Este trabalho foi realizado com auxílio financeiro do CNPq # 40018399/4

e 474174/03-4,

AGRADECIMENTOS

À DEUS pelos desafios propostos à mim nesta jornada.

À Dra. Mariane Martins de Araújo Stefani que me conduziu com vasta sabedoria e

atenção nos caminhos do conhecimento científico.

Aos amigos do Laboratório de Imunologia da Aids e Hanseníase:

Professora Regina Beatriz Bevilácqua Vieira, Ana Maria Rodrigues Visconde, Keila

Xavier da Costa, Alexsander Augusto Silveira, Marize Moreira Gibrail

Aos amigos colaboradores dos trabalhos em co-infecções:

Luiz Carlos Silva Souza, Germana Pimentel Stefani, Celina Maria Turchi Martelli,

Esther M P Siqueira, Regina Maria Bringel Martins, Megmar Aparecida dos Santos

Carneiro, Marília Dalva Turchi, João Alves de Araújo Filho, Nádia C. Maya, Aparecida

Duarte Hg Mussi,

ÍNDICE

Lista de Abreviaturas 1

Apresentação 3

Resumos 4

Summaries 7

Tema 2 ARTIGO SOBRE CO-INFECÇÃO HIV-1–MYCOBACTERIUM

Conclusões

Anexo I

striking genetic diversity of HIV-1 containing 9 genetic subtypes classified as A-D, F-H, J

e K, 2 sub-subtypes A2 e F2. Additionally, 16 Recombinant Circulating Forms (CRFs) and

Unique Recombinant Forms (URFs) were described.

Although some regional differences have been observed in the geographic distribution of

different HIV-1 subtypes in the country HIV-1 epidemic in Brazil is characterized by the

predominance of subtype B in all regions. Following subtype B comes subtype F mainly

region. Moreover subtype D was described in the southeast region together with B/F

predominance of subtype B, recombinant patterns involving B/F represent the second most

Analysis. Borderline Tuberculoid (BT), Tuberculoid, Lepromatous and Indeterminate

morphology with CD3

not HIV-infected were observed; histological evidences of nerve damage were seen in BT

lesions. IgM to M. leprae specific phenolic glycolipid I was not detected. 2/6 co-infected

patients monitored during Highly Active Antiretroviral Therapy developed leprosy type 1

reaction after CD4

patients indicate that each disease progressed as in single infection. However, HAART

immune reconstitution may trigger potential adverse effects, such as leprosy acute

inflammatory episodes.

HIV counseling and testing sites have recently been recognized as potential settings for

HCV screening since both viruses share common routes of transmission. Prevalence,

predictors, co-infection rate and viral genotypes were studied among 592 volunteers from

an Anonymous HIV Testing and Counseling Center in central Brazil. Antibodies for HIV-1

and HCV were screened by ELISA, Western blots confirmed HIV infection. Among HIV

Polymerase Chain Reaction (RT-PCR). Heteroduplex Mobility Analysis (HMA) identified

the strongest risk factor associated to both infections and incarceration was also associated

infection among young asymptomatic adults from HIV testing site indicates increased risk

opportunity to provide diagnosis and prevention strategies at a single visit.

DIVERSIDADE GENÉTICA DO VÍRUS DA IMUNODEFICIÊNCIA HUMANA TIPO 1

NO BRASIL

INTRODUÇÃO

indivíduos jovens homossexuais do sexo masculino levou a identificação de uma nova

entidade denominada Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (SIDA/aids) (CDC 1981).

Na época deste estudo pioneiro não era possível antecipar o enorme alcance e o impacto

desta nova epidemia. Segundo estimativas do Programa das Nações Unidas sobre HIV/aids

milhões de pessoas em todo mundo estão vivendo com a síndrome. Em torno de 4.9

milhões de novas infecções por HIV ocorreram em 2004, 95% delas em países em

desenvolvimento e predominantemente em indivíduos na faixa etária compreendida entre

15 e 49 anos (UNAIDS 2004). No Brasil, até junho de 2004, foram notificados ao

Ministério da Saúde 362.364 casos de aids (Ministério da Saúde 2004). Nestas duas

décadas que se seguiram ocorreram enormes avanços no conhecimento sobre o agente

infecção, as perspectivas de vacinas e, sobretudo, o uso de combinações de terapias

infectados. Ficou então evidente que esta nova epidemia podia ser transmitida por

década de 90 a transmissão heterosexual vem representando a forma de transmissão mais

diversos microrganismos. Conseqüentemente, pacientes com aids tornam-se susceptíveis a

muitas infecções oportunistas como: infecções micobacterianas, toxoplasmose, infecções

fúngicas, sarcoma de Kaposi e linfomas não-Hodgkin (Sepkowitz, 2001).

IDENTIFICAÇÃO E CARACTERÍSTICAS DO VÍRUS DA IMUNODEFICIÊNCIA

HUMANA

Nos dois primeiros anos que se seguiram a descrição desta nova infecção várias teorias,

especulações e poucas evidências foram apresentadas sobre a causa da aids. Finalmente em

1983 o agente etiológico da aids foi descrito quase que simultaneamente por dois grupos de

pesquisa, um francês e o outro norte americano. Os líderes destes grupos, Luc Montaigner

importante descoberta. Originalmente, o grupo francês descreveu um vírus denominado

Vírus Associado a Linfoadenopatia (LAV) isolado a partir de células de linfonodo de

paciente homossexual do sexo masculino que apresentava linfoadenopatia generalizada não

esclarecida (Barre-Sinoussi et al. 1983). O grupo norte americano descreveu um retrovírus

denominado Vírus T-linfotrópico Humano III (HTLV-III) que foi isolado a partir de

linfócitos de pacientes com aids/condições relacionadas a aids, que exibia tropismo para

tratava do agente causador da aids já descrito e que fora transmitido pela via parenteral. O

(HIV) em dois tipos principais: o HIV-1, predominantemente disseminado por todo o

Estudos sobre a origem do HIV indicam que esta epidemia viral resultou de episódios de

transmissão zoonótica do Vírus da Imunodeficiência Símia (SIV) a partir de reservatórios

primatas não humanos. Os dois tipos de HIV foram introduzidos na espécie humana

através de episódios de transmissão zoonótica distintos. Os chimpanzés da subespécie Pan

troglodytes troglodytes são considerados os reservatórios naturais do Vírus da

Imunodeficiência Símia – SIVcpz – que originou o HIV do tipo 1. Macacos da espécie

tipo 2 (Hahn et al. 2000, Hillis 2000, Korber et al. 2000).

O HIV-1, responsável pela pandemia global, é um retrovírus da família Retroviridae e

gênero Lentivirus que produz infecção crônica e danos progressivos ao sistema imune do

todo retrovírus, possui três genes estruturais: env, gag e pol (Barre-Sinoussi et al. 1983). O

gene env codifica uma glicoproteína precursora gp160 que é clivada por protease celular

em duas glicoproteínas de envelope: uma de superfície viral, gp120, e outra

transmembrana, gp41. Estas proteínas desempenham papel fundamental no curso da

infecção pelo HIV por promoverem a infecção da célula alvo. O gene gag codifica

proteínas estruturais do núcleocapsídeo viral: p24 – camada externa, p17 – camada interna,

são grupo específicas e os primeiros anticorpos produzidos durante a infecção são

(RNA de fita simples) em dsDNA proviral (DNA de fita dupla). A integrase viral (p32)

regulatórias: vif e vpu respectivamente influenciam a infectividade dos vírions e liberação

estão em divisão; tat (p14) regula positivamente a transcrição da porção terminal (LTR)

outros retrovírus, apresenta altas taxas de mutações porque a polimerase viral não faz a

releitura da fita de DNA ocorrendo assim erros de transcrição. Conseqüentemente o HIV-1

pode se apresentar num mesmo indivíduo como uma população de formas geneticamente

diversas, porém relacionadas, denominadas quasiespécies (Domingo 1998). A

recombinação viral é um dos principais mecanismos que contribuem para a variabilidade

de todos os retrovírus (Katz & Skalka 1990, Temin 1991) seguida pela alta taxa de

cerca de 10

O HIV apresenta algumas propriedades peculiares como persistência, latência, variação,

recombinação e escape à resposta imune e a pressão de drogas antiretrovirais (Hahn et al.

infectividade que favorece a rápida adaptação viral frente aos desafios do sistema

imunológico humano e a formação de vírions resistentes a drogas antiretrovirais (Blackard

et al. 2002).

diagnóstico e tratamento da infecção (Hu et al. 1996, Moore et al. 2001). O conhecimento

sobre a distribuição geográfica das diferentes formas genéticas do HIV no planeta pode ser

importante na definição de estratégias para o desenvolvimeto de uma vacina que apresente

al. 2004).

filogenéticos distintos: M (Major/Maior/Principal), O (Outlier/Divergente) and N (Non-M

et al. 1995). O vírus do grupo N foi descrito em 1998 em uma paciente do sexo feminino

global, possui ampla distribuição no mundo e está subdividido em 9 subtipos genéticos

2002).

Acredita-se que todos os subtipos de HIV-1 tenham se originado na África Central,

considerada o berço da epidemia de aids, onde co-circulam todos subtipos do grupo M. É

desta região do planeta o caso de infecção humana pelo HIV-1 mais antigo, descrito em

amostra obtida em 1959 de paciente da República Democrática do Congo (Korber et al.

2000). Diferentemente do que ocorre na África Central, nos demais países do mundo, uma

Circulating Recombinant Forms – CRFs, Formas Recombinantes Circulantes que são

responsáveis por microepidemias regionais (Carr et al. 2001, Najera et al. 2002).

Para identificar uma nova CRF é necessário que a seqüência de nucleotídeos do

recombinante seja agrupada filogeneticamente com subtipos distintos em diferentes regiões

do genoma e que vírus apresentando recombinações genéticas idênticas sejam identificados

nomenclatura das CRFs foi padronizada de modo que o número representa o recombinante

“complexo” indica que a recombinação ocorreu entre mais de dois subtipos virais, neste

Até o presente momento foram descritas 16 formas recombinantes circulantes do HIV-1

o CRF02_AG é o recombinante mais prevalente no oeste da África e em algumas partes da

e sua nomenclatura proposta como CRF17-BF e CRF18-BF por Diaz e cols no VI

Simpósio de Pesquisa em HIV/aids, 2005. Além das CRFs, Formas Recombinantes Únicas

denominadas de URFs têm sido descritas (Jost et al. 2002, Najera et al. 2002). Uma URF é

caracterizada em um único indivíduo ou em um único grupo de indivíduos

epidemiologicamente vinculados (Najera et al. 2002).

codifica as proteínas do envelope viral, a gp 120 e gp41. Mais recentemente a avaliação da

diversidade genética do HIV-1 foi extendida a outras regiões do genoma viral tais como

região gag, que codifica as proteínas do core viral, e a região pol, que codifica as enzimas

virais como transcriptase reversa, integrase e protease e também a região nef. Estudos da

determinados antiretrovirais por ser esta a região que codifica as enzimas virais, alvos de

drogas, transcriptase reversa e protease.

MAPEAMENTO MOLECULAR DO HIV-1 NO BRASIL

Um dos métodos empregados na determinação do subtipo de HIV-1 é a técnica de triagem

fundamentada na avaliação em gel de poliacrilamida da mobilidade de heteroduplexes

os fragmentos dos genes de envelope e gag das amostras a serem submetidas à

no início da década de 90 e tinham como alvo a região de envelope viral representada pela

proporção, semelhantemente ao que já havia sido observado em outros países (Couto-

Fernandez et al. 1992, Louwagie et al. 1994).

Análises de seqüências da região V3 de env de 28 amostras de indivíduos soropositivos

residentes em São Paulo e Rio de Janeiro mostraram que 26 seqüências pertenciam ao

subtipo B do HIV-1, uma seqüência foi classificada como subtipo F e foi identificado um

na região env evidenciou diferenças no motivo GPGR no topo da alça V3 da gp120,

originalmente descrito em cepas do subtipo B encontradas nos Estados Unidos da América

e em alguns países Europeus. Diferentemente deste padrão, a maioria das amostras do

subtipo B deste estudo apresentou o motivo GWGR e foram denominadas como subtipo B

Seqüênciamento do gene env do HIV-1 isolado de amostra de uma mulher do Rio de

Janeiro identificou uma possível forma recombinante BF provavelmente advindo de evento

de recombinação in vivo entre os subtipos B e F do HIV-1. Foi também seqüenciado o

isolado viral do parceiro sexual desta paciente e detectado genes recombinantes

relacionados ao dela indicando que o evento de recombinação ocorreu simultaneamente à

enquanto que seqüências relativamente homogêneas foram encontradas na mulher, o que

Os DNAs genômicos de 6 isolados de HIV-1 foram testados quanto à presença do motivo

diferenças entre as cepas (da Costa et al. 1995).

A presença simultânea de múltiplos subtipos em infecções pelo HIV-1 tornou-se comum

análise. Empregando-se RFLP, os autores analisaram 33 amostras quanto a variações

genéticas no DNA proviral do HIV-1. A grande maioria (31/33) foi identificada como

subtipo B, uma amostra foi caracterizada como subtipo F e em outra amostra foi

identificada infecção dupla causada pelos subtipos F e D. Estes resultados foram

confirmados através de seqüênciamento e análises filogenéticas dos genes da protease

viral. Estes resultados mostraram pela primeira vez a presença do subtipo D no Brasil

Em 1996 a distribuição dos subtipos de HIV-1 foi avaliada em 80 pacientes da cidade de