................................................................................45

FIGURA 10: Aspecto da lesão após 1hora.................................................................................45

FIGURA 11: Aparelho de laser utilizado...................................................................................46

FIGURA 12: Medida horizontal (a) e transversal com paquímetro (b)......................................47

FIGURA 13: Equipamento para padronização das fotos............................................................48

FIGURA 14: Molde de papel individualizado para cada animal................................................48

FIGURA 15: Posicionamento do rato para realização das fotos................................................48

FIGURA 16: Padronização do registro da imagem....................................................................49

FIGURA 17: Vista frontal e superior do registro da imagem.....................................................50

FIGURA 18: Aplicação do laser.................................................................................................50

FIGURA 19: Bancada geral: Paquímetro, equipamento para registro da imagem, Aparelho

de laser, tesoura, seringa, anestésico e óculos de proteção....................................51

FIGURA 20: Imagem do Bloco Padrão de 100mm....................................................................52

FIGURA 21: Processo de tratamento de imagem para cálculo das dimensões de um pixel

(imagem escala de cinza e binarizada)...................................................................53

FIGURA 22: Tratamento da imagem para cálculo da área da lesão.

Imagem colorida, em escala de cinza Binarizada..................................................54

FIGURA 23: Ferida com crosta bem definida (a), e após a sua binarização (b)........................72

FIGURA 24: Medida Transversal (a) e horizontal (b) com Paquímetro....................................72

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GRÁFICO 1: Imagem - Evolução da Cicatrização nos Grupos Controle e Bilateral.................60

GRAFICO 2: Imagem - Evolução de Cicatrização das Lesões Esquerdas e Direitas

do Grupo Unilateral..............................................................................................61

GRÁFICO 3: Imagem - Evolução de cicatrização no Grupo Controle e nas Lesões

Direitas do Grupo Unilateral..............................................................................63

GRÁFICO 4: Paquímetro - Evolução de cicatrização no Grupo Controle e no Bilateral..........65

GRÁFICO 5: Paquímetro - Evolução de cicatrização nas Lesões Esquerdas e

Direitas do Grupo Unilateral................................................................................67

GRÁFICO 6: Paquímetro - Evolução de cicatrização no Grupo Controle e nas

Lesões Direitas do Grupo Unilateral....................................................................68

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Key words: Wound; Wound healing; Low intensity laser therapy (LILT); Systemic effect of

the laser; System of acquisition and images treatment.

15

1 - INTRODUÇÃO

As feridas são conseqüências de uma agressão por agente ao tecido vivo. O

tratamento das feridas vem evoluindo desde 3000 anos a.C., quando as feridas hemorrágicas

eram tratadas com cauterização. O uso de torniquete é descrito em 400 a.C., enquanto a sutura

é documentada desde o terceiro século a.C. Na Idade Média, com o aparecimento da pólvora,

os ferimentos tornaram-se mais graves (FERNANDES, 2005).

As grandes descobertas do mundo; o avanço do processo de industrialização; a

proliferação das guerras; o crescimento populacional; as descobertas científicas; a variedade

de produtos disponíveis e o acelerado ritmo exigido pela vida moderna favoreceram o

aumento do número de feridas e queimaduras ocasionadas tanto por negligência quanto por

acidentes causados pelos produtos oriundos das novas tecnologias.

O tratamento de feridas deve ser visto como um processo dinâmico já que na

abordagem terapêutica devem ser incorporados, permanentemente, os conhecimentos técnico-

científicos correlatos. Ao longo da história percebe-se que o tratamento de feridas vem-se

modificando de acordo com os conhecimentos adquiridos em cada época. Esta evolução vem

desde a pré-história, com registros de aplicação de vários agentes sobre as feridas e, na

atualidade, os tratamentos têm bases científicas que levam em consideração a fisiopatologia,

fatores extrínsecos e intrínsecos à ferida com a utilização de um arsenal farmacológico e de

equipamentos aperfeiçoados por modernas tecnologias (NOVATO, CARVALHO, 2000).

Diversas terapias são apresentadas na literatura para o tratamento de feridas, como o

uso de plantas medicinais (EURIDES, 1996; OLIVEIRA, 2001); de microcorrentes

(STEFFANI et al, 2006); de ácido hialurônico (MEDEIROS, 1999); de curativos e enzimas

como a papaína (FERNANDES, 2005) e de açúcar (GALEGO, SILVEIRA, D'ACAMPORA,

1997; PRATA, HADDAD, GOLDENBERG et al, 1988).

Dentre as várias terapias propostas para o tratamento de feridas e de queimaduras,

destaca-se o laser de baixa intensidade, cuja utilização possibilita a aceleração do processo de

cicatrização (MESTER et al, 1971; KANA et al, 1981; TSUCHIDA et al, 1991;

FERNANDO, HILL, WALKER, 1993; ZHANG, 1994; SIMUNOVIC et al, 2000; LAGAN et

al, 2000; AMORIN, 2001; NÚÑEZ, 2002; CARVALHO, 2003; PUGLIESE, 2003;

RIBEIRO, 2004).

Um dos grandes avanços da ciência, nas últimas décadas foi o desenvolvimento

dos aparelhos de laser. A aplicação dos diferentes tipos de lasers possibilitou alterações

16

importantes nos procedimentos médicos e odontológicos. Estas alterações vão desde a

redução do tempo de duração das cirurgias quanto do tempo de recuperação dos pacientes; à

redução nas complicações pós-operatórias e nos edemas; ao maior controle e domínio das

dores crônicas e, ainda, facilita a biomodulação dos tecidos moles.

A interação do laser com os tecidos depende não só do comprimento de onda da

luz, mas também das propriedades ópticas dos tecidos, já que certos elementos de tecidos, a

exemplo de células, mitocôndrias e vasos, podem provocar a dispersão da luz. O feixe de luz

ao incidir sobre os tecidos ou penetra-os ou é refletido. Ao ocorrer sua penetração decorrem

os seguintes processos, quais sejam: a) a luz é absorvida; b) a luz atravessa o tecido sem

produzir nenhuma reação (transmissão colimada) ou, c) sofre espalhamento (muda de

direção).

Diversos resultados de estudos sobre os efeitos desse tipo de terapia tanto em

clínica humana, quanto em animais ou in vitro foram publicados fundamentando, em sua

maioria, a teoria de que a regeneração tissular e a cicatrização de feridas são favorecidas

quando tratadas com laser de baixa potência.

Alguns estudos refletiam casos pontuais ou experiência de clínicos cuja casuística

apresentada era pequena, pouco significativa, e metodologia de pouca qualidade científica e,

portanto, passível de contestação. O avanço das pesquisas inclusive quanto à metodologia

empregada, com estudos duplo cego e em longo prazo, permitiu melhoria na qualidade dos

trabalhos e a conseqüente evolução na confiabilidade dos resultados.

Alguns estudos com o laser de baixa intensidade demonstram que ele pode

produzir efeitos em outras partes do corpo além do local onde o tecido é irradiado

caracterizando o efeito sistêmico. Este efeito pode ser justificado pelo fato de que células do

tecido irradiado produzem substâncias que se espalham e circulam nos vasos sangüíneos e no

sistema linfático. Entretanto, efeitos sistêmicos associados ao LILT ainda não estão claros. Há

trabalhos na literatura que demonstram resultados positivos estatisticamente significantes nos

grupos irradiados, quando comparados ao grupo controle, mesmo quando o controle situa-se

no próprio animal ou no indivíduo tratado (RIBEIRO, ZEZELL, 2004).

Um estudo de ROCHKIND et al. (1989) sobre os efeitos sistêmicos do laser de

He-Ne foi realizado utilizando três modelos experimentais em ratos de acordo com tipos de

lesões: feridas cutâneas, queimaduras e injúrias nos sistemas nervoso periférico e central. Para

cada um dos modelos foram divididos dois grupos cujos animais receberam duas feridas, uma

de cada lado da espinha dorsal. Um dos grupos, definido como o grupo controle, não recebeu

irradiação laser e o outro grupo recebeu irradiação apenas em uma das feridas. Foi analisada a

17

evolução da cicatrização das lesões. Ambas feridas, irradiada e não irradiada do mesmo

grupo, foram curadas em tempo significativamente inferior quando comparadas ao grupo

controle não irradiado e não apresentaram diferença estatisticamente significante entre si,

atestando com isto, a ocorrência do efeito sistêmico. Estes resultados foram observados em

todos os tipos de lesões. Os mesmos autores descreveram os efeitos positivos do laser de

baixa intensidade e sua persistência em longo prazo.

Apesar dos muitos estudos realizados sobre a efetiva participação da luz laser nos

processos de reparação tecidual, muito há, ainda, o que se descobrir em relação à dosagem,

tipo de aparelho, indicações e mecanismo de ação local e o efeito sistêmico dessa terapia.

Resultados contraditórios ainda persistem tornando necessária a continuação desses estudos

em busca de explicações mais objetivas sobre como o laser pode influenciar o tecido

biológico, que absorve a energia localmente, a promover reações gerais no organismo.

1.1- Objetivo Geral

O presente trabalho tem como objetivo geral analisar o efeito do laser em baixa

intensidade no processo de cicatrização de feridas, visando comprovar se a absorção da luz

pelo organismo promove aceleração da reparação tecidual.

1.2- Objetivos Específicos

Os objetivos específicos são:

- Atestar o efeito sistêmico do laser em baixa intensidade que se traduz na

possibilidade de a energia depositada em um local específico promover reação em outro local

no mesmo organismo.

- Promover uma análise metrológica com comparação das técnicas de medição das

lesões. Como o Paquímetro é a técnica tradicionalmente utilizada, o estudo propôs a sua

utilização e, para maior confiabilidade dos resultados, propôs também adotar o sistema de

Aquisição e Tratamento de Imagem, a fim de promover uma análise comparativa quanto à

eficiência metrológica.

- Avaliar o efeito do laser em baixa intensidade na Taxa de cicatrização, ao

longo do tempo.

18

2- REVISÃO DE LITERATURA

2.1 - Feridas

Em termos anatômicos, a pele é subdividida em epiderme e derme (FIG.1). A

epiderme, histologicamente constituída das camadas basal, espinhosa, granulosa, lúcida e

córnea, é um importante órgão sensorial. Na derme, encontram-se os vasos sanguíneos,

linfáticos, folículos pilosos, glândulas sudoríparas e sebáceas, pelos e terminações nervosas,

além de células como: fibroblastos, mastócitos, monócitos, macrófagos e plasmócitos, dentre

outros (FERNANDES, 2005).

FIGURA 1: Pele humana. Disponível em www.afh.bio.br/tegumentar/tegumentar.asp.

Uma ferida é representada pela interrupção da continuidade de um tecido

corpóreo, em maior ou em menor extensão, causada por qualquer tipo de trauma físico,

químico, mecânico ou desencadeada por uma afecção clínica, que aciona as frentes de defesa

orgânica para o contra-ataque (BLANES, 2004).

Os procedimentos no tratamento de feridas vêm sendo registrados desde os tempos

antigos pelos egípcios e gregos. O registro mais antigo é o Papirus de Luxor de Edwin Smith,

19

datado de 1700 a.C., que constitui cópia de um manuscrito de 3.000 a 2.500 a.C. Isso significa

que o cuidado com feridas vem de 5000 anos atrás. Há registros de que na pré-história vários

agentes como extratos de plantas, água, neve, gelo, frutas, lamas e graxa eram aplicados sobre

feridas. No início da era Cristã um cirurgião hindu, Sushruta, descreveu 14 tipos de curativos

feitos de seda, linho, lã e algodão dando ênfase à importância da limpeza da ferida. O avanço

da química nos séculos XVII e XVIII possibilitou a descoberta de compostos como cloro,

iodo, mercúrio, ácido carbólico e ácido fólico; este último usado por Lister em 1867 como

antisséptico e também para cicatrizar ferimentos sem supuração. A partir do século XX,

surgiram vários preparados para uso tópico destinados a tratar as feridas, visando não apenas

um melhor tratamento, mas também uma melhor compreensão do processo de cicatrização. O

avanço mais significativo foi a introdução das pomadas de corticóides além de cremes e

pomadas antibacterianas contendo penicilina e sulfas (NOVATO, CARVALHO, 2000).

Ao longo do tempo vários estudos foram desenvolvidos para o tratamento de

feridas e, em conseqüência, novas alternativas foram apresentadas. Nessa sucessão de estudos

algumas alternativas foram descartadas enquanto outras foram desenvolvidas ou

aperfeiçoadas, o que aponta a existência de contradições e lacunas nessa área específica do

conhecimento a serem ainda sanadas ou preenchidas (GOMES, CARVALHO, 2002).

Em conseqüência à busca do conhecimento quanto à fisiopatologia das feridas para

melhor adequação do tratamento, surgiram pesquisas demonstrando que o laser de baixa

intensidade atua como acelerador do processo de reparo de feridas, com efeitos analgésicos,

antiinflamatórios e de regeneração tecidual.

Dentre as diversas formas de feridas: perfurações, escoriações, queimaduras,

equimoses, hematomas, este trabalho propõe experimentar a terapia de aplicação de laser de

baixa intensidade em feridas do tipo queimaduras.

2.2 – Queimaduras

Para MENEZES e SILVA (1988), queimadura é uma lesão causada por agentes

térmicos, químicos, elétricos ou radioativos que agem no tecido de revestimento do corpo

humano, podendo destruir parcial ou totalmente a pele e seus anexos, até as camadas mais

profundas como tecidos subcutâneos, músculos, tendão e ossos.

No entendimento de JUNIOR (1990), as queimaduras são lesões dos tecidos

orgânicos produzidas por um trauma de origem térmica. A injúria determinada por este

trauma, assume variadas proporções dependendo do tempo de exposição, da extensão da área

20

lesada e do agente causal enquanto as conseqüências se estendem desde um simples cuidado

com a área atingida, em tratamento ambulatorial, até a morte.

As queimaduras são classificadas de acordo com o grau da lesão em queimaduras

de primeiro, segundo, terceiro e quarto graus.

A queimadura de primeiro grau é considerada quando a parte externa da epiderme

é o local acometido pelo traumatismo e as lesões celulares. Devido à avascularização da

epiderme não há sangramento, mas apenas uma reação eritematosa decorrente de irritação da

derme subjacente. Geralmente ocorre leve reação inflamatória o que provoca sinal de dor ao

toque. Nela não ocorre a formação de bolhas e a cicatrização acontece entre 2 a 5 dias. Há

descamação da epiderme externa (O’SULLIVAN, 1993).

BEHRMAN (1994) define a queimadura de segundo grau como sendo aquela em

que o epitélio e parte do cório são destruídos e, em relação à profundidade ele a sub-classifica

como queimaduras de espessura parcial superficial ou profunda. E, a menos que existam

condições ótimas para a manutenção dos elementos dérmicos e apêndices epidérmicos, as

queimaduras de espessura parcial profundas podem converter-se em necrose de espessura

total.

Já na queimadura de terceiro grau verifica-se lesão de toda a espessura da derme

ocorrendo a resolução apenas pelo crescimento epitelial a partir das bordas da ferida ou por

enxerto de pele das áreas não queimadas do corpo (BEHRMAN, 1994).

A queimadura de quarto grau é definida como aquela que estende aos tecidos

subjacentes como a gordura subcutânea, fáscia, músculo ou osso. E, para o fechamento das

feridas, além do enxerto cutâneo pode se fazer necessário à implantação de retalhos locais ou

regionais para cobertura definitiva (BEHRMAN, 1994).

2.3 - Cicatrização

Após ocorrer a lesão a um tecido, imediatamente iniciam-se fenômenos dinâmicos

conhecidos como cicatrização, que é uma seqüência de respostas dos mais variados tipos de

células (epiteliais, inflamatórias, plaquetas e fibroblastos), que interagem para o

restabelecimento da integridade dos tecidos. Mas, o processo de reparação tissular

compreende não só o mecanismo de restauração dos tecidos denominado cicatrização, mas,

também, o de regeneração celular que ocorre com reposição tissular "original". Nesta, o

trauma inicial gera uma resposta inflamatória aguda, manifestada através de edema e

formação de exsudato seroso rico em leucócitos, que cessa em menos de 24 horas.

21

Posteriormente, as células epidérmicas das margens da ferida e das invaginações

epidérmicas dos folículos pilosos e glândulas sudoríparas e sebáceas começam a proliferar e

migrar no leito da ferida ocluindo, rapidamente, sua superfície.

O tipo de lesão também possui importância no tipo de reparação. Assim, em uma

ferida cirúrgica limpa, há necessidade de mínima quantidade de tecido novo, enquanto que,

em uma grande queimadura, há necessidade de todos os recursos orgânicos para cicatrização e

defesa contra uma infecção.

O processo de cicatrização de feridas é composto de uma série de estágios

complexos, interdependentes e simultâneos (BLANES, 2004). Estes estágios são descritos em

fases como: inflamatória, epitelização, celular e fibroplasia (FERNANDES, 2005).

Na fase inflamatória, de grande importância para o processo de cicatrização,

inicialmente, ocorre vaso-constrição fugaz seguida de vaso-dilatação, que é mediada

principalmente pela histamina, liberada por mastócitos, granulócitos e plaquetas com aumento

da permeabilidade e extravasamento de plasma. Essa fase possui duração efêmera de mais ou

menos 30 minutos, sendo a continuidade da vasodilatação de responsabilidade de

prostaglandinas.

Nos vasos próximos à inflamação ocorrem fenômenos de coagulação pela

formação de trombos que auxiliam a proliferação de fibroblastos. Alguns mediadores

químicos são liberados e estimulam a migração de células inflamatórias como monócitos,

neutrófilos, fibroblastos e células musculares lisas, ocorrendo também produção de

colagenase pelos fibroblastos.

Enquanto a fase inflamatória ocorre na profundidade da lesão, a fase de

epitelização ocorre nas bordas da ferida. Em cerca de 24 a 48 horas, toda a superfície da lesão

fica recoberta por células superficiais que com o passar dos dias, sofrem fenômenos de

queratinização.

Já na fase celular, aproximadamente, no terceiro e quarto dias após a lesão, ocorre

a proliferação de fibroblastos originários de células mesenquimais que se tornam

predominantes por volta do décimo dia. Essas células agem na secreção de colágeno, matriz

da cicatrização, e formam feixes espessos de actina. O colágeno é responsável pela força e

integridade dos tecidos.

A fase de fibroplasia caracteriza-se pela presença de colágeno, proteína insolúvel,

sendo composta, principalmente, de glicina, prolina e hidroxiprolina. Para sua formação

requer enzimas específicas que exigem co-fatores como oxigênio, ferro, ácido ascórbico, daí

suas deficiências levarem ao retardo da cicatrização. São os feixes de colágeno que originam

22

uma estrutura densa e consistente que é a cicatriz. As feridas adquirem resistência constante,

por até quatro meses, porém sem nunca adquirir a mesma resistência do tecido original.

Esta fase de fibroplasia não tem um final definido, sendo que as cicatrizes

continuam modelando-se por meses e anos tendo como responsável a enzima colagenase. Esta

ação é importante para impedir a cicatrização excessiva que se traduz pelo quelóide.

OLIVEIRA et al. (2001) relataram que a presença da crosta na ferida favorece o

processo de cicatrização. Entretanto, observaram que em experimento realizado com óleo de

copaíba, as crostas fibrinoleucocitárias das feridas dos animais foram facilmente removidas

no sétimo dia de pós-operatório, permitindo que o medicamento atuasse diretamente sobre as

feridas, o que possibilitou melhor avaliação dos aspectos morfológicos e morfométricos.

Nas feridas abertas (não suturadas) ocorre a formação de um tecido granular fino,

vermelho, macio e sensível, chamado de granulação, em cerca de 12 a 24 horas após o

trauma. Neste tipo de tecido ocorre um fato importante, promovido pelos miofibroblastos que

é o fenômeno da contração, sendo que neste caso, não há a produção de uma nova pele para

recobrir o defeito. A contração é máxima nas feridas abertas, podendo ser, por vezes,

patológica, ocasionando deformidades e prejuízos funcionais, os quais poderão ser evitados

com um enxerto de pele. Esse fenômeno pode ser reduzido através de excisões repetidas das

bordas das feridas e se diferencia da retração que é um fenômeno tardio que ocorre,

principalmente, nas queimaduras e em regiões de dobra de pele (FERNANDES, 2005).

A cicatrização de feridas pode ocorrer por primeira, segunda e terceira intenções.

Na primeira intenção não há perda de tecido e as extremidades da pele ficam justapostas uma

à outra. Já na segunda intenção, que ocorre em feridas onde há perda de tecido e as

extremidades da pele ficam distantes umas das outras, é necessário formação de tecido de

granulação até que a contração e epitelização aconteçam. Na terceira intenção, a ferida que é

deixada aberta por um determinado período, funciona como cicatrização por segunda

intenção, que após ser suturada permite cicatrização à semelhança da primeira intenção. Este

procedimento é empregado geralmente nas feridas cirúrgicas com infecção (BLANES, 2004).

Há que ressaltar a existência de fatores que interferem na evolução natural do

processo de cicatrização, quais sejam: idade, nutrição, estado imunológico, oxigenação local,

drogas utilizadas, quimioterapia, irradiação, tabagismo, hemorragia e tensão na ferida dentre

outros.

Essa interferência em relação à idade decorre da diminuição progressiva do

colágeno que faz com que os tecidos fiquem cada vez menos flexíveis dependentes também,

23

de um balanço nutricional adequado, já que é pacífico o entendimento de sua relação com a

cicatrização ideal.

No estado imunológico comprometido, a ausência de leucócitos, pelo retardo da

fagocitose e da lise de restos celulares, prolonga a fase inflamatória e predispõe à infecção e à

deficiência do processo de cicatrização.

Já a interferência da oxigenação se dá pelo fato de que a anóxia leva à síntese de

colágeno pouco estável, com formação de fibras de menor força mecânica. Essa síntese do

colágeno é diminuída quando da deficiência de insulina, pela diabete e, devido à

microangiopatia cutânea, há uma piora na oxigenação o que favorece a ocorrência de

infecções das feridas.

As drogas que mais interferem, negativamente, no processo normal de cicatrização

são os esteróides, já que o seu efeito anti-inflamatório retarda e altera a cicatrização.

Já a quimioterapia leva à neutropenia que predispõe à infecção; inibe a fase

inflamatória inicial da cicatrização e interfere nas mitoses celulares e na síntese protéica

enquanto a irradiação leva à arterite obliterante local, com conseqüente hipóxia tecidual,

verificando diminuição dos fibroblastos e menor produção de colágeno.

A nicotina por ser um vaso-constritor leva à isquemia tissular, sendo também

responsável por uma diminuição de fibroblastos e macrófagos enquanto o monóxido de

carbono provoca a diminuição do transporte e do metabolismo do oxigênio daí decorrer a

interferência do tabagismo na evolução do processo de cicatrização observando, portanto,

cicatrização mais lenta em fumantes.

Dentre as interferências significativas no processo de cicatrização, destacam-se

tensões sobre as feridas provocadas por vômitos, tosse e atividade física em demasia e,

também, as hemorragias que, pelo acúmulo de sangue, cria espaços mortos que interferem na

cicatrização.

Para FERNANDES (2005), a grande complicação das feridas é a sua infecção,

sendo que os fatores predisponentes podem ser locais ou gerais. Os locais são: contaminação,

presença de corpo estranho, técnica de sutura inadequada, tecido desvitalizado, hematoma e

espaço morto enquanto os fatores gerais que contribuem para aumentar este tipo de

complicação são: debilidade, idade avançada, obesidade, anemia, choque, grande período de

internação hospitalar, tempo cirúrgico elevado e doenças associadas, principalmente o

diabetes e doenças imunodepressoras. A hemorragia e a destruição tecidual são outras

possíveis complicações.

24

2.4 Terapias Convencionais

A seguir são citadas apenas algumas das possíveis terapias utilizadas para melhoria

da cicatrização de feridas.

Para OLIVEIRA et al. (2001), apesar das recentes descobertas de novas e potentes

drogas promovidas, especialmente, pela química sintética e pela biotecnologia, os produtos

naturais como plantas e minerais continuam sendo uma grande fonte para obtenção de

medicamentos para os mais diversos fins, alguns agentes medicinais comumente usados para

o tratamento de várias condições patológicas têm sua origem na medicina popular. Dentre as

substâncias naturais mais amplamente utilizadas para cicatrização de feridas cutâneas,

destacam-se o mel, a própolis e as folhas de Aloe Vera. O autor relata também que resultados

positivos foram encontrados em estudos feitos com óleo de copaíba, fibras de batata doce e

curcumin.

EURIDES et al (1996) em um estudo para avaliar a reparação tecidual de feridas

cutâneas de camundongos tratadas com solução aquosa de barbatimão, utilizaram a seguinte

metodologia: as feridas dos animais foram diariamente avaliadas e mensuradas com auxílio de

um paquímetro em períodos estabelecidos. Para determinação das áreas das lesões utilizou-se

a equação matemática (A = π.R.r), onde R corresponde ao raio maior da ferida e r, o menor.

Os resultados foram analisados através do teste t de Student fixando a = 0,05 ou 5% como

nível de rejeição de hipótese de nulidade. A solução aquosa de barbatimão (Stryphynodendron

barbatiman martius) auxiliou significativamente na reparação de feridas cutâneas de

camundongos.

Os curativos são muito utilizados para tratamento de feridas e pode ser definido

como todo material colocado diretamente por sobre uma ferida, cujos objetivos são: evitar a

contaminação de feridas limpas; facilitar a cicatrização; reduzir a infecção nas lesões

contaminadas; absorver secreções; facilitar a drenagem; promover a hemostasia com os

curativos compressivos; manter o contato de medicamentos junto à ferida e promover

conforto ao paciente (FERNANDES, 2005).

No Quadro 1 são citadas algumas das substâncias mais utilizadas em curativos de

feridas abertas e infectadas, especialmente, no que se refere à indicação, mecanismo de ação e

maneira de utilização.

25

QUADRO 1: Substâncias utilizadas como curativos de feridas.

Substâncias

Indicação

Mecanismo de Ação

Papaína:

enzima proteolítica

extraída do látex da

caricapapaya.

Em todo tecido

necrótico,

particularmente

naqueles com crosta.

Ação anti-inflamatória, bactericida e

cicatricial; atua como desbridante.

Hidrocolóide: Partículas

hidroativas em polímero

inerte impermeável.

Lesões não infectadas

com ou sem exudato,

áreas doadoras e

incisões cirurgicas

Promove barreira protetora,

isolamento térmico, meio úmido,

prevenindo o ressecamento,

desbridamento autolítico, granulação

e epitelização

Triglicérides de cadeia

média:

São ácidos graxos

essenciais, lipídios

insaturados ricos em ácido

linolêico

Todos os tipos de

lesões infectadas ou

não, desde que

desbridadas

previamente

Promove quimiotaxia para

leucócitos, facilita a entrada de

fatores de crescimento nas células,

promove proliferação e mitose

celular, acelerando as fases da

cicatrização.

Carvão ativado:

curativo consiste em

partículas de carvão

impregnado com prata

Nas feridas infectadas

exudativas

Favorece os princípios físicos de

limpeza da ferida e auxilia na

diminuição da carga bacteriana que

dificulta a cicatrização, reduzindo o

exsudato e o odor.

Alginato de cálcio:

fibras de não-tecido,

impregnadas de alginato

de cálcio e sódio,

extraídas de alga marinha

Laminaria

Nas lesões exudativas

com sangramento

Auxilia o desbridamento autolítico;

quimiotáxico para macrófagos e

fibroblastos; hemostático (promove

agregação plaquetária).

Filme com membrana de

poliuretano:

película de poliuretano

transparente, adesiva e

estéril, semipermeáveis

Utilizado para proteção

de lesões profundas

não infectadas

Agem como barreira à contaminação

da ferida; são impermeáveis à água e

a outros agentes e permitem

visualização direta da ferida e

vascularização.

26

CASTRO (2005) realizou pesquisa bibliográfica objetivando verificar se recursos

terapêuticos como a eletroterapia e a termoterapia atuariam para qualquer tipo de queimadura,

devolvendo ao paciente o aspecto funcional e estético precocemente. Os resultados

observados foram: 1-o ultra-som é indicado em áreas que apresentam aderências, com

aplicação de doses de 1w/cm² a 2w/cm² durante 10 minutos, sendo nas primeiras sessões

utilizado diariamente e progredindo para dias alternados. 2 - o laser mais indicado é o HeNe

com dose de 3J/cm², usado pontualmente. 3 - a corrente galvânica é utilizada em pacientes

que indicarem lesões nervosas periféricas. 4 - a corrente farádica é utilizada em pacientes que

seja necessário hipertrofiar músculo e grupos musculares.

Observa-se que, os recursos termo terapêuticos são utilizados sobre o processo de

regeneração tecidual, reiteradamente. O que confirma a eficiência satisfatória desses recursos

na recuperação dos pacientes por possibilitar uma rápida melhoria em seu quadro clínico e,

conseqüentemente, retorno às suas atividades.

STEFFANI et al. (2005) em trabalho sobre a avaliação dos efeitos do uso de

microcorrentes em queimaduras de terceiro grau, em ratos “Wistar”, utilizaram o seguinte

modelo de pesquisa: amostra composta por 12 animais que foram subdivididos em dois

grupos constituídos por 06 ratos cada. Os ratos do primeiro grupo, após a lesão, receberam

estimulação elétrica num total de 15 sessões enquanto os ratos do segundo grupo, também

lesionados, não receberam nenhum tratamento.

O tratamento a que fora submetido o primeiro grupo consistiu na utilização de

corrente elétrica 5 x por semana, em seções de 15 minutos cada, na forma bipolar - 80

microampéres.

Em análise, o grupo de animais submetidos à terapia por microcorrentes

apresentou diminuição do número de microrganismos patogênicos reduzindo assim o

processo infeccioso no local da lesão, comparativamente, ao grupo controle. Além disso, a

qualidade do tecido cicatricial, no grupo de animais tratados, mostrou-se mais ordenada,

evidenciando maior número de fibroblastos, em relação ao grupo controle.

MEDEIROS (1999) investigou a ação tópica do ácido hialurônico em queimaduras

de ratos adultos, até a epitelização completa das lesões. O ácido hialurônico, um

glicosaminoglicano que ocorre em doses elevadas e por tempo prolongado na matriz

extracelular dos tecidos em cicatrização do feto, é o responsável pelo resultado da cicatrização

fetal sem marcas residuais e sem contração. Para o estudo foram usados 20 ratos Wistar com

peso médio 225± 15g, nos quais fora provocada queimadura de 5 cm

2

na pele do dorso, sob

anestesia com éter sulfúrico. No grupo I (n=10) as queimaduras foram tratadas com aplicação

27

tópica diária de 1ml de ácido hialurônico 1% e no grupo II (n=10) com 1ml de solução salina

0,9%, até a completa epitelização. O tempo de cicatrização foi de 29 ± 1,33 dias no grupo I e

38 ± 2,58 no grupo II. A média dos escores histológicos foi de 27,0 ± 2,78 no grupo I e de

18,1 ± 3,66 no grupo II. As diferenças mostraram-se significantes (p<0,05). A análise do

resultado estético revelou maiores deformidades nas cicatrizes do grupo II (controle).

Concluiu, então que o ácido hialurônico tópico contribuiu para acelerar o tempo de

cicatrização, melhorou a evolução histológica e o resultado estético em queimaduras do dorso

de ratos adultos.

PRATA et al. (1988) realizou estudo com objetivo de avaliar o efeito do açúcar

aplicado topicamente em ferida cutânea provocada em ratos que foram divididos em dois

grupos constituídos por vinte animais cada. O primeiro grupo foi denominado grupo açúcar

(A), no qual foi realizado tratamento das feridas com açúcar, colocado em quantidade

suficiente para cobri-las totalmente, duas vezes ao dia. No segundo grupo denominado grupo

controle (B) as feridas foram tratadas com 1 ml de solução fisiológica, duas vezes ao dia. No

3º, 7º, 14º e 21º dias de pós-operatório as feridas dos animais de ambos os grupos foram

analisadas quanto à intensidade de contaminação bacteriana, aspectos macroscópicos,

histológicos e histométricos. Os resultados obtidos em relação à intensidade de contaminação

bacteriana mostraram que somente no 7º dia de pós-operatório a contaminação foi maior no

grupo controle quando comparada ao grupo açúcar. Do ponto de vista histológico, observou-

se que o desenvolvimento e maturação do tecido de granulação fizeram-se de forma mais

precoce no grupo açúcar. A análise histométrica revelou que fibroblastos e fibras colágenas

foram encontrados significantemente aumentados no grupo açúcar em relação ao grupo

controle nos dias estudados. Conclui-se que o açúcar foi capaz de estimular o processo de

reparação cicatricial em ratos.

2.5 - Laser

Laser é uma abreviação das seguintes palavras: “light amplification by stimulated

emission of radiation” (amplificação da luz por emissão estimulada de radiação).

A terapia com laser em baixa intensidade tem sido utilizada, atualmente, nos mais

diversos campos da medicina como conduta terapêutica da dor. É um tipo de terapia não-

invasiva, indolor, não-térmica e asséptica, sem efeitos colaterais, com uma boa relação custo-

benefício. Todavia, para que a terapia com laser de baixa intensidade possa surtir efeitos

28

positivos, é fundamental um correto diagnóstico, assim como um protocolo de aplicação

(SANSEVERINO, 2001).

O tratamento que utiliza o laser em baixa intensidade não é baseado em

aquecimento, ou seja, a energia dos fótons absorvida não será transformada em calor, mas,

sim, nos efeitos fotoquímicos, fotofísicos e/ou fotobiológicos nas células e no tecido. De fato,

estudos na literatura mostram que este tratamento resulta em aumentos de temperatura

inferiores à 1ºC. Quando a luz interage com as células ou tecido, se administrada na dose

adequada, pode estimular certas funções celulares. Esse efeito é particularmente evidente se a

célula tem a sua função debilitada. Trabalhos encontrados na literatura mostram que o LILT

tem efeitos mais pronunciados sobre órgãos ou tecidos enfraquecidos, tais como em pacientes

que sofrem algum tipo de desordem funcional ou de injúria ao tecido (RIBEIRO; ZEZELL,

2004).

Após vários estudos quantitativos serem realizados, KARU (1989) publicou um

artigo revisional sobre a fotobiologia dos efeitos da biomodulação laser para determinar a

ação da luz monocromática visível em baixa intensidade sobre várias células (Escherichia

Coli, fermentos, células HeLa, fibroblastos de hamsters chineses e linfócitos humanos) e,

também, para determinar as condições ideais de irradiação (comprimento de onda, dose e

intensidade) que conduz ao estímulo da atividade vital.

Após a aplicação da radiação visível, e conseqüente absorção por um sistema

biológico, ocorre uma reação fotoquímica. Tanto a radiação visível como a infravermelha

demonstram ser benéficas. Porém elas se diferenciam suas propriedades fotoquímicas e

fotofísicas e, por isso mesmo, SMITH (1991) propõe uma modificação do modelo de KARU

(1989) para explicar os efeitos produzidos por ambos os comprimentos de onda.

No modelo de Karu a luz visível produz mudanças fotoquímicas nos

fotorreceptores das mitocôndrias que alteram o metabolismo, conduzindo à transdução

(transferência de energia de um sistema para outro) do sinal a outras partes da célula,

inclusive membranas, que finalmente conduzem à foto-resposta. Enquanto a luz visível

provavelmente inicia a cascata de eventos na cadeia respiratória das mitocôndrias, por eventos

fotoquímicos, Smith sugere que, por causa das propriedades fotofísicas e fotoquímicas, a

radiação infravermelha inicia a cascata de eventos metabólicos através de efeitos fotofísicos

sobre as membranas (provavelmente nos canais de Ca

++

), conduzindo à mesma resposta final

(RIBEIRO M.S.; ZEZELL D.M, 2004).

Os lasers utilizados para bioestimulação estão situados na porção visível do

espectro eletromagnético, bem como no infravermelho próximo. Os comprimentos de onda

29

mais utilizados estão entre 600 e 1000 nm. Estes comprimentos de onda são, relativamente,

pouco absorvidos e, conseqüentemente, apresentam uma boa transmissão na pele e nas

mucosas (RIGAU, 1996).

Os incrementos de ATP mitocondrial que se produzem após a irradiação com laser

favorecem um grande número de reações que interferem no metabolismo celular. Em estados

patológicos, o laser interfere no processo de troca iônica acelerando o incremento do ATP

(KARU et al.), como mostrado na FIG.2.

FIGURA 2: Modelo de KARU. Ação foto-química do laser visível na mitocôndria e Ação foto-física do laser

infravermelho na membrana celular. Ambos os processos desencadeiam uma resposta celular geradora de

reações bioquímicas, em cascata. Fonte: GUTKNECHT, N; EDUARDO, C. P (2004)

.

A potência do laser é o valor dado pelo fabricante em watts (W). A densidade de

potência é a potência de saída de luz por unidade de área medida em watts por centímetro

quadrado (W/cm²). A densidade de energia, também chamada de dose, é a grandeza que

avalia a possibilidade de estímulo ou inibição dos efeitos do laser. É a quantidade de energia

por unidade de área transferida ao tecido. Geralmente é expressa em joules por centímetro

quadrado (J/cm²), (RIBEIRO, 2001).

Em 1990, YOUNG et al. estudaram a ação de um diodo laser de As-Ga-Al

emitindo em diferentes comprimentos de onda (660, 820 e 870 nm) sobre granulócitos. Os

30

autores observaram que, quando utilizaram fluências que variaram de 4 a 8 J/cm

2

ocorria a

máxima ativação da bomba de sódio e potássio. Quando utilizaram fluências maiores que isso,

acontecia a inibição desse mecanismo. Observaram também que não houve diferença

significativa nos resultados encontrados para os diferentes comprimentos de onda utilizados.

2.5.1 - Interação do laser com os tecidos vivos

Os aparelhos laser possuem um determinado meio ativo que, por suas

características, produz uma luz de comprimento de onda específico que reage de maneira

própria com cada tecido.

Além do comprimento de onda, outros fatores interferem na interação com os

tecidos, tais como: densidade de potência; forma de emissão do laser (contínua, pulsátil e

desencadeada); tempo de duração da pulsação; raio focado ou desfocado e contato direto ou à

distância. Deve-se salientar que as propriedades ópticas de cada tecido, associadas às suas

reações moleculares e bioquímicas determinarão a extensão e a natureza da resposta tecidual

que ocorre nos processos de absorção, transmissão, reflexão e difusão da luz laser

(BRUGNERA JÚNIOR e PINHEIRO, 1998).

A absorção da luz laser pelos tecidos pode resultar em quatro processos, a saber:

Fotoquímico; Fototérmico; Fotomecânico e Fotoelétrico, cujos efeitos abaixo descritos são

ressaltados por BRUGNERA JÚNIOR e PINHEIRO (1998).

No processo fotoquímico ocorrem vários efeitos: a bioestimulação, a fotodinâmica

e a fluorescência.

A bioestimulação consiste no efeito da luz laser sobre processos moleculares e

bioquímicos que normalmente ocorrem nos tecidos (cicatrizações e reparo tecidual), enquanto

na terapia fotodinâmica o uso terapêutico do laser é associado a um corante com afinidade

específica para determinado comprimento de onda que induz reações tissulares e é utilizado

no tratamento de processos patológicos. Já a fluorescência tecidual é usada como um método

de diagnóstico para detecção de tecidos que refletem a luz.

No processo fototérmico podem ocorrer os seguintes efeitos de fotoablação e

fotopirólise. A fotoablação é uma manifestação do efeito fototérmico promovido pelo laser

cujo processo se caracteriza pela remoção de tecido por sua vaporização e pelo

superaquecimento dos fluídos tissulares, promovendo também, coagulação e hemostasia,

enquanto isso, a fotopirólise consiste na queima do tecido por aquecimento.

31

Nos processos fotomecânicos incluem-se a fotodisrupção e a foto dissociação, que

consistem na quebra estrutural do tecido pela luz laser.

Já no processo fotoelétrico inclui-se a fotoplasmólise, que é resultado da remoção

tecidual pela formação de íons e partículas carregadas eletricamente e que existem em um

estado semi-gasoso de alta energia chamado Plasma. O plasma é considerado o quarto estado

da matéria por não ser sólido, nem liquido e nem gasoso.

Há de ser observado que, antes de se iniciar qualquer procedimento clínico com

um aparelho laser, deve-se conhecer os mecanismos de interação do laser com os diferentes

tipos de tecidos vivos.

2.5.2 - Efeitos do Laser na Cicatrização

Diversos estudos realizados em animais e humanos com laser de baixa potência

demonstraram respostas positivas seja na síntese e remodelação de colágeno; seja no número

de fibroblastos; no diâmetro e força de tração das feridas tratadas; na viabilidade dos enxertos;

na vascularização; na vasodilatação; no sistema linfático; nos efeitos antibacteriano e

imunológico e com possíveis efeitos sistêmicos (RIGAU, 1996).

O mais importante efeito do laser de baixa potência sobre a cicatrização de feridas

refere-se ao aumento da síntese de colágeno por parte dos fibroblastos, o que foi demonstrado

nos experimentos em que essa síntese foi monitorada utilizando microscópio eletrônico para o

controle da captação de prolina e glicina tritiada (RIGAU, 1996).

Alguns pesquisadores afirmam que a reação inflamatória aguda, subseqüente a

uma lesão tecidual, produz um infiltrado leucocitário mais acentuado quando a região é

submetida à radiação do laser HeNe (BISHT et al, 1994).

HALL et al (1994) realizaram um estudo para avaliar o efeito do laser de GaAlAs

na cicatrização de feridas em ratos. Para tal utilizou-se de um grupo de ratos onde apenas um

lado foi irradiado com o laser, enquanto o grupo controle teve um dos lados exposto à luz

normal. O laser foi aplicado diariamente com dose de 0,2 J/cm², até o 21° dia de pós-

operatório. Pelas observações clínicas e histológicas semelhantes entre os grupos, concluíram

que o uso do laser de GaAlAs não produziu resultados significativos.

MESTER et al, em 1971, analisaram através de fotográfias e estudo histológico os

efeitos do laser de rubi com 694,3 nm (luz vermelha) em feridas mecânicas e queimaduras de

terceiro grau feitas no dorso de camundongos. O laser foi utilizado com doses de 1,4 e 5

32

J/cm², duas vezes por semana, num total de seis sessões. Em um dos lados de cada animal foi

realizada aplicação do laser enquanto o outro lado serviu como controle. O período avaliado

foi de 7 a 14 dias. A dose 1,1 J/cm² se mostrou com melhor efeito na aceleração da

cicatrização tanto para as feridas mecânicas quanto para as queimaduras. O autor observou

também que no sétimo dia a ferida cirúrgica do lado teste possuía metade do tamanho do lado

controle e com 14 dias estava totalmente cicatrizada.

FUKABORI (2003) realizou um estudo com objetivo de avaliar clinicamente os

efeitos do laser de diodo (Ga-Al-As) de baixa intensidade na bioestimulação de células

cicatriciais em feridas cirúrgicas, correspondentes a leitos doadores de enxertos gengivais

livres, em palato de cães, comparando sua evolução temporal com grupo não irradiado. Foram

realizados os leitos cirúrgicos do lado esquerdo, que serviram de controle, e os do lado direito

que foram irradiados uma única vez, durante 4 minutos com 4 J/cm² de fluência, no pós-

operatório imediato. O estudo mostrou que o laser terapêutico promoveu uma maior

velocidade inicial de cicatrização, que aos poucos foi desacelerando até atingir os padrões

cicatriciais do grupo controle.

TRELLES e MESTER, em 1984, publicaram estudo realizado em pacientes

portadores de úlceras vasculares de membros inferiores que receberam irradiação com laser

de He-Ne na fluência de 4 J/cm

2

. Após realizarem um seguimento fotográfico, observaram a

nível microscópico a evolução dessas feridas. Essa observação constatou uma melhor

evolução do tecido de granulação, bem como da neovascularização e da epitelização dos

grupos tratados com laser em relação aos grupos controles.

BIHARI e MESTER apresentaram, em 1989, um estudo clínico realizado em

pacientes portadores de úlceras. Esses pacientes foram divididos em três grupos. Um deles foi

irradiado com laser de He-Ne, outro com a associação de laser de He-Ne e um diodo laser

emitindo na região do infravermelho próximo e outro com uma luz não-coerente, cujo

comprimento de onda foi de 632 nm. Em todos os grupos a fluência utilizada foi de 4 J/cm

2

.

Os autores demonstraram a eficácia terapêutica da associação dos diferentes tipos de lasers

por apresentarem melhores resultados quando comparados aos demais grupos.

AMORIM (2001) realizou estudo para avaliar a reparação gengival após cirurgia

de gengivoplastia em humanos com estimulação pela irradiação de laser de GaAlAs (685nm).

Como metodologia, utilizou-se de um dos lados do paciente como controle e o outro recebeu

aplicações de 4 J/cm² imediatamente após a cirurgia e com 1, 3 e 7 dias de pós-operatório. Foi

feita uma avaliação clínica da cicatrização por três periodontistas e avaliação biométrica das

feridas. As medidas de profundidade de sondagem, na avaliação biométrica, foram

33

significantes para o lado teste. Porém, as medidas de mudança na posição da margem

gengival e espessura da faixa de mucosa ceratinizada não foram significantes entre os lados.

Após avaliação clínica foi evidenciado que houve melhora na reparação tecidual no lado teste

após 3 dias de pós-operatório.

ANDERS et al (2002) utilizaram um laser diodo de 632,8 nm com dosagem de

4J/cm para avaliar a sua influência na produção de fator de crescimento derivado de

fibroblastos em ratos normais e diabéticos. Foram realizadas feridas cutâneas no dorso dos

ratos e uma das destas foi determinada como controle. Após análise dos resultados, os autores

observaram diferença estatisticamente significante para a produção de fator de crescimento

derivado de fibroblastos tanto entre lados controle e tratados quanto entre os ratos diabéticos e

não diabéticos. Sugerindo que a produção deste fator ficou confinada à área irradiada, já que

no lado controle não houve alteração.

RESENDE (2001) realizou uma pesquisa analisando o efeito da aceleração do

processo de cicatrização de lesões cutâneas em ratos, utilizando diodo laser emitindo em 830

nm. Os 64 animais selecionados neste estudo foram divididos aleatoriamente em quatro

grupos de 16 ratos (G1, G2, G3 e G4). Comparações biométricas e histológicas foram

realizadas no 3º, 7º e 14º dias após o ato cirúrgico e a aplicação do laser.

Nesse estudo foram utilizadas três configurações de irradiação, sendo uma com

contato pontual (G2) e duas uniformes sem contato (G3 e G4), com dois valores de

intensidade (G2: I= 428 mW/cm

2

; G3=G4: I= 53 mW/ cm

2

) e dois valores de dose (G2=G4:

D= 3 J/cm

2

; G3: D= 1,3J/cm

2

). O grupo 1, considerado controle, não foi submetido a nenhum

tratamento. Todas as lesões irradiadas apresentaram aceleração do processo de cicatrização

com relação ao grupo controle. A combinação do valor de intensidade de 53 mW/ cm

2

e da

dose de 1,3 J/cm

2

levaram a resultados ótimos dos pontos de vista biométrico e histológico,

apresentando contração mais rápida da lesão, com maior rapidez na neoformação de tecido

conjuntivo e epitelial.

NÚÑEZ (2002) realizou estudo para avaliar, por meio da fluxometria laser

Doppler, os efeitos provocados pela radiação emitida por um laser de He-Ne (λ= 632,8nm) na

microcirculação sangüínea durante o processo de reparação tecidual. Para esta finalidade

foram selecionados 15 ratos machos que receberam uma lesão provocada por nitrogênio

líquido aplicado sobre a região dorsal, sendo o fluxo sangüíneo desta área, avaliado em

diferentes momentos durante 21 dias. Para a avaliação dos efeitos do laser de He-Ne foi

utilizada dose de 1,15 J/cm

2

, com intensidade de 6 mW/cm

2

. Os resultados obtidos

demonstram alterações de fluxo provocadas pela lesão e conseqüente resposta inflamatória.

34

Pela observação dos resultados obtidos, a radiação proveniente do laser de He-Ne não afeta a

microcirculação imediatamente após a irradiação, embora o grupo irradiado tenha apresentado

aumento percentual de fluxo médio no sétimo dia experimental em relação ao grupo controle.

PUGLIESE (2003) realizou estudo sobre a influência da terapia a laser de baixa

densidade de energia na biomodulação das fibras colágenas e elásticas. Realizaram-se

ferimentos cutâneos padronizados no dorso de setenta e dois ratos Wistar e, em seguida,

aplicação pontual do raio laser de baixa potência do tipo Arseneto de Gálio-Alumínio (Ga-Al-

As) com diferentes densidades de energia. Os animais foram sacrificados com 24, 48 e 72

horas e aos 5º, 7º e 14º dias. Para o tratamento foram utilizadas doses de 4 J/cm² e 8 J/cm² e

um grupo controle não irradiado. Observou-se, que nos grupos submetidos à terapia a laser,

houve maior redução do edema e infiltrado inflamatório. Os animais tratados apresentaram

uma maior expressão de fibras colágenas e elásticas, embora sem significância estatística (p >

0,05). No tratamento com a fluência de 4 J/cm² observaram-se melhores resultados do que

naquele em que foi utilizada a fluência de 8 J/cm². Neste estudo, pôde-se concluir que o laser

contribuiu para uma maior expressão de fibras colágenas e elásticas durante o processo

cicatricial.

RIBEIRO (2004) fez um estudo para investigar a influência da radiação laser

visível polarizada de baixa intensidade na aceleração da cicatrização de feridas de pele. Para o

estudo foram realizadas três queimaduras de aproximadamente 6 milímetros de diâmetro

criadas na parte traseira de ratos com Nitrogênio líquido. Uma Lesão “L” (paralela) foi

irradiada pelo laser de He-Ne (632,8 nm), D = 1,0 J/cm², com o polarização linear paralela à

coluna espinhal do rato. A lesão “L”(perpendicular) apesar de irradiada com os mesmos laser

e dose teve a polarização alinhada perpendicularmente à lesão. A lesão "C" a fim ser

considerada como o controle, não foi irradiada. A análise histológica mostrou que a

cicatrização nas feridas irradiadas foi mais rápida do que naquelas não irradiadas. Além disso,

observou-se que o reparo da ferida da pele é dependente da orientação da polarização com

respeito a uma linha central referencial como a coluna espinhal do animal. A lesão

“L”(paralela) cicatrizou completamente após 17 dias, visto que “L” (perpendicular) mostrou

um grau moderado de cicatrização após o mesmo período.

CARVALHO (2003) realizou um estudo sobre os efeitos da terapia laser na

regeneração tecidual de feridas cutâneas induzidas em ratos diabéticos e não diabéticos e sua

relação com a reparação tecidual. No estudo foram utilizados 15 ratos Wistar, machos. O

diabetes foi induzido por uma injeção intravenosa contendo medicamentos específicos para a

referida indução. Para dar cumprimento ao trabalho foi realizada uma lesão no terço médio do

35

quadríceps dos animais sendo estes divididos em grupo A diabético tratado, B não diabético

tratado, C não diabético não tratado. Os animais dos grupos A e B foram tratados com Laser

HeNe com uma dosagem de 4 J/cm² por 36 segundos. Nas lâminas do grupo A e B observou-

se tecido de granulação exuberante com presença de fibras colágenas; intensa proliferação

fibroblástica; e células inflamatórias mononucleadas, principalmente linfócitos e macrófagos;

neoformação de vasos sugerindo reposição de tecido conjuntivo por um processo envolvendo

angiogênese e fibroblastos. No grupo controle as lâminas apresentaram um intenso exsudato,

células inflamatórias, exacerbação de vasos incompletos e fibroblastos. Os resultados

indicaram que aplicação da laserterapia se mostrou muito eficaz equilibrando e acelerando o

processo de reparação das feridas cutâneas em ratos diabéticos.

Um outro estudo realizado por CARVALHO (2003) teve como objetivo comparar

os resultados dos efeitos da terapia laser na regeneração tecidual de feridas cutâneas. Neste

estudo foi realizada uma análise morfométrica do percentual de fibras colágenas por

densidade de cor. Foram utilizados 48 ratos Wistar, machos, que foram submetidos a uma

lesão no dorso e divididos em dois grupos de 24 animais. O grupo I foi tratado com laser e o

Grupo II não foi tratado. Os animais do grupo I foram tratados com Laser HeNe com uma

dosagem de 4 J/cm² por 36 segundos. Pôde-se concluir que o laser Helio Neônio se mostrou

eficiente no tratamento de feridas cutâneas acelerando seu processo de reparo. Quando esta

radiação é aplicada há um incremento do processo cicatricial com uma rede de fibras

colágenas melhor elaborada do que em animais não submetidos ao mesmo tratamento.

Em um estudo experimental feito por AZEVEDO (2006), foi investigado o

processo de cicatrização de feridas em ratos após tratamento com laser de baixa potência.

Foram utilizados nove ratos da linhagem Wistar, os quais foram subdivididos em três

subgrupos contendo três ratos em cada, para se observar o processo de cicatrização em suas

diferentes fases. Na região lateral de ambas as patas traseiras de cada animal, foi realizada

uma incisão pérfuro-cortante com 3 cm de extensão sob o efeito de anestésico. A pata

esquerda dos animais foi utilizada como teste e a direita como controle. Foram aplicados 3

Joules por centímetro quadrado de área, em três pontos distintos da ferida. Os animais foram

sacrificados de acordo com o número de irradiações efetuadas no 4º, 7º e 11º dias. Ao longo

de todo o processo de cicatrização, foram observadas diferenças macroscópicas apenas no

primeiro dia de sacrifício. Histologicamente foram observadas diferenças significativas em

todo o processo cicatricial.

O conjunto de lâminas examinadas sugeriu que o estímulo da radiação laser no

tecido, faz desencadear uma reação inflamatória mais intensa nos primeiros dias e mobiliza

36

células do exsudato inflamatório com mais facilidade. Ao mesmo tempo, o processo

cicatricial parece ser acelerado.

2.6 - Sistema de Medição

A operação de medição é realizada por um sistema de medição (SM), composto por

vários módulos.

O valor momentâneo do mensurado é descrito em termos de uma comparação com a

unidade padrão referenciado pelo SM. O resultado da aplicação deste SM ao mensurado é um

número acompanhado de uma unidade de Indicação (ALBERTAZZI, 2001).

Em termos genéricos, um SM pode ser dividido em três módulos funcionais: o

sensor/ transdutor, a unidade de tratamento do sinal e o dispositivo mostrador. Cada módulo

pode constituir uma unidade independente ou pode estar fisicamente integrada ao SM (FIG.3).

FIGURA 3: Sistema Generalizado de Medição (ALBERTAZZI, 2001).

O transdutor é o módulo do SM que está em contato com o mensurando. Gera um

sinal (mecânico, pneumático, elétrico ou outro) proporcional ao mensurando segundo uma

função bem definida, normalmente linear, baseada em um ou mais fenômenos físicos.

O sinal gerado pelo sensor/ transdutor normalmente é um sinal de baixa energia,

difícil de ser diretamente indicado. A unidade de tratamento do sinal (UTS), além da

amplificação da potência do sinal, pode assumir funções de filtragem, compensação,

integração, processamento, etc.

Mensurando

Sensor e/ ou

Transdutor

Unidade de

Tratamento de

Sinais

Dispositivo

Mostrador e/

ou

Registrador

Receptor

-

Sinal

proporcional

- Transforma

efeito físico

- Sinal de baixa

energia

-

Amplifica sinal

- Processa sinal

- Fonte de energia

para o transdutor

-

Torna o sinal

perceptível

37

O dispositivo mostrador recebe o sinal tratado e, através de recursos mecânicos,

eletro-mecânicos, eletrônicos ou outro qualquer, transforma-o em uma indicação direta

perceptível.

O procedimento de determinação do resultado de medição deverá ser realizado

com base no conhecimento aprofundado do processo que define o mensurando (o fenômeno

físico e suas características), no conhecimento do sistema de medição (características

metrológicas e operacionais) e no bom senso.

O operador e a técnica de operação empregada podem afetar a medição seja pelo

uso de força de medição irregular ou excessiva; por vícios de má utilização ou SM

inadequados que podem levar a erros imprevisíveis. A forma, tamanho ou faixa de medição

do SM pode não ser a mais indicada para aquela aplicação.

Ao se utilizar um sistema de medição para determinar um resultado é necessário

conhecer e considerar a faixa provável dentro da qual se situam estes efeitos indesejáveis –

sua incerteza – bem como levar em conta as variações do próprio mensurando. Portanto, o

resultado de uma medição não deve ser composto de apenas um número e uma unidade, mas

de uma faixa de valores e a unidade. Em qualquer ponto dentro desta faixa deve situar-se o

valor verdadeiro associado ao mensurando.

A incerteza de medição é definida como um parâmetro, associado ao resultado de

uma medição, que caracteriza a dispersão dos valores que podem ser fundamentadamente

atribuídos a um mensurando. A incerteza de medição compreende, em geral, muitos

componentes. Alguns destes componentes podem ser estimados com base na distribuição

estatística dos resultados das séries de medições e podem ser caracterizados por desvios

padrão experimentais. Os outros componentes, que também podem ser caracterizados por

desvios padrão, são avaliados por meio de distribuição de probabilidades assumidas, baseadas

na experiência ou em outras informações. Entende-se que o resultado da medição é a melhor

estimativa do valor do mensurando, e que todos os componentes da incerteza, incluindo

aqueles resultantes dos efeitos sistemáticos, como os componentes associados com correções

e padrões de referência, contribuem para a dispersão (INMETRO, 2003).

A Calibração é um Conjunto de operações que estabelece, sob condições

especificadas, a relação entre os valores indicados por um instrumento de medição ou sistema

de medição ou valores representados por uma medida materializada ou um material de

referência, e os valores correspondentes das grandezas estabelecidos por padrões. O resultado

de uma calibração permite tanto o estabelecimento dos valores do mensurando para as

indicações como a determinação das correções a serem aplicadas. Uma calibração pode,

38

também, determinar outras propriedades metrológicas como o efeito das grandezas de

influência (INMETRO, 2003).

Um sistema de medição (SM) de boa qualidade deve ser capaz de operar com

pequenos erros. Seus princípios construtivos e operacionais devem ser projetados para

minimizar erros sistemáticos e aleatórios ao longo da sua faixa de medição, nas suas

condições de operação nominais.

Entretanto, por melhores que sejam as características de um SM, este sempre

apresentará erros, seja por fatores internos, seja por ação das grandezas de influência externas

(ALBERTAZZI, 2001).

OLIVEIRA et al (2001) para analisar os resultados do uso de formulações de

confrei (symphytum officinale l.) na cicatrização de feridas cutâneas de ratos, utilizaram 48

animais da linhagem Wistar divididos em dois grupos, onde as feridas foram mensuradas nos

dias 0 (imediatamente após a cirurgia), 1, 3, 7, 12 e 18 de pós-operatório, com o auxílio de

paquímetro. A partir das medidas dos lados da ferida, obteve-se o valor de sua área, sendo

avaliada a contração da ferida através da seguinte fórmula: área inicial - área do dia da medida

÷ área inicial x 100 = percentual da contração no dia da medida.

OLIVEIRA (2005) realizou um trabalho com objetivo de apresentar uma

metodologia para análise da função tensão-deformação de elásticos ortodônticos, através de

uma avaliação experimental. Foi projetada e construída uma banca de teste de tensão-

deformação de elásticos intraorais e intermaxilares de látex dos tipos leve, médio e pesado.

Para avaliação dos dados, o autor utilizou um sistema de aquisição e tratamento de imagem no

visível. Esse sistema permitiu uma avaliação da evolução da deformação dos elásticos no

tempo, e também permitiu verificar a importância da primeira hora no uso dos elásticos. O

autor concluiu que o sistema utilizado permite a comparação entre os diversos modelos de

elásticos, além de possibilitar o armazenamento e reprodução das imagens. Afirmando que o

fato de utilizar um sistema em que o operador não influi tanto no resultado, garante uma

melhor repetitividade e reprodutividade dos resultados.

2.7 - Imagem Digital

Uma imagem digital significa uma representação numérica em forma matricial

bidimensional finita, cujas células (pixels) recebem valores correspondentes à intensidade

luminosa numa determinada região. A imagem digital possui elementos que podem ser

39

manipulados, processados e armazenados em mídia magnética e não pode ser caracterizada

somente como forma, cor e textura (SOBUE, 2005).

As imagens são produzidas por uma variedade de dispositivos físicos, tais como

câmeras e vídeo câmeras, equipamentos de radiografia, microscópios eletrônicos,

equipamento de ultra-som, entre vários outros. A produção e utilização de imagens podem ter

diversos objetivos, que vão do puro entretenimento até aplicações militares, médicas ou

tecnológicas. O objetivo da análise de imagens, seja por um observador humano ou por uma

máquina, é extrair informações úteis e relevantes para cada aplicação desejada

(ALBUQUERQUE et Al, 2004).

Em geral, a imagem pura, recém adquirida pelo dispositivo de captura, necessita

de transformações e realces que a torne mais adequada para que se possa extrair o conteúdo

de informação desejada com maior eficiência. O Processamento Digital de Imagens (PDI) é

um procedimento em que imagens são convertidas em matrizes de números inteiros, sendo

que cada elemento desta matriz é composta por um elemento fundamental: o pixel (uma

abreviação de picture element).

Um pixel é o elemento básico de dimensões finitas na representação de uma

imagem digital. (ALBUQUERQUE et Al, 2004).

A resolução do pixel é comumente chamada de quantização. Essa resolução do

pixel é função de um conversor analógico/digital. Sistemas de visão monocromáticos

normalmente utilizam 8 bits por pixel, fornecendo 256 niveis de cinza. Sistemas em cores

utilizam 8 bits para cada um dos três canais de cores primárias (vermelho, verde e azul)

fornecendo 16.777.216 possíveis cores. Quando se referencia 8 bits, significa 256

possibilidades de valores diferentes para cada componente. Assim, se são 3 componentes,

totalizará aproximadamente 16 milhões de cores possíveis (SCURI, 1999).

O histograma é uma função estatística da imagem que, para cada nível de

tonalidade, calcula quantos pixels existem naquela tonalidade. Muitas operações pontuais

usam o histograma como parâmetro de decisão para fornecer resultados diferentes para o pixel

da imagem processada. O histograma é bastante utilizado na etapa de segmentação,

principalmente, em técnicas que se utilizam da similaridade entre os pixels. Segmentar uma

imagem significa, de modo simplificado, separá-la em suas partes constituintes que se

diferenciam entre si.

A segmentação é um processo empírico e adaptativo que procura sempre se

adequar às características particulares de cada tipo de imagem e ao objetivo que se pretende

alcançar. De um modo geral, as técnicas de segmentação utilizam duas abordagens principais:

40

a similaridade entre os pixels e a descontinuidade entre eles. A binarização de imagens é uma

técnica de segmentação eficiente e simples sendo largamente utilizada em sistemas de visão

computacional. Este tipo de segmentação é utilizado quando as amplitudes dos níveis de cinza

são suficientes para caracterizar os objetos presentes na imagem. Na binarização um nível de

cinza é considerado como um limiar de separação entre os pixels que compõem os objetos e o

fundo. Nesta técnica, se obtém como saída do sistema, uma imagem binária, ou seja, uma

imagem com apenas dois níveis de intensidade: preto e branco. As técnicas baseadas em

descontinuidade entre os pixels procuram determinar variações abruptas do nível de

intensidade entre pixels vizinhos. Estas variações, em geral, permitem detectar o grupo de

pixels que delimitam os contornos ou bordas dos objetos na imagem (ALBUQUERQUE et al,

2004).

41

3 - METODOLOGIA

3.1 - Procedimento experimental

O modelo animal selecionado foi o rato albino da espécie Ratthus norvegicus,

classe Mammalia, ordem Roedentia, gênero Rattus, da linhagem Wistar, que é um animal

muito resistente às infecções, de fácil manuseio e manutenção.

Foram selecionados 30 ratos, fêmeas, com peso aproximado de 200 a 220 gramas

cada. Os ratos foram provenientes do Centro de Bioterismo do Instituto de Ciências

Biológicas da Universidade Federal de Minas Gerais.

Os 30 ratos foram divididos em 3 grupos: A, B, e C, compostos por 10 animais

cada. Em todos eles foram realizadas duas lesões padronizadas (direita e esquerda), no dorso.

O Grupo A (Bilateral) recebeu tratamento à Laser visível em baixa intensidade

(GaAlAs), bilateralmente (lados direito e esquerdo), enquanto o Grupo B (Unilateral) recebeu

tratamento à Laser visível em baixa intensidade, unilateralmente, no lado esquerdo. Já o

Grupo C (Controle) não recebeu nenhum tipo de tratamento.

Os animais foram mantidos no Biotério da Universidade Estadual de Montes

Claros, os quais permaneceram em ambiente com temperatura controlada, em gaiolas

composta por 3 animais, forradas com serragem branca trocada periodicamente. A dieta foi

livre e padronizada com a ração Labina e beberam água ad libidum.

Os ratos foram submetidos à anestesia geral com injeção de medicamento

chamado Telazol (Cloridrato de Zolazepam e Cloridrato de Tiletamina), na posologia de

0,10 ml/100g.

A tricotomia da região dorsal do animal foi realizada com a utilização de lâminas

de barbear comum, conforme FIG.4.

Após tricotomia na região dorsal, foi feita a anti-sepsia do campo operatório com

solução de Gluconato de Clorexidina a 2%.

42

FIGURA 4: Realização de tricotomia

As lesões padronizadas foram provocadas por um bastão cilíndrico de aço

inoxidável com 10 cm de comprimento e 1,0 cm de diâmetro, preso a uma haste de madeira

de 9 cm de comprimento e 3 cm de diâmetro, conforme FIG. 5.

FIGURA 5: Bastão utilizado para produzir a lesão

O bastão de aço foi resfriado, por 10 minutos, em Nitrogênio Líquido contido em

embalagem térmica de isopor conforme FIG.6 “a” e “b”. O processo foi repetido para cada

lesão.

43

(a)

(b)

FIGURA 6: O bastão sendo resfriado em Nitrogênio Liquido.

Após o tempo de resfriamento o bastão foi aplicado no dorso do rato por 1 minuto

(FIG.7).

FIGURA 7: Aplicação do bastão no dorso do animal por 1 minuto.

Os ratos foram numerados em pontos variados, no dorso, na cauda e nas orelhas

(FIG.7 “a”, “b” e “c”) para identificação e acompanhamento individual quanto à progressão

das lesões.

44

(a) (b)

(c)

FIGURA 8: Identificação do animal

Imediatamente após a aplicação do bastão resfriado no dorso do animal, ocorre um

congelamento dos tecidos na região da injúria cujos limites são bem delimitados pela

circunferência do bastão (FIG.9“a”).

Quando da segunda injúria feita no lado oposto, após 10 minutos, já é perceptível

o processo inflamatório instalado na primeira lesão, conforme se verifica na FIG.9 ”b”.

45

(a) (b)

FIGURA 9: Aspecto inicial das lesões

Porém, após uma hora da injúria, já se percebe uma irregularidade na delimitação

das lesões o que é decorrente do processo inflamatório imediato em associação à resposta

orgânica, individual de cada animal (FIG.10).

FIGURA 10: Aspecto da lesão após 1hora

O laser adotado para o tratamento das lesões possui as seguintes características:

Laser de baixa intensidade GaAlAs com 660 nm (vermelho), com potência de 28 mW e dose

de 4J/cm² (FIG.11). A potência do laser foi atestada no laboratório de bioengenharia da

faculdade de engenharia mecânica da UFMG por meio de um aparelho “Power meter -

46

NOVA

®

”. Esse laser foi empregado no experimento para que pudesse ser evidenciada sua

eficiência na aceleração do processo de cicatrização de feridas.

O laser foi aplicado com uma dose diária, nos dez primeiros dias.

FIGURA 11: Aparelho de laser utilizado

Para o desenvolvimento do experimento e conseqüente análise comparativa dos

resultados, com base nos objetivos propostos, foi definida a seguinte metodologia:

O Grupo A (Bilateral) foi submetido ao tratamento a laser nas duas lesões

(esquerda e direita);

O grupo B (Unilateral) foi submetido ao tratamento do laser somente na lesão do

lado esquerdo;

No Grupo C (Grupo Controle) não foi realizado nenhum tratamento, ou seja,

ocorreu a evolução natural de cicatrização.

As feridas foram analisadas macroscopicamente de acordo com a evolução do

processo de cicatrização avaliado pela redução das áreas das lesões ao longo do tempo.

A avaliação do processo de redução das lesões foi realizada através de duas

técnicas distintas quais sejam, medição com Paquímetro, já bastante utilizado em diversas

pesquisas e por um sistema de medição por Aquisição e Tratamento de Imagens no visível,

proposto no presente trabalho.

47

A análise de redução de lesão, com paquímetro, foi feita pela medida linear

transversal e horizontal da lesão e posterior cálculo da área, equivalente a uma elipse:

4

ba

A

×

=

π

Sendo a: medida horizontal e b: medida transversal, como na FIG.12 “a” e “b”. A

redução da área foi acompanhada ao longo dos dias, até a completa cicatrização.

(a) (b)

FIGURA 12: Medida horizontal (a) e transv

48

FIGURA 13: Equipamento para padronização das fotos

Para padronização dos registros das fotos os ratos foram anestesiados e mantidos

na mesma posição em um molde de papel individualizado para cada animal (FIG.14) e

adaptado ao suporte de acrílico preso a uma base de madeira.

As fotos foram realizadas com uma câmera digital da marca Sony com resolução

de 2304 x 1728 pixels, a uma distância de 11 cm (altura entre o dorso do rato até limite

inferior da maquina), padronizada para todos os ratos (FIG.15).

FIGURA 14- Molde de papel individualizado FIGURA 15-

Posicionamento dos rato

para cada animal para realização das fotos

49

Para padronização e maior confiabilidade dos registros das imagens tomou-se o

cuidado de estabelecer marcações de referência para posicionamento da maquina na haste

metálica e esta na base de madeira, conforme a FIG.16.

FIGURA 16: Padronização do registro da imagem

A FIG.17 “a” e “b” apresenta uma vista frontal e superior do registro de imagens,

ilustrando a adoção de procedimentos uniformes e criteriosos que permitem que os resultados

do estudo sejam decorrentes de dados confiáveis.

O programa utilizado para a captura de imagens foi o original da câmera Sony,

enquanto o programa para tratamento de imagens foi o Image-Pró Plus versão 3.2.

As fotos, depois de adquiridas, foram transferidas e armazenadas em um

microcomputador, onde foi feito um tratamento das imagens. O processo de redução da lesão

foi avaliado pelo calculo da área, obtido pela contagem do número de pixels dentro do

contorno da lesão multiplicado pelo valor da área de um pixel.

50

(a) (b)

FIGURA 17: Vista frontal e superior do registro da imagem

As aplicações do laser foram efetuadas com intervalos de 24 horas nos dez

primeiros dias. As medidas de redução das lesões foram realizadas em todos os grupos nos

dias 1º, 3°, 6°, 9º, 15º, 20º, 23º, 28º e 30° após a queimadura. A FIG.18 ilustra um momento

de aplicação do laser.

FIGURA 18: Aplicação do laser

51

A FIG.19 apresenta a bancada geral com alguns dos materiais utilizados.

FIGURA 19: Bancada geral: Paquímetro, equipamento para registro da imagem, Aparelho

de laser, tesoura, seringa, anestésico e óculos de proteção.

3.2 Calibração do Sistema de Medição

3.2.1 Calibração do Paquímetro

Para a técnica do Paquímetro a calibração foi realizada medindo-se as dimensões

individuais de 10 blocos padrões, onde foram realizados 09 (nove) ciclos de medição com

objetivo de registrar a Repetividade (95%) do paquímetro. Onde se concluiu que a incerteza

do Paquímetro é igual a

±

0,02 mm. O certificado de calibração do paquímetro encontra-se no

anexo A.

3.2.2 Calibração da Imagem

Antes de analisar as medições das lesões pelo método de sistema de aquisição e

tratamento de imagens, realizou-se a calibração da imagem para obtenção do tamanho e área

do pixel em mm, de acordo com a resolução da câmera digital e altura de 11 cm delimitada,

com auxílio do programa Image Pró Plus.

52

A calibração da imagem, para quantificação da dimensão do pixel, foi realizada no

Laboratório de Metrologia Dimensional do SENAI (Centro de Formação Profissional Euvaldo

Lodi), utilizando-se de um bloco padrão de Aço de 100 mm da marca Mitutoyo e número de

série 810972 (FIG.20). Foram realizadas fotos onde se capturaram imagens do bloco padrão

na mesma posição e altura das imagens realizadas com os ratos, e em seguida a mensuração

do bloco padrão utilizando a metodologia de tratamento de imagens.

FIGURA 20: Imagem do Bloco Padrão de 100 mm.

Para definir as dimensões do pixel, a imagem do bloco padrão foi adquirida e

tratada, utilizando o programa Image Pró Plus. Para o tratamento, a imagem original colorida

é transformada para escala de cinza com 8 bits, tornando a figura com 256 níveis de

intensidade (0 – 255). Em seguida a imagem é binarizada e passa a ter apenas duas

intensidades (preto e branco). Após a binarização, utilizou-se a função de medição Line

Profile. Essa função permite o uso de uma linha na qual são indicados os pontos para medir a

distância. As extremidades da linha passam sobre os pontos de referência, que são os limites

do bloco, o que permite observar o pixel de transição (branco/preto) da referência. Juntamente

com a linha, é fornecido um gráfico e uma tabela, onde é vista a quantidade de pixels

existentes entre os pontos de referência do bloco indicados pela linha. Com os dados

registrados na tabela gerada pela função Line Profile, obtem-se o número de pixels referentes

ao comprimento do bloco padrão, como observado na FIG.21.

53

FIGURA 21: Processo de tratamento de imagem para cálculo das dimensões de um pixel

(imagem escala de cinza e binarizada).

Para verificação do número de pixels na faixa de operação foram realizadas sete

medições, tendo como valor médio o número de 1921. A incerteza expandida com 95% de

confiabilidade foi de 0,12 mm (anexo B).

Para o cálculo do comprimento do pixel foi dividido o valor do comprimento do

bloco (100 mm) pelo número de pixels (1921), ou seja, 100/1921 que é igual a 0,052 mm.

Portanto, o resultado da calibração estabeleceu que 1 Pixel mede 0,052 mm de

comprimento, e sendo o pixel um quadrado, logo, a área equivalente corresponde a 0,052

multiplicado por 0,052. A área do pixel é 0,0027 mm².

3.3 - Tratamento da Imagem para Cálculo da Área da Lesão

O processo de tratamento de imagem ocorre da seguinte forma: a imagem original,

no formato JPEG, colorida, é transformada para escala de cinza com 8 bits, o que significa

que a figura fica com 256 níveis de intensidade (0 – 255). Em seguida a imagem é binarizada,

54

ou seja, passa a ter apenas duas intensidades (preto e branco), onde a medida 0 representa o

preto e a medida 255 representa o branco. No processo de binarização, após a transformação

da imagem em escala de cinza, foi definido como limite de intensidade um valor aproximado

de 90, ou seja, os valores de intensidade abaixo de 90 (0 – 90) passaram ao nível zero (preto)

e os valores de intensidade acima de 90 (90 – 255) passaram ao nível 255 (branco).

Assim faz-se uma delimitação rígida da região onde se quer medir. A binarização

facilita a definição dos pontos de referência do contorno da lesão, sendo todo o contorno e

interior da lesão demarcado por pixels pretos, e a área externa por pixels brancos, permitindo,

com isso, uma redução dos erros de localização dos pontos de extremidade da lesão e

demonstrando a eficiência no processo de medição FIG.22. Para o cálculo da área desejada

faz-se a contagem do número de pixels pretos presentes no interior do formato da lesão e

multiplica pelo valor da área de um pixel, definida anteriormente, ou seja:

mm² 0,0027 x Pixels de N lesão da Área °=

A redução da área foi acompanhada ao longo dos dias, até a completa cicatrização.

FIGURA 22: Tratamento da imagem para cálculo da área da lesão. Imagem colorida, em escala de cinza e

binarizada.

55

4- RESULTADOS E DISCUSSÕES

As feridas foram analisadas macroscopicamente de acordo com o registro das

áreas evidenciadas pela reação orgânica à inflamação provocada pela ação da queimadura

pelo bastão resfriado em nitrogênio liquido. O processo de evolução de cicatrização das

feridas nos ratos foi analisado pela redução das áreas das lesões ao longo do tempo, através de

duas técnicas distintas de medição: com Paquímetro e com um Sistema de Medição por

Aquisição e Tratamento de Imagens no visível, proposto no presente trabalho. A redução da

área foi acompanhada ao longo dos dias, até a completa cicatrização.

Para a técnica de Aquisição e Tratamento de Imagens, para observação e registro

da evolução do processo de cicatrização das feridas, foram realizadas sucessões de

fotografias, as quais depois de armazenadas no computador tiveram suas imagens tratadas, o

que permitiu a análise da evolução do processo de cicatrização pela avaliação da redução das

áreas ao longo dos dias.

Para o registro uniforme das observações das feridas, houve a necessidade de uma

padronização das informações, obtida com a decisão de adotar como valor medidas das áreas

em percentuais. Após esta decisão, fez-se necessário o estabelecimento do parâmetro-

referência ou marco inicial, ou seja, todas as medidas do primeiro dia passaram a ter valor

“1”.

Esta padronização adotada foi concebida e utilizada objetivando evitar diferenças

conseqüentes de processo inflamatório desenvolvido por cada rato logo após a injúria

provocada pelo bastão de aço resfriado em nitrogênio liquido. Apesar de o bastão ser de

diâmetro bem delimitado e o tempo de contato deste com a pele dos ratos ter sido também

padronizado, os ratos reagem física e biologicamente de maneiras diferentes, o que pode

provocar variações das medidas iniciais das áreas.

Por conseguinte, tornou-se conveniente a adoção de medida em percentual. Essa

avaliação efetuada em relação ao percentual de redução das áreas, propiciou uma análise mais

eficiente quanto ao grau de cicatrização das lesões ao longo dos dias, que foram estipulados

como 1º, 3º, 6º, 9º, 15º, 20º, 23º, 28º e 30º dias.

A medida referente ao primeiro dia, foi realizada 1 (uma) hora após a produção da

lesão.

Para avaliação dos resultados e esclarecimentos dos objetivos propostos foram

estabelecidas as seguintes análises, para cada Sistema de Medição proposto:

56

1) Grupo A (Bilateral) x Grupo C (Controle): Esta análise foi definida

objetivando analisar se a irradiação de feridas com laser de baixa intensidade, na forma

adotada, acelera o processo de cicatrização das feridas do Grupo A, que recebera tratamento

nas duas lesões. Essa análise foi feita pela comparação com a cicatrização das lesões do

Grupo C que não recebera nenhum tipo de tratamento ao longo dos dias, ou seja, a

cicatrização teve evolução natural.

2) Grupo (B) Unilateral - Lesão Esquerda x Lesão Direita: Esta análise,

também comparativa, foi definida para avaliar a evolução da cicatrização das feridas

produzidas neste Grupo de ratos, pela observação da redução das lesões esquerdas submetidas

ao tratamento a laser, em comparação com a redução das lesões direitas que não foram

irradiadas.

3) Grupo (C) Controle x Grupo (B) Unilateral, subgrupo Lesão Direita: Esta

análise foi definida para avaliar a ocorrência de efeito sistêmico benéfico da ação do laser

através da evolução do processo de cicatrização da lesão direita do Grupo B, em conseqüência

ao laser aplicado na lesão esquerda do mesmo Grupo, estabelecendo comparação com a

evolução do processo de cicatrização das lesões do Grupo C que teve a cicatrização

decorrente de evolução natural.

Em conseqüência às técnicas de medição adotadas, foi estabelecido como objetivo

a busca de uma eficiência metrológica para a medição das lesões e análise dos resultados. Os

registros efetuados pelas duas técnicas permitiram a realização da Análise Metrológica,

comparativa, pela aferição da equivalência das medidas das áreas obtidas através do

Paquímetro em relação às medidas das áreas definidas pela Técnica de Aquisição e

Tratamento de Imagens.

Através de avaliação dos resultados das comparações dos grupos, foi estabelecido

como objetivo também, uma análise da influência do laser em baixa intensidade na velocidade

de cicatrização das feridas ao longo do tempo.

4.1-

Método Estatístico

Para análise estatística dos resultados, definiu-se como variável dependente a

“Área da lesão” (em percentual) e como variáveis independentes, o “Tempo” (em dias) e o

“Grupo”, categorizado em grupo: controle, bilateral e unilateral.

57

Em função deste delineamento composto por grupos distintos (Controle, Bilateral

e Unilateral) nos quais a variável dependente - “Área da lesão” - foi avaliada em 9 (nove)

momentos (1°, 3°, 6°, 9°, 15°, 20°, 23°, 28°, 30° dias), entendeu-se conveniente a utilização

da técnica estatística Split-plot Anova (SPANOVA), uma das derivações da análise de

variância.

Com esta técnica, própria para delineamentos mistos, pretendeu-se avaliar as

diferenças da “Área da lesão” entre os grupos distintos, nos quais a “Área da lesão” foi

mensurada mais de uma vez. Para avaliar onde se encontram as diferenças, tornou-se

necessário realizar testes de hipóteses paralelas, no caso o teste “t” de Student. Este teste foi

executado para cada momento de comparação dos grupos, a fim de analisar as diferenças

observadas.

Este teste -“t” de Student”- foi utilizado para amostras independentes e para

amostras pareadas quando os grupos comparados eram distintos ou correlacionados,

respectivamente.

Neste teste definiu-se a hipótese nula como sendo aquela em que “não há diferença

entre as médias das áreas dos grupos comparados” e, como hipótese alternativa, aquela em

que “há diferenças entre as médias das áreas dos grupos comparados”. O nível de

probabilidade de significância adotado foi de 5% (p < 0,05).

A análise estatística através do teste “t” de Student permite considerar que os

resultados acima do valor “p” do nível de significância representam igualdade das

comparações ou nenhuma diferença significativa. Contrariamente, os resultados obtidos

abaixo desse valor “p” representam a existência de uma diferença significativa entre os grupos

comparados que, nesse estudo, se traduz em processos diferentes da evolução da cicatrização

das feridas, em função das áreas percentualmente consideradas.

As tabelas descritivas do teste “t” de Student, com a análise dos resultados tanto

pelo método do paquímetro quanto pelo sistema de aquisição e tratamento de imagens, estão

apresentadas no anexo G.

Para descrição das amostras, foram calculadas as médias e os desvios-padrão da

variável dependente “Área da lesão”, para cada grupo, em momentos distintos. E para

representação gráfica destes resultados foram construídos os seus respectivos gráficos de

linhas.

Para essa análise estatística foi utilizado o Programa SPSS versão 11.0.

58

4.2

-

Resultados das análises

Os dados obtidos por cada técnica de medição para avaliação da evolução do

processo de cicatrização, pelo decréscimo das médias das áreas das lesões, dos grupos

comparados em cada dia, ao longo dos 9 momentos de tempo (1º, 3º, 6º, 9º, 15º, 20º, 23º, 28º

59

TABELA 1: Imagem – Controle x Bilateral

20 1,000 ,000 1,000

20 1,000 ,000

20 ,824 ,200 ,246

20 ,760 ,139

20 ,818 ,116 ,000

20 ,644 ,107

20 ,654 ,097 ,000

20 ,492 ,140

20 ,276 ,064 ,000

20 ,141 ,056

20 ,124 ,043 ,000

20 ,070 ,032

20 ,057 ,031 ,000

20 ,011 ,012

20 ,016 ,015 ,000

20 ,000 ,000

20 ,000 ,000 1,000

20 ,000 ,000

Grupo

controle

bilateral

controle

bilateral

controle

bilateral

controle

bilateral

controle

bilateral

controle

bilateral

controle

bilateral

controle

bilateral

controle

bilateral

Tempo

1° dia

3° dia

6° dia

9° dia

15° dia

20° dia

23° dia

28° dia

30° dia

n Média Desvio -padrão Valor-p

Os resultados do teste estatístico, apresentados na TAB.1, estão indicados na

coluna de “valor-p”, onde se observam diferenças estatisticamente significantes entre as áreas

do grupo controle e bilateral nos seguintes dias: 6° dia (valor-p = 0,000), 9° dia (valor-p =

0,000), 15º dia (valor-p = 0,000), 20° dia (valor-p = 0,000), 23° dia (valor-p = 0,000) e 28° dia

(valor-p = 0,000).

Por esta análise de comparação das áreas das vinte lesões de cada grupo,

expandida para uma população teoricamente infinita, fornecida pelo teste adotado, percebe-se

que a partir do 6º dia houve uma evolução de cicatrização significativamente favorável ao

tratamento com laser nas lesões do Grupo Bilateral, em comparação ao Grupo Controle, pela

confirmação de resultados obtidos do valor-p abaixo de 0,05. No 30º dia todas as lesões

estavam cicatrizadas.

Os dados da TAB.1 sugerem que as áreas das lesões diminuem mais rapidamente

no grupo bilateral, em comparação ao grupo controle.

O GRAF.1 representa uma comparação da evolução da cicatrização das lesões dos

Grupos Controle e Bilateral, em relação à redução das áreas em função do tempo.

60

GRÁFICO 1: Imagem - Evolução da Cicatrização nos Grupos Controle e Bilateral

4.2.1.2 – Imagem - Grupo Unilateral: Esquerdo x Direito

O Grupo Unilateral foi comparado quanto às diferenças entre os percentuais das

áreas das lesões do lado esquerdo e direito, com intuito de evidenciar se, no mesmo rato, a

lesão esquerda irradiada com o laser tem um processo de cicatrização mais acelerado do que a

lesão direita. Para fazer essa comparação, foi realizado o teste t de Student para amostras

pareadas, que avaliou a média das diferenças (esquerdo – direito) dos percentuais das áreas

das lesões em cada momento, nos 10 ratos do grupo.

A TAB.2 apresenta as medidas descritivas das áreas das lesões expressas em

percentuais, e os seus respectivos desvios-padrão dos lados esquerdo e direito, nos 9 (nove)

momentos em que elas foram avaliadas.

A TAB.2 mostra também os valores “p” ao longo dos dias, como resultado do teste

t para amostras pareadas, onde se observam diferenças estatisticamente significantes entre os

percentuais de das áreas das lesões somente nos seguintes dias: 6° dia (valor-p = 0,01) e 9° dia

(valor-p = 0,005), ou seja, as lesões esquerdas tiveram um processo de cicatrização parecido

com o das lesões direitas. Sendo, portanto, observado uma aceleração de cicatrização nas

lesões esquerdas, que foram irradiadas com laser, apenas do sexto dia ao nono dia. Tendo sido

evidenciado com isso que ocorre um efeito sistêmico benéfico do laser aplicado na lesão

esquerda, que provavelmente produz uma resposta orgânica que favorece a cicatrização da

lesão direita. Porém, o efeito direto luz laser nas lesões esquerdas, parece ter estimulado a

regeneração tecidual de maneira mais efetiva nos dez primeiros dias, tendo ocorrido depois

um comportamento parecido, quanto ao processo de cicatrização, com as lesões direitas.

61

TABELA 2: Imagem – Grupo Unilateral: Lesão Esquerda x Lesão Direita

1,000 10 ,000 1,000

1,000 10 ,000

,668 10 ,122 ,069

,713 10 ,115

,503 10 ,056 ,010

,606 10 ,119

,393 10 ,086 ,005

,490 10 ,145

,088 10 ,070 ,241

,118 10 ,091

,026 10 ,021 ,544

,031 10 ,036

,004 10 ,008 ,234

,002 10 ,003

,000 10 ,000 1,000

,000 10 ,000

,000 10 ,000 1,000

,000 10 ,000

Tempo Lateralidade

esquerdo

direito

1° dia

esquerdo

direito

3° dia

esquerdo

direito

6° dia

esquerdo

direito

9° dia

esquerdo

direito

15°

dia

esquerdo

direito

20°

dia

esquerdo

direito

23°

dia

esquerdo

direito

28°

dia

esquerdo

direito

30°

dia

Média n Desvio-padrão Valor-p

Os dados da TAB.2 acima indicam que as lesões esquerdas tiveram um processo

de cicatrização parecido com as lesões direitas.

O GRAF.2 representa uma comparação da evolução da cicatrização das lesões

Esquerda e Direita do Grupo Unilateral, em relação à redução das áreas em função do tempo.

GRAFICO 2: Imagem - Evolução de Cicatrização das Lesões Esquerdas e Direitas do Grupo Unilateral

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1°

3° 6°

9° 15°

20° 23°

28° 30°

Tempo (Dia)

Percentual da área da l

esão

Unilateral direito

Unilateral esquerdo

62

4.2.1.3 Imagem - Grupo Controle x unilateral direito

A análise a seguir apresenta os resultados das comparações feitas em cada um dos

9 (nove) momentos, onde se avaliou a diferença das médias dos percentuais das áreas das

lesões entre o Grupo Controle (vinte lesões) e as lesões do Lado Direito do Grupo Unilateral

(dez lesões).

Esta análise permite atestar o efeito sistêmico do laser, observado através da

estimulação da reparação tecidual das Lesões Direitas do Grupo Unilateral, em função da

irradiação nas Lesões Esquerdas do mesmo Grupo. A aferição e reafirmação do efeito

sistêmico são possíveis pela verificação da evolução dos processos de cicatrização já que nem

as lesões direitas do grupo unilateral nem as lesões dos ratos do grupo Controle receberam

qualquer tipo de irradiação ou tratamento direto.

A TAB.3 apresenta as medidas descritivas dos percentuais das áreas segundo o

grupo e o momento da medição, e seus respectivos desvios-padrão.

TABELA 3: Imagem – Controle x Unilateral direito

Tempo Grupo n Média Desvio-padrão Valor-

p

1º dia controle

unilateral

direito

20

10

1,000

,000

1,000

3º dia controle

unilateral

direito

20

10

,824

,713

,200

,115

,056

6º dia controle

unilateral

direito

20

10

,818

,606

,116

,119

,000

9º dia controle

unilateral

direito

20

10

,654

,490

,097

,145

,001

15º dia controle

unilateral

direito

20

10

,276

,118

,064

,091

,000

20º dia controle

unilateral

direito

20

10

,124

,031

,043

,036

,000

23º dia controle

unilateral

direito

20

10

,057

,002

,031

,003

,000

28º dia controle

unilateral

direito

20

10

,016

,000

,015

,000

,003

30º dia controle

unilateral

direito

20

10

,000

1,000

63

Na TAB.3 estão apresentados também os resultados do teste t de Student, onde se

observa diferença estatisticamente significante entre os percentuais das áreas do Grupo

Controle e do Lado Direito do Grupo Unilateral, nos momentos listados a seguir: 6° dia

(valor-p = 0,000) , 9° dia (valor-p = 0,001) , 15° dia (valor-p = 0,000) e 20° dia (valor-p =

0,000), 23° dia (valor-p = 0,000) e no 28° dia (valor-p = 0,003).

Observa-se, portanto, uma verificação da aceleração do processo de cicatrização

das Lesões Direitas do Grupo Unilateral conseqüente da redução mais rápida das áreas das

lesões em comparação ao Grupo Controle, ao longo de praticamente todos os dias, sendo que

o valor-p de 0,056 do 3º dia ficou muito próximo do valor de significância adotado que foi de

0,05.

Este resultado sugere que o efeito sistêmico do Laser provoca ativação na

reparação tecidual das Lesões Direitas do Grupo Unilateral já a partir do 3º dia, quando em

comparação com o Grupo controle. Considera-se que as lesões do grupo Unilateral

cicatrizaram no 23º dia, enquanto que as lesões do Grupo Controle cicatrizaram no 28º dia.

Os dados da TAB.3 indicam que as áreas das lesões direitas do grupo unilateral

diminuíram mais rapidamente do que as do grupo controle.

O GRAF.3 representa a evolução do processo de cicatrização das lesões do Grupo

Controle em comparação as Lesões Direitas do Grupo Unilateral, em relação à redução das

áreas percentuais em função do tempo.

GRÁFICO 3: Imagem - Evolução de cicatrização no Grupo Controle e nas Lesões Direitas do

Grupo Unilateral.

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1° 3°

6°

9°

15°

20° 23°

28° 30°

Tempo (Dia)

Percentual da área da lesão

Controle

Unilateral direito

64

Ressalte-se que pela análise dos registros é possível constatar uma maior

aceleração do processo de cicatrização das lesões direitas do Grupo Unilateral em relação à

evolução do processo de cicatrização das lesões nos ratos do grupo Controle. Sendo isso

possível pela resposta orgânica favorável à irradiação direta na lesão esquerda, o que se traduz

no conseqüente efeito sistêmico do tratamento com o laser.

4.2.2 -Análise Pela Técnica do Paquímetro

4.2.2.1 –Paquímetro - Grupo Controle x Grupo Bilateral

A TAB.4 apresenta as médias e os desvios-padrão obtidos a partir do total das

áreas, medidas pelo paquímetro em mm² e convertidas em percentual, das lesões de cada

grupo, ou seja, Grupos Controle (C) e Bilateral (A), compostos de 10 ratos, com duas lesões

cada, totalizando, em conseqüência, 20 lesões por grupo (valor “n”) cujas áreas foram

medidas pelo paquímetro em mm² e, posteriormente, convertidas em percentual, com adoção

da medida-referência “1,000”, estabelecida para o primeiro dia.

TABELA 4: Paquímetro – Grupo Controle x Grupo Bilateral

20 1,000 ,000 1,000

20 1,000 ,000

20 ,835 ,129 ,006

20 ,727 ,105

20 ,711 ,126 ,001

20 ,588 ,082

20 ,564 ,106 ,003

20 ,463 ,094

20 ,279 ,114 ,002

20 ,180 ,046

20 ,156 ,075 ,025

20 ,108 ,052

20 ,090 ,083 ,021

20 ,039 ,047

20 ,016 ,070 ,324

20 ,000 ,000

20 ,000 ,000 1,000

20 ,000 ,000

Grupo

controle

bilareral

controle

bilareral

controle

bilareral

controle

bilareral

controle

bilareral

controle

bilareral

controle

bilareral

controle

bilareral

controle

bilareral

Tempo

1° dia

3° dia

6° dia

9° dia

15° dia

20° dia

23° dia

28° dia

30° dia

n Média Desvio-padrão Valor-p

65

Os resultados do teste t de Student estão apresentados na TAB.4, na qual

observam-se diferenças estatisticamente significantes entre as áreas do grupo controle e

bilateral nos seguintes dias: 3° dia (valor-p = 0,006) , 6° dia (valor-p = 0,001), 9° dia (valor-

p = 0,003), 15° dia ( valor-p = 0,002), 20º dia (0,025), 23° dia ( valor-p = 0,021), ou seja, por

esta análise de comparação das áreas das lesões de cada grupo, percebe-se que a partir do 3º

dia houve uma qualidade de cicatrização significativamente favorável ao tratamento com laser

nas lesões do Grupo Bilateral, em comparação às lesões do Grupo Controle. A partir do 28º

dia pode-se considerar que todas as lesões estavam cicatrizadas.

Os dados da TAB.4 sugerem que as áreas das lesões do grupo bilateral diminuem

mais rapidamente, em comparação ao grupo controle.

O GRAF.4 representa uma comparação da evolução da cicatrização das lesões dos

Grupos Controle e Bilateral, em relação à redução das áreas percentuais, extraídas da medição

com o paquímetro, em função do tempo.

GRÁFICO 4: Paquímetro - Evolução de cicatrização no Grupo Controle e no Bilateral

4.2.2.2 - Paquímetro – Grupo unilateral: Esquerdo x Direito

O Grupo Unilateral foi comparado quanto às diferenças entre os percentuais das

áreas das lesões do Lado Esquerdo e Direito.

Essa avaliação comparativa foi possível pela realização do teste “t de Student

indicado para amostras pareadas, que avaliou a média das diferenças (esquerdo – direito) dos

percentuais das áreas das lesões em cada momento.

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1°

3°

6°

9°

15° 20° 23°

28°

30°

Tempo (Dia)

Percentual da área da lesão

Controle

Bilateral

66

A TAB.5 apresenta as medidas descritivas das médias das áreas das lesões

registradas pelo paquímetro, e convertidas em percentuais, dos lados esquerdo e direito nos 9

(nove) momentos em que elas foram avaliadas, e seus respectivos desvios-padrão. Como

foram comparadas as Lesões Esquerdas com as Direitas dos 10 (dez) ratos do mesmo Grupo

Unilateral, o valor “n” é dez para cada subgrupo analisado. Essas medidas referem-se à média

das 10 lesões direitas e esquerdas dos 10 ratos integrantes do Grupo. As lesões foram,

conforme proposição inicial, convertidas em percentual em relação à medida–referência ou

padronizada igual a “1,000”, equivalente ao primeiro dia.

TABELA 5: Paquímetro – Grupo Unilateral: Lesão Esquerda x Lesão Direita

1,000 10 ,000 1,000

1,000 10 ,000

,700 10 ,104 ,160

,775 10 ,108

,547 10 ,086 ,200

,601 10 ,098

,445 10 ,076 ,063

,507 10 ,081

,129 10 ,082 ,458

,113 10 ,090

,035 10 ,033 ,959

,036 10 ,049

,000 10 ,000 1,000

,000 10 ,000

,000 10 ,000 1,000

,000 10 ,000

,000 10 ,000 1,000

,000 10 ,000

Tempo Lateralidade

esquerdo

direito

1° dia

esquerdo

direito

3° dia

esquerdo

direito

6° dia

esquerdo

direito

9° dia

esquerdo

direito

15° dia

esquerdo

direito

20° dia

esquerdo

direito

23° dia

esquerdo

direito

28° dia

esquerdo

direito

30° dia

Média n Desvio-padrão Valor-p

A TAB.5 mostra também o resultado do teste t para amostras pareadas, onde não

se observam diferenças estatisticamente significantes nos percentuais das áreas do lado

esquerdo em comparação com o direito, ao longo de todo o tempo, pela análise dos valores

“p”. Contudo, no 9º dia houve um valor-p de 0,063 que foi bem aproximado do nível de

significância adotado neste presente trabalho, o qual foi de valor-p < 0,05, podendo sugerir

que nesse dia o Subgrupo Esquerdo teve uma cicatrização melhorada em relação ao

Subgrupo Direito.

Os dados da TAB.5 sugerem que não houve diferença estatisticamente significante

na diminuição das áreas esquerda e direita do grupo unilateral.

67

O GRAF.5 representa uma comparação da evolução da cicatrização das lesões

Esquerdas e Direitas do Grupo Unilateral, em relação à redução das áreas percentuais,

extraídas da medição com o paquímetro, em função do tempo.

GRÁFICO 5: Paquímetro - Evolução de cicatrização nas Lesões Esquerdas e Direitas do Grupo

Unilateral

4.2.2.3 – Paquímetro - Grupo Controle x Unilateral Direito

A TAB.6 apresenta as medidas descritivas dos percentuais das médias das áreas

das Lesões do Grupo Controle (n = 20) e das Lesões Direitas do Grupo Unilateral (n=10),

para cada momento fixado. Através do teste t foram verificados os resultados das

comparações feitas em cada um dos 9 momentos, onde se avaliou a diferença das médias dos

percentuais das áreas das lesões entre o Grupo Controle e as Lesões do Lado Direito do Grupo

Unilateral.

Na TAB.6 estão apresentados os resultados do teste t, onde se observa diferença

estatisticamente significante entre os percentuais das áreas do Grupo Controle e do Lado

Direito do Grupo Unilateral, nos seguintes momentos: 6° dia (valor-p = 0,022), 15° dia (valor-

p = 0,000) , 20° dia (valor-p = 0,000) e 23° dia (valor-p = 0,002).

Portanto, houve uma verificação da aceleração do processo de cicatrização das

Lesões Direitas do Grupo Unilateral, que tiveram uma redução mais rápida das áreas em

comparação ao Grupo Controle, ao longo de quase todos os dias, exceção do 3º e 9º dia. As

lesões do Grupo Unilateral cicatrizaram no 23º dia, enquanto que as do Grupo controle no

28ºdia.

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1°

3° 6°

9°

15°

20° 23°

28° 30°

Tempo (Dia)

Percentual da área da lesão

Unilateral direito

Unilateral esquerdo

68

Os dados da TAB.6 sugerem que as áreas das lesões direitas do Grupo Unilateral

diminuem mais rapidamente do que as do Grupo Controle.

TABELA 6: Paquímetro – Grupo Controle x Lesões Direitas do Grupo Unilateral

20 1,000 ,000 1,000

10 1,000 ,000

20 ,835 ,129 ,216

10 ,775 ,108

20 ,711 ,126 ,022

10 ,601 ,098

20 ,564 ,106 ,148

10 ,507 ,081

20 ,279 ,114 ,000

10 ,113 ,090

20 ,156 ,075 ,000

10 ,036 ,049

20 ,090 ,083 ,002

10 ,000 ,000

20 ,016 ,070 ,489

10 ,000 ,000

20 ,000 ,000 1,000

10 ,000 ,000

Grupo

controle

unilateral direito

controle

unilateral direito

controle

unilateral direito

controle

unilateral direito

controle

unilateral direito

controle

unilateral direito

controle

unilateral direito

controle

unilateral direito

controle

unilateral direito

Tempo

1° dia

3° dia

6° dia

9° dia

15° dia

20° dia

23° dia

28° dia

30° dia

n Média Desvio-padrão Valor-p

O GRAF.6 representa uma comparação da evolução de cicatrização das lesões do

Grupo Controle em comparação com as Lesões Direitas do Grupo Unilateral, em relação à

redução das áreas percentuais em função do tempo.

GRÁFICO 6: Paquímetro - Evolução de cicatrização no Grupo Controle e nas Lesões

Direitas do Grupo Unilateral

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1° 3° 6° 9° 15° 20° 23° 28° 30°

Tempo (Dia)

Percentual da área da lesão

controle

unilateral direito

69

4.2.3 Análise Metrológica

O objetivo primordial desta análise é a aferição da eficácia do método proposto.

Esta eficácia foi testada pela comparação das medidas obtidas através do paquímetro, método,

tradicionalmente, utilizado e através do Sistema de Aquisição e Tratamento de Imagens,

método inovador proposto no presente trabalho.

Para tanto, foram incluídas para o teste todas as 60 lesões cujas medidas foram

consideradas não em percentual, mas em mm². Essas medidas, obtidas através do paquímetro

e pela contagem do número de pixels, foram assim consideradas (mm²) em função da

necessária e melhor comparação entre os registros das duas medições.

4.2.3.1 - Resultados da análise: Área Paquímetro x Área Imagem.

A TAB.7 apresenta as medidas descritivas das médias de todas as áreas das 60

(sessenta) lesões, registradas pela técnica do Paquímetro e pela técnica de Aquisição e

Tratamento de Imagens e os seus respectivos desvios-padrão. Os resultados do teste t de

Student são apresentados na coluna de valor-p.

TABELA 7: Paquimetro x Imagem

Tempo Método Média n Desvio-padrão Valor-p

1º dia paquímetro

imagem

163,217

154,382

60

28,854

25,108

0,035

3º dia paquímetro

imagem

123,206

115,936

60

19,488

25,043

0,004

6º dia paquímetro

imagem

100,224

102,334

60

17,802

22,143

0,248

9º dia paquímetro

imagem

80,968

80,739

60

17,847

23,459

0,891

15º dia paquímetro

imagem

30,573

25,943

60

15,059

14,171

0,001

20º dia paquímetro

imagem

15,458

10,980

60

10,633

7,230

0,000

23º dia paquímetro

imagem

6,237

3,278

60

8,988

4,022

0,003

28º dia paquímetro

imagem

0,596

0,654

60

4,613

1,362

0,923

30º dia paquímetro

imagem

0,000

60

0,000

1,000

70

Para analisar se as técnicas produzem os mesmos resultados, foram comparadas as

áreas das lesões mensuradas com o paquímetro e as respectivas áreas obtidas pela contagem

do número de pixels.

Para isto, foram calculadas as dife7absis9wcal1(ar )-33(se)13cales, fc0(ra-22(u)-50()]TJ a de)-1e pixe

71

Os momentos onde não houve diferenças significativas foram justamente nos dias

onde as feridas estão mais bem definidas, com presença de crosta bem estabelecida e de fácil

delimitação e medição tanto pela técnica do paquímetro quanto pelo tratamento da imagem,

sendo que o valor da área média no 6° dia, em torno de 100 mm², e no 9 ° dia, em torno de 80

mm², confirma a quase igualdade das medições nesses momentos. No 28º dia todas as Lesões

estão praticamente cicatrizadas, através das medições pelas duas técnicas.

Entretanto, pelos dados avaliados anteriormente, qualitativamente as lesões em

geral se comportaram com a mesma tendência de evolução de cicatrização, tanto pelo método

de análise com paquímetro quanto pelo sistema de aquisição e tratamento de imagem. Tendo

variação quantitativa no valor de cada área. Portanto, o efeito benéfico do laser é atestado

tanto pela técnica do Paquímetro quanto pela técnica de Aquisição e Tratamento de Imagens,

mesmo que os valores absolutos das áreas obtidos por essas técnicas não tenham sido

equivalentes. Considerando com isso, que houve uma certa coerência na execução do

procedimento de medição registrado por cada técnica. Porém, com algumas dificuldades

apresentadas pela técnica do Paquímetro, devido à complexidade do processo de cicatrização

das lesões, que resulta em contração da ferida de maneira irregular, ás vezes com aspecto

estrelado, que descaracteriza o formato pré-determinado de uma elipse para o cálculo da área.

Mesmo sendo sempre o mesmo examinador para a realização das medições com o

paquímetro, às vezes torna-se difícil, em face ao grande numero de animais e ao variado

processo de contração das feridas decorrente da evolução da cicatrização inerente ao

mecanismo biológico individualizado de cada animal, registrar os pontos de referência para as

margens da demarcação horizontal e transversal utilizando o paquímetro para a medida da

área de determinada lesão ao longo dos dias. O que não ocorre com o Sistema de Tratamento

das Imagens, devido a binarização, que torna evidente a delimitação do contorno da lesão pelo

contraste, preto no interior da ferida e branco na área externa da imagem selecionada,

facilitando com isso a contagem do número de pixels pretos, através do uso do programa

apropriado, para cálculo da referida área.

A FIG.23 (a) ilustra um momento da cicatrização das feridas, as quais se

apresentam com formato equivalente a uma elipse, bem definidas e com estabelecimento da

crosta de fácil delimitação e medição tanto pela técnica do paquímetro quanto pela técnica de

Aquisição e Tratamento de Imagem, como observado após a binarização na FIG.23 (b).

72

(a) (b)

FIGURA 23: Ferida com crosta bem definida (a), e após a sua binarização (b).

A FIG.24 apresenta o momento da utilização do paquímetro para registro das

medidas transversal (a) e horizontal da ferida (b), por volta do 6º dia, onde se percebe uma

boa definição dos limites referenciais dos bordos da lesão, pela característica da crosta da

ferida, que permite um resultado confiável para o cálculo da área com essa técnica.

(a) (b)

FIGURA 24: Medida Transversal (a) e horizontal (b) com Paquímetro

Para o calculo da área da ferida superior da FIG.24 (como exemplo), desenvolveu-

se as seguintes equações com referência nas medidas registradas com Paquímetro e com a

técnica de tratamento de imagem, pela contagem do número de pixels:

73

Paquímetro:

4

ba

A

×

=

π

4

7,92,13

×

=

π

A

4

4,128

×

=

π

A

mm² 51,100

=

A

Onde “A” representa a área, “a” a medida horizontal e “b” a medida transversal.

Análise de Imagem:

pixel) um de (área constante x lesão dainterior no pixels de Nº

=

A

0,00271 · 36.697

=

A

mm² 99,44

=

A

Nota-se que as técnicas utilizadas para medição de área neste caso revelaram

resultados semelhantes.

A FIG.25 evidencia a qualidade de definição da área da lesão após a binarização, e

revela após demarcação dos bordos de referência, que o formato de uma elipse permite o uso

técnica do paquímetro com eficiência nesses casos, com resultado semelhante à técnica de

Tratamento de Imagem.

FIGURA 25: Delimitação da lesão após binarização, e evidência da área com

aspecto de uma elipse.

Na FIG.26 (a) observa-se uma lesão que apresenta uma contração dos bordos

como uma reação biológica característica da evolução do processo de cicatrização, tornando o

74

aspecto irregular, diferente do formato inicial equivalente a uma elipse, proposto para o

cálculo da referida área utilizando a técnica do Paquímetro. Enquanto que na FIG.26 (b)

mostra a lesão após o processo de tratamento da imagem através da binarização, que

possibilita demarcar a lesão de preto, onde se percebe nitidamente o contorno bem delimitado

da ferida, permitindo o cálculo da referida área de maneira mais confiável pela técnica que

utiliza a contagem do numero de pixels no interior do formato evidenciado.

(a) (b)

FIGURA 26: Ferida com aspecto irregular (a), a após sua binarização (b).

A FIG.27 apresenta o momento da utilização do paquímetro para registro das

medidas transversal (a) e horizontal da ferida (b), onde fica evidente a dificuldade de

determinar os limites referenciais dos bordos da lesão, para o cálculo da área.

(a) (b)

FIGURA 27: Medida Transversal (a) e horizontal (b) com Paquímetro

75

Para o calculo da área da ferida inferior da FIG.27, desenvolveu-se as seguintes

equações com referência nas medidas registradas com Paquímetro e com a técnica de

tratamento de imagem, pela contagem do número de pixels:

Paquímetro:

4

ba

A

×

=

π

4

5,92,7

×

=

π

A

4

77,214

×

=

π

A

mm² 53,69

=

A

Onde “A” representa a área, “a” a medida horizontal e “b” a medida transversal.

Análise de Imagem:

pixel) um de (área constante x lesão dainterior no pixels de Nº

=

A

0,00271 17.010

×

=

A

mm² 46,09

=

A

Nota-se que as técnicas utilizadas para medição de área neste caso não revelaram

resultados semelhantes.

A FIG.28 ilustra uma possível falha na técnica do Paquímetro que calcula a área da

ferida, através de dados que retratariam uma lesão com formato imaginário e errôneo de uma

elipse, superestimando, desta forma, o valor supostamente verdadeiro da área.

FIGURA 28: Delimitação da lesão após binarização, e tracejado de linha retratando

possível área, erroneamente, calculada pela técnica do paquímetro.

76

4.2.4 - Avaliação da Taxa de Cicatrização

Como ficou demonstrado, a técnica de Aquisição e Tratamento de Imagens para

avaliação do processo de cicatrização em função da redução das feridas garante melhor

confiabilidade metrológica em relação ao paquímetro. Tornou-se, então, conveniente observar

os resultados desta técnica como referência para analise da taxa de cicatrização das lesões nos

Grupos comparados. A TAB.8 mostra os dados dos Grupos Bilateral e Controle para o cálculo

da taxa de cicatrização ao longo do tempo em função do grau de redução da área, medida em

períodos. O período corresponde ao intervalo entre os dias pré-determinados para medição da

área das lesões. A coluna de taxa média por dia, registra o valor da redução da área em

determinado período dividido pelo número de dias relativo aquele período. A taxa média foi

definida em mm² por dia. Quanto maior a redução da área, maior é a taxa de cicatrização da

lesão naquele período. Tornou-se conveniente definir os valores da área média inicial com

equivalência de 100 mm², padronizada para todos os grupos, para uma melhor interpretação e

registro da Taxa média de cicatrização.

TABELA 8: Taxa de cicatrização dos Grupos Controle e Bilateral

Tempo Grupo n Área

Média

Período

(dias)

Redução

por período

(mm²)

Taxa média

(mm²

/

dia)

1º dia controle

bilateral

20

100,0

3º dia controle

bilateral

20

82,4

76,0

1° ao 3° 17,6

24,0

5,8

8,0

6º dia controle

bilateral

20

81,8

64,4

3° ao 6° 6,0

11,6

2,0

3,8

9º dia controle

bilateral

20

65,4

49,2

6° ao 9° 16,4

15,2

5,5

5,0

15º dia controle

bilateral

20

27,6

14,1

9º ao 15º 37,8

35,1

6,3

5,8

20º dia controle

bilateral

20

12,4

7,0

15° ao 20º 15,2

7,1

3,0

1,4

23º dia controle

bilateral

20

5,7

1,1

20º ao 23º 6,7

5,9

2,2

1,9

28º dia controle

bilateral

20

1,6

0,0

23º ao 28º 4,1

1,1

0,8

0,2

30º dia controle

bilateral

20

0,0

77

O laser foi aplicado somente nos 10 primeiros dias e posteriormente observado o

efeito contínuo de sua ação nos tecidos ao longo de 30 dias. Sabendo-se que esse efeito

persiste por um tempo, mesmo após ter cessado a aplicação do laser (FUKABORI, 2003).

Pela avaliação da coluna de taxa média da TAB.8, percebe-se que as diferenças

foram maiores nos primeiros dias, principalmente até o sexto dia, ou seja, no grupo bilateral

as lesões sofreram um processo de redução de modo mais acentuado em comparação

proporcional as lesões do Grupo controle nos primeiros momentos. Portanto, o laser parece

exercer um efeito mais efetivo nesses dias inicias, promovendo uma taxa de cicatrização mais

intensa em relação a meados e fim do processo de cicatrização. No período do 15º ao 20º dia

houve uma taxa média de cicatrização significativamente maior do grupo controle em relação

ao bilateral. Porém, as lesões do grupo bilateral já estavam em processo avançado de

cicatrização e, portanto tem a taxa naturalmente reduzida nesta fase. Considera-se que as

feridas do grupo bilateral cicatrizaram no 23º dia, enquanto que no Grupo Controle as feridas

cicatrizaram no 28º dia.

TABELA 9: Taxa Média de cicatrização por fase nos Grupos Controle e Bilateral

A TAB.9 mostra a taxa média de cicatrização das lesões dos grupos bilateral e

controle, registrada em mm² por dia, referente aos valores de redução das áreas, em função de

duas fases, compreendidas entre o 1º e 9º dia (relativo aos dias de aplicação do laser), e o 9º e

23º dia (relativo ao fim da cicatrização no grupo bilateral). Nota-se que na primeira fase, a

taxa média de cicatrização é significativamente maior no grupo bilateral, permitindo a

cicatrização final das lesões deste grupo no 23º dia. Enquanto que na segunda fase a taxa foi

Fase

(dias)

Grupo Redução por Fase

(mm²)

Taxa média

(mm²

/

dia)

1º ao 9°

Controle

Bilateral

34,6

50,8

3,84

5,64

9º ao 23°

Controle

Bilateral

59,7

48,1

4,26

3,43

78

maior no grupo controle, porém, as lesões deste grupo só cicatrizaram no 28ºdia. Ficando

demonstrado que a ação do laser foi mais efetiva nos dias iniciais.

No Grupo unilateral, em que foram comparadas as lesões esquerdas (irradiadas)

com as lesões direitas (não irradiadas), considera-se que todas cicatrizaram no 23º e que o

processo de cicatrização ao longo dos dias ocorreu de maneira semelhante, evidenciando o

efeito sistêmico. Contudo, foi observado nos dois primeiros períodos (1º ao 3º dia e 3º ao 6º

dia), pela coluna de taxa média da TAB.10, que o laser promoveu um efeito mais acelerado no

processo de cicatrização das lesões esquerdas. Sugerindo que, o efeito direto da luz no local

da aplicação parece ter promovido uma reação biológica que intensificou a redução das lesões

esquerdas em comparação ao lado direito, nesses dias, sendo que o laser foi aplicado somente

nos dez primeiros dias. Porém, nos outros períodos, o lado direito teve uma taxa de

cicatrização um pouco maior que o esquerdo, o que proporcionou uma completa cicatrização

equivalente das duas lesões no 23º dia.

TABELA 10: Taxa de cicatrização no Grupo Unilateral Direito e Esquerdo

A TAB.11 mostra a taxa média de cicatrização das lesões do grupo unilateral,

registrada em mm² por dia, referente aos valores de redução das áreas, em função de duas

fases, compreendidas entre o 1º e 9º dia (relativo aos dias de aplicação do laser), e o 9º e 23º

Tempo Lateralidade

n Média Período

(dias)

Redução

por período

(mm²)

Taxa média

(mm²

/

dia)

1º dia esquerdo

direito

10

100,0

3º dia esquerdo

direito

10

66,8

71,3

1° ao 3° 33,2

28,7

11,0

9,5

6º dia esquerdo

direito

10

50,3

60,6

3° ao 6° 16,5

10,7

5,5

3,5

9º dia esquerdo

direito

10

39,3

49,0

6° ao 9° 11,0

11,6

3,6

3,8

15º dia esquerdo

direito

10

8,8

11,8

9º ao 15º 30,5

37,2

5,0

6,2

20º dia esquerdo

direito

10

2,6

3,1

15° ao 20º 6,2

8,7

1,2

1,7

23º dia esquerdo

direito

10

0,4

0,2

20º ao 23º 2,2

2,9

0,7

0,9

28º dia esquerdo

direito

10

0,0

30º dia esquerdo

direito

10

0,0

79

dia (relativo ao fim da cicatrização das lesões esquerdas e direitas do grupo unilateral). Nota-

se que na primeira fase, a taxa média de cicatrização é maior nas lesões esquerdas, enquanto

que na segunda fase a taxa foi maior nas lesões direitas. Ficando demonstrado que a ação do

laser aplicado nas lesões esquerdas exerceu um efeito sistêmico favorável às lesões direitas,

permitindo a cicatrização final das lesões direitas e esquerdas deste grupo no 23º dia.

TABELA 11: Taxa Média de Cicatrização por fase no Grupo Unilateral Direito e Esquerdo.

Para analisar a taxa de redução das lesões direitas do grupo Unilateral em

comparação com as do Grupo Controle, foi avaliado a coluna de taxa média da TAB.12, e

percebe-se que as diferenças foram maiores nos primeiros dias, principalmente até o sexto dia,

ou seja, lesões direitas do Grupo Unilateral sofreram um processo de redução de modo mais

acentuado em comparação proporcional as lesões do Grupo controle nos primeiros momentos.

Portanto, o efeito sistêmico do laser parece exercer uma ação efetiva nas lesões direitas,

promovendo uma taxa de cicatrização maior nos dias iniciais em relação a meados e fim do

processo de cicatrização, quando comparadas com o grupo controle. No período entre o 15º e

20º dia houve uma taxa média de cicatrização significativamente maior do grupo controle em

relação às lesões direitas do grupo unilateral. Porém, as lesões direitas já estavam em processo

avançado de cicatrização e, portanto têm a taxa reduzida nesta fase. Considera-se que as

feridas direitas do grupo unilateral cicatrizaram no 23º dia, enquanto que no Grupo Controle

as feridas cicatrizaram no 28º dia.

Fase

(dias)

Grupo Redução por Fase

(mm²)

Taxa média

(mm²

/

dia)

1º ao 9°

Esquerdo

Direito

60,7

51,0

6,74

5,66

9º ao 23°

Esquerdo

Direito

38,9

48,8

2,77

3,48

80

TABELA 12: Taxa de Cicatrização no Grupo Unilateral Direito e Controle

A TAB.13 mostra a taxa média de cicatrização das lesões dos grupos unilateral

direito e controle, registrada em mm² por dia, referente aos valores de redução das áreas, em

função de duas fases, compreendidas entre o 1º e 9º dia (relativo aos dias de aplicação do

laser), e o 9º e 23º dia (relativo ao fim da cicatrização no grupo unilateral direito). Nota-se que

na primeira fase, a taxa média de cicatrização é significativamente maior no grupo unilateral

direito, permitindo a cicatrização final das lesões deste grupo no 23º dia. Enquanto que na

segunda fase a taxa foi maior no grupo controle, no entanto, as lesões deste grupo

cicatrizaram no 28ºdia. Ficando demonstrado que o efeito sistêmico do laser propiciou uma

aceleração da cicatrização das lesões direitas do grupo unilateral mais intensa nos dias iniciais

em comparação ao grupo controle.

A taxa de cicatrização com a técnica do paquímetro encontra-se no anexo H.

Tempo

Grupo n Média Período

(dias)

Redução por

período

(mm²)

Taxa média

(mm²

/

dia)

1º dia controle

unilateral direito

20

10

100,0

3º dia controle

unilateral direito

20

10

82,4

71,3

1° ao 3° 17,6

28,7

5,8

9,5

6º dia controle

unilateral direito

20

10

81,8

60,6

3° ao 6° 6,0

10,7

2,0

3,5

9º dia controle

unilateral direito

20

10

65,4

49,0

6° ao 9° 16,4

11,6

5,5

3,8

15º dia controle

unilateral direito

20

10

27,6

11,8

9º ao 15º 37,8

37,2

6,3

6,2

20º dia controle

unilateral direito

20

10

12,4

3,1

15° ao 20º 15,2

8,7

3,0

1,7

23º dia controle

unilateral direito

20

10

5,7

0,2

20º ao 23º 6,7

2,9

2,2

0,9

28º dia controle

unilateral direito

20

10

1,6

0,0

23º ao 28º 4,1

0,8

30º dia controle

unilateral direito

20

10

0,0

81

TABELA 13: Taxa Média de cicatrização por fase no Grupo Unilateral Direito e Controle

4.3 - Discussões

Os efeitos da radiação laser de baixa potência no processo de regeneração tecidual

tem sido tema de diversos estudos, como de BISHT et al (1994) que afirma em estudo que a

reparação tecidual é favorecida pela epitelização e proliferação de fibroblastos nas áreas

irradiadas. No entanto, HALL et al (1994) em um estudo para avaliar o efeito do laser de

GaAlAs na cicatrização de feridas em ratos, concluíram que o uso do laser não produziu

resultados significativos, pelas observações clínicas e histológicas semelhantes encontradas na

comparação entre os grupos.

A utilização dos ratos Wistar nesta pesquisa foi baseada no estudo de SANTOS

HEREDERO (1996) sobre o modelo experimental de queimaduras, em que o autor afirma que

os animais mais freqüentemente utilizados nessas pesquisas são os ratos Wistar, por terem

baixo custo, maior resistência à infecção e facilidade de produção de diferentes tipos de

queimaduras.

Antes da realização do experimento desse estudo, procurou-se estabelecer uma

padronização de confecção das feridas através da determinação do tempo de permanência do

bastão imerso no nitrogênio liquido e do tempo de contato deste com o dorso do rato. Estes

Fase

(dias)

Grupo Redução por Fase

mm²

Taxa média

(mm²)

/

dia

1º ao 9°

Controle

Unilateral Direito

34,6

51,0

3,84

5,66

9º ao 23°

Controle

Unilateral Direito

59,7

48,8

4,26

3,48

82

foram definidos, através de estudo piloto, em 10 minutos para imersão e 1 minuto para

contado com o rato.

Para confirmar se a padronização estava produzindo o mesmo grau de lesão nos

tecidos foram selecionados 5 ratos para realização do teste piloto, com a produção de duas

lesões em cada animal. Foi realizado 1 biopsia para cada lesão no pós-operatório, totalizando

10 laminas histopatológicas. O resultado foi o mesmo para todos as lesões, ou seja, fragmento

de pele mostrando epiderme delgada, derme edemaciada e discretamente congesta e com

folículos pilosos dilatados, com focos de necrose e circundados por células inflamatórias.

Nenhum animal utilizado em todo o trabalho foi sacrificado.

No presente Trabalho optou-se pela aplicação do laser diariamente de acordo com

KANA et al (1981); ROCHKIND et al (1989); HALL et al (1994); YU et al (1997) e

ANDERS et al (2002). O laser foi aplicado nos dez primeiros dias.

O modo de aplicação do laser foi o pontual, com base em alguns estudos como de

IN de BRAEKT, 1991 e CARRILLO, 1990. A irradiação foi no centro da lesão, em única

sessão diária. O laser foi aplicado à distância de 1mm para evitar contato direto com a ferida

cirúrgica.

O aparelho de laser utilizado foi o diodo de GaAlAs, baseado em alguns autores

como YOUNG et al (1990); HALL et al (1994); SIMUNOVIC et al, (2000); AMORIM

(2001); PUGLIESE (2003), com comprimento de onda de 660nm no espectro vermelho, que

tem menor poder de penetração no tecido em relação ao infravermelho, sendo mais adequado

ao tratamento de feridas superficiais e abertas.

A densidade de energia utilizada neste estudo foi de 4 J/cm², baseada em diversos

estudos como de KANA, (1981); TRELLES, MESTER, (1984); BIHARI, MESTER, (1989);

MESTER, E.; MESTER, A.; MESTER, A.(1985); FERNANDO, HILL, WALKER, (1993);

AMORIN (2001); CARVALHO (2003); PUGLIESE (2003); ANDERS et al (2002).

A opção de se utilizar o nitrogênio liquido para provocar as queimaduras nos ratos

foi embasada nos trabalhos de RIBEIRO (2004) e NÚÑEZ (2002). Porém, optou-se pela

utilização do nitrogênio liquido para o resfriamento de um bastão de aço inoxidável, proposto

neste trabalho, para padronização das lesões, o qual foi idealizado e desenvolvido no

laboratório de Bioengenharia da Faculdade de Engenharia Mecânica da UFMG.

Neste trabalho foi proposto, além do paquímetro, um sistema de aquisição e

tratamento de imagens para avaliação do processo de evolução de cicatrização das feridas, ao

longo do tempo, baseado no trabalho de OLIVEIRA (2005).

83

No presente Trabalho foram observados resultados semelhantes aos encontrados

por ROCHKIND et al (1989), no que se refere à caracterização do efeito sistêmico do laser,

analisado pela evolução de cicatrização mais rápida das lesões direitas não irradiadas do

Grupo B, no qual as lesões esquerdas foram irradiadas, em comparação ao Grupo C que não

recebera nenhuma irradiação a laser.

Quanto à taxa de cicatrização foi observado que as lesões que se beneficiaram da

irradiação com laser sofreram um processo de redução de modo mais acentuado nos primeiros

dias em comparação as lesões do Grupo controle. Portanto, o laser exerceu um efeito mais

efetivo nos dias inicias, em concordância com FUKABORI (2003) e AZEVEDO (2006),

promovendo uma taxa de cicatrização maior nesse período.

A análise com paquímetro não define corretamente a área da lesão devido à

dificuldade técnica de delimitação dos bordos. Isto ocorre principalmente nos primeiros dias,

quando a lesão sofre processo inflamatório e alterações morfológicas até o estabelecimento

definitivo da ferida. Esta dificuldade de medição também ocorre nos últimos dias, onde o

processo de cicatrização promove uma contração dos bordos da ferida, tornando-a às vezes

com aspecto irregular. Isso dificulta a medição com o paquímetro e principalmente o cálculo

da área, já que a forma geométrica identificada não caracteriza o pressuposto de definição da

área, com auxilio de paquímetro, pela fórmula equivalente de uma elipse.

Já com a técnica de Aquisição e Tratamento de Imagens a delimitação da área da

lesão fica bem definida pelo contraste do preto e branco determinado pela binarização da

imagem, onde todo o contorno e interior da lesão ficam demarcados de preto e sua vizinhança

de branco. Mesmo a lesão tendo um formato irregular, esta será bem definida, permitindo

assim um registro mais confiável da área real da lesão. Com isso acreditamos que esse método

seja uma alternativa eficaz como método de análise de medição, e que pode ser usado em

diversas pesquisas cientificas.

84

5 – CONCLUSÕES

De acordo com a metodologia utilizada neste trabalho e com base na análise dos

resultados dos grupos comparados, pode-se concluir que:

- O laser de Arseneto de Gálio e Alumínio com potência de 28mW e dose de

4J/cm², promoveu uma aceleração no processo de cicatrização das feridas quando comparado

com grupo controle não irradiado.

- No mesmo rato, o laser de Arseneto de Gálio e Alumínio com potência de 28mW

e dose de 4J/cm², aplicado somente na lesão esquerda promoveu um efeito sistêmico que

favoreceu a cicatrização da lesão direita.

- As lesões direitas do grupo unilateral, que não receberam irradiação direta,

cicatrizaram mais rápido do que às do grupo controle, o que pôde caracterizar o efeito

sistêmico benéfico promovido pela absorção da luz laser aplicada nas lesões esquerdas do

grupo unilateral.

- Em relação à taxa de cicatrização das feridas nos grupos comparados, pôde-se

constatar que o laser parece exercer uma ação mais efetiva nos dias iniciais da cicatrização,

tanto pelo efeito local quanto sistêmico, em comparação ao Grupo controle, promovendo uma

taxa de cicatrização mais intensa em relação a meados e fim do processo de cicatrização.

- Nos grupos tratados com laser considerou-se que as feridas cicatrizaram no 23º

dia, enquanto que no Grupo Controle as feridas cicatrizaram no 28º dia.

- Pelos resultados da calibração das técnicas de medições e pela avaliação do

comportamento das lesões na evolução do processo de cicatrização, constatou-se que a

variabilidade do mensurando é mais significativa que a incerteza do sistema de medição.

- A técnica de Aquisição e Tratamento de Imagens é capaz de quantificar melhor o

valor da área da lesão em comparação com o paquímetro. Entretanto, o efeito positivo do laser

foi atestado com a análise dos resultados obtidos pelas duas técnicas.

- O método de medição pelo sistema de aquisição e tratamento de imagens garante

maior confiabilidade metrológica para controle do processo.

85

5.1 - Trabalhos Futuros

Para trabalhos futuros propõe-se:

- Uma metodologia para melhor definição da intensidade necessária para registrar

os limites da imagem a ser analisada (ferida/tecido normal), quando do processo de

binarização, usado em sistemas de análise por imagem.

- Utilizar o sistema de aquisição e tratamento de imagens para avaliar a evolução

de cicatrização de diferentes tipos de feridas.

- Realizar análise histológica das feridas ao longo do tempo.

86

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97

ANEXO A

CERTIFICADO DE CALIBRAÇÃO

DATA: 04/11/05

1. OBJETIVO

Calibração de um Paquímetro “MITUTOYO”, a fim de conhecer as características

metrológicas e compara-las com as especificações do fabricante.

2. PAQUÍMETRO A CALIBRAR (SPC)

Proprietário: LABORATORIO DE METROLOGIA – DEMEC/UFMG

Fabricante: MITUTOYO

Número de Série: 3315647

Faixa de Indicação: 0 a 150 mm

Valor de uma Divisão: 0,02 mm

Estado de Conservação: Bom

3. SISTEMA DE MEDIÇÃO PADRÃO (SMP)

Blocos Padrão de Cerâmica

Fabricante: Mitutoyo

Número de Série (fabricante): 0108123

Incerteza do SMP: (0.10 + 1.0L/ 1000) µ m

Rastreável aos padrãos primários conforme Certificado de Calibração Nº 121/2001

4. PROCEDIMENTO DO ENSAIO

Medições com Bicos do Paquímetro – Medição Externa

A calibração foi realizada medindo-se com um paquímetro as dimensões individuais de

cada bloco padrão, onde foram realizados 09 (nove) ciclos de medição com objetivo de

registrar a Repetividade (95%) do paquímetro. Sendo anotados os respectivos valores de

leituras e do bloco padrão. Logo os blocos foram ordenados e medidos em 09 seqüências

até abranger a faixa de indicação do instrumento.

Na calibração foi adotado procedimento de calibração, de acordo com especificações da

norma DIN 862.

98

Condições de ensaio: - Temperatura ambiente: 21,0

±

0,005 ºC

- Pressão atmosférica: 1022,0

±

0,5 mbar

5. ANÁLISE DOS RESULTADOS

a) Erro sistemático máximo (tendência máxima)

Tdmax = 0,02 mm ou 1.33x10

-2

do VFE

b) Repetitividade (95)% máxima:

Remax = (95)% 0.0022 mm ou

±

1.46x10

-3

do VFE

Obs: VFE = Valor Final de Escala = 150mm

7. CONCLUSÃO

A incerteza do Paquímetro é igual a

±

0,02 mm ou

±

0.13% do VFE

A incerteza de medição de um paquímetro depende:

- dos erros da divisão da escala principal;

- dos erros da divisão do nônio;

- da retilineidade dos bicos de medição;

- da perpendicularidade dos bicos de medição em relação à haste e paralelismo entre

si;

- dos erros da guia do cursor.

8. PARECER

O paquímetro satisfaz as tolerâncias estabelecidas pela norma DIN 862.

DADOS BRUTOS

CICLOS SMP PTOS

SMC

1 2 3 4 5 6 7 8 9

1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

2 7.6 7.6 7.64 7.62 7.64 7.62 7.6 7.62 7.64 7.64

3 15.3 15.3 15.32 15.32 15.3 15.32 15.3 15.32 15.32 15.32

4 25.8 25.8 25.82 25.82 25.8 25.82 25.8 25.82 25.82 25.82

5 38.7 38.7 38.72 38.72 38.7 38.72 38.7 38.72 38.72 38.72

6 53.7 53.7 53.72 53.72 53.7 53.72 53.7 53.72 53.72 53.72

7 71.3 71.3 71.32 71.32 71.32 71.3 71.3 71.32 71.32 71.32

8 91.5 91.5 91.52 91.52 91.52 91.5 91.5 91.52 91.52 91.5

9 114.3 114.3 114.32 114.3 114.32 114.3 114.3 114.3 114.3 114.32

10 139.3 139.32 139.3 139.32 139.3 139.32 139.32 139.32 139.32 139.3

99

Unidade de Leitura no Sistema de Medição Padrão (SMP): mm

Unidade de Leitura no Sistema de Medição a Calibrar (SMC): mm

TABELA DADOS PROCESSADOS

TENDÊNCIA REPETITIVIDADE

( )

±

PTOS MEDIDA

MÉDIA SMC

VALOR

VERDADEIRO

CONVENCIONAL

ABS % VFE ABS % VFE

01

0 0

0 0 0 0

02

7.62 7.6

0.02 1.33x10

-2

0.0022 1.46x10

-3

03

15.32 15.3

0.02 1.33x10

-2

0.0011 7.33x10

-4

04

25.82 25.8

0.02 1.33x10

-2

0.0011 7.33x10

-4

05

38.72 38.7

0.02 1.33x10

-2

0.0011 7.33x10

-4

06

53.72 53.7

0.02 1.33x10

-2

0.0011 7.33x10

-4

07

71.32 71.3

0.02 1.33x10

-2

0.0011 7.33x10

-4

08

91.52 91.5

0.02 1.33x10

-2

0.0011 7.33x10

-4

08

114.32 114.3

0.02 1.33x10

-2

0.0011 7.33x10

-4

10

139.32 139.3

0.02 1.33x10

-2

0.0011 7.33x10

-4

Convenção:

ABS: Valor Absoluto

VFE: Valor Final de Escala = 150

Unidade de Análise: mm

100

Anexo B

CALIBRAÇÃO DA TÉCNICA DE AQUISIÇÃO E TRATAMENTO DE IMAGEM

A calibração para a técnica de Aquisição e Tratamento de Imagens foi realizada

utilizando-se o critério de comparação entre o valor conhecido de um bloco padrão de 100

mm e o número de pixels referentes ao comprimento do bloco,obtidos por meio do software

Image Pró Plus.

Para verificação do número de pixels na faixa de operação foram realizadas sete

medições. Essas medições procederam-se colocando o bloco padrão na direção e na altura

da câmera digital referente ao posicionamento do dorso dos ratos. As leituras realizadas do

bloco padrão apresentaram os seguintes valores: 1916, 1921, 1921, 1921, 1922, 1922 e

1925. Isto indica que a repetitividade do sistema de medição apresenta um desvio padrão.

A repetitividade, a incerteza do bloco padrão e a resolução limitada são

utilizadas para o cálculo da incerteza expandida (U

95%

) do sistema de medição (TAB.1). A

repetitividade foi obtida por meio de dados experimentais com a medida do bloco padrão.

A incerteza do bloco padrão foi fornecida pelo fabricante e a resolução do sistema de

medição analisado é 1 pixel.

Bloco Padrão 100 mm

Fonte de Erro Efeitos Aleatórios

Tipo Descrição Unidade Valor Bruto Distribuição Divisor U

68%

A Repetitividade mm 0,053 normal 1 0,053

B u (bloco) mm 0,0002 normal 2 0,0001

B Resolução Limitada mm 0,052 retangular 1,73 0,03

mm Incerteza combinada 0,06

mm

Incerteza expandida (U

95%

) 0,12

TABELA 1: Cálculo da incerteza expandida do sistema de medição proposto neste trabalho

Assim, a incerteza expandida foi obtida multiplicando a incerteza

combinada por uma constante k que, para 95% de confiabilidade, é 2.

101

ANEXO C

MEDIDAS DAS ÁREAS COM PAQUÍMETRO

Lesões Esquerdas

Rato Grupo E 1º E 3º E 6º E 9º E 15º E 20º E 23º E 28º E 30º

1 1 140,1939 135,2459 120,6374 81,4303 31,46 15,818 11,781 0 0

2 1 115,3596 99,7458 93,2663 77,6761 34,5576 16,4934 10,0531 0 0

3 1 153,8677 144,0424 118,8232 73,8274 31,1018 23,4992 17,0118 0 0

4 1 109,7204 79,7338 70,8117 56,5488 28,2744 21,5985 14,4514 0 0

5 1 166,4263 112,3122 84,8232 70,5917 55,2136 40,2125 24,5045 0 0

6 1 170,5103 124,3759 97,4524 79,5296 63,1462 23,7505 14,0272 0 0

7 1 238,7676 173,4006 163,2847 125,2713 34,7147 24,5045 0 0 0

8 1 169,9867 143,7282 110,1288 90,7137 43,9824 18,4427 0 0 0

9 1 164,6292 132,2296 96,4861 82,4667 26,3894 10,1788 0 0 0

10 1 114,7074 125,3495 105,4004 79,2781 65,031 41,2334 32,9867 35,74 0

11 2 169,4579 125,7897 107,2071 94,7501 35,7357 20,7346 17,2788 0 0

12 2 165,4052 97,8766 87,6506 64,2771 20,8131 14,7655 12,6449 0 0

13 2 111,7703 99,0389 86,0956 38,2901 29,531 22,6195 11,781 0 0

14 2 167,6829 125,1613 87,9648 78,3437 42,4587 31,8087 16,4934 0 0

15 2 210,4239 160,2212 129,5907 105,5575 51,8363 24,3473 0,7854 0 0

16 2 133,8322 106,1861 78,2258 61,8503 21,2058 13,4303 0 0 0

17 2 203,4186 151,2366 121,3443 114,6684 38,9558 30,7877 0 0 0

18 2 204,204 158,0618 127,7375 101,081 23,562 8,7965 0 0 0

19 2 176,8092 136,6596 106,956 103,3586 41,0686 12,535 5,0266 0 0

20 2 241,2749 111,3305 103,6728 100,8297 29,1383 10,4458 0 0 0

21 3 138,8587 115,768 97,7352 84,9017 25,3213 13,4303 0 0 0

22 3 150,7968 81,2889 64,717 51,1295 0 0 0 0 0

23 3 225,2135 126,4494 103,1387 95,2298 54,978 11,8753 0 0 0

24 3 183,7836 132,5363 96,6042 75,1471 13,1319 5,1051 0 0 0

25 3 176,715 126,9992 96,1015 70,3718 43,197 8,4823 0 0 0

26 3 163,3632 122,5224 98,175 81,4852 12,4407 0 0 0 0

27 3 123,7005 93,4626 80,425 61,5754 21,7713 0 0 0 0

28 3 163,3632 114,9826 77,7546 71,0629 15,1739 5,7177 0 0 0

29 3 153,9384 90,7608 81,6816 69,1152 21,5985 6,2832 0 0 0

30 3 160,2216 132,1043 88,8287 62,4393 9,896 8,13674 0 0 0

Grupo 1 = controle

Grupo 2 = bilateral

Grupo 3 = unilateral

E = Lesão Esquerda

102

ANEXO D

MEDIDAS DAS ÁREAS COM PAQUÍMETRO

Lesões Direitas

Rato Grupo D 1º D 3º D 6º D 9º D 15º D 20 º D 23º D 28º D 30º

1 1 147,341 90,7137 78,54 66,3506 22,2141 12,9591 9,4248 0 0

2 1 135,7171 124,0932 112,2179 95,0019 51,6993 22,4624 14,1372 0 0

3 1 157,3942 130,2586 117,81 93,3055 32,6726 21,4885 14,2943 0 0

4 1 148,2128 142,5501 123,3071 105,5735 45,8045 24,8045 15,7237 0 0

5 1 144,3173 109,956 84,4305 60,7743 42,9771 18,9124 20,4204 0 0

6 1 155,8234 130,2586 108,5266 92,5358 56,0776 31,3846 14,255 0 0

7 1 153,6242 117,81 106,029 76,9692 28,942 16,9646 0 0 0

8 1 159,4362 117,81 101,1595 82,0743 25,9182 11,4855 0 0 0

9 1 159,2786 129,7477 115,7676 95,9756 32,9867 19,933 0 0 0

10 1 127,5487 140,5706 120,1659 102,6672 62,6748 38,8772 35,3429 0 0

11 2 197,7009 148,5977 106,029 84,8232 31,2197 21,2058 12,9591 0 0

12 2 175,6154 114,2914 98,9604 43,7939 27,756 20,8131 15,1949 0 0

13 2 134,1463 110,5058 95,9916 52,1506 27,489 25,6355 14,7655 0 0

14 2 190,2234 131,5385 104,458 104,458 37,0708 27,4889 18,8486 0 0

15 2 150,7964 125,271 92,5984 72,8849 27,3319 9,62113 0 0 0

16 2 161,5882 125,3498 106,5631 90,4781 25,9182 15,5038 0 0 0

17 2 155,6034 125,2713 107,1286 96,6465 33,1753 25,447 0 0 0

18 2 178,1287 138,5446 91,4206 67,9528 24,5045 9,4248 0 0 0

19 2 224,0354 131,9472 117,81 84,6661 26,3109 9,8489 0 0 0

20 2 158,3681 89,5356 76,8514 70,686 25,9182 9,4248 0 0 0

21 3 150,6397 135,7957 99,3531 82,467 37,385 15,708 0 0 0

22 3 126,4494 111,3305 75,3984 57,5855 0 0 0 0 0

23 3 179,2283 126,8107 89,8341 82,467 15,708 0 0 0 0

24 3 183,7836 123,9047 92,2845 67,5444 1,1781 0 0 0 0

25 3 156,2161 125,7033 84,6661 77,7546 39,7412 5,8905 0 0 0

26 3 179,0712 156,2553 137,7199 109,6811 9,896 0 0 0 0

27 3 164,934 91,1064 76,655 71,6285 26,3109 0 0 0 0

28 3 160 128,2558 112,3122 99,5023 24,9757 21,4885 0 0 0

29 3 146,0059 118,4383 92,2845 74,9664 12,1441 3,7699 0 0 0

30 3 163,3632 121,5485 104,4582 91,8918 12,7235 9,2363 0 0 0

Grupo 1 = controle

Grupo 2 = bilateral

Grupo 3 = unilateral

D = Lesão Direita

=

103

ANEXO E

MEDIDAS DAS ÁREAS COM IMAGEM

Lesão Esquerda

rato grupo E 1º E 3º E 6º E 9º E 15º E 20º E 23º E 28º E 30º

1 1 135,75 123,2454 119,4243 95,9665 23,7532 13,4091 6,1734 1,9729 0

2 1 120,39 65,7771 87,9205 80,7499 36,7693 14,8156 7,7045 1,3496 0

3 1 153,91 146,6869 142,7032 86,0208 30,9699 16,9185 8,4281 1,8618 0

4 1 97,2 70,2161 81,5954 60,5577 30,3656 13,5934 9,3658 5,1843 0

5 1 132,1 93,1454 94,7877 68,0996 45,2028 28,5607 10,8319 4,9701 0

6 1 124,63 98,4567 118,446 87,9964 38,9834 15,5337 5,4661 4,6937 0

7 1 165,28 135,874 132,8794 126,7277 47,3139 15,9023 9,2763 0 0

8 1 150,77 82,7553 104,2049 97,0749 39,7963 9,11761 2,8972 0 0

9 1 116,73 134,3428 90,5682 71,7011 16,8941 5,8889 2,043 0 0

10 1 118,1 91,6519 101,3837 71,3952 42,2567 17,7987 4,9403 1,9626 0

11 2 192,48 143,8902 136,6599 120,6167 41,295 13,0134 5,7533 0 0

12 2 132,14 78,1347 92,1698 46,1621 22,1597 13,1842 3,6016 0 0

13 2 158,21 91,3107 80,693 30,7802 12,9728 7,4091 1,5447 0 0

14 2 143,25 112,176 81,4329 79,5163 26,4713 12,5094 0,5501 0 0

15 2 166,82 149,1411 130,3679 103,8525 18,1073 16,1068 1,5728 0 0

16 2 163,22 106,3811 92,4083 68,0535 19,092 11,5473 0 0 0

17 2 185,42 161,0634 146,405 119,4758 39,4793 26,2111 0,6179 0 0

18 2 147,77 156,8385 100,4272 89,7281 28,4984 10,6205 2,8563 0 0

19 2 163,18 157,8385 115,2265 79,8529 17,8399 12,2926 2,3143 0 0

20 2 156,35 137,3889 124,6275 99,9502 19,0215 14,531 5,4498 0 0

21 3 211,72 76,0833 102,0044 55,7691 27,4577 1,3957 1,2601 0 0

22 3 166,02 73,7472 63,5549 46,1703 0,2032 0 0 0 0

23 3 164,15 105,6412 90,0777 64,3137 33,2246 6,5148 0 0 0

24 3 159,08 111,7252 79,9586 66,0183 6,3712 5,9105 0 0 0

25 3 176,17 90,094 77,88 62,8639 33,8425 8,1137 0 0 0

26 3 189,99 135,0664 103,3865 90,3677 6,2872 1,5908 0 0 0

27 3 135,59 89,7498 68,4573 45,5524 2,981 0 0 0 0

28 3 154,61 120,4243 81,8501 74,0047 13,0432 8,8753 2,08399 0 0

29 3 131,1 66,0535 68,7039 54,0455 15,0432 4,9485 0 0 0

30 3 148,84 96,6765 84,9585 77,6551 8,2818 3,458 3,3143 0 0

Grupo 1

controle

Grupo 2

bilateral

Grupo 3= unilateral

E = Lesão Esquerda

104

ANEXO F

MEDIDAS DAS ÁREAS COM IMAGEM

Lesões Direitas

rato grupo D 1º D 3º D 6º D 9º D 15º D 20 º D 23º D 28º D 30º

1 1 116,84 72,3706 88,7064 67,2676 30,0133 22,344 11,041 4,22 0

2 1 157,05 105,6006 120,7278 117,4541 47,7881 24,3195 10,423 1,867 0

3 1 146,19 139,1531 133,7819 111,213 38,5741 19,306 9,8915 3,108 0

4 1 138,09 158,6244 145,4213 113,2157 45,4304 19,2789 14,29 1,247 0

5 1 123,92 112,5246 91,6549 72,8529 31,1406 17,1624 15,553 2,661 0

6 1 145,09 144,4728 123,5272 100,7009 55,452 24,325 8,7208 1,718 0

7 1 159,72 112,0667 95,9963 75,7011 32,9861 10,1408 1,9649 0 0

8 1 154,18 77,132 98,8202 88,682 33,539 13,1625 4,943 0 0

9 1 136,67 154,0527 124,8091 111,82 34,3005 12,2031 2,8103 0 0

10 1 153,05 143,2371 145,8033 95,7476 53,9511 23,0937 5,5386 2,428 0

11 2 185,74 132,4269 103,0884 98,98 39,0782 5,7886 0,2466 0 0

12 2 170,77 112,2889 113,4731 41,8126 23,4334 12,5012 5,3631 0 0

13 2 148,37 100,2321 80,9342 49,761 26,3787 14,7803 3,2249 0 0

14 2 172,12 140,013 108,7793 102,6425 24,2437 7,1872 0,2409 0 0

15 2 141,16 100,0288 109,1096 79,1096 7,7448 3,3351 0,0866 0 0

16 2 169,53 123,5272 104,5355 90,7986 27,9455 11,8481 0 0 0

17 2 164,09 130,0014 119,1885 109,278 33,585 18,4768 0 0 0

18 2 151,71 131,3673 90,9449 69,498 19,2356 8,5365 0,393 0 0

19 2 164,64 122,1099 94,1806 68,5801 7,5907 2,9756 0,206 0 0

20 2 245,65 118,3078 97,0397 86,1943 9,9484 8,1761 0,2087 0 0

21 3 195,76 77,6225 103,0749 60,1674 35,4034 4,1897 1,355 0 0

22 3 147,134 66,0346 79,525 55,4547 2,0704 0 0 0 0

23 3 138,037 93,8121 77,4491 66,4357 12,3576 0,1978 0 0 0

24 3 142,497 102,0722 82,9829 48,3816 3,9674 1,3062 0 0 0

25 3 155,484 97,1752 81,4816 76,235 44,1025 8,5717 0 0 0

26 3 195,651 132,5976 130,4052 120,2644 12,3359 3,4065 0 0 0

27 3 140,736 96,6738 66,8584 53,6824 6,607 0 0 0 0

28 3 161,505 118,95 129,9635 114,381 31,2165 17,7234 1,168 0 0

29 3 137,991 76,0751 76,6063 69,2324 10,0433 3,9214 0 0 0

30 3 153,801 118,7576 125,9798 107,7848 32,1108 10,8725 0,9838 0 0

Grupo 1 = controle

Grupo 2 = bilateral

Grupo 3= unilateral

D = Lesão Direita

105

ANEXO G

TEST T DE STUDENT

Imagem - Controle x Bilateral

Test t de student

,246 ,064 ,054 -,046 ,174

,000 ,174 ,035 ,103 ,245

,000 ,162 ,038 ,085 ,239

,000 ,135 ,019 ,096 ,174

,000 ,054 ,012 ,029 ,078

,000 ,046 ,008 ,031 ,062

,000 ,016 ,003 ,009 ,022

Tempo

3° dia

6° dia

9° dia

15° dia

20° dia

23° dia

28° dia

Valor-p

Diferença

das médias

Erro-padrão

da diferença

inferior superior

Intervalo de confiança

( 95%)

Teste t para igualdade de média

Imagem - Unilateral esquerdo x direito

Test t de student

-,044 ,068 -,093 ,004 ,069

-,102 ,100 -,174 -,031 ,010

-,097 ,083 -,157 -,038 ,005

-,031 ,077 -,086 ,025 ,241

-,006 ,029 -,026 ,015 ,544

,002 ,005 -,002 ,006 ,234

Tempo

3° dia

6° dia

9° dia

15° dia

20° dia

23° dia

Média da

diferença

Desvio-padrão Inferior Superior

Intervalo de confiança

Teste t de Student para igualdade de médias

Valor-p

106

Imagem – Controle x Unilateral direito

Test t de student

,056 ,198 ,069 ,057 ,338

,000 ,216 ,045 ,124 ,308

,001 ,167 ,045 ,076 ,259

,000 ,159 ,029 ,100 ,218

,000 ,093 ,016 ,061 ,126

,000 ,055 ,010 ,035 ,076

,003 ,016 ,005 ,006 ,026

Percentual área 3° dia

Percentual área 6° dia

Percentual área 9° dia

Percentual área 15° dia

Percentual área 20° dia

Percentual área 23° dia

Percentual área 28° dia

Valor-p

Diferença

das

médias

Erro

padrão da

diferença

Inferior Superior

Intervalo de confiança

Teste t para igualdade de média

Paquímetro - Controle x Bilateral

Test t de student

,006 ,108 ,037 ,033 ,184

,001 ,123 ,034 ,055 ,191

,003 ,101 ,032 ,037 ,165

,002 ,098 ,003 ,101 ,032

,025 ,047 ,020 ,006 ,089

,021 ,052 ,021 ,008 ,095

,324 ,016 ,016 -,016 ,047

Tempo

3° dia

6° dia

9° dia

15° dia

20° dia

23° dia

28° dia

Valor-p

Diferença

das médias

Erro padrão

da diferença

Inferior Superior

Intervalo de confiança

Teste t para igualdade de médias

107

Paquímetro – Grupo Unilateral esquerdo x direito

Test t de student

-,075 ,155 ,049 -,186 ,036 ,160

-,054 ,122 ,039 -,141 ,034 ,200

-,062 ,093 ,029 -,129 ,004 ,063

,016 ,066 ,021 -,031 ,063 ,458

-,001 ,039 ,012 -,029 ,027 ,959

Tempo

3° dia

6° dia

9° dia

15° dia

20° dia

Média da

diferença

Desvio padrão

Erro padrão

da média

limite superior

Intervalo de confiança

Teste t de Student para igualdade de médias

Valor-p

Paquímetro – Controle x Unilateral direito

Test t de student

,216 ,060 ,048 -,037 ,158

,022 ,110 ,046 ,017 ,203

,148 ,057 ,038 -,022 ,135

,000 ,060 ,048 -,037 ,251

,000 ,120 ,026 ,066 ,174

,002 ,057 ,038 -,022 ,145

,489 ,166 ,041 ,081 ,061

Tempo

3° dia

6° dia

9° dia

15° dia

20° dia

23° dia

28° dia

Valor-p

Média da

diferença

Erro padrão

da média

Inferior Superior

Intervalo de confiança

Teste t de Student

108

PAQUÍMETRO x IMAGEM

Test t de student

8,835 31,687 4,091 ,649 17,020 ,035

7,271 18,841 2,432 2,403 12,138 ,004

-2,109 13,997 1,807 -5,725 1,507 ,248

,228 12,807 1,653 -3,080 3,537 ,891

4,631 10,255 1,324 1,982 7,280 ,001

4,476 6,529 ,843 2,789 6,163 ,000

2,958 7,310 ,944 1,069 4,847 ,003

-,058 4,643 ,599 -1,258 1,141 ,923

Tempo

1° dia

3° dia

6° dia

9° dia

15° dia

20° dia

23° dia

28° dia

Média da

diferença

Desvio-padrão Erro- padrão inferior superior

Intervalo de confiança

Valor-p

109

ANEXO H

AVALIAÇÃO DA TAXA DE CICATRIZAÇÃO COM A TÉCNICA DO

PAQUÍMETRO

Paquímetro – Controle x Bilateral

Tabela 1: Taxa de cicatrização dos Grupos Controle e Bilateral

Tempo Grupo n Média Período

(dias)

Redução por

período

(mm²)

Taxa média

(mm²

/ dia)

1º dia controle

bilateral

20

100,0

3º dia controle

bilateral

20

83,5

72,7

1° ao 3° 16,5

27,3

5,5

9,1

6º dia controle

bilateral

20

71,1

58,8

3° ao 6° 12,4

13,9

4,1

4,6

9º dia controle

bilateral

20

56,4

46,3

6° ao 9° 14,7

12,5

4,9

4,1

15º dia controle

bilateral

20

27,9

18,0

9º ao 15º 28,5

28,3

4,7

20º dia controle

bilateral

20

15,6

10,8

15° ao 20º 12,3

7,2

2,4

1,4

23º dia controle

bilateral

20

9,0

3,9

20º ao 23º 6,6

6,9

2,2

2,3

28º dia controle

bilateral

20

1,6

0,0

23º ao 28º 7,4

3,9

1,4

0,7

30º dia controle

bilateral

20

0,0

TABELA 2: Taxa Média por fase nos Grupos Controle e Bilateral

Fase

(dias)

Grupo Redução por Fase

mm²

Taxa média

(mm²)

/ dia

1º ao 9°

Controle

Bilateral

43,6

53,7

4,84

5,96

9º ao 23°

Controle

Bilateral

47,4

42,4

3,38

3,02

110

Paquímetro – Unilateral Direito x Esquerdo

TABELA 3: Taxa de cicatrização nos Grupos Unilateral Direito e Esquerdo

Tempo Grupo Média n Período

(dias)

Redução

por período

(mm²)

Taxa média

(mm² / dia)

1º dia esquerdo

direito

100,0

10

3º dia esquerdo

direito

70,0

77,5

10

1° ao 3° 30,0

22,5

10,0

7,5

6º dia esquerdo

direito

54,7

60,1

10

3° ao 6° 15,3

17,4

5,1

5,8

9º dia esquerdo

direito

44,5

50,7

10

6° ao 9° 10,2

9,4

3,4

3,1

15º dia esquerdo

direito

12,9

11,3

10

9º ao 15º 31,6

39,4

5,2

6,5

20º dia esquerdo

direito

3,5

3,6

10

15° ao 20º 9,4

7,7

1,8

1,5

23º dia esquerdo

direito

0,0

10

20º ao 23º 3,5

3,6

1,1

1,2

28º dia esquerdo

direito

0,0

10

30º dia esquerdo

direito

0,0

10

TABELA 4: Taxa Média por fase nos Grupos Unilateral Direito e Esquerdo

Fase

(dias)

Grupo Redução por Fase

mm²

Taxa média

(mm²) / dia

1º ao 9°

55,5

49,3

6,16

5,47

Esquerdo

Direito

Esquerdo

9º ao 23°

Direito

44,5

50,7

3,17

3,62

111

Paquímetro – Controle x Unilateral Direito

TABELA 5: Taxa de cicatrização nos Grupos Controle e Unilateral Direito

Tempo Grupo n Média Período

(dias)

Redução

por período

(mm²)

Taxa média

(mm² / dia)

1º dia controle

unilateral direito

20

10

100,0

3º dia controle

unilateral direito

20

10

83,5

77,5

1° ao 3° 16,5

22,5

5,5

7,5

6º dia controle

unilateral direito

20

10

71,1

60,1

3° ao 6° 12,4

17,4

4,1

5,8

9º dia controle

unilateral direito

20

10

56,4

50,7

6° ao 9° 14,7

9,4

4,9

3,1

15º dia controle

unilateral direito

20

10

27,9

11,3

9º ao 15º 28,5

39,4

4,7

6,5

20º dia controle

unilateral direito

20

10

15,6

3,6

15° ao 20º 12,3

7,7

2,4

1,5

23º dia controle

unilateral direito

20

10

9,0

0,0

20º ao 23º 6,6

3,6

2,2

1,2

28º dia controle

unilateral direito

20

10

1,6

0,0

23º ao 28º 7,4

1,4

30º dia controle

unilateral direito

20

10

0,0

TABELA 6: Taxa Média por fase nos Grupos Controle e Unilateral Direito

Fase Grupo Redução por Fase

(dias) mm²

Taxa média

(mm²) / dia

1º ao 9°

Controle

43,6

Unilateral Direito

49,3

4,84

5,47

9º ao 23°

Controle

47,4

Unilateral Direito

50,7

3,38

3,62

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