( PDF ) Avaliação de características químicas dos frutos, diversidade genética e detecção de marcas moleculares associadas ao gene da apirenia, em variedades de videira

Download PDF

ads:

AVALIAÇÃO DE CARACTERÍSTICAS QUÍMICAS DOS FRUTOS,

DIVERSIDADE GENÉTICA E DETECÇÃO DE MARCAS

MOLECULARES ASSOCIADAS AO GENE DA APIRENIA, EM

VARIEDADES DE VIDEIRA

FELIPE CAVALCANTI CARNEIRO DA SILVA

UNIVERSIDADE ESTADUAL DO NORTE FLUMINENSE DARCY

RIBEIRO-UENF

CAMPOS DOS GOYTACAZES - RJ

JULHO – 2006

ads:

Livros Grátis

http://www.livrosgratis.com.br

Milhares de livros grátis para download.

AVALIAÇÃO DE CARACTERÍSTICAS QUÍMICAS DOS FRUTOS,

DIVERSIDADE GENÉTICA E DETECÇÃO DE MARCAS

MOLECULARES ASSOCIADAS AO GENE DA APIRENIA, EM

VARIEDADES DE VIDEIRA

FELIPE CAVALCANTI CARNEIRO DA SILVA

Tese apresentada ao Centro de Ciências e

Tecnologias Agropecuárias da Universidade

Estadual do Norte Fluminense Darcy

Ribeiro, como parte das exigências para

obtenção do título de Mestre em Genética e

Melhoramento de Plantas

Orientador: Prof. Alexandre Pio Viana

CAMPOS DOS GOYTACAZES - RJ

JULHO – 2006

ads:

AVALIAÇÃO DE CARACTERÍSTICAS QUÍMICAS DOS FRUTOS,

DIVERSIDADE GENÉTICA E DETECÇÃO DE MARCAS

MOLECULARES ASSOCIADAS AO GENE DA APIRENIA, EM

VARIEDADES DE VIDEIRA

FELIPE CAVALCANTI CARNEIRO DA SILVA

Tese apresentada ao Centro de Ciências

e Tecnologias Agropecuárias da

Universidade Estadual do Norte

Fluminense Darcy Ribeiro, como parte

das exigências para obtenção do título de

Mestre em Genética e Melhoramento de

Plantas

Aprovada em 27 de julho de 2006

Comissão Examinadora:

Prof. Messias Gonzaga Pereira (Ph.D., Melhoramento de Plantas) – UENF

Prof. Gonçalo Apolinário de Souza Filho (Doutor, Biociências e Biotecnologia) –

UENF

Prof. Jurandi Gonçalves de Oliveira (Doutor, Biologia Vegetal) – UENF

Prof. Sergio Yoshimitsu Motoike (PhD., Natural Resources and Environmental

Sciences) – UFV

Prof. Alexandre Pio Viana (Doutor, Produção Vegetal) – UENF

Orientador

A Deus, por tanto me abençoar, à minha noiva Denise, meus pais Walter e Kica

e meus avós.

AGRADECIMENTO

A toda minha famílIa (meus irmãos Paula e Daniel, minha mãe Kica e meu

pai Walter), que sempre me apoiou e tanto me incentivou.

Ao meu orientador Prof. Alexandre Pio Viana, que depositou sua confiança

em mim.

Aos professores Messias, Jurandi, Gonçalo e Ricardo Smith, pelas valiosas

sugestões.

Aos amigos Ramon, Ana Paula, Luciléia, Mirella, Renata, Patrícia, Marília,

Wellington, Gustavo, Chico, Willian, Silvério e, especialmente ao Chico e Pedro,

que tanto me ajudaram.

À UENF e CAPES, pela bolsa de estudos e à FAPERJ e CNPQ, pelo apoio

financeiro.

A Deus.... porque como disse Ele mesmo:

“Eu sou a videira, vós, os ramos. Quem permanece em Mim, e Eu, nele,

esse dá muito fruto; porque sem Mim nada podeis fazer.”

João 15:5

iii

SUMÁRIO

RESUMO .......................................................................................................... vii

ABSTRACT........................................................................................................ ix

1. INTRODUÇÃO ...............................................................................................1

2. REVISÃO DE LITERATURA ..........................................................................4

2.1. Origem da videira......................................................................................4

2.2. Classificação botânica. .............................................................................4

2.3. Aspectos reprodutivos ..............................................................................5

2.3.1. Biologia floral ....................................................................................5

2.3.2. Modo de reprodução.........................................................................5

2.4. Aspectos químicos e fenológicos..............................................................6

2.5. Potencialidades do melhoramento assistido por marcadores de

DNA ...............................................................................................................10

2.6. Perspectivas de utilização de variedades apirênicas..............................12

2.7. Hipóteses para a herança da apirenia ....................................................14

2.8. RAPD na viticultura e diversidade genética ............................................17

3. TRABALHOS ................................................................................................19

3.1. ESTUDO DA DIVERSIDADE GENÉTICA EM DOZE CULTIVARES

DE VIDEIRAS E DETECÇÃO DE MARCAS MOLECULARES

ASSOCIADAS AO GENE DA APIRENIA..........................................................19

RESUMO ..........................................................................................................20

ABSTRACT.......................................................................................................22

3.1.1. INTRODUÇÃO................................................................................23

3.1.2. MATERIAL E MÉTODOS ...............................................................25

3.1.2.1. Material genético .................................................................25

3.1.2.2. Extração de DNA.................................................................26

3.1.2.3. Reação da polimerase em cadeia para RAPD....................28

3.1.2.4. Reação da polimerase em cadeia para SCAR....................28

3.1.2.5. Enzima de restrição.............................................................28

3.1.2.6. Teste de eficiência do marcador molecular SCAR

ligado ao gene da apirenia em videiras............................................29

3.1.2.7. Análises estatísticas............................................................29

3.1.3. RESULTADOS E DISCUSSÃO......................................................30

3.1.3.1. Seleção de iniciadores para análise de RAPD....................30

3.1.3.2. Marcador SCAR ligado ao gene da apirenia .......................35

3.1.4. CONCLUSÕES...............................................................................38

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS..................................................................39

3.2. CARACTERIZAÇÃO QUÍMICA E DETERMINAÇÃO DOS ESTÁDIOS

FENOLÓGICOS DE VARIEDADES DE VIDEIRAS CULTIVADAS NO

NORTE FLUMINENSE .....................................................................................41

RESUMO ..........................................................................................................42

ABSTRACT.......................................................................................................43

3.2.1. INTRODUÇÃO................................................................................44

3.2.2. MATERIAIS E MÉTODOS..............................................................46

3.2.2.1. Material genético.................................................................46

3.2.2.2. Determinação do ciclo reprodutivo ......................................47

3.2.2.3. Composição química dos frutos ..........................................48

3.2.2.4. Delineamento experimental e análises estatísticas.............49

3.2.3. RESULTADOS E DISCUSSÃO......................................................50

3.2.3.1. Estádios fenológicos das variedades de videiras................50

3.2.3.2. Características químicas de frutos de videiras....................53

3.2.3.2.1. Teores de sólidos solúveis, acidez total titulável e

relação SST e ATT.......................................................................53

3.2.3.2.2. Teor de vitamina C.......................................................57

3.2.3.2.3. Teores de antocianinas................................................58

3.2.4. CONCLUSÕES...............................................................................61

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS..................................................................62

3.3. RESUMOS E CONCLUSÕES ...............................................................65

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS..................................................................67

RESUMO

SILVA, Felipe Cavalcanti Carneiro da; M. Sc.; Universidade Estadual Do Norte

Fluminense Darcy Ribeiro; julho, 2006; Avaliação de características químicas,

diversidade genética e detecção de marcas moleculares associadas ao gene da

apirenia, em variedades de videira. Professor orientador: Alexandre Pio Viana.

Co-orientadores: Jurandi Gonçalves de Oliveira, Messias Gonzaga Pereira e

Sergio Yoshimitsu Motoike.

O objetivo deste trabalho foi realizar a caracterização molecular da

coleção de germoplasma da Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy

Ribeiro. Para tanto, realizou-se o estudo da diversidade genética de 12

variedades elite por meio de marcadores RAPD. Através da dissimilaridade

genética baseada no índice de complemento de Jaccard foi obtida a matriz de

distância entre cada par de genótipo, sendo as variedades Niágara Rosada e

Itália as mais distantes geneticamente e as variedades Rubi e Itália as mais

próximas. Com os métodos de agrupamento de otimização de Tocher e

hierárquico do vizinho mais distante, foi possível determinar 3 grupos distintos. O

método de Tocher agrupou a variedade apirênica UFV 01 num grupo separado,

enquanto que, pelo método do vizinho mais distante, a variedade UFV 01 formou

um grupo com a variedade Romana, também apirênia. O marcador SCAR SCC8

mostrou-se bastante eficiente para discriminar genótipos apirênios de genótipos

com semente. As variedades apirênias Romana e UFV 01 revelaram-se

vii

indivíduos heterozigotos em relação à característica de apirenia. Objetivando

avaliar o comportamento de variedades de videiras introduzidas na região Norte

Fluminense, realizaram-se a determinação do ciclo reprodutivo e composição

química de seis variedades de videiras. Os resultados obtidos permitiram as

seguintes observações: as condições climáticas, no ano de 2006, garantiram uma

considerável redução do período de poda à colheita para todas as variedades

estudadas. Pela análise química dos frutos, todas as variedades apresentaram

resultados satisfatórios quanto aos teores de SST e acidez, à relação SST/ATT,

vitamina C e antocianinas. A variedade Romana obteve excelentes resultados

quanto ao teor de sólidos solúveis, acidez e vitamina C.

viii

ABSTRACT

SILVA, Felipe Cavalcanti Carneiro da; M. Sc.; Universidade Estadual do Norte

Fluminense Darcy Ribeiro; July, 2006; Evaluation of chemical characteristics of

the fruits, genetic diversity and detection of molecular marks linked to Seedless, in

grapes. Orienting Professor: Alexandre Pio Viana. Co-orientings: Jurandi

Gonçalves de Oliveira, Messias Gonzaga Pereira and Sergio Yoshimitsu Motoike.

The objective of this work was a molecular characterization of the basic

grape germplasm collection of the Universidade Estadual do Norte Fluminense

Darcy Ribeiro. The genetic diversity of 12 elite varieties was evaluated by means

of RAPD markers. Through the genetic dissimilarity based on the complement of

Jaccard’s index a distance matrix of each genotype pair was established. The

varieties Niágara Rosada and Itália were genetically the most distant and Rubi and

Itália the closest. With the grouping methods of Tocher optimization and

hierarchical most distant neighbor three distinct groups were discriminated. The

Tocher method grouped the seedless variety UFV 01 into a separate group, while

by the method of the most distant neighbor UFV 01 formed a group with variety

Romana, also seedless. SCAR marker SCC8 appeared effective to discriminate

genotypes with from genotypes without seeds. The seedless varieties Romana

and UFV 01 seemed heterozygous individuals in relation to the trait seedlessness.

The performance of grapevine varieties introduced into the Região Norte

Fluminense were evaluated based on the reproductive cycle and chemical

composition of six grapevine varieties. Results allowed the following observations:

climatic conditions in 2006 reduced the pruning - harvest period considerably in all

study varieties. In the chemical fruit analysis, all varieties presented satisfactory

results regarding SST contents, acidity, SST/ATT ratio, vitamin C, glucose,

fructose, sucrose and anthocyanins. The contents of soluble solids, acidity and

vitamin C in variety Romana were considered excellent.

1. INTRODUÇÃO

O cultivo de videiras é uma arte relativa à antiguidade. Há registros sobre

a viticultura e enologia que datam de 5.000 a 6.000 anos atrás. A produção

mundial excede as 66 milhões de toneladas, ultrapassando a produção de todas

as outras frutas temperadas, ficando atrás somente do Citrus e da Banana (FAO,

2005). A videira é cultivada em mais de 9 milhões de hectares ao redor do mundo,

sendo seu fruto consumido principalmente na forma de vinhos, in natura, sucos e

uva-passa.

A produção brasileira de uvas finas de mesa desenvolveu-se com base

em uvas com sementes, especialmente da cultivar Itália e de suas mutações

(Rubi, Benitaka e Brasil). Atualmente, a Região Sul é a principal área produtora no

Brasil, responsável por mais de 600 mil toneladas por ano, sendo a maior parte

reservada à produção de vinhos. Nas Regiões Sudeste e Nordeste, predominam

as variedades destinadas ao consumo in natura (uvas de mesa), principalmente a

Itália e a Rubi (IBGE, 2003). A expansão da viticultura tropical com essas

cultivares proporcionou ao país a grande oportunidade de exportar uvas frescas

nos períodos de entressafra, em que a oferta diminuía consideravelmente. Na

década de 80, o Brasil conseguiu exportações em volumes razoáveis no Vale do

São Francisco, porém logo se percebeu que o mercado internacional era ocupado

por uvas sem sementes, que, até então, não eram cultivadas no país. A partir de

1993, depois de muita pesquisa, atingiram-se níveis satisfatórios de produtividade

com as cultivares sem sementes importadas, chegando a 37.000 toneladas em

2003. Todavia, a produção das cultivares tradicionais sem sementes apresentava

elevados custos de produção e riscos consideráveis devido à sua inconstância

produtiva, sensibilidade a doenças e ao rachamento de bagas pela ocorrência de

chuvas. Esta situação obrigou o setor produtivo a desenvolver cultivares de uvas

sem sementes adaptadas às condições das regiões produtoras do país e com

qualidade para competir no mercado externo. Diante disso, em 2003, a Embrapa

lançou as primeiras cultivares de uvas sem sementes do país, a BRS Morena,

BRS Clara e BRS Linda.

As regiões mais quentes do Brasil produzem uva de mesa de qualidade

superior, quando comparadas com as regiões tradicionalmente produtoras, devido

ao baixo índice de precipitação, alta luminosidade e temperatura, como a região

Noroeste de São Paulo. Neste caso, a região Norte Fluminense apresenta

potencial climático para a viticultura de mesa. Entretanto, a competitividade da

viticultura depende do uso de cultivares adaptadas, cuja produção atenda às

demandas do mercado. Em geral, as cultivares comerciais são oriundas de zonas

temperadas, onde a precipitação pluviométrica nos meses de verão é baixa. A

introdução destas cultivares nas condições brasileiras, em regiões onde o verão é

quente e chuvoso, tem apresentado como principal problema a ocorrência de

doenças, sobretudo míldio e oídio (Camargo, 1997).

O mercado de uvas de mesa é um dos mercados hortifrutícolas que mais

crescem no Brasil. O consumo per capita deste produto no país subiu de 0,4

Kg/hab/ano no início da década de 80 para quase 2,7 Kg/hab/ano em 2001

(Sentelhas, 1998).

O Estado do Rio de Janeiro constitui o segundo maior mercado

consumidor do país, totalizando 10% da população do Brasil (Campo, 1998). Esse

Estado apresenta 90% de seus habitantes concentrados na área urbana; apesar

disso, mesmo alguns municípios apresentando ótimas condições climáticas,

localização geográfica e infra-estrutura para investimentos, não se observam

plantios comerciais expressivos de videiras dentro do estado.

Nesses últimos anos, os viticultores têm-se preocupado em diversificar a

produção vitícola com a introdução de novas variedades não somente para evitar

a saturação do mercado com a oferta exclusiva de uva Itália mas também para

adaptação às novas exigências do mercado interno e principalmente do mercado

externo.

Os objetivos do presente trabalho foram avaliar a divergência genética da

coleção do banco de germoplasma de videiras da Universidade Estadual do Norte

Fluminense Darcy Ribeiro, detectar marcas moleculares associadas ao gene de

apirenia em videiras, determinar as características químicas de frutos e os

estádios fenológicos de variedades elite de videiras nas condições do Norte

Fluminense.

2. REVISÃO DE LITERATURA

2.1. Origem da videira

A região entre o Mar Negro e o Mar Cáspio, no Velho Mundo é considerada

por taxonomistas como o local original das videiras, onde ainda hoje se

encontram na forma silvestre. No leste europeu, a videira se propagou

inicialmente ao redor da região mediterrânea, estendendo-se para o interior e

atingindo os vales da França, no tempo dos romanos. Em 1.500, a viticultura

estabeleceu-se nas ilhas da madeira e canárias. Mais tarde difundiu-se na África

do Sul, Austrália e América do sul. Ainda hoje são encontradas novas espécies

em regiões inexploradas, como, por exemplo, no México (Reisch e Pratt,1996).

2.2. Classificação botânica

As videiras pertencem à classe dicotyledoneae, ordem rhamnales, família

Vitaceae, são compostas de 14 gêneros e mais de 1.000 espécies. O gênero de

grande interesse econômico e o único que fornece alimento é o Vitis. Outros

gêneros, como Parthenocissus, Ampelopsis e Cissus, fornecem importantes

espécies ornamentais. O gênero Vitis é subdividido em duas seções: Muscadínea,

com todas as espécies diplóides 2n=2X=40 cromossomos, e Euvitis, também com

espécies diplóides 2n=2X=38 cromossomos.

A espécie Vitis vinifera faz parte da seção Euvitis, sendo a espécie que

apresenta as melhores qualidades de frutos e que deu origem a mais de 14.000

cultivares por todo o mundo (Reisch e Pratt,1996).

2.3. Aspectos reprodutivos

2.3.1. Biologia floral

O conhecimento da biologia floral tem grande valor na exploração

econômica de uma espécie (Oliveira e Lima, 2000). Em videiras, existem três

principais tipos de flor: flores hermafroditas, cujos estames são eretos e com

anteras produzindo pólen funcional, e pistilo, também funcional; flores pistiladas,

encontradas em plantas femininas de espécies dióicas, em que o pistilo é bem

desenvolvido e funcional, porém os estames são recurvados e o pólen geralmente

estéril; e flores estaminadas, encontradas em plantas masculinas com estames

eretos, pólen viável e um pistilo que sofre um aborto após o estádio de óvulos

imaturos (Gerrath e Posluszny, 1988). A grande maioria das espécies cultivadas

para produção de fruto é hermafrodita.

De acordo com Reisch e Pratt (1996), os cachos de flores são formados

em gemas desenvolvidas durante o verão, antes do florescimento, mas as flores

se desenvolvem principalmente na primavera. As partes das flores diferenciam-se

na seguinte ordem: cinco sépalas, uma pétala e um estame unidos emergem de

cada um dos cinco primórdios e, por último, o pistilo aparece, com um anel, dos

lados centrais nos quais a placenta se desenvolve. Depois de formado, o pistilo

apresenta um curto estilete que termina no estigma. As pétalas são livres no

início, porém, mais tarde, elas se juntam para formar a caliptra, que vai cobrir o

botão floral. O ovário possui dois óvulos que contêm dois lóculos cada um.

A antese ocorre freqüentemente entre 6 e 9 h da manhã com o aumento

da temperatura, ocorrendo também entre 2 e 4 h da tarde.

2.3.2. Modo de reprodução

A polinização consiste na transferência do grão de pólen da antera e sua

deposição no estigma da flor, com conseqüente fertilização. O método de

polinização em videiras tem sido motivo de grandes debates. Souza (1996) e

Borém (1999) afirmam que as variedades cultivadas são alógamas e sua

polinização é principalmente realizada por insetos. Para Reisch e Pratt, (1996), as

plantas com flores hermafroditas provavelmente são autopolinizadas.

Com programas de melhoramento em que se utilizam métodos de

hibridação, deve-se levar em consideração que a receptividade do estigma é uma

etapa muito importante da maturação da flor porque pode influenciar grandemente

na taxa de fertilização. Em videiras, Reisch e Pratt (1996) afirmam que o estigma

encontra-se receptivo quando seu tecido epidérmico secreta uma solução de

açúcar do canal estilar formando uma pequena gotícula na ponta do estigma.

Flores que não secretam essa solução não se fecundam e, mais tarde, secam e

caem. Um fato importante que se deve levar em conta, durante o período de

polinização, é o uso inadequado de defensivos agrícolas que podem causar

efeitos deletérios sobre a biologia floral (Couto e Nacif, 1999).

2.4. Aspectos químicos e fenológicos

O número de cachos de fruto por gema pode variar consideravelmente de

ano para ano, para qualquer cultivar de uva. A variação sazonal na capacidade de

frutificação de gemas pode ser devida a fatores climáticos, práticas culturais ou

doenças. Entre os aspectos climáticos mais estudados estão a luz, temperatura,

estresse hídrico e fotoperíodo. As práticas culturais de maior influência na

capacidade de frutificação de gemas incluem a poda, sistema de condução,

adubação (especialmente com nitrogênio) e irrigação (Kliewer, 1981).

A luz é um fator importante na fertilidade das gemas; as “raios de sol”,

que crescem em quase toda estação em plena luz solar, são superiores às

sombreadas, que crescem no interior do dossel da videira, sendo que, naquele

caso, o número de gemas frutíferas e os cachos são quase invariavelmente

maiores (Kliewer, 1981).

De acordo com Kliewer (1981), o efeito do déficit hídrico na formação de

gemas frutíferas da videira tem relatos conflitantes, com alguns indicando

melhoria e outros, uma diminuição. Sabe-se que, com o déficit de água, há um

decréscimo na taxa de crescimento do ramo. No período de iniciação floral, a

fertilidade das gemas pode ser melhorada, por desvio de assimilados, para o

desenvolvimento dos primórdios, mas se o déficit é severo, os estômatos se

fecham, a fotossíntese é reduzida, assim como a acumulação de carboidratos

(Smart et al., 1964).

A avaliação qualitativa de videiras está relacionada com os teores de

sólidos solúveis totais (SST), o pH, a acidez total titulável (ATT), a relação SST/

ATT, conteúdo de Vitamina C e açúcares.

Açúcares são os principais sólidos solúveis no suco da fruta; por esta

razão os sólidos solúveis podem ser utilizados para estimar o conteúdo de

açúcares. Ácidos orgânicos, aminoácidos, componentes fenólicos e pectinas

solúveis também contribuem para os sólidos solúveis (Mitcham et al., 1996). O

teor de SST caracteriza-se por um crescente aumento em função do tempo; este

comportamento em videiras, a partir da maturação das bagas, deve-se ao

aumento da concentração de açúcares, sendo que o valor mínimo recomendado

pelas normas internacionais de comercialização para uvas de mesa é de 17 °Brix.

(Barros et al., 1995). De acordo com as normas brasileiras, a uva é considerada

imatura somente com valores de SST inferiores a 14 ºBrix.

No Vale do São Francisco, a colheita de dois ciclos da variedade Superior

Seedless, entre 1999 e 2000, apresentou uma média de 17,3 °Brix no teor de

sólidos solúveis, ficando acima do valor mínimo recomendado (Grangeiro et al.

2002). No submédio do Vale do São Francisco, as variedades Superior Seedless

e Crimson Seedless apresentaram valores de 17,3 e 19,2 ºBrix, respectivamente,

(Souza Leão, 2001).

A acidez total titulável representa a concentração de ácidos orgânicos

presentes nas bagas e é expressa em porcentagem de ácido tartárico. Sabe-se

que a ATT decresce a partir do início do amolecimento das bagas devido a

diversos fatores e, mais tarde, sofre uma diluição pelo aumento do volume das

bagas. Possner e Kliewer (1985) afirmam que o conteúdo de ácido tartárico se

mantém constante, porém, durante a maturação, a concentração do ácido

tartárico diminui devido ao efeito do aumento de volume da baga. Fernandez

(1991) atribui a diminuição da acidez, durante o processo da maturação, a dois

fatores: à diluição em função da grande quantidade de água que é absorvida

durante a maturação e à diminuição dos ácidos málico e tartárico durante a

respiração dos frutos. No Vale do São Francisco, a ATT, no período de 1999 a

2000 da variedade Superior Seedless, foi de 0,456 g/100 ml de suco (Grangeiro et

al., 2002). Souza Leão (2001) encontrou na região do submédio do Vale do São

Francisco, para as variedades Fantasy Seedless e Crimson Seedless, valores

inferiores a 1 g /100ml de suco.

A determinação da relação SST/ATT é o melhor indicativo do grau de

maturação das uvas, e a variação de suas concentrações são influenciadas por

fatores genéticos e ambientais. A Associação de Exportadores do Chile (1997)

adota normas de qualidade, para uvas de mesa, com base nas normas dos

países importadores. A amostragem inicial para avaliar a maturação mínima do

lote é determinada pelo teor de sólidos solúveis totais, podendo ser determinada

também pela relação SST/ATT, não podendo ser inferior a 20. Recomenda-se

que essa relação seja determinada sempre que os SST não atinjam o requisito

mínimo .

Grangeiro et al. (2002), no Vale do São Francisco, encontraram uma

relação SST/ATT de 38,21, bem maior que o mínimo recomendado, que é de 20

(Bleinroth, 1993; Choudhury, 2000).

Antocianinas são os principais agentes responsáveis pela coloração

vermelha das uvas. Elas se localizam na casca das videiras, nos vacúolos das

três primeiras camadas de células da hipoderme. O clima influencia diretamente o

conteúdo de antocianinas nas uvas; temperatura e luminosidade excessivamente

baixa ou elevada não são favoráveis, além disso, as composições químicas e

físicas dos solos também afetam o acúmulo de antocianinas. Solos arenosos são

mais favoráveis que os solos argilosos, e o pH ácido é propício à coloração roxa

das bagas. Segundo Nunez et al. (2004), a concentração e perfil das antocianinas

em videiras vermelhas variam entre espécies, variedades, grau de maturação,

área de produção, práticas culturais e produtividade. De acordo com Hilbert et al.

(2003), altas concentrações de nitrogênio são capazes de inibir a síntese de

antocianinas. Estes autores ainda afirmam que a síntese de antocianinas pode

aumentar quando os teores de açúcares intracelulares estão altos.

A composição de antocianinas tem sido estudada por muitos autores com

o intuito de caracterizar variedades e estabelecer a origem das videiras (Nunez et

al., 2004). Nunez et al. (2004), trabalhando com as variedades Graciano,

Cabernet-Sauvignon e Tempranillo cultivadas na estação de Navarra, na

Espanha, puderam diferenciá-las de forma bem clara, por meio da variação nos

teores de antocianinas, através da técnica de cromatografia líquida.

Os açúcares da uva são representados principalmente pela glicose e

frutose sendo esta última a de maior quantidade no fruto maduro. O depósito de

açúcar nas bagas é um fenômeno de caráter osmótico e hormonal, e o teor

começa a aumentar na polpa a partir da viragem, continuando por toda a

maturação até que na fase de sobrematuração, torne-se parcialmente oxidado.

Baixas temperaturas são nocivas ao acúmulo de açúcar, entretanto, uma variação

na amplitude térmica diária favorece o aumento da concentração de açúcar

(Pommer, 2003). Chinnici et al. (1999) afirmam que as infestações das folhas de

videiras por fungos podem interferir na concentração de açúcares, uma vez que

ocorre a redução da área foliar e conseqüente queda da fotossíntese.

As frutas e vegetais são responsáveis por 95% das fontes de ácido

ascórbico da alimentação humana, sendo a vitamina C um dos mais importantes

nutrientes encontrados nesses alimentos (Henshall, 1981).

De acordo com Nakasone et al. (1966) e Henshall (1981), citados por

Matsuura et al., (2001), a quantidade de vitamina C encontrada na acerola

apresenta diferenças de acordo com a variedade, maturação do fruto, época de

colheita, práticas culturais, fertilidade e disponibilidade de nutrientes do solo e

clima (temperatura, precipitação pluvial, insolação). Asenjo e Guzmán (1946)

relataram valores entre 1.000 e 3.300 mg de ácido ascórbico por 100 g de polpa

de acerola

Segundo Mievska (1984), o teor de vitamina C em videiras aumenta

durante o amadurecimento, atingindo seu pico na fase de maturação fisiológica.

Este autor afirma que o teor de vitamina C em frutos maduros varia de 1,15 a 6,5

mg/100 g polpa.

A caracterização fenológica do ciclo produtivo da videira fornece o

conhecimento das prováveis datas da colheita, indicando o potencial climático das

regiões para o cultivo da videira. As principais vantagens do estudo da fenologia

da videira são: redução dos tratamentos fitossanitários, que passam a ser

realizados de maneira mais racional, de acordo com as principais pragas e

doenças; melhoria na qualidade dos frutos, economia de insumos e colheita na

entressafra brasileira (Murakami et al., 2002).

As condições climáticas têm grande influência na fenologia e fisiologia

das plantas, de forma que a videira de clima tropical semi-árido apresenta um

comportamento totalmente distinto daquele apresentado nas regiões subtropicais

e temperadas (Murakami et al., 2002). De acordo com Grangeiro et al. (2002), no

Vale do São Francisco, a época da poda influenciou a duração do ciclo

fenológico, sendo que a poda realizada no primeiro semestre (16/02/2000)

ocasionou uma antecipação de 14 dias na colheita. Isto, provavelmente, deve-se

às condições climáticas, principalmente à temperatura. Neste período, as

temperaturas máxima e mínima são maiores em relação às do segundo semestre,

proporcionando uma antecipação na maturação dos frutos (Pommer, 2003).

Segundo Murakami et al. (2002), na região de Cardoso Moreira (RJ), o

ciclo da videira Itália é de aproximadamente 138 dias com poda em abril e, na

região de Jales (SP), é de 150 dias com poda em março e colheita em julho.

De acordo com Eichhorn e Lorenz (1977), os estádios de

desenvolvimento de todo o ciclo da videira, da poda à colheita, são os seguintes:

1) Período da poda ao início da brotação;

2) Início da brotação ao pleno florescimento;

3) Período do pleno florescimento ao início da maturação;

4) Início da maturação à plena maturação.

2.5. Potencialidades do melhoramento assistido por marcadores de DNA

Milach (1998), citado por Costa (2004), descreve que os marcadores

moleculares são características de DNA que diferenciam dois ou mais indivíduos

e são herdadas geneticamente. Esses marcadores são utilizados para o aumento

da eficiência de seleção, para o melhor conhecimento e caracterização do

germoplasma e maximização dos ganhos genéticos.

O melhorista pode ser auxiliado pelo uso de marcadores moleculares, que

permitem quantificar a variabilidade genética existente em termos de DNA e

correlacioná-la com a expressão fenotípica em procedimentos de mapeamento

genético (Ferreira e Grattapaglia, 1995). As técnicas moleculares são também

importantes ferramentas no melhoramento para resistência a doenças, sobretudo

em espécies perenes, pelo uso da seleção assistida por marcadores.

Desde o surgimento da reação em cadeia da polimerase (PCR),

pesquisadores reconheceram a sua grande utilidade na caracterização genética

de organismos. Os marcadores moleculares foram adaptados para resolver vários

problemas (Vidal et al., 2000). No caso de videiras, têm sido de grande valia na

identificação das variedades, relação genética entre elas e mapeamento dos

genes.

A técnica conhecida como RAPD utiliza-se de um oligonucleotídeo

sintético como iniciador do processo de amplificação, que produz um polimorfismo

detectado na presença ou ausência de bandas discretas de DNA, de expressão

dominante, o que, de certa forma, dificulta a detecção de indivíduos heterozigotos.

Esta técnica é vantajosa por requerer pequenas quantidades de DNA, não

envolver o uso de sondas radioativas e demandar pouca mão-de-obra (Ferreira e

Grattapaglia, 1995).

A técnica de RAPD tem tido muito sucesso na diferenciação de cultivares

de várias espécies. Jean-Jaques et al. (1993) testaram esse método para

caracterização interespecífica de Vitis vinifera em 8 cultivares, utilizando um total

de 50 iniciadores que produziram de 2 a 15 fragmentos de DNA. Dois iniciadores

permitiram a obtenção de 5 fenótipos entre os 8 testados. Os autores ainda

afirmam que clones de certas variedades podem ser caracterizados por

marcadores RAPD.

Striem et al. (1994) utilizaram 78 iniciadores, que revelaram polimorfismo

entre Early-Muscat e Flame-Seedless em 82 indivíduos da progênie resultante do

cruzamento dessas duas variedades. Com esses iniciadores, foi possível

identificar correlações com cor de baga, sabor e apirenia. Para apirenia, foi

identificado um primer (OPE-10) presente na variedade sem semente Flame-

Seedless e numa mistura de DNA de 10 indivíduos apirênios da progênie,

estando ausente na variedade com semente.

O uso de marcadores tipo SCAR aumenta a utilidade dos marcadores

RAPD por serem altamente específicos e muitas vezes dispensarem a corrida em

gel de eletroforese. Sua principal vantagem é a grande especificidade de

pareamento com o DNA. Esses marcadores representam loci únicos

geneticamente definidos, identificados por amplificação de PCR de DNA

genômico com pares de primers específicos de oligonucleotídeos (Ferreira e

Grattapaglia, 1995).

Lahouge et al. (1998), tentando identificar marcadores ligados ao gene I,

responsável pela expressão da apirenia, utilizaram cento e quarenta marcadores

RAPD e identificaram dois marcadores ligados bem próximos ao referido gene. O

marcador mais próximo, ligado a 0,7 cM do gene I, foi transformado num

marcador SCAR.

Vidal et al. (2000), trabalhando com oito iniciadores RAPD, conseguiram

transformar dois deles em marcadores SCAR, que auxiliam na identificação de

cultivares específicos.

Seqüências simples repetidas (SSR), mais comumente chamadas de

microssatélites, consistem de pequenas seqüências, com um a quatro

nucleotídeos de comprimento, repetidas que geram regiões menores de 100

pares de bases repetidas em tandem. Essas seqüências formam locos genéticos

muito polimórficos, são abundantes e uniformemente distribuídas no genoma a

cada 10 kb; são marcadores de expressão co-dominante e multialélicos,

possuindo o mais elevado conteúdo de informação de polimorfismo.

Estudos prévios demonstraram que o genoma de uva tem diferentes

classes de microssatélites, (GT), (GA), (GAC), (GACA), sendo os dois primeiros

os mais comuns (Thomas et al., 1993).

Em análise de polimorfismo de cinco diferentes loci de vinte e seis

cultivares de Vitis vinifera, com o auxílio de SSRs, foram encontrados 13, 12, 8, 5

e 4 diferentes comprimentos alélicos, totalizando 42 marcas polimórficas (Thomas

e Scott, 1993).

Diante do exposto, verifica-se a grande potencialidade da introdução de

seleção de indivíduos assistida por marcadores de DNA. Em se tratando de

espécies frutíferas com longo ciclo de vida e alta exigência de recursos e mão-de-

obra para implantação de ensaios de campo, tal metodologia poderá reduzir em

muito o tempo necessário para obtenção de cultivares melhoradas.

2.6. Perspectivas de utilização de variedades apirênias

O mercado de uvas in natura apresenta tendência de aumento de

consumo de uvas sem semente, substituindo as tradicionais uvas com semente.

Nos Estados Unidos, as uvas apirênias já dominam o mercado com mais de 80%

da produção total e, na Europa, é crescente a demanda por uvas sem sementes

(Lahouge et al., 1998 e Margarita et al., 2004). Certamente em outros mercados,

os consumidores estarão susceptíveis a mudanças de hábito de consumo, dando

preferência às uvas apirênias.

Consoante com as demandas de mercado, atualmente a criação de

cultivares de uva de mesa sem semente é uma das grandes prioridades dos

programas de melhoramento da videira em todo mundo (Camargo et al., 2000).

Existem dois sistemas com determinação genética para a apirenia, a

partenocarpia e a estenoespermocarpia. A partenocarpia caracteriza-se pela

ausência total de sementes. Nesse caso, não ocorre fecundação. O fruto é

desenvolvido exclusivamente a partir de tecidos maternos. Na

estenoespermocarpia, ocorre a fecundação para a formação do fruto, seguida do

aborto do embrião ainda imaturo devido à ausência ou má formação do

endosperma. Desse processo, originam-se frutos maduros com sementes-traço

pouco desenvolvidas e macias, imperceptíveis ao consumidor (Camargo et al.,

2000).

Para o desenvolvimento de novas variedades apirênias, o tradicional

método de melhoramento é baseado no cruzamento de indivíduos com sementes

atuando como genitor feminino e indivíduos apirênios como genitores masculinos,

sendo Thompson seedless a principal fonte apirênia (Camargo et al. 2000,

Lahogue et al. 1998). Este modelo de cruzamento é considerado de baixa

eficiência porque não se pode esperar que mais de 25% das progênies sejam

portadoras de apirenia (Ramming, 1990). Diante dessa baixa freqüência, torna-se

necessária a formação de grandes populações para aumentar as chances de

seleção de um indivíduo apirênio. Por outro lado, também exige maior tempo uma

vez que um mínimo de oito anos é necessário para reunir as características de

dois progenitores apirênios. Considerando-se ainda as demais etapas do

programa de melhoramento, a criação de uma nova cultivar pode exigir um

período total de 20 anos. Nesse processo, o melhoramento assistido por

marcadores de DNA pode e muito contribuir para a seleção precoce de indivíduos

apirênios. Com o surgimento da cultura in vitro, embriões viáveis puderam ser

resgatados de cruzamentos entre variedades apirênias, e a proporção de

genótipos apirênios obtidos desses cruzamentos aumentou para 50%-80% de

acordo com o grau de apirenia dos parientais (Lahogue et al., 1998).

A necessidade de ampliação da variabilidade genética, através de

cruzamentos, para a seleção de indivíduos apirênios superiores determinou o

abandono da partenocarpia e a adoção da estenoespermocarpia por todos os

programas de melhoramento empenhados na obtenção de cultivares de uvas

apirênias (Camargo et al., 2000).

2.7. Hipóteses para a herança da apirenia

Apesar dos progressos obtidos pelos melhoristas nesses últimos 70 anos,

a herança da apirenia em videiras ainda não está bem clara. Nenhuma das

hipóteses propostas até agora satisfaz completamente a herança da

estenoespermocarpia.

Baseado em exames histológicos de bagas com semente e sem semente,

Stout (1936) concluiu que a apirenia não era condição fisiológica anormal, mas

uma característica herdável controlada por genes segregantes. Este autor

acreditava que um único gene dominante “S” e vários fatores modificantes

afetavam a herança da estenoespermocarpia.

Mais tarde, novos estudos surgiram discrepando bastante do modelo

proposto por Stout (1936). Para Constantinescu (1975), Dudnik e Moliver (1976),

a herança de progênies de cruzamentos entre variedades apirênias e com

sementes era controlada por um gene recessivo. Já para Khachatryan e

Martirsyan (1971), a herança seria controlada por um único gene dominante.

Spiegel-Roy et al. (1990), avaliando progênies durante cinco anos consecutivos,

variando de 483 a 1988 indivíduos, verificaram que a apirenia era um caráter

recessivo e que se tratava de uma herança controlada por dois genes recessivos,

em que os parientais doadores de pólen eram heterozigotos (AaSs) produzindo

uma F1 na razão de 3:1 em cruzamentos entre variedades sem semente

doadoras de pólen e variedades com semente receptoras de pólen.

Para Weinberger e Harmon (1964), Loomis e Weinberge (1979) e

Pospisilova e Patenik (1988), a apirenia tratava-se de uma herança governada por

um complexo de vários genes recessivos, ou ainda, segundo Sandhu et al.,

(1984) e Golodriga et al., (1978), por fatores quantitativos.

Dentre essas inúmeras hipóteses levantadas, a que melhor explica a

herança da apirenia trata-se do modelo proposto por Bouquet e Danglot (1996), o

qual diz que a herança é baseada num sistema complexo, em que a expressão de

três genes recessivos independentes é controlada por um gene regulador

dominante. Bouquet e Danglot (1996), trabalhando com a progênie MTP3140,

obtida pelo cruzamento de dois parientais sem sementes provenientes de

cruzamentos entre variedades com semente e sem sementes, obtiveram 136

descendentes que foram distribuídos em quatro classes fenotípicas de acordo

com a percentagem total de peso seco da semente e matéria seca, onde as

classes 1, 2 e 3 eram caracterizadas como videiras sem sementes, sendo

agrupadas de acordo com o grau de desenvolvimento das sementes, mas nunca

completamente desenvolvidas e sementes completamente desenvolvidas (classe

4). Bouquet e Danglot (1996) testaram seus resultados no sistema de três

complementares genes recessivos independentes com dominância incompleta

dos alelos levando a expressão do caráter com semente. Este sistema está sob

controle de um gene completamente dominante conhecido como gene I. Quando

esse gene é homozigoto recessivo ii, a expressão dos genes menores é inibida e

todos os fenótipos são da classe 4. Quando esse mesmo gene maior está em

heterozigose ou homozigose dominante tem-se a expressão de genes apirênios e

os fenótipos observados correspondem aos diferentes genótipos possíveis. Para

a expressão do fenótipo da classe 1, é necessário o mínimo de dois genes

homozigotos recessivos (a1a1 a2a2 _3 _3). Quando somente um gene é

homozigoto recessivo haverá a presença de traços de sementes, e a

diferenciação entre as classes 2 e 3 ocorrerá de acordo com a homozigose ou

heterozigose dos outros dois genes. Se nenhum dos três genes estiver em

homozigose recessiva, os indivíduos serão da classe 4 (Quadro 1).

Quadro 1- Classes fenotípicas e genotípicas envolvidas na hipótese da apirenia

em videiras

Genótipos Ii ou II Fenótipos

Classe 1 a1a1 a2a2 a3a3 A1A1 a2a2 a3a3

a1a1 A2a2 a3a3 a1a1 A2A2 a3a3

a1a1 a2a2 A3a3 a1a1 a2a2 A3A3

A1a1 a2a2 a3a3

Classe 2 a1a1 A2a2 A3a3

A1a1 a1a1 A3a3

A1a1 A2a2 a2a2

Classe 3 a1a1 A2A2 A3a3 A1A1 a2a2 A3a3

a1a1 A2A2 A3A3 A1A1 a2a2 A3A3

a1a1 a2A2 A3A3 A1A1 A2a2 a3a3

A1a1 A2A2 a3a3 A1A1 A2A2 a3a3

A1a1 a2a2 A3A3

Classe 4 A1a1 A2a2 A3a3 A1A1 A2a2 A3a3

A1a1 A2A2 A3a3 A1A1 A2A2 A3a3

A1a1 A2A2 A3A3 A1A1 A2a2 A3A3

A1a1 A2a2 A3A3 A1A1 A2A2 A3A3

Desta forma, Bouquet e Danglot (1996) avaliaram suas progênies

considerando que os parientais que originaram a progênie MTP3140 possuíam os

genótipos A1a1 A2a2 a3a3 (Ii), fornecendo a proporção de 21: 12: 15: 16.

Qualquer hipótese a respeito da herança da apirenia deve levar em conta

o fato de que o caráter sem semente ou com semente está sujeito à mutação.

Bagas sem sementes foram observadas em mutantes pelo menos nove vezes no

último século. Do mesmo modo, há pelo menos duas ocorrências documentadas

de uvas com sementes em variedades apirênias. A ocorrência de mutações, que

modificam uma forma em outra, tende a quebrar a regra proposta por fatores

quantitativos. Na estenoespermocarpia baseada em genes recessivos, se esse for

o caso, o cruzamento entre variedades sem semente e com semente nunca

poderia ultrapassar 50% de progênies sem semente no melhor dos casos,

contrariando assim os resultados obtidos por Ledbetter e Burgos (1994). Também

não explicaria a ocorrência de fenótipos com semente em cruzamentos de

variedades apirênias.

As heranças baseadas em genes dominantes não podem explicar a baixa

percentagem de uvas apirênias geralmente observadas em cruzamentos entre

variedades com semente e sem semente, nem a ocorrência de fenótipos

apirênios em progênies obtidas pela autopolinização de videiras com semente

tendo o caráter apirênio em seu parentesco.

2.8. RAPD na viticultura e diversidade genética

O estudo da diversidade genética em Vitis vinifera assim como noutras

fruteiras é importante não só para efeitos evolucionários mas também para

melhoramento e conservação de germoplasma (Fanizza et al., 1999).

Marcadores RAPD ganharam popularidade como técnica molecular em

espécies frutíferas incluindo as videiras, pois, diferentemente de marcadores

morfológicos, eles não são afetados por variações ambientais, além de terem um

baixo custo e oferecerem baixa dificuldade de utilização (Fanizza et al., 1999 e

Gorgocena et al., 1993). Gorgocena et al. (1993) afirmam que a técnica de RAPD

evita problemas de baixa concentração de DNA e DNA não digeridos. Apesar da

reprodutibilidade de RAPDs ser bastante questionada, eles podem ser

considerados excelentes para estudos de diversidade no caso de métodos

padronizados (Fanizza et al., 2000).

Fanizza et al., (2000) avaliaram quatorze variedades Moscatéis em

Apulia, na Itália. Foram selecionados 158 primers RAPD, produzindo 263 bandas

monomórficas e 484 bandas polimórficas. Verificou-se que a maioria das

variedades moscatéis de Apulia formou grupos com baixos valores de

similaridade, variando de 0,56 a 0,78.

Vidal et al. (1999) avaliaram a diversidade genética entre 32 variedades

de uvas viníferas obtidas de quatro bancos de germoplasma, cultivadas nas

principais regiões da França e Espanha. Foram obtidas, no total, 208 marcas de

DNA, com uma média de 6,3 marcas por iniciador utilizado, sendo 64 marcas

monomórficas e 144 bandas polimórficas. Com uma similaridade acima de 0,8,

puderam ser diferenciados 3 grupos bem definidos, demonstrando concordância

com suas origens.

Zoghlami et al. (2001) estudando 33 variedades de uvas pertencentes ao

banco de germoplasma da Tunísia, obtiveram 54 bandas polimórficas e 27

bandas monomórficas, totalizando 81 bandas provenientes de 11 iniciadores

RAPD. A relação genética foi estabelecida pelo método de agrupamento UPGMA,

identificando 5 grupos (A, B, C D e E) diferentes, com 8, 8 ,8, 5 e 3 acessos,

respectivamente.

Marcadores moleculares de DNA têm sido muito utilizados para

caracterizar uma ampla variedade de espécies vegetais. Herrera et al. (2002), por

meio de marcadores RAPD, identificaram um iniciador, denominado P2, capaz de

diferemciar as variedades de videira Cabernet Sauvignon, Cabernet Franc,

Carmenere e Merlot, com padrões bem distintos, obtendo quatro marcas

polimórficas e duas monomórficas.

3. TRABALHOS

3.1. ESTUDO DA DIVERSIDADE GENÉTICA EM DOZE CULTIVARES DE

VIDEIRAS E DETECÇÃO DE MARCAS MOLECULARES ASSOCIADAS AO

GENE DA APIRENIA

RESUMO

O conhecimento da diversidade genética entre um grupo de genitores é

importante para o melhoramento, sobretudo para identificar combinações híbridas

de maior heterozigose e de maior efeito heterótico. O presente trabalho tem como

objetivo avaliar a divergência genética entre 12 cultivares de videiras através de

marcadores moleculares RAPD e identificar marcas moleculares associadas ao

gene da apirenia com o marcador molecular SCAR, denominado SCC8, em

videiras sem sementes. Observou-se, no estudo de diversidade, uma ampla

divergência genética entre os 12 acessos, com a formação de três grupos

distintos, tanto pelo método de Tocher quanto pelo método hierárquico do vizinho

mais distante. As cultivares mais divergentes foram Niágara Rosada e Itália e as

menos divergentes foram as variedades Itália, com seu mutante somático Rubi, e

a variedade Patrícia, com seu mutante somático Rosalinda. Para se detectar

indivíduos apirênios, foi utilizado um marcador molecular co-dominante do tipo

SCAR, chamado SCC8, em quatro variedades de videiras, sendo dois genótipos

apirênios (Romana e UFV 01) e dois genótipos com semente (Niágara Rosada e

Itália). Para detecção do polimorfismo, o produto da amplificação foi digerido com

a enzima de restrição Bgl II, que produziu de uma a três bandas entre os

indivíduos. Os genótipos apirênios apresentaram um sítio de restrição em

somente um dos alelos, produzindo um total de três fragmentos, sendo dois deles

de menor tamanho, confirmando assim sua heterozigose (SCC8

+ -

/ scc8 ) em

relação ao gene para apirenia, enquanto que os genótipos com semente

confirmaram sua homozigose recessiva (scc8 / scc8

) apresentando um sitio para

a enzima nas duas formas alélicas, produzindo dois fragmentos de menor

tamanho.

ABSTRACT

Knowledge on the genetic diversity in a group of parents is important in

improvement, above all for the identification of hybrid combinations with high

heterozygosis levels and strong heterotic effects. Objective of the present study

was an evaluation of the genetic divergence in 12 grapevine cultivars through

RAPD markers and the identification of molecular markers associated to the

seedlessness gene with the SCAR marker, designated SCC8, in seedless

grapevine. Wide genetic divergence was observed in the 12 accessions and three

groups distinct groups were formed by the Tocher as well as by the hierarchical

most dissimilar neighbor method. Most divergent cultivars were Niágara Rosada

and Itália and the least divergent the varieties Itália with the somatic mutant Rubi

and Patrícia with Rosalinda. A codominant molecular marker of the SCAR type

SCC8 detected seedless individuals in four grapevine varieties - two genotypes

with (Romana and UFV 01) and two without seeds (Niágara rosada and Itália). To

detect polymorphism, the amplification product was digested with the restriction

enzyme Bgl II that produced three bands in the individuals. The seedless

genotypes presented one restriction site in only one of the alleles, producing a

total of three fragments, two of which were small and confirmed heterozygosis

(SCC8

/ scc8

) regarding the seedlessness gene, while the genotypes with seed

confirmed recessive homozygosis (scc8

/ scc8

) by presenting one site for the

enzyme in the two allele forms, producing two smaller fragments.

3.1.1. INTRODUÇÃO

Ocupando atualmente uma área de 7,5 milhões de hectares, a videira é

uma das principais fruteiras cultivadas no mundo, com uma produção anual de 62

milhões de toneladas (FAO, 2004), das quais 8,5 milhões são de uva para mesa.

Segundo a FAO (2004), o Brasil apresenta área plantada em torno de 68 mil

hectares, com produção média de 1.065 milhões de toneladas, representando

cerca de 2% da produção mundial.

Analisando o mercado brasileiro de frutas de mesa, é possível perceber

uma exigência cada vez maior dos consumidores por uvas de melhor qualidade,

não somente em relação ao aspecto visual mas também, ao sabor, aroma e

consistência, além de uma preferência por uvas do tipo sem sementes ou

apirênias. Estima-se que 80% da produção mundial de uva de mesa sejam de

variedades apirênias (Margarita et al., 2004).

O conhecimento da diversidade genética entre um grupo de genitores é

importante para o melhoramento, sobretudo para identificar combinações híbridas

de maior heterozigose e de maior efeito heterótico, proporcionando indivíduos

mais vigorosos e produtivos.

Existem varias técnicas baseadas em PCR que são utilizadas na análise

da distância genética através da geração de polimorfismos; dentre elas, a técnica

de simple sequence repeat (SSR), Cleaved amplified polymorphism sequences

(CAPS), AFLPs e a técnica de Random amplified polymorphic DNA (RAPD) (Vidal

et al., 2000). A grande vantagem desta última é que demanda pouca

mão-de-obra, não exige conhecimento prévio de seqüências do DNA e tem baixo

custo (Ferreira e Grattapaglia, 1995).

O uso de marcadores moleculares de DNA para detectar polimorfismos

entre cultivares de videira, através da técnica de reação em cadeia da DNA

polimerase (PCR), revelou a possibilidade do uso desta metodologia para a

identificação de várias marcas moleculares correlacionadas à ausência de

sementes como nos trabalhos demonstrados por Striem et al. (1990), Lahogue et

al. (1998) e Silva e Martins (2006). O desenvolvimento de Sequence

characterized amplified regions (SCARs) derivados de fragmentos de RAPD

possibilitou a obtenção de cópias únicas de marcas moleculares ligadas a genes

de interesse em diversas culturas, dentre elas, as videiras (Vidal et al., 2000). Em

programas de melhoramento de videiras apirênias, a avaliação de uma progênie

pode levar de 3 a 5 anos, visto que antes disso ela ainda não é capaz de produzir

cachos. Dessa maneira, a descoberta de marcadores moleculares ligados ao

gene de apirenia em videiras tem sido de grande interesse, pois cria a

possibilidade de excluir progênies com sementes em estádios iniciais de

desenvolvimento, reduzindo consideravelmente os custos (Lahogue et al., 1998).

O objetivo deste trabalho é avaliar a diversidade genética dos acessos de

videiras da coleção do banco de germoplasma, da Universidade Estadual do

Norte Fluminense Darcy Ribeiro, para a escolha de genitores mais apropriados

para cruzamentos, e também testar a eficiência do marcador molecular SCAR

ligado ao gene de apirenia, desenvolvido por Lahogue et al. (1998), em videiras

cultivadas no Norte Fluminense.

3.1.2. MATERIAL E MÉTODOS

O experimento foi montado no Colégio Estadual Agrícola Antônio Sarlo,

no município de Campos dos Goytacazes - RJ, seguindo um delineamento

experimental de blocos casualizados com três repetições, com a unidade

experimental composta por quatro plantas, cujo espaçamento é de 4 x 3 m, com

sistema de condução em latada.

3.1.2.1. Material genético

Camargo (1998) apresenta breves descrições desses materiais, e que

serão resumidas a seguir:

Quadro 1: Genótipos utilizados

Genótipos Espécies Procedência Características

1- Roberta IAC Susceptível a doenças, de cachos grandes e

bagas globulosas verde-amareladas

Vitis vinifera

2- UFV 01 - Viçosa Variedade apirênia, com cachos pequenos

verde-amarelados.

3- Kyoho Híbrido de Vitis

vinifera e Vitis

labruscana

IAC Cultivar tetraplóide, com cachos grandes e

coloração preta.

4- Niágara Rosada IAC Mutação somática natural da Niágara Branca

de cachos de coloração rosada.

Vitis

labruscana

5- Patrícia IAC Cachos grandes, bagas médias, globulosas e

pretas.

Vitis vinifera

IAC 6- Rosalinda Mutação somática da Patrícia, de baga

branca.

Vitis vinifera

IAC 7- Moscatel de

Hamburgo

Cachos cônicos, baga preta, obtida do

cruzamento de Alexandria x Frankental.

Vitis vinifera

IAC 8- Romana Variedade apirênia, cachos médios a grandes,

de bagas esverdeadas.

Vitis vinifera

IAC 9- Rubi Mutante somático da Itália, com bagas

vermelho-clara.

Vitis vinifera

IAC 10- Isabel Boa resistência à antracnose, cachos médios,

bagas médias e arredondadas, de cor preto-

azulada.

Vitis

labruscana

IAC 11- Red Globe Cachos médios a grandes, bagas muito

grandes e rosadas com polpa descolorida.

Vitis vinifera

IAC 12- Itália Bagas grandes, formato ovóide e coloração

verde-clara. Muito produtiva.

Vitis vinifera

3.1.2.2. Extração de DNA

Foram coletadas do campo cerca de cinco folhas de cada um dos doze

genótipos, embaladas em papel alumínio e congeladas em nitrogênio líquido. Em

laboratório, foram maceradas com nitrogênio líquido e armazenadas em tubos de

15 ml a -70 ºC. A extração de DNA foi realizada conforme o protocolo para

espécies do gênero Vitis e Ampelosis, de Lodhi et al. (1994) (Quadro 2).

Aproximadamente 500 mg de tecido macerado de lâminas foliares, sem

as nervuras, foram transferidos para tubos com capacidade de 15 ml e imersos

em nitrogênio líquido. Em seguida, foram ressuspensos com 6 ml de tampão de

extração. Neste ponto, os tubos foram “vortexados” para garantir a atuação

melhor do tampão. Os tubos foram encubados a 65 ºC durante 30 minutos, sendo

invertidos suavemente durante esse processo e esfriados à temperatura

ambiente. Foram, então, adicionados 6 ml de clorofórmio: álcool isoamílico (24:1).

Após serem agitados até se formar uma emulsão, os tubos foram centrifugados a

5.500 rpm durante 25 minutos. Quatro ml do sobrenadante foram transferidos

para novos tubos de 15 ml e adicionados 2 ml de NaCl 5 M e 8 ml de etanol 95%.

Logo após, foram bem agitados e refrigerados a -20º C por um período de 2

horas.

Os tubos foram centrifugados em temperatura ambiente por 5 minutos a

5.000 rpm. Neste momento, o precipitado branco que havia se formado no fundo

foi transferido para tubos de 2 ml e centrifugado com etanol 70% e etanol 95%

por 6 minutos. Em seguida foi seco no banho seco, ressuspendido com 100 ml de

solução de TE/RNAse a uma concentração de 40 mg/ml e incubado em

banho- maria a 37 ºC por 30 minutos. Ao final deste passo, o DNA já estava

ressuspenso.

Quadro 2- Preparo da solução de tampão de extração de DNA de videiras:

Estoque Concentração final p/ 15 ml

CTAB 5% 2% 6 ml

NaCl 5 M 1,4 M 4,2 ml

EDTA 0,5 M 20 mM 0,6 ml

Tris-HCl (ph 8) 1M 100 mM 1,5 ml

PVPP sólido 1% 0,15 g

Β-Mercaptoetanol 0,2% 30 µl

H O - q.s.p. 15 ml

3.1.2.3. Reação da polimerase em cadeia para RAPD

As reações de amplificação, para o estudo da diversidade genética, entre

doze cultivares de videiras foram realizadas num volume de 20 µl, no

termociclador de gradiente Ependorff programado por 1 minuto a 95 ºC, seguindo

45 ciclos de 1 minuto a 94 ºC, 1 minuto a 36 ºC e 1 minuto a 72 ºC e um passo

final para extensão de 7 minutos a 72º). Para o coquetel de reagentes, foram

utilizados tampão pcr 1X, MgCl (2mM), Dntp’s (200µM), taq polimerase (1u),

iniciadores operon tecnologies (0,4µM) e água ultrapura. O produto da

amplificação foi submetido a eletroforese em gel de agarose a 1,2%, em tampão

de TAE 0,5X a 0,21 ampères.

3.1.2.4. Reação da polimerase em cadeia para SCAR

As reações de amplificação foram realizadas conforme Lahogue et al.

(1998) com modificações, em um volume final de 24 μL, contendo os reagentes

nas seguintes concentrações: Tris-HCl a 10 mM, pH 8,3, MgCl

a 2 mM, dATP,

dCTP, dGTP e dTTP a 200 μM, primers SCC8-S e SCC8-AS a 1 pmol cada um,

20 ng de DNA genômico e uma unidade de taq DNA polimerase (Pharmacia

Biotech). Utilizou-se o termociclador (Perkin Elmer GeneAmp PCR System 9700)

programado por 4 minutos a 94 °C, seguindo 35 ciclos de 1 minuto a 94

C, 1

minuto a 64,4

o o

C e 1 minuto a 72 C e um passo final para extensão de 6 minutos

a 72

C, utilizando-se o modo de transmissão de temperatura rápida disponível

C/1s). Os produtos de amplificação (bandas) foram obtidos por meio de

eletroforese em gel de agarose a 1,6% e visualizados após coloração por brometo

de etídio.

3.1.2.5. Enzima de restrição

O produto de amplificação com o marcador SCAR (Sequence

Characterized Amplified Regions) foi precipitado com 15 μl de acetato de sódio

3 M e 100 μl de etanol absoluto. Após o período de três horas a –20

C, realizou-

se uma centrifugação por 20 minutos a 12.000 rpm; em seguida, efetuou-se uma

lavagem com etanol 70% para retirada de sais em excesso e, depois, foi colocado

em banho seco por 10 minutos.

O precipitado foi então ressuspendido em 10 μl de água ultrapura e bem

vortexados. Aos 10 μl da amplificação, foram adicionados 2 μl do tampão da

enzima bgl II, 0,5 μl da enzima de restrição Bgl II e água ultrapura suficiente para

completar 20 μl. Logo após, os tubos foram deixados em banho-maria por duas

horas a 37

C para garantir a ação da enzima. Após este período, efetuou-se a

eletroforese a 0,21 ampères em gel de agarose a 1,4%.

3.1.2.6. Teste de eficiência do marcador molecular SCAR ligado ao gene da

apirenia em videiras

Para tal, foram utilizados 2 progenitores de videiras com reconhecida

presença de apirenia, sendo elas Romana e UFV 01, e duas variedades com

semente, Niágara rosada e Kyoho, do programa de introdução de cultivares

realizado no Laboratório de Melhoramento Genético Vegetal. Para a detecção do

gene de apirenia foram utilizados marcadores do tipo SCAR distantes 0,7 cM do

gene I (ligado à apirenia), denominado SCC8, com as seqüências GGTGTCAA

GTTGGAAGATGG para o primer SCC8-S e TATGCCAAAAACATCCCC para o

primer SCC8- AS.

3.1.2.7. Análises estatísticas

A matriz de dados binários foi formada, de maneira que, na presença de

bandas, foi atribuído 1 e na ausência destas, atribuído 0. A distância genética foi

calculada aos pares entre os genótipos pelo Complemento Aritmético do Índice de

Jaccard. Com base nesse índice, foi empregado o método de otimização de

Tocher. Para a obtenção do dendograma, foi empregado o método do vizinho

mais distante. Para o cálculo do Complemento Aritmético do Índice de Jaccard

utilizou-se o programa computacional Genes (Cruz, 2001). O dendograma foi

obtido pelo programa Estatística.

3.1.3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

3.1.3.1. Iniciadores para análise de RAPD

Foram utilizados 26 primers, gerando um total de 120 marcas polimórficas

e 27 marcas monomórficas (Quadro 3). A partir dos dados foi gerada a matriz de

dados binários para obtenção da matriz de dissimilaridade através do índice de

complemento aritmético de Jaccard.

Quadro 3- Relação de iniciadores utilizados:

Iniciadores Marcas polimórficas Marcas monomórficas

1- OPA-02 05 02

2- OPA-08 08 -

3-OPA-10 10 01

4-OPC-07 05 -

5-OPC-10 04 -

6-OPC-13 05 -

7-OPD-11 07 01

8-OPD-15 03 01

9-OPF-11 03 02

10-OPF-20 06 01

11-OPG-16 04 01

12-OPI-01 03 02

Quadro 3- Continuação

Marcas polimórficas Marcas monomórficas

13-OPI-07 10 01

14-OPI-20 06 02

15-OPL-12 04 02

16-OPO-02 03 01

17-OPO-05 04 -

18-OPO-07 02 01

19-POR-04 03 02

20-OPAB-01 05 -

21-OPAB-019 03 02

22-OPAC-05 04 -

23-OPAD-04 03 02

24-OPAF-14 04 01

25-OPAF-20 04 01

26-OPAH-01 02 01

TOTAL 120 27

No quadro 4, pode-se verificar que os genótipos mais dissimilares

gerados pela matriz de dissimilaridade foram as espécies Vitis labruscana,

representada pela cultivar Niágara Rosada, e a Itália (Vitis vinifera) com uma

distância de 0,5840 entre elas, o que já se esperava por se tratarem de espécies

de origens diferentes. As cultivares Itália e Rubi mostraram-se bastante similares

(0,0470), visto que a variedade Rubi é uma mutação somática da Itália, assim

com as cultivares Patrícia e Rosalinda, que também apresentaram uma alta

similaridade (0,03226), em que esta é uma mutação somática daquela.

Costa (2004), trabalhando com 55 marcas polimórficas, com todas essas

variedades, obteve a distância genética de 0,3472 entre as variedades Niágara

Rosada e Itália. Esta autora ainda obteve resultados muito semelhantes aos

observados neste trabalho entre as variedades Itália e Rubi, com uma distância

genética de 0,048 entre elas.

da pelo índice aritmético do complemento de Jaccard, com base em marcadores RAPD

Roberta UFV 01 N. Rosada Kyoho Rosalinda Patrícia Moscatel Romana Rubi Isabel Red Globe Itália

Quadro 3- Matriz obti

0,5104 0

0,4947 0,5420 0

0,4742 0,4953 0,3052 0

0,3404 0,4444 0,5263 0,4414 0

0,3191 0,4311 0,5258 0,4561 0,0322 0

0,3478 0,4862 0,5652 0,4821 0,3142 0,2857 0

0,4111 0,3979 0,5463 0,4859 0,3904 0,3619 0,4038 0

0,3626 0,5137 0,5789 0,4955 0,3584 0,3457 0,2551 0,4174 0

0,5238 0,5263 0,32 0,4128 0,5245 0,5122 0,525 0,5304 05737 0

0,3 0,4574 0,53 0,4747 0,375 0,3608 0,2809 0,3595 0,3516 0,5142 0

0,3666 0,5046 0,5840 0,4722 0,3619 0,3490 0,2210 0,4215 0,0470 0,5666 0,3555 0

Utilizando a matriz gerada pelo índice de Jaccard, foi possível fazer o

agrupamento das cultivares através do método de agrupamento proposto por

Tocher, gerando três grupos bem distintos entre si (Quadro 5). O primeiro grande

grupo formado foi representado pelas variedades viníferas. O segundo grupo ficou

representado pelas duas variedades da espécie Vitis labruscana, Isabel e Niágara

Rosada, além da variedade Kioho, o que está bem de acordo com a literatura,

que afirma que esta variedade trata-se de um híbrido entre Vitis labruscana e Vitis

vinifera, sendo que sua maior proximidade com as variedades labruscanas,

através deste método, pode estar associada à sua maior semelhança física em

relação à característica da folha com as variedades labruscanas. O terceiro grupo

gerado foi representado somente pela variedade sem semente denominada UFV

01 originária de programas de melhoramento dos EUA, mas sem informações de

sua genealogia.

Quadro 5 - Agrupamento dos 12 genótipos pelo método de Tocher com base na

dissimilaridade pelo complemento aritmético do índice de Jaccard

Grupos Genótipos

I Rosalinda, Patrícia, M. Hamburgo, Itália, Rubi, Red

Globe, Roberta e Romana.

II N. Rosada, Kioho e Isabel.

III UFV 01.

O dendograma gerado foi obtido pelo método hierárquico aglomerativo do

vizinho mais distante, sendo escolhido esse método por fornecer grupos mais

homogêneos e capazes de favorecer a discussão e interpretação dos resultados

obtidos (Dal Col Lúcio et al., 2006). Os resultados obtidos foram bem semelhantes

aos resultados do método de Tocher (Quadro 6). Também se formaram três

grupos distintos, sendo que um dos grupos foi formado pelas duas variedades

apirênias, Romana e UFV 01, o que levanta a hipótese dessas variedades serem

espécies correlacionadas, visto que as duas têm sua origem nos EUA. O outro

grupo formado, assim como no método de Tocher, por variedades viníferas

mostrou que a variedade Patrícia assim como seu mutante somático, a variedade

Rosalinda, agruparam-se bem próximas do grupo formado pela variedade Itália,

Rubi e Moscatel de Hamburgo (Quadro 6). Segundo Pommer e Ferri (1995), a

variedade Patrícia, introduzida pelo Instituto Agronômico de Campinas (IAC),

possui em sua genealogia grandes atributos herdados principalmente da Moscatel

de Hamburgo e da Itália.

Diante do exposto, as melhores recomendações para se iniciar um

programa de hibridações, entre os indivíduos envolvidos no presente trabalho,

seriam a utilização das variedades Itália e Niágara Rosada, por serem os

indivíduos mais contrastantes e que forneceriam o maior efeito heterótico.

Entretanto, é necessário que se conheçam as condições de campo de cada

variedade antes de se iniciar qualquer programa de hibridações. Neste contexto,

Costa (2004), avaliando as características de produtividade e suscetibilidade a

doenças, verificou que a variedade Itália se mostrou bastante vulnerável a

doenças e, em decorrência disto, apresentou baixa produtividade. Sendo assim,

seria incoerente indicar a variedade Itália, uma vez que a resistência a doenças e

a produtividade são características muito importantes.

Com o intuito de iniciar um programa de melhoramento com a introdução

de variedades apirênias, pela análise de agrupamento de Tocher, verificou-se que

as variedades apirênias Romana e UFV 01, aproveitando ainda as boas

características agronômicas da variedade Romana que, de acordo com Costa

(2004) possui uma menor suscetibilidade a doenças e uma alta produção de

frutos (42 Kg/planta), poderiam ser indicadas para cruzamento entre elas,

aumentando as chances de obtenção de indivíduos apirênios na progênie, ou

também ser utilizadas em cruzamentos com cultivares com sementes, como as

variedades Niagára Rosada, Isabel e Kioho que, além de terem formado um

grupo separado (grupo II) pelo método de Tocher, foram bem produtivas segundo

Costa (2004), com 11, 36 e 11 kg/planta, respectivamente.

Quadro 6 - Dendograma de dissimilaridade entre os 12 genótipos de videira

estabelecido pelo método do vizinho mais distante

Genetic Distance

0,0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

Isabel

Kyoho

N. Rosada

Romana

UFV 01

Itália

Rubi

M. Hamburgo

Patrícia

Rosalinda

Red globe

Roberta

3.1.3.2. Marcador SCAR ligado ao gene da apirenia

O marcador SCAR SCC8 revelou um único fragmento de 988pb em

ambos os indivíduos com sementes e apirênios, confirmando a presença de uma

seqüência de cópia única (Figura 1A). Para revelar o polimorfismo entre as

variedades apirênias Romana e UFV 01 e as variedades Niágara Rosada e

Kyoho, ambas pirênias, utilizou-se a enzima de restrição Bgl Il no produto da

amplificação, produzindo de 1 a 3 bandas (Figura 1B). Uma análise mais profunda

revelou que há duas formas alélicas neste loco, chamado de SCC8, sendo que

somente o alelo scc8

apresentou um sítio para a enzima, produzindo dois

fragmentos de menor tamanho. Bouquet e Danglot (1996), avaliando a progênie

MTP 3140 de videiras, verificaram que a distribuição 1:2:1 estava de acordo com

a hipótese de um marcador co-dominante, permitindo distinguir o homozigoto do

heterozigoto no loco SCC8. As variedades UFV 01 e Romana demonstraram ser

heterozigotas (SCC8

/scc8

), apresentando somente um sítio para a enzima em

um dos alelos deste loco, dando origem a três bandas, enquanto que as

variedades Niágara Rosada e Kyoho, ambas variedades com semente,

demonstraram ser homozigotas recessivas (scc8

/ scc8

), apresentando sítio para

a enzima nos dois alelos do loco, dando origem a duas bandas de menor

tamanho. Apesar da utilização de poucas variedades na análise da apirenia, o

marcador se mostrou eficiente, porém, para se obter uma maior confiabilidade, é

necessário que se aumente o número de indivíduos na análise. Para confirmar

esses resultados, já estão em andamento as análises de progênies provenientes

de cruzamentos entre variedades apirênias e com sementes. Esse marcador

aparenta ser muito útil num programa de seleção assistida por marcadores

moleculares para o caráter apirênio, porém é importante salientar que essa

técnica é baseada na hipótese de um gene dominante que regula a expressão de

três genes complementares recessivos, conforme Bouquet e Danglot (1996).

Do exposto, a obtenção de indivíduos F

apirênios, originados dos

cruzamentos de genitores com semente e apirênios, pode ser monitorada pelo

referido marcador, o que trará grande economia de tempo e recursos financeiros

em um futuro programa de melhoramento genético de videiras, visando obter

variedades apirênias e adaptadas às condições do Norte e Noroeste Fluminense.

1 2 3 4 5 6 7 8 9

A B

SCC8

/scc8

scc8

/scc8

Figura 1 - Análise das variedades de videira. A: Linhas 2-5: amplificação de

fragmentos de DNA de variedades sem semente (2: UFV 01, 3:

Romana) e com sementes (4: Niágara Rosada, 5: Kyoho). Linha 1:

marcador molecular de tamanho 250 pb. B: Linhas 6-9: polimorfismo

obtido após digestão com Bgl II- Indivíduos heterozigotos SCC8

/scc8

UFV 01 e Romana (6 e 7) e indivíduos homozigotos recessivos scc8

scc8

: Niágara Rosada e Kyoho (8 e 9) .

3.1.4. CONCLUSÕES

Pela análise de divergência genética via marcadores RAPD, observou-se

uma ampla divergência genética entre os genótipos estudados, antevendo

resultados promissores em programa de hibridação para obtenção de indivíduos

apirênios e adaptados às condições do Norte Fluminense.

O marcador SCAR SCC8 mostrou-se eficiente para detecção de

indivíduos apirênios, distinguindo as variedades apirênias Romana e UFV 01 de

genótipos com semente, sendo essas variedades consideradas heterozigotas

para a característica sem semente.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Barticevic, M.R., Zavala, K.M., De Felice, S., Valenzuela, J.B., Muñoz, C.S.,

Hinrichsen, P.R. (2004) Caracterización fenotípica de segregantes identificados

con marcadores de microsatélites, con énfasis en apirenia y respuesta a ácido

giberélico en crecimiento de bayas de uva. Agricultura Técnica. Chile, 64 (1):3-

16.

Bouquet, A., Danglot, Y. (1996) Inheritance of seedlessness in grapevine, Vitis

vinifera L. Vitis 35 (1):35-42.

Camargo, U.A. (1998) O melhoramento genético da videira na EMBRAPA uva e

vinho. Simpósio Brasileiro de Melhoramento de Fruteiras, Jaboticabal.

Costa, A.F. (2004) Avaliação de Características Agronômicas em Variedades e de

Diversidade Molecular em Variedades, Híbridos e Espécies de Videira. Tese

(Mestrado em Produção vegetal) - Campos dos Goytacazes - RJ, Universidade

Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro - UENF, 95p.

Cruz, C.D. (2001) Programa Genes (Versão Windows), aplicativo computacional

em genética e estatística. Viçosa: UFV, 648p.

Dal col lúcio, A., Fortes, F.O., Storck. L., Filho, A.C. (2006) Abordagem

multivariada em análise de sementes de espécies florestais exóticas. Cerne,

Lavras, 12 (1): 27-37.

Ferreira, M.E., Grattapaglia, D. (1998) Introdução ao uso de marcadores

moleculares em análise genética. EMBRAPA-CENARGEN: Brasília, 220p.

Food And Agriculture Organization Of The United Nations. FAOSTATAgriculture;

<http://faostat.fao.org> em: 08/03/2004.

Lahouge, F., This, P., Bouquet, A. (1998) Identification of a codominant scar

marker linked to the seedless character in grapevine. Theoretical Applied

Genetics 97:950-959.

Lodhi, M.A., Ye, G.N., Weedes, N.F., Reisch,B.I. (1994) A simple and efficient

method for DNA extraction from grapevine cultivars, Vitis species and

Ampelosis. Plant Molecular Biology Reporter 12 (1): 6-13.

Vidal, J.R., Delavault, P., Coarer, M., Defontaine, A. (2000) Design of grapevine

(Vitis vinifera) cultivar-specific SCAR primers for PCR fingerprinting. Theoretical

Applied Genetics 101:1194-1201.

3.2. CARACTERIZAÇÃO QUÍMICA E DETERMINAÇÃO DOS ESTÁDIOS

FENOLÓGICOS DE VARIEDADES DE VIDEIRAS CULTIVADAS NO NORTE

FLUMINENSE

RESUMO

O experimento foi conduzido no município de Campos dos Goytacazes-

RJ, durante os anos de 2005 e 2006, utilizando-se plantas das variedades

Romana, Isabel, Kioho, Moscatel de Hamburgo, Roberta, Niágara Rosada e UFV

01. Para a determinação do clico fenológico das sete variedades em questão,

realizaram-se podas em 20/03/2005 e 15/02/2006. Para a poda realizada em

fevereiro, verificou-se uma redução do período de poda à colheita em todas as

variedades, sendo a variedade Isabel a mais tardia, com um ciclo médio de 124

dias para os dois anos. A variedade Niágara Rosada, na média, foi a mais

precoce, com 109 dias. A variedade UFV 01, avaliada somente no período de

2006, juntamente com a variedade Kyoho foram as cultivares que obtiveram o

menor ciclo, 91 dias, durante o ano de 2006. Realizou-se a determinação dos

componentes químicos sólidos solúveis totais, acidez total titulável, relação

SST/ATT, vitamina C e antocianinas. A variedade Isabel apresentou os maiores

índices de acidez, com 1,5%, enquanto que a variedade Moscatel de Hamburgo

foi a cultivar de menor acidez. Para a relação sólidos solúveis totais e acidez total

titulável, a variedade Isabel apresentou o menor valor, 11,08, enquanto que a

variedade Kioho foi a melhor, com 24,11. A variedade Romana obteve os

melhores resultados para os teores de sólidos solúveis totais.

ABSTRACT

The experiment was conducted in the county of Campos dos Goytacazes-

RJ, in 2005 and 2006, with plants of the varieties Romana, Isabel, Kioho, Moscatel

de Hamburgo, Roberta, Niágara Rosada and UFV01. The seven study varieties

were pruned on 20/03/2005 and 15/02/2006 to determine the phenological cycle.

Pruning in February evidenced a reduction of the pruning-harvest period in all

varieties. Isabel was the latest variety, with a mean cycle of 124 days in both

years. In the mean, Niágara Rosada was the earliest variety (109 days). UFV 01,

evaluated only in the period of 2006, had, together with Kyoho, the shortest cycle

(91 days) in 2006. The chemical components total soluble solids, total titrable

acidity, SST/ATT ratio, vitamine c, glucose, fructose, sucrose and anthocyanins

were determined. Variety Isabel attained the highest acidity indices (1.5%) and

Moscatel de Hamburgo the lowest. For the ratio total soluble solids by total titrable

acidity variety Isabel presented lowest values (11.08) and Kioho the best (24.11).

Variety Romana obtained best results for total soluble solids, acidity and vitamin C

contents.

3.2.1. INTRODUÇÃO

Atualmente a videira é cultivada sob uma enorme diversidade de

condições climáticas, exceto em alguns locais que não se oferecem o mínimo de

condições climáticas para seu desenvolvimento. No Brasil, ela é cultivada de

Norte a Sul do país. Com o emprego da irrigação, regiões anteriormente

consideradas inaptas tornaram-se grandes produtoras de uva.

Na introdução de novas variedades, a fenologia desempenha importante

função, pois permite a caracterização da duração das fases do desenvolvimento

da videira em relação ao clima, especialmente às variações estacionais, além de

ser utilizada para interpretar como as diferentes regiões climáticas interagem com

a cultura (Terra et al., 1998).

A fenologia varia em função do genótipo e das condições climáticas de

cada região produtora ou em uma mesma região devido às variações estacionais

do clima ao longo do ano. Em condições de clima tropical, como aquelas

predominantes no Vale do São Francisco, a videira vegeta continuamente, não

apresentando fase de repouso hibernal. O momento da poda passa a ser a

referência para o início do ciclo fenológico da videira, que sofre a influência das

condições climáticas predominantes durante aquele período.

O clima tem sido um fator preponderante na duração do ciclo, qualidade

do fruto, fitossanidade e produtividade da videira. A videira cresce e desenvolve-

se melhor em regiões com verões longos e secos e com invernos frios, para

satisfazer suas necessidades de repouso. Temperaturas elevadas durante a

brotação influenciam positivamente na emissão de cachos, além de antecipar a

maturação da uva e repercutir no aumento do teor de açúcares nas bagas. A

videira é uma planta exigente em relação à luz solar, sendo que a falta dela pode

ocasionar inúmeros problemas durante a floração e maturação da uva.

A caracterização dos estádios fenológicos do ciclo produtivo da videira

fornece informações de grande utilidade para o agricultor, uma vez que o

conhecimento de cada etapa do desenvolvimento pode reduzir muito os custos de

produção da videira, tornando mais racionais os gastos com defensivos agrícolas,

economia de insumos, além de possibilitar a produção de uvas em épocas

diferenciadas das grandes regiões produtoras, garantindo a oferta de uva durante

todo o ano (Murakami et al. 2002).

O valor nutritivo é um atributo de qualidade muito importante. Os

componentes responsáveis pela qualidade nutricional dos produtos são vitaminas,

minerais, açúcares solúveis, amido, fibras, hemiceluloses e lignina (Kays, 1991,

citado por Mota et al., 2005). Adicionalmente, algumas substâncias químicas que

conferem valor nutritivo ao produto hortícola são também responsáveis pelo

sabor, como sólidos solúveis, açúcares e ácidos orgânicos.

As características de uma cultivar e a maturidade por ocasião da colheita

são fatores críticos que influenciam os atributos de qualidade dos produtos

frescos. A maturidade fisiológica é utilizada para definir o ponto ideal de colheita,

sendo o estádio de crescimento e desenvolvimento em que os frutos atingem o

nível ideal de maturação, estando então apropriados para consumo in natura

(Suojala, 2000, citado por Mota et al., 2005).

O objetivo deste trabalho é realizar a caracterização fenológica e química

de variedades de videiras cultivadas no Norte Fluminense

3.2.2. MATERIAIS E MÉTODOS

O experimento foi realizado no Colégio Estadual Agrícola Antônio Sarlo,

no município de Campos dos Goytacazes- RJ, durante dois ciclos de produção

um 1º semestre de 2005 (poda em 20/03/2005) e outro no 1º semestre de 2006

(poda em 15/02/2006). Todas as plantas das sete variedades avaliadas foram

enxertadas sobre o porta-enxerto IAC 572, seguindo um delineamento

experimental de blocos casualizados com três repetições, com a unidade

experimental composta por quatro plantas, cujo espaçamento era de 4 x 3 m, com

sistema de condução em latada. Após a poda todas as gemas foram pulverizadas

com cianamida hidrogenada (2,5%) para quebra de dormência e uniformização da

brotação.

3.2.2.1. Material genético

Camargo (1998) apresenta breves descrições desses materiais, e que

serão resumidas a seguir:

Quadro 1 - Genótipos utilizados

Genótipos Espécies Procedência Características

1- Roberta IAC Susceptível a doenças, de cachos grandes e

bagas globulosas verde-amareladas

Vitis vinifera

2- UFV 01 - Viçosa Variedade apirênia, com cachos pequenos

verde-amarelados.

3- Kyoho Híbrido de Vitis

vinifera e Vitis

labruscana

IAC Cultivar tetraplóide, com cachos grandes e

coloração preta.

4- Niágara Rosada

IAC Mutação somática natural da Niágara Branca

de cachos de coloração rosada.

Vitis

labruscana

5- Patrícia IAC Cachos grandes, bagas médias, globulosas e

pretas.

Vitis vinifera

IAC 6- Rosalinda Mutação somática da Patrícia, de baga

branca.

Vitis vinifera

IAC 7- Moscatel de

Hamburgo

Cachos cônicos, baga preta, obtida do

cruzamento de Alexandria x Frankental.

Vitis vinifera

IAC 8- Romana Variedade apirênia, cachos médios a grandes,

de bagas esverdeadas.

Vitis vinifera

IAC 9- Rubi Mutante somático da Itália, com bagas

vermelho-clara.

Vitis vinifera

IAC 10- Isabel Boa resistência à antracnose, cachos médios,

bagas médias e arredondadas, de cor preto-

azulada.

Vitis

labruscana

IAC 11- Red Globe Cachos médios a grandes, bagas muito

grandes e rosadas com polpa descolorida.

Vitis vinifera

IAC 12- Itália Bagas grandes, formato ovóide e coloração

verde-clara. Muito produtiva.

Vitis vinifera

3.2.2.2. Determinação do ciclo reprodutivo

O ciclo fenológico das variedades foi caracterizado por meio de avaliações

semanais, registrando-se a data das seguintes fases fenológicas, conforme

classificação de Eichorn e Lorenz (1977): 1) Período da poda a início da brotação,

2) Início da brotação ao pleno florescimento, 3) Período do pleno florescimento ao

início da maturação, 4) Início da maturação à plena maturação.

3.2.2.3. Composição química dos frutos

Foram realizadas coletas de três cachos de plantas selecionadas

previamente de cada variedade, feitas semanalmente desde o período de início

da maturação até a colheita, para se avaliar o teor da acidez total titulável, dos

sólidos solúveis totais, antocianinas e açúcares solúveis, totalizando sete coletas

durante o 1º semestre de 2005. Foram utilizadas para análises somente seis

variedades de videiras: Romana, Isabel, Kyoho, Moscatel de Hamburgo, Roberta

e Niágara Rosada.

O teor de sólidos solúveis totais foi obtido por refratometria, utilizando

refratômetro portátil ATAGO N1, com leitura na faixa de 0 a 32

Brix. As leituras

foram feitas em amostras de suco da polpa, extraída por prensagem manual.

Para a determinação da acidez total titulável, 5,0 g de polpa foram

macerados em um almofariz, contendo 50 ml de água destilada. À amostra

adicionaram-se três gotas do indicador fenolftaleína a 1%, procedendo-se em

seguida a titulação, sob agitação, com solução de NaOH 0,1 N previamente

padronizada com biftalato de potássio até ocorrer a viragem, ou seja,no momento

que atinge o pH 8,1. Os resultados foram expressos em grama equivalente de

ácido tartárico (100 g de polpa)

-1

calculados pela seguinte equação:

TA= (ml NaOH gasto x N (NaOH) x 0,075 (fator de correção ac. tartárico) x 100)/5

g (peso amostra).

A relação entre sólidos solúveis e acidez titulável foi obtida pela divisão dos

resultados obtidos de teor de sólidos solúveis e de acidez total titulável. A

expressão dos resultados foi feita por meio dos valores absolutos encontrados.

Para a determinação do teor de vitamina C, seguiu-se a metodologia de

Tillmmans (1927), modificada por Bezerra Neto et al. (1994). A mesma consta da

titulação do ácido ascórbico presente no suco da fruta, utilizando-se uma solução

de 2,6-diclorofenolindofenol; usou-se a solução de ácido oxálico como solvente e

estabilizadora da vitamina C (que se comporta como um composto bastante

instável) em substituição ao ácido metafosfórico, tradicionalmente utilizado neste

método.

Para o conteúdo de antocianinas, realizou-se a maceração de 5 g de casca

homogeneizados com solução de etanol/HCl 1,5N (85:15). A solução foi deixada

em repouso, sob refrigeração, durante toda noite. O conteúdo foi determinado por

espectrofotometria ao comprimento de onda de 535 nm. Após a leitura, os valores

foram convertidos para mg/100 g de peso fresco através da seguinte equação:

Antocianina = (ABS 535 x volume de extração em ml x 100)/(peso fresco x 98,2).

3.2.2.4. Delineamento experimental e análises estatísticas

As variedades foram dispostas seguindo o delineamento em blocos

casualizados de parcela subdividida, com o fator da parcela constando de quatro

variedades para a característica de antocianinas e seis para as demais

características, sendo o fator da subparcela composto pelos sete subperíodos de

avaliação, conforme o seguinte modelo:

ijkl

= µ + B

+ G + E (a)+ P

j ij k

+ P

+ E

ijk

(b)

µ = Constante geral

B = Efeito do bloco B

= Efeito do genótipo j

E (a)= Erro a (efeito da interação bloco x genótipo)

= Efeito do período k P

= Efeito da interação entre a k-ésimo período e o j-ésimo genótipo.

ijk

(b)= Erro b (resíduo geral)

Os dados foram submetidos à análise de variância e às interações entre

os fatores, assim como seus efeitos isoladas foram desdobrados via análise de

regressão polinomial.

3.2.3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

3.2.3.1. Estádios fenológicos das variedades de videira

Acerca do subperíodo, em relação à poda ao início da brotação (E1), no

1° semestre de 2005, houve pequenas variações na duração do período para as

diferentes variedades, porém, a variedade Niágara Rosada foi a que apresentou

um período mais longo, com 10 dias, enquanto que as outras variedades ficaram

entre 4 e 6 dias (Quadro 3). Já, no 1° semestre de 2006, as variedades

apresentaram menores diferenças em relação ao tempo, sendo que a variedade

UFV 01 apresentou um período mais curto, com 9 dias, enquanto que todas as

outras ficaram em 10 dias (Quadro 4). Essa maior uniformidade, neste período,

deve-se, provavelmente, à aplicação da cianamida hidrogenada para quebra de

dormência, que ocorreu logo após a poda em todas as variedades, enquanto que

em 2005 a aplicação do produto levou cerca de sete dias para cobrir todas as

variedades. É importante dizer que as variedades que não estiverem presentes

nos quadros não tiveram produção, inviabilizando a determinação do ciclo. No

subperíodo, início da brotação à plena floração (E2), durante 2005, variou entre

24 e 29 dias, enquanto que em 2006, variou entre 15-25 dias. Neste subperíodo,

comparando os anos de 2005 e 2006, a variedade Kioho foi a que apresentou

uma maior redução no número de dias (10 dias). O subperíodo compreendido

entre a plena floração e o início da maturação (E3) variou, em 2005, entre 45 e 58

dias, apresentando pouca diferença em relação ao ano de 2006, que variou entre

45-54 dias. O subperíodo referente ao intervalo entre o início da maturação à

plena maturação foi o mais contrastante dentre as variedades. Em 2005,

verificou-se uma variação entre 30 e 54 dias, enquanto que, em 2006, ficou entre

15 e 30 dias, destacando-se a variedade Kyoho, que reduziu este período em 39

dias, seguido pela variedade Romana (19 dias), variedade Isabel (18 dias),

variedade Niágara Rosada (15 dias) e Moscatel de Hamburgo (9 dias).

Para a poda realizada em março de 2005, o ciclo das variedades foi

consideravelmente mais longo, variando de 121 a 135 dias. Para a poda realizada

em fevereiro de 2006, o ciclo completo das variedades ficou entre 91 e 109 dias,

com destaque para a variedade Kyoho, que obteve uma redução de 44 dias em

seu ciclo.

A variedade Isabel foi considerada a mais tardia, com um ciclo médio,

poda à colheita, de 124 dias para os dois anos. A variedade Niágara Rosada na

média, foi a variedade mais precoce, com 109 dias. A variedade UFV 01, avaliada

somente no período de 2006 juntamente com a variedade Kyoho, foram as

cultivares que obtiveram o menor ciclo, 91 dias, durante o ano de 2006.

Essa grande variação, na duração do ciclo das videiras, encontrada

durante os anos de 2005 e 2006 pode estar relacionada às condições climáticas

dos diferentes anos. O período de 2005, da poda à colheita, foi marcado por

intensas chuvas e pouca incidência solar, ocasionando perdas substanciais e

aparecimento de doenças fúngicas. Já, no ano de 2006, com poda no mês de

fevereiro, durante todos os estádios fenológicos, não ocorreram chuvas,

verificando-se um período seco, bem característico da região (Quadro 2). Além

disso, durante o dia, ocorreram dias bem ensolarados e, durante a noite,

temperaturas bem amenas. Segundo Pommer (2003), a temperatura elevada

durante o ciclo vegetativo antecipa a maturação da uva, e uma maior amplitude

térmica diária acelera o acúmulo de açúcares.

Quadro 2 - Índice de precipitação média, temperaturas máxima e mínima e

radiação solar durante os ciclos fenológicos das videiras

Precipitação média Temperatura Máx. e

Mín.

Radiação solar

2005 2006 2005 2006 2005 2006

Março 159,7 49,3 31,2 / 21,8 31,9 / 22,2 227 239

Abril 54,7 83,8 30,8 / 20,6 29,5 / 20,1 196 183

Maio 94,6 14,2 28 / 18,6 26,9 / 16,5 157 161

Junho 75,8 0 27,2 / 17 25,8 / 15,6 170 152

Julho 57,5 - 25,1 / 15,5 - 152 -

Média 88.4 36,8 28,4 / 18,7 28,5 / 18,6 180 184

Quadro 3 - Duração dos subperíodos fenológicos, expressos em dias, em função

da data da poda

Estádios fenológicos

Variedades Data de poda

E1 E2 E3 E4 Total

N. Rosada 20/03/2005 10 25 58 30 123

Isabel 20/03/2005 4 24 58 48 134

M. Hamburgo 20/03/2005 6 25 53 35 119

Romana 20/03/2005 4 28 45 44 121

Kyoho 20/03/2005 5 28 48 54 135

Roberta 20/03/2005 6 29 46 41 122

Média 6 26 47 42 126

E1: poda ao início da brotação, E2: início da brotação ao pleno florescimento, E3: pleno

florescimento ao início da maturação, E4: início da maturação à plena maturação.

Quadro 4 - Duração dos subperíodos fenológicos, expressos em dias, em função

da data da poda.

Estádios fenológicos Variedades Data de poda

E1 E2 E3 E4 Total

N. Rosada 15/02/2006 10 18 51 15 94

Isabel 15/02/2006 10 15 54 30 109

M. Hamburgo 15/02/2006 10 20 49 26 105

Romana 15/02/2006 10 25 49 25 109

Kyoho 15/02/2006 10 18 48 15 91

UFV 01 15/02/2006 09 16 45 21 91

Média 10 19 49 22 100

E1: poda ao início da brotação, E2: início da brotação ao pleno florescimento, E3: pleno

florescimento ao início da maturação, E4: início da maturação à plena maturação.

3.2.3.2. Características químicas de frutos de videiras

3.2.3.2.1. Teor de sólidos solúveis (SST), acidez total titulável (ATT) e relação

SST/ATT

Houve efeito significativo para o fator período e também para a interação

genótipo x período (Quadro 5). O teor de sólidos solúveis sofreu um aumento

linear nas variedades Romana, Isabel e Niágara Rosada; enquanto que, nas

variedades Moscatel de Hamburgo, Kyoho e Roberta, o aumento teve resposta

quadrática (Figura 1). Pôde-se verificar que a variedade Romana foi a cultivar que

atingiu o maior Brix, chegando a 18 ºBrix, seguida pela variedade Isabel, com 17,5

ºBrix. Nota-se na Figura 1 que a variedade Romana teve o maior incremento no

teor de sólidos solúveis, durante o período de maturação, variando de 8 a 18

ºBrix. A variedade Niágara Rosada apresentou o menor incremento de sólidos

solúveis, variando de 10,7 a 16,2 ºBrix. A variedade kyoho, durante o início da

maturação, apresentou uma queda na sua concentração de sólidos solúveis totais

(Figura 1). Isto pode ser explicado pelo período de intensas chuvas entre o

intervalo de coletas, provocando um aumento do volume das bagas e

conseqüente diluição dos açúcares no interior das bagas.

Quadro 5 - Resumo da análise de variância para teor de sólidos solúveis totais

(SST), acidez total titulável (ATT), relação SST/ATT e vitamina C, em

seis variedades de videira

FV GL SST ATT SST/ATT VIT. C

Rep 2 0.3648ns 0.0265ns 0.0175ns 0.8956ns

Genótipo 5 5.6846* 6.0795** 243.4495** 3.9586**

Erro A 10 1.1293 0.0188 0.0052 0.3535

Período 6 111.8842** 5..5408** 656.1546** 23.7155**

Gen*per 30 6.0507** 0.2634** 27.6323** 0.7473**

Erro B 72 1.8193 0.0261 6.038685 0.3143

CV% 9.98 10.88 20.17 24.69

** Significativo a 1% pelo teste F.

* Significativo a 5% pelo teste F.

CV= Coeficiente de variação, em porcentagem

ºBRIX

Kioho y = 12,007 - 0,133x + 0,006x

= 0,510

Romana y = 8,173 + 0,247x R

= 0,841

Isabel y = 10,659 + 0,181x R

= 0,741

N. Rosada y = 10,478 + 0,126x R

= 0,749

M . Hamburgo y = 9,810 + 0,245x - 0,002x

= 0,601

Roberta y = 9,280 + 0,287 - 0,003x

= 0,792

0 1020304050

Dias após início da maturação

ºBrix

Romana

Isabel

Kioho

M. Hambur go

Roberta

N. Rosada

Figura 1 - Teores de sólidos solúveis totais medidos em ºBrix, em seis variedades

de videiras, em função dos períodos de amostragem

A acidez total titulável foi influenciada pelos genótipos e pelos períodos.

Verificou-se efeito da interação genótipo x período (Quadro 5). Os teores de

acidez tiveram decréscimos lineares em cinco variedades, exceto na variedade

Roberta, que demonstrou uma resposta quadrática (Figura 2). A variedade Isabel

foi a cultivar que apresentou os maiores teores de acidez. No início da maturação,

na primeira coleta, o valor médio de acidez para esta variedade foi 3,29 g/100 ml,

atingindo na colheita, na sétima coleta, teores de 1,5 g/100 ml, valores

considerados limitantes para resultar em sabores agradáveis em variedades

comerciais (Carvalho e Chitarra, 1984). É importante ressaltar que as análises de

acidez foram realizadas em frutos com casca que, segundo Possner et al. (1985),

apresenta altos níveis de ácido málico. A variedade Niágara Rosada foi a cultivar

que apresentou menores índices de acidez, variando de 1,45 g/100 ml suco no

período 1 a 0,68g / 100 mL no ponto de colheita. Observa-se que o coeficiente de

variação para acidez total titulável foi baixo (10,88%), podendo-se inferir que

ocorreu uma boa precisão experimental.

ATT

Ro mana y = 2,4 0 4 - 0 ,04 2 x R

= 0 ,7 0 4

Isabel y = 3,272 - 0,037x R

= 0,860

Kioho y = 1,726 - 0,026x R

= 0,867

M. Hamburgo y = 2,631 - 0,051x R

= 0 ,8 5 3

Roberta y = 2,167 - 0,101x + 0,001x

= 0,782

N. Rosada y = 1,540 - 0,020x R

= 0 ,8 0 1

0 1020304050

Dias após início da maturação

g/100 ml

Romana

Isabel

Kioho

M. Hamburgo

Roberta

N. Rosada

Figura 2- Teores de acidez total titulável, em seis variedades de videiras, em

função dos períodos de amostragem

Para a relação SST/ATT, houve influência dos genótipos e dos períodos.

Verificaram-se diferenças significativas na interação genótipos x períodos (Quadro

5). Dessa forma, os dados indicam que existem diferenças entre os genótipos

para relação SST/ATT. Pôde-se verificar que somente a variedade Romana

apresentou um incremento linear na relação SST/ATT, enquanto que as

variedades Kioho, Isabel, Moscatel de Hamburgo, Roberta e Niágara Rosada

tiveram acréscimo quadrático. Nota-se, na Figura 3, que a variedade Isabel

obteve os piores valores para essa característica, atingindo seu ponto máximo no

último período, com o valor médio de 11,08 (dados não mostrados), bem abaixo

do mínimo de 20, que é recomendado por Bleinroth (1993) e Choudhury (2000).

Este resultado pode ser explicado pelo alto índice pluviométrico observado nos

meses de junho e julho do ano de 2005 (Quadro 2). Segundo Simão (1971), em

condições de baixa precipitação pluviométrica, ocorre a formação de frutos com

menor teor de umidade e, conseqüentemente, maior concentração de

componentes químicos, inclusive de açúcares e ácidos orgânicos. Vale ressaltar

que, apesar da média dos valores das variedades Isabel, Romana e Moscatel de

Hamburgo (11,08, 18,56, 19,54, respectivamente) estarem abaixo do

recomendado, de acordo com a Associação de Exportadores do Chile (1977), a

relação SST/ATT tem caráter secundário, devendo ser avaliada somente quando

os valores de sólidos solúveis totais, não atingirem o mínimo recomendado. Para

a característica sólidos solúveis totais todas as variedades apresentaram valores

satisfatórios, ficando dentro das normas exigidas para comercialização de uvas.

SST/ATT

Isabel y = 3,093 + 0,112x + 0,001x

= 0,845

Kioho y = 6,253 + 0,111x + 0,007x

= 0,842

Romana y = 2,930 + 0,404x R

= 0,861

M . Hamburgoy = 2,794 + 0,368x + 0,001x

= 0,837

Roberta y = 3,649 + 0,883x - 0,008x

= 0,754

N. Rosada y = 7,365 + 0,01x + 0,01x

= 0,787

0 1020304050

Dias após início da maturação

Romana

Isabel

kioho

M. Hamburgo

Roberta

N. Ros ada

Figura 3 - Relação SST/ATT, em seis variedades de videiras, em função dos

períodos de amostragem.

3.2.3.2.2. Teor de vitamina C

Com base no Quadro 5, pode-se observar que houve diferenças

significativas para genótipos, para períodos e também para a interação genótipos

x períodos. O coeficiente de variação foi moderado (24,69%), indicando boa

precisão experimental. As variedades Moscatel de Hamburgo e Niágara Rosada

não apresentaram aumentos significativos no teor de vitamina C, mantendo uma

média de 2,59 e 1,84 mg/100 g, respectivamente. Nas variedades Romana e

Isabel, o teor variou segundo equação linear, com acúmulo de vitamina C ao

longo da maturação. A variedade Kioho obteve os maiores valores para vitamina

C, com média de 5,33 mg/100 g na época de colheita, seguida pelas variedades

Romana e Isabel, com 4,66 e 4,33 mg/100 g, respectivamente. Os valores

encontrados, nestas variedades, foram bem superiores ao valor de 3 mg/100 g

PF, da cultivar Niágara Rosada. Nogueira et al. (2002), avaliando teores de

vitamina C em frutos de acerola, encontraram teores de 1.797 mg/100 ml de suco

e 1.561 mg/100 ml de suco. Butt (1980), citado por Nogueira et al. (2002) afirma

que o conteúdo de vitamina C, na maioria dos frutos, tende a diminuir durante o

processo de maturação, atribuindo esse decréscimo à atuação da enzima

denominada ácido ascórbico oxidase. Segundo Mievska (1984), os teores de

vitamina C em uvas aumentam significantemente durante o amadurecimento,

atingindo o seu conteúdo máximo na fase de maturidade fisiológica. Segundo este

autor, os teores de vitamina C variam entre 1,15 e 6,05 mg %, dependendo das

cultivares. Dessa forma, todas as variedades apresentaram teores de vitamina C

dentro do padrão esperado, segundo Mievska (1984).

itamina C

Kioho y = 1,041 + 0,04x + 0,001x

= 0,826

Romana y = 0,225 + 0,099x R

= 0,792

Isabel y = -0,161 + 0,09x R

= 0,819

Roberta y = 0,733 + 0,086x - 0,0004x

= 0,69

-1

0 1020304050

Dias após início da maturação

g/100 g

Romana

Isabel

Kioho

M. Hamburgo

Roberta

N. Rosada

Figura 4 - Teores de Vitamina C em seis variedades de videiras em função dos

períodos de amostragem

3.2.3.2.3. Teores de antocianinas

Pela análise do Quadro 5, verificam-se diferenças significativas para

genótipos e períodos. O efeito da interação genótipos x períodos também mostrou

diferenças significativas. As variedades N. Rosada e Kioho apresentaram um

acréscimo com resposta quadrática, enquanto que nas variedades M. Hamburgo

e Isabel, o aumento foi linear (Figura 5). O coeficiente de variação foi considerado

moderado a baixo (24,22%), indicando boa precisão experimental. A variedade

Isabel, por possuir bagas de coloração preta-azulada intensa, apresentou os

maiores teores de antocianinas, atingindo 374,88 mg/100 g PF, valores bem

superiores aos encontrados para as outras variedades. A variedade Niágara

Rosada obteve os menores índices (80 mg/100 g PF), resultado este já esperado

por se tratar de uma variedade de coloração mais avermelhada. É importante

lembrar que a análise de antocianinas só foi realizada com as variedades de

coloração vermelha (Isabel, Kioho, Niágara Rosada e Moscatel de Hamburgo).

Quadro 6 - Resumo da análise de variância para teores de Antocianinas em

quatro variedades de videiras

FV GL

Rep 2 3986.45*

Genótipo 3 123646.95**

Erro A 6 1329.84

Período 6 29754.80**

Genótipo x período 18 8823.88**

Erro B 39 892.26

CV% 24.22

** Significativo a 1% pelo teste F.

* Significativo a 5% pelo teste F.

CV= Coeficiente de variação em porcentagem.

Antocianinas

Isabel y = 105,329 + 6,667x R

= 0,706

Kioho y = 154,971 - 9,329x + 0,267x

= 0,763

M . Hamburgo y = 48,374 + 3,259x R

= 0,695

N. Rosada y = 27,967 - 2,213x + 0,087x

= 0,898

100

150

200

250

300

350

400

0 1020304050

Dias após início da maturação

mg /100 g PF

Isabel

Kioho

M. Hamburgo

N, Rosada

Figura 5 - Teores de antocianinas, em quatro variedades de videiras, em função

dos períodos de amostragem.

3.2.4. CONCLUSÕES

Em todas as variedades estudadas, observou-se uma clara variação entre

os estádios fenológicos e ciclos de produção, o que será de grande valia para

estudos fitotécnicos e ajustes na tecnologia de produção de videira para as

condições do Norte Fluminense.

Na caracterização qualitativa das variedades, observaram-se ótimos

resultados evidenciando o potencial de produção de uvas de qualidade na região

supracitada.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Associação de Exportadores do Chile (1997) Fruta fresca chilena de exportación-

uva de mesa - manual de produtos. Santiago, p. 2-13

Bleinroth, E.W. (1993) Determinação do ponto de colheita. In: Gorgattineto, A.,

Gayet, J.P., Bleinroth, E.W. (eds.) Uva para exportação: procedimentos de

colheita e pós-colheita. Brasília: EMBRAPA-SPI/FRUPEX, p. 20-21.

(Publicações Técnicas).

Bezerra Neto, E., Andrade, A.G. de, Barreto, L.P. (1994) Análise química de

tecidos e produtos vegetais. Recife: UFRPE, 80p.

Camargo, U.A. (1998). O melhoramento genético da videira na EMBRAPA uva e

vinho. Simpósio Brasileiro de Melhoramento de Fruteiras, Jaboticabal.

Choudhury, M.M. (2000) Colheita, manuseio pós-colheita e qualidade

mercadológica de uvas de mesa. In: Souza Leão, P.C., Soares, J.M. (eds.) A

viticultura no semi-árido brasileiro. Petrolina: Embrapa Semi-árido, 366p.

Cruz, C.D. (1997) Programa GENES (Versão Windows) Aplicativo computacional

em genética e estatística. Viçosa: Imprensa Universitária 442p.

Eichorn, K.W., Lorenz, H. (1977) Phaenologische Entwicklungstadien der Rebe.

Nachrichtenblatt des Deutschen Pflanzenschutzdienstes, Stuttgart, (29):119-

120.

Matsuura, F.C.A.U., Cardoso, R.L., Folegatti, M.I., Oliveira, J.R.P., Oliveira, J.A.B.,

Santos, D.B. (2001) Avaliações físico-químicas em frutos de diferentes

genótipos de acerola (Malpighia punicifolia L.) Revista Brasileira de Fruticultura,

Jaboticabal, 23(3):602-606.

Mievska T.S.(1984) Dynamics of vitamine C in berries of several table grape

cultivars. Gradinarska I Lozarska Nauka,Sofia. 21 (5):59-64.

Mitcham, B., Cantwell, M., Kader, A. (1996) Methods for Determining quality of

fresh comodities. Perishables Handling Newsletter. 85. 5p.

Murakami, K.R.N., Carvalho, A.J.C., Cereja, B.S., Barros, J.C.S.M., Marinho, C.S.

(2002) Caracterização fenológica da videira cv. Itália (Vitis vinifera L.) sob

diferentes épocas de poda na região de norte do estado do rio de janeiro.

Revista Brasileira de Fruticultura, 24 (3): 615-617.

Nogueira, R.J.M.C., Moraes, J.A.P.V., Burity, H.A., Junior, J.F.S. (2002) Efeito do

estádio de maturação dos frutos nas características físico-químicas de acerola.

Pesquisa agropecuária brasileira, Brasília, 37(4):463-470.

Pommer, C.V. (2003) Uva: Tecnologia de produção, pós-colheita, mercado. Porto

Alegre: Cinco continentes, 778p.

Possner, D.R.E., Kliewer, W.M. (1985) The localisation of acids, sugars,

potassium and calcium in developing grapes berries. Vitis 24:229-240.

Tais, L., Zieger, E. (2004) Fisiologia vegetal. Tradução de Eliane Romanato

Santarém. Porto Alegre: Artmed, 719p.

Terra, M.M., Pires, E.J.P., Nogueira, N.A.M. (1998) Tecnologia para produção de

uva Itália na região Noroeste do Estado de São Paulo. 2. ed. Campinas: CATI,

58p. (Documento Técnico, 97).

3.3. RESUMOS E CONCLUSÕES

Para caracterização molecular da coleção molecular de germoplasma da

Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro, realizou-se o estudo

da diversidade genética de 12 variedades elite por meio de marcadores RAPD.

Através da dissimilaridade genética baseada no índice de complemento

de Jaccard, foi obtida a matriz de distância entre cada genótipo, sendo as

variedades Niágara Rosada e Itália as mais distantes geneticamente e as

variedades Rubi e Itália as mais próximas.

Com os métodos de agrupamento de otimização de Tocher e hierárquico

do vizinho mais distante foi possível discriminar 3 grupos. O método de Tocher

agrupou a variedade apirênia UFV 01 num grupo separado, enquanto que, pelo

método do vizinho mais distante, a variedade UFV 01 formou um grupo com a

variedade Romana, também apirênia.

O marcador SCAR SCC8 mostrou-se bastante eficiente para discriminar

genótipos apirênios de genótipos com semente. As variedades apirênias Romana

e UFV 01 mostraram-se indivíduos heterozigotos em relação à característica de

apirenia.

Objetivando avaliar o comportamento de variedades de videiras

introduzidas na região Norte Fluminense, realizou-se a determinação do ciclo

reprodutivo e composição química de seis variedades de videiras. Os resultados

obtidos permitiram as seguintes observações:

As condições climáticas, no ano de 2006, garantiram uma considerável

redução do período de poda à colheita para todas as variedades estudadas.

Esses resultados podem ser explicados pelo baixo índice pluviométrico

registrados no ano de 2006, permitindo assim um incremento acelerado dos

componentes químicos do fruto. É importante ressaltar que essa redução do ciclo

é benéfica, pois reduz consideravelmente os custos de produção e garante a

oferta de uvas fora de época.

Pela análise química dos frutos, todas as variedades apresentaram

resultados satisfatórios quanto aos teores de Brix, acidez, SST/ATT, vitamina C e

antocianinas.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Asenjo, C.F., Guzmán, S.F. (1946) The high ascorbic acid content of the West

Indian Cherry. Science , 103:219.

Associação de Exportadores de Chile (1997). Fruta fresca chilena de exportación-

uva de mesa - Manual de produtos. Santiago, p. 2-13.

Barros, J.C.S.M., Ferri, C.P., Okawa, H. (1995) Qualidade da uva fina de mesa

comercializada na Ceasa de Campinas. Informações Econômicas, São Paulo,

25(7):53-61.

Barticevic, M.R., Zavala, K.M., De Felice, S., Valenzuela, J.B., Muñoz, C.S.,

Hinrichsen, P.R. (2004) Caracterización fenotípica de segregantes identificados

con marcadores de microsatélites, con énfasis en apirenia y respuesta a ácido

giberélico en crecimiento de bayas de uva. Agricultura Técnica. Chile, 64 (1):3-

16.

Bleinroth, E.W. (1993) Determinação do ponto de colheita. In: Gorgattineto, A.,

Gayet, J.P., Bleinroth, E.W. (eds.) Uva para exportação: procedimentos de

colheita e pós-colheita. Brasília: EMBRAPA-SPI/FRUPEX, p. 20-21.

(Publicações Técnicas).

Bouquet, A., Danglot, Y. (1996) Inheritance of seedlessness in grapevine, Vitis

vinifera L. Vitis 35 (1):35-42.

Borém, A. (1999) Melhoramento de espécies cultivadas. Editora UFV, 817p.

Borém, A. (2001) Melhoramento de plantas. Editora UFV, 453p.

Bezerra Neto, E., Andrade, A.G., Barreto, L. P. Análise química de tecidos e

produtos vegetais. Recife: UFRPE, 1994. 80p.

California Table Grape Commission (1995) The distribution and per capita

consumption of California table grapes by major varieties in the United States

and Canada. Califórnia Table Grape Commission, Califórnia, EUA.

Camargo, U.A. (1998) O melhoramento genético da videira na EMBRAPA uva e

vinho. In: Simpósio Brasileiro de Melhoramento de Fruteiras, Jaboticabal.

Camargo, U.A., Amaral, A.L., Oliveira, P.R.D. (2000) Uvas sem sementes.

Biotecnologia Ciência e Desenvolvimento (Encarte Especial).

Campo (1998) - Cia de Promoção Agrícola. Estudo da variabilidade de um pólo de

fruticultura na região Norte-Noroeste Fluminense. Brasília: FIRJAN, 29p.

Chinnici, F., Antonelli, A., Amati, A., Piva, A. (1999) Composition of grapes from

cv. Trebbiano romagnolo affected by Esca, Vitis 38 (4):187-188.

Choudhury, M.M. (2000) Colheita, manuseio pós-colheita e qualidade

mercadológica de uvas de mesa. In: Souza Leão, P.C., Soares, J.M. (eds.) A

viticultura no semi-árido brasileiro. Petrolina: Embrapa Semi-árido, 366p.

Constantinescu, G.A., Pena, A., Indreas, A. (1975) Inheritance of some Qualitative

and quantitative characters in the progeny of crosses between functionaly

female (Gynodynamic) and apyrene (Androdynamic) varieties. (Romanian)

Probl. Genetics Teoretical Applied, 7:213-241.

Costa, A.F. (2004) Avaliação de Características Agronômicas em Variedades e de

Diversidade Molecular em Variedades, Híbridos e Espécies de Videira. Tese

(Mestrado em Produção vegetal) - Campos dos Goytacazes - RJ, Universidade

Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro - UENF, 95p.

Couto, F. A. D., Nacif, S. R. (1999) Hibridação em mamão. In: Borém, A. (org.)

Hibridação artificial de plantas. Viçosa, MG: UFV, 307-329p.

Cruz, C.D. (2001) Programa Genes (Versão Windows), aplicativo computacional

em genética e estatística. Viçosa: UFV, 648p.

Dal col lúcio, A., Fortes, F.O., Storck. L., Filho, A.C. (2006) Abordagem

multivariada em análise de sementes de espécies florestais exóticas. Cerne,

Lavras, 12 (1):27-37.

Dudnik, N. A., Moliver, M. G. (1976) Inheritance of seedlessness in grape in the

South of Ukrainian SSR. Ref. Zhurnal 5.55.118:105-113.

Eichorn, K.W., Lorenz, H. (1977) Phaenologische Entwicklungstadien der Rebe.

Nachrichtenblatt des Deutschen Pflanzenschutzdienstes, Stuttgart, 29:119-120.

Fanizza, G., Colonna, G., Resta, P., Ferrara, G. (1999) The effect of the number of

markers on the evoluation of genotypic distances in Vitis vinifera. Euphytica

107|: 45-50.

Fanizza, G., Corona, M.G., Resta, P. (2000) Analysis of genetic relationships

among Muscat grapevines in Apulia (South Italy) by RAPD markers. Vitis. 39:4:

159-161.

Fernandez, M.T. 1991 Biologia de la vid: fundamentos biológicos de la viticultura.

Madrid: Mundi, 349 p.

Ferreira, M.A.S.V., Braga, J.P., França, C.D., Uesugi, C.H., Lima, M.F. (2000)

Caracterização bioquímica de isolados de Xanthomonas campestris pv. viticola.

Fitopatologia Brasileira, n. 25, Suplemento, p. 459.

Ferreira, M.E., Grattapaglia, D. (1998) Introdução ao uso de marcadores

moleculares em análise genética. EMBRAPA-CENARGEN: Brasília, 220p.

Food And Agriculture Organization Of The United Nations. FAOSTATAgriculture;

<http://faostat.fao.org> em: 08/03/2004.

Food and Agriculture Organization of the United Nations. FAOSTATAgriculture.

<http://faostat.fao.org> em: 28/06/2006.

Gerrath, J. M., Posluszny, U. (1988) Morphological and anatomical development in

the Vitaceae, II: Floral development in Vitis Riparia. Can. J. Bot. 65:1334-1351.

Golodriga, P., Troshin, L. P., Frolava, L. I. (1978) Inheritance of the character of

seedlessness in the hybrid generation of Vitis vinifera. Tsitol. Genetics 19:372-

376.

Gorgocena, Y., Arulsekar, S., Dandekar, A. M., Parfitt, D. E. (1993) Molecular

markers for grape characterization. Vitis. 32:183-185.

Grangeiro, L.C., Leão, P.C.D., Soares, J.M.(2002) Caracterização fenológica e

produtiva da variedade de uva Superior seedless cultivada no Vale do São

Francisco. Revista Brasileira de Fruticultura, Jaboticabal, 24(2): 552-554.

Henshall, J.D. (1981) Ascorbic acid in fruit juices and beverages. In: Counsell,

J.N., Horning, D.H. eds. Vitamin C (Ascorbic Acid). London: Applied Science.

Herrera, R., Cares, V., Wilkinson M.J., Caligari, P.D.S. (2002) Characterisation of

genetic variation between Vitis vinifera cultivars from central Chile using RAPD

and Inter Simple Sequence Repeat markers. Euphytica, 124:139–145.

Hilbert, G., Soyer, J.P., Molot, C., Giraudon, J., Milin, S., Gaudillere, J.P. (2003).

Effects of nitrogen supply on must quality and anthocyanin accumulation in

berries of cv. Merlot. Vitis, 42 (2):69–76.

IBGE. Banco de dados agregados - SIDRA. Produção agrícola municipal

(PAM)<http://www.sidra.ibge.gov.br/bda/agric/default.asp > em: 08/2005.

Jean-Jaques, I., Defontaine, A., Hallet, J.N. (1993) Characterization of Vitis

vinifera cultivars by Random Amplified Polymorphic DNA markers. Vitis,

32:189-190.

Khachatryan, S.S., Martirosyan, E.L. (1971) Nature of inheritance of large fruit and

size and number of seeds per fruit in hybrid progenies of vinifera. Ref. Zhurnal,

7.55.119.

Kliewer, W.N. (1981) Fisiologia da videira: como produz açúcar uma videira? Trad.

por Celso V. Pommer e Ilene R.S. Passos. Campinas, Instituto

Agrônomico,20p.

Lahouge, F., This, P., Bouquet. A. (1998) Identification of a codominant scar

marker linked to the seedless character in grapevine. Theoretical applied

genetics 97:950-959.

Leedbetter, C.A., Burgos, L (1994). Inheritance of stenospermocarpic

seedlessness in Vitis vinifera L. Journal of Heredity, 85: 157-160.

Lodhi, M.A., YE, G.N., Weedes, N.F., Reisch, B.I. (1994) A simple and efficient

method for DNA extraction from grapevine cultivars, Vitis species and

Ampelosis. Plant Molecular Biology Reporter 12 (1):6-13.

Loomis, N.H., Weinberger, J.H. (1979) Inheritance Studies of seedlessness in

grapes. Journal Of American Soc. Hort. Sci., 104:181-184.

Matsuura, F.C.A.U., Cardoso, R.L., Folegatti, M.I., Oliveira, J.R.P., Oliveira J.A.B.,

Santos D.B. (2001) Avaliações físico-químicas em frutos de diferentes

genótipos de acerola (Malpighia punicifolia L.) Revista Brasileira Fruticultura,

Jaboticabal, 23 (3):602-606.

Mievska, T.S. (1984) Dynamics of vitamine C in berries of several table grape

cultivars.Gradinarska I Lozarska Nauka, Sofia, 21 (5):59-64.

Mitcham, B., Cantwell, M., Kader, A. (1996) Methods for determining quality of fres

comoditiies. Perishables Handling Newsletter. 85. 5p.

Murakami, K.R.N., Carvalho, A.J.C., Cereja, B.S., Barros, J.C.S.M.,Marinho, C.S.

(2002) Caracterização fenológica da videira cv. Itália (Vitis vinifera L.) sob

diferentes épocas de poda na região de norte do estado do rio de janeiro.

Revista Brasileira de Fruticultura, 24(3):615-617.

Nogueira, R.J.M.C., Moraes, J.A.P.V., Burity, H.A., Junior, J.F.S. (2002) Efeito do

estádio de maturação dos frutos nas características físico-químicas de acerola.

Pesquisa agropecuária brasileira., Brasília, 37 (4):463-470.

Núñez, V., Monagas, M., Gomez-Cordovés, M.C., Bartolomé, B. (2004) Vitis

vinifera L. cv. Graciano grapes characterized by itsanthocyanin profile.

Postharvest Biology and Technology 31:69–79.

Oliveira, V.H., Lima, R.N. (2000) Influência da irrigação e da localização da

inflorescência sobre a expressão do sexo em cajueiro-anão precoce. Pesquisa

Agropecuária, 35:1751-1758.

Pommer, C.V. (2003) Uva: Tecnologia de produção, pós-colheita, mercado. Porto

Alegre: Cinco continentes, 778p.

Pospilova, D., Palenik, V. (1988) Heredity of seedlessness in grapes. .Genetics,

Sletchteni, 24:325-332.

Possner, D.R.E., Kliewer, W.M. (1985) The localisation of acids, sugars,

potassium and calcium in developing grapes berries. Vitis, 24:229-240.

Ramming, D.W. (1990) The use of embryo culture in fruit breeding. HortScience,

Alexandria, 25(4):393-398.

Reisch, B.I., Pratt, C. (1996) Grapes. In: Janick, J., Moore, J.N. (eds.) Fruit

breeding, Vine and small fruit crops. v. 2. John Wiley & Sons, p. 287-360.

Sandhu, A.S., Jawanda, J.S., Uppal, D.K. (1984) inheritance of seed characters in

hybrid populations of intercultivar crosses of grapes (Vitis vinifera L.). J. Res.

Punjab. Agricult. Univ. 21:39-44.

Sentelhas, P.C. (1998) Aspectos climáticos para a viticultura Tropical. Informe

Agropecuário, Belo Horizonte,19(194):9-14.

Smart, R.E., Tukington, C.R., Evans, C.J. (1964) Grapevines response to forrow

and trickle irrigation. American Jounal of Enology and Viticulture, 25:62-68.

Souza Leão, P.C. (2001) Comportamento das variedades de uva sem sementes

Crimson Seedlees e Fantasy Seedless no submédio Sao Francisco. Boletim de

Pesquisa e Desenvolvimento. EMBRAPA SEMI-ÁRIDO, 18p.

Sousa, J.S.I. (1996) Uvas para o Brasil. Piracicaba: Fealq, 791p.

Spiegel- Roy, P., Baron, Y., Sahar, N. (1990) Inheritance of seedlessness in

seeded x seedless progeny of Vitis vinifera L. Vitis 29:79-83.

Stout, A.B. (1936) Seedlessness in grapes. N. Y. State Agricultural Expt. Stat.

Tech. Bull. 238p.

Striem, M.J., Ben-hayyim, G., Spiegel-Roy, P. (1994) Developing molecular

genetic markers for grape breeding, using polymerase chain reaction

procedures. Vitis, 33:53-54.

Tais, L., Zieger, E. (2004) Fisiologia vegetal. Tradução de Eliane Romanato

Santarém. Porto Alegre: Artmed, 719p.

Terra, M.M., Pires, E.J.P., Nogueira, N.A.M. (1998) Tecnologia para produção de

uva Itália na região Noroeste do Estado de São Paulo. 2. ed. Campinas: CATI,

58p. (Documento Técnico, 97).

Thomas, M.R., Scott. N.S. (1993) Microsatellite repeats in grapevine reveal DNA

polymorphisms when analysed as sequence-tagged sites (STSs). Theoretical

Applied GeneticsI, 86:985-990.

Weinberger, J.H., Harmon, F.N. (1964) Seedlessness in Vitis vinifera grapes.

Proc. Amer. Soc. Hort. Sci. 85:270-274.

Vidal, J.R., Coarer, M., Defontaine, A. (1999) Genetic relationships among

varieties grown in different French and Spainish regions based on RAPD

markers. Euphytica, 109:161-172.

Vidal, J.R., Delavault, P., Coarer, M., Defontaine, A. (2000) Design of grapevine

(Vitis vinifera) cultivar-specific SCAR primers for PCR fingerprinting. Theoretical

Applied Genetics 101:1194-1201.

Winkler, J. (1965) General Viticulture. University of California Press, Berkeley:

p.137-162.

Zoghlami, N., Miliki, A., Ghorbel, A. (2001) Evaluation of genetic diversity among

Tunisian grapevines by RAPD markers. Vitis, 40:31-37.

Livros Grátis
( http://www.livrosgratis.com.br )
 
Milhares de Livros para Download:
 
Baixar livros de Administração
Baixar livros de Agronomia
Baixar livros de Arquitetura
Baixar livros de Artes
Baixar livros de Astronomia
Baixar livros de Biologia Geral
Baixar livros de Ciência da Computação
Baixar livros de Ciência da Informação
Baixar livros de Ciência Política
Baixar livros de Ciências da Saúde
Baixar livros de Comunicação
Baixar livros do Conselho Nacional de Educação - CNE
Baixar livros de Defesa civil
Baixar livros de Direito
Baixar livros de Direitos humanos
Baixar livros de Economia
Baixar livros de Economia Doméstica
Baixar livros de Educação
Baixar livros de Educação - Trânsito
Baixar livros de Educação Física
Baixar livros de Engenharia Aeroespacial
Baixar livros de Farmácia
Baixar livros de Filosofia
Baixar livros de Física
Baixar livros de Geociências
Baixar livros de Geografia
Baixar livros de História
Baixar livros de Línguas

Baixar livros de Literatura
Baixar livros de Literatura de Cordel
Baixar livros de Literatura Infantil
Baixar livros de Matemática
Baixar livros de Medicina
Baixar livros de Medicina Veterinária
Baixar livros de Meio Ambiente
Baixar livros de Meteorologia
Baixar Monografias e TCC
Baixar livros Multidisciplinar
Baixar livros de Música
Baixar livros de Psicologia
Baixar livros de Química
Baixar livros de Saúde Coletiva
Baixar livros de Serviço Social
Baixar livros de Sociologia
Baixar livros de Teologia
Baixar livros de Trabalho
Baixar livros de Turismo
 
 