( PDF ) Alteração testicular, epidimária e do liquido cefalorraquidiano de cães (Canis familiaris) (Linnaeus, 1758) naturalmente infectados por Leishmania (Leishmania) chagasi provenientes da região

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FABIANE ARAGÃO RODRIGUES

ALTERAÇÃO TESTICULAR, EPIDIDIMÀRIA E DO LIQUIDO

CEFALORRAQUIDIANO DE CÃES (Canis familiaris) (LINNAEUS, 1758)

NATURALMENTE INFECTADOS POR Leishmania (Leishmania) chagasi

PROVENIENTES DA REGIÃO METROPOLITANA DO RECIFE

RECIFE

2006

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UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE PERNAMBUCO

DEPARTAMENTO DE MEDICINA VETERINÁRIA

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIA VETERINÁRIA

FABIANE ARAGÃO RODRIGUES

ALTERAÇÃO TESTICULAR, EPIDIDIMÀRIA E DO LIQUIDO

CEFALORRAQUIDIANO DE CÃES (Canis familiaris) (LINNAEUS, 1758)

NATURALMENTE INFECTADOS POR Leishmania (Leishmania) chagasi

PROVENIENTES DA REGIÃO METROPOLITANA DO RECIFE

Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação

em Ciência Veterinária da Universidade Federal Rural

de Pernambuco - UFRPE, como parte dos requisitos

para obtenção do grau de Mestre em Ciência

Veterinária.

Orientador: Prof. Dr. Leucio Câmara Alves

RECIFE

2006

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ALTERAÇÃO TESTICULAR, EPIDIDIMÀRIA E DO LIQUIDO

CEFALORRAQUIDIANO DE CÃES (Canis familiaris) (LINNAEUS, 1758)

NATURALMENTE INFECTADOS POR Leishmania (Leishmania) chagasi

PROVENIENTES DA REGIÃO METROPOLITANA DO RECIFE.

FABIANE ARAGÃO RODRIGUES

Dissertação defendida e aprovada pela Banca Examinadora:

ORIENTADOR:

________________________________

Prof. Dr.Leucio Câmara Alves

EXAMINADORES: ______________________________

Dr. Yara de Miranda Gomes

______________________________

Prof. Dr. Marcelo Moraes Valença

______________________________________

Prof. Dr.Valdemiro Amaro da Silva Júnior

RECIFE

2006

Ficha catalográfica

Setor de Processos Técnicos da Biblioteca Central – UFRPE

CDD 636. 708 969 364

1 . Parasitologia Veterinária

2 . Neurologia

3 . Patologia

4 . Proteína

5 . Leishmaniose visceral canina

6 . Anticorpos anti-Leishmania chagasi

7 . Liquido cefalorraquidiano

8 . Clínica médica

9 . Veterinária

10 . Pernambuco

I . Alves, Leucio Câmara

II . Alteração testicular e do líquido cefalorraquidianode cães (Canis familiaris)

(Linnaeus, 1758) natural mente infectados por Leishmania (Leishmania) chagasi

provenientes da Região Metropolitana do Recife

R696a Rodrigues, Fabiane Aragão

Alteração testicular, epididimária e do líquido

cefalorraquidiano de cães (Canis familiaris) (Linnaeus,

1758) naturalmente infectados por Leishmania

(Leishmania) chagasi provenientes da Região

Metropolitana do Recife /Fabiane Aragão Rodrigues. -

2006.

90 f.

Orientador : Prof. Dr. Leucio Câmara Alves

Dissertação (Mestrado em Ciência Veterinária)

Departamento de Medicina Veterinária - UFRPE

Inclui anexo e bibliografia.

“Somos o que fazemos, mas somos, principalmente, o que fazemos para mudar o

que somos.”

(

Eduardo Galeno

)

A minha mãe Maria José Aragão pelo exemplo de mulher, pela garra,

o profissionalismo e, principalmente, pelo amor e esforços a mim

dedicados, não só a minha vida acadêmica, como pessoal.

Ao meu pai José Luiz Rodrigues pelos bons conselhos nas horas

certas e pela força

Vocês sempre serão meu porto seguro!

AGRADECIMENTOS

A Deus que sempre esteve presente em minha vida me guiando e iluminando meu caminho

principalmente nesse momento tão especial.

Ao meu querido irmão Rodrigo que sempre me deu força.

Ao meu noivo Reidson Marcio pela ajuda, apoio e paciência nos momentos mais críticos ao

longo da realização deste trabalho.

Ao Prof. Dr. Leucio Câmara Alves, meu orientador, por ter acreditado em mim e sempre ter

me apoiado nos momentos mais difíceis ao longo dessa jornada. Pelos ensinamentos, pela

participação ativa neste trabalho, pelo incentivo e pela amizade.

A Profa. Dra. Maria Aparecida da Gloria Faustino, pessoa pela qual tenho muita admiração,

pelas orientações e ensinamentos.

Aos Profs. Drs. Frederico Celso Lyra Maia, Valdemiro Amaro da Silva Júnior e Maria

Madalena Pessoa Guerra, pela essencial colaboração na realização e interpretação dos

exames histopatologicos e reprodutivos.

A todos do Laboratório de imunológia do Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães/ Fiocruz,

em especial à Dra. Yara de Miranda Gomes, Rodrigo Alves, Milena Paiva e Mineo pela

colaboração de grande valor para a realização dos exames sorológicos, parte fundamental

deste trabalho.

Ao Centro de Vigilância Ambiental da Prefeitura do Recife, em especial a João Alves,

Geraldo Vieira, Sandra Araújo e aos funcionários do canil, pelos animais cedidos para

realização do experimento e pela ajuda com os mesmos.

Às amigas Bárbara, Paola, Éricka e Ana Maria pela disposição em vários momentos

precisos e preciosos na realização deste trabalho. Sem essa equipe nada teria saído do

papel.

Aos colegas do curso de Pós-graduação, Andréa Paiva, Carlos Alberto, Erica Morais

Fabiani Guido, Graziele, Juliana Pinto, Rivanilson, Manoel, Manuela, Mariana, Sildivane e

Wagner por todos momentos que passamos juntos.

A todos os amigos do Laboratório de Doenças Parasitárias do Departamento de Medicina

Veterinária da UFRPE, em especial Alessandra Ribeiro, Daliane, Débora, Edileuza,

Geovania, Márcia Paula, Marilene, Verdiane e Guiomar.

A Ana Katarina e Tuzinha pela ajuda na busca pelas referencias no COMUT e

normalização das mesmas, respectivamente.

Toda a minha gratidão a todos que direta ou indiretamente contribuíram para realização

deste trabalho.

RESUMO

A leishmaniose visceral canina (LVC) ou calazar é uma doença sistêmica causada pelo

protozoário da espécie Leishmania (Leishmania) chagasi. Sua transmissão realiza-se por

insetos hematófagos da espécie Lutzomyia longipalpis, considerado vetor ativo da doença

no Brasil. Este trabalho teve como propósito relatar as alterações testiculares e do líquido

cefalorraquidiano (LCR), bem como, analisar as proteínas do soro e do LCR de cães com

infecção natural provenientes da Região Metropolitana do Recife. As alterações testiculares

foram evidenciadas em um animal que não fecundava nenhuma fêmea há mais de 12

meses. O resultado do exame histopatológico evidenciou degeneração testicular e

epididimite multifocal e intesticial linfoplasmocitária discreta, sem presença de

espermatozóide no lúmen. Para pesquisa de anticorpos anti-Leishmania (Leishmania)

chagasi, tanto no soro quanto no LCR foram utilizados 29 animais sendo 21 pertencentes

ao grupo infectados (GI) e oito ao grupo controle (GC). Os resultados revelaram que 42,8%

(9/21) dos animais do GI foram positivos para presença de anticorpo anti-Leishmania

(Leishmania) chagasi no LCR. Após a mensuração da proteína serica e liquórica dos

animais do GI, 85,7% (18/21) apresentaram a proteína serica elevada, e 16,7% (3/21)

apresentaram a proteína liquórica elevada com médias de 8,34±1,07 e 17,09±16,03,

respectivamente. Os resultados aqui obtidos sugerem que cães com histórico de

infertilidade proveniente de áreas endêmicas devem ser investigados para LVC. Por outro

lado, a possível lesão na barreira hematoencefálica e/ou a produção de imunoglobulina no

LCR pode ser responsável pela presença de anticorpos anti Leishmania (L) chagasi, assim

como a elevação da proteína liquórica. Não obstante a hiperproteinemia é resultante da

estimulação policlonal após o contato com Leishmania (Leishmania) chagasi.

ABSTRACT

Canine visceral leishmaniasis (CVL) also now as kalazar is a systemic disease caused by

the protozoan from the Leishmania (Leishmania) chagasi genus.Its transmission occurs

through hematophagus insects from the Lutzomyia longipalpis genus, considered active

vectors in Brazil. This work aimed to present not only the testicular and Cerebrospinal

Fluid (CSF) changes but also evaluate sera proteins in naturally infected dogs from the

Região Metropolitana do Recife. Testicular changes were observed in an animal that could

not fertilize a female for over 12 months. Results from the histopathological exams

evidenced testicular degeneration and discreet lymphoplasmocytic multifocal intesticial

epididimitis with sperms absence at the lumen. To search for anti-Leishmania (Leishmania)

chagasi antibodies in sera and CFS, 29 animals were used where 21 belonged to the

infected group (IG) and eight to the control group (CG). Results revealed that 42.8% (9/21)

of the IG were positive for anti-Leishmania (Leishmania) chagasi antibody. Following sera

and liquor protein measurement 85.7% (18/21) presented hyperproteinemia and 16.7%

(3/21) presented increase of CFS protein level with means ranging from 8.34±1.07 and

17.09±16.03, respectively. These results suggests that dogs with history of infertility

coming from endemic areas must be investigated for CVL. On the other hand, the possible

lesion on blood-brain barrier and/or immuneglobulins production at CFS may be

responsible for the presence of antibodies anti Leishmania (L) chagasi, as well as the

increase on liquor protein. Still, hyperproteinemia is a result of policlonal stimulation

following contact with Leishmania (Leishmania) chagasi.

INDICE DE ILUSTRAÇÂO

Página

CAPITULO 1

3. ORQUITE E EPIDIDIMITE EM CÃO COM INFECÇÃO NATURAL POR Leishmania

(Leishmania) chagasi - RELATO DE CASO

FIGURA 1 Fotomicrografia da cauda do espermatozóide fortemente

enrolada (seta esquerda) e cabeça destacada (seta direita). 40 X 20

FIGURA 2 Fotomicrografia do infiltrado mononuclear linfoplasmocitário

no intertúbulo. 40 X 20

FIGURA 3 Fotomicrografia do processo degenerativo caracterizado pela

redução do epitélio. 40 X 20

FIGURA 4 Fotomicrografia da célula de Leydig apresentando excesso de

lipofuscina em seu interior. 100X 20

FIGURA 5 Fotomicrografia do lúmem da calda do epidídimo direito apresentando

azospermia. 10X 21

INDICE DE TABELA

Página

CAPITULO 3

5. AVALIAÇÃO DA PROTEÍNA TOTAL DO SORO E DO LÍQUIDO

CEFALORRAQUIDIANO (LCR) DE CÃES NATURALMENTE INFECTADOS POR

Leishmania (Leishmania) chagasi

Tabela 1- Média e desvio padrão dos níveis séricos em g/dl de proteína total,albumina,

globulina e da relação A: G no soro dos animais do GI e do GC. Recife, 2006 44

SUMÀRIO

1-INTRODUÇÃO GERAL 01

1.1- Leishmaniose visceral 01

1.2- Aspectos clínicos 02

1.3- Alterações no Sistema Genital na Leishmaniose Visceral Canina 03

1.4- Alterações no Liquido Cefalorraquidiano (LCR) na Leishmaniose Visceral

Canina 03

1.5- Alterações na Proteína Serica na Leishmaniose Visceral Canina 05

1.6- Referências 05

2. OBJETIVOS 12

2.1- Geral 12

2.2-Específicos 12

CAPÍTULO 1 13

3. ORQUITE E EPIDIDIMITE EM CÃO COM INFECÇÃO NATURAL POR Leishmania

(Leishmania) chagasi - RELATO DE CASO

Resumo 14

3.1- Introdução 15

3.2- Relato do Caso 16

3 2.1- Descrição do paciente 16

3.2.2- Exame clínico 17

3.2.3- Exame parasitológico 17

3.2.4- Colheita do sangue para sorologia 17

3.2.5- Exame andrológico 18

3.2.6- Teste de imunoadsorção enzimática (ELISA) 18

3.2.7- Exame anatomo patológico 18

3.3.-Discussão 19

3.4- Referências 23

CAPÍTULO 2 27

4. ANTICORPOS ANTI-Leishmania (Leishmania) chagasi

(CUNHA & CHAGAS, 1937) EM LIQUIDO CEFALORRAQUIDIANO DE CÃES

(Canis familiaris)( LINNAEUS, 1758) COM INFECÇÃO NATURAL

Resumo 28

4.1- Introdução 29

4. 2- Material e Métodos 30

4.2.1- Animais 30

4.2.2- Exame clínico 30

4.2.3- Colheita do material destinado ao exame parasitológico 31

4.2.3.1- Biopsia de medula óssea 31

4.2.4- Colheita do material destinado ao teste sorológico 31

4.2.5- Formação do grupo experimental 31

4.2.6- Colheita do Liquido Cefalorraquidiano (LCR) 32

4.2.7- Teste sorológico 32

4.3. Resultados e discussão 33

4.4- Conclusão 34

4.5- Referências 34

CAPÍTULO 3 38

5. AVALIAÇÃO DA PROTEÍNA TOTAL DO SORO E DO LÍQUIDO

CEFALORRAQUIDIANO (LCR) DE CÃES NATURALMENTE INFECTADOS POR

Leishmania (Leishmania) chagasi

Resumo 39

. 5.1- Introdução 40

.5.2- Material e Métodos 41

.5.2.1-Animais 41

5.2.2- Colheita do soro 42

5.2.3- Colheita do Liquido Cefalorraquidiano (LCR) 42

5.2.4- Determinação da proteína total do LCR e do soro 43

5.2.5- Análise Estatística 43

5.3- Resultado e discussão 44

5.4- Conclusão 48

5.5- Referências 49

6. CONCLUSÕES GERAIS 55

7- REFERÊNCIAS 56

8- ANEXOS 69

1. INTRODUÇÃO GERAL

1.1. Leishmaniose Visceral

Atualmente a Leishmaniose visceral (LV) encontra-se entre as seis endemias

consideradas prioritárias no mundo (WHO, 2002). No Brasil, a Leishmania

(Leishmania) chagasi tem sido o agente responsável pela infecção, sendo transmitido ao

homem pelo flebotomíneo Lutzomyia longipalpis (ALVES e BEVILACQUA, 2004).

Desta forma, a ocorrência da doença em uma determinada área depende

basicamente da presença do vetor susceptível e de um hospedeiro/reservatório

igualmente susceptível (GONTIJO e MELO, 2004).

Apesar da LV ocorrer de forma endêmica em áreas suburbanas e urbanas

(BRASIL, 2003) de vários Estados do Brasil como Roraima, Pará, Tocantins, Minas

Gerais, Espírito Santo, São Paulo, Goiás, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul e todos os

estados do Nordeste (SANTA ROSA e OLIVEIRA, 1997), no passado a enfermidade

era considerada doença exclusivamente de ambientes rurais.

Entre os hospedeiros silvestres susceptíveis, raposas e masurpiais são os

animais incriminados na cadeia epidemiológica.

No ambiente doméstico, segundo Gontijo e Melo (2004), o cão desempenha

um importante papel na cadeia de transmissão, em virtude destes apresentarem uma

maior quantidade de parasitos na pele do que o homem, fato que favorece a infecção

dos vetores (SANTA ROSA e OLIVEIRA, 1997) e sua transmissão para população

canina e humana.

As diferentes taxas de prevalência da enfermidade na população canina refletem

a imunocompetência do hospedeiro vertebrado (FEITOSA et al., 2000) frente ao desafio

infectante. Sendo assim atualmente, considera-se a Leishmaniose Visceral Canina

(LVC) como uma enfermidade imunomediada, onde a presença da resposta humoral

está associada à doença clínica, enquanto que a resposta celular tem sido observada em

animais assintomáticos (MORENO et al., 1999).

Como conseqüência deste status imunológico, os animais que não forem

eficazes na geração da resposta imune, ocorre a disseminação dos parasitos na pele e

posteriormente para diferentes órgãos e tecidos, causando uma doença sistêmica.

1.2. Aspectos Clínicos

Segundo, Feitosa e colaboradores (2000), a leishmaniose causa doença

sistêmica e pode manifestar-se de três meses a alguns anos após a infecção por

Leishmania sp., e sua gravidade depende da imunocompetência do hospedeiro

vertebrado. Clinicamente, os animais podem ser classificados de acordo com a

evolução da doença em assintomáticos, oligossintomáticos e polissintomáticos

(BRASIL, 2004).

De um modo geral os animais podem desenvolver dermatopatias, caracterizada

principalmente por alopecia local ou generalizada e presença de ulceras cutâneas

(ALVES e FAUSTINO, 2005).

Entre as alterações sistêmicas, destacam-se a hepatoespelenomegalia, e sinais de

deposição de imunocomplexos nos olhos, representado por ceratoconjutivite seca,

ceratite ulcerativa e corioretinite (BRITO, 2004), problemas articulares como a

poliartrite autoimune, (DENEROLLE, 1996), além de disfunção cardio-respiratória e

digestiva (RIBEIRO, 2005; BARROIUM-MELO et al, 2005) entre outros tem sido

observados.

1.3. Alterações no Sistema Genital na Leishmaniose Visceral Canina

O envolvimento do trato genital e a infecção por Leishmania sp, tem sido

descrito na doença cutânea (DINIZ, 2005), notadamente na espécie humana (CASTRO

et al., 1987; CABELLO et al., 2002).

Contudo Martinez-Garcia et al., (1996) e Kovalenko et al. (1994) observaram

alterações testiculares em infecções naturais ou experimentais por Leishmania donovani

no homem e em animais de laboratório respectivamente.

Na espécie canina, presença de formas amastigotas de Leishmania sp foi descrita

no testículo e epididimo em cães com infecção natural (POUL, 1949; DIAZ, 1982)

Segundo Diniz (2005), a intensidade de inflamação e a quantidade de formas

amastigotas encontrada nos epidídimos, glande e prepúcio são diretamente

proporcionais ao aparecimento dos sinais clínicos em cães com infecção natural por

Leishmania sp.

1.4. Alterações no Líquido Cefalorraquidiano (LCR) na Leishmaniose Visceral

Canina

O LCR é responsável por proteger, sustentar e nutrir o cérebro e a medula

espinal (FERNANDES, 1990). Sua produção é realizada no plexo coróide por um

processo de filtração e secreção ativa, com sua absorção ocorrendo nas vilosidades no

seio venoso cerebral, pelas vênulas no espaço subaracnóide e pelos vasos linfáticos ao

redor da medula espinal (WHEELER e SHARP, 1999).

Inúmeros quadros mórbidos podem causar alterações no líquor, particularmente

linfossarcomas, processos inflamatórios crônicos, degenerativos e infecciosos causados

por vírus, bactérias, fungos, e protozoários (CORNELIUS ,1958).

Prasad e Sen (1996) relataram a presença de formas amastigotas de Leishmania

donovani em pacientes humanos e em animais infectados, bem como processos

inflamatórios no plexo coróide e meninges (VIÑUELAS et al. 2001).

No que concerne à infecção por Leishmania sp, Prasad e Sen (1996) e Viñuelas

et al. (2001) observaram formas amastigotas de Leishmania donovani no plexo coróide

com alteração do conteúdo liquórico em pacientes humanos e animais com infecção

natural respectivamente.

Segundo Viñuelas et al. (2001), sinais de envolvimentos neurológicos na

leishmaniose visceral canina estão associados à presença de inflamação crônica das

meninges, infiltração por linfócitos e células plasmáticas, e imunoglobulinas (LIMA et

al., 2003).

Por outro lado Garcia-Alonso et al.(1996), observaram que a deposição de

proteínas de alto peso molecular, como as imunoglobulinas, no plexo coróide em cães

com infecção natural por Leishmania infantum pode predispor ao aparecimento de

doença degenerativa e depósito de substancias.

1.5 Alterações na Proteína Serica na Leishmaniose Visceral Canina

As proteínas são fundamentais, no que diz respeito à estrutura e função, para

qualquer célula que faça parte do organismo de qualquer ser vivo e a maioria delas são

sintetizada no fígado (COLES, 1984).

O aumento de proteína plasmática tem sido observado em animais com LVC

(MENDONÇA, 1996, YKEDA et al., 2003). Este aumento está relacionado com a

evolução da infecção, número de parasitos inoculados e a via de inoculação (ROSSAN e

STAUBER, 1959). Além disso, a hiperproteinemia plasmática tem sido verificada,

particularmente, nos estágios finais da doença (HERNANDEZ-RODRIGUEZ et al.,

1987; RAMOS et al., 1994).

Como resultado, ocorre uma a hipergamaglobulinemia como conseqüência da

produção de anticorpos, e inversão da relação Albumina: Globulina (A:G) em

decorrência das alterações hepáticas (FERRER, 1992; KONTOS e KOUTINAS, 1993).

1.6 REFERÊNCIAS

ALVES, W.A.; BEVILACQUA, P.D. Reflexões sobre a qualidade do diagnóstico da

leishmaniose visceral canina em inquérito epidemiológicos: o caso da epidemia de Belo

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Janeiro. v. 20, n. 1, p. 259-265, jan/fev, 2004

ALVES, L. C.; FAUSTINO, M. A. G. Leishmaniose visceral canina. Manual da

Schering-Plough, 2005, 14p.

BRASIL. MINISTÈRIO DA SAUDE. Manual de vigilância e controle da

leishmaniose visceral. Brasília, DF, 2003. 120p.

BRASIL. MINISTÈRIO DA SAUDE. Manual de vigilância e controle da

leishmaniose visceral. Brasília, DF, 2004. 120p.

BARROUIN-MELO, Stella Maria et al. Can spleen aspirations be safely used for the

parasitological diagnosis of canine visceral leishmaniosis? A study on assymptomatic

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339, 2006.

BRITO, F. L. C. Alterações oculares e análise do humor aquoso de cães (Canis

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& Chagas, 1937). 2004. 862 f. Dissertação (Mestrado em Ciência Veterinária) –

Universidade Federal Rural de Pernambuco, Recife.

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CASTRO, C.A.; HIDALGO, H.H; SOLANO,A.E.;COTO,C.F. Leishmaniasis of the

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DENEROLLE, P H. Leishmaniose canine: difficultes du diagnostic et du traitement

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DIAZ, M. P.; ARRIBAS, J. L. G.; GARCIA, E. G. Lesiones testiculares y epididimarias

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2002.

2- OBJETIVOS

2.1- GERAL

Avaliar a alteração testicular, epididimaria e do líquido cefalorraquidiano de

cães (Canis familiaris) (Linnaeus, 1758) naturalmente infectados por Leishmania

(Leishmania) chagasi provenientes da Região Metropolitana do Recife.

2.2- ESPECÍFICOS

• Relatar a orquite e epididimite em cão infectado naturalmente com

Leishmania (Leishmania) chagasi.

• Detectar a presença de anticorpos anti-Leishmania (Leishmania) chagasi

no líquido cefalorraquidiano (LCR) de cães naturalmente infectados.

• Avaliação das proteínas do líquido cefalorraquidiano e do soro de cães

com diagnóstico positivo para LVC na Região Metropolitana do Recife.

CAPÍTULO 1

ORQUITE E EPIDIDIMITE EM CÃO COM INFECÇÃO NATURAL POR

Leishmania (Leishmania) chagasi (CUNHA & CHAGAS, 1937)

RELATO DE CASO

ORQUITE E EPIDIDIMITE EM CÃO COM INFECÇÃO NATURAL POR

Leishmania (Leishmania) chagasi (CUNHA & CHAGAS, 1937)

RELATO DE CASO

RESUMO

Leishmaniose visceral canina (LVC), é uma doença com envolvimento sistêmico

em que o desenvolvimento da sintomatologia clinica de uma parcela dos cães infectados

depende de sua competência imunológica. Contudo infecções por protozoários no trato

genital masculino são raras. O objetivo deste trabalho foi relatar as alterações

testiculares em um cão infectado naturalmente por Leishmania chagasi proveniente do

município de Paulista-PE. Os resultados demonstraram a presença de epididimite

multifocal e intersticial linfoplasmocitária discreta com ausência de espermatozóides.

Com base nos resultados obtidos, sugere-se que cães com histórico de infertilidade

proveniente de áreas endêmicas devem ser investigados para LVC.

ORQUITIS AND EPIDIDIMITIS IN DOGS WITH NATURAL INFECTION BY

Leishmania (Leishmania) chagasi (CUNHA & CHAGAS, 1937)

CASE REPORT

ABSTRACT

Canine Viceral Leishmaniasis (CVL) is a disease with systemic involvement, which

depends on immunological response from the affected animals so that only part of

infected dogs develops clinical illness. However, infections promoted by protozoan on

genital system male are unusual. The aim of this work was to present the testicular

alterations in a dog naturally infected by Leishmania chagasi deriving from Paulista-PE

district. The results showed an evident multifocal epididimitis and lymphoplasmocytic

intesticial with sperms absence at the lumen. Based on the results it is concluded that

dogs with infertility precedent coming from endemic areas must be investigated for

CVL.

1. INTRODUÇÃO

Dentre os sinais sugestivos da leishmaniose visceral canina (LVC) ou calazar

canino, se destacam as dermatopatias, que em geral estão presentes no focinho, nas

orelhas e nas extremidades. Onicogrifose, conjuntivite, febre irregular, apatia, epistaxe,

emagrecimento, hepatoesplenomegalia, ascite, edema das extremidades e paresia dos

posteriores (MARZOCHI et al., 1985; RAMOS et al., 1994) são outros sinais que têm

sido relatados em cães provenientes de áreas endêmicas.

A LVC é considerada doença imunomediada com formação de imunocomplexos

circulantes como conseqüência de vasculite, uveíte, glomerulonefrite e artrite (PINELLI

et al., 1994). Porém pode ocorrer, na dependência da resposta imunológica, apenas uma

parcela dos cães infectados desenvolve doença clínica (MARZOCHI et al. 1985;

MORENO et al., 1999). Assim, os cães podem ser agrupados em três categorias:

assintomáticos, oligossintomáticos e polissintomáticos, em função dos sinais clínicos

apresentados (SANTA ROSA e OLIVEIRA, 1997).

Após a infecção, ocorre multiplicação do parasito no sítio de inoculação, e se o

hospedeiro não gerar uma resposta imune eficaz, há destruição dos macrófagos

infectados, e desta forma a infecção é debelada. Do contrario, os parasitos disseminam-

se na pele para posteriormente migrarem para diferentes órgãos e tecidos, tais como

medula óssea, baço, fígado (LOSOS, 1986; STRAUSS e BANETH, 2001; FERRER,

2002; BRASIL, 2003), coração, pulmão, intestino e rins (MANGOUD et al. (1997);

MANGOUD et al. (1998); KOVALENKO et al. (1994).

Infecções por protozoários no trato genital masculino são raras, no entanto,

Leishmania donovani têm sido vinculada à disfunções testiculares no homem

(MARTINEZ-GARCIA et al., 1996) e em hamster submetido a infecção experimental

(KOVALENKO et al. 1994).

No que se refere a LVC, há relatos da presença de formas amastigotas de

Leishmania sp no testículo e epididimo em animais com infecção natural (POUL, 1949;

DIAZ, 1982; DINIZ, 2005).

O presente trabalho teve como objetivo descrever os achados histopatológicos da

orquite e epididimite em cão com infecção natural por Leishmania (Leishmania)

chagasi.

2. RELATO DO CASO

2.1 DESCRIÇÃO DO PACIENTE

Um cão, da raça Fila Brasileiro, macho, com idade de quatro anos, proveniente

do município de Paulista, localizado no litoral norte do Estado de Pernambuco (Latitude

07º56'27" Sul e longitude 34° 52' 23” Oeste), foi encaminhado pelo médico veterinário

ao hospital veterinário da Universidade Federal Rural de Pernambuco, com a finalidade

de realizar o exame sorológico para LVC. Durante o exame clínico o proprietário

relatou que o animal era reprodutor e não fecundava nenhuma fêmea há mais de 12

meses, sendo então decidido a realização do exame andrológico.

2.2 EXAME CLÍNICO

O exame clínico constituiu, inicialmente, de anamnese com obtenção de dados

referentes ao estado geral do animal, sexo, idade, porte, evolução do processo, local de

procedência e possíveis condutas terapêuticas efetuadas anteriormente. O exame físico

constituiu na avaliação do animal, para identificação de alterações orgânicas,

observando-se a existência de sinais sugestivos de LVC.

2.3 EXAME PARASITOLÓGICO

O exame parasitológico foi realizado por biópsia de medula óssea na crista do

osso externo, utilizando-se seringa

e agulha

descartáveis. Do material puncionado

foram realizados esfregaços em lâminas de vidro para microscopia, fixados e corados

pelo método de coloração rápida Panótico

e examinados em microscópio óptico com

objetiva de 100x no Laboratório de Doenças Parasitárias dos Animais Domésticos do

Departamento de Medicina Veterinária da Universidade Federal Rural de Pernambuco

para pesquisa de Leishmania L chagasi.

2.4 COLHEITA DE SANGUE PARA SOROLOGIA

Seringa

descartável de 20ml, Becton Dickson

Agulha

descartável de 40x12, Becton Dickson

solução Corante para Hematologia Panótico rápido-LB Laborclin

Seringa

descartável de 5ml, Becton Dickson

Agulha

descartável de 25x7, Becton Dickson

A amostra de sangue foi colhida por venopunção da veia cefálica, com seringa

agulha

descartáveis. Ato contínuo, o material foi transferido para um tubo de ensaio

estéril, para posterior obtenção do soro, que foi acondicionado em recipiente de vidr

e armazenado a uma temperatura de –20ºC.

2.5 EXAME ANDROLÓGICO

O exame constituiu-se palpação dos testiculos e epididimos objetivando avaliar

tamanho, simetria e consistência. Em seguida foi procedida a colheita do sêmen para

posterior analise, acompanhado do exame ultra-sonográfico com o aparelho Pie Medical

dos testículos para avaliar a ecogenicidade do parênquima testicular do animal.

2.6 TESTE DE IMUNOADSORÇÃO ENZIMÁTICA (ELISA)

Foi utilizado Kit para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina ELISA -

Biogene (Lote 003-1/04). O teste Elisa foi realizado no Laboratório de Doenças

Parasitárias da Universidade Federal Rural de Pernambuco.

2.7 EXAME ANÁTOMO-PATOLÓGICO

Após o diagnóstico sorológico positivo para LVC, o animal foi encaminhado

pelo médico veterinário para eutanásia, seguindo a sugestão da Organização Mundial de

Saúde (WHO, 2002). Após os procedimentos de eutanasia foi realizado o exame

macroscópico e posterior coleta de fragmentos testiculares. Após a necropsia foi

realizada punção da cauda do epidídimo direito com seringa

e agulha

descartáveis,

visando avaliar microscopicamente seu conteúdo, visto que a quantidade colhida

anteriormente não foi suficiente para analise, em seguida foi retirado fragmentos do

testículo direito e acondicionados em formalina tamponada 10%, sendo processada de

acordo com as técnicas de rotina para inclusão em parafina pela técnica da

hematoxilina-eosina (H.E.) (LUNA, 1968) para posterior exame histopatológico.

3. DISCUSSÂO

Não foram evidenciadas formas amastigotas de Leishmania (L.) chagasi na

biópsia de medula óssea. Contudo o resultado do teste sorológico evidenciou presença

de anticorpos circulantes anti-Leishmania (L.) chagasi, apresentando densidade ótica

(D O) de 0, 210 (Cut-off= 0,127).

Segundo Sundar (2002), a razão para negatividade do teste parasitológico deve-

se à sensibilidade da biópsia de medula óssea.

Com relação ao teste sorológico, a utilização do teste Elisa no diagnóstico da

LVC tem sido apontada como teste seguro, notadamente quando se utiliza a porção

carboxi-terminal da proteína recombinante HSP-70 de Leishmania chagasi, como

antígeno para o ELISA, o qual tem demonstrado identificação específica e precoce da

infecção em cães (ANDRADE et al., 1998)

No exame andrológico foi observado que os testículos direito e esquerdo

apresentavam tamanho e consistência normais, porém no ato da palpação, a cauda do

epidídimo do testículo direito encontrava-se mais consistente.

O exame ultra-sonografico revelou que o parênquima testicular (direito e

esquerdo), possuía média ecogenicidade. A estrutura morfológica dos testículos

encontrava-se com aparência normal no que diz respeito à separação entre o

compartimento intersticial e tubular. Todavia, a cauda do epidídimo direito apresentou

aumento de ecogenicidade.

Microscopicamente, o conteúdo espermático apresentava-se com 24,35% de

células normais, 62,61% de células com cauda de espermatozóide fortemente enrolada,

7,83% de caudas dobradas, além de 5,21% de cabeças destacadas (FIGURA 1).

Kristin (2003) afirma que cães com boa fertilidade não apresentam mais que

20% de espermatozoides anormais.

Ao exame histopatológico, do testículo direito, foi evidenciado discreto

infiltrado mononuclear linfoplasmocitário no intertúbulo (FIGURA 2).

Figura 1

- Fotomicrografia da cauda do

espermatozóide fortemente enrolada

(seta esquerda) e cabeça destacada (seta

direita). 40 X

Figura 2

- Fotomicrografia do infiltrado

mononuclear linfoplasmocitário no

intertúbulo. 40 X

O processo degenerativo foi caracterizado pela redução na altura do epitélio,

como também pela formação de aglomerados de células sinciciais em diferentes

estágios de necrose e apoptose (FIGURA 3), corroborando com Diaz et al. (1982), que

também evidenciaram infiltrado inflamatório e degeneração nos animais com LVC.

As células de Leydig possuíam excesso de lipofuscina, compatível com início de

degeneração gordurosa (FIGURA 4). Ressalta-se ainda que foi observado epididimite

multifocal e intersticial linfoplasmocitária discreta. O lúmem da calda do epididimo

direito não possuía espermatozóides (FIGURA 5) e o epitélio limitante tinha

característica normal apresentando infiltração linfocitária.

Figura 3

- Fotomicrografia do processo

degenerativo caracterizado pela redução do

epitélio. 40 X

Figura 4

Fotomicrografia da célula de Leydig

apresentando excesso de lipofuscina em seu

nterior. 100X

Estes achados são compatíveis com os observados por Gonzalez et al. (1983)

que encontraram degeneração testicular crônica em hamsters infectados

experimentalmente com Leishmania donovani, tendo observado atrofia testicular

progressiva, com células espermatogênicas dos túbulos seminíferos com degeneração

vacuolar e diminuição do número de espermatozóides, bem como, infiltrado

linfoplasmocitário com macrófagos contendo L. donovani no espaço intertubular.

No estudo em questão, não foram evidenciadas formas amastigotas de

Leishmania sp. em macrófagos no testículo, contrapondo com os achados de Poul,

(1949), Diaz (1982) e Diniz (2005), que encontraram formas amastigotas em testiculo e

epididimo de cães infectados naturalmente.

Em virtude de ser um único caso, novos estudos deverão ser realizados para

avaliar a freqüência desses achados em animais com LVC.

Com base nos resultados encontrados sugere-se que cães com histórico de

infertilidade proveniente de áreas endêmicas devem ser investigados para LVC.

Figura 5

Fotomicrografia do

lúmem da calda do epidídimo

direito apresentando

azospermia. 10X

4. REFERÊNCIAS

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2002.

CAPITULO 2

ANTICORPOS ANTI-Leishmania (Leishmania) chagasi

(CUNHA & CHAGAS, 1937) EM LÌQUIDO CEFALORRAQUIDIANO DE CÃES

(Canis familiaris) (LINNAEUS, 1758) COM INFECÇÃO NATURAL

ANTICORPOS ANTI-Leishmania (Leishmania) chagasi

(CUNHA & CHAGAS, 1937) EM LIQUIDO CEFALORRAQUIDIANO DE CÃES

(Canis familiaris)( LINNAEUS, 1758) COM INFECÇÃO NATURAL

RESUMO

Apesar de o cérebro ser dotado de uma proteção imunológica, a presença de formas

amastigotas tem sido relatada neste sitio em pacientes humanos e em animais infectados

com Leishmania donovani. O objetivo deste trabalho foi relatar a presença de anticorpos

anti- Leishmania (Leishmania) chagasi em cães infectados naturalmente. A presença

dos mesmos no LCR pode sugerir a existência de lesão na barreira hematoencefálica.

ANTI-Leishmania (Leishmania) chagasi (CUNHA & CHAGAS, 1937)

ANTIBODIES IN CEREBROSPINAL FLUID IN NATURALLY INFECTED

DOG

ABSTRACT

Human and animal brains possess a great immunological protection, nonetheless,

amastigots forms have been related under Leishmania donovani infection. The aim of

this work was to present the existence of antibodies anti-Leishmania (Leishmania)

chagasi in dogs naturally infected. The presence of these antibodies in Cerebrospinal

Fluid (CSF) suggests that there is lesion on blood-brain barrier.

1. INTRODUÇÃO

No Brasil a leishmaniose visceral (LV) ou calazar, é uma antropozoonose

causada pelo protozoário Leishmania (Leishmania) chagasi, transmitido por insetos

flebotomíneos do gênero Lutzomyia sp. tendo no ambiente silvestre as raposas e

masurpiais, como reservatórios e no meio urbano o cão (SANTA ROSA e OLIVEIRA.,

1997; FEITOSA et al., 2000).

A infecção por Leishmania sp, usualmente causa doença sistêmica de evolução

crônica, podendo manifestar-se de três meses a alguns anos após a infecção, e a sua

gravidade depende da imunocompetência do hospedeiro vertebrado (FEITOSA et al.,

2000).

Após a infecção, os parasitos disseminam-se na pele e posteriormente alcançam

diferentes órgãos e tecidos, tais como medula óssea, baço, fígado, coração, pulmão,

intestino e rins, (LOSOS, 1986; FERRER, 2002; MANGOUD et al 1997;

KOVALENKO et al. 1994) causando uma doença sistêmica.

Apesar do tecido nervoso do SNC ser dotado de uma proteção imunológica

privilegiada (ABREU-SILVA et al., 2003) a presença de formas amastigotas tem sido

relatada em líquor cefalorraquidiano (LCR) de pacientes humanos e em animais

infectados com Leishmania donovani (PRASAD e SEN, 1996).

Alterações no LCR (LIMA et al., 2003) e a presença de processos inflamatórios

no plexo coróide (NIETO et al, 1996) e meninges (PRASAD e SEN, 1996; VIÑUELAS

et al. 2001) têm sido reportada em paciente humanos e cães com infecção natural por

Leishmania donovani e Leishmania infantum, respectivamente.

Não obstante, Garcia-Alonso e colaboradores (1996) e Lima e colaboradores

(2003) observaram a presença de imunoglobulinas da classe G (IgG) anti- Leishmania

sp em LCR de cães com infecção natural.

O presente trabalho teve como objetivo detectar a presença de anticorpos anti-

Leishmania (L.) chagasi em LCR de cães infectados naturalmente.

2. MATERIAL E MÉTODOS

2.1 ANIMAIS

Foram utilizados 29 cães de raça, sexo e idades variadas procedentes da Região

Metropolitana do Recife. A amostra foi escolhida por conveniência não probabilística,

de acordo com Costa Neto (1977), no período de julho de 2004 a abril de 2005.

2.2 EXAME CLÍNICO

Inicialmente foi realizado anamnese, com obtenção de dados referentes ao

estado geral, raça, sexo, idade, porte e evolução do processo bem como dados

referentes ao proprietário e ao animal. O exame físico, para observação da existência ou

não de sinais sugestivos de leishmaniose visceral canina, de acordo com Ferrer, e

colaboradores (1999) e Ferrer (2002), constou principalmente da inspeção da pele e

fâneros, além da palpação abdominal e dos gânglios linfáticos

2.3 COLHEITA DO MATERIAL DESTINADO AO EXAME

PARASITOLÓGICO

2.3.1 BIOPSIA DE MEDULA ÓSSEA

A biópsia de medula óssea foi realizada por punção medular no manúbrio do

osso externo, utilizando-se seringas

e agulhas

descartáveis. Do material puncionado

foram realizados esfregaços que após secagem foram fixados, corados e examinados

como foi descrito anteriormente.

2.4 COLHEITA DO MATERIAL DESTINADO AO TESTE SOROLÓGICO

De cada animal foram colhidos aproximadamente 10 mililitros (ml) de sangue

por venopunção da veia cefálica, com seringa

e agulha

descartáveis. O material foi

transferido para tubos estéreis sem anticoagulante para obtenção do soro, o qual foi

acondicionado em tubos de polipropileno

(Eppendorf) com capacidade para 1,5 ml.

2.5 FORMAÇÃO DOS GRUPOS EXPERIMENTAIS

Após os exames clínicos, sorológicos e parasitológicos, os animais foram

divididos em grupos experimentais, a saber: Grupo Infectado (GI), formado por 21

animais atendidos no Hospital Veterinário da UFRPE com sorologia positiva ao teste

ELISA e/ou exame parasitológico positivo para Leishmania (L) chagasi, independente

Seringa

descartável de 20ml, Becton Dickson

Agulha

descartável de 40x12, Becton Dickson

Seringa

descartável de 5ml, Becton Dickson

Agulha

descartável de 25x7, Becton Dickson

Agulha

descartável de 25x8, Becton Dickson

de sinais clínicos; e Grupo Controle (GC), formado por oito animais provenientes do

Centro de Vigilância Ambiental da Cidade do Recife-PE, com sorologia negativa ao

teste ELISA e exame parasitológico negativo para Leishmania (l.) chagasi, sem sinais

clínicos da doença.

2.6 COLHEITA DO LIQUIDO CEFALORRAQUIDIANO (LCR)

O LCR foi colhido segundo a técnica descrita por Wright (1978). Para tanto o

animal foi colocado em decúbito lateral, com a cabeça formando um ângulo de 90° com

a coluna cervical e o espaço entre a protuberância occipital e a ponta crânio dorsal da

vértebra C2. A colheita foi realizada com auxílio de agulha

estéril no espaço mediano.

Após a visibililização do LCR no cabo da agulha, o mesmo foi colhido por gotejamento

em tubos de polipropileno

com capacidade para 1,5 ml.

2.7 TESTE SOROLÓGICO

Foi utlizado o kit EIE-Leishmaniose Canina Bio-Manguinhos

para realização

dos testes sorológicos tanto para o soro como para o LCR. As diluições utilizadas nos

testes foram 1:100 e 1:2 com o Kit Elisa horseradish peroxidase (Sigma, St. Louis, MO,

USA) (GARCIA-ALONSO et al.,1996) para o soro e LCR respectivamente. A leitura

foi realizada em um leitor de ELISA com densidade óptica de 450 nanômetros, no

Centro de Pesquisa Ageu Magalhães/Fundação Osvaldo Cruz.

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

Os resultados dos testes sorológicos do LCR, com o kit EIE-Leishmaniose

Canina Bio-Manguinhos,

revelaram que 42,8% (9/21) dos animais do GI foram

positivos para presença de anticorpo anti-Leishmania (Leishmania) chagasi.

Estes resultados são inferiores aqueles observados por Garcia-Alonso e

colaboradores (1996) e Lima e colaboradores (2003), que detectaram a presença de

anticorpos anti-Leishmania sp em LCR de 61,5% e 46,6% dos cães com infecção

natural respectivamente utilizando o kit Elisa Sigma.

A presença de anticorpos específicos em LCR de cães com LVC tem sido pouco

descrita na literatura. Entretanto, sua presença sugere lesão ao nível da membrana

semipermeável formada por endotélio vascular e células ependimais altas do plexo

coróide que protegem o sistema nervoso central (SNC).

Abreu-Silva e colaboradores (2003) e Vries e colaboradores (1997), asseguram

que vários patogenos podem atravessar a barreira hematoencefálica e causar lesões.

Entre as possíveis vias de entrada no sistema nervosos central, Toumanen (1996)

destaca a invasão direta dos patogenos nas células epiteliais, passagem dos

microorganismos entre as células da referida barreira, ou ainda transporte através da

barreira dentro de leucócitos infectados.

Vale salientar que dos animais do GI, 38% (8/21) foram positivos para presença

de anticorpo anti-Leishmania (Leishmania) chagasi, tanto no soro quanto no LCR, e

que 4,7% (1/21) foi positivo apenas no LCR. Contudo nenhum dos animais estudados

apresentava sinais de envolvimento neurológico.

Furmaga-Jablosnka (1987) assegura que a presença de IgG no LCR pode ser

resultante do aumento das Imunoglobulinas no soro ou produção local no LCR em

estados patológicos.

A presença de anticorpos no LCR e ausência do soro de animais com infecção

natural, pode estar relacionada a fatores ligados á exaustão da resposta imune,

notadamente aqueles relacionados com linfócitos T e CD4, reações falso negativas

também têm sido demonstradas (BRITO, 2004).

Por outro lado, sinais neurológicos não têm sido reportados com freqüência na

literatura. Novos estudos deverão ser realizados para avaliar melhor a presença de

anticorpos no LCR e sua repercussão em cães de áreas endêmicas.

4. CONCLUSÃO

A presença de anticorpos anti-Leishmania (L) chagasi, pode sugerir a existência

de lesão na barreira hematoencefálica e/ou produção local no LCR.

5. REFERÊNCIAS

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CAPÍTULO 3

AVALIAÇÃO DA PROTEÍNA TOTAL DO SORO E DO LÍQUIDO

CEFALORRAQUIDIANO (LCR) DE CÃES NATURALMENTE INFECTADOS

POR Leishmania (Leishmania) chagasi

AVALIAÇÃO DA PROTEÍNA TOTAL DO SORO E DO LÍQUIDO

CEFALORRAQUIDIANO (LCR) DE CÃES NATURALMENTE INFECTADOS

POR Leishmania (Leishmania) chagasi

RESUMO

O aumento de proteína plasmática total, vem sendo comumente observado na LVC,

nesses casos a hiperglobulinemia seguido de hipoalbuminemia é relatada como

conseqüência da produção de anticorpos e alterações renais e hepáticas. Com base na

escassez de dados na literatura correlacionando as proteínas do soro e do líquido

cefalorraquidiano em cães com calazar, este trabalho teve por objetivo mensurar a

proteína total serica e do LCR de cães naturalmente infectados por Leishmania (L.)

chagasi. Após a mensuração da proteína sérica e liquórica dos animais infectados

naturalmente, 85,7% (18/21) apresentaram hiperproteinemia, e 16,7% (3/21)

apresentaram o nível de proteína elevado do LCR com médias de 8,34±1,07 e

17,09±16,03, respectivamente.

EVALUATION OF SERIC AND CEREBROSPINAL FLUID PROTEINS IN

NATURALLY Leishmania (Leishmania) chagasi INFECTED DOG

ABSTRACT

The increase of total plasmatic protein has been commonly observed in CVL. In these

cases the hyperglobulinemia followed by hypoalbumunemia is alleged to be a

consequence of the production of antibodies renal and hepatic alterations. Based on the

scarce data correlating seric and cerebrospinal fluid proteins in dogs with kalazar

disease, this work aimed to measure both, the total seric protein and CSF protein from

dogs naturally infected by Leishmania (L.) chagasi. Following sera and liquor protein

measurement 85.7% (18/21) presented hyperproteinemia and 16.7% (3/21) presented

increase of CFS protein level with means ranging from 8.34±1,07 and 17.09±16.03,

respectively.

1. INTRODUÇÃO

As proteínas são compostos indispensáveis à vida, representando a base da

estrutura de células, tecidos e órgãos. Funcionam como catalisadores enzimáticos nas

reações bioquímicas, carreadores de muitos constituintes do plasma e na defesa

orgânica como anticorpos (JAIN, 1993; KANEKO et al., 1989).

A maioria das proteínas são sintetizadas no fígado a partir de aminoácidos obtidos

após a quebra e absorção intestinal (COLES, 1984; KERR, 2003).

Com relação às proteínas sericas, as globulinas e as albuminas são as principais

frações, sendo as albuminas, responsáveis por cerca de 35 a 60% das proteínas séricas

totais (COLES, 1984; BUSH et al., 2004).

Sendo assim, os valores normais da proteína sérica total e albumina em cães

variam de 5,4 a 7,8 g/dl, e 2,5 a 40g/dl respectivamente (KANEKO et al., 1989; KERR,

2003; BUSH, 2004).

Com relação às globulinas, são produzidas pelos plasmócitos em resposta à

estimulação antigênica, com sua concentração variando de 2,5 a 4,5g/dl, (COLES, 1984;

BUSH, 2004).

No que concerne à proteína total presente no líquido cefalorraquidiano (LCR) sua

concentração varia de 10 a 40mg/dl (COLES, 1984; FERNANDES, 1990; CHRISMAN,

1992; BRAUND, 1994; MEINKOTH e CRYSTAL, 1998). Contudo, De Lahunta (1983)

assegura que a maior parte da proteína é composta de albumina.

Estudos envolvendo alteração do perfil eletroforético e a infecção por Leishmania

(Leishmania) chagasi têm sido reportada por Rey (2001), observando

hipergamaglobulinemia e alteração na relação albumina/globulina.

Em cães, Medonça (1997) observou que o nível de gamaglobulina mostrou-se

elevado com diminuição dos valores de albumina nos animais com infecção natural por

Leishmania sp.

Por outro lado, Lima e colaboradores (2003) relataram a presença de anticorpos

anti-Leishmania em LCR de animais positivos para LVC com conseqüente alterações do

líquido cefalorraquidiano (LCR).

Devido à escassez de dados na literatura correlacionando leishmaniose e

alterações no LCR, este trabalho teve como objetivo, mensurar a proteína total sérica e

liquorica de cães naturalmente infectados por Leishmania (L.) chagasi.

2. MATERIAL E MÉTODOS

2.1 ANIMAIS

Foram utilizados 21 cães de raça, sexo e idades variados, positivos ao teste ELISA

e/ou exame parasitológico positivo para Leishmania (L.) chagasi, independente de sinais

clínicos sugestivos da doença, denominados de Grupo Infectado (GI), procedente da

Região Metropolitana do Recife, atendidos no Hospital Veterinário da Universidade

Federal Rural de Pernambuco e o Grupo Controle (GC), formado por oito animais

provenientes do Centro de Vigilância Ambiental da Cidade do Recife-PE, com sorologia

negativa ao teste ELISA e exame parasitológico negativo para Leishmania (L.) chagasi, e

sem sinais clínicos da doença. A amostragem utilizada foi por conveniência não

probabilística, de acordo com Costa Neto (1977).

2.2 COLHEITA DO SORO

Foram colhidos aproximadamente 10 ml de sangue através da venopunção da veia

cefálica, com seringa

e agulha

descartáveis e transferidos imediatamente para tubos de

ensaio estéreis, sem anticoagulante, e mantidos inclinados até a completa retração do

coágulo para obtenção do soro, o qual foi transferido para tubos de polipropileno

armazenado à temperatura de –20°C.

2.3 COLHEITA DO LÍQUIDO CEFALORRAQUIDIANO (LCR)

O LCR foi colhido segundo a técnica descrita por Wright (1978). Para tanto o

animal foi colocado em decúbito lateral, com a cabeça formando um ângulo de 90° com

a coluna cervical e o espaço entre a protuberância occipital e a ponta crânio dorsal da

vértebra C2. A colheita foi realizada com auxílio de agulha

estéril no espaço mediano.

Após a visiblilização do LCR no cabo da agulha, o mesmo foi colhido por gotejamento

em tubos de polipropileno

com capacidade para 1,5 ml.

2.4 DETERMINAÇÃO DA PROTEÍNA TOTAL E ALBUMINA NO SORO E

PROTEÍNA NO LCR

A mensuração da proteína total sérica e da albumina foi realizada através de Kits

comerciais

utilizando a metodologia calorimétrica. A leitura foi realizada em

espectrofotômetro digital

em densidade óptica de 450.

A determinação da proteína total do LCR foi realizada pela técnica do ácido

sulfossalicílico 3% e padrões de proteína com concentração de 20mg/dl, 40mg/dl e

80mg/dl, de acordo com Sarmento e colaboradores (2002). A leitura foi realizada no

mesmo aparelho citado anteriormente, em densidade óptica de 420.

2.5 ANÁLISE ESTATÍSTICA

Para análise dos resultados foram utilizados os testes t-Student para as

variáveis proteínas sérica, albumina, globulina e a relação A:G, precedidas do teste

de normalidade, bem como o teste não paramétrico de Mann-Whitney para avaliar as

alterações da proteína liquórica. O nível de significância utilizado nas decisões dos

testes estatísticos foi de 5%. Os dados foram digitados em planilha Excel e o

Seringa

descartável de 20ml, Becton Dickson

Agulha

descartável de 40x12, Becton Dickson

Agulha

descartável de 25 x8, Becton Dickson

Kit para dosagem de Proteína Total e Albumina , Doles

Spectro UV-VISRS

programa utilizado para a obtenção dos cálculos estatísticos foi Minitab Release 14,1

Estatistical Software.

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

Analisando-se os dados referentes às dosagens séricas de proteína total, albumina

e globulinas (Tabela 1), constatou-se que o valor médio da proteína total e das globulinas

nos animais do GI, encontram-se acima dos valores referenciais de Bush (2004). Contudo

os valores relativos à albumina e a relação Albumina:Globulina (A:G) estava abaixo

daqueles referenciais.

Tabela 1-Média e desvio padrão dos níveis séricos em g/dl de proteína total, albumina,

globulina e da relação A: G no soro dos animais do GI e do GC. Recife, 2006

VARIÁVEIS GI GC

VALORES

REFERÊNCIAIS*

Proteína total 8,34 ± 1,07 5,91 ± 1,82 5,5-7,5 g/dL

Albumina 1,69 ± 0,41 1,53 ± 0,31 2,5-4,0 g /dL

Globulina 6,65 ±1,26 4,38 ± 1,84 2,5-4,5 g /dL

Relação A:G 4,26 ± 1,60 2,98 ± 1,54 0,5-1,3 g /dL

* Bush (2004)

Os valores para proteínas totais, albumina, alfa, beta e gamaglobulinas em cães

adultos saudáveis já estão bem caracterizados (BARSANTI et al., 1977; KEAY, 1982;

HARRUS, 1996), para várias enfermidades infecciosas e parasitárias no cão, incluindo

a LVC (MENDONÇA, 1997).

Contudo a sua variação pode ser decorrente da idade, estado nutricional e

fisiológico, gestação, lactação, perda de líquidos, além dos processos infecciosos

(KANEKO, 1989)

Segundo Bush (2004), o aumento da proteína total está relacionado a vários

fatores como desidratação, concentração aumentada de globulinas, devido à inflamação

aguda, subaguda ou crônica, doenças hepáticas e/ou renais, distúrbio auto-imunes,

doenças virais, além de infecções por fungos e protozoários.

Sendo assim a hiperproteinemia aqui encontrada pode ser resultante da

hiperglobulinemia, devido a uma ativação policlonal de células B e a produção de

anticorpos (FERRER, 1992; LOPES et al., 1996; CIARAMELLA et al., 1997;

KOUTINAS et al., 1999).

Desta forma fica claro que os valores aumentados das globulinas aqui

encontrados são resultantes da resposta na atividade das células T, particularmente os

linfócitos T auxiliar 2 (Th2) que elicitam a imunidade humoral (BIAZZONO, 2003).

Os dados de hiperproteinemia e hiperglobulinemia aqui encontrada são

concordantes com os achados de Ferrer (1992), Ciaramella e colaboradores (1997) e

Koutinas e colaboradores (1999), que observaram a hiperproteinemia por

hiperglobulinemia em animais com LVC, particularmente nos estágios finais da doença.

(HERNANDEZ-RODRIGUEZ et al., 1987; RAMOS et al., 1994)

Com relação à diminuição de albumina aqui observada, deve-se levar em

consideração que em virtude da lesão hepática, devido à disseminação dos parasitos no

fígado na LVC, possa ocorrer redução na sua produção, o que reflete diretamente nos

índices sericos.

Vale a pena lembrar que a determinação da proteína sérica total ou albumina

isolada, podem refletir em um achado clínico sem muito valor, em virtude de que a

alteração de uma das frações pode refletir diretamente no aumento ou diminuição de

outra fração, como observado por Mendonça (1997) na LVC.

Entretanto, a diminuição desta proteína ocorreu tanto no grupo infectado quanto

no controle. Outros fatores relacionados com perdas renais e diminuição na ingestão

protéica devem ser levados em consideração para o entendimento melhor dessas

alterações.

Com base nos resultados da relação albumina/globulina (A/G), pôde-se

constatar uma diminuição da relação A:G.

A avaliação da relação albumina/globulina auxilia na orientação diagnóstica,

nos quadros de aumento das imunoglobulinas, como na gamopatia observada por Font

e colaboradores (1994) no calazar canino.

Analisando-se os dados referentes às dosagens de proteína total no LCR

constatou-se que o valor médio da proteína total liquórica nos animais do GI, encontra-

se acima, enquanto que no GC estavam abaixo dos valores referenciados por Meinkoth

e Crystal (1998) que é 10 a 25 mg/dL, apresentando médias 17,09 ± 16,03 e 1,92 ±

0,38, respectivamente.

Analisando-se individualmente as proteínas liquórica do GI, observou-se que

37,5% (9/21) estavam abaixo do normal, sem significado cliníco-patológico, 45,83%

(9/21) estavam dentro da normalidade, porém, 16,7% (3/21) apresentaram concentrações

acima do considerado normal, o que sugere alteração na permeabilidade da barreira

hemato-encefálica do plexo coróide (LAHUNTA, 1983; DUNKAN, 1987).

A análise estatística revelou não existir diferença siguinificativa (p >0,05) nos

níveis protéicos do soro e do LCR tanto nos animais do GI, como nos do GC.

Segundo Gerber e colaboradores (1994), a concentração de proteínas do LCR é

definida pela interação entre o fluxo molecular e o fluxo do LCR, e o nível normal de

proteína no LCR aumenta do espaço ventricular para o lombar. O transporte difusão-

dependente de proteínas do cérebro para o LCR e do sangue para o LCR segue as leis da

difusão de acordo com o tamanho da molécula, o que é a causa da seletividade da função

das barreiras hemato-encefálica (BHE) e hemato-liquórica (BHL), as quais representam

interface entre o sistema vascular e o compartimento extracelular do sistema nervoso

central (SNC), o sistema vascular e o espaço do LCR, respectivamente.

Segundo, Gárcia-Alonso e colaboradores (1996) e Nieto e colaboradores (1996), a

ação dos antígenos de Leishmania sp e imunoglobulinas no plexo coróide, pode gerar

como conseqüência uma reação inflamatória no local.

Sperhacke e colaboradores (2004) citam que, nas infecções agudas, os leucócitos

migram para o LCR e para o tecido nervoso, as BHE e BHL se tornam permeáveis para

albumina e outras grandes moléculas, como conseqüência pode aumentar a resistência de

saída do fluxo do LCR no espaço subaracnóideo, tendendo a diminuir o fluxo do LCR e

aumentar a concentração protéica do LCR.

Vale salientar ainda que nos animais do GC a concentração protéica esteve abaixo

daqueles valores referenciais.

É importante lembrar que ocorre variação da concentração protéica de acordo com

o local da punção (GAMA et al., 2005), assim como na dependência da idade e estado

patológico (SPERHACKE et al., 2004).

4. CONCLUSÕES

A determinação da proteina sérica de cães com infecção natural por Leishmania

(L.) chagasi deve ser cuidadosamente avaliada, levando-se em consideração os problemas

renais além da diminuição na ingestão protéica.

Nos cães com infecção natural por Leishmania (L.) chagasi, a elevação da

proteína liquórica pode ser decorrente da alteração da permeabilidade da barreira

hematoencefálica, ou do aumento na síntese de imunoglobulina intratecal.

5. REFERÊNCIAS

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6. CONCLUSÕES GERAIS

1- Com base nos resultados encontrados sugere-se que cães com histórico de

infertilidade proveniente de áreas endêmicas devem ser investigados para LVC.

2- A presença de anticorpos anti-Leishmania (L) chagasi, pode sugerir a

existência de lesão na barreira hematoencefálica e/ou produção local no LCR

3- A determinação da proteína sérica de cães com infecção natural por

Leishmania (L.) chagasi deve ser cuidadosamente avaliada, levando-se em consideração

os problemas renais além da diminuição na ingestão protéica.

4- Nos cães com infecção natural por Leishmania (L.) chagasi, a elevação da

proteína liquorica pode ser decorrente da alteração da permeabilidade da barreira

hematoencefálica, ou do aumento na síntese de imunoglobulina intratecal.

7- REFERÊNCIAS

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