UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA “JULIO DE MESQUITA FILHO”

FACULDADE DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS E VETERINÁRIAS

CÂMPUS DE JABOTICABAL

Jeanne Mendes Cattini Duarte Montrezor

Zootecnista



Jaboticabal – São Paulo – Brasil

UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA “JULIO DE MESQUITA FILHO”

FACULDADE DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS E VETERINÁRIAS

CÂMPUS DE JABOTICABAL

Jeanne Mendes Cattini Duarte Montrezor

Co-Orientador: Prof. Dr. Dante Pazzanese Duarte Lanna

Tese apresentada à Faculdade de Ciências Agrárias e

Veterinárias – Unesp, Câmpus de Jaboticabal, como

parte das exigências para a obtenção do título de

Doutor em Zootecnia (Produção Animal).

DADOS CURRICULARES

recebendo bolsa do CNPq para seu desenvolvimento científico. Formou-se em Janeiro

de 1998, e em 2000 retornou a Faculdade para a realização de Mestrado na mesma

área, conseguindo aprovação do projeto pela FAPESP. Em 2002 deu início ao

Doutorado com a aprovação da Bolsa pela FAPESP. Em 2004, foi convidada a

trabalhar na Danone Ltda na área de qualidade do leite, onde encontra-se até o

momento.

AGRADECIMENTOS

científico prestados.

-Agradeço a banca examinadora, que além de excelentes profissionais são

companheiros de profissão: Lúcia, Regina, Lenira e Augusto.

-Aos amigos de graduação que estão sempre presentes nos momentos mais

importantes de minha vida: Dri, Andréa, João Jorge, Longo, Baby

-Aos amigos que muito me ajudaram para que este trabalho fosse finalizado: Murote,

Gregório, Priscila, Beto, Leo

-Aos amigos de última hora: Lindenber e Japonês

extração e metilação da gordura. Obrigada pelo apoio.

-Aos amigos da Danone, que tiveram que me agüentar nos momentos antecedentes à

defesa da tese – puro estresse...

-Á minha segunda família (Araraquara), que tiveram que me agüentar nos domingos

antecedentes aos controles leiteiros, e que terão que me agüentar pelo resto de suas

vidas.......

Aqui encerra-se mais uma fase de minha vida..... Agradeço a todos que passaram por

ela e que deixaram ou levaram algo de importante. Que esta passagem seja mais um

SUMÁRIO

Página.

RESUMO................................................................................................................

ii

SUMMARY............................................................................................................. iv

INTRODUÇÃO........................................................................................................

CONCLUSÃO.........................................................................................................

O objetivo deste trabalho foi verificar os fatores que afetam o CLA e as

produções de leite, gordura e proteína ao longo da lactação, estudar o perfil de ácidos

graxos e verificar a existência de variação genética aditiva entre os indivíduos e a

possibilidade de incrementar os teores de CLA no leite de búfalas, mediante seleção.

Para tanto, foram analisadas 3929 lactações, provenientes de 2130 búfalas da raça

murrah, pertencentes a 12 rebanhos, localizados no estado de São Paulo, no decorrer

dos anos de 1997 a 2004. Para a estimação dos parâmetros genéticos, incluiu-se no

circulação.

Sob certas condições, o início da biohidrogenação é alterada, tendo como

resultado final a produção do CLA trans-10, cis-12, que apesar de constituir pequena

parte do CLA total, possui relação curvilínea entre o percentual deste isômero no CLA e

a redução da produção de gordura do leite (BAUMAN, 2001). Ainda de acordo com este

autor, os mecanismos específicos de ação deste isômero não são bem definidos, no

de ácidos graxos via síntese de novo.

)

CLA

vacênico

redução

(mais lenta)

-dessaturase

Ácido

Linolênico

significativos em alguns casos. Entretanto, a taxa de mortalidade de pacientes com

carcinoma invasivo e metastático no colon, coração, pulmão, pâncreas, próstata e

bexiga não tem sido reduzida (SPORN, 1996). Sendo difícil a erradicação do câncer,

faz-se necessário o controle sobre o uso do cigarro, poluentes industriais, radiação

ultravioleta e dieta como meio de prevenção (PARODI, 1999). A dieta é a causa de 1/3

das mortes por câncer (DOLL, 1992), sendo a mesma composta por ingredientes que

O isômero cis-9, trans-11 é reconhecido por sua capacidade anticarcinogênica.

Vários trabalhos confirmaram esta capacidade em modelos animais in vivo e em

cultura de tecido humano. Ip et al. (1994) observaram que a adição de menos de 1% de

(CUNNINGHAN et al., 1997; CESANO et al., 1998; VISONNEAU et al., 1996). Ip et al.

resultado indica que a eficácia na redução dos tumores, pelo CLA, não é afetada pela

quantidade de ácido linoléico ingerida. Os grupos suplementados com 0,5 e 1,0% de

CLA apresentaram redução dose-dependente na incidência e no número de tumores.

Em 1999, Ip et al., em trabalho realizado com ratos ingerindo manteiga com diferentes

desenvolvimento da glândula mamária, promoveu um menor crescimento do epitélio

mamário e reduziu o risco de câncer de mama. Além disso, foi observado maior

quantidade de CLA no fígado, gordura mamária, gordura peritoneal e plasma dos

animais que ingeriram as dietas com maior porcentagem de CLA. O isômero

encontrado em maior quantidade nos tecidos foi o cis-9, trans-11.

Além do câncer de mama, estudos comprovaram a eficiência do CLA em inibir o

crescimento de tumores em outros tecidos. Ha et al. (1987,1990) constataram a inibição

de tumores de pele e estômago em ratos tratados com substâncias carcinogênicas. Em

ambos os casos, o CLA foi fornecido em uma única dose anteriormente à indução do

câncer, a qual foi realizada por meio da administração de DMBA (para iniciar os

papilomas na pele) ou benzo(a)perene (para a indução do tumor no estômago). Por

meio destes trabalhos, concluiu-se que dietas contendo CLA podem ser utilizadas, com

sucesso, na prevenção do câncer. Em estudos com cultura de células humanas, uma

concentração fisiológica de CLA inibiu a proliferação de células de melanoma maligno e

câncer, a idade do animal, a duração da exposição à substância carcinogênica e ao

estágio da carcinogênese (PARODI, 1997).

Outro isômero com reconhecida atividade biológica é o trans-10, cis-12, onde

estudos têm demonstrado que sua infusão abomasal tem diminuído o teor e a produção

de gordura no leite das vacas (CHOUINARD et al., 1999; LOOR e HERBEIN, 1998;

BAUMGARD et al., 2000).

Chouinard et al. (1999) trabalharam com vacas holandesas e promoveram a

infusão de diferentes porcentagens de CLA no abomaso dos animais. Não foi

observado aumento na ingestão de matéria seca, porém houve significante redução na

produção e porcentagem de gordura no leite. Ocorreu diminuição nos ácidos graxos de

Segundo os mesmos autores, observou-se diferença na eficiência de transferência dos

isômeros para a gordura do leite. Cerca de 33% do CLA cis-9, trans-11 infundido foi

secretado na gordura do leite, enquanto o CLA cis-10, trans-12 foi transferido com

eficiência de apenas 21%.

Baumgard et al. (2001) promoveram a infusão do CLA trans-10 cis-12, em

diferentes doses, no abomaso de vacas holandesas. Todas as doses de trans-10, cis-

12 reduziram, significativamente, a produção e porcentagem da gordura do leite. Esta

redução foi de 25% para a infusão de baixa dose do isômero (3,5g/dia) e 50% para alta

fator alfa), que são mediadores da imunidade e, principalmente, da resposta

inflamatória, são produzidas pelos macrófagos e outras células imunes quando são

essas citoquinas podem resultar em diminuição das taxas de ganho, perdas de

músculo, redução da eficiência alimentar e anorexia (COOK, 2001), uma vez que estas

substâncias redirecionam o fluxo de nutrientes para os produtos relacionados com a

imunidade e induzem a degradação e diminuição de síntese do músculo esquelético

(COOK e PARIZA, 1998). Parece que o CLA age na regulação e/ou ação dessas

citoquinas, não permitindo o catabolismo do músculo esquelético.

inverno (época em que ocorre diminuição da oferta de pasto) (RIEL, 1963; PARODI ,

observado que os animais que permaneceram a pasto no decorrer do experimento

apresentaram aumento de 500% no teor de CLA da gordura do leite, quando

comparados aos animais alimentados com 50% de forragem conservada e 50% de

grãos. Segundo os mesmos autores, existe um aumento linear de CLA no leite de

Nova Zelândia, por possuírem maior acesso a pastagens novas e ricas em ácidos

graxos polinsaturados, são duas ou três vezes maiores que os observados nos Estados

Unidos (PARODI, 1996).

Kelly et al. (1998) observaram substancial variação individual (9,9 a 51,7 mg de

CLA/g de gordura) em vacas no mesmo estágio de lactação, consumindo a mesma

dieta e submetidas ao mesmo manejo. Observações semelhantes foram obtidas por

2002). Assim sendo, é possível que o teor de CLA na gordura deste leite também seja

maior. Por meio da estimação de parâmetros genéticos para o teor de CLA no leite,

será possível verificar se tal característica poderá ser incrementada por seleção,

ocorrendo então, aumento na qualidade nutricional e no valor econômico deste,

acarretando beneficio à saúde humana.

MATERIAL E MÉTODOS

Foram consideradas as lactações até a quarta ordem de parto, truncadas aos

270 dias. As lactações com produções de leite (PL) menores que 500 kg e maiores que

Mensalmente, foram realizados controles leiteiros nas fazendas, e as amostras

As amostras de leite para análise de CLA foram congeladas para posterior

análise. Para a extração da gordura do leite, com fins na análise do perfil de ácidos

graxos, a amostra foi descongelada e centrifugada (centrífuga refrigerada, sob rotação

de 9.000 g, a 8ºC, por 30 minutos), para se concentrar a gordura. Pesou-se 40 mg de

descrita por Hara e Radim (1978). Para a metilação dos ácidos graxos, seguiu-se a

metodologia descrita por Christie (1982), e adaptada por Chouinard et al. (1999)

empregando-se solução básica de metóxido de sódio.

A quantificação dos ácidos graxos do leite foi realizada por meio de

cromatografia gasosa em equipamento Trace GC 3, aparelhado com detector de chama

(FID), coluna capilar SUPELCO 2-4056 SP

– 2560, de 100 m x 0.25 mm de diâmetro,

i

x

j

(C

i

) = efeito aleatório da j

ésima

búfala dentro da i

ésima

fazenda;

A

k

= efeito fixo do k

ésimo

mês de parto (1, ...., 9);

m

Os parâmetros genéticos foram estimados por meio do método de Máxima

Verossimilhança Restrita, aplicado a um modelo animal utilizando o programa

MTDFREML, desenvolvido por Boldman et al. (1993). Foram feitas análises

unicaracterísticas, e calculou-se as correlações entre os valores genéticos para cada

característica utilizando a saída mtdf78 do programa MTDFREML, mediante

procedimento Proc Corr do SAS (2004). No modelo matemático, considerou-se como

efeito fixo o grupo de contemporâneo (ano de parto, fazenda e estação), e as

covariáveis idade ao parto (linear e quadrática) e a duração da lactação (linear e

quadrática). Para PL, PG e PT, foram considerados os efeitos genético aditivos e de

ambiente permanente. Para o CLA, apenas o efeito genético aditivo, pois foram

Y = vetor das observações (produções de leite, gordura e proteína e % CLA);

a = vetor dos efeitos genéticos diretos do animal;

pe = vetor de efeitos de ambiente permanente para PL, PG e PT;